A esporotricose, micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, acomete o homem e várias espécies de animais, sendo os felinos domésticos a espécie mais comumente envolvida nos relatos zoonóticos da enfermidade. Considerando as dificuldades terapêuticas no tratamento da micose, incluindo toxicidade e o desenvolvimento de resistência aos antifúngicos disponíveis, o estudo objetivou avaliar a eficácia in vivo do imunomodulador (1-3) glucana e em associação ao Itraconazol no tratamento da esporotricose sistêmica experimental, além de avaliar a presença do S. schenckii na cavidade oral e a produção de óxido nítrico. Foram utilizados 96 ratos Wistar, machos, os quais foram divididos em seis grupos de 16 animais, sendo eles G1: 0,5mg de glucana previamente (três doses) e pós a inoculação; G2: 0,5 mg glucana pós inoculação; G3: grupo controle; G4: 0,5mg de glucana associada a 10mg/kg de itraconazol; G5: 10mg/kg de itraconazol; e grupo G6: duas doses de 0,5mg de glucana associado a 10mg/kg de itraconazol. Os animais foram inoculados com 0,1ml do inóculo fúngico pela via intraperitoneal e veia lateral da cauda, após uma semana iniciou-se o tratamento dos grupos, quando estes apresentavam sinais clínicos da enfermidade. Após acompanhamento clínico durante a cinco semanas de tratamento e isolamento do agente na cavidade oral dos animais, estes foram eutanasiados e necropsiados para a coleta de sangue, avaliação anatomopatológica dos órgãos, retroisolamento do agente, quantificação das unidades formadoras de colônias (UFC) do baço e quantificação de óxido nítrico. Na primeira avaliação foi observado no grupo G1, uma prevenção da enfermidade desencadeada pela glucana, uma vez que, os animais pertencentes a esse grupo não apresentaram sinais clínicos, lesões anatomopatológicas e obtiveram a menor quantificação de UFC (p<0,5). No entanto no final do período experimental o G4 foi significativamente melhor dentre os grupos de tratamento, pois, findou o período com 70% dos animais sem qualquer alteração clínica, lesões macroscópicas nos órgãos e retroisolamento do agente, além de demonstrar menor quantificação nas UFCs e não ocorrer nenhum óbito decorrente da enfermidade. Os grupos G2, G5 e G6 foram significativamente melhor que o grupo controle uma vez que este grupo apresentou uma mortalidade de 31,25%, além de que 100% dos animais permanceram com alterações clínicas, lesões em órgão como fígado, baço e testículo e demonstraram maior quantificação de UFC (p<0,5). Quanto á produção de óxido nítrico foi verificado maior quantidade nos grupos que receberam a glucana em detrimento aos demais grupos. Em vista dos resultados obtidos conclui-se que a glucana induz a produção de óxido nítrico e os cinco tratamentos demostraram resultados satisfatórios, no entanto, a associação do antifúngico e (1-3) glucana propiciou uma regressão mais precoce das lesões no tratamento da esportricose sistêmica experimental. / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii, which affects humans and a wide variety of animals, domestic cats involved in reports of zoonotic illness. Considering the difficulties in the therapeutic treatment of ringworm, including toxicity and the development of resistance to antifungals available, the study aimed to evaluate the efficacy of the immunomodulator in vivo (1-3) glucan and in combination with Itraconazole in the treatment of experimental systemic sporotrichosis, beyond to evaluate the presence of S. Schenckii in the oral cavity of experimental animals and the production of oxide nitric. Were used 96 male Wistar rats, which were divided into 6 groups of 16 animals, and they were G1: 0.5 mg of glucan in advance (three doses) and after inoculation G2: 0.5 mg glucan after inoculation; G3: control group; G4: 0.5 mg of glucan associated with 10mg/kg of itraconazole; G5: 10mg/kg of itraconazole, and G6: two doses of 0.5 mg of glucan associated 10mg/kg of the itraconazole. The animals were inoculated with 0.1 ml of fungal inoculum by intraperitoneal and lateral tail vein, after one week started treatment groups when they showed clinical signs of disease. After clinical monitoring during the five weeks of treatment and isolation of the agent in the oral cavity of animals, they were euthanized and necropsied to collect blood, anatomopathological evaluation of organs, organ cultures of the agent, and quantification of colony forming units (CFU) of spleen. In the first evaluation was observed in G1, a prevention of the disease triggered by glucan, since the animals from this group showed no clinical signs, anatomopathologicals lesions and obtained the smaller number of CFU (p <0.5). However at the end of experimental period the G4 was significantly better among the treatment groups, therefore, ended the period with 70% of animals without any clinical alteration, macroscopic lesions in organs and organ cultures of the agent, beyond to demonstrate smaller number in CFUs and not occur any deaths resulting from illnes .The groups G2, G5 and G6 were significantly better than the control group since this group had a mortality rate of 31.25%, besides that 100% of the animals remained with clinical changes, lesions in organs such as liver, spleen and testis and demonstrated greater quantification of CFU (p <0,5). As the production of nitric oxide has been found much in the groups receiving the glucan rather than to the other groups. In view of these obtained results it is concluded that glucan induces the production of nitric oxide and the five treatments demonstrated efficacy to the reference sporotrichosis experimental systemically, however, the combination of antifungal (1-3) glucan provided an early regression of the lesions.

