Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-08-01T13:36:14Z No. of bitstreams: 1 Amanda Baricatti Finazzi.pdf: 587738 bytes, checksum: 3544755ab40549d4e228afdfc83d9c20 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T13:36:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amanda Baricatti Finazzi.pdf: 587738 bytes, checksum: 3544755ab40549d4e228afdfc83d9c20 (MD5) Previous issue date: 2016-06-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to evaluate the effect of a colloid in single layer centrifugation (AndroColl®-E; Minitub, Germany) associated to three freezing extenders: extender 1 (Botucrio®; Biotech, Botucatu,, Brazil), extender 2 (EquiPlus Freeze®; Minitub, Germany + 3% glycerol) and extender 3 (EquiPlus Freeze®; Minitub, Germany + 3% DMSO) on equine semen quality. We used three ejaculates from five stallion (n=15), collected by artificial vagina. After collection, the semen was diluted with extender to from skimmed milk (EquiPlus®, Minitub, Germany) and divided into 2 groups: group E (centrifuged without colloid) and group A (centrifuged with colloid). No grupo E, o sêmen foi centrifugado à 676g por 15 minutos, no grupo A, o sêmen foi centrifugado à 314g por 20 minutos. Após a centrifugação, os grupos receberam os diferentes diluentes: diluente 1, diluente 2 e diluente 3. The kinetics was evaluated by CASA and the integrity of plasma and acrossomal membrane by association of fluorescent probes and subjected to flow cytometry. With respect to the CASA parameters, it can be seen that the A1 group, with the colloid centrifuged, had superior result in LIN and WOB variables, compared to the E1 group. The variables, RAP, VCL, VAP, ALH and BCF, had lower results when centrifuged with colloid, A1 group than in the group E1. With respect to the integrity of plasma and acrosomal membrane, it can be seen that A1 and A3 groups were centrifuged with colloid, they had superior result to E1 and E3 groups, which were centrifuged without the colloid. The use of colloid improved integrity of plasma and acrosomal membranes probably avoided the process of sperm hyperactivation and provided lower production of ROS. Greater in vivo studies are needed to prove this technique. / Objetivou-se avaliar o efeito da centrifugação em coloide de camada única (AndroColl®-E; Minitub, Alemanha) e três diluentes de congelamento: diluente 1 (Botucrio®; Biotech, Botucatu, Brasil), diluente 2 (EquiPlus Freeze®; Minitub, Alemanha + 3% glicerol) e diluente 3 (EquiPlus Freeze®; Minitub, Alemanha + 3% DMSO), sobre a qualidade do sêmen equino. Utilizou-se 3 ejaculados de 5 garanhões (n=15). Após a colheita, o sêmen foi diluído com meio à base de leite desnatado (EquiPlus®, Minitub, Alemanha) e dividido em 2 grupos: grupo E (centrifugado sem coloide) e grupo A (centrifugado com coloide). No grupo E, o sêmen foi centrifugado à 676g por 15 minutos, no grupo A, o sêmen foi centrifugado à 314g por 20 minutos. Após a centrifugação, os grupos receberam os diferentes diluentes: diluente 1, diluente 2 e diluente 3. Logo após foram levadas ao congelamento em máquina programável portátil e armazenadas em botijões criogênicos. A cinética foi avaliada pelo CASA e a integridade das membranas plasmática e acrossomal, por associação de sondas fluorescentes submetidas ao Citômetro de Fluxo. Com relação aos parâmetros do CASA, pode-se observar que o grupo A1, centrifugado com o coloide, teve resultado superior nas variáveis LIN e WOB, comparadas com o grupo E1. Já as variáveis, RAP, VCL, VAP, ALH e BCF, tiveram resultados inferiores quando centrifugadas com o colóide, grupo A1 em relação ao grupo E1. Com relação à integridade de membrana plasmática e acrossomal, pode-se observar que os grupos A1 e A3, que foram centrifugados com o coloide, tiveram resultado superior aos grupos E1 e E3, que foram centrifugados sem o coloide. O uso do coloide melhorou integridade das membranas plasmática e acrossomal, provavelmente evitou o processo da hiperativação espermática e proporcionou menor produção de ROS. Maiores estudos in vivo serão necessários para comprovação desta técnica.

Aimed to evaluate the antioxidant potential of freeze-dried pulp of the Noni (Morindacitrifolia) in addition to a diluent for semen freezing, the concentrations of 2,35mg / mL; 4,70mg / mL and 4,70mg / mL on the in vitro viability of sheep sperm. A total of five ejaculates from two breeding race Santa Inês aged 1 and 2 years, the technique of artificial vagina were collected. Semen was divided into equal volumes, diluted in the means corresponding to each treatment, stored in straws of 0.25 ml, followed by cooling to - 0.25 ° C / min to 5 ° C, a time of stabilization of an hour and freezing at - 20 º C / min up to - 140 º C, when they were submerged in liquid nitrogen at - 196 ° C. the samples were thawed (37 ° C / 30 seconds) and evaluated for feasibility, computerized sperm kinetics, plasma membrane integrity, status of training and acrosome reaction and applied the test of slow thermoresistance test for parameters like motility, vigor and integrity of the plasma membrane by hypoosmotic test. The addition of the freeze-dried noni fruit pulp concentration of 4.70 mg / mL reduced lipid peroxidation of the means (p <0.5). However, after dilution of the semen, followed by freeze / thawing media containing higher concentrations 2,35mg / mL harmful (p <0.5) the total motility, progressive motility, average path velocity, progressive velocity, curvilinear velocity, amplitude of lateral head displacement, beat cross cross and concentration 4,70mg / mL on the straightness of ram spermatozoa, without affecting the integrity of the plasma membrane and the status of capacitation and acrosome reaction. At the concentrations used, the use of freeze-dried Noni pulp is recommended as an antioxidant ingredient in diluent for freezing ram semen. / Objetivou-se avaliar o potencial antioxidante da polpa liofilizada do fruto do Noni (Morindacitrifolia) em adição a diluente para congelação de sêmen, nas concentrações de 2,35mg/mL; 4,70mg/mL e 4,70mg/mL sobre a viabilidade in vitro de espermatozoides ovinos.Foram coletados um total de cinco ejaculados, provenientes de dois reprodutoresda raça Sant Inês com idade entre 1 e 2 anos, pela técnica da vagina artificial. O sêmen foi dividido em volumes iguais, diluído nos meios correspondentes a cada tratamento, armazenado em palhetas de 0,25mL, seguidoda refrigeração à 0,25 ºC/min até 5ºC, um tempo de estabilização de uma hora e, congelação à 20 º C/min até atingir 140 º C, quando foram submersas em nitrogênio líquido à 196 º C. As amostras foram descongeladas (37°C/30segundos) e avaliadas quanto a viabilidade, cinética espermática computadorizada, integridade de membrana plasmática, status de capacitação e reação acrossomal e aplicou-se o teste de teste de termorresistência lento quanto aos parâmetros motilidade, vigor e integridade da membrana plasmática pelo teste hiposmótico. A adição da polpa liofilizada do fruto do noni na concentração de 4,70mg/mL reduziu a peroxidação lipídica do meios (p<0,5). Entretanto após diluição do sêmen, seguida da congelação/descongelação, os meios contendo concentrações superiores a 2,35mg/mL foram prejudiciais (p<0,5) a motilidade total, motilidade progressiva, velocidade de percurso médio, velocidade progressiva, velocidade curvilinear, amplitude de deslocamento lateral da cabeça, batimento flagelar cruzado e na concentração 4,70mg/mL sobre a retilinearidade de espermatozóides ovinos, sem no entanto afetar a integridade da membrana plasmática e o status de capacitação e reação acrossomal. Nas concentrações utilizadas, não recomenda-se a utilização da polpa do Noni liofilizada, como ingrediente antioxidante em diluente para congelação de sêmen ovino.

