Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-08-03T15:48:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marielle Garcia Silva - 2014.pdf: 4245927 bytes, checksum: 01ba5c62c3b90ad1f08e7f5fd48439e6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-08-07T15:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marielle Garcia Silva - 2014.pdf: 4245927 bytes, checksum: 01ba5c62c3b90ad1f08e7f5fd48439e6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T15:38:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marielle Garcia Silva - 2014.pdf: 4245927 bytes, checksum: 01ba5c62c3b90ad1f08e7f5fd48439e6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-08-04 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Paracoccidioides spp. are pathogenic fungi that causes paracoccidioidomycosis, an important systemic mycosis in Latin American countries. The success of infection depends on the pathogen ability to obtain essential micronutrients (metals) from the host. This process of nutrient uptake occurs through membrane associated transporters. The membranes are constituted of a lipid bilayer with associated proteins and are involved in different processes during the establishment of infection, such as transport of nutrients and homeostatic regulation. As zinc is a metal that plays an important role in the regulation of host-pathogen interaction and changes in this micronutrient homeostasis are implicated in the pathogenesis of infectious diseases, the aim of this study was to identify the membrane proteins expressed under conditions of zinc deprivation. NanoUPLC-MSE technique was employed in order to identify membrane proteins of yeast cells (Pb01) grown in chemically defined media in the presence and absence of zinc. Transmission electron microscopy was performed to confirm the sample enrichment with membranes. Subsequently, the samples were digested and analyzed by NanoUPLC-MSE. In silico analysis was performed to determine the location of 460 proteins identified in extracts of Pb01 grown in + Zn (control) and TPEN (treated) medium. Among the identified proteins, 141 were classified as belonging to membranes and of those, 120 proteins were repressed and 21 were induced during zinc deprivation. Among the 141 membrane proteins, 81 showed transmembrane domains and 9 were classified as membranes proteins with post-transcriptional modification. A total of 15 membrane proteins showed signal peptide. Analysis of the function of membrane proteins, allowed the description that phospholipid metabolism and cell integrity maintenance pathways were affected by zinc deprivation. / Paracoccidioides spp. são fungos patogênicos, causadores da paracoccidioidomicose, uma importante micose sistêmica nos países latino-americanos. O sucesso da infecção depende da capacidade do patógeno obter micronutrientes essenciais (metais) a partir do hospedeiro. Este processo de captação de nutrientes ocorre através de transportadores associados às membranas. As membranas são constituídas por uma bicamada lipídica com proteínas associadas e estão envolvidas em diferentes processos durante o estabelecimento da infecção, como transporte de nutrientes e regulação homeostática da célula. Como o zinco é um metal que desempenha um papel importante na regulação da interação patógeno-hospedeiro e distúrbios na homeostase deste micronutriente estão implicados na patogênese de doenças infecciosas, o objetivo deste estudo foi identificar as proteínas de membranas expressas em condições de privação de zinco. A técnica NanoUPLC-MSE foi empregada para identificar proteínas de membranas de células de levedura (Pb01) cultivadas em meio quimicamente definido na presença e ausência de zinco. Microscopia eletrônica de transmissão foi realizada para confirmar o enriquecimento da amostra com membranas. Posteriormente, as amostras foram digeridas e analisadas por NanoUPLC-MSE. Análises in silico foram realizadas para determinação da localização de 460 proteínas obtidas do extrato proteico de Pb01 cultivado em meio com zinco (controle) e TPEN (tratado). Do total de proteínas identificadas, 141 proteínas foram classificadas como pertencentes a membranas e destas, 120 proteínas foram reprimidas e 21 foram induzidas durante privação de zinco. Dentre as 141 proteínas de membranas, 81 apresentaram domínio transmembrana e 9 foram classificadas como sendo de membrana, em decorrência de modificação pós-traducional. Um total de 15 proteínas de membrana apresentou peptídeo sinal. Análises da função das proteínas de membranas permitiu a descrição de que o metabolismo de fosfolipídeos e a integridade celular foram afetados pela privação de zinco.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-04-26T14:05:04Z No. of bitstreams: 1 2012 - Patricia Gon?alves Galv?o.pdf: 5289496 bytes, checksum: 8dcb41bc971793cc8b4cdf383401ade4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T14:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Patricia Gon?alves Galv?o.pdf: 5289496 bytes, checksum: 8dcb41bc971793cc8b4cdf383401ade4 (MD5) Previous issue date: 2012-03-01 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the protein profile expression of G. diazotrophicus PAL5 and its defective mutant in the indole compound production (lao-) grown in the presence or absence of tryptophan through 2DE-PAGE technique. The spectrometric analysis allowed the identification of 24 differentially expressed proteins. The majority of the proteins down regulated in the wild type PAL5 cultivated with tryptophan as compared to the cultivation without the amino acid belonged to the category of transductional modification, protein turnover and chaperones. For the mutant lao- grown in the same conditions, the majority of the proteins that presented differential expression belonged to the category of production and conversion of energy. In