Camundongos da linhagem BALB/ c foram infectados com 5x106 leveduras de S. schenckii e acompanhados durante vinte e oito dias de infecção. Através da contagem do número de UFC nos baços fígados verificou-se que a carga fúngica nos órgãos dos animais diminui drasticamente na segunda semana de infecção. O teste ELISA revelou que nos órgãos destes animais a citocina IL-10 produzida em níveis mais elevados durante toda a infecção, assim modulando o controle da infecção. O padrão de proteínas secretadas pelas células leveduriformes de S. schenckii quando cultivadas em meio de cultura líquido e visualizado através de SDS-PAGE, apresentou bandas com pesos moleculares entre 97kDa e 20,1 kDa. Uma banda de 70 kDa foi reconhecida pelos soros dos animais infectados somente após a segunda semana de infecção e persistiu até o final desta. Os níveis de Ig total produzidos contra o antígeno solúvel e a proteína de 70 kDa aumentaram na segunda semana infecção e os títulos mantiveram-se durante a infecção. A isotipagem dos anticorpos revelou a predominância dos isotipos IgG1 e IgG3 para os dois antígenos testados. Notou-se que o aumento dos níveis de Ig contra o exoantígeno e a proteína imunorreativa de 70kDa, assim como o reconhecimento desta proteína, ocorreu inversamente proporcional à diminuição da carga fúngica nos órgão dos animais infectados. As proteínas secretadas pelas leveduras de S. schenckii, principalmente a proteína de 70 kDa, são capazes de ativar uma resposta humoral e conseqüente produção de altos níveis anticorpos e inibir a fagocitose do fungo pelos macrófagos. Desta maneira, estes antígenos modulam a resposta imune na esporotricose e contribuem para a patogenicidade do fungo. / BALB/c mice had been infected with 5xl06 yeasts of S. schenckii and followed during twenty and eight days of infection. Through the counting of the number of UFC in the livers and spleens it was verified that the fungaI load in the organs of the animais decreased drastically in the second week of infection. The ELISA test disclosed that in the organs of these animaIs the cytokine IL-10 was produced in leveIs more raised during alI the infection, thus modulating the control of the infection. The protein standard secreted for the yeasts of S. schenckii when cultivated in liquid medium and visualized through SDS-PAGE, it presented bands with molecular weights between 97 and 20,1 kDa. A band of 70 kDa was recognized for the sera of the infected animals after the second week of infection and persisted until the end of this. The leveIs of total Ig produced against the exoantigen and the protein of 70 kDa had increased in the second week of infection and the titers had been remained during the infection. The isotyping of the antibodies disclosed the predominance of the IgG1 and IgG3 for two tested antigens. One noticed that the increase of the leveIs of Ig against antigens and the recognition of the protein of 70 kDa occurred parallel with the reduction of the fungal load in the organs of the infected animals. The proteins secreted by the yeasts of S. schenckii, mainly the protein of 70 kDa, they are capable to activate a humoral response and consequent production high leveIs of antibodies and to inhibit phagocytosis of the fungi for the macrophages. In this way, these antigens modulate the immune response in sporotricosis and contribute for the pathogenic potential of fungi.

Considerando a importância do felino doméstico nos relatos zoonóticos da esporotricose, assim como os problemas relacionados a terapêutica da micose nessa espécie, o estudo objetiva avaliar a atividade in vitro da terbinafina e itraconazol frente ao S. schenckii; estudar a ação desses fármacos no tratamento da esporotricose sistêmica experimental; analisar as enzimas hepáticas e hemograma dos animais submetidos ao tratamento antifúngico; estudar as possíveis alterações macroscópicas nos animais inoculados com S. schenckii assim como realizar o retroisolamento do agente. Para o teste in vitro, foram utilizados 10 isolados de S. schenckii (seis felinos, três humanos e um de cão), os quais foram avaliados quanto a suscetibilidade frente aos fármacos através da técnica de microdiluição em caldo de acordo com o CLSI para as fases leveduriforme e filamentosa do agente. A leitura da CIM foi visual, correspondendo à menor concentração do antifúngico em que não houve crescimento visível do S. schenckii quando comparado ao controle positivo. O teste in vivo, foi realizado através da inoculação pelas vias intraperitonial e veia lateral da cauda de células fúngicas (2x103 cél/mL) de dois isolados de S. schenckii (felino e canino) em 120 ratos norvergicus, divididos em quatro grupos: tratado terbinafina (250mg/kg) e itraconazol (100mg/kg); diluente terbinafina (250mg/kg de solução de água destilada com 5% de DMSO e 1% de Tween 20) e itraconazol (100mg/kg de água destilada estéril), sendo administrados através de sondagem oral uma vez ao dia, durante 30 dias. Paralelamente foram realizados hemogramas e avaliação das enzimas hepáticas (ALT e FA), assim como o acompanhamento da evolução clínica e análise histopatológica de todos animais experimentais. No final do período experimental os animais foram necropsiados e realizado análise macroscópica com a coleta dos órgãos para a obtenção do retroisolamento do S. schenckii. A CIM para a terbinafina obtida entre todos os isolados na fase leveduriforme de esporotricose felina variaram de 0,055μg/mL a 0,109μg/mL, enquanto que para os isolados humanos e de cão foi de 0,055μg/ml. Para o itraconazol, a CIM frente aos isolados de esporotricose felina foi de 0,875μg/mL a 1,75μg/mL, já para os casos humanos foi de 0,219μg/mL e para o isolado de cão de 1,75μg/mL. Para a fase filamentosa do agente foi observada uma CIM para a terbinafina entre os isolados de felinos de 0,875 μg/mL, enquanto que os isolados humanos e de cão a CIM foi de 0,219μg/mL. Para o itraconazol os isolados felinos resultaram numa CIM de 3,5μg/mL, já nos isolados de esporotricose humana e em cão a CIM foi de 1,75μg/mL. Quanto ao estudo in vivo, os animais tratados com terbinafina e itraconazol resultaram em menor freqüência de alterações macroscópicas assim como na obtenção do retroisolamento do agente em relação aos grupos controle. Não foi detectada alterações nas enzimas hepáticas, hemograma e nas avaliações macro e histopatológicas dos