Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao em pdf.pdf: 3843489 bytes, checksum: cf2e697dbd0b8d0de2ae9be8b74192c6 (MD5) Previous issue date: 2008-03-27 / Even with the advances that have allowed a better understanding of pathogenesis, epidemiology and prevention of infection, approximately 33.2 million people worldwide are suffering from HIV / AIDS. The HIV / AIDS is considered a pandemic, causing a major demographic impact due to the devastating infection among young adults. According to the Organization of the United Nations fighting AIDS (UNAIDS), despite a reduction in the overall number of new infections, this index is still very high, and the sexually transmission still the more frequent form of HIV infection. In order to interrupt transmission efficiently an accurate and fast diagnosis is pivotal. The great majority of diagnostic methods for HIV are based in the detection of antibodies specific to different proteins of the virus or the detection of its genetic material. Therefore delay in obtaining accurate results affects negatively prevention and treatment strategies. In the present study, we examined the effectiveness and cost of a rapid test (Rapid Check) as an alternative method in the serological diagnosis workflow for HIV infection. Three hundred and eight serum samples sent to LACEN-ES between October 2006 and May 2007 were analyzed. Both the Rapid Check and the prototype Tri-line depicted a high degree of concordance (98.97%) compared to other tests used for diagnosis of HIV infection at the LACEN-ES. In parallel, from 16 samples with results considered as "inconclusive" by the normal workflow due to absence or low reactivity of anti-gp41, only 3 out of these 16 were still considered inconclusive after using the Rapid Check. In addition to its efficiency, when cost were considered, rapid tests had the lowest cost/test, and required the shortest time to provide a final result (less than 15 minutes) not requiring additional equipment, accessories or specific infrastructure. Therefore, we believe that rapid tests with performance equal to or greater than the Rapid Check could be used as an alternative method at the Immunofluorescence, thus promoting a reduction in the cost and time of release of results. / Mesmo com os avanços que permitiram uma melhor compreensão da patogênese, epidemiologia e prevenção da infecção, cerca de 33,2 milhões de pessoas no mundo são portadoras de HIV/AIDS. A infecção pelo HIV/AIDS é considerada uma pandemia, causando um importante impacto demográfico, devido à infecção devastadora de adultos jovens. Segundo Organização das Nações Unidas para combate a AIDS (UNAIDS) apesar de uma redução no número global de novas infecções, este índice ainda é muito elevado, sendo a transmissão sexual a forma de contágio mais freqüente. Para que a cadeia de transmissão seja interrompida eficientemente é necessário que o diagnóstico dos casos seja preciso e rápido. Os métodos de diagnóstico para o HIV se baseiam, em sua maioria, na detecção de anticorpos específicos para as diferentes proteínas do vírus ou na detecção de seu material genético. Portanto o atraso na obtenção dos resultados afeta negativamente os programas de prevenção e tratamento. Neste estudo, foram analisados a efetividade e o custo da utilização de um teste rápido (Rapid Check) como método alternativo no fluxograma de diagnóstico sorológico da infecção pelo HIV. Para isso, foram analisadas 308 amostras de soro encaminhadas para o LACEN-ES entre outubro de 2006 e maio de 2007. Tanto o Rapid Check quanto o protótipo Tri-line apresentaram alto grau de concordância (98,97%) quando comparados a outros testes utilizados para o diagnóstico da infecção pelo HIV no LACEN-ES. Paralelamente, das 16 amostras com resultados considerados como inconclusivos pelo fluxograma normal, devido a ausência ou baixa reatividade de anticorpos anti-gp41, apenas em 3 delas o Rapid Check foi incapaz de produzir um resultado conclusivo. Paralelamente à eficiência, ao se considerar o custo, os testes rápidos apresentam custo inferior aos demais métodos, além de necessitarem de um tempo de execução menor (15 minutos) e não necessitarem de equipamentos, acessórios e infra-estrutura específica adicionais. Portanto, acreditamos que testes rápidos com a performance igual ou superior a do Rapid Check poderiam ser utilizados como método alternativo junto à Imunofluorescência, promovendo assim uma redução no custo e no prazo de liberação de resultados.