Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T03:39:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_LeonardoRamosNicolauda_M.pdf: 1301168 bytes, checksum: d04e8ef75b775c4dc82df39bb2b4cdd8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A febre aftosa é uma patologia viral, infecto-contagiosa, caracterizada por um cenário repleto de incertezas que lhe são inerentes, resultantes da influência de fatores socioeconômicos e ambientais relacionados ao processo de transmissão, que pode ocorrer por via direta e indireta. Em epidemiologia, grande parte das incertezas são tratadas ou pela Teoria das Probabilidades ou pela Teoria de Conjuntos Fuzzy, a depender da natureza, seja ela oriunda da aleatoriedade ou de verdade parcial. O uso integrado de modelos clássicos, particularmente as Equações Diferenciais Parciais (EDP), modelos fuzzy e probabilísticos no tratamento das duas classes de incertezas ainda é muito incipiente. Com a intenção de contribuir para o aumento dos estudos nessa área, propõe-se um modelo integrado, envolvendo EDP, lógica fuzzy e métodos probabilísticos, a fim de estudar a dinâmica espacial e temporal de fenômenos epidemiológicos, cujas incertezas são importantes para sua evolução. Para tanto, tomou-se como objeto de estudo a febre aftosa em bovinos e elaborou-se um modelo SIR envolvendo EDP para estudar sua evolução espaço-temporal com parâmetros de difusão e transmissão incertos. Esses foram estimados fazendo-se uso de Sistemas Baseados em Regras Fuzzy (SBRF). As variáveis lingüísticas utilizadas nos SBRF apresentaram incertezas de natureza aleatória, as quais foram tratadas por modelos estocásticos. Na implementação computacional, fez-se o acoplamento dos métodos de elementos finitos para a discretização espacial, e Cranck-Nicolson para a temporal, toolbox fuzzy para os modelos fuzzy e Monte Carlo para os modelos estocásticos, todos em um mesmo algoritmo, construído nos ambientes Matlab e Fortran. / Abstract: The foot-and-mouth disease is a viral, infectum contagious pathology, characterized for a scene full of inherent uncertainties, resultants of the influence of social, economic and environmental factors related to the transmission process, that can occur for direct and indirect means. In Epidemiology, great part of the uncertainties are treated either by the Theory of Probabilities or by Fuzzy Logic Theory, depending on the nature, in accordance with the type of uncertainty which can be either deriving of the randomness or coming from the subjectivity. The integrated use of models involving Partial Differential Equations (PDE), Fuzzy Theory and Probabilistic in the treatment of the two categories of uncertainties, simultaneously, is still very incipient. Aiming to contribute to the growth of existing studies in this area, we propose an integrated model, involving PDE Models, Fuzzy Models and Stochastic Models, in order to study the space and secular dynamics of these epidemiological phenomena, whose uncertainties are important for their evolution. To do so, the foot-and-mouth disease in bovines was taken overcome as our study's object and we elaborated a SIR model involving EDP to study its space-weather evolution with uncertain parameters of diffusion and transmission. Due the uncertainties these parameters had been estimated using Rule-Based Fuzzy Systems (RBFS). The linguistic variables of the RBFSs presented uncertainties of random nature, which were treated by random models. For computational results, we coupling several models, using the method of finite elements for the space discretization and Cranck-Nicolson for time discretization, toolbox fuzzy for Fuzzy Models and Mount Carlo for Random Models, all in the same algorithm constructed in the environments Matlab and Fortran. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T10:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_CandidaLuizaTonizzade_D.pdf: 7808064 bytes, checksum: e7eb0b2d08d94a0d2baad550d0683e29 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A distrofia muscular de Duchenne é caracterizada pela falta de distrofina, proteína estrutural do sarcolema que promove a sua estabilização. Em ausência de distrofina, ocorre aumento da permeabilidade ao cálcio e conseqüente mionecrose. No camundongo distrófico mdx, os músculos extra-oculares (EOM) não apresentam mionecrose, sendo protegidos da falta de distrofina. Este fato os torna importantes para a maior compreensão dos mecanismos da patogênese da distrofia muscular. No presente trabalho verificamos se alterações nos níveis das proteínas calsequestrina e SERCA1, reguladoras do cálcio, e ?-distroglicana (?-DG), pertencente ao complexo distrofina-glicoproteínas, podem se relacionar a proteção contra a mionecrose dos EOM de animais distróficos. Utilizamos as técnicas de immunoblotting e imunofluorescência e observamos que os EOM de animais distróficos apresentaram aumento significativo no conteúdo das proteínas calsequestrina e SERCA1, bem como aumento significativo da ?