Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-02-09T03:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336849.pdf: 8368799 bytes, checksum: 38db1bdc9122b89129a0fdc55484990c (MD5) Previous issue date: 2015 / A esponja marinha Petromica citrina é considerada uma espécie nativa do Brasil encontrada na região sul e sudeste. Entre os compostos isolados neste gênero estão os sulfatos de halistanol (esteroides sulfatados) que se destacam por suas atividades antiviral e antimicrobiana. O presente estudo teve por objetivo avaliar o potencial in vitro (atividade antiviral e antimicrobiana) e in vivo (modelos de indução da sepse) da fração n-butanólica (BF), da fração rica em halistanóis (TSH) e dos compostos isolados [sulfato de halistanol (HS) e sulfato de halistanol C (HS-C)]. O fracionamento bioguiado da fração BF foi realizado utilizando gel de permeação molecular (Sephadex LH-20) que, em um primeiro momento, proporcionou a obtenção da amostra bioativa TSH. Esta subfração foi submetida a novo processo cromatográfico com sílica de fase reversa, permitindo o isolamento do sulfato de halistanol (HS) e sulfato de halistanol C (HS-C), compostos estes identificados por ressonância magnética nuclear (RMN) e espectrometria de massas (ESI). Os resultados gerados com os ensaios de avaliação da atividade antiherpética (HSV-1) da amostra TSH, apresentaram índice de seletividade (IS) igual a 15,33, valor este superior quando comparado às amostras HS (IS=2,46) e HS-C (IS=1,45). O potencial antimicrobiano das amostras TSH, HS e HS-C foram estabelecidos por meio das técnicas de difusão em disco, bioautografia e microdiluição, sendo constatada atividade frente a três cepas ATCC S. aureus, E. faecalis e C. albicans, além de três cepas de isolados clínicos bacterianos multirresistentes (S. aureus, MRSA e VRE), sobretudo para amostra TSH foram evidenciados valores de concentrações inibitórias mínimas promissoras frente as cepas MRSA (CIM=31,25 µg/mL) e VRE (CIM=62,5 µg/mL). Com base nos resultados de atividade antimicrobiana da amostra TSH, a mesma foi submetida a ensaios em modelos experimentais de indução de sepse (in vivo). A administração via intraperitoneal dessa amostra na dose de 12 mg/kg no modelo de pneumosepse foi capaz de retardar a morte dos animais. Contudo, no modelo de ligação e perfuração cecal (CLP) a amostra TSH não exerceu efeito na taxa de sobrevivência dos animais quando administrada na dose 33 mg/Kg.<br> / Abstract : The marine sponge Petromica citrina is considered a native species found in south and southeast of Brazil. Among the compounds isolated at this genus are the halistanol sulfates (sulfated steroids), that showed antiviral and antimicrobial activities. The aim of this study was to evaluate the potential in vitro (antiviral and antimicrobial activity) and in vivo (sepsis model) of the n-butanol fraction (BF), halistanol enriched-fraction (TSH) and compounds isolated [halistanol sulfate (HS) and halistanol sulfate C (HS-C)]. Herein it was performed a chemical bioguided fractionation of BF fraction using gel permeation (Sephadex LH-20), as a first step to obtain bioactive TSH sample. This TSH fraction was then submitted to a new purification process by reversed phase chromatography yielding the halistanol sulfate (HS) and halistanol sulfate C (HS-C), that were identified by nuclear magnetic resonance (NMR) and mass spectrometry (ESI). The results of anti-herpetic activity (HSV-1) were significantly more attractive to TSH sample, that showed selectivity index SI =15.33, while HS (SI=2.46) and HS-C (SI=1.45) showed weak activities. The antimicrobial potential of TSH, HS and HS-C were established by the disk diffusion, bioautography and microdilution techniques. The results showed antimicrobial activity against three ATCC strains (S. aureus, E. faecalis and C. albicans), as well as against three clinical multiresistant strains (S. aureus, MRSA and VRE). The TSH sample, presented the most promising results with minimum inhibitory concentrations values against MRSA strains (MIC=31.25 µg/ mL) and VRE (MIC=62.5 µg/mL). Finally, the TSH was assayed in two experimental models of sepsis (in vivo). The intraperitoneal administration of this sample at 12 mg/kg in Pneumosepse model was able to delay the death of animals. On the other hand, in the cecal ligation and puncture model (CLP), TSH sample at 33 mg/kg did not shown effect on the animal survival.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 315357.pdf: 1183526 bytes, checksum: 3438b89e5c0d9c1e499bd8b7a6b63ef7 (MD5) / INTRODUÇÃO Ainda não foi descrito um modelo experimental ideal de para estudo da sepse. O modelo mais utilizado consiste na ligadura e perfuração do ceco. Neste estudo foi avaliado um novo modelo. OBJETIVO: Este estudo tem o objetivo de estimar o calibre de agulha letal mediano (GL50) do novo modelo e compará-lo ao GL50 do modelo clássico. MATERIAL E MÉTODO Foram utilizados 22 ratos machos albinos da linhagem Wistar. Os animais foram distribuídos em dois grupos - Grupo I (GWi): os animais foram submetidos a sepse experimental por ligadura e punção do ceco; Grupo II (GdAc): os animais foram submetidos a sepse experimental por ligadura do cólon ascendente e punção do ceco. Para a estimativa do GL50 foi utilizado o método sequencial up-and-down. RESULTADOS O GL50 no Grupo I (Gwi) foi 19 Gauge (Intervalo de Confiança 17 a 22 Gauge). No Grupo II (GdAc) não foi possível o cálculo do GL 50, pois houve óbito em todos os animais. CONCLUSÕES O modelo que foi avaliado neste ensaio tem letalidade muito alta. Futuras pesquisas são necessárias para estabelecer o papel do modelo Obstrução e Perfuração Intestinal nos estudos sobre a fisiopatologia e tratamento da sepse e da obstrução intestinal.