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Cynthia.pdf: 1641533 bytes, checksum: 56ac8be8ae2e1e0e55c011b99fe0d3aa (MD5) Previous issue date: 2009-03-20 / Rapidly growing mycobacteria (RGM) can cause a wide spectrum of disseminated or localized diseases, especially pulmonary, skin, or soft tissue infections. In last years infections due to contaminated materials and invasive procedures have been also increasingly reported. Recent outbreaks of infections affecting more than 1000 patients submitted to different invasive procedures in Brazil underscores this issue. Of the RGM, members of the M. chelonae - M. abscessus group are the most pathogenic and antimicrobial resistant. Even with multiple drug combinations, multiresistant RGM infections may be difficult to cure. In this study we describe the molecular identification, typing and in vitro susceptibilities to antimicrobial agents of RGM involved in recent infections in Brazil. The study was carried out in two groups of RGM isolates: one group recovered from different outbreaks (75 isolates) and a second group recovered from sporadic infections (10 isolates). hsp65 and rpoB gene sequencing was used for discrimination between species of M. chelonae - M. abscessus group and pulsed field gel electrophoresis (PFGE) was used to evaluate possible clonal relatedness and diversity among the isolates. Broth microdilution MICs of 15 antimicrobial agents were determined for these clinical isolates. Three species were identified in RGM outbreaks: M. massiliense from video assisted surgeries; M. bolletii from mesotherapy and M. abscessus from liposuction and mammaplasty. Molecular typing by PFGE demonstrated the clonal relatedness within M. massiliense isolates and within M. abscessus isolates. Mesotherapy and pulmonary isolates presented different PFGE patterns. Our results showed that the isolates drug resistance does not differed markedly by PFGE pattern. The resistance rates of these isolates to the currently available agents were high. The majority of M. massiliense isolates was susceptible to clarithromycin, amikacin and tigecyclin, whereas M. bolletii and M. abscessus isolates were susceptible only to amikacin and tigecyclin and moderately susceptible to cefoxitin. In conclusion, despite in vitro drug sensitivity tests limitations, the results provided may be sufficient to guide clinicians in selecting appropriate therapy for RGM infections. / Micobactérias de crescimento rápido (MCR) podem causar um amplo espectro de doenças, desde infecções cutâneas superficiais até doenças disseminadas graves. Relatos de infecções adquiridas devido ao uso de materiais contaminados e a procedimentos cirúrgicos invasivos têm aumentado nos últimos anos. Os surtos ocorridos recentemente no Brasil e que afetaram mais de 1000 pacientes comprovam este fato. Entre as espécies de MCR, aquelas pertencentes ao grupo M. chelonae - M. abscessus são as mais patogênicas e resistentes aos antimicrobianos. Mesmo em vigência de poliquimioterapia, pacientes portadores de infecções causadas por MCR podem não obter cura clínica. Neste estudo, identificamos espécies de MCR envolvidas em surtos e infecções esporádicas no Brasil no período de 2004 a 2008 e analisamos seus perfis genotípicos e de sensibilidade a antimicrobianos. Para isso, realizamos o estudo em dois grupos de MCR: o primeiro constituído por isolados relacionados a surtos (75 isolados) e o segundo por isolados não relacionados a surtos (10 isolados). O seqüenciamento dos genes hsp65 e rpoB foi utilizado para diferenciar entre as espécies do grupo M. chelonae - M. abscessus e a eletroforese em campo pulsátil (PFGE) para avaliar possíveis semelhanças entre os perfis genotípicos. A determinação das concentrações inibitórias mínimas (MIC) de 15 antimicrobianos frente aos isolados de MCR foi determinado pelo método de microdiluição em caldo. A partir dos testes realizados, foram identificadas 3 espécies de MCR relacionadas a surtos: M. massiliense, relacionado a videocirurgias; M. bolletii relacionado a mesoterapia; e M. abscessus, relacionado a cirurgias estéticas. A análise genotípica por PFGE desses isolados permitiu demonstrar ou comprovar a relação clonal entre os isolados de M. massiliense e entre os isolados de M. abscessus. Porém, os isolados provenientes de mesoterapia e infecções esporádicas apresentaram diferentes perfis genotípicos. As espécies analisadas, independentemente de sua origem (surto ou infecção esporádica) apresentaram uma ampla resistência in vitro aos antimicrobianos. Isolados de M. massiliense só apresentaram sensibilidade in vitro à claritromicina, amicacina e tigeciclina, enquanto os isolados de M. bolletii e M. abscessus foram sensíveis somente à amicacina e tigeciclina e moderadamente sensíveis à cefoxitina. Em conclusão, a análise ampla dos perfis genotípicos e, sobretudo de resistência, como efetuado neste trabalho, mesmo com as limitações próprias de um critério fenotípico in vitro, pode auxiliar o médico na fundamentação do esquema terapêutico.