-distroglicana. Músculos distróficos não protegidos (tibial, gastrocnêmio, sóleo, esternomastóide e diafragma) apresentaram diminuição no conteúdo destas proteínas em relação aos controles. Não foram observadas alterações na localização da utrofina, decorrente da falta da distrofina. Sugerimos que o aumento da ?-DG nos EOM de animais distróficos possa auxiliar na integridade do sarcolema e, conseqüentemente, na proteção das fibras musculares. Já o aumento das proteínas ligadas ao Ca2+ nos EOM mdx poderia ajudar na rápida remoção do excesso de cálcio, resultando na manutenção da sua homeostase e proteção à mionecrose. Os resultados obtidos nos demais músculos distróficos confirmam que distúrbios no tamponamento do cálcio podem estar envolvidos na distrofia muscular. / Abstract: Duchenne muscular dystrophy is one of the most common hereditary diseases. Abnormal calcium ion handling renders dystrophic muscle fibers more susceptible to necrosis. In the mdx mice, extraocular muscles (EOM) are protected and do not undergo myonecrosis. We investigated whether this protection is related to an increased expression of calcium-binding proteins, which may protect against the elevated calcium levels seen in dystrophic fibers. The expression of SERCA1 and calsequestrin was examined in EOM and in non-spared limb, diaphragm and sternomastoid muscles of control and mdx mice using immunofluorescence and immunoblotting. Dystrophic EOM presented a significant increase in the proteins studied, and a significant increase in ?-dystroglycan expression. These proteins were reduced in the non-spared mdx muscles. The were no changes in utrophin distribution. The increase of Ca2+-handling proteins in dystrophic EOM may permit a better maintenance of calcium homeostasis, with the consequent absence of myonecrosis. The results further support the concept that abnormal Ca2+-handling is involved in dystrophinopaties. / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alexandre_EduardoCosta_M.pdf: 1619659 bytes, checksum: 6844ca6a5644be1025879f062b675420 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Estudos clínicos vêm relacionando a síndrome metabólica / obesidade a sintomas do trato urinário inferior, também referidos como LUTS (da sigla Lower Urinary Tract Symptoms), os quais compreendem diversas queixas relacionadas a problemas de armazenamento e/ou esvaziamento da bexiga urinária. Estes sintomas acometem milhares de pessoas em todo o mundo, estando relacionados à frequência, urgência e noctúria, e frequentemente associados à bexiga hiperativa, que pode evoluir para incontinência urinária. O trato urinário inferior (TUI) é composto basicamente pela bexiga e uretra. A dinâmica vesicoesfincteriana compreende duas fases: Fase de armazenamento e Fase de eliminação. Estes processos envolvem uma sincronia de ações do músculo liso detrusor e uretra para um correto ciclo miccional. A despeito dos estudos epidemiológicos apontarem para uma correlação positiva entre síndrome metabólica/obesidade e LUTS, os mecanismos fisiopatológicos envolvidos permanecem pouco compreendidos. Portando, utilizando um modelo animal de obesidade associada à bexiga hiperativa, procuramos analisar as alterações causadas pela obesidade no trato urinário inferior antes e após o tratamento com o ativador da GCs, BAY 60-2770. O BAY 60-2770 faz parte de uma nova classe de drogas, denominadas ativadores da GCs. Essas drogas são capazes de ativar a GCs de maneira independente do NO e/ou grupamento heme, e apresentam uma potência aumentada quando o ferro se encontra em sua forma oxidada (Fe3+). Especificamente, realizamos os seguintes experimentos em camundongos controles e obesos: 1) cistometria; 2) curvas concentração-resposta a diferentes agentes contráteis e relaxantes na bexiga e/ou uretra; 3) determinação dos níveis de GMPc; 4) expressão das subunidades de ?1 e/ou ?1 da GCs; 5) medida das espécies reativas de oxigênio. O camundongo obeso apresentou um padrão miccional irregular caracterizado pelo aumento do número de contrações miccionais e de contrações involuntárias, alterações normalizadas após o tratamento com BAY 60-2770. Na bexiga, o carbacol, KCl e CaCl2 produziram contrações de forma concentração-dependente em tiras isoladas de bexiga, contrações que foram maiores em animais obesos quando comparado aos controles. O tratamento com BAY 60-2770 normalizou as contrações da bexiga em animais obesos. Um aumento de 78% nas espécies reativas de oxigênio foi observado em bexigas de animais obesos, resultado não alterado pelo BAY 60-2770. O tratamento com BAY 60-2770 gerou um aumento de 10 vezes nos níveis de GMPc em bexiga de animais obesos, sem afetar a produção desse nucleotídeo cíclico nos animais controles. A expressão protéica das subunidades ?1 e ?1 da GCs estava 40% diminuída em bexiga de animais obesos, esse resultado foi normalizado após o