addition, the majority of the protein differentially expressed in the mutant lao- as compared to the wild-type PAL5 strains belonged to carbohydrates metabolism and transport. On the other hand, no proteins related to the tryptophan biosynthesis were detected in any condition, possibly due to the low yield of the proteins during the spectrometric analysis. Furthermore, mutants lao- and nif- of G. diazotrophicus were used for inoculation of micropropagated sugarcane plants in order to determine the influence of auxins produced by the bacteria in the plant growth promotion in comparison with PAL5. The first experiment, carried out in hydroponic conditions for 10 days showed a significant inoculation effect of the wild type on plant shoot. The other experiment was conducted in a period of 120 days in pots containing sand:vermiculite substrate fertilized with 30 and 60 ppm with ammonium sulphate enriched with 15N. The plants were inoculated in vitro with the wild type and mutants lao- and nif-, and the results showed a visual difference in the roots inoculated with PAL5 that showed higher volume suggesting a higher number of secondary roots and root hairs. On the other hand, the plants inoculated with the lao- mutant were ticker and showed lower number of secondary roots and root hairs. The shoot biomass of plants inoculated with PAL5 was higher than those inoculated with the mutant strains for both N dose, however the difference was not significant. Plants grown with 60 kg N dose and inoculated with the mutants showed lower accumulation of dry shoot mass than plants inoculated with the wild type strain. In conclusion, the present study showed the occurrence of several differentially expressed proteins either in the wild type strain or in the mutant lao- grown in LGI-P with and without tryptophan. The role played by these proteins in the metabolism of the bacteria requires additional studies, including different growth conditions. In addition, the inoculation of micropropagated sugarcane plants suggested a hormonal effect of the bacteria mainly on the root development e consequently in the N use efficiency. However, the size of the pots may have limited the plant development, suggesting that new experiments should be carried out in more appropriated conditions to confirm the influence of the indol production and the BNF during the association of the G. diazotrophicus and sugarcane plants / Este estudo teve por objetivo avaliar o perfil de express?o de prote?nas de G. diazotrophicus PAL5 e seu mutante defectivo na produ??o de compostos ind?licos (lao-) cultivados na presen?a e aus?ncia de triptofano atrav?s da t?cnica de 2DE-PAGE. A an?lise por espectrometria de massa permitiu a identifica??o de 24 prote?nas diferencialmente expressas. A maioria das prote?nas com a express?o diminu?da em PAL5 cultivada em meio com triptofano em rela??o ao meio de cultivo sem esse amino?cido pertenceu ? categoria modifica??o p?s-traducional, turnover de prote?nas e chaperonas. No mutante lao- cultivado nas mesmas condi??es, a maioria das prote?nas que apresentaram express?o diferencial pertencia ? categoria produ??o e convers?o de energia. Em adi??o, a maioria das prote?nas que foram diferencialmente expressas no mutante lao- em compara??o com a estirpe selvagem PAL5 pertencia ? categoria metabolismo e transporte de carboidratos. Por outro lado, n?o foram observadas prote?nas relacionadas ? bioss?ntese de triptofano em nenhuma condi??o analisada possivelmente devido ao baixo rendimento das identifica??es por espectrometria. Al?m das an?lises dos perfis de prote?nas, os mutantes lao- e nif- de G. diazotrophicus foram inoculados em plantas de cana-de-a??car micropropagadas com o objetivo de determinar a influ?ncia das auxinas na promo??o do crescimento dessa cultura em compara??o com a estirpe selvagem PAL5. O primeiro experimento, conduzido em condi??es de hidroponia pelo per?odo de 10 dias, mostrou efeito significativo da inocula??o da estirpe selvagem na promo??o de crescimento da parte ?rea das plantas, enquanto que o mutante lao-, n?o diferiu estatisticamente do controle n?o inoculado. O outro experimento, foi conduzido por 120 dias em vasos com substrato areia:vermiculita contendo 30 ou 60 ppm de sulfato de am?nio enriquecido com 15N e as pl?ntulas foram inoculadas in vitro. Os resultados mostraram uma diferen?a visual nas ra?zes das plantas inoculadas com PAL5, que se mostraram mais volumosas, aparentando um n?mero mais elevado de ra?zes secund?rias e p?los radiculares. J? as plantas inoculadas com lao- apresentaram ra?zes mais grossas, com um n?mero muito reduzido de ramifica??es ou p?los radiculares. A biomassa seca da parte a?rea das plantas inoculadas com PAL5 foi superior ?quelas inoculadas com as estirpes mutantes para as duas doses de nitrog?nio, por?m essa diferen?a n?o foi significativa. N?o foram observadas evid?ncias de contribui??o da FBN, por?m as plantas inoculadas com PAL5 foram menos eficientes na recupera??o do N fertilizante. Em conclus?o, o presente estudo mostra a ocorr?ncia de diversas prote?nas diferencialmente expressas tanto na estirpe selvagem como em lao- quando crescidas na presen?a e aus?ncia do amino?cido triptofano. A defini??o do papel dessas prote?nas no metabolismo da bact?ria requer estudos adicionais, inclusive em diferentes condi??es de cultivo. Em adi??o, a inocula??o dessas bact?rias em plantas de cana-de-a??car mostrou o efeito hormonal da bact?ria no desenvolvimento das ra?zes e, por conseguinte na maior efici?ncia de uso do N aplicado. Entretanto, dado a limita??o de espa?o f?sico dos vasos para o desenvolvimento das plantas, sugere-se a realiza??o de novos experimentos, em condi??es mais apropriadas, para confirmar a influ?ncia da produ??o de ?ndoles e da FBN durante a associa??o da bact?ria com as plantas de cana-de-a??car.

