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Resposta imunológica em camundongos com tríplice infecção com cepas do Trypanosoma cruzi de diferentes biodemas frente ao uso de imunossupressores / Resposta imunológica em camundongos com tríplice infecção com cepas do Trypanosoma cruzi de diferentes biodemas frente ao uso de imunossupressoresMagalhães, Lorena dos Anjos January 2012 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-10-23T17:03:01Z
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Lorena Magalhães. Resposta imunologica em camundongos...pdf: 2348914 bytes, checksum: 57fdb9c90a6454dd882c58e05aa0ba95 (MD5)
Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Um fator determinante e importante que contribui para a gravidade da doença de Chagas é a ocorrência de múltiplas infecções pelo Trypanosoma cruzi nos indivíduos residentes em áreas endêmicas. Estudos experimentais comprovam o aumento da morbidade pelas reinfecções sucessivas com diferentes cepas e permitem caracterizar as cepas re-inoculadas e avaliar a influência das múltiplas infecções nas lesões tissulares. A presença de múltiplas infecções poderia também influenciar no grau de agravamento e reativação da doença de Chagas em pacientes portadores de HIV e/ou imunossuprimidos, em casos de transplantes, nos quais pode haver uma reativação de cepas virulentas levando a complicações nos indivíduos infectados. O presente estudo tem como objetivo avaliar a resposta imunopatológica em camundongos triplamente infectados com diferentes cepas do T. cruzi tratados com diferentes drogas imunossupressoras. Camundongos isogênicos da linhagem Balb/c foram infectados sucessivamente com cepas do T. cruzi de diferentes biodemas: 1- cepa Colombiana (Biodema Tipo III – T. cruzi I); 2- Cepa 21SF (Biodema Tipo II – T. cruzi II) 50 dias após; 3); 3- Cepa Y (Biodema Tipo I, Z2b) 20 dias depois; para cada cepa houve também um grupo experimental de infecção única, como controle. Após 20 dias da última infecção, os camundongos sobreviventes foram submetidos a dois esquemas de tratamento: Esquema 1: Betametasona (2mg/kg/dia) e Ciclofosfamida (250 mg/kg/dia) durante 4 semanas; Esquema 2: Azatioprina (2mg/kg), Betametasona (1mg/kg) e Ciclosporina (16mg/kg, 10mg/kg, 8mg/kg, 6mg/kg) durante 4 semanas. Como parâmetros foram analisados: parasitemia, mortalidade, estudo histopatológico; exame sorológico, dosagem de isótipos de imunoglobulinas (método de ELISA) e teste cutâneo (hipersensibilidade tardia). No presente estudo foi observada uma reativação da parasitemia e da mortalidade em camundongos com triplíce infecção e tratados com Betametasona e Ciclofosfamida. Concomitantemente, com a reagudização da infecção pelo T. cruzi neste grupo, observou-se uma intensificação do parasitismo tissular, um aumento do processo inflamatório mononuclear, espessamento da matriz extracelular e macrofagotropismo com o aparecimento de ninhos parasitários com formas amastigotas do T. cruzi no fígado e no baço. O tratamento combinado com Azatioprina, Ciclosporina e Betametasona em camundongos triplamente infectados, por cepas do T. cruzi de diferentes biodemas, não determinou um aumento significativo da parasitemia e da mortalidade. Entretanto, o estudo histopatológico destes animais mostrou um aumento da infiltração mononuclear perivascular no miocárdio e músculo esquelético, áreas focais de destruição tissular e presença de arterite e arteriolite. Os resultados do exame sorológico anti-T. cruzi demonstraram que o tratamento com imunossupressores (Betametasona e Ciclofosfamida; Azatioprina, Betametasona e Ciclosporina) em camundongos triplamente infectados determinou uma redução da titulação de anticorpos anti-T. cruzi nos dois grupos de tratamento, quando comparados ao grupo de animais triplamente infectados e não tratados. Os resultados demonstraram que camundongos triplamente infectados e tratados com Betametasona e Ciclofosfamida, apresentaram uma diminuição nos níveis de IgG1, IgG2a, IgM e IgG2b estatisticamente significante, quando comparados ao grupo infectado sem tratamento. Nos camundongos triplamente infectados e tratados com Azatioprina, Betametasona e Ciclosporina foi observado um aumento nos níveis de IgG2a e uma diminuição nos níveis de IgG2b quando comparados aos níveis deste isótipo nos outros grupos. O resultado do teste de hipersensibilidade tardia através o teste cutâneo com medição da espessura da pata apresentou diferença significante no ponto de 48h nos grupos de camundongos triplamente infectados não tratados, camundongos tratados com Betametasona e Ciclofosfamida e no grupo de camundongos tratados com Azatioprina, Betametasona e Ciclosporina. No presente estudo, a imunossupressão com Betametasona e Ciclofosfamida determinou uma reativação da fase aguda em camundongos, comparável ao visto em pacientes imunossuprimidos. Concomitantemente houve uma diminuição significante das imunoglobulinas do soro, indicando a importância da resposta humoral no controle da infecção. O tratamento com Azatioprina, Betametasona e Ciclosporina em camundongos cronicamente infectados pelo T. cruzi pode influenciar no agravamento das lesões imunopatológicas características de uma reação de hipersensibilidade tardia, principalmente no miocárdio, embora sem determinar a reagudização da infecção pelo T. cruzi. / An important factor that contributes to the severity of Chagas disease in people living in endemic areas is the occurrence of multiple infections with Trypanosoma cruzi. Experimental studies have shown the increased morbidity due to successive reinfections with different strains, with the possibility of to identify and characterize the re-inoculated strains and to evaluate the influence of multiple infections upon the tissue lesions. The occurrence of multiple infections could also influence reagudisation of the disease in patients with HIV infection (AIDs) or immunosuppressed in cases of organs transplantation. In such cases, a reactivation of virulent strains could occur with aggravation of the disease. The objective of the present study was to evaluate