<br> / Abstract : INTRODUCTION An ideal model of experimental sepsis was not yet described. The most popular model is Cecal Ligation and Puncture. In this study, a new model was evaluated. OBJECTIVE The aim of this study was to estimate the lethal needle diameter in 50% of cases (GL50) of the new model and compare it to the GL50 of the classic one. MATERIAL AND METHODS Male albine Wistar rats were studied (n=22). Animals were allocated into two study groups # Group I (GWi): experimental sepsis was induced by cecal ligation and puncture; Group II (GdAc): experimental sepse was induced by ascending colon ligation and cecal puncture. Up-and-down method was used to determinate the GL50. RESULTS GL50 in Group I (GWi) was 19 Gauge (Confidence Interval 17 to 22 Gauge). In Group II (GdAc), determination of GL50 was not possible due to death of all animals in this group. CONCLUSIONS The new model tested in this trial has a too high lethality. Future research will define the role of the model "Intestinal Obstruction and Perforation" in research about physiology and treatment of sepsis and intestinal obstruction.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318109.pdf: 5339491 bytes, checksum: 3bd18f691339280cf25525f6dcba51e8 (MD5) Previous issue date: 2013 / A pneumonia é uma das principais causas de sepse, que por sua vez é a maior causa de morte nas Unidades de Terapia Intensiva, mesmo com os recentes avanços da medicina. O estudo da sepse e de novas alternativas terapêuticas permanecem um desafio devido à complexidade desta síndrome, cujo principal componente é uma resposta inflamatória desordenada. A lipoxina A4 (LXA4) é um mediador lipídico endógeno com potentes ações anti-inflamatórias e pró-resolutivas, entretanto seu papel em processos infecciosos como a sepse ainda não é bem entendido. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avançar no entendimento do papel da LXA4 e do seu receptor FPR2/ALX na resposta inflamatória desordenada que ocorre no modelo de sepse induzida por pneumonia. Para isso, a sepse foi induzida em camundongos Swiss machos pela inoculação intratraqueal de Klebsiella pneumoniae. Os parâmetros inflamatórios e cardiovasculares foram avaliados 6, 24 e 48 h após a infecção. Os resultados mostram que a severidade da infecção e a mortalidade dos animais se correlacionam com a quantidade de bactéria inoculada. Os animais sépticos apresentaram alterações histopatológicas nos pulmões, exibiram aumento do número de células no lavado bronco-alveolar e dos níveis das citocinas pró-inflamatórias TNF-? e IL-1? local e sistemicamente, desenvolveram leucopenia, além de hipotensão e hiporreatividade a agentes vasoconstritores. Além do pulmão, foram encontradas bactérias no baço e coração dos animais, indicando disseminação da infecção. Interessantemente, houve aumento da expressão da NOS-2 em tempos mais tardios, enquanto que os níveis da NOS-1 e NOS-3 permaneceram inalterados. A maior expressão da NOS-2 coincidiu com uma grande produção de NO no foco infeccioso e no plasma, avaliado pela mensuração de nitrito + nitrato. A sepse também induziu aumento precoce da concentração de LXA4 no foco infeccioso e da expressão do seu receptor FPR2/ALX nos pulmões. O tratamento com o antagonista do receptor FPR2/ALX, BOC-1, no início da sepse aumentou a migração de leucócitos para o foco, reduziu o processo infeccioso local e a sua disseminação, e aumentou a sobrevida dos animais. Por outro lado, nos animais tratados com a LXA4 ou com o seu análogo BML-111 no início da sepse, houve redução da migração de células para o foco e agravamento do processo infeccioso. Em momentos mais avançados da sepse, o tratamento dos camundongos com BOC-1 não teve efeito na sobrevida. Entretanto, o tratamento tardio com a LXA4 e o BML-111 aumentou a sobrevida por reduzir a resposta inflamatória excessiva. Esse estudo mostra que a infecção pulmonar induzida pela K. pneumoniae é um modelo animal de sepse clinicamente relevante que induz uma resposta inflamatória sistêmica e provoca alterações cardiovasculares que persistem por pelo menos 48 h. Nossos achados mostram que os níveis de LXA4 e do seu receptor FPR2/ALX estavam aumentados no início da sepse contribuindo para a resposta inflamatória desordenada que ocorre nessa patologia. Além disso, nossos dados mostram que a LXA4 tem um papel duplo na sepse, e seu efeito benéfico ou maléfico é tempo-dependente. Portanto, uma interferência apropriada na via LXA4-FPR2/ALX pode constituir uma nova estratégia terapêutica no auxílio do tratamento da sepse. <br> / Abstract: Pneumonia is one of the major causes of sepsis, which, in turn, is the main cause of death in intensive care units, in spite of recent medical advances. The study of sepsis and new therapeutic alternatives remains challenging due to the complexity of this syndrome, whose main component is a dysregulated inflammatory response. Lipoxin A4 (LXA4) is an endogenous lipid mediator with potent anti-inflammatory e proresolution actions but its role in infectious processes like sepsis is not well understood. Thus, the aim of the present work was to provide a better comprehension of the role of LXA4 and its receptor FPR2/ALX in the inflammatory dysregulation that occurs in pneumonia-induced sepsis model. Pneumosepsis was induced in Swiss male mice by Klebsiella pneumoniae intratracheal inoculation. Inflammatory and cardiovascular parameters were evaluated 6, 24 and 48 h after the insult. The results show that severity of infection and the mortality