Made available in DSpace on 2017-05-12T14:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Iara _Fernanda Rocha (1).pdf: 1203704 bytes, checksum: 3b3c626c8325feae1cf11ce8968fd774 (MD5) Previous issue date: 2015-12-03 / Diatraea saccharalis is an important insect pest of sugarcane and other crops, so it has been the focus of research. In general, the insects present innate immune system, which come with a range of immune responses against microorganisms. Many antimicrobial peptides have been isolated and characterized from model insects such as Drosophila melanogaster and Bombyx mori. In the 5th instar larvae of Diatraea saccharalis has already been reported a protein of Gloverin family with antimicrobial activity. Considering these facts, the objectives of this study were to determine the protein profile of hemolymph larvae from Diatraea sacharalis at 5th instar challenged with Escherichia coli (ATCC 11224) and Bacillus subtilis (ATCC 6623), identify differentially expressed proteins and polypeptides by analyzing the proteomic data, and verifying the antimicrobial activity of crude extract on plates by inhibition of microbial growth. Proteins from the hemolymph of larvae of D. sacharalis challenged and unchallenged were extracted. The samples were quantified and subjected to two-dimensional electrophoresis (2-DE) to obtain a proteomic profile of native hemolymph, challenged by E. coli and B. subtilis. Each gel showed an average of 300 protein spots and 92 spots were correspondents in these gels on three conditions. Were taken 41 different protein spots from gels, these spots were digested with trypsin and analyzed by mass spectrometry of the type MALDI-TOF/TOF. In this analysis, it was possible to identify 10 proteins from MS and MS/MS spectra. Among these proteins were expressed by induction with both bacteria such as chitinase and antimicrobial peptides: protein homologous to the turandot (turandot the like-protein), protein homologous to attacin (Attacin like-protein), and protein homologous peptidoglycan recognition. Another antimicrobial peptide was found, the homologous to β-defensin (β-defensin-like protein), induced only in the hemolymph of the larvae challenged by B. subtilis. A homologous protein Cyclophilin (Cyclophilin-like protein) was found in the hemolymph of larvae challenged and non-challenged. In addition, were also found proteins with hatching activity, hydrolytic not characterized and hypothetical protein of unknown function. Additionally, it also tested the antimicrobial activity of crude extracts from the hemolymph, by testing inhibition of microbial growth plate area, and this analysis was observed inhibition of growth of B. subtilis with the hemolymph extract from larvae challenged with B. subtilis. This is the first analysis of proteomic profile of hemolymph of a major agricultural pest, which verified the expression of some proteins with several functions and four related proteins immune response. These results contribute to the understanding of the immune system D. saccharalis under condition of infection. / Diatraea saccharalis é um importante inseto praga da cana-de-açúcar e de outras culturas agrícolas, por isso, tem sido foco de pesquisas. De uma forma geral, os insetos apresentam sistema imunológico inato, que os provêm com uma gama de respostas imunológicas contra microrganismos. Inúmeros peptídeos antimicrobianos têm sido isolados e caracterizados a partir de insetos modelo, como Bombyx mori e Drosophila melanogaster. Em larvas de 5º ínstar de Diatraea saccharalis já foi reportada uma proteína da família Gloverina com atividade antimicrobiana. Considerando estes fatos, os objetivos deste trabalho foram determinar o perfil de proteínas da hemolinfa de larvas de Diatraea sacharalis em 5º ínstar desafiadas com Escherichia coli (ATCC 11224) e Bacillus subtilis (ATCC 6623), identificar proteínas e polipeptídios diferencialmente expressos através da análise dos dados proteômicos, e verificar a atividade antimicrobiana do extrato bruto em placas por meio da inibição do crescimento microbiano. Foram extraídas proteínas da hemolinfa de larvas de D. sacharalis desafiadas e de não desafiadas. As amostras foram quantificadas e submetidas à eletroforese bidimensional (2-DE) para obtenção de um perfil proteômico da hemolinfa nativa, de larvas desafiadas por E. coli e B. subtilis. Cada gel apresentou em média 300 spots protéicos e 92 destes spots eram correspondentes nos géis nas três condições. Foram retirados 41 spots protéicos diferentes dos géis, estes spots foram digeridos com tripsina e analisados por espectrometria de massas do tipo Maldi-ToF/ToF. Nesta análise, foi possível identificar 10 proteínas a partir dos espectros MS e MS/MS. Entre elas, proteínas que foram expressas pela indução com ambas as bactérias, como a quitinase, e os peptídeos antimicrobianos: proteina homóloga à turandot A (turandot A like-protein), proteina homóloga à Atacina (Attacin like-protein), proteína homóloga de reconhecimento de peptideoglicano. Outro peptídeo antimicrobiano encontrado, o homólogo à β-defensina (β-defensin like-protein), foi induzido somente na hemolinfa das larvas desafiadas por B. subtilis. Uma proteína homológa á Ciclofilina (Cyclophilin like-protein) foi encontrada na hemolinfa da larvas desafiadas e não-desafiadas. Além disso, também foram encontradas proteínas com atividade de eclosão, hidrolítica, não caracterizada e proteína hipotética com função desconhecida. Adicionalmente, foi também testada a atividade antimicrobiana dos extratos brutos da hemolinfa, pelo ensaio de zona de inibição do crescimento microbiano em placa, e nesta análise, foi verificada a inibição do crescimento de B. subtilis com o extrato da hemolinfa de larvas desafiadas com B. subtilis. Esta é a primeira análise do perfil proteômico da hemolinfa de uma importante praga agrícola, na qual verificou-se a expressão de algumas proteínas com funções diversas e quatro proteínas relacionadas a resposta imunulógica. Estes resultados contribuem para a compreensão do sistema imunológico da D. saccharalis sob condição de infecção.