tratamento com BAY 60-2770. Em uretra, relaxamentos induzidos por NO (nitrito de sódio acidificado), doadores de NO (s-nitrosoglutationa e nitroglicerina) e BAY 41-2272 (estimulador da GCs) se apresentaram reduzidos em obeso quando comparado ao grupo controle. O relaxamento uretral por BAY 60-2770 apresentou um padrão diferente e foi 43% maior em camundongos obesos, resultado acompanhado pelo aumento nos níveis de GMPc. A oxidação da GCs potencializou o relaxamento uretral induzido por BAY 60-2770. O tratamento crônico reverteu completamente as disfunções uretrais dos animais obesos. A produção de espécies reativas de oxigênio estava aumentada e a expressão da subunidade ?1 da GCs diminuída na uretra do animal obeso, ambas as alterações foram revertidas pelo tratamento com BAY 60-2770. Concluímos então que as contrações aumentadas da bexiga e a disfunção no relaxamento uretral estão associadas com a produção de espécies reativas de oxigênio e "downregulation" da sinalização GCs ¿ GMPc. A prevenção da degradação da GCs pelo tratamento crônico com BAY 60-2770 melhora as disfunções miccionais de camundongos obesos. Portanto, o BAY 60-2770 pode ser de grande valor terapêutico no tratamento de complicações urológicas associadas à obesidade / Abstract: Clinical studies have shown an association between metabolic syndrome / obesity and lower urinary tract symptoms (LUTS), name given to a group of symptoms affecting the bladder during urine storage and voiding. These symptoms affect thousands of people throughout the world and are related with frequency, urgency, nocturia and often associated with overactive bladder (OAB), which may result in urinary incontinence. The low urinary tract consists of the bladder and urethra. Vesical sphincter dynamics is divided into two phases: storage and voiding phase. Each phase requires a coordinated interaction between urethra and bladder to allow a healthy urinary function. Despite epidemiological studies suggest a positive correlation between metabolic syndrome / obesity and LUTS, its pathophysiological mechanisms are still poorly studied. Therefore, using an animal model of obesity associated OAB we studied low urinary tract before and after treatment with the sGC activator BAY 60-2770. BAY 60-2770 is a novel class of drugs, classified as soluble guanylyl cyclase (sGC) activators. This class of drugs acts by NO- and heme-independent mechanisms and present a higher potency to oxidated form of sGC heme iron (Fe3+). More specifically we conducted the fallowing experiments: 1) cystomettry; 2) concentration ¿ response curves to contractile and relaxing agents in bladder and/or urethra; 3) determination of cGMP levels; 4) evaluated expressions of ?1 and/or ?1 sGC subunits; 5) measurement of reactive oxygen species. Obese mice displayed an irregular micturition pattern characterized by significant increases in voiding and non-voiding contractions, both of wich were normalized by BAY 60-2770 treatment. In the bladder, carbachol, KCl and CaCl2 produced concentration-dependent contractions in isolated bladder strips that were markedly greater in obese compared with control group. BAY 60-2770 treatment normalized the bladder contractions in obese group. A 78% increase in reactive-oxygen species (ROS) generation in bladder tissues of obese mice was observed, and that was unaffected by BAY 60-2770. Treatment with BAY 60-2770 generated a 10-fold increase in GMPc levels in bladder from obese mice, without affecting this nucleotide level in lean group. Protein expression of ?1 and ?1 subunits of sGC was decreased by 40% in bladder tissues of obese animals, which was restored by BAY 60-2770. In the urethra, relaxations induced by NO (acidified sodium nitrite), NO-donors (S-nitrosolutathione and glyceryl trinitrate) and BAY 41-2272 (sGC stimulator) were markedly reduced in obese compared with control mice. As opposed, urethral relaxations induced by BAY 60-2770 were 43% greater in obese mice, which was accompanied by increases in cGMP levels. Oxidation of sGC with potentiated BAY 60-2770-induced USM responses in control group. Long-term oral BAY 60-2770 administration fully prevented the impairment of urethral relaxations in obese mice. Reactive-oxygen species (ROS) production was enhanced, whereas protein expression of ?1 sGC subunit was reduced in USM from obese mice, both of which were restored by BAY 60-2770 treatment. In conclusion, enhanced bladder contractions and impaired urethral relaxations in obese mice are associated with ROS generation and downregulation of sGC- cGMP signaling. Prevention of sGC degradation by long-term BAY 60-2770 administration ameliorates the micturition dysfunction in obese mice. Therefore, BAY 60-2770 could be of great therapeutic value in the treatment of urological complications associated with obesity / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T08:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perez_PaulaSpanopoulos_M.pdf: 