correlated with the amount of bacteria. Septic animals presented pathological changes in lungs, increase in cell number in the bronchoalveolar lavage, leukopenia, increase in TNF-a and IL-1ß levels, hypotension and hyporesponsiveness to vasoconstrictors, the two latter characteristics of severe sepsis and septic shock. Significant numbers of bacteria in spleen and heart homogenates indicated infection spreading. Interestingly, NOS-2 expression appeared late after bacteria inoculation, whereas levels of NOS-1 and NOS-3 were unchanged. The high NOS-2 expression coincided with an exacerbated NO production in the infection focus and in plasma, as judging by nitrate + nitrite levels. Sepsis also induced an early increase in LXA4 levels and an augment in its receptor FPR2/ALX expression in lungs. Treatment in early sepsis with the antagonist of FPR2/ALX, BOC-1, increased leukocyte migration to the focus, reduced bacterial load and dissemination and improved survival. On the other hand, animals treated with LXA4 itself or the analog BML-111 in early sepsis exhibited a decrease in cell migration to the focus and an infection worsening. In late sepsis, treatment of mice with BOC-1 had no effect, but LXA4 and BML-111improved the survival rate by reducing the excessive inflammatory response. This study shows that K. pneumoniae-induced lung infection is a clinically relevant animal model of sepsis inducing a systemic inflammatory response and cardiovascular alterations which endures at least until 48 h. Our findings demonstrate that LXA4 and its receptor FPR2/ALX levels were increased in the early phase of sepsis, contributing to the characteristic inflammatory dysregulation that occurs in this pathology. In addition, our data show that LXA4 has a dual role in sepsis and that its beneficial or harmful effects are critically dependent on the time. Therefore, a proper interference with LXA4 system may open a new therapeutic avenue to treat sepsis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317916.pdf: 1258675 bytes, checksum: bca79daba9e5f6b05b6c9d073a3d532b (MD5) Previous issue date: 2013 / A produção excessiva de óxido nítrico (NO) durante a sepse está relacionada com a disfunção vascular caracterizada por hipotensão e hiporreatividade a vasoconstritores. NO reage rapidamente com resíduos de tiol (-SH) levando à formação de nitrosotióis (R-SNO). Não obstante a sua natureza reversível, a formação de R-SNO em proteínas pode resultar em efeitos duradouros para a sua função. Outra característica importante dos R-SNO é que eles podem transferir NO na presença de tióis livres (mas não com a eficácia de 100%) através da reação conhecida como transnitrosilação Um modelo já descrito pelo nosso laboratório para estudos de S-nitrosilação e disfunção vascular consiste na infusão de doadores de NO que induzem uma redução substancial da função vasoconstritora de forma semelhante ao que ocorre no quadro da sepse. No que se refere ao mecanismo, doadores de NO transferem parte do seu conteúdo de NO para resíduos de tióis de proteínas endógenas. Considerando todas estas informações, neste trabalho investigamos a participação do NO e R-SNO sobre a hiporreatividade vascular à fenilefrina em animais infundidos com nitroprussiato de sódio (SNP) e animais sépticos. Nossos resultados mostram que animais infundidos com SNP apresentam redução substancial e persistente da resposta contrátil à fenilefrina, apesar da pressão arterial média estar dentro de valores normais. Observou-se também que a administração de L-cisteína induz a hipotensão em animais infundidos com SNP. Esta hipotensão é decorrente, pelo menos em parte, da ativação da guanilato ciclase solúvel. Adicionalmente, injeções sucessivas de L-cisteína atenuam a hiporreatividade à fenilefrina. A oxidação prévia de tióis com DTNB previne e reverte a diminuição da resposta pressórica à fenilefrina em animais infundidos com SNP. A oxidação de tióis com DTNB é revertida por DTT restituindo o estado hiporreativo resultante da infusão com SNP. Em animais sépticos, o DTNB também preveniu a hiporreatividade à fenilefrina. Levando em consideração que DTNB não atravessa a membrana plasmática, é provável que os resultados do efeito da oxidação de resíduos de tiol sejam em proteínas localizadas na face externa da membrana. Nossos resultados mostram que a S-nitrosilação de resíduos de tiol e a formação consequente de R-SNO tem papel fundamental na função vascular, contribuindo para a hiporreatividade a vasconstritores. Por conseguinte, a interferência em R-SNO formados na sepse pode ter impacto substancial na melhora da disfunção cardiovascular desta condição.<br> / Abstract : The excessive production of nitric oxide (NO) during sepsis is related to vascular dysfunction characterized by hypotension and hyporesponsiveness to vasoconstrictors. NO reacts fast to thiol (-SH) residues leading to the formation of nitrosothiols (R-SNO). Notwithstanding its reversible nature, formation of R-SNO in proteins may cause long-lasting consequences to their function. Another important characteristic of R-SNO is that they can exchange (but not with 100% efficacy) NO when in the presence of free thiols by a reaction known as transnitrosylation. A model has been described by our laboratory for studies of vascular dysfunction similar to those that takes place in sepsis. The model consists of the infusion of NO donors leading to a substantial reduction of vasoconstrictor functionality, similarly to what occurs in the context of sepsis. As for the mechanism, we suggest that the infused NO donor will transfer to thiol residues in endogenous proteins. Considering