Orientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Banca: Solange Maria Gennari / Banca: Maria de Lurdes de Azevedo Rodrigues / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Gervasio Henrique Bechara / Resumo: Para estudar a cinética populacional de células imune/inflamatórias na infecção natural por Toxocara vitulorum em bezerros búfalos, realizou-se a quantificação de mastócitos, eosinófilos, linfócitos intraepiteliais (LIE) e células caliciformes na camada intraepitelial e de macrófagos na parede do intestino delgado. Para isto, amostras de tecidos foram retiradas do duodeno, jejuno e íleo de seis grupos de animais, de acordo com o resultado do exame coprológico, ou seja: animais que estavam no início ou ascensão (1), no pico (2) do parasitismo, durante as fases de declínio ou expulsão (3), e de pós-expulsão dos parasitas (4), além de dois grupos controles de animais não parasitados por T. vitulorum com idades médias entre 30 (C30) e 50 (C50) dias. Pelo estudo morfológico, feito através de mensurações de todas as camadas da parede do intestino delgado, constatou-se somente uma significativa atrofia vilosa no duodeno, durante as fases de ascensão, de pico e de expulsão do parasita, mas a hipertrofia muscular não foi observada. Concluiu-se que a infecção pelo nematódeo T. vitulorum em bezerros búfalos foi responsável pela hiperplasia celular (LIEs, células caliciformes, eosinófilos e mastócitos) na camada intraepitelial e pela interação entre mastócitos e processos nervosos na mucosa, nos plexos submucoso e mioentérico. Como estas alterações celulares predomindando no pico da infecção normalizaram-se após a expulsão, concluiu-se também que elastiveram participação no mecanismo imunológico celular de controle e expulsão do parasita pelo hospedeiro. O macrófago presente em maior quantidade na fase da pós-expulsão sugeriu uma importante participação destas células na recuperação das lesões inflamatórias nesta infecção. / Abstract: The populational kinetics of immune/inflammatory cells was studied in the wall of the small intestine from buffalo calves naturally infected with Toxocara vitulorum. Samples of tissues were removed from duodenum, jejunum and ileum of four groups of animals during the beginning of the infection, at the peak of egg output, during the period of expulsion and post-expulsion of the worms, as well as from uninfected calves. Cells (mast cells, eosinophils, intraepithelial lymphocytes - IEL and goblet cells) present in the epithelial layer (intraepithelial) of the small intestine were counted. In the duodenum, jejunum and ileum, the population of mast cells, eosinophils and lymphocytes increased significantly during the peak of the infection. Goblet cell numbers increased also during the beginning and at the peak of the infection. The decline of the number of these cells occurred during the periods of expulsion of the worms reaching to uninfected control counts at the post-expulsion period indicated a role of these cells in the process of expulsion of T. vitulorum by the buffalo calves. Morphological examinations showed a significant vilar atrophy, particularly in the duodenum during the beginning, peak and during the phase of expulsion of the worms, but smooth muscle hypertrophy or other alteration was not observed in any phase of the infection. In conclusion, the infection by T. vitulorum in buffalo calves elicited cellular hyperplasy of LIEs, goblet cells, eosinophils and mast cells in the intraepithelial layer of the small intestines and association between mast cells and nervous process in the mucosa and in the submucosal and mioentérico plexa, these cellular changes might be important for the worm expulsion. The macrophages presents in high numbers in the post-expulsion phase might have important role in the recovery of the infection. / Doutor