Made available in DSpace on 2017-07-10T13:59:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Iara _Fernanda Rocha (1).pdf: 1203704 bytes, checksum: 3b3c626c8325feae1cf11ce8968fd774 (MD5) Previous issue date: 2015-12-03 / SIM (não especificado) / Diatraea saccharalis is an important insect pest of sugarcane and other crops, so it has been the focus of research. In general, the insects present innate immune system, which come with a range of immune responses against microorganisms. Many antimicrobial peptides have been isolated and characterized from model insects such as Drosophila melanogaster and Bombyx mori. In the 5th instar larvae of Diatraea saccharalis has already been reported a protein of Gloverin family with antimicrobial activity. Considering these facts, the objectives of this study were to determine the protein profile of hemolymph larvae from Diatraea sacharalis at 5th instar challenged with Escherichia coli (ATCC 11224) and Bacillus subtilis (ATCC 6623), identify differentially expressed proteins and polypeptides by analyzing the proteomic data, and verifying the antimicrobial activity of crude extract on plates by inhibition of microbial growth. Proteins from the hemolymph of larvae of D. sacharalis challenged and unchallenged were extracted. The samples were quantified and subjected to two-dimensional electrophoresis (2-DE) to obtain a proteomic profile of native hemolymph, challenged by E. coli and B. subtilis. Each gel showed an average of 300 protein spots and 92 spots were correspondents in these gels on three conditions. Were taken 41 different protein spots from gels, these spots were digested with trypsin and analyzed by mass spectrometry of the type MALDI-TOF/TOF. In this analysis, it was possible to identify 10 proteins from MS and MS/MS spectra. Among these proteins were expressed by induction with both bacteria such as chitinase and antimicrobial peptides: protein homologous to the turandot (turandot the like-protein), protein homologous to attacin (Attacin like-protein), and protein homologous peptidoglycan recognition. Another antimicrobial peptide was found, the homologous to β-defensin (β-defensin-like protein), induced only in the hemolymph of the larvae challenged by B. subtilis. A homologous protein Cyclophilin (Cyclophilin-like protein) was found in the hemolymph of larvae challenged and non-challenged. In addition, were also found proteins with hatching activity, hydrolytic not characterized and hypothetical protein of unknown function. Additionally, it also tested the antimicrobial activity of crude extracts from the hemolymph, by testing inhibition of microbial growth plate area, and this analysis was observed inhibition of growth of B. subtilis with the hemolymph extract from larvae challenged with B. subtilis. This is the first analysis of proteomic profile of hemolymph of a major agricultural pest, which verified the expression of some proteins with several functions and four related proteins immune response. These results contribute to the understanding of the immune system D. saccharalis under condition of infection. / Diatraea saccharalis é um importante inseto praga da cana-de-açúcar e de outras culturas agrícolas, por isso, tem sido foco de pesquisas. De uma forma geral, os insetos apresentam sistema imunológico inato, que os provêm com uma gama de respostas imunológicas contra microrganismos. Inúmeros peptídeos antimicrobianos têm sido isolados e caracterizados a partir de insetos modelo, como Bombyx mori e Drosophila melanogaster. Em larvas de 5º ínstar de Diatraea saccharalis já foi reportada uma proteína da família Gloverina com atividade antimicrobiana. Considerando estes fatos, os objetivos deste trabalho foram determinar o perfil de proteínas da hemolinfa de larvas de Diatraea sacharalis em 5º ínstar desafiadas com Escherichia coli (ATCC 11224) e Bacillus subtilis (ATCC 6623), identificar proteínas e polipeptídios diferencialmente expressos através da análise dos dados proteômicos, e verificar a atividade antimicrobiana do extrato bruto em placas por meio da inibição do crescimento microbiano. Foram extraídas proteínas da hemolinfa de larvas de D. sacharalis desafiadas e de não desafiadas. As amostras foram quantificadas e submetidas à eletroforese bidimensional (2-DE) para obtenção de um perfil proteômico da hemolinfa nativa, de larvas desafiadas por E. coli e B. subtilis. Cada gel apresentou em média 300 spots protéicos e 92 destes spots eram correspondentes nos géis nas três condições. Foram retirados 41 spots protéicos diferentes dos géis, estes spots foram digeridos com tripsina e analisados por espectrometria de massas do tipo Maldi-ToF/ToF. Nesta análise, foi possível identificar 10 proteínas a partir dos espectros MS e MS/MS. Entre elas, proteínas que foram expressas pela indução com ambas as bactérias, como a quitinase, e os peptídeos antimicrobianos: proteina homóloga à turandot A (turandot A like-protein), proteina homóloga à Atacina (Attacin like-protein), proteína homóloga de reconhecimento de peptideoglicano. Outro peptídeo antimicrobiano encontrado, o homólogo à β-defensina (β-defensin like-protein), foi induzido somente na hemolinfa das larvas desafiadas por B. subtilis. Uma proteína homológa á Ciclofilina (Cyclophilin like-protein) foi encontrada na hemolinfa da larvas desafiadas e não-desafiadas. Além disso, também foram encontradas proteínas com atividade de eclosão, hidrolítica, não caracterizada e proteína hipotética com função desconhecida. Adicionalmente, foi também testada a atividade antimicrobiana dos extratos brutos da hemolinfa, pelo ensaio de zona de inibição do crescimento microbiano em placa, e nesta análise, foi verificada a inibição do crescimento de B. subtilis com o extrato da hemolinfa de larvas desafiadas com B. subtilis. Esta é a primeira análise do perfil proteômico da hemolinfa de uma importante praga agrícola, na qual verificou-se a expressão de algumas proteínas com funções diversas e quatro proteínas relacionadas a resposta imunulógica. Estes resultados contribuem para a compreensão do sistema imunológico da D. saccharalis sob condição de infecção.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2014-01-21T12:33:06Z No. of bitstreams: 1 T_54.pdf: 3536931 bytes, checksum: 59552db3345f3f24dce1136cf6f46d7c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-21T12:33:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 T_54.pdf: 3536931 bytes, checksum: 59552db3345f3f24dce1136cf6f46d7c (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / Apesar do grande esforço na tentativa de controlar a esquistossomose, esta doença continua sendo uma das mais prevalentes no mundo. Novas intervenções são uma prioridade importante para a eliminação da esquistossomose, uma vez que o controle da doença tem sido baseado essencialmente na quimioterapia, a qual não previne a reinfecção. O desenvolvimento de uma vacina para a esquistossomose para proteção a longo prazo, bem como de um novo teste de diagnóstico, constituirá um grande avanço para o controle da doença. A compreensão da resposta imunológica associada com os estados de infecção/proteção pode constituir a base da descoberta de novos antígenos biomarcadores para vacina e diagnóstico para a esquistossomose. Recentes avanços na área pós-genômica têm permitido uma busca mais racional por biomarcadores. Inicialmente, eletroforese bidimensional (2-DE) de extrato proteico total de diferentes fases de desenvolvimento do Schistosoma mansoni foi realizada, obtendo-se um perfil de separação de spots proteicos com boa resolução com os extratos de todas as fases, mas com um perfil distinto entre eles. Posteriormente, proteínas do extrato proteico de verme adulto, total e de tegumento, foram separaradas por 2-DE e, então, incubadas com amostras de soro de indivíduos infectados (INF) e não infectados de área endêmica (NE) e de indivíduos não infectados de área não endêmica (NI) para esquistossomose em experimento de Western-blotting bidimensional (2D-WB). No total, 47 proteínas imunogênicas foram identificadas por espectrometria de massas. Embora a maioria dos spots proteicos sejam imunogênicos aos diferentes pools de soro, nove spots proteicos reagiram exclusivamente com o pool de soro INF e um com o pool de soro NE. Algumas glicoproteínas foram identificadas no extrato proteico total de verme adulto de S. mansoni usando o método Periodic Acid-Schiff e lectina-blotting. No