animais submetidos ao tratamento antifúngico. Com esses resultados conclui-se que a terbinafina e itraconazol possuem atividade in vitro frente ao S. schenckii e que as doses estudadas dos fármacos são eficazes no tratamento da esporotricose experimental sistêmica, assim como não produzem alterações das enzimas hepáticas avaliadas e do hemograma. / Considering the importance of the domestic feline in the zoonotic reports of the esporotrichosis, as well as the related problems the therapeutics of the mycosis in that species, the study objective was evaluate the activity in vitro of terbinafine and itraconazole against to S. schenckii; study the activity of those drugs in the treatment of the experimental systemic esporotrichosis; analyze the hepatic enzymes and blood count of the animals submitted to the antifungal treatment; study the possible macroscopic alterations in the animals inoculated with S. schenckii as well as realized the agent retroisolament. For the test in vitro, 10 isolated of S. schenckii were used (six felines, three humans and one canine), which were performed as the susceptibility against to the drugs through the microdiluição technique in broth in accordance with the CLSI for the phases yeast and mycelial of the agent. The reading of CIM was visual, corresponding to smallest concentration of the antifungal in that there was not visible growth of S. schenckii when compared to the positive control. The test in vivo, was performed through the of the inoculation intraperitonial and lateral vein of the tail of fungal cells (2x103 cél/mL) of two isolated of S. schenckii (feline and canine) in 120 mice norvergicus, divided in four groups: treaty terbinafine (250mg/kg) and itraconazole (100mg/kg); diluent terbinafine (250mg/kg of solution of water distilled with 5% of DMSO and 1% of Tween 20) and itraconazol (100mg/kg of water distilled sterile), being administered by gavage once a day, for 30 days. Parallel blood counts and evaluation of the hepatic enzymes were accomplished (ALT and F.A), as well as the accompaniment of the clinical evolution and analysis histopathologic of all animal experimental. In the end of the experimental period the animals were autopsied and performed macroscopic analysis with the collection of the organs for the obtaining of the detected S. schenckii growth. CIM for the terbinafine obtained among all the isolated in the phase yeast of feline esporotrichosis oscillated between 0,055μg/mL the 0,109μg/mL, while for the isolated humans and canine was of 0,055μg/ml. For the itraconazole, the CIM against of the isolated of feline esporotrichosis was from 0,875μg/mL to 1,75μg/mL, for the human cases it went of 0,219μg/mL and for the isolated canine of 1,75μg/mL. For the mycelial phase a CIM was observed for the terbinafine among the isolated of felines of 0,875 μg/mL, while the isolated humans and canine CIM was of 0,219μg/mL. For the itraconazole the isolated felines resulted in a CIM 3,5μg/mL, in the isolated of human esporotrichosis and canine CIM was of 1,75μg/mL. As for the study in vivo, the animals treaties with terbinafine and itraconazole resulted in smaller frequency of macroscopic alterations as well as in the obtaining of the detected agent growth in relation to the groups control. It was not detected alterations in the hepatic enzymes, blood count and in the evaluations macro and histopathologic of the animals submitted to the antifungal treatment. With those results we are to report that the terbinafine and itraconazol apresent activity in vitro against to S. schenckii and that the studied doses of the drugs are effective in the treatment of the systemic experimental esporotrichosis, as well as they don't produce alterations of the appraised hepatic enzymes and blood count.

Considerando a importância do felino doméstico nos relatos zoonóticos da esporotricose, assim como os problemas relacionados a terapêutica da micose nessa espécie, o estudo objetiva avaliar a atividade in vitro da terbinafina e itraconazol frente ao S. schenckii; estudar a ação desses fármacos no tratamento da esporotricose sistêmica experimental; analisar as enzimas hepáticas e hemograma dos animais submetidos ao tratamento antifúngico; estudar as possíveis alterações macroscópicas nos animais inoculados com S. schenckii assim como realizar o retroisolamento do agente. Para o teste in vitro, foram utilizados 10 isolados de S. schenckii (seis felinos, três humanos e um de cão), os quais foram avaliados quanto a suscetibilidade frente aos fármacos através da técnica de microdiluição em caldo de acordo com o CLSI para as fases leveduriforme e filamentosa do agente. A leitura da CIM foi visual, correspondendo à menor concentração do antifúngico em que não houve crescimento visível do S. schenckii quando comparado ao controle positivo. O teste in vivo, foi realizado através da inoculação pelas vias intraperitonial e veia lateral da cauda de células fúngicas (2x103 cél/mL) de dois isolados de S. schenckii (felino e canino) em 120 ratos norvergicus, divididos em quatro grupos: tratado terbinafina (250mg/kg) e itraconazol (100mg/kg); diluente terbinafina (250mg/kg de solução de água destilada com 5% de DMSO e 1% de Tween 20) e itraconazol (100mg/kg de água destilada estéril), sendo administrados através de sondagem oral uma vez ao dia, durante 30 dias. Paralelamente foram realizados hemogramas e avaliação das enzimas hepáticas (ALT e FA), assim como o acompanhamento da evolução clínica e análise histopatológica de todos animais experimentais. No final do período experimental os animais foram necropsiados e realizado análise macroscópica com a coleta dos órgãos para a obtenção do retroisolamento do S. schenckii. A CIM para a terbinafina obtida entre todos os isolados na fase leveduriforme de esporotricose felina variaram de 0,055μg/mL a 0,109μg/mL, enquanto que para os isolados humanos e de cão foi de 0,055μg/ml. Para o itraconazol, a CIM frente aos isolados de esporotricose felina foi de 0,875μg/mL a 1,75μg/mL, já para os casos humanos foi de 0,219μg/mL e para o isolado de cão de 1,75μg/mL. Para a fase filamentosa do agente foi observada uma CIM para a terbinafina entre os isolados de felinos de 0,875 μg/mL, enquanto que os isolados humanos e de cão a CIM foi de 0,219μg/mL. Para o itraconazol os isolados felinos resultaram numa CIM de 3,5μg/mL, já nos isolados de