the immunopathological response in mice with triple infections with different T. cruzi strains and treated with different immunosuppressor drugs. Inbred Balb/c mice were successively infected with T. cruzi strains of different Biodemes : 1) the Colombian strain (Biodeme Type III – T. cruzi I); 2) 50 days after, the mice were re-infected with the 21SF strain (Biodeme Type II – T. cruzi II); 3) after 20 days the third infection was performed with Y strain (Biodeme Type I, Z2b). For each separate T. cruzi strain a group of mice with only a single infection was included as a control group. Twenty days after the last infection, surviving mice were divided into two different groups, submitted to different schedules of treatment with immunosuppressor drugs: Schedule 1 – Betamethasone (2mg/kg/day) plus Cyclophosphamide (250mg/kg/day), during four weeks ; Schedule 2 – Azathioprine (2mg/kg/day) plus Betamethasone (1mg/kg/day ) and Cyclosporine ( first week - initial dose of 16mg/kg/day, during one week, followed by dosis of 10mg/kg/day, 8mg/kg/day and 6mg/kg/day for the following 3 weeks). The mice from the several groups were evaluated by following the evolution of parasitemia and mortality, histopathology and serological specific responses. Evaluation of immunoglobulin isotypes (ELISA method) and skin test for delayed hypersensitivity (DTH) were performed. In the present study a reactivation of T. cruzi infection in mice with triple infection and treated with Betamethasone and Cyclophosphamide was detected; it was characterized by increased parasitemia levels, mortality rates and tissue parasitism. Presence of amastigotes in macrophages of the liver and spleen (macrophagotropism); intensification of the inflammatory infiltration and of extracellular matrix deposits. Combined treatment with Azathioprine, Betamethasone , Cyclosporine and in the triple infected mice did not influence neither parasitemia levels or mortality rates. However the histopathological study demonstrated aggravation of the necrotic inflammatory lesion with the presence of arterites and peri-arterites in the myocardium and skeletal muscles. A decrease of anti-T. cruzi serological titres was observed in triple infected mice treated with immunossupressor drugs in both schedules of treatment employed in the present study, as compared to the untreated control group. A significant decrease in the levels of IGg1, IGg2a, IGg2b and IgM was observed in the group of mice with triple infection, treated with Betamethasone and Cyclophosphamide (Schedule 1) as compared with the untreated controls. In the group with triple infection, treated with Azathioprine, Betamethasone and Cyclosporine (Schedule 2), increased levels of IgG2a and decreased levels of IgG2b were observed. The DTH cutaneous test, disclosed significant differences in the 48 hours point between untreated triple infected mice and the treated with either one of the treatment schedules. In the present study the immunosuppression with Betamethasone plus Cyclophosphamide, determined reactivation of the acute phase of the infection with T. cruzi, comparable to that observed in immunosuppressed patients, concomitantly with significant decrease of the immunoglobulins. This suggests an effective influence of the humoral response on the control of the infection. Treatment with Azathioprine, Betamethasone and Cyclosporine determined aggravation of the immunopathological lesions, characteristics of DTH alterations, without re-agudization of T. cruzi infection.
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Interação in vivo do fungo Paecilomyces lilacinus, agente causal da hialohifomicose, com o modelo murino C57BL/6Sequeira, Danielly Corrêa Moreira de January 2012 (has links)
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Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Paecilomyces lilacinus é um fungo filamentoso, hialino, assexuado e agente causal da hialohifomicose. Esse fungo é considerado um patógeno emergente e oportunista capaz de infectar crianças, adultos imunossuprimidos, como também imunocompetentes. O presente trabalho objetivou estudar a resposta à infecção, in vivo, de camundongos C57BL/6, imunocompetentes e imunossuprimidos, frente a P. lilacinus. Dois isolados de origem humana do fungo foram avaliados quanto à virulência, tendo como critérios, sinais clínicos, sobrevivência, índice esplênico, lesões histológicas nos animais e reisolamento de células fúngicas viáveis do baço. Além disso, o perfil imunológico dos animais foi feito através da quantificação de células T CD4+ e CD8+ esplênicas, seus perfis de marcadores de ativação e memória em linfócitos T (CD25, CD69 e CD62L), e da avaliação de anticorpos no plasma contra epítopos de P. lilacinus
Os resultados demonstraram que ambos os isolados fúngicos apresentaram características morfológicas compatíveis com a espécie e foram capazes de infectar os animais do grupo dos imunocompetentes e provocar a doença, com manifestações clínicas, no modelo imunossuprimido. Um dos isolados, proveniente de lesão cutânea, foi considerado mais virulento, pelos critérios avaliados, que o isolado proveniente de lesão subcutânea na região da tíbia. A avaliação imunológica mostrou diferenças na cinética de expressão de moléculas de ativação pelos linfócitos CD4+ e CD8+ dos animais inoculados com os dois isolados, sendo mais recente para o isolado da região tibial, e tardia para o isolado de pele
Foi possível também verificar que esse padrão se mantinha nos animais imunossuprimidos, mas com um grau de ativação aparentemente mais elevado do que nas células obtidas dos animais imunocompetentes. Com relação a avaliação da produção de anticorpos específicos contra o fungo, nossos dados sugerem que a imunossupressão não exerceu influência na resposta humoral, visto que ambos os grupos de animais, imunocompetentes e imunossuprimidos, inoculados com o fungo foram capazes de produzir anticorpos IgG específicos anti-P. lilacinus / Paecilomyces lilacinus
is a filamentous, hyaline, asexual fungus and causal agent of
hyalohyphomycosis.