Orientador: Maria da Glória Buzinaro / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a imunidade ativa e passiva contra rotavirose bovina induzida por vacina comercial em vacas e seus respectivos bezerros, oriundos de propriedade no município de Cravinhos, Estado de São Paulo. Foram realizadas análises dos níveis séricos das imunoglobulinas IgG, IgG1, IgG2, IgM e IgA anti-rotavírus das vacas antes da vacinação (aproximadamente 60 dias antes do parto), antes da revacinação (aproximadamente 30 dias antes do parto) e no momento do parto, pela técnica de ELISA indireto. Os níveis colostrais das imunoglobulinas IgG, IgG1, IgG2 IgM e IgA no dia do parto foram avaliados pela mesma técnica. Os níveis de imunoglobulinas dos bezerros, nascidos das vacas vacinadas e não vacinadas alimentados com seus respectivos colostros, foram avaliados no dia do nascimento (D0) antes da mamada do colostro e 1, 7, 14, 21 e 28 dias após o nascimento. A excreção de rotavírus nas fezes dos bezerros foi avaliada por SDS-PAGE. Neste estudo os níveis séricos de IgM e IgA foram significativamente maiores nas vacas que não foram vacinadas, o que refletiu no aumento da IgM no primeiro dia de vida dos bezerros nascidos destas vacas. O grupo das vacas vacinadas tiveram níveis séricos de IgG1 e níveis colostrais de IgG2 aumentados em relação às vacas do grupo controle, mas não houve diferenças significativas nos níveis de imunoglobulinas dos bezerros nascidos de vacas vacinadas ou não vacinadas. Em ambos os grupos houve excreção de rotavírus nas fezes, e, apesar de baixa ocorrência, um bezerro nascido de vaca vacinada excretou rotavírus posteriormente (aos 21 dias) aos dois bezerros nascidos de vacas não vacinadas (7 e 14 dias). Os resultados deste estudo demonstraram que a vacinação materna no terço final de gestação com vacina inativada retardou, mas não evitou a ocorrência da rotavirose / Abstract: The aim of this study was evaluated the active and passive immunity against rotavirus induced by vaccination with an inactive commercial vaccine in cows and their respective calves from a farm of Cravinhos, state of São Paulo. The analysis of IgG, IgG1, IgG2 , IgM and IgA were done in serum 60 days before calving (before vaccination); 30 days before calving (before revaccination) and in the day of calving, with indirect ELISA. The levels of IgG, IgG1, IgG2, IgM and IgA in colostrum were evaluated in the day of calving, with the same technique. The levels of calves' immunoglobulin were evaluated in the day of born and 1, 7, 21 and 28 days of age. The secretion of rotavirus was evaluated in fecal samples of calves by SDS-PAGE. In this study, levels of IgM and IgA were increased in cows that were not vaccinated, and their calves, fed their colostrums, have levels of IgM increased one day after born. Vaccinated cows have serum IgG1 and colostral IgG2 higher than non vaccinated cows but statistics differences in levels of immunoglobulin were not found in calves. In both groups, was detected rotavirus in feces of calves, and besides the low occurrence in this study, one calf of vaccinated cow excreted rotavirus in day 21, while two calves born of non vaccinated cows excreted rotavirus with 7 and 14 days. In conclusion, the vaccination of cows with a commercial inactivated vaccine did not prevent the rotaviruses in calves / Mestre

Orientador: Paulo Traiman / Coorientador: Andréa Teixeira de Carvalho / Banca: Anagloria Pontes / Banca: Rogério Dias / Banca: Walter Antonio Prata Pace / Banca: Ricardo Bassil Lasmar / Resumo: Introdução: O câncer epitelial de ovário (CEO) e endometriose apresentam alguns aspectos semelhantes, como infiltração tecidual e capacidade de produzir lesões em órgão adjacentes e a distância, no entanto, diferem de forma marcante em sua evolução. A análise das semelhanças e diferenças do sistema imune e resposta inflamatória relacionados a estas patologias podem permitir um melhor entendimento de seus mecanismos fisiopatológicos e consequentemente contribuir no aprimoramento do rastreamento, diagnóstico e estratégias terapêuticas. O objetivo desde estudo é avaliar e comparar a expressão gênica tecidual , citocinas, quimiocinas e micropartículas no plasma, líquido ascético e lavado peritoneal de pacientes com CEO e endometrioma. Métodos: Foram estudadas 60 pacientes, dividias em 3 grupos: Grupo 1 (CEO): 26 pacientes; Grupo 2 (endometriomas): 18 pacientes; Grupo 3 (controle): 16 pacientes. Todas as pacientes tiveram coletadas amostras de sangue, líquido ascítico ou lavado peritoneal e amostra tecidual das lesões. O material foi estocado para posterior análise. Citocinas e quimiocinas foram dosadas utilizando-se CBA, as amostras teciduais foram avaliadas com técnica de RT-qPCR e as micropartículas com técnica de imunoflorescência modificada para esta análise. Utilizou-se os teste de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis quando apropriados. Para a