esporotricose humana e em cão a CIM foi de 1,75μg/mL. Quanto ao estudo in vivo, os animais tratados com terbinafina e itraconazol resultaram em menor freqüência de alterações macroscópicas assim como na obtenção do retroisolamento do agente em relação aos grupos controle. Não foi detectada alterações nas enzimas hepáticas, hemograma e nas avaliações macro e histopatológicas dos animais submetidos ao tratamento antifúngico. Com esses resultados conclui-se que a terbinafina e itraconazol possuem atividade in vitro frente ao S. schenckii e que as doses estudadas dos fármacos são eficazes no tratamento da esporotricose experimental sistêmica, assim como não produzem alterações das enzimas hepáticas avaliadas e do hemograma. / Considering the importance of the domestic feline in the zoonotic reports of the esporotrichosis, as well as the related problems the therapeutics of the mycosis in that species, the study objective was evaluate the activity in vitro of terbinafine and itraconazole against to S. schenckii; study the activity of those drugs in the treatment of the experimental systemic esporotrichosis; analyze the hepatic enzymes and blood count of the animals submitted to the antifungal treatment; study the possible macroscopic alterations in the animals inoculated with S. schenckii as well as realized the agent retroisolament. For the test in vitro, 10 isolated of S. schenckii were used (six felines, three humans and one canine), which were performed as the susceptibility against to the drugs through the microdiluição technique in broth in accordance with the CLSI for the phases yeast and mycelial of the agent. The reading of CIM was visual, corresponding to smallest concentration of the antifungal in that there was not visible growth of S. schenckii when compared to the positive control. The test in vivo, was performed through the of the inoculation intraperitonial and lateral vein of the tail of fungal cells (2x103 cél/mL) of two isolated of S. schenckii (feline and canine) in 120 mice norvergicus, divided in four groups: treaty terbinafine (250mg/kg) and itraconazole (100mg/kg); diluent terbinafine (250mg/kg of solution of water distilled with 5% of DMSO and 1% of Tween 20) and itraconazol (100mg/kg of water distilled sterile), being administered by gavage once a day, for 30 days. Parallel blood counts and evaluation of the hepatic enzymes were accomplished (ALT and F.A), as well as the accompaniment of the clinical evolution and analysis histopathologic of all animal experimental. In the end of the experimental period the animals were autopsied and performed macroscopic analysis with the collection of the organs for the obtaining of the detected S. schenckii growth. CIM for the terbinafine obtained among all the isolated in the phase yeast of feline esporotrichosis oscillated between 0,055μg/mL the 0,109μg/mL, while for the isolated humans and canine was of 0,055μg/ml. For the itraconazole, the CIM against of the isolated of feline esporotrichosis was from 0,875μg/mL to 1,75μg/mL, for the human cases it went of 0,219μg/mL and for the isolated canine of 1,75μg/mL. For the mycelial phase a CIM was observed for the terbinafine among the isolated of felines of 0,875 μg/mL, while the isolated humans and canine CIM was of 0,219μg/mL. For the itraconazole the isolated felines resulted in a CIM 3,5μg/mL, in the isolated of human esporotrichosis and canine CIM was of 1,75μg/mL. As for the study in vivo, the animals treaties with terbinafine and itraconazole resulted in smaller frequency of macroscopic alterations as well as in the obtaining of the detected agent growth in relation to the groups control. It was not detected alterations in the hepatic enzymes, blood count and in the evaluations macro and histopathologic of the animals submitted to the antifungal treatment. With those results we are to report that the terbinafine and itraconazol apresent activity in vitro against to S. schenckii and that the studied doses of the drugs are effective in the treatment of the systemic experimental esporotrichosis, as well as they don't produce alterations of the appraised hepatic enzymes and blood count.

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dayvison_freitas_ioc_dout_2014.pdf: 5915307 bytes, checksum: a8cd2187aedf589e2dda9410eb3318b6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Esporotricose é uma micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico previamente descrito como uma única espécie, Sporothrix schenckii, agora entendido como um complexo de diferentes espécies de interesse clínico. A região metropolitana do Rio de Janeiro constitui área hiperendêmica de esporotricose zoonótica transmitida por gatos desde 1998. Clinicamente tem se caracterizado por formas clínicas pouco usuais, manifestações de hipersensibilidade e um número crescente de pacientes coinfectados com HIV. Este estudo teve como objetivo avaliar fatores epidemiológicos, micológicos, clínicos e terapêuticos associados às diversas formas clínicas de pacientes com esporotricose. Foram utilizados o banco hospitalar de registros de pacientes e o banco de cepas do laboratório de micologia do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC), bem como técnicas de identificação genotípica e laboratoriais clássicas para determinação de virulência e fenótipo dos isolados fúngicos. Foi verificado que a dacriocistite aguda (quatro casos entre 2008 e 2010) é uma manifestação da esporotricose que evolui com complicações (fístula e dacriocistite crônica) necessitando reparação cirúrgica. A Síndrome de Sweet foi observada em três pacientes até 2010 e deve ser incorporada como manifestação de hipersensibilidade da esporotricose. As 12 gestantes com esporotricose entre 2005 e 2010 apresentaram boa evolução com termoterapia local. Na análise clínica e terapêutica de 21 casos de esporotricose e HIV, as formas clínicas variaram com o status imunológico dos pacientes e ocorreu resposta terapêutica em 81% dos casos. A investigação diagnóstica de doença sistêmica em pacientes com linfócitos T CD4+ < 200 células/\03BCL se impõe Na série histórica avaliada, com 48 pacientes com esporotricose e HIV e 3.570 com esporotricose, observamos que pacientes com HIV evoluíram com quadros mais disseminados, hospitalização e óbito. Na avaliação genotípica de 50 isolados, Sporothrix brasiliensis esteve associado às formas pouco