Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T12:41:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cyrino_LarissaTavares_M.pdf: 2371187 bytes, checksum: 4a8ffd61bdea2150bc5ecd919622747a (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A autofagia é o principal mecanismo celular de degradação de proteínas e organelas citoplasmáticas. Este processo biológico vem sendo considerado importante no combate aos microrganismos durante processos infecciosos, eliminando-os e ativando respostas imunes inatas e adaptativas. A leishmaniose é um grupo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, que parasitam macrófagos e células dendríticas e é responsável pelo aparecimento de lesões cutâneas simples, lesões mucosas e leishmaniose visceral. O conhecimento dos fatores do hospedeiro e das espécies de Leishmania que influenciam a patogênese dos vários tipos de leishmaniose é limitado e pouco se sabe sobre o papel da autofagia nesta doença. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar o processo autofágico durante a infecção de macrófagos com L. amazonensis. O monitoramento da autofagia por western blotting (detecção de LC3, proteína marcadora de autofagia), por microscopia eletrônica de transmissão, e pela detecção de atividade lisossomal (LysoTracker® Red) indicou que a infecção causada por L. amazonensis induz autofagia tanto em macrófagos de linhagem tumoral quanto em macrófagos primários de camundongos de diferentes linhagens. Nossos dados também indicam que o aumento do índice de infecção está relacionado ao aumento da autofagia nesses macrófagos e que a indução de autofagia por starvation (inanição) aumenta a porcentagem de infecção com L. amazonensis em macrófagos derivados de medula óssea de camundongos BALB/c. Por outro lado, a indução de autofagia não altera o índice de infecção de macrófagos derivados de medula óssea de camundongos C57BL/6, indicando que a linhagem de camundongos de origem dos macrófagos interfere no desfecho da infecção. Juntos, nossos resultados indicam que a autofagia apresenta um papel importante na infecção causada por L. amazonensis e abre novas perspectivas para o estudo desse processo biológico durante a infecção causada por outras espécies de Leishmania / Abstract: Autophagy is the primary mechanism of degradation of cellular proteins and organelles. This biological process has been considered important in fighting microorganisms during the infectious processes, eliminating them and activating innate and adaptive immune responses. Leishmaniasis is a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania, which parasitize macrophages and dendritic cells, and it is responsible for the appearance of simple skin lesions, mucosal and visceral leishmaniasis, The knowledge of host factors and the Leishmania species that influence the pathogenesis of many types of leishmaniasis is limited and little is known about the role of autophagy in this disease. The general aim of this study was to evaluate the autophagic process during infection of macrophages with L. amazonensis. The monitoring of autophagy by western blotting (to detect LC3, a protein marker of autophagy), by Transmission Electron Microscopy, and by lysosomal activity detection (by using Lysotracker® Red) indicated that the infection caused by L. amazonensis induces autophagy in both tumor macrophage lineage and in primary macrophages from mice of different strains. Our data also indicate that the increase in the rate of infection is related to the increase of autophagy in these macrophages and that induction of autophagy by starvation increases the percentage of bone marrow-derived macrophages from BALB / c mice with L. amazonensis after three days of culture. On the other hand, the induction of autophagy does not change the infection rate of bone marrow -derived macrophages from C57BL / 6 mice, indicating that the mice strain interfere in the outcome of infection of macrophages. Together, our results indicate that autophagy has an important role in infection caused by L. amazonensis and creates new perspectives to the study of this biological processes during infection caused by other species of Leishmania / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T11:49:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilio_CarlaAparecida_M.pdf: 2994284 bytes, checksum: 44f1f84fbfc7d771c4aafc810091d90b (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Foi demonstrado anteriormente que macrófagos peritoneais de ratos, elicitados pelo tioglicolato e estimulados "in