all this information we have investigated the role of NO and R-SNO on vascular hyporeactivity to phenylephrine in rats infused with sodium nitroprusside (SNP) and in septic animals. Our results show that animals infused with SNP show a substantial and persistent reduction in the contractile response to phenylephrine, despite the blood pressure being within normal values. We also observed that administration of L-cysteine induces hypotension in animals infused with SNP. This hypotension is due, at least in part, to the activation of soluble guanylatecyclase. Successive injections of L-cysteine attenuate the hyporeactivity to phenylephrine in SNP infused rats. Previous oxidation of thiols with DTNB prevents and post-infusion reverts the hyporeactivity to phenylephrine in SNP infused animals. The relevance of the availability of reduced thiols was shown by the demonstration that reduction of DTNB oxidized thiols with DTT promptly recovered the hyporeactivity to phenylephrine caused by SNP infusion. In septic animals, DTNB also prevented the hyporeactivity to vasocontritors. Taking into account that DTNB does not cross the plasma membrane, it is likely that its effect results from the oxidation of thiol residues in proteins located at the external face of the membrane. Our results show that possibly S-nitrosylation of thiol residues in proteins and the consequent formation of R-SNO have a critical role in the vascular function, contributing to the hyporeactivity to vasoconstrictors. Therefore, interference with R-SNO formed in sepsis may have a substantial impact on improving cardiovascular dysfunction in this condition.

Resumo não disponível

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / Studies are researching immune cell death mechanisms during the course of sepsis in response to pro-inflammatory and anti-inflammatory mediators that are involved in its pathophysiology. Taurine (Tau) is an abundant amino acid in polymorponuclear leucocytes (PMN) that reacts with hypochlorous acid to form taurine chloramine (TauCl) under inflammatory conditions. In this context, we investigated potential interactions between lymphocytes and TauCl in rats submitted to cecal ligation and perforation (CLP), analyzing cell viability and cytokine secretion profile (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 and IL-10). Adult male rats were divided in two groups (sham and CLP) and then were killed 24 or 120 hours after sepsis induction to isolate lymphocytes from blood and spleen. Lymphocytes (> 95,0% purity determined by differentiation with Giemsa staining) were cultured for 24 hours at a concentration of 1x106 cells/mL and activated by 2 μg/mL concanavalin A (Con-A). After 24 hours, Tau and TauCl were added at concentrations of 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 and 0.5 (mM) for 1 hour. After this time, cells were incubated with MTT (500 μg/mL) for 3 hours to evaluate cell viability and supernatants were used to determine cytokines levels. Cells incubated with Tau exhibited better viability than those incubated with TauCl, in both time and organs. TauCl, in a time and dose-dependent ratio, decreased cytokines secretion (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 and IL-10) when compared to untreated cells. These findings show a possible impairment in lymphocytes function promoted by TauCl, correlated with immunosuppression and cell death characteristic of the late stages of sepsis. / Estudos estão buscando mecanismos de morte celular durante o curso da sepse, em que respostas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias estão envolvidas na sua complexa fisiopatologia. Taurina (Tau) é um aminoácido abundante em polimorfomucleares (PMNs) que reage com ácido hipocloroso para formar o oxidante cloramina taurina (TauCl) em condições inflamatórias. Neste contexto, foi investigado potenciais interações entre linfócitos e TauCl em ratos submetidos à ligação e perfuração cecal (CLP), por meio de análise de viabilidade celular e perfil de secreção de citocinas (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 e IL-10). Ratos adultos machos foram divididos em dois grupos (sham e CLP) e subsequentemente mortos 24 ou 120 horas após a indução da sepse para isolamento de linfócitos do sangue e do baço. Linfócitos (> 95,0% de pureza determinada por diferenciação com coloração de Giemsa) foram cultivados por 24 horas a uma concentração de 1x106 células/mL e ativadas com 2 μg/mL de concanavalina A (ConA). Após 24 horas, Tau e TauCl foram adicionadas a concentrações de 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 e 0,5 (mM) por uma hora. Após este tempo, as células foram incubadas com MTT (500 μg/mL) por 3 horas para avaliar viabilidade celular e os sobrenatantes foram usados para determinar os níveis de citocinas. Células incubadas com Tau exibiram maior viabilidade do que as células incubadas com TauCl, em ambos tempos e órgãos. TauCl, por meio de relação dose-dependente, diminuiu a secreção de citocinas (TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-17A, IL-23 e IL-10) quando comparadas às células não incubadas. Estes achados mostram um possível comprometimento na função de linfócitos promovido pelo efeito de TauCl, correlacionado com a imunossupressão e morte celular características dos estágios de sepse.