identificação de associações entre dosagens de líquido ascítico e soro foi utilizado o coeficiente de correlação de Sperman. O valor de p<0,05 foi considerado significativo. Resultados: A idade média das pacientes no grupos CEO, endometrioma e controle foram respectivamente 62, 37 e 40,2 anos. Os pacientes foram estadiados segundo o critérios da FIGO para o câncer de ovário,10 pacientes nos estadios I e II, e 16 no estádio III/IV no grupo de CEO. O estadiamento dos pacientes com endometriomas foram realizados conforme os critérios da ASRM identificando-se ... / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Ana Paula Fávero Trombone Garlet / Banca: Rita Cristina Chaim / Resumo: A leishmaniose visceral (LV) é um problema emergente de saúde pública, sendo uma das principais doenças negligenciadas no Brasil e no mundo. É causada por L. donovanie L.chagasi/infantum. A resistência à infecção está associada à produção de citocinas de perfil Th1 e a suscetibilidade às citocinas do perfil Th2. Os receptores Toll-like (TLRs) da imunidade inata têm importante papel no reconhecimento microbiano e no desenvolvimento da resposta imune adaptativa. Além disso, o estado nutricional possui grande impacto na resposta imune. Desse modo, nosso objetivo foi avaliar o perfil bioquímico-nutricional, o envolvimento dos TLR2 e TLR4 na produção de citocinas e NO e relacionar as lipoproteínas com a resposta imune em pacientes com LV antes e após o tratamento. Foram estudados 13 pacientes com LV antes e após o tratamento e 16 indivíduos controles.A avaliação bioquímica-nutricional foi realizada através da impedância biolétrica e testes bioquímicos de colesterol total (CT), HDL, LDL, triglicerídeos (TG), glicose e proteínas totais e frações. A expressão de TLR2 e TLR4 em linfócitose monócitosfoi realizada através da citometria de fluxo. A produção das citocinas e NO em sobrenadantes de cultura de PBMCs estimuladas ou não com agonistas dos receptores TLR2 (PGN) e do TLR4 (LPS), foi avaliada através da técnica de CBA Flex e de kits comerciais. Pacientes prétratamento apresentaram menor ângulo de fase em relação aos controles, níveis diminuídos de CT, HDL, LDL e albumina e níveis aumentados de triglicerídeos em relação ao póstratamento e controles. Além disso, mostraram maior porcentagem de linfócitos expressando TLR2 e TLR4 e aumento da expressão destes receptores em monócitos. Quanto às citocinas, foi verificado aumento da produção de TNF-α, IL-10 e TGF-β enquanto os níveis de IFN-γ, IL-17 e NO foram menores. Os resultados também mostraram o envolvimento dos receptores TLR2 e TLR4 na ... / Abstract: Visceral leishmaniasis (VL) is an emerging public health problem, being of the major neglected diseases in Brazil and worldwide. It is caused by L. chagasi and L. donovani/infantum. Resistance to infection is associated to production of Th1 cytokines and susceptibility to Th2 cytokine profile. The toll-like receptors (TLRs) of the innate immunity plays an important role in microbial recognition and development of the adaptive immune response. In addition, nutritional status has a great impact on the immune response. Our objective was to evaluate the biochemical and nutritional profile, the involvement of TLR2 and TLR4 in the production of cytokines and NO and relate the lipoproteins to the immune response in VL patients, before and after the treatment. Were studied 13 patients with LV before and after the treatment and 16 control subjects. Biochemical and nutritional evaluation was performed by bioelectrical impedance and biochemical assays of total cholesterol (TC), HDL, LDL, triglycerides (TG), glucose, and total protein and fractions. Expression of TLR2 and TLR4 in lymphocytes and monocytes was performed by flowcytometry. The production of cytokines and NO in culture supernatants of PBMCs stimulated or not with agonists of TLR2 (PGN) and TLR4 (LPS) receptors was evaluated by CBA Flex technique and commercial kits. Patients on pre-treatment had lower phase angle compared to controls, reduced levels of TC, HDL, LDL and albumin and increased triglycerid elevels in relation to post-treatment and controls. In addition, pre-treatment patients presented a higher percentage of lymphocytes expressing TLR2 and TLR4 and increased expression of these receptors on monocytes. Regarding the cytokines, was observed increased of the production of TNF-α, IL-10 and TGF-β, while production of IFN- γ, IL-17 and NO were lower. The results also demonstrated the involvement of TLR2 and TLR4 receptors on TNF-α, IL-10 and NO production. With treatment ... / Mestre