vitro" com lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, liberavam no sobrenadante de cultura fator indutor (MNCF) e inibidor (NRIF) da migração de neutrófilos para o foco inflamatório (CUNHA & FERREIRA, 1986; TAVARES et alli, 1989, TAMASHIRO et alli, 1992). O MNCF foi recentemente caracterizado como uma proteína de 54 KDa, cuja atividade se faz através de um sítio ligante à D-galactose (DIAS-BARUFFI et alli, 1993). Ao contrário de outras citocinas, o MNCF induz migração de neutrófilos em ratos pré-tratados com glicocorticóides. Resultados preliminares apontam que o NRIF e o MNCF são na verdade o mesmo fator (TAVARES-MURTA et alli, 1993). No presente trabalho, procuramos investigar a produção de fatores similares ao MNCF /NRIF por macrófagos peritoneais de camundongos, estimulados ¿in vitro" com LPS, através de protocolo semelhante ao descrito por CUNHA & FERREIRA (1986). Os resultados aqui obtidos mostraram que macrófagos de camundongos, sob estímulo com LPS, liberam fatores capazes de induzir a migração de neutrófilos para cavidades peritoneais de camundongos e ratos. Esses fatores também foram ativos em animais tratados com dexametasona, à semelhança do que ocorre com o MNCF. Esses sobrenadantes foram capazes ainda de quando administrados endovenosamente, inibir a migração de neutrófilos induzida por estímulos inflamatórios, similarmente ao NRIF. A atividade indutora de migração de neutrófilos foi abolida desses sobrenadantes pela sua pré-incubação anticorpos anti-TNF. Esses resultados sugeriam que o TNFa detectado nos sobrenadantes de cultura de macrófagos era a com citocina responsável sobrenadante. A administração de TNFa recombinante murino (mrTNFa)reproduziu os resultados encontrados com os sobrenadantes de macrófagos, isto é, foi capaz de induzir, de modo dosedependente, a migração de neutrófilos para as cavidades peritoneais de camundongos pré-tratados com dexametasona. A migração de neutrófilos induzida pelo mrTNFa também foi bloqueada por anticorpo específico. Observou-se ainda que o pré-tratamento dos animais com anticorpo monoclonal anti-TNFa bloqueou a migração de neutrófilos induzida pela administração intraperitoneal de LPS. Esses resultados reforçam a hipótese de que entre as citocinas liberadas por macrófagos,residentes ou ativados,o TNFa é a que induz migração de neutrófilos em camundongos tratados com dexametasona / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Bernardo Beiguelman / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T01:49:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freire-Maia_DertiaVillalba_D.pdf: 8660926 bytes, checksum: b05cb30400c23e143bdb0b335853c914 (MD5) Previous issue date: 1972 / Resumo: Na introdução deste trabalho (Cap. II), fez-se uma revisão geral sobre alguns problemas epidemiológicos da lepra, reação à lepromina, e aspectos genéticos da suscetibilidade à doença, tendo sido comentados os fatores que podem afetar a prevalência da doença e a reação de Mitsuda, essa última de grande valor diagnóstico e prognóstico em Leoprologia. Foram referidas as primeiras idéias a respeito da predisposição genética à lepra e revistos os trabalhos sobre os eventuais efeitos pleiotrópicos dos marcadores genéticos (grupos sanguíneos, PTC, proteínas do soro, deficiência do G-GPD, e hemoglobinas anormais). Foram mencionados os resultados obtidos em gêmeos, relativamente às taxas de concordânca das formas da doença e da reação de Mitsuda. Finalmente, foram revistos os trabalhos sobre as análises familiares dos tipos de lepra e sobre o comportamento dos indivíduos sadios em relação à lepromino-reação. Ainda no capítulo de Introdução, foram comentados alguns estudos feitos em relação ao comportamento in vitro dos macrófagos humanos frente ao M. leprae. Consideram-se algumas evidências a respeito de um possível fator genético, influindo no aparecimento das formas de lepra, a autora se propôs a estudar a possibilidade de ser o comportamento in vitro dos macrófagos humanos face o L. leprae, um caráter genético... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-20Bitstream added on 2014-06-13T20:09:23Z : No. of bitstreams: 1 000736403.pdf: 2027693 bytes, checksum: d4421ff9f2de84b0955662de4c9a9da9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A interação fungo-hospedeiro resulta em um processo complexo cujo conhecimento permite melhor entendimento da patogênese das micoses sistêmicas. Espécies de Paracoccidioides são agentes causadores da paracoccidioidomicose (PCM), doença progressiva, crônica e sistêmica, geograficamente confinada na América Latina. O fungo é termodimórfico e a infecção ocorre após a inalação de conídios ou fragmentos de hifas, que ao entrarem em contato com o hospedeiro podem ser transformadas em formas leveduriformes. Esse evento é importante para o estabelecimento da PCM, associado a fatores ligados ao fungo bem como ao hospedeiro. A virulência fúngica é descrita como um evento altamente complexo onde em diferentes estágios da infecção ocorre a expressão de múltiplos genes, podendo estar fortemente associados ao estabelecimento da doença. A adesão e a sobrevivência no interior do hospedeiro são extremamente importantes para o estabelecimento da patogênese. Alguns genes de Paracoccidioides spp se apresentam diferencialmente expressos durante a transição dimórfica do fungo, apresentando baixos níveis de expressão na forma miceliar quando comparadas com a forma leveduriforme, sugerindo que estes possivelmente seriam fatores na composição de estratégias moleculares que P. brasiliensis utiliza para morfo-adaptação e sobrevivência no hospedeiro. O objetivo deste trabalho foi estudar a expressão de genes relacionados a alguns dos fatores de virulência de P. brasiliensis e P. lutzii na fase miceliar e leveduriforme, visando verificar o nível de expressão no fungo bem como na interação com células fagocíticas e epiteliais. Para tanto foram realizados ensaios de infecção com P.brasiliensis (Pb18) e P. lutzii (P01), nas fases miceliar e leveduriforme em células epiteliais pulmonares (MRC-5) e macrófagos alveolares (AMJ2-C11) utilizando a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR). Os genes eleitos para este estudo foram os... / The fungus - host interaction results in a complex process whose knowledge allows a better understanding of the pathogenesis of systemic mycoses. Paracoccidioides species are causative agents of paracoccidioidomycosis (PCM), a progressive, chronic and systemic disease , geographically confined to Latin America. The fungus is thermally and infection occurs after inhalation of conidia or hyphal fragments, which on contact with the host can be transformed into yeast forms. This event is important for the establishment of PCM besides other factors related to the host-fungus interaction. The fungal virulence is described as a highly complex event that enables the expression of multiple genes of the fungus in different stages of infection and can be strongly associated with the development of the disease. Adherence and survival within the host are extremely important for the establishment of pathogenesis. Paracoccidioides spp differentially expressed some genes during the dimorphic fungus transition, having low expression levels in the mycelial form compared with yeast-form, suggesting that these factors were likely to be in the composition of molecular strategies of P. brasiliensis that uses to morpho- adaptation and survival in the host. The aim of this study was to compare the gene expression of the some virulence factors of Paracoccidioides species by real-time PCR. For the assays, the infection was performed with the yeast and mycelial phase of P. brasiliensis (Pb18) and P. lutzii (P01) in pulmonary epithelial cells (MRC-5) and alveolar macrophages (AMJ2 -C11) using RT- PCR. The genes chosen for this study were those which express the 43 kDa glycoprotein (gp43), enolase, glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase (GAPDH), 14-3-3 (30kDa), phospholipase, protease and hemolysin (Duf gene). The results showed a significant increase in the levels expression of enolase, gp43 and GAPDH in the yeast phase of P. brasiliensis. Enolase was more ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-19Bitstream added on 2014-06-13T19:40:41Z : No. of bitstreams: 1 scorzoni_l_dr_arafcf.pdf: 3179979 bytes, checksum: 1e778fd453c60b43b64a943d7b3e82a0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A incidência de infecções fúngicas oportunistas tem aumentado nas últimas décadas devido à crescente proporção de pacientes imunocomprometidos em nossa sociedade. Candida krusei é descrita como um dos agentes de infecções fúngicas em pacientes susceptíveis. Embora sua prevalência seja baixa entre as infecções fúngicas (2-7%), a resistência intrínseca ao fluconazol torna esta levedura importante no contexto relacionado à epidemiologia e na procura de novas alternativas terapêuticas. Modelos de organismos não mamíferos são alternativas viáveis para estudar a virulência de fungos e eficácia de drogas. Neste trabalho utilizou-se Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans como modelos para estudar a virulência e avaliar a eficácia antifúngica de anfotericina B e fluconazol durante a infecção por C. krusei, bem como cultura de macrófagos e testes de agrotransformação. No modelo de G. mellonella foi realizada a caracterização completa da interação de C. krusei por meio da determinação do índice de fagocitose, quantificação da densidade hemocitária, melanização, estudos de filamentação, carga fúngica e histopatologia. Além disso, foi realizado estudo de eficácia antifúngica entre G. mellonella e C. elegans mostrando resultados compatíveis entre os dois modelos. Além disso, utilizou-se cultura de macrófagos RAW 267.7 para verificar o efeito das duas drogas sobre a fagocitose e produção de citocinas quando as células foram infectadas com C. krusei. Não houve alterações quanto à fagocitose nesse modelo, entretanto a produção de TNF-α mostrou-se excessivamente aumentada com o tratamento com anfotericina sugerindo que além do efeito direto da droga existem também mecanismos de imunomodulação envolvidos nessa... / The incidence of opportunistic fungal infections has increased in the last decades due to the increasing proportion of immunocompromised patients. Candida krusei is described as one of the agents of fungal infections in susceptible patients. Although its prevalence is low among fungal infections (2-7%), the intrinsic resistance to fluconazole makes this yeast important in this context related to epidemiology and new therapies. Models of non-mammalian are viable alternatives to study virulence of fungi and drug efficacy. In this work we used Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans as models for studying virulence and evaluate the efficacy of antifungal agent’s amphotericin B, fluconazole and caspofungin during infection by C. krusei, and C. albicans, as well as, macrophages and agrotransformation studies. The model of G. mellonella was done full characterization of the interaction with C. krusei by determining the phagocytosis index, measuring the density haemocytic, melanization, filamentation studies, fungal burden and histopathology. In addition, we conducted a study of antifungal efficacy between G. mellonella and C. elegans showing compatible results between the two models. Furthermore, we used macrophage culture RAW 267.7 to determine the effect of drugs amphotericin B and fluconazole on phagocytosis and production of cytokines when the cells were infected with C. krusei and C. albicans. There was no change on the phagocytosis in this model, however, the production of TNF-α was shown to be excessively increased with treatment with amphotericin suggesting that in addition to the direct effect of the drug, immunomodulation mechanisms are also involved in this response. The construction of transformants... (Complete abstract click electronic access below)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T09:16:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286647.pdf: 2822556 bytes, checksum: efcdfec4981831ef957fb764c96e7d5d (MD5) / Neste estudo foi padronizada a reação de RT-PCR para a detecção da expressão do mRNA dos marcadores TNF-?, IL-10 e iNOS, importantes no contexto de ativação de macrófagos, para seleção in vitro de substâncias naturais ou sintéticas com potencial atividade imunomodulatória sobre macrófagos, visto que estes constituem uma das principais populações de células do sistema imune. Para isso foi selecionada a linhagem murina RAW 264.7, cultivada in vitro e que responde a estímulos como o LPS. Para a realização da RT-PCR, o RNA foi extraído das células utilizando o reagente Trizol e posteriormente feito reação de transcrição reversa com 1 µg de RNA total, em condições padronizadas. Na etapa de amplificação do cDNA, foram testadas a melhor temperatura de anelamento para cada marcador, concentração dos iniciadores específicos e diluição do cDNA. Determinou-se que o melhor tempo necessário para visualizar os produtos de amplificação era de 6 horas para os ensaios de ativação e foram estabelecidas as concentrações de LPS capazes de estimular as células em cultura, quando avaliadas pela RT-PCR e dosagem de óxido nítrico. Verificou-se que a adição prévia de polimixina B (50 µg/ml) nas amostras é eficiente na inativação de endotoxinas contaminantes. Estabeleceu-se um protocolo para testar a potencial atividade antiinflamatória de compostos químicos, pela adição da substância a ser testada 6 horas após a ativação prévia com LPS, incubação por 18 horas e observação da inibição da expressão