Sources of lipids based on polyunsaturated fatty acids have been used for qualitative improvement of cryopreserved semen. Supplementation of diets with unsaturated oils for ruminants is recommended with the addition of a protector to facilitate their absorption. The objective of this study was to evaluate the influence of different levels of polyunsaturated fatty acids in the diet on the fatty acid view and quality of the semen cryopreservation of rams. Twenty-four Santa Inês raced rams were randomly distributed into four groups fed with isoproteic diets: G0 - without polyunsaturated fatty acids complexed with calcium salts (Ca-PUFA) and G3, G6 and G9 with Ca-PUFA levels in 3, 6, 9%, respectively. The semen was collected and frozen in French straws in the following periods: 0 (P0), 30 (P30), 60 (P60) and 90 (P90) days beginning the administration of diets. The fresh semen samples were analyzed for motility subjective, and the fatty acid profile, while samples of frozen-thawed semen were analyzed for sperm kinetics in a computerized system, evaluation of sperm membranes integrity, sperm capacitation and acrossome reaction. The results were subjected to a multivariate analysis including comparison tests of average between treatments on fatty acid profile in the P90, with the correlation of coefficient for axis 1 and 2 NMS and correlation of coefficient of the parameters of sperm for axis 1 and 2 NMS with a Monte Carlo test, at the significance level of 5%. It was identified in experiment 1 were identified lower proportions of stearic acid, oleic, -linolenic, arachidonic sperms in groups of rams treated with 9% Ca-PUFAs (G9) when compared to the control group (G0) after 90 days of administration diet. It was observed in experiment 2 a lower average kinetic parameters ALH and VCL of semen from rams fed with 9% diet. It was concluded that supplementing the diet with 9% Ca-PUFA after 90 days, produces no changes in the kinetic parameters such as curvilinear velocity and amplitude of lateral head of semen cryopreservation produced by rams, even containing lower proportions of oleic, - linolenic and arachidonic. / Fontes de lipidios a base de acidos graxos poli-insaturados tem sido usadas para melhoria dos aspectos quantitativos e qualitativos do semen criopreservado. A suplementacao de oleos insaturados em dietas para ruminantes requer a adicao de um protetor que facilite a sua absorcao. O objetivo do estudo foi avaliar a influencia de diferentes niveis de acidos graxos poli-insaturados na dieta ao perfil de acidos graxos e na qualidade dos espermatozoides criopreservados de carneiros. Vinte e quatro carneiros da raca Santa Ines foram distribuidos aleatoriamente em quatro grupos alimentados durante 90 dias com dietas isoproteicas: G0 - sem acidos graxos poli-insaturados complexados com sais de calcio (PUFA-Ca) e G3, G6 e G9 com PUFA-Ca em teores de 3, 6, 9%, respectivamente. O semen foi coletado e congelado em palhetas nos periodos: 0 (P0), 30 (P30), 60 (P60) e 90 (P90) dias do inicio da administracao das dietas. As amostras de semen in natura foram analisadas quanto a motilidade subjetiva, e ao perfil de acidos graxos, enquanto que aquelas descongeladas foram analisadas quanto a cinetica espermatica em sistema computadorizado, integridade das membranas espermaticas e capacitacao e reacao acrossomal. Os dados obtidos foram submetidos a analise multivariada com o teste de comparacao de medias entre os tratamentos, quanto ao perfil de acidos graxos dentro do P90, com o coeficiente de correlacao para os eixos 1 e 2 NMS e com coeficiente de correlacao dos parametros dos espermatozoides para os eixos 1 e 2 NMS com teste de Monte Carlo, ao nivel de significancia minimo de 5%. No experimento 1 foram identificadas menores proporcoes dos acidos estearico, oleico, ×-linolenico, araquidonico nos espermatozoides dos carneiros do grupo tratado com 9% de PUFAs-Ca (G9), quando comparado ao grupo controle (G0) aos 90 dias da administracao da dieta. No experimento 2 foram observadas menores medias nos parametros cineticos ALH e VCL dos espermatozoides dos carneiros alimentados pela dieta 9%. Conclui-se que a suplementacao da dieta de carneiros com 9% de acidos graxos poli-insaturados complexados com sais de calcio por um periodo de 90 dias produz uma mudanca no perfil de acidos graxos dos espermatozoides ovinos associada significativamente a diminuicao das proporcoes dos acidos estearico, oleico, ×-linolenico, araquidonico, do somatorio de acidos graxos poli-insaturados e da razao entre os somatorio dos acidos graxos poli-insaturados e saturados, alem de reduzir a qualidade do semen criopreservado associada ao deslocamento lateral da cabeca e a velocidade curvilinear.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the effect of cryoprotectant solutions, immersion times and regeneration means of zygotic embryos cryopreserved coconut and evaluate the effect of different procedures for packaging and storage time on contamination and germination of zygotic embryos. For cryopreservation were used zygotic embryos obtained from mature fruits of Brazil Green Dwarf (BGD) and Brazilian Tall (BRA) accessions of Active Bank Coconut Germplasm Embrapa Coastal Tablelands. BGD coconut seeds were placed in two cryoprotectant solutions: C1 - medium Y3 + 1.75 M sucrose + 15% glycerol, C2 - medium Y3 + 3.33 M glucose + 15% glycerol and BRA coconut embryos in solutions: C1 - medium Y3 + 3.33 M glucose and C2 - medium Y3 + 3.33 M glucose + glycerol 15%, both accesses remained immersed for 24, 48 and 72 hours. Thereafter explants were dehydrated on silica gel 34 (BGD) and 30 hours (BRA) and immersed in liquid nitrogen