entanto, o tratamento com periodato/borohidreto indicou que a porção glicídica não tem influência sobre a reatividade das proteínas aos diferentes pools de soro utilizados nos experimentos de 2D-WB. Western-blotting de duas proteínas recombinantes, selecionadas dos experimentos de 2D-WB, mostrou um perfil de reconhecimento pelos diferentes pools de soro semelhante ao das proteínas nativas. Dentre as proteínas imunogênicas identificadas nos experimentos de 2D-WB, 27 foram expressas in vitro com sucesso, as quais serão utilizadas em experimentos futuros em um microarranjo de proteínas. A associação de eletroforese bidimensional e Western-blotting permitiu a seleção de um painel de antígenos proteicos capazes de distinguir os estados de suscetibilidade e resistência à esquistossomose mansônica. Estes antígenos poderão ser utilizados como biomarcadores no desenvolvimento de uma vacina e/ou de um novo teste diagnóstico para a doença. / Despite intensive efforts towards schistosomiasis control, the disease is still one of the most prevalent in the world. New interventions are a high priority for the elimination of schistosomiasis, since the disease control has been essentially based on the use of chemotherapy, which does not prevent re-infection. The development of a long term protection and an effective diagnostic assay would be a major breakthrough for schistosomiasis control. Understanding which aspects of the immune responses are associated with infection/protection status may constitute the basis for the understanding of a successful vaccine and could also indicate new diagnostic candidates. Progress on post-genomic technologies resulted in the development of rational and global approaches for the discovery of new biomarkers. Initially, two-dimensional electrophoresis (2-DE) of different developmental stages protein extracts of Schistosoma mansoni were conducted. It was obtained a good separation pattern of the spots that was distinguishable in all the stages evaluated. Subsequently, two-dimensional electrophoresed S. mansoni adult worm protein extracts, total and tegumental, were probed with pooled sera of infected (INF), non-infected individuals from endemic area (NE) and non-infected individuals from non-endemic schistosomiasis area (NI) in a two-dimensional Western-blotting experiment (2D-WB). A total of 47 immunoreactive proteins were identified by mass spectrometry. Although most of the protein spots were immunoreactive to all of the serum pools, nine reacted exclu sively with the INF serum pool, and one with the NE serum pool. Glycoproteins were identified in the S. mansoni adult worm total protein extract using Periodic Acid–Schiff base method and lectin-blotting. However, periodate/borohydride treatment indicated that the glycoprotein glycan portion had no influence on the immunoreaction obtained in the 2D-WB experiments using different serum pools. Western-blotting of two 2D-WB selected recombinant proteins showed a similar serum recognition profile of the native protein. A total of 27 immunoreactive proteins identified by 2D-WB approach were successfully in vitro expressed and will be used in future experiments of protein microarray. The association of two-dimensional electrophoresis and Western-blotting assays allowed the selection of a protein antigens panel capable to diagnose the schistosomiasis mansoni susceptibility/resistance status. These antigens may be used as biomarkers for the development of a vaccine and/or a new diagnostic test for the disease

SOUSA, Solange Damasceno. Proteômica do fluido da Rete Testis de carneiros Morada Nova. 2015. 133 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Zootecnia, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia. Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-08-10T12:26:45Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-10T15:18:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T15:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) Previous issue date: 2015 / The aim of the study was to identify and characterize the proteins of the rete testis fluid from Morada Nova rams. The testicles, obtained from six slaughtered Morada Nova rams, were immediately dissected. The head of the epididymis was separated to gain access to the efferent ducts. The fluid from the efferent ducts was obtained by testis massage. Thereafter, the fluid was centrifuged to remove cell debris and sperm. Proteins were precipitated with acetone at -20°C and quantified by the Bradford assay. Each sample (400 µg) was focused in strips of 13 cm (pH 4-7) and the second dimension was conducted on SDS-PAGE 15%. The gels were scanned with an ImageScanner II (GE Lifesciences, USA) and analyzed using the PDQuest® version 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, USA). Spots detected after PDQuest analysis of 2-D maps were cut from gels and submitted to trypsin digestion. Proteins were identified using tandem mass spectrometry. Protein information obtained by MASCOT was analyzed using the software tool for searching annotations of proteins (STRAP). Protein-protein interaction networks were obtained from STRING version 9.0 database. In the gels were detected 227 ± 32.1 spots (mean ± SD), where 51% of the proteins were found above 40 kDa, corresponding to 65% of the intensity of all spots detected. Based on gene ontology analysis, the most common biological processes associated with proteins from rete testis fluid were regulation (24.28%) and cellular process (23.27%). Binding (27.42%) and catalytic activity (19.30%) corresponded to the most frequent molecular functions for those proteins. The most intensely expressed proteins were: albumin, clusterin, serotransferrin, immunoglobulin gamma-1 chain and alpha-2-HS-glycoprotein. The rete testis fluid has a large quantity of proteins related to the spermatogenesis. This feature is important in view of the fact that these molecules contribute to the development of the germ cells, as a result of the transport and conversion of substances required to the production of male gametes. / O objetivo do estudo foi identificar e caracterizar as proteínas do fluido da rete testis de carneiros Morada Nova. Os testículos, obtidos de seis carneiros Morada Nova abatidos, foram imediatamente dissecados. A cabeça do epidídimo foi separada para ter acesso aos ductos eferentes. O fluido oriundo dos ductos eferentes foi obtido por massagem do testículo. Posteriormente, o fluido foi centrifugado para remoção dos debris celulares e espermatozoides. As proteínas foram precipitadas com acetona a -20°C e quantificadas pelo método de Bradford. Cada amostra (400 μg) foi focalizada em tiras de 13 cm (pH 4-7) e a segunda dimensão foi realizada em SDS-PAGE a 15%. Os géis obtidos foram escaneados com um ImageScanner II (GE Lifesciences, EUA) e analisados utilizando o aplicativo PDQuest® versão 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, EUA). Os spots detectados após a análise dos mapas 2-D no PDQuest foram cortados dos géis e submetidos a digestão com tripsina. As proteínas foram identificadas por espectrometria de massa em tandem. A informação sobre a proteína adquirida pela busca no MASCOT foi analisada através da utilização do programa para anotações de proteínas (STRAP). Redes de interação proteína-proteína foram obtidas a partir do banco de dados STRING versão 9.0. Nos géis foram detectados em média 227 ± 32,1 spots, onde 51% das proteínas se encontraram acima de 40 kDa representando 65% da intensidade de todos os spots detectados nos géis. Com base na análise da ontologia gênica, os processos biológicos mais comuns associados às proteínas do fluido rete testis foram regulação (24,28%) e processos celulares (23,27%). Ligação (27,42%) e a atividade catalítica (19,30%) corresponderam às funções moleculares mais frequentes. As proteínas mais intensamente expressas foram: albumina, clusterina, serotransferrina, imunoglobulina gama-1 e alfa-2-HS-glicoproteína. A maioria das proteínas identificadas desempenha importantes papéis nos processos de espermatogênese, proteção espermática, motilidade, capacitação e reação acrossômica. O fluido da rete testis possui várias proteínas envolvidas na espermatogênese, o que representa um importante fator, uma vez que estas moléculas contribuem para o desenvolvimento das células germinativas, participando no transporte e conversão de substâncias requeridas para a produção dos gametas masculinos.