4055081 bytes, checksum: 1297b13fc85bb6918c3785c93466dff5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T16:26:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Colomeu_TalitaCristina_M.pdf: 1606110 bytes, checksum: ed843e2069440cf659e4ab7cc6c4c21f (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A linhagem NOD (non obese diabetic) é utilizada como modelo experimental de DM-1, pois desenvolve espontaneamente a doença com marcante similaridade ao observado em humanos. Vários são os mecanismos propostos para ruptura da tolerância imunológica no DM-1, como a predisposição genética do indivíduo, juntamente com fatores ambientais, tais como estresse e alimentação, parecem favorecer o desencadeamento de mecanismos auto imunes. Nos últimos anos o interesse por alimentos fitoterápicos pelos órgãos governamentais, com a finalidade de auxiliar no tratamento de doenças vem aumentando. A espécie Passiflora sp., é descrita pela farmacopeia Brasileira como fitoterápico e seu uso na medicina popular está relacionado ao tratamento de diversas doenças. Estudos sobre as propriedades das folhas do Passiflora alata Curtis no diabetes mellitus são escassos. Neste contexto, investigamos quais os melhores solventes (água, etanol e metanol/acetona) para extração de compostos bioativos da folha de P.alata, a atividade antioxidante dos solventes pelas técnicas DPPH, FRAP, ABTS e ORAC, fenóis totais, composição centesimal e investigação de quatro compostos fenólicos (vitexina, isovitexina e isoorientina) nas folhas. Além disso, avaliamos as propriedades do consumo crônico do extrato aquoso das folhas de P.alata sobre a incidência do DM-1, a insulite, os níveis de GSH no fígado/rim, a insulina sérica nos camundongos NOD e o estresse oxidativo, a apoptose e a imunofluorescência de infiltrados CD4+,CD8+ e CD11+ nas ilhotas pancreáticas desses animais. Nossos resultados sugerem que o extrato aquoso em comparação com o metanol/acetona e etanólico, apresenta atividade antioxidante e fenóis totais superiores e que seu consumo crônico é capaz de diminuir o índice de infiltrado inflamatório e consequentemente a expressão do diabetes, ajudar a manter os níveis de GSH no fígado/rim e reduzir o estresse oxidativo e apoptose nos camundongos NOD / Abstract: The strain of NOD mice (non obese diabetic) is common used for study with type 1 diabetes mellitus, because develops spontaneously the disease with strong similarity to the observed in humans. Several mechanisms are proposed to break immune tolerance in DM-1, such as genetic predisposition, environmental factors, as infections and dietetic, seem to favor the triggering of autoimmune mechanisms. In recent years the interest in herbal foods in order to prevent diseases is increasing in the population. The species Passiflora sp. is described by Brazilian Pharmacopoeia as herbal medicine and in folk medicine is related to the treatment of various diseases. Studies about properties of leaves of Passiflora alata Curtis related with diabetes mellitus are scarce. In this context, we investigate what the best solvent (water, ethanol and methanol/acetone) for the extraction of bioactive compounds from P.alata leaf, the antioxidant activity of the solvents by DPPH, FRAP, ABTS and ORAC, total phenols, composition and investigation of four phenolic compound (vetexin, isovitexin and isoorientin) in leaves. Furthemore, we evaluated the chronic consumption of aqueous extract on incidence of DM-1, insulits, GSH levels in liver/ kidney, serum insulin in NOD mice and oxidative stress, apoptosis and immunofluorescence of infiltrated CD4+,CD8+CD11+ in the pancreatic islets of these animals. Our results suggest that the aqueous extract shows higher values of antioxidant activity, total phenols and the chronic consumption can reduce the number of inflammatory infiltrate and consequently the expression of diabetes, help maintain the levels of GSH in the liver / kidney and reduce oxidative stress and apoptosis in NOD mice / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientador: Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T07:55:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Matsumura_CintiaYuri_D.pdf: 2096053 bytes, checksum: 36802787c48fa671b02e82fdc5d9de40 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Na Distrofia Muscular de Duchene (DMD) e em seu modelo experimental, camundongos mdx, a ausência ou disfunção da proteína distrofina leva a degeneração muscular. Acredita-se que a patogênese da DMD esteja relacionada à fragilidade do sarcolema, ao estresse mecânico e ao maior influxo de íons cálcio na fibra muscular resultante do funcionamento anormal de canais iônicos, como os canais de cálcio ativados por estiramento. O conhecimento das proteínas envolvidas na degeneração/regeneração muscular e na proteção a mionecrose da fibra muscular distrófica é essencial para a caracterização das distrofias musculares, bem