This fungus is considered an emergent and opportunist
ic
pathogen
,
to be
able to infect child
ren
and adults
i
mmunosuppressed, as well as
immunocompetent
ones
. This study investigated the response to infection,
in vivo
, of
the immunocompetent and
i
mmunosuppressed C57BL/6 mice inoculated with
P.
lilacinus
. Two strains fro
m human lesions were evaluated regarding virulence using the
following criteria: clinical signs, survival, splenic index, histopathological lesions and the
number of viable fungal cells recovered from spleen. Besides, the
immunological profile
of the mice
was done by quantification of CD4+ and CD8+ on splenocytes and their
profiles of activation markers on T lymphocytes (CD25 and CD69), as well as memory
markers (CD62L), and evaluation of antibodies in plasma against
P. lilacinus
epitopes
.
The results demon
strated that both strains showed morphological features compatible
with the species and were able to infect the immunocompetent group of animals and
cause disease, with clinical manifestations, in the immuno
supressed
model. One of the
strains from skin les
ions was considered to be more virulent than the strain from
subcutaneous lesion of the
tibia
area
.
The immunological evaluation showed differences in the activation molecules
expression in CD4+ and CD8+ T cells obtained from animals infected with each fu
ngal
strain. Activation happened earl
ier
in cells from the tibia strain infected animals, when
compared to those obtained from animals infected with the skin isolated strain. We
were also able to observe the same pattern of expression in cells obtained f
rom
Immunosuppressed infected animals, although the degree of activation seem to be
much higher than those observed in the immunocompetent mice. It was also possible
to suggest that the immunosuppression did not interfere in the humoral immune
response, s
ince both groups of the animals, immunocompetent and
immunosuppressed, inoculated with the fungus were able to produce specific IgG
anti
-
P. lilacinus
antibodies
.
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Perfil da resposta imune celular em pacientes infectados pelo HIV com leishmaniose ou tuberculoseGois, Luana Leandro January 2015 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T16:10:12Z
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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A infecção pelo HIV promove a redução do número de linfócitos T CD4+ e,
consequentemente, o surgimento de doenças oportunistas. A leishmaniose visceral e a
tuberculose são comumente reconhecidas como doenças oportunistas importantes e
associadas ao óbito de indivíduos infectados por HIV. Ambos os patógenos, Leishmania
e Mycobacterium tuberculosis (Mtb) infectam cronicamente macrófagos. A imunidade
protetora associada a estas infecções envolve linfócitos Th1 produtores de IFN-g. O
prejuízo na resposta imune celular causado pelo HIV perturba a resposta imune contra
estes patógenos. Não são bem determinadas quais alterações imunológicas causadas
pelo HIV promovem o prejuízo na resposta imune específica contra a Leishmania spp. e
Mtb, induzindo o desenvolvimento de formas atípicas e graves destas infecções. Deste
modo, esta tese teve como objetivo descrever o perfil da resposta imune celular aos
antígenos de Leishmania spp. ou Mtb em pacientes infectados com HIV. Para tal.,
foram recrutados pacientes infectados por HIV e com diagnóstico de leishmaniose
(HIV/LV) e tuberculose (HIV/TB). Indivíduos não infectados por HIV e diagnóstico de
leishmaniose (LV) ou tuberculose (TB) forma incluídos como controles. Foram
avaliadas a linfoproliferação e a frequência das subpopulações de memória dos
linfócitos T CD4+ em resposta aos antígenos solúveis de Leishmania spp. (SLA).
Igualmente, foram avaliadas a linfoproliferação, a frequência das subpopulações de
memória dos linfócitos T CD4+ e CD8+, o perfil de funcional de linfócitos T CD4+ e
CD8+ produtores de citocinas e a atividade citotóxica de linfócitos T CD8+ e células NK
em resposta ao purificado protéico derivado (PPD) do M. bovis. Duas revisões
sistemáticas da literatura que abordam a associação entre estas infecções e a síndrome
inflamatória de reconstituição imune em indivíduos infectados por HIV após terapia
antiretroviral foram realizadas. Os linfócitos T CD4+ e CD8+ dos pacientes HIV-LV não
apresentavam resposta proliferativa ao SLA e houve redução na frequência de
subpopulações de linfócitos T CD4+, a qual foi restaurada após o tratamento para
leishmaniose visceral. Nos pacientes HIV-TB foi igualmente observada ausência de
resposta proliferativa de linfócitos T CD4+ e CD8+ e de células produtoras de IFN-g em
resposta ao PPD. Além disso, o HIV promoveu a redução da atividade degranulativa de
células NK, o que contribui para o descontrole da infecção e desenvolvimento de TB
ativa. Nos pacientes HIV-TB, HAART foi capaz de induzir uma recuperação parcial de
células específicas produtoras de IFN-g, bem como da proliferação em resposta ao PPD.
Em conjunto, os resultados desta tese sugerem que a infecção pelo HIV induz alterações
na resposta celular de memória central e efetora contra patógenos intracelulares
oportunistas. Essas alterações são parcialmente restauradas no curso da HAART. / The HIV-infection promotes reduced number of CD4+ T-lymphocytes and
manifestation of opportunistic diseases. Visceral leishmaniasis and tuberculosis are
commonly known as main opportunistic infections and are associated with mortality in
HIV-infected individuals. Both pathogens, Leishmania and Mycobacterium tuberculosis
(Mtb), infect macrophages. The protect immune response involve T-lymphocytes help 1
(Th1) and producing of IFN-g. The impairment of cellular immune response caused by
HIV disrupts the immune response against these pathogens. It is unclear which
immunological alterations caused by HIV infection promote the damage in specific
cellular immune response against Leishmania and Mtb and induces the development of
atypical and severe forms. Thus, this thesis aimed to describe the profile of the cellular
immune response to Leishmania antigens or Mtb in HIV infected patients. To this end,
were recruited HIV infected patients with visceral leishmaniasis (HIV/VL) and HIV
infected patients with active tuberculosis (HIV/TB). Moreover, HIV uninfected
individuals with VL or TB were also included as controls. Lymphoproliferation and
frequency of memory CD4+ T-lymphocyte subsets in response to soluble Leishmania
antigen (SLA) were evaluated. Also were evaluated lymphoproliferation, frequency of
memory CD4+ and CD8+ T-lymphocyte subsets, functional profile of cytokines
producing CD4+ and CD8+ T-lymphocytes and cytotoxic activity of CD8+ Tlymphocytes
and NK cells in response to purified protein derivative (PPD) of M. bovis.