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutora em Ciências da Saúde. / Sepsis survivors have cognitive impairments associated with decreased quality of life and increased long-term morbidity. Some of these changes are similar to the pathophysiology of neurodegenerative diseases. The receptor for advanced glycation end product ( RAGE) has been associated with progression of neuronal death in many neurodegenerative diseases such as Alzheimer's, and is an important pro- inflammatory mediator. Previous studies have shown that the use of metalloproteinase inhibitor or antioxidant can assist in reducing cognitive impairment. We analyzed biochemical parameters related to neurodegeneration in animal sepsis survivors and the possible involvement of RAGE, the inhibitory avoidance test and use of Metalloproteinase Inhibitor and Antioxidant in animals surviving sepsis. The animals were subjected to sepsis by cecal ligation and puncture ( CLP ) and thirty days after induction, hippocampus and prefrontal cortex were isolated. In the first experiment the immunocontent the _ - amyloid peptide ( Aß ), _ - synuclein, synaptophysin and phosphorylated tau were analyzed by western blot. Furthermore, it was found that the RAGE immunocontent the presence of S100_. An increase of _ -synuclein, tau and phosphorylated Ab and the hippocampus, but not in the prefrontal cortex. The immunocontent RAGE was increased in the two structures and S100_ showed no differences compared to controls in both structures. In the second experiment, we determined the levels of Aß and synaptophysin ( identical to experiment 01 procedures ) and performed the inhibitory avoidance, where the data showed that the inhibitory avoidance latency was significantly reduced in sepsis group compared to sham, suggesting damage to the memory aversive. In the third experiment procedures as experiment 01 were adopted for the animals, except for a few animals that were immediately treated the induction of sepsis with ATX and MMP 2-9 and subsequently testing the inhibitory avoidance (as experiment 02 ). Despite the fact that the inhibitory avoidance task to be a dependent of the hippocampus, it was not possible to determine a decrease in the levels of synaptophysin in the hippocampus or a relationship of increased levels of Aß and RAGE in the hippocampus with test performance of inhibitory avoidance. In the prefrontal córtex synaptophysin levels drop and small increase in their levels of treatment was observed, improved deseempenho memory. The early treatment with antioxidants can decrease cognitive impairment in long-term animals. We concluded that the brains of animals surviving sepsis have several markers of neurodegeneration and performance in the inhibitory avoidance test seems to be dependent on the levels of some of these markers, suggesting a neurodegenerative phenomenon this may be an important factor in cognitive impairment associated with long term rat sepsis survivors. / Sobreviventes a sepse apresentam danos cognitivos associados com a diminuição da qualidade de vida e aumento da morbidade a longo prazo. Algumas destas alterações se assemelham aos mecanismos fisiopatológicos de doenças neurodegenerativas. O receptor para produto final de glicolização avançada (RAGE) vem sendo associado à progressão de morte neuronal em muitas doenças neurodegenerativas, como o Alzheimer, além de ser um importante mediador próinflamatório. Estudos anteriores mostraram que o uso de Inibidor de metaloproteinase de matriz (MMP) ou antioxidante (ATX) podem auxiliar na redução do dano cognitivo. Analisaram-se parâmetros bioquímicos relacionados à neurodegeneração em animais sobreviventes a sepse e o possível envolvimento do RAGE; o teste de esquiva inibitória e uso de Inibidor de MMP e ATX em animais sobreviventes a sepse. Os animais foram submetidos à sepse por ligação cecal e punção (CLP) e trinta dias após a indução, hipocampo e córtex pré-frontal foram isolados. No primeiro experimento o imunoconteúdo do peptídeo amilóide-_ (A_), _-sinucleína, sinaptofisina e tau fosforilada foram analisados por western blot. Além disso, verificou-se o imunoconteúdo de RAGE e a presença de S100_. Houve aumento de _-sinucleína, A_ e tau fosforilada no hipocampo, mas não no córtex pré-frontal. O imunoconteúdo de RAGE esteve aumentado nas duas estruturas e S100_ não apresentou diferenças quando comparadas ao controle, em ambas as estruturas. No segundo experimento, foram determinados os níveis de A_ e sinaptofisina (procedimentos idênticos ao experimento 01) e realizada a esquiva inibitória, onde os dados mostraram que a latência na esquiva inibitória foi significativamente reduzida no grupo sepse quando comparados ao sham, sugerindo dano na memória aversiva. No terceiro experimento foram adotados procedimentos conforme experimento 01 quanto aos animais, com exceção de alguns animais que foram tratados imediatamente a indução da sepse com ATX e inibidor de MMP 2-9 e posteriormente o teste da esquiva inibitória (conforme experimento 02). Apesar do fato de a esquiva inibitoria ser uma tarefa dependente do hipocampo, não foi possível determinar uma diminuição nos níveis de sinaptofisina no hipocampo ou uma relação do aumento dos níveis de A_ e RAGE no hipocampo com desempenho no teste da esquiva inibitória. No córtex pré-frontal foi observada queda dos níveis de sinaptofisina e com pequeno aumento nos seus níveis de tratamento, melhorou o desempenho da memória. O tratamento com ATX precoce pode diminuir o deficit cognitivo a longo prazo em animais. Conclui-se que o cérebro dos animais sobreviventes a sepse apresentam vários marcadores de neurodegeneração e o desempenho no teste de esquiva inibitória parece ser dependente dos níveis de alguns destes marcadores, sugerindo um fenômeno neurodegenerativo podendo este ser um fator importante na associação com dano cognitivo a longo prazo em ratos sobreviventes a sepse.

