Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:49:27Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_rf_me_rcla.pdf: 5396854 bytes, checksum: 53dc5df0dd553ffb8f11bf6074d163cc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Quando um tecido ou órgão é alvo de algum tipo de injúria, dá-se início ao processo de inflamação tecidual. As reações celulares e humorais que tomam parte desta reação são evocadas a fim de exterminar ou neutralizar o agente infeccioso e seus produtos, permitindo que o reparo tecidual se dê da melhor forma possível. Contudo, algumas vezes o resultado desta ação pode ser prejudicial, levando ao comprometimento ou a perda das funções do tecido ou órgão em questão, com conseqüências que podem afetar a saúde do indivíduo como um todo. Em contrapartida, a atividade física moderada tem sido apontada como um grande aliado no combate à várias doenças, potencializando a ação do sistema imune e reduzindo os possíveis danos e minimizando os efeitos nocivos das respostas inflamatórias. Desta forma, nos propomos a verificar os efeitos da atividade física moderada no processo inflamatório e de reparação tecidual, comparando 10 ratos Wistar que realizaram exercícios físicos moderados com 10 sedentários, por meio da análise numérica (microscopia de luz) e ultra-estrutural (microscopia eletrônica de transmissão) de mastócitos, macrófagos e fibroblastos, células muito importantes para tais fenômenos. O modelo de estudo escolhido foi o implante subcutâneo de esponjas de PVC, que mimetiza situações clínicas importantes como, por exemplo, implantes de marcapasso. Nossos resultados indicam que as células do grupo treinado respondem de maneira mais ágil (precoce) e efetiva à injúria, que o número de cada tipo celular foi significativamente maior neste grupo e ainda que, para quaisquer dos grupos, os tipos celulares em estudo agem estreitamente interrelacionados... / When a tissue or organ is target of some offense, it feels beginning to the process of tissue inflammation. Cellular and humoral reactions that participate of this reaction are evoked to exterminate or to neutralize the infectious agent and your products, allowing the tissue repair to feel in the best possible way. However, the result of this action can sometimes be harmful, taking to the compromising or the loss of the functions of the tissue or organ in subject, with consequences that can affect the individual's health as a completely. On the other hand, the moderate physical activity has been pointed as a great ally in the combat to several diseases, improving the action of the immune system and reducing the possible damages and minimizing the noxious effects of the inflammatory answers. Thus, we intend to verify the effects of the moderate physical activity in the inflammatory and tissue repair process, comparing 10 Wistar rats that had carried through moderate physical exercises with 10 sedentary ones, through the numeric analysis (light microscopy) and ultrastructural (transmission electronic microscopy) of mast cells, macrophages and fibroblasts, which are very important cells for such phenomena. The model of chosen study was the subcutaneous implantation of PVC sponges, that simulates important clinical situations as, for instance, implant of pacemaker. Our results indicate that the cells of the trained group answer in a more agile (precocious) and effective way to the offense, that the number of each cellular type was significantly larger in this group and although, for any of the groups, the cellular types in study act narrowly interrelated. Therefore, we ended in our work that the moderate physical activity can contribute positive and significantly for the inflammation and tissue repair process, making possible that the homeostasis is reestablished more easily and, like this, avoiding larger damages to the individual.

Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Mast cell tumors (MCT) are neoplastic tumors of mast cells of unknown etiopathogenesis, representing up to 21% of all canine cutaneous cancers. This tumor varies widely in biological presentations and behaviors, ranging from benign to extremely aggressive, leading to metastasis and death. The cytological identification of MCT is a highly recommended method for initial detection of the tumor, it is inexpensive, can be performed with conscious animal and allows to suspect a tumor of high degree according to the cellular features. In addition to the histological grading, which is the gold standard for establishing the prognosis of MCT, additional markers are recommended, among them the AgNOR count, an indicator of cell proliferation. Additionally, some studies focus on the relationship between MCT and vitamin D, since mast cell tumors express vitamin D receptors (VDR). Thus, the aim of this research is to characterize the occurrence of canine MCT diagnosed by cytological examination in the region of Santa Maria/RS, to describe a protocol for determining AgNOR index in cytological samples of MCT and to investigate the relationship between vitamin D levels and AgNOR index in dogs with this tumor, since the AgNOR index is already consolidated as a prognostic marker for mastocytoma and vitamin D has been reported as a target for MCT management. Regarding to the occurrence profile of this tumor, we found results similar to those described in the literature, with some peculiarities referring to breeds and clinicopathological findings, allowing to suspected of MCT and planning more appropriate therapeutic interventions for each case. Referring to the AgNOR index, a protocol adapted from techniques already described was applied to cytological samples. Also has been observed that vitamin D and AgNOR index in dogs with MCT are negatively and moderatelycorrelated (P=0,011), suggesting that vitamin D levels can be measured in dogs with this tumor. In