at - 196 ° C for 24 hours, after this period were thawed at 38 ± 2 ° C. It was determined the humidity of the embryos at the end of step of cryoprotectants and dehydration treatments. The percentage of survival and regeneration was assessed after the embryo transfer into the culture medium Y3 supplemented or not with mol 0.5 gibberellic acid. The pre-cultivation in cryoprotectant solutions and different immersion times did not affect embryo viability. The cryoprotective solution composed of 1.75 M sucrose and 15% glycerol showed lower moisture content (12.3%) and improved survival (63.3%) to the coconut BGD zygotic embryos cryopreserved. The BRA access the embryos reached 77.8% survival when immersed in cryoprotectant formed medium Y3 + 3.33 M glucose, however, both cryoprotectant solutions when combined with the shortest time of immersion (24 hours) may be recommended. For studies of transport and storage procedures were used Cameroon red dwarf (CRD), Malayan yellow dwarf (MYD) and Malayan red dwarf (MRD) acessions. We evaluated five cases; T1 endosperm disk storage at 10 ± 2 ° C for 5 days; T2 endosperm disk storage at 10 ± 2 ° C for 8 days; T3 endosperm disk storage at 10 ± 2 ° C for 12 days (before excision and embryo inoculation in culture medium Y3); T4 excised zygotic embryo and inoculated into culture medium Y3 in individual storage and 5 ml microtube 2 days and then transferred to culture medium Y3; T5- five zygotic embryos inoculated in culture medium Y3 in a Petri dish after 2 days and transferred to culture medium Y3. The transport zygotic embryos in Petri plate with Y3 culture medium without sucrose for two days promotes low percentage of bacterial contamination. All procedures studied promote low fungal contamination. The transport endosperm discs in plastic bags and stored for five, eight, and twelve days promotes higher germination of zygotic embryos uncontaminated MRD and MYD access. The transport of isolated zygotic embryos in microtube with Y3 culture medium without sucrose for two days and endosperm discs in plastic bags and stored for five and eight days promote increased germination of zygotic embryos uncontaminated CRD access. / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de soluções crioprotetoras, tempos de imersão e meios de regeneração de embriões zigóticos criopreservados de coco e avaliar o efeito de diferentes procedimentos para a embalagem e tempo de armazenamento sobre a contaminação e germinação de embriões zigóticos. Para a criopreservação foram utilizados embriões zigóticos obtidos de frutos maduros provenientes de plantas matrizes de coqueiro gigante do Brasil da Praia do Forte (GBrPF) e anão verde do Brasil de Jiqui (AVeBrJ) do Banco Ativo de Germoplasma de Coco da Embrapa Tabuleiros Costeiros. Embriões de coqueiro AveBrJ foram imersos em duas soluções crioprotetoras: C1 meio Y3 +1,75 M sacarose + 15% glicerol, C2 meio Y3 + 3,33 M glicose + 15% glicerol e, embriões de coqueiro GBrPF nas soluções: C1 - meio Y3 + 3,33 M glicose e C2 meio Y3 + 3,33 M glicose + 15% glicerol, ambos os acessos permaneceram imersos por 24, 48 e 72 horas. Posteriormente os explantes foram desidratados em sílica gel por 34 (AVeBrJ) e 30 horas (GBrPF), e imersos em nitrogênio líquido a -196º C por 24 horas, após esse período foram descongelados a 38 ± 2ºC. Foi determinada a umidade dos embriões ao final da etapa de tratamentos crioprotetores e desidratação. Foi avaliada a porcentagem de sobrevivência e regeneração, após a transferência dos embriões para o meio de cultura Y3 suplementado ou não com 0,5 mol de ácido giberélico. O pré-cultivo nas soluções crioprotetoras e os diferentes tempos de imersão não alteraram a viabilidade dos embriões. A solução crioprotetora composta por 1,75 M de sacarose e 15% de glicerol proporcionou menor umidade (12,3%) e maior sobrevivência (63,3%) aos embriões zigóticos de coco AVeBrJ criopreservados. Os embriões do acesso GBrPF alcançaram 77,8% de sobrevivência quando imersos no crioprotetor formado pelo meio Y3 + 3,33 M glicose, porém, ambas as soluções crioprotetoras quando combinadas com o menor tempo de imersão (24 horas) podem ser recomendadas. Para os estudos de procedimentos de transporte e armazenamento foram utilizados embriões de coqueiro anão vermelho dos Camarões (AVC), anão amarelo da Malásia (AAM)e anão vermelho da Malásia (AVM). Foram avaliados cinco procedimentos; T1- Armazenamento do disco de endosperma a 10 ± 2°C durante 5 dias; T2- Armazenamento do disco de endosperma a 10 ± 2°C durante 8 dias; T3- Armazenamento do disco de endosperma a 10 ± 2°C durante 12 dias (antes da excisão de embrião e a inoculação no meio de cultura Y3); T4- embrião zigótico excisado e inoculado em microtubo de 5 mL com 3 mL de meio de cultura Y3 sem sacarose e depois de 2 dias transferidos para meio de cultura Y3; T5- cinco embriões zigóticos inoculados em placa de Petri com meio de cultura Y3 sem sacarose e depois de 2 dias transferidos para meio de cultura Y3. O transporte de embriões zigóticos em placa de Petri com meio de cultura Y3 sem sacarose durante dois dias promove menor porcentagem de contaminação bacteriana. Todos os procedimentos estudados promovem baixa contaminação fúngica. O transporte de discos de endosperma em sacos plásticos e armazenados por cinco, oito e doze dias promove maior germinação de embriões zigóticos não contaminados dos acessos AVM e AAM. O transporte de embriões zigóticos isolados em microtubo com meio de cultura Y3 sem sacarose por dois dias e de discos de endosperma em sacos plásticos e armazenados por cinco e oito dias promovem maior germinação de embriões zigóticos não contaminados do acesso AVC.