Introduction: Sepsis is determined as a sistemic inflamatory response syndrome (SIRS) followed by an infecction, evidenced or not. Even after discharge, sepsis survivors have high mortality index and may develop long term cognitive impairment. Articles show that exercise act positively on cognitive behavior considering angiogenesis, neurogenesis and sinaptogenesis as well as like atennuation on memory dammage by depleted or downregulation of MDA and carbonils in hipocampos and córtex préfrontal córtex. Objetive: The aim of this study was analise the effects of moderate physical exercise treadmill program on preventions of alterations on CNS in an sepsis animal model. Methodology: This study use black male mice C57BL/6 (28 days, between 20-25 g). The animals were submitted to moderate physical exercise treadmill program during 8 weeks. Completing 88 days before sepsis induccion by LPS were aleatorally distribueted in groups(n = 10): 1) PBS + not exercitaded; 2) PBS + exercitaded; 3) LPS + not exercitaded; 4) LPS + exercitaded. After 10 days mice did the memory tests and after executed, and having samples of córtex pré-frontal, estriatum, hipocampus, cerebellum and córtex to avaliations based on levels of MDA, carbonils and free-thios. Results: The LPS + exercited didn’t show long term cognitive impairmentand and show smaller MDA concentrations on córtex total, hipocampus, estriatum e cerebellum; downregulated carbonils in córtex total and hipocampus and upregulated levels of free thiois in córtex pré-frontal e córtex total, when compared to LPS + not exercited group. Conclusions: Beyond performance of this training program was observed that memory and learning were preserved was partially explain for the bioquimics results when compared to not exercised group. We suggest new researches to verify how exercise effects may influence other patterns to better understand the power of this intervention Sugerem-se novas pesquisas para verificar a atuação do exercício em outras vias e cascatas metabólicas e compreender melhor o alcance desta intervenção. / Submitted by Tatyane Barbosa Philippi (tatyane.barbosa@unisul.br) on 2017-10-23T18:55:06Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Regina.pdf: 1679084 bytes, checksum: 16dfcc0bf0b5564bcf13b2b8442eb9c2 (MD5) Regina_Maldonado_Bussmann.pdf: 775206 bytes, checksum: 7c2b149b3ff90e8991c8fa1067a4a5c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Barreiros (ana.barreiros@unisul.br) on 2017-10-23T19:24:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação Regina.pdf: 1679084 bytes, checksum: 16dfcc0bf0b5564bcf13b2b8442eb9c2 (MD5) Regina_Maldonado_Bussmann.pdf: 775206 bytes, checksum: 7c2b149b3ff90e8991c8fa1067a4a5c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T19:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Regina.pdf: 1679084 bytes, checksum: 16dfcc0bf0b5564bcf13b2b8442eb9c2 (MD5) Regina_Maldonado_Bussmann.pdf: 775206 bytes, checksum: 7c2b149b3ff90e8991c8fa1067a4a5c5 (MD5) Previous issue date: 2016-07 / Introdução: Sepse é conceituada como uma síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) decorrente de infecção, sendo esta comprovada ou não. Mesmo após a alta, os pacientes sobreviventes a sepse apresentam elevada taxa de mortalidade e comprometimento de algumas funções cognitivas. Estudos demonstram a influência positiva do exercício regular no funcionamento cognitivo cerebral favorecendo angiogênese, neurogenese e sinaptogenese assim como atenuação do prejuízo sobre a memória de memória de longo e curto prazo pela erradicação ou diminuição de peroxidação lipídica em hipocampo e córtex pré-frontal. Objetivo: Avaliar os efeitos de um protocolo de exercício físico aeróbio na prevenção de alterações no SNC em um modelo animal de sepse. Métodos: Foram utilizados camundongos machos C57BL/6 com 28 dias, entre 20-25 g. Os animais foram submetidos a um protocolo de exercício físico aeróbio moderado por oito semanas. Aos 88 dias após a indução de sepse por LPS, os animais foram distribuídos nos seguintes grupos (n = 10): 1) PBS + não exercitado; 2) PBS + exercitado; 3) LPS + não exercitado; 4) LPS + exercitado. Depois de 10 dias os camundongos foram submetidos aos testes de memória e aprendizado. Após os testes comportamentais, os animais foram sacrificados sendo o córtex pré-frontal, estriado, hipocampo, cerebelo e córtex removidos e armazenados para análises posteriores de peroxidação lipídica e carbonilação de proteínas e tióis livres. Resultados: O grupo LPS + exercitado não apresentou comprometimento da memória e do aprendizado e apresentou menores concentrações de MDA no córtex total, hipocampo, estriado e cerebelo; proteínas carboniladas diminuídas em córtex total e hipocampo e aumentadas concentrações de tióis livres em córtex pré-frontal e córtex total, quando comparados com LPS + não exercitados. Conclusão: A realização do exercício aeróbio moderado preserva a função cognitiva (memória e aprendizado) em insultos sépticos, e a redução do dano oxidativo, parece mediar pelo menos em parte o efeito do exercício físico.