addition, follow-up studies of dogs with MCT and monitoring their outcoming are necessary, so that the vitamin D can be proposed as a prognostic marker and therapeutic agent for this neoplasm. / Mastocitomas são proliferações neoplásicas de mastócitos, de etiopatogênese desconhecida, que representam até 21% de todos os tumores cutâneos caninos. Este tumor possui uma grande variedade de apresentações e comportamentos biológicos, os quais vão desde benignos a extremamente agressivos levando à metástase e morte. A identificação citológica do mastocitoma um método bastante recomendado para detecção inicial do tumor, é de baixo custo, pode ser realizada com o animal consciente e permite suspeitar de um tumor de alto grau conforme as características celulares. Além da graduação histológica, que é o padrão-ouro para estabelecer o prognóstico do mastocitoma, marcadores adicionais são recomendados, como a contagem de AgNOR, um indicador de proliferação celular. Adicionalmente, alguns estudos enfocam a relação entre mastocitoma e vitamina D, uma vez que mastocitomas expressam receptores de vitamina D (VDR). Assim, a finalidade desta pesquisa é caracterizar a ocorrência de mastocitoma canino diagnosticado por exame citológico na região de Santa Maria/RS, descrever um protocolo para determinação de índice AgNOR em amostras citológicas de mastocitoma e investigar a relação entre níveis de vitamina D e índice AgNOR em cães com este tumor, visto que o índice AgNOR já é consolidado como marcador prognóstico para o mastocitoma e a vitamina D vem sendo apontada como alvo de intestigação neste tumor. Em relação ao perfil de ocorrência do mastocitoma canino, neste trabalho encontraram-se resultados semelhantes aos descritos na literatura, com algumas particularidades referentes a raças e achados clínico-patológicos, permitindo o direcionamento para suspeita de mastocitoma e planejamento de intervenções terapêuticas mais adequadas para cada caso. Referente ao índice AgNOR, foi especificado um protocolo adaptado, a partir de técnicas já descritas, aplicável a amostras citológicas. Também pode-se observar que a vitamina D e o índice AgNOR em cães com mastocitoma estão correlacionados de forma negativa e moderada (P=0,011), sugerindo-se que os níveis de vitamina D sejam avaliados nos cães com este tumor. Em adição, estudos de acompanhamento de cães com mastocitoma e monitoramento de seu tempo de sobrevida são necessários para que a dosagem de vitamina D possa ser proposta como marcador prognóstico e agente terapêutico para esta neoplasia

Submitted by HELENA RIBEIRO SOUZA null (helena.riber@hotmail.com) on 2016-08-11T15:45:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Helena R Souza.pdf: 28021261 bytes, checksum: cfa8bae6ea9a632c8ff6462cc740385a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-12T19:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 souza_hr_me_sjrp.pdf: 28021261 bytes, checksum: cfa8bae6ea9a632c8ff6462cc740385a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-12T19:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 souza_hr_me_sjrp.pdf: 28021261 bytes, checksum: cfa8bae6ea9a632c8ff6462cc740385a (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / O processo de reparo de lesões térmicas pode ser dividido nas fases de inflamação, proliferação e remodelação. No seu processo de desgranulação, os mastócitos (MCs) liberam fatores quimiotáticos, citocinas e proteases, como triptase e quimase, para o meio extracelular, contribuindo na degradação da matriz lesada e síntese de uma nova. Além disso, estudos indicam que os MCs armazenam a proteína anti-inflamatória anexina A1 (AnxA1), envolvida na inflamação, apoptose, crescimento e diferenciação celular. Contudo, não se conhecem relatos da expressão e função da AnxA1 no reparo de queimaduras. Diante disso, os objetivos desse estudo foram quantificar e avaliar a ativação, acúmulo de histamina e heterogeneidade para triptase e quimase dos MCs, bem como, verificar a expressão da AnxA1, quantificar macrófagos, e dosar as citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 e a quimiocina MCP-1 em modelo de queimadura de segundo grau em ratos Wistar. Para o desenvolvimento da lesão os animais foram anestesiados e submetidos à aplicação de um bloco metálico aquecido no dorso. Os animais foram divididos em grupos controles e tratados com pomada de sulfadiazina de prata a 1% (SDP 1%). As análises foram realizadas em 3, 7, 14 e 21 dias após injúria, e também em fragmentos de pele normal. Avaliações macroscópicas e histopatológicas da cicatrização confirmaram as características de queimadura de segundo grau e a melhor evolução da cicatrização nos animais tratados. A quantificação dos MCs mostrou grande quantidade de células intactas na pele normal e redução significante dessas células nas fases de inflamação (dia 3) e de proliferação (dia 7). Nas fases de proliferação de matriz (dia 14) e remodelação (dia 21) foi verificada maior quantidade de MCs nos animais controles e essas células foram observadas, principalmente, desgranuladas no dia 14 e intactas no dia 21. Ainda, no grupo tratado aos 7 dias e em ambos os grupos aos 14 dias, foi encontrada diferença entre MCs com grande quantidade de histamina e MCs totais. A análise da heterogeneidade dos MCs revelou maior número de MCs positvos para triptase (MCT) do que para quimase (MCQ) na pele normal e redução de MCTs e MCQs nas primeiras fases da cicatrização. Contudo, na fase de remodelação, muitos MCQs foram observados no grupo controle. A expressão da AnxA1 foi fraca na pele normal com aumento nas fases de inflamação e de proliferação. Aos 21 dias após lesão, a expressão da AnxA1 foi maior nos animais tratados com SDP 1%, no estroma e também em regiões epiteliais próximas à neogênese dos anexos cutâneos. As análises das citocinas mostraram aumento das pró-inflamatórias TNF-α, IL-1β e