Two systematic reviews of the literature concerning the association between
leishmaniasis and tuberculosis with the inflammatory immune reconstitution syndrome
(IRIS) in HIV-infected individuals after antiretroviral therapy were done. The absence
of proliferative response to SLA of CD4+ and CD8+ T-lymphocytes and the reduced
frequency of memory CD4+ T-lymphocyte subsets were observed in HIV/VL patients.
The frequency of memory CD4+ T-lymphocyte subset was restored after treatment for
visceral leishmaniasis. In HIV/TB patients was also observed absence of proliferative
response to PPD of CD4+ and CD8+ T-lymphocytes and of PPD-specific IFN-g
producing cells. In addition, HIV infection promotes the reduction in degranulative
activity of NK cells which contributes to the survival of Mtb into macrophages and
development of active TB. In HIV/TB patients, HAART was able to induce a partial
recovery of PPD-specific IFN-g producing cells and of lymphoproliferation in response
to PPD. Taken together, the results suggest HIV infection induces changes in cellular
immune response of central and effector memory against opportunistic intracellular
pathogens. These alterations are partially restored in the after HAART.
Keywords: HIV,
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Papel de antígenos secretados de uma linhagem atenuada de Corynebacterium pseudotuberculosis na indução de resposta imune em camundongosRodrigues, Gabriele Costa January 2009 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2015-10-20T16:10:30Z
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Dissertação_ICS_ Gabriele Costa Rodrigues.pdf: 669924 bytes, checksum: 39da9a8e9734a6d7491ddbfaf0f55cd4 (MD5) / A linfadenite caseosa é uma doença infecciosa crônica que afeta ovinos e caprinos, causada por uma bactéria intracelular facultativa, Corynebacterium pseudotuberculosis. Pouco se conhece sobre a imunorreatividade induzida por diferentes linhagens deste microrganismo, bem como sobre o efeito no hospedeiro de seus antígenos secretados. O objetivo deste trabalho foi avaliar o reconhecimento antigênico e a ativação de células esplênicas de camundongos Balb/c infectados com duas linhagens de C. pseudotuberculosis, utilizando para tanto dois preparados antigênicos obtidos a partir da linhagem atenuada T1, denominados SeT1 e Q5, ao longo dos primeiros 35 dias após a inoculação. Os camundongos foram infectados com 102 CFU da linhagem VD57 ou da linhagem T1 e sacrificados nos dias 0, 15 e 35. A resposta humoral e celular foram avaliadas pela identificação de IgG total e subclasses, específicas contra estes antígenos secretados, bem como pela quantificação de citocinas produzidas “in vitro”, contra estas mencionadas biomoléculas. O grupo infectado com a linhagem selvagem VD57 apresentou diversas lesões granulomatosas, ao contrário dos camundongos infectados com a linhagem atenuada T1 que não desenvolveram lesões. A linhagem VD57 induziu expressiva produção de TNF-alfa, IFN-gama e IL-10, enquanto que a produção de IL-4 foi semelhante nos dois grupos, apesar de ter apresentado valores significativos com a estimulação pela fração Q5. Através do “Western Blotting” foi possível identificar quatro bandas na fração antigênica Q5, reativas com soros de camundongos infectados com a linhagem T1. Utilizando-se o ensaio imunoenzimático ELISA observou-se uma baixa resposta pelo grupo infectado com a linhagem T1 e uma resposta expressiva dos animais infectados com a linhagem VD57 apenas no dia 35. Neste último grupo, notou-se resposta predominante de IgG1 e IgG2a quando se utilizou como antígeno, respectivamente os preparados Q5 e SeT1. Os dados mostram que os dois preparados antigênicos foram capazes de estimular a imunidade humoral e celular, entretanto, ativando diferentemente os padrões de resposta Th1 e Th2.