Made available in DSpace on 2016-03-10T13:18:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 simone_kikuchi_ioc_dout_2014.pdf: 2479959 bytes, checksum: 2a905b9a047aa9c1b82436e5810d80f4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A doença de Chagas é uma doença tropical negligenciada que atinge principalmente a América Latina. Trypanosoma cruzi, agente etiológico desta enfermidade, é largamente distribuído no continente americano e apresenta uma grande variabilidade fenotípica e genotípica em suas cepas. Os fatores que determinam as diferentes formas clínicas da doença, assim como as razões pela qual uma cepa apresenta tropismo diferenciado não estão claros. De forma semelhante, a correlação entre a variabilidade genética do parasito, sua relação com o desenvolvimento clínico da doença, assim como sua distribuição geográfica também não está bem estabelecida. Estas observações associadas com a variabilidade na resposta ao tratamento conduzem ao fato de que este cenário complexo, possivelmente, será mais bem entendido quando houver uma completa caracterização do parasito e o entendimento da relação parasito-hospedeiro na doença de Chagas. Desta forma, com o objetivo de estudar esta diversidade, caracterizações de populações deste parasito têm sido realizadas através de técnicas biológicas, bioquímicas e moleculares tentando associar determinado grupo de parasito a um determinado perfil epidemiológico. Neste estudo, foram utilizados parâmetros moleculares e bioquímicos para caracterização de amostras de T.cruzi isolados silvestres de Triatoma vitticeps do município de Santa Maria Madalena (Rio de Janeiro) e cepas da Amazônia (Manaus e Barcelos). Estudos baseados no perfil eletroforético de isoenzimas, propuseram que o T.cruzi fosse classificado em 3 zimodemas (ZI, ZII e ZIII). Posteriormente, através de diversas técnicas de biologia molecular,classificou-se as cepas em duas grandes linhagens filogenéticas: T.cruzi I (que se correlaciona ao ZI) e T.cruzi II (que se correlaciona ao ZII) Dados ecológicos e moleculares sugerem que as cepas pertencentes ao ZIII estejam mais relacionadas a T. cruzi I do que T. cruzi II, mas na realidade a posição de ZIII permanece controversa. A diversidade encontrada entre os isolados, bem como entre estes e cepas já estabelecidas nos leva a indagações sobre as moléculas de superfície destas populações e de que forma estas poderiam influenciar na interação parasito-hospedeiro. Este trabalho tem como objetivo principal definir o mapa de proteínas solúveis das cepas e isolados pertencentes ao ZIII ressaltando as diferenças existentes. Desta forma, buscamos analisar as os mapas proteícos, perfil de proteases e estudar a expressão de glicoproteínas de superfície (Gp 82, Gp 35/50, Gp 90) destes isolados de T. cruzi (ZIII) (epimastigota e tripomastigota) obtidos de triatomíneos silvestres. Para isto foram utilizadas as técnicas de eletroforese bidimensional e espectrometria de massa. Foi feita a padronização de protocolos para a obtenção de extratos protéicos das formas epimastigotas e da separação das proteínas por eletroforese bidimensional. Os ensaios realizados na faixa de pH 3-10, revelaram uma grande diversidade de spots. Entretanto, quando a faixa de pH foi diminuida (4-7) houve um aumento no número de spots revelados. Uma diversidade considerável na expressão de proteína bem como na intensidade de vários spots também foi observada entre as cepas e isolados estudadas. Experimentos de western blot e citometria de fluxo mostraram uma expressão diferencial das gps nos diferentes isolados. Esses resultados contribuem para o conhecimento e registro do perfil de alguns isolados silvestres de T. cruzi em regiões ainda não acometidas pela doença. Nossos resultados apontaram uma heterogeneidade destes isolados de T. cruzi relacionados à biologia e expressão diferencial de enzimas de superfície / Chagas disease is a neglected tropical disease which affects mainly Latin America. Trypanosoma cruzi , the etiologic agent of Chagas disease, is widely distributed in the American continent. The factors that determine the different clinical forms of the disease, as well as the reasons why one strain shows differential tropism are not clear. Similarly, the correlation between the genetic variability of the parasite, its relationship with the clinical development of the disease, as well as their geographical distribution is also not well established. Genetical studies are important to clarify the intra - specific heterogeneity of the parasite, the study of the biological behavior and the host - parasite relationships could clarify the importance of different strains, in the determination of clinico - pathological manifestations of Chagas' disease. These observations associated with the variability in response to treatment leads to the fact that this complex scenario possibly be better understood when there is a complete characterization of the parasite and the understanding of host - parasite relationship in Chagas disease. Thus, aiming t o study aim of studying this diversity characterizations of populations of this parasite have been done by biological, biochemical and molecular techniques trying to associate certain group of a given parasite epidemiology. In this study, molecular and bio chemical parameters for the characterization of T. cruzi isolated from Triatoma vitticeps municipality of Santa Maria Madalena (Rio de Janeiro) and strains of the Amazon (Manaus and Barcelos) were used. Studies based on enzyme electrophoresis profile clust ered T.cruzi isolates into 3 zymodemes (ZI, ZII and ZIII). Molecular techniques showed a dimorphism among the isolates, grouping them into T.cruzi I (related to ZI) and T.cruzi II (related to ZII). Ecological and molecular data suggest that ZIII strains ar e more related to T. cruzi I than T. cruzi II , but their exact phylogeny is an unresolved issue. This work aims to define the map of soluble proteins of strains and isolates belonging to ZIII highlighting the differences. The diversity found among isolates , as well as between them and established strains leads to questions about the surface molecules of these populations and how these could influence the host - parasite interaction. Thus, we seek to analyze the protein maps, profile of proteases and study the expression of surface glycoproteins (Gp 82, Gp 35/50, Gp 90) of these isolates of T. cruzi (ZIII) (epimastigote and trypomastigote) obtained from