como para o estabelecimento de métodos diagnósticos e de tratamentos preventivos ou terapêuticos. No presente trabalho estudamos os mecanismos de proteção a degeneração muscular, sendo dois os objetivos. No primeiro, identificamos proteínas envolvidas na proteção a mionecrose e nos processos de degeneração/regeneração muscular através do estudo proteômico dos músculos afetados ou não pela distrofia muscular em camundongos mdx e em animais controle. No segundo, verificamos a participação dos canais de cálcio ativados por estiramento na degeneração da fibra muscular através do seu bloqueio pela estreptomicina nos diferentes músculos distróficos de mdx. Adicionalmente, verificamos os potenciais efeitos secundários da estreptomicina na estabilidade do sarcolema e no tamponamento e sinalização de cálcio. Quanto ao estudo proteômico, nossos resultados sugerem que a diferença constitutiva dentre músculos afetados e não afetados pela degeneração são fundamentais para proteção a mionecrose, permitindo a manutenção da homeostase de cálcio e melhor resposta ao estresse mecânico e oxidativo. As proteínas galectina-1, anexina A1 e proteína 1 de interação com Reticulon-4 são possíveis biomarcadores para a distrofia muscular, uma vez que participam de diferentes processos celulares. Quanto a terapia farmacológica verificamos que os músculos distróficos mais afetados, como o diafragma, possuem maior quantidade de canais de cálcio ativados por estiramento e a estreptomicina atenuou a degeneração dos músculos distróficos. Diferente do efeito secundário de outros bloqueadores de canais de cálcio, a estreptomicina não alterou as proteínas do complexo distrofina-glicoproteína (beta-distroglicana e alfa-sintrofina), bem como as relacionadas ao cálcio (calsequestrina e calmodulina). Nossos resultados abrem novas perspectivas para o desenvolvimento de terapias farmacológicas relacionadas a proteínas envolvidas na degeneração muscular e na proteção a mionecrose, assim como para o desenvolvimento de métodos diagnóstico e de acompanhamento das distrofinopatias pelos marcadores moleculares / Abstract: In Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) and in the mdx mice model of DMD, the lack of dystrophin leads to muscle degeneration. The pathogenesis of DMD is related to sarcolemmal fragility, mechanical stress and increased influx of calcium in muscle fibers, due to dysfunction of ion channels, such as the stretch-activated calcium channels. The knowledge of the proteins related to muscle degeneration/regeneration and to the protection against myonecrosis is essential to better characterize the muscular dystrophy and to establish new diagnostic tools, in addition to new preventive or therapeutic treatments. In the present study, we addressed new mechanisms of muscle protection by focusing on two main objectives. First, to identify proteins related to the protection agaisnt myonecrosis and to muscle degeneration/regeneration by performing a comparative proteomic study of spared and affected muscles of mdx and control mice. Second, to verify the involvement of stretch-activated calcium channels in dystrophic muscle degeneration by performing a drug therapy with a stretch-activated calcium channels blocker, streptomycin, in muscles that are differently affected by the lack of dystrophin, in the exercised-mdx mice. Furthermore, we were interested to see whether the stretch-activated calcium channels blocker would have additional effects on sarcolemal stability and on calcium buffering and signaling, as previously reported for other calcium channels blockers. The proteomic study suggests that constitutive differences among spared and affected dystrophic muscles are essential for muscle protection agaisnt myonecrosis, allowing a better calcium homeostasis and response to oxidative and mechanical stress. Galectin-1, annexin A1 and the protein interacting with Reticulon-4 are potencial biomarkers for muscular dystrophy, due to their involvement in different cellular processes. The drug therapy study shows that stretch-activated calcium channels participates in dystrophic muscle degeneration, showing higher levels in the mostly affected muscle, the diaphragm. Streptomycin protects the dystrophic muscles against myonecrosis, but has no further effects on other mechanisms of dystrophic muscle protection, i.e., did not improve the dystrophin-glycoprotein complex (assayed by beta-dystroglycan and alpha-syntrofin levels), nor calcium binding protein (assayed by calsequestrin and calmodulin levels). Overall, the present study opens new perspectives for the development of drug therapies to dystrophinopathies by suggesting potential new molecular markers of dystrophy (proteomic study) and by suggesting new mechanistic views to explain the differences in the response of dystrophic muscles to the lack of dystrophin (drug therapy) / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Maria Julia