IL-6, e da citocina anti-inflamatória IL-10, nas fases iniciais do reparo, especialmente nos dias 3 e 7. O mesmo foi observado com relação a quimiocina MCP-1 e a quantificação de macrófagos. Nossos resultados evidenciaram diferenças no número de MCs e na imunomarcação da AnxA1 entre os grupos estudados, moduladas pelo tratamento com a SDP 1% e indicam que essas células e proteínas podem ser alvos terapêuticos no processo de regeneração de queimaduras. / The repair process of thermal injury can be divided into phases of inflammation, proliferation and remodeling. The mast cells (MCs) in their degranulation process, release chemotactic factors, cytokines and proteases, as tryptase and chymase, to the extracellular environment contributing to the degradation of damaged matrix and synthesis of a new one. Moreover, studies indicate that MCs store the antiinflammatory protein annexin A1 (AnxA1) which involved in inflammation, apoptosis, growth and cell differentiation. However, there are no known reports of the expression and function of AnxA1 in burns repair. Thus, the objectives of this study were to quantify, assess the activation, histamine accumulation and heterogeneity for tryptase and chymase of MCs, as well as, check the expression of AnxA1, associated with macrophages quantification and the levels of TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-10 and MCP-1 in a second degree burn model in rats. For the development of the lesions, animals were anesthetized for applying a water-heated metal block in the dorso. The animals were divided into control and treated or not with the cream of silver sulfadiazine 1% (SDP 1%). The analyzes were performed on 3, 7, 14 and 21 days after injury, and also in normal skin fragments. Macroscopic and histopathological evaluations of healing confirmed the burning characteristics of second degree and the better progress of wound repair in treated animals. Quantification of MCs showed large amount of intact cells in normal skin and a significant reduction of these cells in the stages of inflammation (day 3) and proliferation (day 7). In the phases of matrix proliferation (day 14) and remodeling (day 21) it was observed increased amount of MCs, only in the control animals, and these cells were mainly degranulated on day 14, but intact on day 21. Also, in the treated group on day 7 and in both groups on day 14, it was found difference between MCs with large amounts of histamine and total MCs. The heterogeneity analysis revealed more MCs positves for tryptase (MCT) than for chymase (MCC) on normal skin and reduced MCTs and MCQs in the early stages of healing. However, in the remodeling phase, many MCCs were observed in the control group. The expression of AnxA1 was low in normal skin and increased in the stages of inflammation and proliferation. On 21 days after injury, the expression of AnxA1 was higher in animals treated with SDP 1% in the stroma and epithelial cells especially in regions close to neogenesis of skin attachments. Analysis of the inflammatory mediators showed an increase pro-inflammatory TNF-α, IL-1β and IL-6 and anti-inflammatory IL-10 cytokines in the early stages of the repair, especially on days 3 and 7. The same was observed for MCP-1 chemokine and quantification of macrophages. Our results showed differences in the number of MCs and AnxA1 expression between groups, that were modulated by treatment with the SDP 1%, indicating that these cells and protein can be used as therapeutic targets in burns regeneration process.

När rumsligt omvälvande projekt skall genomföras är det ofta konsekvenserna för naturmiljö, kulturmiljö, estetiska miljöaspekter som ger upphov till diskussioner. Uppförandet av telemaster till mobiltelefonsystemet 3G är ett infrastrukturprojekt som kommer att vara visuellt påtagliga på många platser i landskapet. I Sverige uppförs två stycken parallella mastsystem och detta har givit upphov till diskussioner kring projektets påverkan på vår omgivning. Uppsatsen studerar hur miljöpåverkan från ett stort infrastrukturprojekt, uppförandet av telemaster för 3G-systemet, behandlats av länsstyrelsen i samrådsärenden enligt 12 kapitlet 6§ miljöbalken, samt diskuterar kring hur handläggare på länsstyrelsen hanterar och upplever dessa ärenden. Studien visar att handläggare på de undersökta länsstyrelserna har begränsat mandat att minska antalet master genom samlokalisering. Önskemålen om att teleoperatörerna ska dela på själva masten är svåra att genomföra eftersom operatörerna inte har samverkansavtal. Laglig rätt att förplikta samlokalisering fanns inte under den studerade perioden. Det är vanskligt att säga om den sammantagna inverkan som masterna sägs ha kunnat begränsas på denna nivå. Det som identifierats som ett problem av aktörer som Boverket och PTS, d.v.s. antalet master, fastlades redan i ett tidigare skede. Samråden är inriktade på att undvika ur naturmiljösynpunkt olämpliga mastplaceringar. Dock utgör den fastslagna utbyggnaden av nätet och kravet på geografisk täckning att det kan uttryckas som att det för länsstyrelsen är inte en fråga om i fall masterna ska uppföras, utan om var. Lokaliseringen av masterna blir ett samspel mellan var operatörerna föredrar att placera master samt var det är lämpligt ut naturmiljösynpunkt. Den på nationell nivå fastlagda geografiska täckningskravet gör att bedömningen av masters påverkan på vissa landskap, där intrycket i landskapsbilden blir stort, upplevs svår av de intervjuade handläggarna. Bedömning av masters påverkan på just landskapsbilden kan upplevas som subjektiv. Det stora antalet anmälningar om samråd har resulterat i få förelägganden och förbud. MKB har endast använts i ett litet antal fall. Samråden synes mycket inriktade på att hitta alternativa lösningar innan förbud utfärdas. Landskapsbilden är den enskilda motivering till förbud som förekommer flest gånger.