dos marcadores. Determinou-se em seguida, a atividade de 15 formulações de polissacarídeos de Agaricus blazei, sendo que todos os extratos mostraram atividade, pela RT-PCR, para a concentração de 10 µg/ml para a citocina TNF-? e nas frações 2, 3, 11 e 12 para a enzima iNOS; enquanto que a dosagem de óxido nítrico realizada em paralelo mostrou-se menos sensível. Também avaliou-se a atividade de 9 galatos sintéticos, e concluiu-se que nenhuma das amostras testadas demonstrava atividade ativadora de macrófagos. Ficou evidenciado neste estudo, portanto, a utilidade de uma técnica in vitro para a triagem de substâncias com potencial atividade imunomodulatória sobre macrófagos, que permite vislumbrar a análise de grande número destas substâncias, sem a utilização de animais de laboratório. / In this study an RT-PCR to detect mRNA expression of the markers TNF-?, IL-10 and iNOS, relevant in the macrophage activation context, was standardized in order to in vitro screening of natural or synthetic compounds with potential immunomodulatory activity in macrophages, whereas they constitute a major population of immune systems cells. For this, was selected the murine strain RAW 264.7 cultured in vitro, and that responds to stimuli such as LPS. To perform RT-PCR, RNA was extracted from cells using Trizol reagent and subsequently made a reverse transcription reaction with 1 µg of total RNA under standard conditions. In amplification of cDNA step, were tested the best annealing temperature for each marker, the concentration of specific primers and dilution of cDNA. It was determined that the best time to view the amplification products was 6 hours for the testing of activation, and states the concentrations of LPS the cells were responsive to our model of RT-PCR and measurement of nitric oxide. It was found that the previous addition of polymyxin B (50 µg / ml) in samples is efficient in the inactivation of endotoxin contaminants. Was established a protocol to test the potential anti-inflammatory activity of chemical compounds, by adding the substance to be tested after 6 hours prior to activation with LPS, incubated for 18 hours and observing the inhibition of expression of markers. Was determined activity of 15 polysaccharides of Agaricus blazei where all the extracts showed activity in the RT-PCR for the concentration of 10 µg / ml for TNF-? cytokine and for the fractions 2, 3, 11 and 12 for the iNOS enzyme; but not in the dosage of nitric oxide. We also determined the activity of 9 gallates synthetic, and concluded that none of gallates tested showed activity in activating macrophages. Was evidenced in this study, therefore, the usefulness of an in vitro technique for screening of substances with potential immunomodulatory activity on macrophages, which paves the analysis of many of these substances without the use of laboratory animals.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T05:32:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 238945.pdf: 16959863 bytes, checksum: bec6807482c3930e51f82b9197812244 (MD5) / A lesão periapical é resultado de uma reação inflamatória local causada por microrganismos do canal radicular infectado e seus produtos. A interação entre as células inflamatórias e os microrganismos suscita uma resposta imune específica e inespecífica. Reações imunológicas mediadas por linfócitos T e B e macrófagos têm sido implicadas em lesões periapicais em dentes permanentes. Devido à falta de estudos relacionados à participação do sistema imune em lesões perirradiculares em dentes decíduos e à própria imaturidade do sistema imunológico da criança, esta pesquisa propôs verificar a presença de linfócitos T, linfócitos B e macrófagos em lesões perirradiculares de dentes decíduos. Quartorze lesões perirradiculares (abcesso agudo, abcesso crônico e granuloma) foram analisadas. A técnica de imuno-histoquímica foi realizada para identificar linfócitos T, linfócitos B e macrófagos, utilizando anticorpos monoclonais específicos anti-humanos CD45RO, CD20 e CD68, respectivamente. As células foram quantificadas por meio de análise microscópica dos cortes histológicos. Os dados revelaram que a média da porcentagem de células positivas CD45RO foi de 11,76; de células CD20 positivas foi de 5,25; células positivas CD68 foi de 10,92. Os resultados indicam que linfócitos T e B e macrófagos constituem a maior parte do infiltrado inflamatório em lesões perirraridulares em dentes decíduos indicando que a reação imune humoral e mediada por células está presente. É relevante a participação