Cryopreservation of fish semen is a key to optimization of reproductive management, the formation of germplasm bank and the development of genetic improvement programs. The success of this technique depends on the management and balance of several factors such as the collection, dilution, packaging, freezing and thawing. Tambaqui semen cryopreservation protocols have been developed using 0.5 mL straws on packaging. However, the high volumes of semen produced and the elevated taxes of fecundity are presented by this specie, it is necessary to use larger volume storage containers for application to large-scale production. The objective of this study was to establish a tambaqui semen cryopreservation protocol in large straw 4,0mL, from the definition of cryosolution, equilibration time and the best ratio between temperature and time semen thawing. The semen collected was diluted, packaged in large straws, frozen in liquid nitrogen which was conditioned in dry-shipper and stored in cryogenic cylinder at -196 °C. In the first experiment, different cryosolutions (M1 - 5% 5% methylglycol; M2 - 5% 5% methylglycol+ 5% egg yolk; M3 - 10% 5% methylglycol; M4 - 10% 5% methylglycol + 5% egg yolk; M5 - 15% 5% methylglycol; M6 - 15% de 5% methylglycol + 5% egg yolk) and three equilibration times (4, 20 and 40 minutes) were tested. In the second experiment, different relation between temperature and time thawing on sperm quality (30ºC for 50s - T1; 30ºC for 80s - T2; 60ºC for 25s - T3 e 60ºC for 40s - T4) were evaluated. In conclusion, this study showed that the ideal protocol for cryopreservation of tambaqui semen in large straw 4,0mL is made by diluting semen at a ratio of 1: 9 (v: v) in a medium composed of 5% methylglycol and 5% egg yolk. Both of them must have remained in contact with each other for 4 minutes until both were subjected to freezing in dry-shipper. The thawing of samples required to be performed in a water bath at 60 ° C for 25s. / A criopreservação de sêmen de peixes é uma ferramenta para a otimização do manejo reprodutivo, a formação de bancos de germoplasma e o desenvolvimento de programas de melhoramento genético. O sucesso dessa técnica depende do domínio e o equilíbrio de vários fatores que envolvem os processos de coleta, diluição, envase, congelamento e descongelamento. Protocolos de criopreservação sêmen de tambaqui já foram desenvolvidos utilizando palhetas de 0,5mL no envase, no entanto, o elevado volume de sêmen produzido e alta fecundidade da espécie sugere o armazenamento em recipientes de maior volume para a aplicação na produção em larga escala. Com isso, o objetivo do presente estudo foi estabelecer um protocolo de criopreservação seminal do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL, a partir da definição de um meio diluidor, tempo de equilíbrio e a melhor relação entre temperatura e o tempo de descongelamento do sêmen. O sêmen coletado foi diluído, envasado em macropalhetas, congelado em vapor de nitrogênio líquido no botijão dry-shipper e armazenadas em botijão criogênico a -196°C. No primeiro experimento, foram testadas diferentes composições do meio diluidor (M1 - 5% de metilglicol; M2 - 5% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M3 - 10% de metilglicol; M4 - 10% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M5 - 15% de metilglicol; M6 - 15% de metilglicol + 5% de gema de ovo) e três tempos de equilíbrio (4, 20 e 40 minutos). No segundo experimento, foram avaliadas diferentes velocidades de descongelamento do sêmen em banho-maria, sobre a qualidade espermática (30ºC por 50s - T1; 30ºC por 80s - T2; 60ºC por 25s - T3 e 60ºC por 40s - T4). Ao final do estudo concluiu-se, que o protocolo ideal para a criopreservação do sêmen do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL consiste na diluição do sêmen na proporção de 1:9 (v:v) em um meio composto por 5% de metilglicol e 5% de gema de ovo, os quais devem permanecer em contato por 4 minutos até que sejam submetidos ao processo de congelamento em botijão dry-shipper. O descongelamento das amostras deve ser realizado em banho-maria a 60°C por 25s.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Catia Ciencia Animal 2011.pdf: 762064 bytes, checksum: bf88768cc40c5c8bee991ff416b2a29d (MD5) Previous issue date: 2011-08-03 / The function of antioxidants is control the free radicals to improve the quality of fresh and cryopreserved semen. The objective this work was to study the effect of antioxidants catalase, &#945;-tocopherol and sodium pyruvate added in bull semen in order to control the reactive oxygen species and improve sperm quality after cryopreservation. Were used six adult Nelore bulls previously selected from other animals by evaluation of body condition and andrological examination. Semen was collected and immediately evaluated for motility and vigor at the laboratory. After, the semen were diluted with Tris-egg yolk-glycerol medium with the antioxidants molecules in different concentrations. The work was divided into four experimental groups: Group 1 (control without addition of antioxidants), Group 2 (with catalase antioxidant in three concentrations 20 IU, 80 IU and 200 IU), Group 3 (with &#945;-tocopherol antioxidant in the concentrations of 50 mM, 100 mM and 150 mM) and Group 4 (with sodium pyruvate antioxidant in the concentrations of 1.5 mM, 3.5 mM and 5 mM). After semen thawing the computerized analysis (CASA) of motility, plasm membrane, and acrosome integrity, mitochondrial activity and measurement of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). It was observed that the antioxidants had no significant effect on most parameters measured, but the lower antioxidants concentrations were more efficient than the control group for the total motility, progressive motility, average path velocity, and plasm membrane integrity parameters. In the TBARS evaluation was observed lower lipid peroxidation when higher antioxidants concentrations were used. Thus more research is needed to determine the functionality of sperm, as well as indentify the optimal concentration of the antioxidants that benefits all sperm parameters after thawing. / Os antioxidantes têm como função neutralizar os efeitos dos radicais livres proporcionando uma melhor qualidade do sêmen fresco e criopreservado. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito da adição dos antioxidantes catalase, &#945;-tocoferol e piruvato de sódio no sêmen bovino visando um controle das espécies reativas de oxigênio para melhorar a qualidade espermática pós-criopreservação. Foram utilizados seis touros adultos da raça Nelore selecionados previamente entre outros animais por meio da avaliação de condição corporal e exame andrológico. O sêmen foi coletado e imediatamente avaliado quanto a motilidade e vigor no laboratório. Em seguida, o sêmen foi diluído com o meio Tris-gema-glicerol com as moléculas antioxidantes nas diferentes concentrações. O trabalho foi estruturado em quatro grupos experimentais: Grupo1 (controle sem adição de antioxidantes); grupo 2 (com antioxidante catalase em três concentrações 20 UI, 80 UI e 200 UI); grupo 3 (com antioxidante &#945;-tocoferol nas concentrações de 50 &#956;M, 100 &#956;M e 150 &#956;M) e o grupo 4 (com antioxidante piruvato de sódio nas concentrações de 1.5 &#956;M, 3.5 &#956;M e 5 &#956;M). Após a descongelação foram realizadas as análises computadorizada (CASA) da motilidade, da integridade de membrana plasmática, de integridade acrossomal, da atividade mitocondrial e mensuração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Observou-se que os antioxidantes não tiveram efeito significativo na maioria dos parâmetros avaliados, porém nas menores concentrações tiveram melhor resultado comparando-se com o grupo controle para os parâmetros de motilidade total, motilidade progressiva, velocidade de trajeto e integridade de membrana. Em relação a avaliação de TBARS observou-se que as maiores concentrações dos antioxidantes têm menor peroxidação lipídica. Desta forma, tornam-se necessárias mais pesquisas em relação a avaliação funcional dos espermatozóides, bem como a identificação da concentração ideal que beneficie todos os parâmetros espermáticos pós-descongelação.