Os mastócitos participam do sistema imunológico liberando mediadores farmacologicamente ativos. A principal via de ativação dos mastócitos é através do receptor de alta afinidade para a imunoglobulina E (FcRI). A ativação dos mastócitos via FcRI culmina com a liberação de mediadores. A enzima PLD atua sobre fosfolipídios hidrolisando a fosfatidilcolina em ácido fosfatídico e colina. A PLD é ativada após o estímulo via FcRI e possui um papel importante na transdução do sinal em mastócitos. Existem duas isoformas da enzima PLD, a PLD1 e a PLD2 que são expressas, diferentemente, de acordo com o tipo celular. Ambas as isoformas podem estar expressas numa mesma célula, apenas uma ou nenhuma. Neste estudo foram utilizadas células RBL-2H3 transfectadas para a super expressão PLD2 nas formas catalítica ativa (CA) e inativa (CI). O papel da PLD2 foi examinado nestas células com o objetivo de elucidar sua atuação no processo de secreção incluindo o aparelho de Golgi e os grânulos secretores. As células CA e CI possuem maior atividavidade de -hexosaminidase total, porém quando estimuladas mostram uma deficiência na liberação desta enzima, quando comparadas com as células selvagens. A PLD2 nas células CA, CI, VET e RBL-2H3 está localizada no citosol, sendo abundante na região justanuclear, principalmente nas células CI, sugerindo uma associação com o aparelho de Golgi. A dupla marcação com o mAb AA4, que imunomarca gangliosídeos derivados do GD1b da membrana plasmática e com anti-PLD2, mostrou que esta enzima não se localiza na membrana plasmática. A dupla marcação com anti-PLD2 e anti-GM130 mostrou que as áreas de maior concentração da PLD2 se co-localizam com o aparelho de Golgi, especialmente nas células CI. A marcação com anti-GM130 e os experimentos com microscopia eletrônica de transmissão mostraram que o aparelho de Golgi está organizado nas células CA e desorganizado nas células CI, onde se encontra disperso no citoplasma. Ainda, as células CI expressam menos GM130 em comparação com as demais linhagens celulares. Quando a produção de PA pela PLD está inibida pelo 1-Butanol, as células CA apresentam as mesmas características fenotípicas das células CI. A incubação das CI com PA resulta na reestruturação do aparelho de Golgi. A manutenção estrutural do aparelho de Golgi, também está relacionada com os microtúbulos. Nas células CI o centro organizador de microtúbulos é dificilmente identificado. Os microtúbulos nas células CI são desordenados em comparação com as demais linhagens celulares. Estes resultados mostram que a produção de PA pela PLD2 é importante na organização de microtúbulos e na manutenção da estrutura do aparelho de Golgi. As alterações celulares relacionadas com os microtúbulos e o aparelho de Golgi afetam o processo secretor nestas células e, provavelmente, em outros tipos de células secretoras. Estes achados poderão levar a novas estratégias terapêuticas para controlar a liberação de mediadores durante processos alérgicos e inflamatórios. / Mast cells are components of the immune system that liberate a wide variety of pharmacologically active mediators. The principle method of activating mast cells is through the high affinity receptor for IgE (FcRI). This activation then culminates with the release of mediators. Phospholipase D (PLD) acts on phospholipids, hydrolyzing phosphatidylcholine to phosphatidic acid (PA) and choline. PLD is activated following stimulation via FcRI and plays an important role in signal transduction in mast cells. PLD has two isoforms, PLD1 and PLD2, which are differentially expressed depending on the cell type where none, one or both may be expressed. RBL-2H3 cells, a mast cell line, transfected to super express catalytically active (CA) and inactive (CI) forms of PLD2 were used in the present study. The role of PLD2 was examined in these cells in order to clarify the action of PLD2 in the secretory process. Although the CA and CI cells posses a greater total -hexosaminidase activity, when stimulated these cells release less -hexosaminidase than cells transfected with empty vector or wild type RBL-2H3 cells. In all cell lines, PLD2 was dispersed throughout the cytoplasm with a concentration in the juxtanuclear region suggesting an association of PLD2 with the Golgi apparatus. Double labeling with anti-PLD2 and mAb AA4, which recognizes gangliosides derived from GD1b on the plasma membrane, showed that PLD2 was not associated with the plasma membrane. When the cells were double labeled with anti-PLD2 and anti-GM130, which labels the cis-Golgi saccules, PLD2 does colocalize with the Golgi apparatus, especially in CI cells. Labeling with anti-GM130 alone as well as experiments employing transmission electron microscopy revealed that the Golgi apparatus is well organized in the CA cells, but is disorganized and dispersed in the cytoplasm in the CI cells. By Western Blotting, the CI cells also expressed less GM130 than the other cell lines. When the production of PA by PLD2 was inhibited by 1-Butanol, the Golgi apparatus of the CA cells presented the same phenotypic characteristics as that of the CI cells. Conversely, incubation of the CI cells with PA resulted in the reorganization of the Golgi apparatus. The structural maintenance of the Golgi apparatus is also related to microtubules. In the CI cells, the microtubule organizing center was difficult to identify and the microtubules were disorganized in the cytoplasm as compared to the other cell lines. These results show that the production of PA by PLD2 is important in the arrangement of the microtubules and in maintaining the structure of the Golgi apparatus. Alterations in the distribution of the microtubules and the structure of the Golgi apparatus in the CI cells affect the secretory process in these cells, and such alterations may affect the secretory process in other cell types as well. The findings presented here may lead to new therapeutic strategies to control the production and release of mediators during allergic and inflammatory processes.