do sistema imune nos processos inflamatórios perirradiculares em dentes decíduos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-14Bitstream added on 2014-06-13T19:53:32Z : No. of bitstreams: 1 schwardt_tf_me_araca.pdf: 288540 bytes, checksum: f6b713d25bd498b2a46d22b12adc7738 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose visceral em cães é descrita como uma doença de caráter crônico na qual os principais sintomas são perda progressiva de peso, caquexia, lesões dermatológicas, e recentemente, a doença tem sido relacionada com quadros neurológicos. Um total de 41 cães portadores de leishmaniose visceral, foram divididos em dois grupos. O primeiro composto por cães sem sintomas neurológicos (n=31) e o segundo grupo composto por cães com sintomas neurológicos (n=10). Amostras de encéfalo foram coletadas e armazenadas em formalina tamponada, para realização de imunoistoquímica para a pesquisa de formas amastigotas da Leishmania sp., linfócitos T CD3+, CD4+ e CD8+ e macrófagos. Não foram observadas formas amastigotas de Leishmania sp. Linfócitos T CD3+ estavam presentes em 24/31 (77,4%) dos cães sem sintomas neurológicos e em todos os cães do segundo grupo (p=0,0011). Linfócitos T CD4+ e CD8+ raramente foram observados, apresentando imunomarcação para CD4+ em 10/41 (24,3%) dos cães e em metade dos animais do grupo neurológico (p=0,0090). A presença de CD8+ foi detectada em 4/10 (40%) dos cães com doenças neurológicas (p=0,0021). Macrófagos foram observados em 38/41 (92,6%) cães, sem diferença estatística significante entre os dois grupos (p= 0,7664) / Visceral leishmaniasis in dogs is described as a chronic disease whose main symptoms are progressive weigth loss, dermatologic lesions and, recently, the disease has been associated to neurologic disorders in dogs. A total of 41 Leishmania chagasi infected dogs were divided into two groups. The first composed of dogs without neurological signs (n=31) and the second by dogs with neurological disorders (n=10). Brain samples were collected, stored in 10% buffered formalin and subjected to immunohistochemical examination for amastigotes forms of Leishmania sp, CD3+, CD4+ and CD8+ T lymphocytes and macrophages. Imunnohistochemistry not revealed amastigote any forms of Leishmania sp. CD3+ T lymphocytes were present in 24/31 (77,4%) dogs without neurological signs and in all dogs from the second group (p=0.0011). CD4+ and CD8+ were rarely observed, with CD4+ immunostaining in 10/41 (24,3%) dogs, from which half of them had neurological disease (p=0.0090). The presence of CD8+ was detected only in 4/10 (40%) dogs from neurological group (p=0.0021). Macrophages were detected in 38/40 (92,6%) dogs, without significant differences between groups (p=0.7664)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-23Bitstream added on 2014-06-13T18:30:24Z : No. of bitstreams: 1 tansini_a_me_arafcf.pdf: 1446439 bytes, checksum: 2d298f3950fa8afa956b4ee972cd76f4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A infecção por Y. pseudotuberculosis é a causa de doenças intestinais e extraintestinais. A resolução da infecção está relacionada com a ativação de células Th1. Macrófagos e células dendríticas são capazes de orientar a resposta imune adaptativa através da produção de citocinas e apresentação de antígenos às células T. Estas células metabolizam L-arginina por duas vias, utilizando as enzimas iNOS ou arginase. O metabolismo de L-arginina é um importante parâmetro para discriminar o estado de ativação destas células. O objetivo deste estudo foi verificar a influência da infecção por Y. pseudotuberculosis sobre o comportamento de macrófagos e células dendríticas de camundongos resistentes (C57BL/6) e suscetíveis (BALB/c). Macrófagos peritoneais e células dendríticas esplênicas foram obtidos em 12 horas, 1º, 3º e 5º dias pós-infecção, cultivados, e foi determinada a produção de NO, atividade da arginase, produção de citocinas e capacidade imunoestimulatória destas células. Durante a infecção, macrófagos e células dendríticas de camundongos C57BL/6 infectados produziram quantidade maiores de NO, IL-12 e TNF- , enquanto as células de camundongos BALB/c infectados apresentaram maior atividade da arginase e produção de IL-10. A infecção provocou uma diminuição na capacidade de estimulação de macrófagos e células dendríticas, com menor proliferação de células T nos camundongos BALB/c. Estes resultados sugerem que os mecanismos responsáveis pela resistência e suscetibilidade à infecção podem estar relacionados com diferenças no estado de