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-13T18:33:56Z No. of bitstreams: 1 Tese - Aldecinei Bastos Siqueira.pdf: 11876927 bytes, checksum: cf4e6b319286981a71942bf8cef68bc4 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T17:25:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Aldecinei Bastos Siqueira.pdf: 11876927 bytes, checksum: cf4e6b319286981a71942bf8cef68bc4 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-16T17:33:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Aldecinei Bastos Siqueira.pdf: 11876927 bytes, checksum: cf4e6b319286981a71942bf8cef68bc4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-16T17:33:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Aldecinei Bastos Siqueira.pdf: 11876927 bytes, checksum: cf4e6b319286981a71942bf8cef68bc4 (MD5) Previous issue date: 2010-06-11 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Piper peltatum (Piperaceae) and Ampelozizyphus amazonicus (Rhamnaceae) are species that have important medicinal features proven, for example, the action against malaria. Both are used as medicinal by the Amazonian peoples, and are obtained exclusively by the practice of extraction. These species are not scientifically well-known, and, due to their potential, studies about methodologies for the conservation of genetic resources and the domestication of these species are necessary. The objectives of this study were to locate and characterize, based on field observation and environmental data base, the natural populations of these species along the Amazon River, and developing strategies for conservation of Ampelozizyphus amazonicus and Piper peltatum germplasm by minimum growth techniques and sub-zero and cryogenic temperatures. For in vitro conservation minimum growth techniques were used. The maintenance of P. peltatum microshoots was evaluated under different temperatures (10 °C, 20 °C and 25 °C) and different salts concentrations in MS medium. Microshoots of P. peltatum and Ampelozizyphus amazonicus were subjected to different concentrations of sucrose, mannitol and sorbitol (1%, 2% and 3%). Microshots of P. peltatum were also subjected to culture media with different concentrations of sucrose, mannitol and sorbitol (1%, 2% and 3%) with or without salicylic acid (SA). Seeds conservation of Piper peltatum were evaluated under sub-zero (-20 °C) and cryogenic (-196 °C) temperatures. For seeds preservation under sub-zero temperatures, the seeds were desiccated for 0h, 24h and 48h and maintained for 0, 90 and 180 days in temperature of -20 °C. For cryopreservation, seeds were immersed in liquid Nitrogen for 24h, and stored with or without other cryoprotectors. Field observation and the data base demonstrate that most of sampling areas visited are under anthropic deforestation. The In vitro maintenance of P. peltatum microshoots was more efficient in the temperature of 20 °C. The use of mannitol for conservation in vitro resulted in high mortality rates of the microshoots of both species. In vitro conservation of P. peltatum in function of sucrose, mannitol e sorbitol and different concentrations of SA, the best results are obtained in the absence of AS. Germination rates were satisfactory when the seeds of Piper peltatum were dried for up to 48 hours and stored for up to 180 days at -20 ° C. The seeds were also tolerant to cryopreservation, regardless of the use of cryoprotectants. It is possible the conservation of the species in vitro for up to 180 days by reducing the growth temperature. The addition of mannitol and sorbitol, for the concentrations tested, are inadequate for in vitro conservation of A. amazonicus microshoots. Sorbitol may be used in P. peltatum conservation in concentrations between 1% and 2% in MS medium. Piper peltatum seeds are tolerant to desiccation and exposure to subzero and cryogenic temperatures, suggesting that Piper peltatum seeds are orthodox. / Ampelozizyphus amazonicus Ducke (Rhamnaceae) e Piper peltatum L. (Piperaceae) são espécies que possuem características medicinais importantes comprovadas cientificamente, dentre essas a ação contra a malária. Ambas são usadas como medicinais pelas populações da Amazônia, que as obtêm exclusivamente pela prática do extrativismo. As espécies são pouco conhecidas sob o ponto de vista científico e devido ao potencial que estas apresentam, são necessários estudos a respeito de metodologias para a conservação dos recursos genéticos e domesticação destas espécies. Este trabalho teve por objetivo localizar populações naturais de Ampelozizyphus amazonicus e Piper peltatum ao longo dos rios Solimões e Amazonas, caracterizar por meio de observações nas áreas de coleta e informações de bases de dados as condições ambientais das populações, e desenvolver estratégias para a conservação de germoplasma por técnicas de crescimento mínimo, temperaturas sub zero e criogênicas. Para a conservação in vitro utilizaram-se técnicas de conservação in vitro por crescimento mínimo. Foi avaliada a manutenção de microestacas de Piper peltatum sob diferentes temperaturas (10 °C, 20 °C e 25 °C) e o cultivo em diferentes concentrações dos sais do meio de cultura MS. Microestacas de Ampelozizyphus amazonicus e Piper peltatum foram submetidas a diferentes concentrações de sacarose, manitol e sorbitol (1%, 2% e 3%). Em outro ensaio microestacas de Piper peltatum foram cultivadas em meio de cultura com diferentes concentrações de sacarose, manitol e sorbitol (1%, 2% e 3%) adicionado ou não de ácido salicílico (AS). Foram realizados ensaios de conservação de sementes de Piper peltatum, estas foram submetidas a conservação por temperaturas sub zero (-20 oC) e criogênicas (-196 oC). Para a conservação de sementes sob temperatura sub zero, inicialmente as sementes foram dessecadas por 0h, 24h e 48h e conservadas por 0, 90 e 180 dias, a -20 °C de temperatura. Para a criopreservação, as sementes foram testadas quanto à tolerância a imersão por 24 horas em Nitrogênio líquido (NL) e quanto ao uso ou não de diferentes tipos de crioprotetores. As observações ambientais realizadas e as informações das bases de dados demonstram que a maior parte das áreas de coleta visitadas está sob ação antrópica de desmatamento. A manutenção in vitro de microestacas de Piper peltatum a 20 °C de temperatura foi a mais eficiente na conservação in vitro sob diferentes temperaturas. O uso do manitol para a conservação in vitro resultou no aumento das taxas de mortalidade das microestacas de ambas as espécies estudadas. Para a conservação in vitro de P. peltatum em função da sacarose, manitol e sorbitol e diferentes concentrações de AS, os melhores resultados das culturas sobreviventes são obtidos na ausência de AS. A conservação de sementes de Piper peltatum apresentou taxa de germinação satisfatória quando dessecadas por até 48 horas e conservadas por até 180 dias à -20 °C de temperatura. As sementes foram tolerantes à criopreservação independentemente do uso de crioprotetores. Conclui-se que é possível a conservação in vitro de P. peltatum por até 180 dias pela redução da temperatura de crescimento. A adição de manitol e sorbitol, nas concentrações testadas, são inadequadas para a conservação in vitro de microestacas de A. amazonicus. O sorbitol pode ser usado na conservação de P. peltatum em intervalo de 1% a 2% da concentração adicionado ao meio de cultura de MS. As sementes de Piper peltatum são tolerantes à dessecação e à exposição às temperaturas sub zero e criogênicas, sugerindo que se trata de semente do tipo ortodoxa.