usuais e aos casos de hipersensibilidade. O estudo de cinco isolados coletados ao longo de cinco anos em um paciente com quadro de esporotricose disseminada demonstrou aumento de virulência no isolado obtido após 11 anos de infecção (5 anos de tratamento no IPEC), quando utilizado Galleria mellonella como modelo in vivo, sugerindo uma adaptação do fungo ao hospedeiro neste período. Conclui-se que a esporotricose no Rio de Janeiro está relacionada ao surgimento de formas raras e inéditas. Da mesma forma, tem acometido pacientes infectados pelo HIV, com morbimortalidade, devendo ser incorporada como uma infecção oportunística na sua forma disseminada. S. brasiliensis, espécie envolvida na quase totalidade dos casos desta região, pode ter incremento em sua virulência ao longo dos anos, favorecendo sua sobrevida e dificultando a cura do paciente / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus previously described as a single species, Sporothrix schenckii , now understood as a complex of different species of clinical interest. The metropolitan region of Rio de Janeiro is an endemic area of zoonotic sporotrichosis transmitted by cat s since 1998. Clinically , it has been characterized by un usual clinical presentations , manifestations of hypersensitivity and a n increasing number of patients coinfected with HIV. This study aimed to evaluate epidemiological, mycological, clinical and therapeutic factors associated with different clinical aspect s of patients with sporotrichosis. The hospital database of patient records and the stock strains of the laboratory of mycology of Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC) were used , as well as techniques for genotypic identification and classic al laboratory tools for determination of virulence and phenotype of the fungal isolates. It was found that acute dacryocystitis (4 cases between 2008 and 2010) is a manifestation of sporotrichosis which evolves with complications (fistula and chronic dacry ocystitis) requiring surgical repair. Sweet syndrome was observed in three patients until 2010 and should be incorporated as a manifestation of hypersensitivity of sporotrichosis. The 12 pregnant women with sporotrichosis between 2005 and 2010 presented a good evolution with l ocal thermotherapy. In the clinical and therapeutical analysis of the 21 cases of sporotrichosis and HIV, the clinical forms varied with the immunological status of the patients , and a good therapeutic response was seen in 81% of the c ases. T he diagnostic investigation of systemic disease in immunosuppressed patients (CD4 + < 200 cells/ μ L) is required. In the historical series evaluated , with 48 patients with sporotrichosis and HIV , and 3,570 with sporotrichosis, it was seen that patient s with HIV evolved with more disseminated pictures , hospitalization and death. In the genotypic evaluation of 50 isolates, Sporothrix brasiliensis was associated with unusual aspects and cases of hypersensitivity. The study of five isolates collected over five years in a patient with disseminated sporotrichosis demonstrated increased virulence of the isolate obtained after 11 years of infection (5 years of treatment at IPEC) , when Galleria mellonella was used as an in vivo model , suggesting an adaptation of the fungus to the host within this period . In conclusion, sporotrichosis in Rio de Janeiro is related to the emergence of rare and novel aspects . On the same way, it has affect ed HIV - infect ed patients , with morbi mortality , and should be incorporated as an opportunistic infection on its disseminated form. S. brasiliensis , the species involved in almost all cases of this region , may have an increase in virulence over the years, favoring its survival and hindering the healing of the patient.

Submitted by JOÃO PAULO BURIAN null (joaopauloburian@gmail.com) on 2016-04-07T19:17:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Alho.pdf: 1147027 bytes, checksum: 14de6564bb0a0f0b37cd02405a0bd734 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Por favor, corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-04-08T12:38:59Z (GMT) / Submitted by JOÃO PAULO BURIAN null (joaopauloburian@gmail.com) on 2016-04-21T18:18:31Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Alho.docx: 1520845 bytes, checksum: 54391a3f711bcf02c685c8a8cdf13400 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-02T16:15:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 burian_jp_me_arafcf.pdf: 1339974 bytes, checksum: 93eb88dfc1c01bdf44ebb0d72bd5bfe8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T16:15:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 burian_jp_me_arafcf.pdf: 1339974 bytes, checksum: 93eb88dfc1c01bdf44ebb0d72bd5bfe8 (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O alho (Allium sativum L.) é cultivado em todo o mundo como hortaliça condimentar e medicinal desde 3.000 a. C. A aliina (composto majoritário) e a alinase permanecem em compartimentos separados nos bulbilhos de alho, e somente quando cortados ou triturados, a aliina é convertida em alicina pela ação da alinase. A alicina é o principal componente do alho, sendo atribuída a ela a maior parte das suas atividades biológicas, dentre elas as ações bactericida, antifúngica e antiviral. Porém, outros compostos do alho apresentam atividade antioxidante, hipocolesterolemiante, vasodilatadora, ação protetora contra diversos tipos de câncer e imunomoduladora. Ante a invasão de patógenos, o sistema imunológico desencadeia respostas que envolvem células como macrófagos e linfócitos. Essa complexa interação entre células é coordenada pela liberação de citocinas e outros mediadores. A nutrição tem papel relevante na modulação da resposta imune e inflamatória em diferentes tipos de doenças. As infecções por fungos são causas importantes de morbidade e mortalidade no homem principalmente em indivíduos imunossuprimidos. O Sporothrix schenckii, agente causal da esporotricose (micose subcutânea mais comum na América Latina), é fungo dimórfico, de vida saprofítica no solo ou em vegetais, infectando homens e os animais principalmente através de lesões e arranhões na pele. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do consumo de alho na imunomodulação de camundongos Swiss saudáveis e infectados por S. schenckii, a partir do estado funcional dos macrófagos peritoneais desses animais quanto à produção de óxido nítrico e das citocinas (IL-1β, IL-10 e IL-12) e avaliar o potencial antifúngico do alho frente ao S. schenckii por meio de teste de concentração inibitória mínima e unidades formadoras de colônia. Os resultados demonstraram que o alho apresenta potencial antifúngico frente S. schenckii. A administração oral de extratos de alho influencia a liberação de citocinas por macrófagos ex vivo, o consumo regular apresenta efeito anti-inflamatório em animais sadios, e seu uso agudo pode gerar uma resposta inflamatória. Camundongos que consumiram alho responderam de forma mais efetiva ao combate da infecção. / Garlic (Allium sativum L.) is grown all over the world as seasoning and medicinal food since 3,000 a. C. The aliin (major compound) and alliinase remain in separate compartments in intact garlic clove, and when the garlic is cut or crushed, the alliin is converted to allicin by the action of alliinase. Allicin is the main component of garlic is attributed to it most of the biological activities of garlic, including the bactericide, antifungal and antiviral action. However, other garlic compounds have antioxidant activity, hypocholesterolemic and vasodilating activities, guard action against many types of cancer and immunomodulatory. At the invasion of pathogens, the immune system triggers responses involving cells such as macrophages and lymphocytes. This complex interaction between cells is coordinated by the release of cytokines and other mediators. Nutrition plays an important role in modulating the immune and inflammatory response in different types of diseases. Fungal infections are significant reasons of human morbidity and mortality mainly in immunocompromised people. The Sporothrix schenckii, the causal agent of sporotrichosis (most common subcutaneous mycosis in Latin America), is dimorphic fungus, of saprophytic life in soil or in plant that infects humans and animals mainly through skin injuries and scratches. The aim of this study was to evaluate the influence of garlic consumption in immunomodulation of Swiss healthy and infected mice by S. schenckii from the functioning of peritoneal macrophages of the animals and the production of nitric oxide and cytokines (IL 1β, IL-10 and IL-12) and evaluating the antifungal potential of garlic against S. schenckii by minimum inhibitory concentration test and colony forming units. The results show that garlic has potential antifungal front S. schenckii. Oral administration of garlic extracts influences the releasing of cytokines by macrophages ex vivo, regular consumption has anti-inflammatory effects in healthy animals, and its use can generate an acute inflammatory response. Mices that consumed garlic responded more effectively to combat the infection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-01Bitstream added on 2014-06-13T20:43:39Z : No. of bitstreams: 1 maia_dcg_dr_arafcf.pdf: 644698 bytes, checksum: c954f27183fc2d6dfe3edc5c958d5f3c (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A esporotricose é uma infecção micótica provocada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, causando em geral lesões subcutâneas nodulares e/ou ulcerativas que se proliferam via linfática, porém em raros casos pode provocar infecção sistêmica. O óxido nítrico (NO) é sintetizado através da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) em macrófagos ativados. Por outro lado, as citocinas exercem papel importante em todo o processo de ativação das células T e pode influenciar diretamente na resposta imunológica, juntamente com os compostos intermediários do nitrogênio. Para melhor avaliar a inter-relação entre as respostas inata, adaptativa, celular e humoral esse trabalho analisou vários mediadores como a iNOS (arginina marcada por trício), NO (teste de Griess), citocinas ( teste imunoenzimático), transformação linfocitária (incorporação da timidina triciada) e detecção de IgG (teste imunoenzimático). Observou-se que o NO produzido a partir da iNOS causou uma imunossupressão entre a quarta e sexta semana de infecção, levando a uma depressão na produção de algumas citocinas como a IL-1b e o TNF-a, além de inibir a proliferação das células T nas mesmas semanas. A IL-12 como o IFN-g são importantes mediadores da resposta imune celular tipo Th1 e em conjunto com a IL-2 parecem ser produzidos como uma tentativa de proteção do hospedeiro contra a doença. Por outro lado, a IL-10 parece estar relacionada com a suscetibilidade à infecção. Para reverter esse quadro da doença fúngica a IL-6 e a IL-4 podem vir a induzir uma resposta humoral verificada pela produção de anticorpos nas semanas finais da infecção e por fim, levar a remissão da infecção experimental por S. schenckii. / Sporotrichosis is a micotic infection desease caused by dimorphic fungus Sporothrix schenckii, causing in general subcutaneous nodulares and/or ulcerative lesions that proliferate through lymphatic vessels, however in rare cases sistêmic can provoke infection. The nitric oxide (NO) is synthezed through of the enzyme nitric oxide sintase induzível (iNOS) in activated macrophages. On the other hand, the cytokines exert important role in all the process of activation of cells T and can to influence directly in the immunological response, together with intermediate composites of nitrogen. The evaluation between the innate, adaptativa, cellular and humoral response this work were analyzed several mediators as iNOS (arginine H3), NO (Griess reagent), cytokines (immunoenzimatic assay), lymphatic transformation (incorporation of timidine- H3) and detection of IgG (immunoenzimatic assay). We observed that NO the produced from iNOS caused an immunossupression between the fourth and sixth week of infection leading to a depression in the production of some cytokines as the IL-1b and TNF-a, besides inhibiting the proliferation of cells T in the same weeks. The IL-12 as the IFN-g is important mediators of the cellular Th1 response and together with IL-2 seem to being produced as a protection host attempt against the disease. On the other hand, the IL-10 seems to be related with the susceptibility to the infection. To revert this immunological response IL-6 and IL-4 can come to induce an humoral response verified by the antibodies production in the infection final weeks and finally, lead the experimental infection remission by S. schenckii.