Orientador: Marilda Mazzali / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T16:38:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beraldo_FelipeCaetano_M.pdf: 4477461 bytes, checksum: 2e940e62a8ea6158326013aef37b29e0 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A lesão renal causada pela isquemia é a principal causa de insuficiência renal aguda [IRA] em rins nativos e transplantados. A fisiopatologia da IRA induzida por isquemia/reperfusão [I/R] envolve alterações na hemodinâmica renal, lesão de células endoteliais e tubulares e os processos inflamatórios, que resultam na ativação e lesão de células endoteliais, aumento da adesão entre células endoteliais e leucócitos, migração de leucócitos para o tecido afetado e comprometimento microvascular. Dentre as células inflamatórias envolvidas no modelo I/R, estudos demonstram a participação de macrófagos e leucócitos. Os mastócitos, apesar de participarem ativamente do processo de fibrose intersticial renal, são pouco estudados neste modelo. Estudos anteriores demonstraram que a presença de mastócitos em transplantes renais humanos com necrose tubular aguda [NTA] apresentou correlação com o desenvolvimento de fibrose intersticial. Assim, o presente estudo tem como hipótese que a presença de mastócitos no modelo de I/R seria um fator de risco para o desenvolvimento de nefropatia crônica. Para tanto, animais [ratos Wistar machos] foram submetidos ao procedimento clássico de isquemia/reperfusão e sacrificados a períodos variáveis de 0 a 14 dias. Ao final de cada período foram analisadas a função renal [creatinina sérica], a presença de células inflamatórias [macrófagos, mastócitos, linfócitos T], a proliferação celular, a expressão de fatores pró-inflamatórios [osteopontina], de diferenciação epititélio-mesenquimal [vimentina] e pró-fibróticos [alfa-actina] através de imunohistoquímica. Os animais desenvolveram IRA, confirmada pela presença de elevação de creatinina sérica a partir de D1 e pela presença de alterações degenerativas tubulares, especialmente em camada medular externa. A partir do D7 pós reperfusão teve início o processo regenerativo tubular, com redução dos níveis séricos de creatinina e aumento do número de túbulos com regeneração celular. O infiltrado inflamatório medular, detectado por aumento de expressão de células PCNA + apresentou pico em D3. Os mastócitos foram as primeiras células a apresentar aumento de expressão (D1), seguidas de linfócitos e macrófagos em D3. Entretanto, enquanto o infiltrado de macrófagos e linfócitos diminuiu a partir de D7, o número de mastócitos permaneceu crescente, com pico em D14. A expressão de osteopontina em camada medular foi precoce (D1) e constante até D7, enquanto vimentina apresentou elevação a partir de D3, com pico em D5-7. Em D14, tanto a expressão de osteopontina como de vimentina foram menos intensas, porém ainda significativamente superiores às dos animais controle (Sham). Miofibroblastos, identificados através de imunohistoquímica para alfa actina apresentaram aumento significativo a partir de D3, e persistiram elevados até o período final do estudo (D14). Estes dados sugerem que os mastócitos participam do processo de resposta renal à isquemia, com infiltração precoce e persistência durante o processo de regeneração/cicatrização. A associação com macrófagos e linfócitos sugere sua participação no processo inflamatório inicial. Entretanto, a persistência de mastócitos e a associação com expressão de vimentina e de alfa actina sugerem que estas células também tem participação no processo de regeneração e de cicatrização tecidual / Abstract: Renal ischemia is the main cause of acute renal failure in both native and transplanted kidneys. Ischemia/reperfusion lesion includes changes in renal hemodynamic, endothelial and tubular cell lesion, and inflammatory process, resulting in endothelial cell activation, increased adhesion of endothelial cells and leukocytes, migration of circulating cells to damaged tissue and microvascular dysfunction. While macrophages and T cells are usually analyzed in this model, mast cells, another group of inflammatory cells, are forgotten. Previous studies have shown that mast cells are involved in renal fibrosis, but its participation in the acute phase of renal injury remains unknown. In this study we hypothesized that the presence of mast cells in response to ischemia reperfusion lesion could be a risk factor for the development of renal fibrosis. Male Wistar rats undergone bilateral renal artery clamping for 45 minutes, and were sacrificed from 0 to 14 days after reperfusion. At each study point, renal function, (serum creatinine) and renal morphology (PAS staining), presence of cell proliferation (PCNA), inflammatory cells (macrophages, T cells and mast cells), as well as the expression of pro inflammatory (osteopontin), de-differentiation (vimentin) and pro fibrotic (a smooth muscle cell actin- aSMA ) markers were analyzed. All studied animals developed acute renal failure, confirmed by the increase in serum creatinine and presence of degenerative tubular cell lesions in outer medulla, from D1. Seven days after reperfusion the regenerative process started, with decrease in serum creatinine levels and increase in number of regenerative tubular cells. Interstitial inflammatory response in medulla, analyzed by PCNA stained, peaked at D3. Mast cells was the early detected cell type (D1), followed by both macrophages and T cells at D3.However, while macrophages and T cells infiltrates decreased from D7, mast cell remained in medullar interstitium, with a peak in D14. Osteopontin expression in medulla was observed at early points (D1), and remained constant till D7. Vimentin increased from D3, peaking from D5-D7. Despite a reduction of osteopontin and vimentin expression was observed at D14, these values were still higher than in control animals (Sham). Myofibroblasts, identified by aSMA staining were observed in medulla from D3, and persisted until the end of study period (D14). These data suggests that mast cells are involved in the tissue response to ischemic injury, with an early infiltration and persisting during the repare/scare phase. Association with macrophages and T cells suggests the participation of mast cells in the early inflammatory response. However, its persistence and association with vimentin and myofibroblasts suggests the participation in both renal repare and scarring process / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-06-02T17:42:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Joana Estela Rezende Vilela - 2015.pdf: 2631245 bytes, checksum: cc3eb64cd43c485a3a6e07b7034d39e6 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-06-03T11:31:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Joana