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-29T22:53:27Z No. of bitstreams: 1 JoaoFirminoRodriguesNeto_TESE.pdf: 2194031 bytes, checksum: fb646e671a736d92f6d4e5cc3cc5acc2 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-03-02T00:38:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JoaoFirminoRodriguesNeto_TESE.pdf: 2194031 bytes, checksum: fb646e671a736d92f6d4e5cc3cc5acc2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-02T00:38:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoaoFirminoRodriguesNeto_TESE.pdf: 2194031 bytes, checksum: fb646e671a736d92f6d4e5cc3cc5acc2 (MD5) Previous issue date: 2015-04-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / A leishmaniose visceral (LV) ? uma doen?a end?mica em muitos pa?ses, incluindo o Brasil. O protozo?rio Leishmania infantum ? o agente etiol?gico da LV, sendo transmitido pela picada das f?meas dos flebotom?neos, durante o repasto sangu?neo. A maioria dos indiv?duos quando expostos ao parasita n?o desenvolvem a doen?a, pois apresentam um predom?nio da resposta celular Th1. Aqueles que desenvolvem doen?a, apresentam sinais como febre, perda de peso, hepatoesplenomegalia e um comprometimento da resposta imune celular, espec?fica a ant?genos de Leishmania. N?s avaliamos se essa anergia, observada durante a doen?a ativa, poderia estar associada com altera??es nas mol?culas coestimulat?rias de linf?citos T ou em seus ligantes em mon?citos CD14+. H? aumento na porcentagem de CTLA-4 em linf?citos T CD4+ (p=0,001) e ICOS em linf?citos T CD4+ e CD8+ (p=0,002 para CD4+ e p=0,003 para CD8+) ap?s est?mulo por ant?geno sol?vel de Leishmania (SLA) na LV sintom?tica, e que h? maior porcentagem dessas mol?culas ex vivo, quando comparados indiv?duos sintom?ticos aos recuperados (p=0,04 para CTLA-4 em CD4+, e p=0,001 para ICOS em CD4+ e p=0,026 para CD8+). Al?m disso, encontramos uma maior express?o dos genes CTLA-4, OX-40 e ICOS, durante a LV ativa. As mol?culas CD40, CD80, CD86, HLA-DR e ICOSL, n?o sofrem altera??o durante a doen?a. H? produ??o de IFN-? por c?lulas de sangue perif?rico, ap?s est?mulo por SLA, em indiv?duos sintom?ticos; no entanto, h? diminui??o na raz?o entre IFN-?/IL-10, com aumento desta ap?s a cura. A observa??o do comprometimento de algumas vias de mol?culas coestimulat?rias poderia diminuir a capacidade microbicida dos fag?citos, durante a leishmaniose visceral sintom?tica, podendo facilitar a sobreviv?ncia e a prolifera??o do parasita. / Visceral leishmaniasis (VL) is endemic in many countries, including Brazil. The protozoan Leishmania infantum, is the etiological agent of VL, and is transmitted by the bite of female sandflies during the blood meal. The majority of subjects when exposed to the parasite do not develop the disease, because of development of Th1 cellular responses. Those who have develop signs of VL such as fever, weight loss, hepatosplenomegaly, have impairment of the cellular immune response, specific to the Leishmania antigens. We evaluated whether the specififc anergy during symptomatic VL, may be associated with changes in T cells costimulatory molecules or their ligands in CD14+ monocytes. There is an increase in CTLA-4 porcentage on CD4+ T lymphocytes (p=0.001) and ICOS on CD4+ and CD8+ T cells (p=0.002 to CD4+ and p=0.003 to CD8+), after stimulation by soluble Leishmania antigen (SLA) during active visceral leishmaniasis, and that there is a higher percentage of these molecules ex vivo, when comparing symptomatic to recovered individuals (p=0.04 to CTLA-4 in CD4+, and p=0.001 to ICOS in CD4+ and p=0.026 to CD8+). Moreover, we found a high gene expression of CTLA-4, OX-40 and ICOS during active VL. CD40, CD80, CD86, HLA-DR and ICOSL molecules do not suffer changes during disease. There is IFN-? production by the peripheral blood cells, after SLA stimulation, by peripheral blood cells in symptomatic subjects; however, there is a decrease of the ratio IFN-?/IL-10, which is reversed after clinical recovery. The impairment of some costimulatory molecules pathways during symptomatic VL could inhibit the ability of phagocytes to kill Leishmania and could facilitate their survival and the proliferation inside macrophages.