Marques, Selma Maria Michelin Matheus / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T06:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DeCarvalho_SamaraCamacari_M.pdf: 1740331 bytes, checksum: ad4bf7c2d274ea63e20314141eeb1e83 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma miopatia progressiva causada pela ausência da proteína distrofina e necrose muscular progressiva. No camundongo mdx, modelo da DMD, a resposta inflamatória é exacerbada e populações distintas de macrófagos, M1 e M2, influenciam a degeneração e regeneração muscular, respectivamente, regulando a progressão da doença. Anti-inflamatórios esteróides são utilizados para a terapia farmacológica da DMD. Contudo, os efeitos colaterais decorrentes do seu uso contínuo estimulam o desenvolvimento de novas terapias farmacológicas para esta doença. No presente trabalho, verificamos os efeitos do ácido eicosapentaenóico (EPA) sobre os macrófagos M1 e M2 nos músculos bíceps braquial (BB), diafragma (DIA) e quadríceps femoral (QDR) do camundongo mdx. Camundongos mdx (14 dias de vida pós-natal) receberam 300mg/Kg de EPA diluído em óleo mineral, via gavagem, diariamente, por 16 dias. Camundongos mdx não tratados e camundongos C57BL/10 não tratados receberam óleo mineral via gavagem, pelo mesmo período. Verificamos que o EPA diminuiu a mionecrose (redução da CK no plasma) e aumentou o número de fibras com núcleo periférico, principalmente no BB e DIA. Em todos os músculos estudados, o tratamento com EPA diminuiu significativamente a área total de inflamação. Nos músculos BB e DIA, o tratamento com EPA aumentou a área de macrófagos M2. No QDR, observou-se predominância de regeneração muscular após o EPA, evidenciada por extensas áreas contendo fibras com núcleo central, em diferentes estágios de regeneração. Estes resultados sugerem que o EPA altera o balanço entre os macrófagos M1 e M2, promovendo diminuição de macrófagos M1, citotóxicos, o que pode contribuir para a proteção contra a mionecrose dos músculos distróficos / Abstract: Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a progressive myopathy characterized by the absence of dystrophin and progressive muscle necrosis. In the mdx mice model of DMD, the inflammatory response is exacerbated and distinct macrophage populations, M1 and M2, influence muscle degeneration and regeneration, respectively, regulating the progression of the disease. Antiinflammatory steroids are the choice pharmacological therapy for DMD. However, their side effects stimulate the development of new drug therapies for this disease. In the present study, we observed the effects of eicosapentaenoic acid (EPA) on M1 and M2 macrophages in the biceps brachii (BB), diaphragm (DIA) and quadriceps (QDR) muscles of the mdx mice. Mdx mice (14 days old) received 300mg/kg of EPA diluted in mineral oil by gavage, daily, for 16 days. Untreated mdx and C57BL/10 mice received mineral oil by gavage for the same period. We observed that EPA decreased myonecrosis (reduced plasma CK) and increased the number of fibers with peripheral nuclei, mainly in the BB and DIA. In all muscles, treatment with EPA significantly decreased the total area of inflammation. In DIA and BB muscles, treatment with EPA increased the area of M2 macrophage. In the QDR, there was a predominance of muscle regeneration after EPA, with extensive areas containing fibers with central nuclei at different stages of regeneration. These results suggest that EPA affects the balance of M1 and M2 macrophages in dystrophic muscles, with a trend towards a decrease in the cytotoxic M1 phenotype, which may contribute to the protection against myonecrosis in the dystrophic muscles / Mestrado / Anatomia / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T09:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Apolinario_LeticiaMontanholi_M.pdf: 1840325 bytes, checksum: aac9928181ab48946d6ed91bfa3a9c50 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença recessiva ligada ao cromossomo X. Os glicocorticoides são amplamente utilizados para o tratamento da DMD, entretanto os efeitos colaterais decorrente de seu uso contínuo motivam a busca por novas terapias farmacológicas. Ácidos graxos poli-insaturados têm sido empregados para o tratamento de várias doenças, exercendo seus efeitos através de mecanismos pouco conhecidos... O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is an X-linked recessive disease that leads to myonecrosis and cardiorespiratory failure. Glucocorticoids are so far the choice treatment for DMD. However their side effects due to continuous use motivate the search for new therapies¿ The complete Abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Anatomia / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Humberto Santo Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T21:05:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferretti_Renato_D.pdf: 15919724 bytes, checksum: 