Estela Rezende Vilela - 2015.pdf: 2631245 bytes, checksum: cc3eb64cd43c485a3a6e07b7034d39e6 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-03T11:31:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Joana Estela Rezende Vilela - 2015.pdf: 2631245 bytes, checksum: cc3eb64cd43c485a3a6e07b7034d39e6 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-07-02 / In Americas million people are carriers of Chagas disease caused by Trypanosoma cruzi. Chronic chagasic cardiopathy is the most severe form of the disease, characterized by lesions in the myocardium associated with inflammation and fibrosis which often evolve to progressive decrease of heart function. Chagas’ disease during aging may have specific aspects that require further studies. The aim of the study was to describe the relationship of angiogenesis and mast cell density with myocardial fibrosis in elderly patients with chronic Chagas' disease. To reach this goal we selected left ventricular fragments of autopsied patients at the Clinical Hospital, Federal University of Triangulo Mineiro. The samples were divided into four groups: elderly with chagasic cardiopathy - 6 (CC elderly); elderly without chagasic cardiopathy - 5 (SC elderly); Non-elderly with chagasic cardiopathy - 5 (no elderly CC); Non-elderly without chagasic cardiopathy - 5 (no elderly SC). Picrosirius red staining was performed for quantifying the percentage of collagen in common light and 10x magnification. Immunohistochemistry was performed to obtain the mast cell density, using antitriptase monoclonal antibody, and the density of blood vessels, using CD34 monoclonal antibody. The samples were evaluated under common light and at 40x magnification. The percentage of collagen was significantly higher in the elderly CC group compared to the other groups (p = 0.003). The density of mast cells was higher in elderly CC group, but no significant difference (p = 0.226). The density of blood vessels was lower in the elderly CC group and no significant difference (p = 0.224). Therefore, in elderly CC group there was more collagen, and also higher density of mast cells and lower density of blood vessels, although not significant, which are probably associated to the etiopathogenesis of myocardial lesions in chronic Chagas' disease during aging. / Nas Américas milhões de pessoas são portadoras da doença de Chagas causada pelo Trypanosoma cruzi. A cardiopatia chagásica crônica é a forma mais grave da doença, caracterizada por lesões no miocárdio associadas a processo inflamatório e fibrose que muitas vezes evoluem para progressiva diminuição das funções cardíacas. A doença de Chagas durante o envelhecimento pode ter aspectos específicos que precisam ser mais claramente entendido. O objetivo do estudo foi descrever a relação da angiogênese e da densidade de mastócitos com a fibrose miocárdica em idosos portadores de cardiopatia chagásica crônica. Para tanto foram selecionados fragmentos do ventrículo esquerdo de pacientes autopsiados no Hospital das Clínicas da Universidade Federal do Triângulo Mineiro. Formou-se quatro grupos, idosos com cardiopatia chagásica – 6 (Idoso CC); idosos sem cardiopatia chagásica – 5 (Idoso SC); Não-idosos com cardiopatia chagásica – 5 (não idoso CC); Não-idosos sem cardiopatia chagásica - 5 (não idoso SC). Realizou-se a técnica de picrosirius para quantificação da porcentagem do colágeno sob luz comum e objetiva de 10x. A imunohistoquímica foi realizada para obtenção da densidade de mastócitos utilizando o anticorpo monoclonal antitriptase, e para a densidade de vasos sanguíneos o anticorpo monoclonal CD34, ambas foram avaliadas sob luz comum e objetiva de 40x. A porcentagem de colágeno foi significativamente maior no grupo de idosos CC, quando comparada aos outros grupos (p=0,003). A densidade de mastócitos foi maior no grupo de idosos CC, mas sem diferença significativa (p=0,226). A densidade de vasos sanguíneos foi menor no grupo de idosos CC e sem diferença significativa (p=0,224). Portanto, foi verificada no grupo de idosos CC maior quantidade de colágeno, e ainda, maior densidade de mastócitos e menor densidade de vasos sanguíneos, embora não significativa, que provavelmente estão relacionados com a etiopatogênese das lesões miocárdicas na cardiopatia chagásica crônica durante o envelhecimento.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-12-19T17:52:15Z No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 740997 bytes, checksum: fec1f12612ff6a41fbbbee9640600a35 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Rejected by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com), reason: Júlio, falta o arquivo da tese. on 2016-12-26T12:31:54Z (GMT) / Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-01-02T15:41:57Z No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 10731375 bytes, checksum: d59433128feb9bc7facacb81cb311a98 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-03T09:40:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 10731375 bytes, checksum: d59433128feb9bc7facacb81cb311a98 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-03T09:40:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Maurício Barcelos Costa - 2014.pdf: 10731375 bytes, checksum: d59433128feb9bc7facacb81cb311a98 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Leprosy is a complex, chronic, infectious dermato-neurological disease that affects the skin and peripheral nerves especially during acute immune-inflammatory episodes known as type 1/T1R and type 2/T2R reactions. There is no experimental model for leprosy and leprosy skin lesions have been extensively used to unravel its multifaceted immunopathological mechanisms.This study investigated in situ expression of two distinct cell populations with important immunoregulatory roles: T regulatory (Treg) cells and mast cells (MC) in diverse skin diseases with emphasis on leprosy T1R and T2R. For the Treg cell study, 154 skin biopsies from 114 participants belonging to 3 groups were investigated: 1. Leprosy (n=74), 56 T1R (28-paired biopsies reactionfree/reactional from the same patient, 28 single reactional biopsy), 18 T2R (12 pairedreaction-free/reactional lesions, 6 single reactional biopsy); 2. Dermatoses: (n=29) noninfectious and cutaneous infectious diseases; 3. Normal controls: skin fragment of mammoplasty from healthy females that had cosmetic surgery. Double immunohistochemical detection of Treg cells was performed with automated platform for CD25 and Foxp3 staining. Quantifications of double immunostained Treg cells was performed (values expressed by mm2 ) blinded to the participants’ clinical status. For the mast cell study 80 skin biopsies from 3 groups were