Considerando a importância do felino doméstico nos relatos zoonóticos da esporotricose, assim como os problemas relacionados a terapêutica da micose nessa espécie, o estudo objetiva avaliar a atividade in vitro da terbinafina e itraconazol frente ao S. schenckii; estudar a ação desses fármacos no tratamento da esporotricose sistêmica experimental; analisar as enzimas hepáticas e hemograma dos animais submetidos ao tratamento antifúngico; estudar as possíveis alterações macroscópicas nos animais inoculados com S. schenckii assim como realizar o retroisolamento do agente. Para o teste in vitro, foram utilizados 10 isolados de S. schenckii (seis felinos, três humanos e um de cão), os quais foram avaliados quanto a suscetibilidade frente aos fármacos através da técnica de microdiluição em caldo de acordo com o CLSI para as fases leveduriforme e filamentosa do agente. A leitura da CIM foi visual, correspondendo à menor concentração do antifúngico em que não houve crescimento visível do S. schenckii quando comparado ao controle positivo. O teste in vivo, foi realizado através da inoculação pelas vias intraperitonial e veia lateral da cauda de células fúngicas (2x103 cél/mL) de dois isolados de S. schenckii (felino e canino) em 120 ratos norvergicus, divididos em quatro grupos: tratado terbinafina (250mg/kg) e itraconazol (100mg/kg); diluente terbinafina (250mg/kg de solução de água destilada com 5% de DMSO e 1% de Tween 20) e itraconazol (100mg/kg de água destilada estéril), sendo administrados através de sondagem oral uma vez ao dia, durante 30 dias. Paralelamente foram realizados hemogramas e avaliação das enzimas hepáticas (ALT e FA), assim como o acompanhamento da evolução clínica e análise histopatológica de todos animais experimentais. No final do período experimental os animais foram necropsiados e realizado análise macroscópica com a coleta dos órgãos para a obtenção do retroisolamento do S. schenckii. A CIM para a terbinafina obtida entre todos os isolados na fase leveduriforme de esporotricose felina variaram de 0,055μg/mL a 0,109μg/mL, enquanto que para os isolados humanos e de cão foi de 0,055μg/ml. Para o itraconazol, a CIM frente aos isolados de esporotricose felina foi de 0,875μg/mL a 1,75μg/mL, já para os casos humanos foi de 0,219μg/mL e para o isolado de cão de 1,75μg/mL. Para a fase filamentosa do agente foi observada uma CIM para a terbinafina entre os isolados de felinos de 0,875 μg/mL, enquanto que os isolados humanos e de cão a CIM foi de 0,219μg/mL. Para o itraconazol os isolados felinos resultaram numa CIM de 3,5μg/mL, já nos isolados de esporotricose humana e em cão a CIM foi de 1,75μg/mL. Quanto ao estudo in vivo, os animais tratados com terbinafina e itraconazol resultaram em menor freqüência de alterações macroscópicas assim como na obtenção do retroisolamento do agente em relação aos grupos controle. Não foi detectada alterações nas enzimas hepáticas, hemograma e nas avaliações macro e histopatológicas dos animais submetidos ao tratamento antifúngico. Com esses resultados conclui-se que a terbinafina e itraconazol possuem atividade in vitro frente ao S. schenckii e que as doses estudadas dos fármacos são eficazes no tratamento da esporotricose experimental sistêmica, assim como não produzem alterações das enzimas hepáticas avaliadas e do hemograma. / Considering the importance of the domestic feline in the zoonotic reports of the esporotrichosis, as well as the related problems the therapeutics of the mycosis in that species, the study objective was evaluate the activity in vitro of terbinafine and itraconazole against to S. schenckii; study the activity of those drugs in the treatment of the experimental systemic esporotrichosis; analyze the hepatic enzymes and blood count of the animals submitted to the antifungal treatment; study the possible macroscopic alterations in the animals inoculated with S. schenckii as well as realized the agent retroisolament. For the test in vitro, 10 isolated of S. schenckii were used (six felines, three humans and one canine), which were performed as the susceptibility against to the drugs through the microdiluição technique in broth in accordance with the CLSI for the phases yeast and mycelial of the agent. The reading of CIM was visual, corresponding to smallest concentration of the antifungal in that there was not visible growth of S. schenckii when compared to the positive control. The test in vivo, was performed through the of the inoculation intraperitonial and lateral vein of the tail of fungal cells (2x103 cél/mL) of two isolated of S. schenckii (feline and canine) in 120 mice norvergicus, divided in four groups: treaty terbinafine (250mg/kg) and itraconazole (100mg/kg); diluent terbinafine (250mg/kg of solution of water distilled with 5% of DMSO and 1% of Tween 20) and itraconazol (100mg/kg of water distilled sterile), being administered by gavage once a day, for 30 days. Parallel blood counts and evaluation of the hepatic enzymes were accomplished (ALT and F.A), as well as the accompaniment of the clinical evolution and analysis histopathologic of all animal experimental. In the end of the experimental period the animals were autopsied and performed macroscopic analysis with the collection of the organs for the obtaining of the detected S. schenckii growth. CIM for the terbinafine obtained among all the isolated in the phase yeast of feline esporotrichosis oscillated between 0,055μg/mL the 0,109μg/mL, while for the isolated humans and canine was of 0,055μg/ml. For the itraconazole, the CIM against of the isolated of feline esporotrichosis was from 0,875μg/mL to 1,75μg/mL, for the human cases it went of 0,219μg/mL and for the isolated canine of 1,75μg/mL. For the mycelial phase a CIM was observed for the terbinafine among the isolated of felines of 0,875 μg/mL, while the isolated humans and canine CIM was of 0,219μg/mL. For the itraconazole the isolated felines resulted in a CIM 3,5μg/mL, in the isolated of human esporotrichosis and canine CIM was of 1,75μg/mL. As for the study in vivo, the animals treaties with terbinafine and itraconazole resulted in smaller frequency of macroscopic alterations as well as in the obtaining of the detected agent growth in relation to the groups control. It was not detected alterations in the hepatic enzymes, blood count and in the evaluations macro and histopathologic of the animals submitted to the antifungal treatment. With those results we are to report that the terbinafine and itraconazol apresent activity in vitro against to S. schenckii and that the studied doses of the drugs are effective in the treatment of the systemic experimental esporotrichosis, as well as they don't produce alterations of the appraised hepatic enzymes and blood count.