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:13:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ronan Maciel Marcos.pdf: 4015895 bytes, checksum: 8eccb9bdeae1bd75f757e535ee696dd1 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Fundação Araucária / The aim of this work were: evaluate sperm and seminal parameters of surubim-do-Iguaçu males and evaluate the effect of dilution, temperature and storage time of semen on them, besides determine the viability and describe the kinetics of activation of sperm cells of S. melanodermatum cryopreserved in different extenders. For the realization this work was divided into two sections: a) Spermatic and seminal parameters of surubim do Iguaçu, and short-term semen storage. It was collected semen from nine males hormonally induced. The spermatic parameters evaluated were: sperm motility (MOT), curvilinear velocity (VCL), straight-line velocity (VSL), average path velocity (VAP), sperm velocity (SV), time total of sperm activation (TEMP), sperm concentration (CONC), normal sperm morphology index (NORM), seminal plasma osmolality (OSM) and pH of semen (pH). Samples of semen were stored in microtubes to evaluate the effect of dilution (aqueous solution containing 5% fructose and 5% milk powder), temperature (10 and 25°C) and storage time (0, 5, 9, 18 , 27, 36, 45, 54 hours) on the MOT, VCL, VSL, VAP and TEMP. Males released on average 10.57 ± 6.28 mL and the sperm showed 99,86±0,31% of MOT, 185,58±14,11&#956;m.s-1 of VCL, 49,15 ±4,66&#956;m.s-1 of VSL, 87,02±4,13 &#956;m.s-1 of VAP, 106,52 ±4,45&#956;m.s-1 of VE, 79,31±5,62s of TEMP, 1,03x1010±3,65x109 células.mL-1 of CONC, 75,81±5,71% of NORM, 258,78±29,36mOsm of OSM and 7,11±0,31 of pH. b) Motility and kinetics activation of sperm cells cryopreserved in different extenders. Were collected semen samples from five males, hormonally induced, these submitted to the protocol of cryopreservation with the use of twelve extenders, formulated with the use of glucose, fructose, milk powder, DMSO, propylene glycol and methanol. The cryopreserved semen was thawed and evaluated for the parameters: sperm motility (in 10 seconds after activation), theoretical initial motility, sperm velocity, index of normality and the elapsed times for 75%, 50% and 25% of the sperm stay mobile. The fresh semen was evaluated for the same parameters. The solution containing 2.5% fructose, 5% milk powder and 10% methanol had higher (P <0.05) rate of normality (71.13 ± 4.79%) and higher initial motility (85.56 ± 15.31%). By using the solution containing 5% fructose, 5% milk powder and 10% methanol was found highest averages for the parameters: sperm motility in 10s after activation (78.99 ± 27.20%), sperm velocity (75.62 ± 18.76 &#956;m.s-¹) and this solution prolonged the sperm activation. The semen samples stored undiluted and maintained at 10 or 25°C showed higher averages for MOT. Is indicated storage of semen S. melanodermatum un diluted until 27 hours and cryopreservation using the extender solution containing 5% fructose, 5% milk powder and 10% methanol in aqueous solution. / Os objetivos deste estudo foram: avaliar os parâmetros seminais e espermáticos de Steindachneridion melanodermatum, bem com o efeito da diluição, da temperatura e tempo de estocagem do sêmen, além de avaliar a motilidade e descrever a cinética da ativação de células espermáticas de S. melanodermatum criopreservadas em diferentes soluções diluidoras. Para a realização do trabalho este foi dividido em duas seções: a) Parâmetros seminais e espermáticos do surubim do Iguaçu e estocagem do sêmen por curto prazo e b) Motilidade e cinética da ativação de células espermáticas criopreservadas em diferentes diluidores. No primeiro ensaio foi coletado o sêmen de nove machos, induzidos hormonalmente. Avaliou-se os parâmetros: motilidade espermática (MOT), velocidade curvilinear (VCL), velocidade em linha reta (VLR), velocidade média de deslocamento (VMD), velocidade espermática (VE), tempo total de ativação espermática (TEMP), concentração espermática (CONC), índice de normalidade morfológica dos espermatozoides (NORM), osmolaridade do plasma seminal (OSM) e pH do sêmen (pH). Amostras do sêmen foram estocadas em microtubos para a avaliação do efeito da diluição (solução aquosa contendo 5% de frutose e 5% de leite em pó), temperatura (10 e 25ºC) e tempo de estocagem (0, 5, 9, 18, 27, 36, 45, 54 horas) do sêmen sobre a MOT, VCL, VLR, VMD, TEMP. Os machos liberaram em média 10,57±6,28 mL e os espermatozoides apresentaram 99,86±0,31% de MOT, 185,58±14,11&#956;m.s-1 de VCL, 49,15 ±4,66&#956;m.s-1 de VLR, 87,02±4,13 &#956;m.s-1 de VMD, 106,52 ±4,45&#956;m.s-1 de VE, 79,31±5,62s de TEMP, 1,03x1010±3,65x109 células.mL-1 de CONC, 75,81±5,71% de NORM, 258,78±29,36mOsm de OSM e 7,11±0,31 de pH. No segundo ensaio foram coletadas amostras de sêmen de cinco machos, induzidos hormonalmente, que foram submetidas protocolo de criopreservação com a utilização de doze soluções diluidoras, formuladas com a utilização de glicose, frutose, leite em pó, DMSO, propileno glicol e metanol. O sêmen criopreservado foi descongelado e avaliado quanto aos parâmetros: motilidade espermática (10s após a ativação), motilidade inicial teórica, velocidade espermática, índice de normalidade, e os tempos decorridos para que 75%, 50% e 25% dos espermatozóides permanecessem móveis. O sêmen fresco foi avaliado em relacão aos mesmos parâmetros. A solução contendo 2,5% frutose, 5% leite em pó e 10% metanol apresentou maior (P<0,05) índice de normalidade (71,13±4,79%) e maior motilidade inicial (85,56±15,31%). Com a utilização da solução contendo 5% frutose, 5% leite em pó e 10% metanol foram encontrados maiores médias para os parâmetros: motilidade espermática em 10s após a ativação (78,99±27,20%), velocidade espermática (75,62±18,76 &#956;m.s-¹) e esta solução prolongou a ativação espermática. As amostras de sêmen estocadas não diluídas e mantidas a 10 ou 25ºC apresentaram maiores médias para MOT. Indica-se a estocagem do sêmen S. melanodermatum não diluído por até 27 horas e a criopreservação com a utilização de solução crioprotetora contendo 5% frutose, 5% de leite em pó e 10% de metanol em solução aquosa.