ativação de macrófagos e células dendríticas. / Y. pseudotuberculosis infection is the cause of intestinal or extraintestinal diseases. The resolution of infection is connected with activation of Th1 cells. Macrophages and dendritic cells are able to orient the adaptive immune response through the production of cytokines and antigen presentation to T-cells. These cells metabolize L-arginine by two pathways, using the iNOS or arginase enzymes. L-arginine metabolism is an important parameter to discriminate the activate state of these cells. The objective of this study was to verify the influence of Y. pseudotuberculosis infection on the behavior of macrophages and dendritic cells from susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice. Peritoneal macrophages and splenic dendritic cells were obtained on the 12 h, 1st, 3rd, 5th day post-infection, cultured, and the NO production, arginase activity, cytokines production and immunostimulatory capacity of these cells was determined. During the infection, macrophages and dendritic cells from infected C57BL/6 mice produced higher amounts of NO, IL-12 and TNF- , while the cells from infected BALB/c mice presented higher arginase activity and IL-10 production. The infection leads to a decrease in the immunostimulatory capacity of macrophages and dendritic cells, with T-cell proliferation smaller in the BALB/c mice. These results suggest that mechanisms responsible for the resistance and susceptibility to infection may be connect with differences in the activation state of macrophages and dendritic cells.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:12Z : No. of bitstreams: 1 000845917.pdf: 361869 bytes, checksum: 05c7e4fd0d5c7cd067d242d6200d2346 (MD5) / Matrizes de quitosana e colágeno podem oferecer nicho biológico para o crescimento de células-tronco derivadas do tecido adiposo (ADSC). O objetivo deste trabalho foi caracterizar as propriedades físicoquímicas das matrizes e sua biocompatibilidade com ADSC, bem como suas interações e influências diretas das matrizes sobre o comportamento da ADSC. A metodologia incluiu o tratamento enzimático de tecido adiposo obtido por lipoaspiração com colagenase IV, imunofenotipagem, cinética de crescimento das células, estudos de biocompatibilidade das matrizes analisadas pela atividade de fosfatase alcalina (AP), determinação de óxido nítrico (NO) por macrófagos e imagens das matrizes por microscopia óptica e eletrônica de varredura. A concentração de reticulação de genipina e glutaraldeído foi avaliada por ensaios de ninidrina, testes de solubilidade e de degradação das matrizes. Os melhores resultados foram obtidos com genipina a 0,5 %. Após nove expansões a viabilidade foi de 99 % e o tempo de duplicação da população de células diminuiu de sete para dois dias. Os resultados mostraram que as matrizes são biocompatíveis, exibem propriedades físicas e químicas necessárias para as células e são fortes estimuladoras de proteínas de sinalização (fosfatase alcalina) e de outras moléculas (NO), que são importantes no processo de regeneração tecidual. Portanto, as matrizes podem proporcionar um nicho biológico para adesão, proliferação e controle das atividades das ADSC / Scaffolds of chitosan and collagen can offer a biological niche for the growth of adipose derived stem cells (ADSC). The objective of this work was to characterize the physico-chemical properties of the scaffolds and the ADSC, as well as their interactions to direct influences of the scaffolds on the behavior of ADSC. The methodology included an enzymatic treatment of fat obtained by liposuction by collagenase IV, ASDC immunophenotyping, cell growth kinetics, biocompatibility studies of the scaffolds analyzed by the activity of alkaline phosphatase (AP), nitric oxide (NO) determination, and images of both optical and scanning electron microscopy of the matrices. The extent of the crosslinking of genipin and glutaraldehyde was evaluated by ninhydrin assays, solubility tests and degradation of the matrices. The best results were obtained with 0.5 % genipin. After nine expansions viability was 99 % and the population doubling time decreased from seven to two days.The results showed that the matrices are biocompatible, exhibit physical and chemical properties needed to house cells in vivo and are strong stimulators of signaling proteins (alkaline phosphatase) and other molecules (NO) which are important in tissue regeneration. Therefore, the matrices provide a biological niche for ADSC adhesion, proliferation and cells activities