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Comparação entre as vias intranasal e intramuscular para a imunização com uma vacina de antígeno bruto de Staphylococcus aureusStegmiller, Nataly Pescinalli 30 April 2014 (has links)
Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-13T19:14:10Z
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Dissertacao Nataly Stegmiller.pdf: 969971 bytes, checksum: 56211b8da0204ded63a6d90ae86998e6 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-05-17T16:02:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2
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Dissertacao Nataly Stegmiller.pdf: 969971 bytes, checksum: 56211b8da0204ded63a6d90ae86998e6 (MD5) / CAPES / A mastite é uma enfermidade da glândula mamária que se caracteriza por um processo inflamatório, quase sempre decorrente da presença de microrganismos infecciosos. É considerada a principal causa de perdas econômicas relacionadas à prática leiteira, já que interfere diretamente na função do órgão, diminuindo de 15-20% a produção láctea/animal. Dentre os microrganismos identificados como causadores da mastite, bactérias da espécie Staphylococcus aureus são as mais comumente relacionadas, sendo responsáveis por mais de 91% dos casos. O surgimento de cepas droga-resistentes associado a grande toxicidade do
tratamento, imprime a necessidade do desenvolvimento de uma vacina efetiva, segura e barata, que possa ser utilizada como medida preventiva contra a mastite. Por esse motivo, objetivamos o desenvolvimento de uma vacina composta por antígenos totais de S. aureus (SaAg), administrada por via intranasal ou intramuscular, contra a mastite experimental. O preparo da vacina foi realizado a partir da cultura de uma cepa de S. aureus isolada de glândula mamária bovina, caracterizada molecularmente e submetida a 15 ciclos de congelamento e descongelamento lento. Camundongos BALB/c, foram vacinados pelas vias
intranasal ou intramuscular com SaAg (50 g/mL) em 2 doses intervaladas por 15 dias, para avaliação da biocompatibilidade e imunogenicidade. Os sinais clínicos foram monitorados por 72 horas após cada dose, onde se observou alterações comportamentais e físicas, com intensa resposta inflamatória nos animais vacinados por via intramuscular. Não foram observadas diferenças nos níveis de transaminases e creatinina entre os grupos vacinados por via nasal ou intramuscular em comparação com o controle. Além disso, foi verificado um aumento significativo das respostas linfoproliferativas dos animais vacinados em relação aos controles. Animais vacinados por via intranasal apresentaram maiores porcentagens de linfócitos TCD4+ e TCD8+ produtores de IFN-γ quando comparados aos demais grupos, o que não foi verificado na avaliação da produção de citocinas utilizando o sobrenadante das culuras estimuladas com SaAg in vitro. De forma diferente, animais vacinados por via intramuscular apresentaram maiores porcentagens de linfócitos TCD4+ e TCD8+ produtores de IL-10, quando comparados aos demais grupos, bem como produziram maiores níveis de IFN-γ nos sobrenadantes de cultura reestimulados, quando comparados aos grupos controle ou vacinados por via intranasal. Na avaliação da resposta imune humoral, significativos níveis de IgG2a
foram relacionados à vacinação intranasal, quando comparados aos demais grupos. Além disso, animais vacinados por via intranasal ou intramuscular apresentaram semelhantes níveis de IgG1, porém, significativamente maiores que os animais controle. Dessa forma, nossos resultados demonstram a viabilidade do uso da vacina SaAg, administrada pelas vias intramuscular e intranasal, como um potencial
agente profilático contra a mastite causada por S. aureus. / Mastitis is a disease of the mammary gland characterized by an inflammatory process, often due to the infectious microorganisms presence. It is considered the main cause of economic losses related to dairy practice, as it can act directly in the organ function, decreasing to 15-20% milk/animal production. Among the
microorganisms identified as causing the mastitis, Staphylococcus aureus bacteria species are the most common, accounting for over 91% of mastitis cases. The emergence of drug-resistant strains associated with high toxicity of the treatment, prints the need to develop an effective, inexpensive and safe vaccine that could be used as a preventive measure against mastitis. In this work, we aimed to develop a vaccine produced with total antigen of S. aureus (SaAg) and intranasaly or intramuscularly given against experimental mastitis. The vaccine preparation was done using a S. aureus strain isolated from bovine mammary gland, followed of 15 slow freezing /thawing cycles. BALB/c mice were vaccinated by intranasal or intramuscular route with 2 doses of SaAg (50μg/animal) followed of biocompatibility and immunogenicity evaluation 72 hours after each dose. Intramuscular vaccinated mice showed behavioral and physical changes. No differences of transaminases and creatinine levels were observed in the vaccinated groups as compared to unvaccinated animals, different from observed in the lymphoproliferative responses. Intranasal vaccinated mice presented significant percentage increase of CD4+ and CD8+ IFN-γ producer’s when
compared to intramuscular or unvaccinated groups. By the other hand, mice vaccinated by intramuscular route showed a increase of CD4+ and CD8+ T cells producers percentage also supernatant cytokine production (Il-10 and IFN- γ) after SaAg in vitro recall, when compared to intramuscular vaccinated animals or unvaccinated. The Intranasal vaccination induced a significant increase of IgG2a levels and decreased IgG1 production when compared to control or intramuscular vaccinated groups. Thus, our results demonstrate the feasibility of SaAg vaccine, given by intramuscular and intranasal routes, as a potential prophylactic agent against mastitis caused by S. aureus.
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Análise microscópica do comportamento tecidual de parafusos de osso bovino instalados em tíbia de coelhoSchiochett, Cintia January 2002 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-19T15:48:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-26T01:58:41Z : No. of bitstreams: 1
182043.pdf: 19965973 bytes, checksum: 6e100783b29d2dfbb9b0fdb544b28697 (MD5) / Utilizou-se microscopia de luz (óptica) para avaliar o comportamento tecidual de parafusos usinados em osso bovino e instalados em tíbias de coelhos, em relação a presença ou ausência de reabsorção do parafuso de osso, tecido ósseo neo-formado, osso necrótico, células inflamatórias e fibrose, a fim de que possamos inferir a possibilidade da utilização dos mesmos como: 1) material de preenchimento nas técnicas de aumento de rebordo, 2) dispositivo de fixação de membranas reabsorvíveis, 3) dispositivo de fixação de enxertos ósseos tipo aposicional e 4) dispositivo de estabilização de fraturas ósseas intra e extra-bucais em seres humanos. Os parafusos de osso bovino foram instalados na tíbia direita de 8 (oito) coelhos, machos albinos, da raça New Zealand, entre nove e doze meses de idade. Um coelho foi mantido como controle, ou seja, não recebeu parafuso. Após anestesia, tricotomia e antissepsia, os animais receberam uma incisão linear de 2 cm até exposição do tecido ósseo e uma perfuração de 7 mm de profundidade e 2 mm de diâmetro executada com brocas cirúrgicas do sistema de colocação de implantes. Os parafusos de osso bovino foram instalados, estabilizados manualmente e recobertos pela epiderme suturada. Sacrificaram-se os animais após 60 dias. As peças foram fixadas com formol a 10%, descalcificadas e coradas pela técnica da hematoxilina-eosina (H.E.). A análise microscópica das peças demonstrou que em 7 coelhos houve reabsorção completa do parafuso de osso bovino. Todas as amostras continham características de tecido ósseo em neo-formação, ausência de células inflamatórias, ausência de fibrose e ausência de áreas com reabsorção acentuada. As mesmas características foram encontradas no animal controle. Os resultados obtidos nesta pesquisa, tais como, reabsorção do parafuso com conseqüente preenchimento ósseo; obtenção de ganho ósseo vertical na maioria dos espécimes; ausência de células inflamatórias; inexistência de fibrose e presença de tecido ósseo em neo-formação, sugerem que os parafusos de osso bovino podem ser utilizados, em humanos, nas cirurgias ósseas reconstrutivas.