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:13:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giovano Neumann.pdf: 1483055 bytes, checksum: 73310de09daeb1b45d1ac1eda6a64ce0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This dissertation is based on the development of two separate scientific papers. (1) First article it is a scientometric analysis: In 2007 was released in the scientific means by Wilson-Leedy and Ingermann, the first article using the CASA free software in sperm mobility analysis for fish, for this study, from of scientometric techniques, the contribution has been assessed and the impact that the article caused the scientific community. It also evaluated the frequency in the number of publications using andrologic analysis in fish, from 2007 to 2014 in four magazines that publish articles related to this topic. Were evaluated under articles made soundness analysis in fish using any existing CASA system, the variables used and ways to interpret the results to determine the sperm viability and correlate the sperm motion parameters with the potential fertilization. For scientometry CASA launching the contribution in free software took place in the google scholar search to get all the work that had quoted the article. For scientometry of items with fish using CASA, was conducted using the search index of ScienceDirect. And to assess the variables and the interpretations made by the authors, harvest characteristics of the materials and methods and results in the articles. It was found 123 quotes Wilson-Leedy article and Ingermann these, 94 are articles, of which 66 were performed with fish, and 35 of these conducted their research using CASA in free software, and there was an increase of 85% in citing publications the author reference. In the search for articles that use in fish soundness analysis, an increase of 59.4% from 2007 to 2014. Of the publications articles using any home system for the assessment of sperm motility in fish, 75.76% of the two work assesses or more times the spermatic movement, 51.52% use at least four of the characteristics generated by CASA, about ¼ of the work validated the CASA results with fertilization and hatching of eggs and used statistical models to group correlated variables CASA and explanations them, less than 10% of articles explores statistical modeling in sperm kinetics and to explain the characteristics generated by CASA on sperm fertility. The article by Wilson-Leedy and Ingermann contributed to the advancement of research with fish sperm, and sperm was used in the evaluation of other animals and other cells also concluded that little is known of the relationship of some sperm variables generated by CASA with fertility sperm in fish. And the researchers do not use in full the resources of the CASA system. (2) According to an article this is an experiment of artificial reproduction: The objective of this study was to evaluate the interactive effects of the relationship or independent mobile sperm: oocyte and sperm speed on artificial reproduction procedures with the use of semen catfish (Rhamdia quelen) cryopreserved. Through the Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) were evaluated in six replicates motility and sperm velocity of cryopreserved semen from eight seconds of its activation and to each according to the end of the spermatic movement. For the fertilization test an experimental design was used in a factorial (6x3x3) consists of six mobile sperm relations: oocyte (70,000, 90,000, 110,000, 130,000, 150,000 and 170,000), three sperm speeds (60, 40 and 20&#956;m.s-1) and three experimental replicates or blocks (pools of oocytes from three groups of female). Activation curves of sperm (kinetic) have been prepared with the help of non-linear statistical model. The effects were evaluated on the fertilization, hatching and normal larvae. In evaluating the variables, the response surface analysis showed no interaction effect (p>0.05) between the relationship moving sperm: oocyte and sperm speed, on the fertilization rates, hatching and normal larvae. Only linear effect was found (p<0.05) of sperm speed under the fertilization rates and hatching eggs. According to the results, it is concluded that there is no difference between the use of 70,000 up to 170,000 mobile sperm for each oocyte on the reproductive success in terms of fertilization rate, hatching and larval normality of catfish (Rhamdia quelen) and that the value of the sperm velocity is decisive on the reproductive success of sperm catfish (Rhamdia quelen) decreasing the fertilization and hatching rates as decreases sperm speed. / Esta dissertação baseia-se na elaboração de dois artigos científicos distintos. (1) Primeiro artigo trata-se de uma análise cientométrica: Em 2007 foi lançado no meio cientifico por Wilson-Leedy e Ingermann, o primeiro artigo utilizando o CASA em software livre em análise de mobilidade espermática para peixes, para este estudo, a partir de técnicas cientométricas, foi avaliado a contribuição e o impacto que o artigo provocou na comunidade cientifica. Também foi avaliada a frequência no número de publicações utilizando analises andrológicas em peixes, desde 2007 à 2014 em quatro revistas que publicam artigos referentes a este tema. Foram avaliados sob artigos que realizaram analise andrológica em peixes utilizando algum sistema CASA existente, as variáveis utilizadas e as formas de interpretação dos resultados para determinar a viabilidade espermática e correlacionar os parâmetros de movimento espermático com o potencial de fertilização. Para a cientometria da contribuição do lançamento do CASA em software livre foi realizada busca no google acadêmico para levantar todos os trabalhos que haviam citado o artigo. Para a cientometria dos artigos com peixes utilizando o CASA, foi realizado busca utilizando o indexador da ScienceDirect. E para avaliar as variáveis e as interpretações realizadas pelos autores, colhemos suas características dos materiais e métodos e resultados nos artigos. Encontrou-se 123 citações do artigo de Wilson-Leedy e Ingermann destes, 94 são artigos, dos quais 66 foram realizados com peixes e, 35 destes realizaram suas pesquisas utilizando o CASA em software livre, e ocorreu um aumento de 85% nas publicações citando o autor referência. Na busca de artigos que utilizam analise andrológica em peixes, ocorreu um aumento de 59,4% das publicações de 2007 à 2014. Dos artigos que utilizam qualquer sistema CASA para a avaliação da mobilidade espermática em peixes, 75,76% dos trabalhos avalia dois ou mais tempos do movimento espermático, 51,52% utiliza pelo menos quatro das características geradas pelo CASA, aproximadamente ¼ dos trabalhos validou os resultados do CASA com fertilização ou eclosão dos ovos e usou modelos estatísticos para agrupar as variáveis correlacionadas do CASA e explica-las, menos de 10% dos artigos explora modelagem estatística na cinética espermática e para explicar as características gerados pelo CASA sobre a fertilidade espermática. O artigo de Wilson-Leedy e Ingermann contribuiu para o avanço das pesquisas com espermatozoides de peixes, e foi utilizado na avaliação espermática de outros animais e outras células, também concluímos que pouco se sabe da relação de algumas variáveis espermáticas geradas pelo CASA com a fertilidade espermática em peixes. E que os pesquisadores não utilizam em sua totalidade os recursos do sistema CASA. (2) Segundo artigo trata-se de um experimento de reprodução artificial: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos interativos ou independentes da relação espermatozoides móveis:ovócito e da velocidade espermática em procedimentos de reprodução artificial com o uso do sêmen do jundiá (Rhamdia quelen) criopreservado. Através do Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) foram avaliadas em seis réplicas a motilidade e a velocidade espermática do sêmen criopreservado a partir de oito segundos da sua ativação e a cada um segundo até o termino do movimento espermático. Para o ensaio de fertilização foi aplicado um delineamento experimental em esquema fatorial (6 x 3) composto de seis relações espermatozoides móveis:ovócito (70.000, 90.000, 110.000, 130.000, 150.000 e 170.000), três velocidades espermáticas (60, 40 e 20µm.s-1) e três réplicas ou blocos experimentais (pools de ovócitos provenientes de três grupos de fêmeas). As curvas de ativação dos espermatozoides (cinéticas) foram elaboradas com auxílio de modelo estatístico não linear. Os efeitos foram avaliados sobre as taxas de fertilização, eclosão e larvas normais. Na avaliação das variáveis, a análise de superfície de resposta não mostrou efeito interativo (p>0,05) entre a relação espermatozoides móveis:ovócito e as velocidades espermáticas, sobre as taxas de fertilização, de eclosão e de larvas normais. Somente foi encontrado efeito linear (p<0,05) da velocidade espermática sob as taxas de fertilização e de eclosão dos ovos. De acordo com os resultados, conclui-se que não há diferença alguma entre uso de 70.000 até 170.000 espermatozoides móveis para cada ovócito sobre o sucesso reprodutivo em termos de taxa de fertilização, eclosão dos ovos e normalidade larval do jundiá (Rhamdia quelen) e, que o valor da velocidade espermática é determinante sobre o sucesso reprodutivo dos espermatozoides de jundiá (Rhamdia quelen) diminuindo as taxas de fertilização e eclosão conforme diminui a velocidade espermática.