A identificação de moléculas com potenciais ações terapêuticas e a compreensão dos mecanismos envolvidos na modulação da resposta imune frente à administração de substâncias farmacologicamente ativas em modelos experimentais infectados por Trypanosoma cruzi tem contribuído de maneira importante nas investigações de novas terapias para a doença de Chagas. Estudos prévios demonstraram as ações do zinco e da melatonina sobre a imunidade do hospedeiro, durante a fase aguda da infecção chagásica experimental, potencializando a resposta imune gerada contra o parasita. O presente estudo teve como objetivo avaliar o possível efeito imunomodulador da administração de zinco e melatonina em ratos Wistar machos durante a fase crônica da infecção por T. cruzi, utilizando os seguintes parâmetros: dosagens de citocinas IL-2, IL-4, IL-10, IFN-, e TNF-, produção de óxido nítrico, proliferação de esplenócitos, citometria de fluxo para análise fenotípica das subpopulações de células T CD3+CD4+ e CD3+CD8+, células dendríticas, células NK (CD161+) e NKT (CD3+CD161+), macrófagos, moléculas co-estimuladoras CD28, CD80 e CD86, RT1B, análise dos marcadores CD11a e CD25 e detecção do processo de apoptose celular. O efeito imuno-modulador do zinco e da melatonina durante a fase crônica da infecção chagásica pode ser comprovado através redução no percentual de macrófagos, células dendríticas, linfócitos TCD4+ e TCD8+, apoptose celular, das concentrações de óxido nítrico, IFN- e MCP-1. Adicionalmente, a terapia com zinco e melatonina durante a infecção experimental resultou em modificações importantes na resposta imunológica, como evidenciado pelo aumento no percentual de células T reguladoras, da proliferação celular e dos níveis das citocinas IL-2, IL-4 e IL-10. O desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, que possam modular a resposta inflamatória, contribuindo para prevenção dos danos teciduais observados na fase crônica da doença, são alvos importantes no tratamento da doença de Chagas. / The identification of molecules with potential therapeutic actions and the comprehension of the mechanisms involved in modulating the immune response by the administration of pharmacologically active substances in experimental models infected with Trypanosoma cruzi have contributed significantly in the investigation of new therapies for Chagas\' disease. Previous studies have demonstrated the actions of zinc and melatonin on host\'s immunity during the acute phase of experimental Chagas\' disease, enhancing the immune response generated against the parasite. The present study aimed to evaluate the possible immunomodulatory effect of zinc and melatonin administration in male Wistar rats during the chronic phase of T. cruzi infection, using the following parameters: measurement of IL-2, IL-4, IL-10, IFN- and TNF-, nitric oxide, proliferation of splenocytes, flow cytometry for phenotypic analysis of CD3+CD4+ and CD3+CD8+ T cells subpopulations, dendritic cells, NK cells (CD161+) and NK T (CD3+CD161+), macrophages, co-stimulatory molecules CD28, CD80 and CD86, RT1B, analysis of markers CD11a and CD25 and detection of the apoptosis process. The immunomodulator effect of zinc and melatonin during the chronic phase of Chagas\' disease was evaluated by a reduction of the percentage of macrophages, dendritic cells, CD4+ and CD8+ lymphocytes, cellular apoptosis, the concentrations of nitric oxide, IFN- and MCP-1. In addition, the treatment with zinc and melatonin during the experimental infection resulted in significant changes in the immune response, as evidenced by the increased percentage of regulatory T cells, cell proliferation and cytokine levels of IL- 2, IL-4 and IL-10. The development of new therapeutic strategies that can modulate the inflammatory response, contributing to prevention of tissue damage observed in the chronic phase, are important targets in the treatment of Chagas disease.

Orientadores: Maria Marluce dos Santos Vilela, Marcos Tadeu Nolasco da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T07:56:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mazzola_TaisNitsch_M.pdf: 3018206 bytes, checksum: 39fdba437713dd35f918f994fd3bd77d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Este estudo teve como objetivos analisar a resposta imune celular de lactentes saudáveis à vacina de Bacillus Calmette-Guérin (BCG), vacinados ao nascer com BCG e Hepatite B combinada ou separada e compará-la à de lactentes expostos ao Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) e não infectados. Nos lactentes sadios, a proliferação de linfócitos T frente a BCG, medida por citometria de fluxo, foi semelhante nos grupos que receberam a vacina combinada e separada e a subpopulação que mais expandiu nos ensaios in vitro foi a TCR ?d+. As concentrações de IL-10, IL-12, IFN-? e TNF-a nas culturas estimuladas com BCG, determinadas por ELISA, não diferiram entre os grupos, sugerindo que a vacinação combinada de BCG e Hepatite B promoveu resposta celular semelhante à separada. Os lactentes expostos ao HIV foram recrutados no Ambulatório de Pediatria da UNICAMP. A proliferação de linfócitos T específica para BCG foi reduzida em relação a lactentes sem exposição e apenas nos expostos com idades entre 18,1 e 23,4 meses as porcentagens de blastos CD4+, CD8+ e TCR ?d+ foram semelhantes aos controles. A