2e3e4ba8b562aaaaf3dde85b2e810561 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os músculos intrínsecos da laringe (MIL) são protegidos da mionecrose em camundongos mdx, modelo da distrofia muscular de Duchenne (DMD). A DMD caracteriza-se pela mionecrose, causada pela ausência da proteína distrofina (DIS). A DIS se une a um complexo glicoproteínas (CDG), que auxilia na estabilidade da fibra e interage com proteínas reguladoras do Ca2+. O sarcolema instável dado pela ausência da DIS, diminuição de proteínas do CDG, desregulação de canais de Ca2+ e leva ao influxo de Ca2+ exacerbado, associado à diminuição da homeostase do Ca2+ intracelular e capacidade do estresse oxidativa, resulta na mionecrose. A utrofina (Utrn), semelhante à proteína DIS, se conecta às proteínas do CDG, parece ter papel na agregação dos receptores de acetilcolina (AChRs) nas junções neuromusculares (JNM) e auxiliaria na proteção da mionecrose. Neste trabalho examinamos os níveis das proteínas do CDG (beta-distroglicana [b-DG], beta-sarcoglicana [b-SG] e alfa-sintrofina [a-SIN]), da Utrn, de canais de estoque do Ca2+ (SOCE; proteínas Orai e STIM1) e proteína relacionada ao estresse oxidativo na mitocôndria (PGC-1a) em MIL distróficos. Além disso, analisamos o padrão de distribuição da Utrn e AChRs nas JNM de MIL distróficos. A análise da b-DG, b-SG, a- SIN e da Utrn pela técnica de imunohistoquímica e western blotting, mostrou que nos MIL distróficos os níveis da b-DG e da Utrn são normais em MIL adultos comparados com controle. Com envelhecimento, os níveis de proteínas do CDG e Utrn são alterados em MIL distróficos e parece não estar relacionado a proteção da mionecrose. Com emprego de técnicas moleculares e bioquímicas para análise de canais de estoque do Ca2+ (Orai e STIM1) e proteína do estress oxidativo na mitocôndria (PGC-1a), foram observados níveis aumentados de STIM1, com similar aumento da proteína calmodulina (CaM), bem como aumento da expressão do PGC-1a em MIL distróficos. Músculos acometidos distróficos apresentaram diminuição na expressão destas proteínas. Utilizando imunohistoquimica e microscopia confocal, foi observado que o padrão de distribuição da Utrn e dos AChRs não se altera nas JNM de MIL mdx. Em fibras regeneradas tanto o padrão de distribuição da Utrn quanto dos AChRs mostraram-se alterados. Pode-se concluir que os MIL de camundongos mdx apresentam manutenção dos níveis normais de proteínas do CDG e da Utrn, bem como o aumento de STIM1, CaM e PGC-1a, poderiam auxiliar, pelo menos em parte, à proteção da mionecrose / Abstract: The intrinsic laryngeal muscles (ILM) are protected from myonecrosis in the mdx mouse model of Duchenne muscular dystrophy (DMD). The DMD is characterized by myonecrosis, resulting from the absence of dystrophin protein. Dystrophin links the cytoskeleton to a complex of glycoprotein, the dystrophin-glycoprotein complex (DGC), which interacts with Ca2+-dependent channels for signaling and stability of the muscle membrane. In the absence of dystrophin, the sarcolemma becomes instable due to a decrease in the DGC level, deregulation of Ca2+-dependent channels, which increase Ca2+ influx, decreased Ca2+-handling and oxidative stress capacity, that result in muscle fiber necrosis. Utrophin (Utrn), similarly to the dystrophin, conects to DGC proteins, assembles the acethylcoline receptors (AChRs) at the neuromuscular junctions (NMJ) and may play a role in dystrophic muscle sparing. In this study, we examined the levels of DGC proteins (beta-dystroglycan [b-DG], beta-sarcoglycana [b-SG], alpha-syntrophin [a-SIN]), Utrn, store-operated Ca2+ channels (SOCE; STIM1 and Orai1 proteins), and mitochondrial oxidative protein (PGC-1a) in dystrophic ILM. We also examined the distribution of Utrn and AChRs in the dystrophic ILM NMJ. Immunohistochemistry and western blotting analyses of b-DG, b-SG and a-SIN, and the Utrn showed normal levels in adult dystrophic ILM compared with adult control. In aged mice, a dramatic decrease in DGC levels was observed in all dystrophic muscles compared with control. There are age-related alterations in DGC in the ILM of mdx mice, regardless of their protection against the lack of dystrophin. Using biochemical and molecular techniques to analyze SOCE proteins and mitochondrial oxidative protein (PGC-1a), we observed increased levels of STIM1, associated with increased level of calmodulin (CaM), and increased level of PGC-1a in dystrophic ILM. Dystrophic affected muscles have decreased levels of those proteins. Using molecular and biochemical methods we observed that Utrn and AChRs are fragmented only in affected muscle fibers and remaining unchanged in dystrophic MIL. We conclude that in adult dystrophic MIL the rescue of the DGC, increased levels of STIM1, CaM and PGC-1a, may be associated, at least in part, with their protection against myonecrosis / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Selenophenes are a promising class