A criopreservação de sêmen humano tem sido amplamente utilizada como método de preservação da fertilidade. A fim de reduzir os danos causados pelo processo de congelamento, diversos estudos utilizaram substâncias antioxidantes e estimulantes, porém, sua eficácia, bem como seu papel no controle funcional dos espermatozoides, não está bem estabelecida na literatura. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito da suplementação de melatonina e cafeína nas características estruturais e funcionais de espermatozoides pré-criopreservação e pós-descongelamento. Para isso, este estudo prospectivo utilizou 30 amostras seminais de pacientes entre 19 e 45 anos de idade da rotina do Laboratório Androscience entre maio de 2013 e maio de 2017. Todas as amostras foram classificadas como normozoospérmicas, segundo análise seminal inicial de acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS). Em seguida, as amostras foram criopreservadas com Human Tubal Fluid modificado sem suplemento ou com 2mM de melatonina. Após o descongelamento, as amostras foram analisadas ou suplementadas com 2 mM de cafeína, incubadas por 15 minutos. Ao final dos experimentos, obtivemos 4 grupos: Amostras pós-descongelamento sem suplementação (CONT), amostras suplementadas com cafeína (CAF), melatonina (MEL) e cafeína + melatonina (CM). Parâmetros seminais de contagem, motilidade e cinética, analisados pelos critérios da OMS e pelo software SCA®, a atividade mitocondrial, pela coloração por diaminobenzidina, avaliação da taxa de fragmentação de DNA, pelo método SCSA® e a dosagem dos níveis de radicais livres de oxigênio (ROS), pelo método de luminescência, foram realizados pré-criopreservação e pós-descongelamento com ou sem suplementação. Os dados foram analisados pelo teste T de Student pareado e pela análise de variâncias de uma via com medidas repetidas, seguida pelo pós-teste de Holm-Sidak, e adotado um alfa de 5%. Observamos redução significativa concentração espermática (p < 0,001), motilidade total (p < 0,001) e progressiva (p < 0,001), parâmetros cinéticos (p < 0,009) e atividade mitocondrial (p < 0,001) e aumento das taxas de fragmentação de DNA (p=0,046) e ROS (p=0,052) nas amostras CONT quando comparadas com as amostras a fresco. Quando suplementadas com cafeína e melatonina, observamos aumento da motilidade progressiva nos grupos CAF (p=0,005) e CM (p=0,048) e aumento da atividade mitocondrial no grupo CM (p < 0,05). Podemos concluir que a associação da suplementação com cafeína e melatonina nas amostras pré-criopreservação e pós-descongelamento demonstrou ser uma ferramenta importante para ser aplicada em amostras criopreservadas para atuarem como substâncias estimuladoras de motilidade espermática / Human semen cryopreservation has been widely used as a method of preserving fertility. In order to reduce the damages caused by the freezing process, several studies used antioxidant and stimulant substances, however, their efficiency as well as their role in the functional control of spermatozoa have not been well established in literature. Thus, the goal of this study was to investigate the effect of melatonin and caffeine supplementation on the structural and functional characteristics of pre-cryopreservation and post-thaw spermatozoa. For this, this prospective study used 30 seminal samples from patients aged from 19 to 45 years in the routine of the Androscience Laboratory between May 2013 and May 2017. All samples were classified as normozoospermic, according to the initial seminal analysis following criteria of the World Health Organization (WHO). Then, the samples were cryopreserved with modified Human Tubal Fluid without supplement or with 2 mM of melatonin. After thawing, the samples were analyzed or supplemented with 2 mM of caffeine, and incubated for 15 minutes. At the end of the experiments, we obtained 4 groups: Post-thaw samples without supplementation (CONT), samples supplemented with caffeine (CAF), melatonin (MEL) and caffeine + melatonin (CM). Seminal parameters for count, motility and kinetics, analyzed by WHO criteria and by the SCA® software, mitochondrial activity, by diaminobenzidine staining, evaluation of DNA fragmentation rate, by the SCSA® method, and dosage of radical oxygen species (ROS) levels, by the luminescence method, pre-cryopreservation and post-thaw were carried out with or without supplementation. The data were analyzed by the paired Student\'s t-test and by one-way analysis of variance with repeated measurements, followed by the Holm-Sidak post-test, adopting an alpha of 5%. We observed a significant reduction in sperm concentration (p < 0.001), total (p < 0.001) and progressive (p < 0.001) motility, kinetic parameters (p < 0.009) and mitochondrial activity (p < 0.001), and increased rates of DNA fragmentation (p=0.046) and ROS (p=0.052) production in the CONT samples when compared with fresh sample. When supplemented with caffeine and melatonin, we observed an increase in progressive motility in the CAF (p=0.005) and CM (p=0.048) groups, and an increase in mitochondrial activity in CM group (p < 0.05). We can conclude that that the combination of caffeine and melatonin supplementation in pre-cryopreservation and post-thaw samples proved to be an important tool to be applied in cryopreserved samples to act as substances that stimulate sperm motility