silvatic triatomine s . To this end the techniques of two - dimensional electrophoresis and mass spectrometry wer e used. The present work describes the standardization of a protocol in order to obtain reproducible extraction and separation of soluble proteins using two dimensional gel electrophoresis from different ZIII strains. The experiments carried out in pH 3 - 10 , revealed a great diversity of spots . Further separation using a narrow pH range (4 - 7) showed an increase in number of spots. A considerable diversity in protein expression as well as the intensity of various spots was also observed between the strains a nd isolates studied. Experiments western blot and flow cytometry showed a differential expression of the different GPS isolated. These results contribute to the knowledge and record of some wild isolates of T. cruzi in areas not yet affected by the disease profile. Our results showed a heterogeneity of isolates of T. cruzi biology and related differential expression of enzymes surface.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Durante o tratamento radioterápico para tumores localizados na região torácica, parte do coração frequentemente é incluída no campo de tratamento e pode receber doses de radiação ionizante, significativas em relação à terapêutica. A irradiação do coração é capaz de causar importantes complicações cardíacas ao paciente, caracterizadas por alterações funcionais progressivas cerca de 10 a 20 anos após a exposição do órgão. Devido ao seu alto grau de contração e grande consumo energético, o tecido cardíaco é altamente dependente do metabolismo oxidativo que ocorre nas mitocôndrias. Danos as estas organelas podem levar ao decréscimo da produção de energia, tendo um impacto direto sobre a performance cardíaca. Ainda, ao interagir com as células, a radiação ionizante pode gerar uma série de eventos bioquímicos que conduzem a uma resposta celular complexa, em que muitas proteínas parecem estar envolvidas. Tendo em vista tais conhecimentos, o objetivo do estudo foi avaliar o aspecto ultraestrutural do tecido cardíaco, a bioenergética mitocondrial e a expressão diferencial de proteínas após irradiação. Os ensaios foram realizados em amostras de tecido cardíaco de ratos Wistar irradiados com dose única de 20 Gy direcionada ao coração. As análise tiveram início 4 e 32 semanas após irradiação. A análise ultraestrutural foi realizada através de microscopia eletrônica de transmissão. A respiração mitocondrial foi mensurada em oxígrafo, a partir das taxas de consumo de oxigênio pelas fibras cardíacas. A identificação de proteínas diferencialmente expressas foi investigada através de duas técnicas proteômicas: 2D-DIGE (2-D Fluorescence Difference Gel Electrophoresis) e uma abordagem label-free seguida de espectrometria de massas. Os resultados mostraram que os efeitos tardios da radiação incluem a degeneração das mitocôndrias e das unidades contráteis do tecido cardíaco, disfunções na cadeia respiratória mitocondrial e expressão diferencial de proteínas envolvidas no metabolismo energético de carboidratos, lipídeos e da fosfocreatina. De forma geral, o estudo mostrou que a irradiação cardíaca prejudica o processo de síntese energética, conduzindo a um déficit da taxa respiratória mitocondrial como efeito tardio. Tal evento pode culminar em disfunções mecânicas no coração, caracterizando o desenvolvimento de doenças cardíacas radioinduzidas. / During radiotherapy for tumors located at toracic region, part of the heart is often included in the treatment field and may receive a significant ionizing radiation dose comparing to the therapeutics. Heart irradiation is able to cause substantial cardiac complications to patient, characterized by functional progressive changes from 10 to 20 years after the exposure of the organ. Because of its high level of contraction and large energetic consumption, cardiac tissue is highly depending on oxidative metabolism which happens at mitochondrias. Damage to these organelles can lead to decreased energy production, having a direct impact on cardiac performance. Even when interacting with cells, ionizing radiation can generate a series of biochemical events that lead to a complex cellular response, in many proteins seem to be involved. Given this knowledge, the aim of the study was to evaluate the ultrastructural appearance of cardiac tissue, mitochondrial bioenergetics and differential expression of proteins after irradiation. The tests were performed on samples of cardiac tissue of rats irradiated with single dose of 20 Gy directed to the heart. The analysis started 4 to 32 weeks after irradiation. The ultrastructural analysis was performed by transmission electron microscopy. Mitochondrial respiration was measured in oxigraph from rates of oxygen consumption by cardiac fibers. The identification of differentially expressed proteins was investigated using two proteomic techniques: 2D-DIGE (2-D Fluorescence Difference Gel Electrophoresis) and a label-free approach followed by mass spectrometry. The results showed that the late effects of radiation include degeneration of mitochondria and contractile units of cardiac tissue, dysfunction in the mitochondrial respiratory chain and differential expression of proteins involved in energy metabolism of carbohydrates, lipids and phosphocreatine. In general, the study showed that the cardiac irradiation damages the process of synthesis energy, leading to a deficit in mitochondrial respiratory rate as late effect. Such event may result in mechanical dysfunction in the heart, characterizing the development of radiation-induced heart disease.