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Perfil de citocinas do padrão Th1, Th2, Th17 e o estado redox de indivíduos com leishmaniose visceral pré e pós tratamento / Profile of cytokines of standard Th1, Th2, Th17 and the redox status of individuals with visceral leishmaniasis pre and post treatmentCarvalho, Francilene Capel Tavares de [UNESP] 29 February 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose visceral (LV) é causada pelos protozoários intracelulares obrigatórios pertencentes ao complexo Leishamania donovani (L.donovani). O sucesso na cura da LV depende principalmente do estado imunitário do hospedeiro em combinação com os efeitos das drogas leishmanicidas. Nesse sentido, a resistência do hospedeiro a leishmaniose está associada à produção de citocinas envolvidas na indução e efetuação de uma resposta do tipo Th1, como IL-12, IFN-γ e TNF-α. Essa resposta culmina na ativação de macrófagos com conseqüente aumento na produção de metabólitos do estresse oxidativo com atividade leishmanicida. Por outro lado, a suscetibilidade à infecção e a progressão da doença estão relacionadas com o direcionamento de uma resposta do tipo Th2, com produção de IL-4 e de outras citocinas como a IL-10, que desativam macrófagos. A subpopulação de células Th17 vem ganhando importância na resposta contra a Leishmania, entretanto não se sabe até o momento se está envolvida na resistência ou suscetibilidade à infecção. Apesar desses resultados, são raros os trabalhos que tenham objetivado avaliar de forma sistemática, os perfis de resposta de células CD4+ em pacientes com LV, antes e após o tratamento. Desta forma, um dos objetivos do presente estudo foi quantificar as citocinas do perfil Th1, Th2 e Th17 nestas duas fases da evolução da doença. Outro objetivo foi avaliar o estado redox desses pacientes, uma vez que ao tentar eliminar o parasita através do processo de ativação de macrófagos, os mesmos podem liberar quantidades exageradas de metabólitos leishmanicidas, que podem levar a um estresse oxidativo envolvido na patogênese da doença. Foi observada uma tendência dos pacientes apresentarem um aumento nos níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-17 e IFN- antes do tratamento com diminuição após o tratamento. Diferenças significantes, foram detectadas em relação aos níveis de IL-6 e IL-10. Pacientes antes do tratamento apresentaram uma produção mais alta das duas citocinas em relação aos indivíduos controles. No entanto, após o tratamento, essa produção abaixou de forma significante, atingindo novamente níveis semelhantes aos dos indivíduos controles. Em relação ao estado redox detectamos que pacientes com a doença ativa apresentaram um aumento da substância malondialdeído (MDA), um indicador de peroxidação lipídica, associado a uma diminuição de carotenóides antioxidantes como o licopeno e a luteína o que revela a presença de um desequilíbrio oxidativo nesses pacientes. As associações entre os achados imunológicos e os relativos ao estado redox dos pacientes e as suas implicações para a patogênese da leishmaniose são discutidos. / Visceral leishmaniasis (VL) is caused by obligatory intracellular protozoa belonging to Leishmania donovani (L. donovani) complex. The success in LV cure depends mainly on the immune status of the host in combination with the effects of antileishmanial drugs. Accordingly, leishmaniasis host resistance is associated with production of cytokines involved in Th1 response induction and its effector functions, such as IL-12, IFN-γ and TNF-α. This response culminates in macrophages activation, that begin to release higher levels of oxigen and nitrogen reactive species that have potent leishmanicidal activities. In contrast, susceptibility to infection and disease progression are linked to a predominat Th2 response that produces IL-4 and other cytokines such as IL-10 that deactivate macrophages. The importance of Th17 subset in host response to leishmania has also been studied, however it is not established yet if it is involved in resistance or susceptibility to infection. Despite these findings, few studies have aimed to evaluate the predominant profiles of CD4 + cells that are activated in patients with LV before and after treatment. Thus, one of the objectives of the present study was to quantify the cytokines tipical of Th1, Th2 and Th17 profiles in these two stages of disease progression. In addittion, we aimed to evaluate the redox status of these patients, since by trying to eliminate the parasite through the macrophage activation process, they can release excessive amounts of metabolites which may lead to oxidative stress involved in the pathogenesis of the disease. Patients before treatment trended to release higher IL-17 and IFN-γ in comparison to after treatment. Significant differences were detected in IL-6 and IL-10 levels. Patients before treatment presented higher production of both cytokines when compared to control subjects. However, after treatment, this production was significantly lowered, reaching levels similar to those of control subjects. Regarding redox state, patients with active disease exhibited an increase in the levels of malondialdehyde (MDA), an indicator of lipidic peroxidation, associated with a decrease in antioxidant carotenoids such as lycopene and lutein, which reveals the presence of an oxidative imbalance in these patients. Associations between immunological findings and those relating to the redox status of patients and their implications for the pathogenesis of leishmaniasis are discussed.