Introduction: Sepsis is a disease with high rates of morbidity and mortality worldwide, especially in relation to late diagnosis, being one of the main reasons for hospitalization in an intensive care unit (ICU). Sepsis is among the leading causes of death with a high lethality rate. Objective: To estimate the incidence of nosocomial sepsis in adults from an ICU of a hospital in Southern Santa Catarina between 2009 and 2015. Methods: Retrospective cohort study. The data was obtained based on a review of the nosocomial infection notification sheets in the adult ICU and patients records, for the definition of sepsis cases in the study period. Results: There were 10,322 patients admitted to the ICU from 2009 to 2015. The incidence rate was 3.6%, which corresponds to 35.6 new cases per 1000 patients. In relation to the infection site, pneumonia (59.7%), urinary tract (28.3%), and surgical procedures (12.0%) were the most prevalent sources. Antibiotic therapy was necessary in 100% of the cases. Of the 367 cases of sepsis, 268 (73.0%) patients died. Conclusion: The incidence rate of nosocomial sepsis was 3.6%, with a reduction from 4.5% in 2009 to 2.3% in 2015. The decrease in incidence may be associated with the development of infection prevention protocols and improved care for patients with sepsis. However, there was a high sepsis-related lethality rate. / Submitted by Everson da Silva Souza (everson.souza@unisul.br) on 2017-09-05T18:27:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Everson com ficha catalografica e assinatura dos membros da banca.pdf: 3173135 bytes, checksum: 4ad46b19d3f31a34ac05886fd0f5cbf4 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2017-09-05T19:04:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Everson com ficha catalografica e assinatura dos membros da banca.pdf: 3173135 bytes, checksum: 4ad46b19d3f31a34ac05886fd0f5cbf4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T19:04:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Everson com ficha catalografica e assinatura dos membros da banca.pdf: 3173135 bytes, checksum: 4ad46b19d3f31a34ac05886fd0f5cbf4 (MD5) Previous issue date: 2017-09-04 / Introdução: A sepse é uma doença com altas taxas de morbidade e mortalidade no mundo, principalmente no que tange o diagnóstico tardio, sendo um dos principais motivos de internação em centro de terapia intensiva (CTI). A sepse está dentre as principais causas de morte com alta taxa de letalidade. Objetivo: Estimar a incidência de sepse nosocomial em adultos de um CTI de um hospital no Sul de Santa Catarina entre 2009 e 2015. Métodos: Foi realizado um estudo de coorte histórica. Os dados foram obtidos pela revisão das fichas de notificação por infecção nosocomial no CTI adulto, além de dados provenientes do prontuário médico, para a definição dos casos de sepse no período. Resultados: Houve 367 casos de sepse entre 10.322 pacientes internados no CTI no período, resultando em incidência de 3,6% ou 35,6 novos casos a cada 1.000 pacientes. Em relação ao sítio de infecção, a pneumonia (59,7%), infecção de trato urinário (28,3%) e infecção cirúrgica (12,0%), foram às fontes mais frequentes. A antibioticoterapia se fez necessária em 100% dos pacientes. Do total de 367 casos com sepse, 268 (73,0%) tiveram o óbito como desfecho clínico. Conclusão: A taxa de incidência de sepse nosocomial foi de 3,6%, com redução de 4,5% em 2009 para 2,3% em 2015. A baixa incidência pode estar relacionada ao fato da instituição instituir protocolos de prevenção de infecção hospitalar e melhorar a assistência ao paciente com sepse. Entretanto, observa-se alta letalidade entre os casos de sepse.

Submitted by ERICA PIRES ROCHA (erirocha3@hotmail.com) on 2017-09-28T01:33:22Z No. of bitstreams: 1 Érica Pires da Rocha - Mestrado.pdf: 1273239 bytes, checksum: cbf17cc022865581d3b57682f0ef2824 (MD5) / Rejected by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: Inserir o número do processo de financiamento FAPESP nos agradecimentos da tese/dissertação. Corrija estas informações e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-09-28T14:53:27Z (GMT) / Submitted by ERICA PIRES ROCHA (erirocha3@hotmail.com) on 2017-09-29T09:23:30Z No. of bitstreams: 1 ERICA MESTRADO PDF.pdf: 1338051 bytes, checksum: 9bf40b5727bebead9b29d331b3ca8fbe (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-09-29T18:45:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rocha_ep_me_bot.pdf: 1338051 bytes, checksum: 9bf40b5727bebead9b29d331b3ca8fbe (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-29T18:45:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rocha_ep_me_bot.pdf: 1338051 bytes, checksum: 9bf40b5727bebead9b29d331b3ca8fbe (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: O idoso se apresenta como principal grupo etário acometido pela lesão renal aguda (LRA) por possuir diversos fatores de risco para o seu desenvolvimento como a nefroesclerose senil, a presença de comorbidades, o uso de medicamentos nefrotóxicos e a susceptibilidade à sepse. Além disso, conforme se envelhece, perde-se massa muscular e por isso