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:02:43Z : No. of bitstreams: 1 facincani_ap_dr_jabo.pdf: 858313 bytes, checksum: ed1c0a29bbfb5d008f9e8ca583e52cf0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A bactéria fitopatogênica Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) é o agente causal do cancro cítrico, responsável por perdas significativas na citricultura nacional e mundial. Com a finalidade de se obter um primeiro mapa proteômico de referência da Xac, as bactérias foram cultivadas em dois meios não indutores de virulência (meios CN e TS8), e as proteínas foram digeridas com tripsina e analisadas pela tecnologia de MudPIT (Tecnologia de Identificação Multidimensional de Proteínas). Trinta e nove por cento de todas as proteínas preditas pelo genoma da Xac foram identificadas através de seus peptídeos, e estão distribuídas em todas as categorias funcionais. Além disso, 25% das proteínas designadas como hipotéticas conservadas do genoma foram identificadas. Outro objetivo deste trabalho foi analisar o perfil de expressão protéico durante a patogênese decorrente do contato Xac / The phytopathogenic bacteria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) is the causal agent of the citrus canker disease, which responds for important losses in national and worldwide citriculture. In arder to obtain the first proteomic reference map of Xac, the bacterium was grown on two non-inductive media for bacterial virulence (CN and TSB media) and proteins were proteolysed with trypsin and analyzed by MudPIT technology (Multidimensional Protein Identification Technology). Thirty nine per cent of ali predicted proteins from Xac genome were identified with their component peptides as belonging to ali functional categories. Besides, 25% of proteins described as conserved hypothetical in Xac's genome were identified. Another aim of this study was to analyze the proteome profile during Xac

Made available in DSpace on 2015-03-26T12:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1360029 bytes, checksum: 35b5c53d7d26fedd4a7b89866d26c3e0 (MD5) Previous issue date: 2012-05-31 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Hormesis is a widely used in toxicology to describe the biphasic dose-response curve, where exposure to chemical or physical stress induces a stimulatory or inhibitory response dose-dependent. This phenomenon is typically described by a nonlinear dose-response where exposure to low levels of stress induces a stimulatory effect while high levels of exposure cause inhibition or toxicity. Two reparameterized logistic-logarithmic models were used to describe deltamethrin dose-response in Sitophilus zeamais, two insecticide-resistant strains and one insecticide-susceptible strain. Moreover, the profile of protein expression was examined in three populations. The biphasic dose-response was observed in three tested strains. It was observed several changes in protein profiling expression. In insecticide-resistant strains prevailed up-regulation protein expression (increase in spot volume) while in the insecticide-susceptible strain was observed down-regulation expression in most spots. This reduction may be due to a more extend refractory period and consequently greater delay in restoring the homeostatic state in the insecticide-susceptible strain. Few spots were identified as the expression of new proteins in the three strains. The Jacarezinho strain showed the largest number of protein spots, were six spots in the Jacarezinho strain, one spot in the Juiz de For a strain and no spot in the Sete Lagoas susceptible strain. This wide variation reflects the difficulty of relating the molecular events with the responses obtained in the dose-response curves. Although the biological responses can be observed with relative difficulty, the myriad of molecular events in response to changes in the environment make it extremely difficult to identify the mechanistic events involved in the stress response. The change in the profile of protein expression between populations reflects the difficulty in understanding the mechanisms involved in the hormesis. The exposure to even moderate doses of stress induces many changes in the profiling protein expression. In a next step the identification of differentially expressed proteins would be of great importance to check whether groups of common proteins among populations are affected. Besides the greater magnitude in population growth, moderate doses of deltamethrin resistant populations have a higher profile changes in protein expression and this behavior seems to be dependent on life history parameters. / Hormese é um termo amplamente utilizado na toxicologia para descrever o comportamento bifásico da curva dose-resposta, onde a exposição ao estresse físico ou químico induz uma resposta estimulatória ou inibitória dose-dependente. O fenômeno é caracteristicamente descrito por um modelo dose-resposta não-linear onde a exposição a baixos níveis de estresse induz um efeito estimulatório enquanto altos níveis de exposição provocam inibição ou toxicidade. Dois modelos logarítmico-logísticos reparameterizados foram utilizados para avaliar bioensaios dose-resposta em Sitophilus zeamais, duas populações resistentes e uma susceptível a inseticidas. Além disso, o perfil de expressão de proteínas foi analisado nas três populações. A curva dose-resposta foi bifásica para as três populações. Foi observado várias alterações no perfil de expressão de proteínas. Nas populações resistentes prevaleceu o aumento de expressão (aumento no volume do spot) enquanto na população susceptível foi observado redução de expressão na maioria dos spots diferencialmente expressos. Essa redução pode ser devido a um período refratário mais prologando nessa população e consequentemente maior retardo no restabelecimento do estado homeostático. Poucos spots foram identificados como expressão de novas proteínas nas três populações. A população de Jacarezinho foi a que apresentou o maior número de spots com expressão de novas proteínas, foram seis spots para população de jacarezinho, um spot para população de Juiz de Fora e nenhum spot na população susceptível de Sete Lagoas. Essa grande variação reflete a dificuldade de relacionar os eventos moleculares com as respostas obtidas nas curvas dose-resposta. Embora as respostas biológicas possam ser observadas com relativa dificuldade, a miríade de eventos moleculares em resposta as variações do ambiente tornam extremamente difícil identificar os eventos mecanisticos envolvidos com a resposta ao estresse. A variação no perfil de expressão de proteínas entre populações reflete a dificuldade para compreensão dos mecanismos envolvidos com o efeito hormético. A exposição mesmo a doses moderadas de estressse induziu muitas alterações no perfil de expressão de proteínas. Em uma próxima etapa a identificação das proteínas diferencialmente expressas seria de grande importância para verificarmos se grupos de proteínas comuns entre as populações são afetados. Além de apresentar maior magnitude no incremento populacional, em doses moderadas de deltametrina, as populações resistentes apresentam maior alteração no perfil de expressão de proteínas e esse comportamento parece ser dependente dos parâmetros de história de vida.