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Avaliação do efeito antinociceptivo, anti-inflamatório e gastroprotetor do extrato hidroalcoolico das entrecascas de Machaerium hirtum (Vell) StellfeldLopes, Juliana Agostinho [UNESP] 22 July 2013 (has links) (PDF)
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000723175.pdf: 2363017 bytes, checksum: 4ee05ec8c8fd9e3c5c0bed95102d764b (MD5) / A dor é uma experiência multidimensional, uma qualidade sensorial subjetiva e pessoal, difícil de ser descrita e interpretada, pois não inclui apenas a nocicepção, mas também componentes cognitivos, afetivos e emocionais. A propagação da dor é iniciada com a ativação dos nociceptores por intensos estímulos térmicos, mecânicos ou químicos. Quando ocorre lesão tecidual é desencadeada a resposta inflamatória. A inflamação é uma resposta imune complexa relacionada ao dano tecidual e/ou celular causada por estímulos químicos, físicos, imunológicos ou microbianos. No processo inflamatório diversas substâncias são liberadas pelos tecidos danificados, destacando-se as prostaglandinas, os leucotrienos, substância P, as citocinas, quimiocinas, fatores de crescimento, dentre outros, que são capazes de estimular e sensibilizar nociceptores que provocam a dor. Se houver falha neste processo de reparo tecidual pode haver a perda da função através de um processo inflamatório crônico. A abordagem mais comum para reduzir a dor e a inflamação é através da utilização de drogas anti-inflamatórias não esteroidais (AINEs). Entretanto, o uso destes fármacos sem as devidas orientações médicas e/ou farmacêuticas, ou por longos períodos, pode levar ao aparecimento de sérias reações adversas. Devido a estes fatores, a busca por novas alternativas terapêuticas para o tratamento da dor e inflamação, como o uso de espécies vegetais tem sido fomentada pelo Ministério da Saúde brasileiro. O gênero Machaerium é comumente encontrado no Cerrado brasileiro e muito utilizado popularmente para o tratamento de tosse, aftas e diarreia. A espécie Machaerium hirtum (Vell.)Stellfeld, conhecida popularmente como “bico-deandorinha”, é utilizada na medicina popular no combate as úlceras e diarreia, e estudos fitoquímicos desta... / Pain is a multidimensional experience, a subjective and personal sensorial quality, difficult to be described and understood, because it does not include only nociception, but also cognitive, affective and emotional components. Propagation of pain begins with the nociceptors activation by intense thermal, mechanical or chemical stimulus. When tissue damage occurs the inflammatory response is triggered. Inflammation is a complex immune response related to tissue and/or cellular damage caused by chemical, physical, immunological or microbial stimuli. Several substances are released by the damaged tissues in inflammatory process, especially prostaglandins, leukotrienes, substance P, cytokines, chemokines, growth factors, among others, that are able to stimulate and sensitize nociceptors causing pain. If the tissue repair process fails there can be a loss of function through a chronic inflammatory process. The most common approach to reduce pain and inflammation is through the use of antiinflammatory non-steroidal drugs (NSAIDs). However the use of these drugs without proper medical and/or pharmaceutical guidelines, or for long periods, can lead to the onset of serious adverse reactions. Due to these factors, the search for new therapeutic alternatives for the treatment of pain and inflammation, such as the use of plant species, has been supported by the Brazilian Health Ministry. The gender Machaerium (Fabaceae) found in the Brazilian Cerrado is very popularly used to combat cough, aphthas and diarrhea. The species Machaerium hirtum (Vell.) Stellfeld, popularly known as “bico-de-andorinha”, is used in folk medicine against ulcers and diarrhea, and phytochemical studies from this specie have shown the presence of flavones and triterpenes in its composition, that are secondary metabolites known for their... (Complete abstract click electronic access below)
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Envolvimento do inflamassoma e citocinas na resposta imunológica em infecção induzida pelo fungo Sporothrix schenckiiGonçalves, Amanda Costa [UNESP] 18 February 2013 (has links) (PDF)
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goncalves_ac_me_arafcf.pdf: 721947 bytes, checksum: 2ac1a94e8c25ed57ddda5d2effa6d4d6 (MD5) / A esporotricose é uma doença micótica causada pelo fungo termodimórfico Sporothrix schenckii. A resposta imune inata permite o reconhecimento de um amplo espectro de agentes patogênicos através dos PRRs, como os NLRs. Esses receptores, moléculas adaptadoras ASC e proteases caspase-1 formam os inflamassomas, complexo multiprotéico responsável pela maturação da IL-1β e IL-18. Evidências experimentais mostram que o inflamassoma tem importante papel na defesa antifúngica do hospedeiro, entretanto não há informações disponíveis sobre seu envolvimento em infecções causadas pelo S. schenckii. A indução da imunidade celular depende da interação entre antígenos, macrófagos e linfócitos, pois quando ativadas essas populações celulares liberam mediadores imunológicos, estabelecendo uma ligação entre as respostas imunológicas inata e a adaptativa. O objetivo deste trabalho foi avaliar o envolvimento do inflamassoma, por meio da determinação de caspase-1, e citocinas na resposta imunológica induzida pelo fungo S. schenckii em modelo experimental de esporotricose sistêmica utilizando camundongos Balb/c infectados e não infectados durante oito semanas. Os resultados encontrados mostraram que entre a 4ª e 6ª semanas de infecção ocorre imunossupressão do hospedeiro, com consequente agravamento da doença, pois a produção de NO permaneceu elevada neste período, assim como houve diminuição da liberação da IL-1β, IL-17, IL-23, citocinas pró-inflamatórias que agem protegendo o hospedeiro. Neste mesmo período, a diminuição do percentual de caspase-1 ativa, seguido pela menor liberação de IL-1β e IL-18, demonstrou que o inflamassoma estava com sua ativação inibida, colaborando