a creatinina plasmática basal do idoso pode ser mais baixa que o normal de modo a mascarar o aumento patológico decorrente de lesão renal e assim levar ao subdiagnóstico ou diagnóstico tardio, o que justifica a busca por biomarcadores de lesão mais precoce, como o NGAL. Não há estudos que avaliaram a LRA em pacientes sépticos e idosos admitidos em unidade de terapia intensiva (UTI). Objetivo: Este estudo teve como objetivo principal avaliar a eficácia do NGAL urinário (u) como predito diagnóstico e prognóstico da LRA associada à sepse em pacientes idosos em UTI. Pacientes e métodos: Foram estudados de modo prospectivos pacientes idosos admitidos com sepse ou que evoluíram com sepse em três UTIs do HC-FMB (UNESP) durante o período de 01 de outubro de 2014 a 20 de novembro de 2015. A avaliação de função renal foi realizada diariamente por meio da dosagem da creatinina sérica e verificação de débito urinário. A dosagem do NGALu foi realizada nas primeiras 48h do diagnóstico de sepse (amostra 1) e entre 48 e 96h (amostra 2). Os resultados foram apresentados utilizando estatística descritiva e área sob a curva ROC para determinar a capacidade do NGALu discriminar o diagnóstico e prognóstico da LRA. Todos os resultados dos testes de hipótese foram discutidos no nível de 5% de significância (p<0.05). Resultados: Foram incluídos 75 pacientes idosos sépticos, sendo que 47 (62,7%) desenvolveram LRA. Na regressão logística foram identificados como fatores associados à LRA a presença de DRC (OR= 0,051, IC=0,017-0,601, p=0,045), menor PAM à admissão (OR=0,816, IC=0,130– 0,472; p=0,047) e maior NGALur1 (OR= 2,002, IC=1,205-3,325, p=0,007). O NGAL u apresentou-se como excelente preditor diagnóstico de LRA, com área sob a curva >0,95, e sensibilidade e especificidade superiores a 0,89, antecipando o diagnóstico de LRA em 2,1±0,3 dias. Os fatores associados ao óbito na regressão logística foram a presença de LRA (OR= 2,14, IC= 1,421–3,982, p=0,04), a doença pulmonar obstrutiva crônica (OR=9,376, IC=1,790 – 49,1, p= 0,008) e o uso de droga vasoativa (OR= 2,066, IC=0,987 – 1,021, p=0,04). A acurácia do NGALu1 e 2 como preditor de óbito foi intermediária, com área sob a curva de 0,61 e 0,62; sensibilidade entre 0,65 e 0,77 e especificidade inferior a 0,6. Conclusão: O NGAL u mostrou-se excelente preditor de LRA em pacientes idosos sépticos em UTI, podendo antecipar o diagnóstico de LRA em 2,1 dias. / Background: The elderly is the main age group affected by acute kidney injury (AKI). There are several risk factors for its development as renal structural and functional degeneration, comorbidities, use of nephrotoxic drugs and susceptibility to sepsis. Besides that, in the process of ageing there is loss of muscular mass and therefore, the basal plasmatic creatinine levels of the elderly can be lower than the normal values, masking an increase in kidney injury pathologies, leading to delayed or late diagnosis, justifying the search for biomarkers of early injury biomarkers, such as NGAL. There are no studies that assessed AKI in elderly septic patients admitted to Intensive Care Units (ICUs). Objective: This study aimed to evaluate the efficacy of urinary NGAL (u) as predictor of diagnosis and prognosis in elderly septic patients admitted to ICUs. Patients and Methods: We prospectively studied elderly patients with sepsis admitted to ICUs from October 2014 to November 2015. Assessment of renal function was performed daily by serum creatinine and urine output. The dosage of NGALu was performed within the first 48 hours of the diagnosis of sepsis (NGAL 1) and between 48 and 96 hours (NGAL 2). The results were presented using descriptive statistics and area under the receiver operating characteristic curve (AUC-ROC) by comparing AKI patients with all non-AKI patients and by comparing survivor patients with those nonsurvivor patients. In all tests, differences were considered significant at 5%. Results: Seventy-five septic elderly patients were included, 47 (62.7%) developed AKI. In logistic regression were identified as factors associated with AKI the presence of chronic kidney injury (OR = 0.051, CI = 0.017 to 0.601, p = 0.045), lower mean blood pressure at admission (OR = 0.816, CI = 0,130- 0.472; p = 0.047) and higher NGALur1 (OR = 2.002, CI = 1.205 to 3.325, p = 0.007). The NGAL u was excellent predictor of AKI diagnosis (AUC-ROC > 0.95, and sensitivity and specificity greater than 0.89), anticipating the AKI diagnosis in 2.1 ± 0.3 days. Factors associated with mortality in the logistic regression were the presence of AKI (OR = 2.14, CI = 1.421 to 3.982, p = 0.04), chronic obstructive pulmonary disease (OR = 9.376, CI = 1.790 to 49.1, p = 0.008) and vasoactive drugs (OR = 2.066, CI = 0.987 to 1.021, p = 0.04). The accuracy of NGALu1 and 2 as predictors of death was intermediate, with AUC-ROC of 0.61 and 0.62; sensitivity between 0.65 and 0.77 and a specificity lower than 0.6. Conclusion: The uNGAL was excellent predictor of AKI in septic elderly patients in ICUs and can anticipate the diagnosis of AKI in 2.1 days. / FAPESP: 2012/16713-3