concentração de IFN-? estimulada por BCG em cultura foi mais baixa nos expostos entre 6,7 a 8,8 meses, em relação às outras faixas etárias e aos controles. IL-10 e TNF-a não foram diferentes entre os lactentes com e sem exposição ao HIV. A deficiência da resposta imune celular específica para BCG observada nos lactentes expostos ao HIV sugere um atraso na maturação do sistema imune, fazendo-se necessário um seguimento prospectivo para definir se esta alteração é ou não transitória / Abstract: The objectives of this study were to evaluate cell-mediated immune response to Bacillus Calmette-Guérin (BCG) vaccination in infants vaccinated with combined or separated BCG and Hepatitis B and to compare with BCG-specific response from uninfected infants with vertical exposure to Human Immunodeficiency Virus-1 (HIV-1). BCG-specific proliferation by flow cytometry and IL-10, IL-12, IFN-? and TNF-a concentrations by ELISA were similar in PBMC from infants vaccinated with combined or separated BCG and Hepatitis B. There was CD4+, CD8+ and remarkable ?d+ T cell proliferation in BCG-stimulated cultures. The results suggested that the combined BCG and Hepatitis B vaccine was as immunogenic as BCG vaccine inoculated alone. Exposed HIV-uninfected infants were recruited at Pediatrics Out-Patients Unit of Hospital das Clínicas in UNICAMP and separated into three groups: E1 (aged 6.7-8.8 months), E2 (aged 9.1-17.1) and E3 (aged 18.1-23.4). Unexposed infants (UE, aged 7.0-8.7 months) and E1 matched for age. Proliferation in cell cultures with BCG was significantly reduced in all exposed groups in comparison to UE. Only BCG-stimulated cultures from E3 were similar to UE in relation to CD4+, CD8+ and ?d+ T cell subsets. TNF-a and IL-10 production was not different in BCG-stimulated cultures of unexposed and exposed infants from all groups and there were lower IFN-? concentration in the samples from E1 in comparison to all of the other groups. The results demonstrated a delay in immune system development of HIV-exposed infants / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Três décadas após a associação da infecção por HIV com o desenvolvimento da AIDS e seu reconhecimento como epidemia mundial, muitas questões permanecem em aberto e dificultam o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas e profiláticas mais satisfatórias. O desenvolvimento da AIDS é caracterizado pela tempestade de citocinas pró-inflamatórias no plasma, seguido por intensa imunossupressão e redução brusca na quantidade de células T CD4+ durante a replicação viral. Em contrapartida, macrófagos são cronicamente infectados pelo vírus e capazes de sobreviver por vários meses, atuando como importante reservatório viral. Apesar de não haver redução em número de células, macrófagos infectados apresentam problemas de diferenciação e deficiências funcionais. O reconhecimento de padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs) e a presença de citocinas no microambiente celular determinam o padrão de diferenciação dos macrófagos em clássicos (M1) ou alternativos (M2). Nossos resultados indicam a reversão parcial da tempestade de citocinas no plasma durante o uso regular da terapia antirretroviral. Não foi observada liberação de óxido nítrico por macrófagos M1 e M2a após o estímulo com PAMPs, fornecendo indícios sobre o silenciamento desta via em macrófagos humanos. Macrófagos M1 e M2a de pacientes HIV+ apresentam redução progressiva na liberação de citocinas e quimiocinas após o estímulo com LPS ou -Glucana, com restauração parcial após o uso da terapia antirretroviral. Em conjunto, nossos resultados podem ser úteis no estabelecimento de um novo parâmetro para monitoramento da terapia antirretroviral, baseado na resposta funcional de macrófagos. / Three decades after the association of HIV infection with the AIDS development and its recognition as a global epidemic, many questions remain unanswered and hamper the development of new and more effective therapeutic and prophylactic approaches. The AIDS development is characterized by proinflammatory cytokines storm in plasma, followed by severe immunosuppression and abrupt reduction of CD4+ T cells during viral replication. In contrast, macrophages are chronically infected by the virus and can survive for several months, acting as important viral reservoir. However, although there is no cell number reduction, infected macrophages have several problems of differentiation and functional impairments. The recognition of pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and the presence of cytokines in the cellular microenvironment determine the macrophage activation into the Classic (M1) or Alternative (M2) patterns. Our results indicated that cytokine storm on plasma is partially reversed during regular use of antiretroviral therapy. No release of nitric oxide was observed by M1 and M2a macrophages after stimulation with PAMPs, providing clues about the silencing of this pathway in human macrophages. Classical and alternatively activated macrophages have progressive reduction of cytokines and chemokines release after stimulation with LPS ou -Glucana, with partial restore after regular use of antirretroviral therapy. Together, our data may be useful in establishing a new approach to monitoring the antiretroviral therapy, based on functional response of macrophages.