Orientador: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: A esporotricose é uma micose de distribuição mundial, decorrente da implantação traumática do fungo Sporothrix. Atualmente, é considerada uma zoonose emergente, de impactos à saúde pública, sendo os gatos os principais animais afetados e associados à transmissão aos humanos. O estudo objetivou identificar casos de esporotricose em gatos no município de São José do Rio Preto/SP, com identificação da espécie circulante, além de analisar os fatores clínicos e epidemiológicos, e de suscetibilidade aos antifúngicos. Amostras de secreções e/ou biópsias de animais com lesões e sintomas da doença foram analisadas por técnicas micológicas, fenotípicas e moleculares de identificação do fungo. O método de microdiluição em caldo foi utilizado para identificar o perfil de suscetibilidade aos antifúngicos. Os aspectos clínicos e epidemiológicos foram avaliados com base em informações contidas nas fichas de investigação. No período estudado, foram coletadas 245 amostras de gatos sintomáticos à esporotricose, sendo o fungo Sporothrix isolado em 189 (77, 2%) amostras. Na análise fenotípica, para todos os isolados, foi encontrado padrão morfofisiológico compatível com a espécie S. brasiliensis, sendo esse achado confirmado por técnica molecular. Na análise de suscetibilidade aos antifúngicos, em geral, a terbinafina foi o fármaco com melhor desempenho de atividade antifúngica, seguido pelo cetoconazol e itraconazol. A população de felinos domésticos analisada era composta, em sua maioria, por ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a worldwide mycosis, resulting from the traumatic implantation of the fungus Sporothrix. It is currently considered an emerging zoonosis with public health impact, and cats are the main animals affected and associated with transmission to humans. The aim of this study was to assess the cases of feline sporotrichosis in São José do Rio Preto, Brazil, to identify the circulating species, to analyze clinical and epidemiological factors, and evaluate the susceptibility to antifungal drugs. Secretion and/or biopsies samples from animals with lesions and sporotrichosis symptoms were analyzed by mycological procedures, and the isolates were identified by phenotypic and molecular techniques. The broth microdilution method was used to identify the antifungal susceptibility profiles. Clinical and epidemiological aspects were evaluated based on information contained in the research sheets. During the studied period, 245 samples of cats symptomatics of sporotrichosis were collected, and Sporothrix was isolated in 189 (77.2%) samples. According to the phenotypic analysis, all isolates exhibited the morphophysiological pattern of S. brasiliensis, this finding was confirmed by molecular technique. Regarding the antifungal susceptibility testing, terbinafine was, in general, the antifungal which exhibited the best activity, followed by ketoconazole and itraconazole. The domestic feline population analyzed was mostly male (180; 73.5%), adults (236; 96.3%), street (131; 53.5%... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A esporotricose caracteriza-se como uma micose subcutânea causada por fungos dimórficos do gênero Sporothrix, capazes de acometer o homem e uma grande variedade de animais, dentre eles os felinos. A princípio, Sporothrix schenckii era a única espécie conhecida como responsável pela esporotricose. Após estudos genotípicos e fenotípicos de isolados ambientais, clínicos humanos e animais, verificou-se alta variabilidade entre os isolados e estabeleceu-se a existência de um Complexo Sporothrix. Dentro deste, a maior causadora de surtos epidêmicos, justificada por uma maior virulência e capacidade de evasão da resposta imune, é a espécie Sporothrix brasiliensis. Nesse sentido, dada a ausência de estudos direcionados a está espécie, objetivou-se avaliar a importância de receptores Toll like-2 (TLR-2) e Toll like-4 (TLR-4) na infecção por S. brasiliensis. Além disso, utilizando técnicas de proteômica, procurou-se elucidar proteínas diferencialmente expressas em S. brasiliensis quando comparado à espécie S. schenckii. Para avaliação da resposta imune utilizaram-se modelos in vitro e in vivo de infecção, e para a investigação das proteínas diferencialmente expressas, utilizou-se a técnica de proteômica Bottom-up. A investigação da resposta imune in vitro mostrou a dependência dos receptores TLR-2 e TLR-4 no desencadeamento da resposta imune. Os ensaios in vivo mostraram a importância desses receptores no controle da infecção e dependência dos mesmos na produção de citocinas, principalmente nos primeiros 14 dias de infecção. Na ausência do receptor TLR-2, houve a polarização de resposta Th17 na tentativa de controle da infecção. Quando avaliadas as diferenças entre as espécies S. brasiliensis e S. schenckii, em termos de proteínas expressas, verificou-se que S. brasiliensis expressa diferencialmente 60 proteínas. Dentre essas, 9 são relatadas na literatura, como importantes na virulência e escape imunológico dos principais fungos de importância médica. Os resultados encontrados no presente trabalho permitem concluir que reconhecimento de S. brasiliensis é dependente dos receptores TLR-2 e TLR-4. Estudos que investiguem a utilização de outras vias de sinalização como mecanismos compensatórios, bem como, o sinergismo desses receptores no contexto da infecção por S. brasiliensis são fundamentais na compreensão da fisiopatologia dessa doença. No que tange a caracterização proteica, estudos com mutantes para cada uma das proteínas descritas nesse trabalho devem ser avaliados. / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by dimorphic fungi of the genus Sporothrix that affects humans and animals, predominantelly felines. Inicially, Sporothrix schenckii was the only specie associated to sporotrichosis. However, after genotypic and phenotypic studies of human and animal clinical isolates, a high variability among the isolates was found and was concluded the existence of a complex: the Sporothrix Complex. Inside the Sporothrix complex, the major cause of epidemic outbreaks, justified by a greater virulence and ability to evade the immune system, is Sporothrix brasiliensis. Concerning this, the absence of studies directed to this specific specie, the aim was to evaluate the importance of Toll like receptor-2 (TLR-2) and Toll like receptor-4 (TLR-4) during S. brasiliensis infection. In addition, was look using proteomics techniques, the proteins differentially expressed in S. brasiliensis when compared to S. schenckii. To evaluate the immune response, in vitro and in vivo tecniques were used, and for the investigation of differentially expressed proteins, the Bottom-up proteomics technique was used. The investigation of the in vitro immune response showed the dependence of TLR-2 and TLR-4 receptors on phagocytosis and the production of inflammatory mediators, such as cytokines and NO. In vivo assays showed the importance of these receptors to control the infection and their dependence on cytokine production during the first 14 days of infection. In the absence of the TLR-2 receptor, the Th17 response was polarized in an attempt to control the infection. Evaluating the differences between S. brasiliensis and S. schenckii, in terms of expressed proteins, it was verified that S. brasiliensis differentially expressed 60 proteins. Among these, 9 are reported in the literature, as important in the virulence and immune evasion among the most important medical fungi. The results found in the present study allow to conclude that S. brasiliensis recognition is dependent on TLR-2 and TLR-4 receptors. Studies investigating the use of other signaling pathways as compensatory mechanisms, as well as the synergism of these receptors in the context of S. brasiliensis infection, are fundamental to understand the pathophysiology of this disease. Regarding the protein characterization, studies with mutants for each of the proteins described in this work should be evaluated.