para uma maior disseminação do patógeno, já que estão diretamente relacionada... / Sporotrichosis is a fungal disease caused by the thermo-dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The innate immune response enables the recognition of a broad spectrum of pathogens through PRRs, such as NLRs. These receptor, ASC and caspase-1 form inflammasomes, complex multiprotein responsible for maturation of IL-1β and IL-18. Experimental evidence shows that inflammassome plays an important role in antifungal host defense, however there is no information available about his involvement in infections caused by S. schenckii. The induction of cellular immunity depends on the interactions between antigens, macrophages and lymphocytes because when activated, these cell populations release immune mediators to establishing a link between the innate and adaptive immune responses. The aim of this study was to evaluate the involvement of inflamassoma, through the determination of caspase-1, and cytokines in the immune response induced by the fungus S. schenckii in an experimental model of systemic sporotrichosis using Balb/c mice infected and uninfected for eight weeks. The results showed that between the fourth and sixth weeks of infection occurs immunosuppression of the host, with consequent worsening of the disease, because NO production encontrouse high during this period, as well as decreased release of IL-1β, IL-17, IL-23, pro-inflammatory cytokines that act to protect the host. In this same period, the decrease in the percentage of active caspase-1, followed by lower release of IL-1β and IL-18, showed that inflammasome was inhibited its activation, contributing to further spread of the pathogen, since it is directly related with the innate response and optimization of an adaptive response. The production of IFN-γ remained increased during all weeks... (Complete abstract click electronic access below)
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Transferência de imunidade passiva de vacas da raça Holandesa imunizadas e não imunizadas contra rotavírus para seus bezerrosRocha, Thaís Gomes [UNESP] 17 December 2013 (has links) (PDF)
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000749271.pdf: 1660013 bytes, checksum: 6f1dc11e66991cf9bd120ae223d6357d (MD5) / O objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta imune humoral de vacas primíparas e pluríparas imunizadas ou não contra rotavírus com vacina comercial inativada e a transferência dessa imunidade para seus bezerros. Para tal, ensaio imunoenzimático indireto (EIE indireto) foi utilizado, sendo constituídos dois grupos e quatro subgrupos experimentais: grupo V1: 24 vacas imunizadas contra rotavírus bovino (BRV), com dois subgrupos - V1n (12 vacas primíparas) e V1v (12 vacas pluríparas) e grupo V2: 24 vacas não imunizadas contra BRV, com dois subgrupos - V2n (12 vacas primíparas) e V2v (12 vacas pluríparas). Os bezerros também foram alocados em grupos e subgrupos, de acordo com a distribuição de suas mães para a avaliação da imunidade humoral sérica, da cinética de parâmetros hematológicos, bioquímicos e da excreção de rotavírus nas fezes nos trinta primeiros dias de vida. Os bezerros foram ainda realocados, de acordo com a ocorrência de diarreia no primeiro mês de vida, sendo constituídos os grupos A (sem diarreia), B (diarreia, negativos para a detecção de rotavírus) e C (diarreia, positivos para rotavírus). Os dados foram submetidos à análise de variância, e o teste de Tukey e o teste de correlação de Pearson foram empregados, considerando-se as diferenças significativas quando P<0,05. Nas vacas dos grupos V1 e V2, não foi verificada influência do número de parições sobre os parâmetros séricos analisados, enquanto que na análise do colostro, verificou-se maiores teores de IgA e IgG em vacas do subgrupo V1v. A imunização pré-parto aumentou significativamente os títulos séricos de IgG anti-BRV, sendo os maiores títulos verificados também nos animais do subgrupo V1v. Os bezerros que receberam colostro dessas vacas (grupo B1) também apresentaram maiores títulos de IgG anti-BRV, quando comparados ao grupo B2, no entanto, a vacinação da vaca... / The aim of this study was to evaluate the humoral immune response of primiparous and multiparous cows immunized with an inactivated commercial vaccine against rotavirus, as well as the passive immunity transfer to its calves through indirect enzymatic immunoassay (EIE); thus, two groups and four subgroups were formed: Group V1: 24 cows immunized with a commercial inactivated vaccine against BRV, comprising two subgroups - V1n (12 first gestation cows) and V1v (12 second or later gestation cows) and Group V2: 24 cows not immunized against BRV, comprising two subgroups - V2n (12 first gestation cows) and V2v (12 second or later gestation cows). The calves were also allotted into groups and subgroups according to its mother’s distribution, in order to evaluate humoral immune response in serum, the kinetics of hematological and biochemical parameters, the acute phase proteins response, and rotavirus excretion in feces throughout the first 30 days of life. The same calves were also redistributed into groups according to the occurrence of diarrhea in the first month of life as Group A (no diarrhea), group B (diarrhea, but negative to rotavirus detection) and group C (diarrhea, positive to rotavirus detection). Data were submitted to variance analysis and Tukey’s test was performed in order to compare mean values of parameters and establish differences between groups; differences were considered significant when P<0,05. Pearson’s correlation test was also performed in some of the studied parameters, and was considered significant when P<0,05. In group V1 and V2 cows, there was no influence of lactation number in the serum parameters analyzed, whilst in the colostrum whey, higher levels of IgA and IgG were noted in V1v cows when compared to the other Subgroups. Prepartum immunization of cows with a commercial vaccine against rotavirus effectively raised titers of specific IgG against rotavirus ...
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