investigated: 40 newly diagnosed untreated leprosy patients (18 reaction-free, 11 T1R, 11 T2R), 29 patients with other dermatoses (the same as for Treg study) and 11 normal skins. Toluidine blue stained intact and degranulated MC counts/mm2 ; streptavidin-biotin-peroxidase immunostaining was used to detect tryptase/try+ and chymase/chy+ MCs and their density (median optical density) was evaluated. Results: Treg study: Not one CD25+ Foxp3+ Treg cell was seen in any of the 11 normal skin sections while variable numbers were detected in skin diseases (p<0.0001); the number of double stained cells was higher in infectious compared to non-infectious diseases (p=0.008). Treg cell numbers were comparable between leprosy and other infectious dermatoses (p=0.157) Treg cell counts in reactional lesions were higher than in reaction-free leprosy lesions (p<0.002). Paired biopsies of T1R or T2R reactional/reaction-free lesions showed xxvii increased numbers of Treg during T1R compared to reaction-free lesions from the same patient (p< 0.001). Treg cell median in T1R developed during MDT was slightly higher compared to T1R developed at diagnosis in naïve patients (p=0.047). There was a trend in increasing Treg cell numbers from the tuberculoid to borderline-lepromatous form, which showed the highest median value of Tregs, however this difference was not significant (p>0.8). Mast cell study: Infectious and non-infectious skin lesions showed higher numbers of degranulated than intact MC both for leprosy and other dermatoses, compared to normal skin. The numbers of degranulated MC were higher than intact MC regardless of the leprosy form (from tuberculoid/TT to lepromatous/LL), regardless of the occurrence of leprosy reactions (reactional and reaction-free) and regardless of the type of reaction (T1R/T2R). Try+ MC numbers and density were higher than chy+ MC in leprosy, in reaction-free and reactional lesions, particularly in T2R, but not in other dermatoses. Conclusions: Higher Treg numbers seen in T1R suggest Treg role in suppressing the exacerbated cell-mediated phenomenon that causes T1R. Differential expression/ of try+ and chy+ MC subsets was seen in leprosy compared to other skin diseases and to normal skin. However, neither leprosy form nor leprosy reaction was associated with MC changes in lesions suggesting that the Mycobacterium leprae infectious process per se dictates MC expression in leprosy skin lesions. / A hanseníase é uma complexa doença dermato-neurológica, crônica, de causa infecciosa que afeta a pele e os nervos periféricos, especialmente durante os episódios imunoinflamatórios agudos conhecidos com reações tipo 1/RT1 e tipo 2/RT2. Não existe modelo experimental para hanseníase e as lesões de pele têm sido extensivamente usadas para desvendar os multifacetados mecanismos imunopatológicos associados com a doença. Este estudo investigou a expressão in situ de duas distintas populações celulares que apresentam importante papel imunorregulatório: células Treg (Treg) e mastócitos (MC) em pele normal e diversas doenças cutâneas com ênfase nas reações hansênicas RT1 e RT2. Para o estudo de Tregs foram utilizadas 154 biópsias cutâneas de 114 participantes de três grupos: 1. Hanseníase (n=74), 56 RT1 (28-biópsias pareadas do mesmo paciente sem reação/durante reação, 28 biópsias únicas de RT1), 18 RT2 (12 biópsias pareadas sem reação/durante reação, 6 biópsias únicas de RT2); 2. Dermatoses: (n=29) doenças cutâneas não infecciosas e infecciosas. Controles Normais: fragmentos de peles obtidos de mamoplastias eletivas em mulheres saudáveis. Imunomarcação dupla CD25+ Foxp3+ de células Treg foi realizada em plataforma automatizada. Quantificação das células Treg duplo positivas foram feitas sem conhecimento da condição clínica do paciente (valores expressos em mm2 ). Para o estudo dos MC 80 biópsias de 3 grupos foram investigadas: 40 pacientes com hanseníase recém diagnosticados não tratados (18 sem reação, 11 RT1, 11 RT2), 29 pacientes com outras dermatoses e 11 biópsias de pele normal. Quantificação de MC intactos e desgranulados corados por azul de toluidina/mm2 ; imunomarcação streptavidina-biotina-peroxidase foi empregada para detectar MC triptase/try+ e chimase/chy+ e a densidade ótica (mediana da densidade ótica) foi avaliada. Resultados: Estudo das Tregs: Nenhuma célula Treg CD25+ Foxp3+ foi identificada em nenhuma das 11 amostras de pele normal, enquanto um número variável de Tregs foi identificado nas diversas doenças cutâneas (p<0.0001); o número de células Treg duplo positivas foi maior nas doenças infecciosas comparado com as não-infecciosas (p=0.008). Medianas de Treg entre hanseníase e outras doenças infecciosas foram semelhantes (p=0.157). Quantificação de Tregs em lesões reacionais foram maiores do que as sem reação (p<0.02). Nas biópsias pareadas de lesões de xxv RT1/sem reação ou RT2/sem reação, números maiores de Treg foram vistos durante a RT1 quando comparados com a não reacional do mesmo paciente (p< 0.001). Mediana de Treg em RT1 desenvolvidas durante MDT foi ligeiramente superior comparada a RT1 desenvolvida em pacientes sem de tratamento (p=0.047). Observou-se uma tendência de aumento no número das Tregs do polo tuberculoide em direção ao lepromatoso, mais especificamente até a forma borderline-lepromatosa que apresentou a maior mediana da quantificação de Treg, entretanto esta diferença não foi estatisticamente significativa (p>0.8). Estudo dos Mastócitos: lesões cutâneas de origem infecciosa e não infecciosa mostraram números aumentados de mastócitos desgranulados do que intactos tanto na hanseníase como nas outras dermatoses quando comparados com pele normal. Os números de mastócitos (MC) desgranulados foram maiores do que intactos, independente da forma de hanseníase (do polo tuberculoide/TT ao lepromatoso/LL), independente da ocorrência de reações hansênicas (lesão reacional/sem reação) e independente do tipo de reação (RT1/RT2). Número e densidade de mastócito triptase positivo (MC try+ ) estão aumentados em relação aos quimase positivo (MC chy+ ) na hanseníase, em pacientes com e sem reação, particularmente na RT2, mas não nas outras dermatoses. Conclusões: aumento nas Treg detectados durante RT1 sugerem papel supressor dessas células em eventos associados à resposta imune celular exacerbada, responsáveis pela RT1. Expressão diferencial das subpopulações de MC try+ e chy+ foi observada na hanseníase em relação a outras doenças cutâneas e pele normal. Entretanto, nem a forma da hanseníase, nem a ocorrência de reação hansênica, estava associada a mudanças nas subpopulações de MC nas lesões sugerindo que o processo infeccioso pelo Mycobacterium leprae per se direciona a expressão de MC nas lesões cutâneas da hanseníase.