A tuberculose representa um sério problema de Saúde Pública para o Brasil e o mundo. Estima-se que cerca de um terço da população mundial seja infectado pelo bacilo, sendo que 95% destes indivíduos desenvolvem a forma latente da tuberculose. Dessa forma, encontrar um marco entre o que faz o bacilo Mycobacterium tuberculosis (Mtb) induzir no hospedeiro uma doença ativa ou sua forma latente tem sido o objeto de estudo de diferentes grupos de pesquisa. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi correlacionar mudanças na resposta imune desenvolvida por monócitos de pacientes em diferentes estágios da tuberculose pulmonar com alterações epigenéticas, e então com aspectos clínicos de cada estágio. Nosso estudo incluiu 17 pacientes com a doença ativa, 14 indivíduos com tuberculose latente e 16 controles não infectados. A partir de sangue periférico, foi coletado plasma para quantificação de citocinas, sCD163 e sCD14. Complementarmente, monócitos foram purificados para avaliação da ativação imune através da quantificação de citocinas e espécies reativas de oxigênio mediante estimulação in vitro com Mtb inativado por calor, bem como PCR array para detectar expressão de enzimas de repressão ou ativação epigenética entre os grupos e avaliação do padrão de metilação global. Pacientes com tuberculose ativa apresentaram níveis plasmáticos elevados de citocinas como IL-6, IP-10, TNF-, IL-12, bem como IL-5. Dentre as citocinas, TNF-, IL-5, IL-6 e IP-10 permitiram diferenciar indivíduos latentes dos pacientes com tuberculose ativa. Também demostramos que maior número de correlações entre as citocinas foi observado nos pacientes com a doença ativa, indicando um estado geral mais ativado do sistema imune. Níveis plasmáticos de sCD163 e sCD14 estavam elevados nos pacientes quando comparados com indivíduos latentes e controles, e poderiam também diferenciar a tuberculose ativa. Tais níveis aumentados correlacionam-se com o estado ativado de monócitos dos pacientes, que produzem maior quantidade de espécies reativas de oxigênio e tendem a produzir mais citocinas inflamatórias, como IL-6 e TNF-. Este perfil parece ser modulado por modificações epigenéticas, uma vez que monócitos de pacientes com tuberculose pareceram mostrar menor expressão de enzimas responsáveis por mudanças relacionadas à repressão e maior expressão de enzimas relacionadas à ativação da expressão gênica, bem como redução no padrão global de metilação do DNA genômico, sugerindo maior atividade destas células. Finalmente, uma vez que pacientes com tuberculose apresentaram níveis elevados de alguns mediadores, correlacionamos estes com o grau de lesão pulmonar, e consequentemente, com a gravidade da doença. Nós mostramos que dentre os marcadores, TNF- e sCD163 correlacionaram-se positivamente com a progressão da tuberculose. Assim, concluímos que em relação aos indivíduos controle e com TB latente, os pacientes com tuberculose ativa apresentam o sistema imune em maior estado de ativação, e ainda, que alterações epigenéticas podem ser as responsáveis pela modulação observada. Dentre os fatores aumentados nos pacientes, TNF-, IL-6, IP-10, IL-5, sCD163 e sCD14 podem diferenciar os pacientes com doença ativa dos demais indivíduos analisados, e ainda sCD163 e TNF- podem atuar como indicativos da gravidade da tuberculose. / Tuberculosis is a major public health problem for Brazil and worldwide. It is estimated that about one third of the world population is infected with the bacillus, and 95% of those individuals have the condition in the latent form. Thus, finding a hallmark between what makes the Mycobacterium tuberculosis (Mtb) induces in the host an active disease or its latent form has been the subject of different research groups. In this context, the objective of this study was to correlate changes in the immune response developed by monocytes from patients at different stages of pulmonary tuberculosis with epigenetic alterations and then, with clinical aspects of each stage. Our study included 17 patients with active disease, 14 individuals with latent tuberculosis and 16 uninfected controls. From the peripheral blood, plasma was collected for cytokine and CD163s, sCD14 quantification. In addition, monocytes were purified to evaluation of the immune activation through cytokine and reactive oxygen species quantification upon in vitro stimulation with heat-killed Mtb, as well as PCR array for epigenetic repression or activation enzymes were performed to detect epigenetic changes between the groups and evaluation of the global methylation profile. We have shown that patients with active tuberculosis have increased plasma levels of cytokines such as IL-6, IP-10, TNF-, IL-12, as well as IL-5. Among these cytokines, TNF-, IL-5, IL-6 and IP-10 could differentiate latent-infected from TB patients. We also showed that patients with active disease presented higher number of correlations between plasma cytokines, indicating an activated state of the immune system. The plasma levels of sCD163 and sCD14 were more elevated in patients than latent and control individuals, and might differentiate TB active from these other groups. These increased levels of biomarkers correlate with the activated state of monocytes from patients, which produced raised quantities of reactive oxygen species and tended to produced more pro-inflammatory cytokines, such as IL-6 and TNF-. This profile seems to be modulated by epigenetic modifications, since