of heterocyclic selenium-containing compounds presenting important pharmacological properties. Based on selenium well-described role on mood regulation and since depression is a serious and prevalent disease affecting a wide part of the world s population, the main aim of this work was to investigate de antidepressant-like action of 3-(organosseleno)-2,5-diphenyl-selenophenes in mice. The pharmacological effect of these compounds was analyzed by using different experimental models of depression and results were shown by three scientific articles. Firstly, results of Article 1 demonstrated the antidepressant-like action of five selenophene compounds. H-DPS, CH3-DPS, Cl-DPS, FDPS and CF3-DPS reduced the total immobility time of mice evaluated in the forced swimming test (FST), which seems to be related to their chemical structure. The antidepressant-like action of F-DPS was observed at lower doses than other selenophenes e involves the phosphorylation of extracellular-signal-regulated kinases (ERK), whose signaling pathway is commonly modulated by antidepressant drugs. Articles 2 and 3 investigated the pharmacological effect of F-DPS in mouse models of depression induced by both neuropathic pain and chronic corticosterone administration, respectively. Both the acute and subchronic treatments with F-DPS significantly reversed the depression-related behavior produced by partial sciatic nerve ligation (PSNL), whereas pain sensibility was only reduced after repeated treatment with this selenophene. Besides, repeated administration of the glucocorticoid hormone corticosterone induced behavior, endocrinal and neurochemical changes similar to those clinically observed in depression, which were also reversed by treatment of animals with F-DPS. Based on these data, the mechanisms of pharmacological action of this organoselenium compound seem to involve, at least in part, a modulation of glutamatergic and serotonergic systems, the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis regulation and changes on neuronal pathways related to the synaptic plasticity. Together, the results shown in this thesis suggest the pharmacological properties of selenophene compounds, particularly F-DPS, as an interesting tool in the study and development of future therapies for depressive disorders. / Os selenofenos são uma classe de compostos heterocíclicos aromáticos com promissoras propriedades farmacológicas. Tendo em vista o importante papel do selênio na regulação do humor e a grande prevalência populacional das doenças depressivas, o principal objetivo deste estudo foi investigar a ação do tipo antidepressiva de 3-(organosseleno)-2,5-difenilselenofenos em camundongos. A fim de atender a este objetivo, o efeito farmacológico destes compostos foi analisado pelo uso de diferentes modelos experimentais de depressão e os resultados foram apresentados em três artigos científicos. Primeiramente, os resultados do Artigo 1 demonstraram a ação do tipo antidepressiva de cinco representantes da classe dos selenofenos. Os compostos H-DPS, CH3-DPS, Cl-DPS, F-DPS e CF3-DPS reduziram significantemente o tempo total de imobilidade de camundongos avaliados no teste do nado forçado (TNF), efeito este que parece estar relacionado às suas estruturas químicas. A ação do tipo antidepressiva do F-DPS foi observada em menores doses em comparação aos outros selenofenos e envolve a fosforilação da proteína quinase regulada por sinal extracelular (ERK), cuja via de sinalização é comumente modulada por drogas antidepressivas. Os Artigos 2 e 3 investigaram o efeito farmacológico do F-DPS em modelos crônicos de depressão induzida pela dor neuropática e pela administração crônica de corticosterona em camundongos, respectivamente. Tanto o tratamento agudo como o subcrônico com F-DPS reverteram significantemente o comportamento do tipo depressivo produzido pela ligação parcial do nervo ciático (LPNC), enquanto que a sensibilidade à dor foi reduzida somente após a terapia prolongada com este composto. Por sua vez, a administração repetida do hormônio glicocorticoide corticosterona induziu alterações comportamentais, endócrinas e neuroquímicas similares às observadas clinicamente na depressão e que também foram revertidas pelo tratamento dos animais com F-DPS. Com base nestes resultados, acredita-se que os mecanismos de ação farmacológica deste composto orgânico de selênio envolvam, pelo menos em parte, a modulação dos sistemas glutamatérgico e serotonérgico, a regulação da atividade do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal (HPA) e modificações em vias neuronais relacionadas à plasticidade sináptica. Juntos os resultados apresentados nesta tese de doutorado sugerem que o estudo das propriedades farmacológicas de compostos selenofenos, particularmente do F-DPS, parece ser interessante no desenvolvimento de futuras terapias para o tratamento dos distúrbios neurológicos relacionados às doenças depressivas.