Este estudo teve por objetivos: a) caracterizar o influxo de leucócitos (LC) induzido pelo veneno de Bothrops moojeni (VBm); b) avaliar o papel dos mastócitos (MC) e da histamina neste evento; c) analisar a liberação de TXA2, PGD2, LTB4, MCP-1 e KC e d) avaliar a capacidade do VBm desgranular MC in vivo e in vitro. A injeção intraperitoneal de VBm, em camundongos, causou o recrutamento de LC e neutrofilia. O tratamento dos animais com cromoglicato aboliu o influxo de LC enquanto a difenidramina, ranitidina e a tioperamida, antagonistas da histamina, reduziram o influxo de neutrófilos. Ainda, o veneno induziu a liberação de PGD2, TXA2, LTB4, MCP-1 e de KC e causou a desgranulação de MC in vivo e a liberação de -hexosaminidase de MC in vitro. Em conclusão, o VBm induz influxo de LC para o local de sua injeção. Este efeito depende da histamina, via receptores H1, H2 e H4 e da desgranulação de MC, que decorre de ação direta do veneno nestas células. A neutrofilia e o TXA2, LTB4, MCP-1 e KC devem contribuir para o influxo de leucócitos causado pelo VBm. / In this study the effects of Bothrops moojeni venom (BmV) on the cellular component of inflammatory responses and the mechanisms involved in this effect were investigated. The effects of venom on peritoneal and circulating leukocyte numbers and on the release of inflammatory mediators, such as LTB4, TXA2, PGD2, MIP-1 and KC, were assessed. The role of both mast cells and histamine receptors in leukocyte recruitment induced by BmV was assessed by selected pharmacological treatments. BmV caused a marked infiltration of leukocytes (3-24 h) when injected into the peritoneal cavity of mice. Neutrophils (PMN) were the predominant cell type in the early stages of response whereas macrophages (MN) were accumulated from 3 up to 24 h. Moreover, BmV increased blood neutrophil numbers at 3 h after injection. The BmV-induced leukocyte influx was abrogated by cromoglicate and significantly reduced either by difenidramine or ranitidine or tioperamide, histamine H1, H2 and H4 receptor antagonists, respectively, at 6 h after injection. Significant increments in peritoneal levels of LTB4, TXA2, PGD2, MIP-1 and KC were detected at distinct periods of time after venom injection. In addition, BmV induced mast cell degranulation both in vivo and in vitro. In conclusion, obtained data demonstrated the ability of BmV induce leukocyte recruitment into the site of its injection. This effect is dependent on mast cell activation and degranulation, which may be due to a direct effect of venom on these cells, and is mediated at least in part by histamine via H1, H2 and H4 receptors. Moreover, the ability of venom to mobilize leukocytes from bone marrow reserve compartments and to release the chemotactic mediators TXA2, LTB4, MCP-1 and KC may be relevant for leukocyte infiltration.

Este estudo consistiu em avaliar comparativamente se camundongos neonatos e adultos, quando expostos ao poluente 1,2-NQ exibiriam susceptibilidade aumentada à inflamação alérgica (ovalbumina; OVA). Camundongos adultos ou neonatos foram expostos à 1,2-NQ ou veículo (15 min por três dias). Os camundongos adultos, após 24 h, ou neonatos, após 59 dias, foram sensibilizados/desafiados com OVA e os parâmetros funcionais e inflamatórios foram avaliados 24 h após. Em animais expostos a 1,2-NQ na fase neonatal, o desafio alérgico na idade adulta causou potente influxo de leucócitos no pulmão, sangue periférico e maturação eosinofílica na medula óssea, mas não afetou a hiperresponsividade brônquica. Isto foi consistente com maior biossíntese de citocinas Th2 e apresentação de CD11c esplênica. Em animais adultos, a 1,2-NQ não amplificou a inflamação alérgica. Conclui-se que, a exposição de camundongos neonatos à 1,2-NQ aumentou a susceptibilidade destes à inflamação alérgica na idade adulta via maior apresentação de CD11c esplênica e da biossíntese de citocinas Th2. / We have comparatively investigated whether exposure of neonates and adults mice to 1,2-NQ increases their susceptibility to allergic inflammation evoked by ovalbumin (OVA). Adults or neonate mice were nebulized with 1,2-NQ or corresponding vehicle. Following 24 h or eight weeks, adult or neonate mice were sensitized and challenged with OVA and the functional and inflammatory parameters were evaluated 24 h later. The allergic challenge in mice exposed to 1,2-NQ as neonates caused a potent influx of leukocytes in bronchoalveolar lavage, peripheral blood and increased eosinophil maturation in the bone marrow, without affecting Penh response. This was correlated with increased presentation of splenic CD11c and biosynthesis of Th2 cytokines in the lung. Adult mice exposure to 1,2-NQ failed to significantly increase OVA-induced allergic responses. Exposure to 1,2-NQ during neonatal period is critical to enhance susceptibility of asthma at a later stage of life, and that increased expression of splenic CD11c and inflammatory mediators contribute to this effect.