monocytes from patients with tuberculosis seemed to show reduced expression of enzymes responsible for changes related to repression and enhanced expression of enzymes responsible for activation of gene expression, and in addition, these patients presented reduction in the percentage of global methylation of genomic DNA, suggesting increased activity of these cells when compared to the other groups. Finally, once tuberculosis patients presented increased levels of some mediators, we correlated these with the degree of lung injury, and consequently tuberculosis severity. We have showed that TNF- and sCD163 were correlated with disease progression in tuberculosis. In conclusion, we demonstrated that patients with active tuberculosis are more activated than the other groups, and epigenetic alterations might be responsible for these modulations, indicated by the alteration of the enzymes and methylation pattern analyzed. Among the cytokines/chemokines differentially expressed TNF-, IL-6, IP-10, IL-5 and monocyte activation markers, sCD163 and sCD14 could discriminate between active disease from others, and also sCD163 and TNF- could indicate tuberculosis severity.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Malaria remains a major responsible factor for morbidity and mortality in many tropical and subtropical countries. Due to the several attempts to control this protozoan infection, vaccines have been subject of intensive research, since this seems to be a promising way for the effective control of malaria. Individuals, who are frequently exposed to the parasite by living in endemic areas, develop specific immune responses, leading to a reduction of parasite load and clinical manifestations. Moreover, the serum of such individuals may impair fertilization of gametes in the mosquito, blocking the transmission of this parasite into the vector. The Pvs48/45 protein is found on the surface of gametocytes and used as a target of antibodies enabling this strategy a transmission blocking vaccine. The aim of this study is to evaluate the antibody response in naturally acquired infections by Plasmodium vivax against Pvs48/45 protein. The research of antibodies IgG anti- Pvs48/45 was performed by ELISA in sera from 281 samples of malarial patients living in the Brazilian Amazon. The cutoff point was established using serum from volunteers who never had contact with the plasmodium, establishing the mean optical density (OD) plus three standard deviations. Samples were analyzed in duplicate and the mean OD was divided by cutting point to establish the reactivity index (RI), while samples with IR ≥ 1 are considered positive. Of 281 sera analyzed, in 22.4% were found specific antibody response anti-Pvs48/45 and indices of parasitemia and gametocyte did not influence the antigenic recognition of this protein. With the analysis of the subgroups was obtained that the CTerminal + Central region of Pvs48/45 was the one with the highest antigenic recognition in the study sample. Therefore, studies using this region of the protein may facilitate the understanding of the immunogenic potential of this antigen. This study aims to contribute to the development of an efficient transmission blocking vaccine against Pvs48/45 protein in future trials. / A malária continua sendo responsável por grande morbidade e mortalidade em muitos países tropicais e subtropicais. Diante de várias tentativas de controle dessa protozoose, as vacinas têm sido alvo de intensa pesquisa, uma vez que esse parece ser o caminho promissor para o controle efetivo da malária. Indivíduos que estão frequentemente expostos ao parasito, por habitarem áreas endêmicas desenvolvem respostas imunes específicas, levando a uma redução da carga parasitária e das manifestações clínicas. Além disso, o soro desses indivíduos pode impossibilitar a fertilização dos gametas nos mosquitos, bloqueando a transmissão desse parasito para o vetor. A proteína Pvs48/45 é encontrada na superfície dos gametócitos e utilizada como alvo dos anticorpos viabilizando essa estratégia de uma vacina de bloqueio de transmissão. O objetivo desse estudo é avaliar a resposta de anticorpos naturalmente adquirida em infecções por Plasmodium vivax contra a proteína Pvs48/45. A pesquisa de anticorpos IgG anti-Pvs48/45 foi realizada por ELISA no soro de 281 amostras de pacientes maláricos residentes na região amazônica brasileira. O ponto de corte foi estabelecido utilizando soro de voluntários que nunca tiveram contato com o plasmódio, estabelecendo a média da densidade óptica (DO) mais três desvios padrão. As amostras foram analisadas em duplicatas e a média da DO foi dividida pelo ponto de corte para estabelecer o índice de reatividade (IR), sendo que amostras com IR ≥ 1 são consideradas positivas. Dos 281soros analisados, em 22,4% foram encontradas respostas de anticorpos específicos anti-Pvs48/45 e os índices de parasitemia e os gametócitos não influenciaram o reconhecimento antigênico desta proteína. Na análise dos subfragmentos, obteve-se que a região C-Terminal + Central da Pvs48/45 foi a que apresentou maior reconhecimento antigênico na amostra em estudo (32%). Diante disso, estudos com a utilização dessa região da proteína podem facilitar o entendimento do potencial imunogênico desse antígeno. Esse estudo visa contribuir para o desenvolvimento de uma vacina de bloqueio de transmissão eficiente contra a proteína Pvs48/45 em ensaios futuros.