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HELMINtiASE INTESTINAL.pdf: 1507224 bytes, checksum: 6132aca0f1aadf166d4e2b773c982a74 (MD5) Previous issue date: 2009-04-27 / Mycobacterium tuberculosis (MTB) é um exemplo clássico de patógeno para o qual a resposta protetora depende da imunidade celular do tipo Th1, que é caracterizada pela presença de linfócitos T CD4+ produtores de IFN-g. Essa citocina ativa mecanismos microbicidas no macrófago infectado, levando à eliminação do bacilo. Evidências sugerem que a progressão para a tuberculose esteja relacionada à presença de mecanismos imunossupressores mediados por citocinas e por células T reguladoras. Acredita-se que a presença de helmintíase intestinal possa prejudicar o desenvolvimento de uma resposta adaptativa capaz de conter ou eliminar o MTB, tornando assim o indivíduo susceptível ao adoecimento. Para aquilatar a influência da infecção por helmintos intestinais na resposta celular durante a tuberculose pulmonar, neste trabalho, foram avaliados os perfis quantitativo e fenotípico de populações celulares de sangue periférico e o padrão de citocinas em culturas de sangue total estimuladas com antígenos de MTB, em pacientes portadores de tuberculose pulmonar apresentando ou não helmintíase intestinal no momento do diagnóstico e durante a terapia antituberculose. Para isso, foram arrolados 53 pacientes com diagnóstico recente de tuberculose pulmonar. Desses, 26% eram portadores de pelo menos uma espécie de helminto intestinal. Pacientes com tuberculose pulmonar apresentaram uma redução significativa nos números de linfócitos T CD8+, células NK e NKT. Os indivíduos com helmintíase intestinal associada à tuberculose apresentaram uma maior freqüência de células T reguladoras, com ambos os fenótipos CD4+CD25HIGH e CD4+CD25HIGHFoxp3+. Além disso, os resultados sugerem que a presença de infecção por helmintos intestinais tenha induzido um estado de hipoergia em pacientes portadores de tuberculose pulmonar, uma vez que esses pacientes apresentaram concentrações menores das citocinas IL-2, TNF-a, IL-4, IL-5 e IL-10 nos sobrenadantes de culturas em relação às concentrações encontradas no grupo TB e no grupo controle. Portanto, os resultados desse trabalho sugerem que a presença de infecção por helmintos intestinais tenha um impacto negativo na resposta imunitária à tuberculose em pacientes portadores de tuberculose pulmonar. / The protection against Mycobacterium tuberculosis (MTB) depends on a cellmediated Th1 type-immune response. This response is characterized by IFN-g production by CD4+ T cells, which activates macrophages to enhance microbicidal mechanisms leading to the bacillus eradication. Factors related to tuberculosis resistance or susceptibility are not completely understood. There are evidences suggesting that the progress to active disease is related to immune downregulation caused by suppressors cytokines and regulatory T cells. It is believed that the association with helminth infection can disturb the protective immune response that should contain or eliminate MTB. Here, we investigated the role of intestinal helminth infection on M. tuberculosis specific immune response during active pulmonar tuberculosis in patients with associated tuberculosis and intestinal helminth infection at the time of diagnosis and during tuberculosis therapy. Quantitative and phenotypic analyses of peripheral blood cells populations were performed and the MTBstimulated whole blood culture cytokines production was evaluated. Fifty-three patients with newly diagnosed tuberculosis were enrolled for this study. Twenty-six percent of these patients were infected with at least one intestinal helminth (TB + HELM patients). Patients with pulmonary tuberculosis presented a significant reduction in the numbers of TCD8+, NK and NKT cells. Patients with both intestinal helminth infection and tuberculosis presented higher frequency of regulatory T cells, of both phenotype CD4+CD25HIGH and CD4+CD25HIGHFoxp3+, as compared to TB group, to HELM group, and to control group. In addition, the results suggest a hipoergy status in TB + HELM patients because the production of the cytokines IL-2, TNF-a, IL-4, IL-5 and IL-10 decreased in whole blood culture of these patients as compared to both TB patients and healthy controls. The data from this study indicated that the associated intestinal helminth infection has a negative impact on immunity to tuberculosis in patients with tuberculosis.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AVALIACAO DO USO DE ANTI-SEPTICOS BUCAIS.pdf: 1254776 bytes, checksum: 087b10a47a1cc18ecfab1efbe191ac81 (MD5) Previous issue date: 2009-04-03 / Identifying individuals with respiratory symptoms is considered an important strategy in detecting new cases of tuberculosis (TB). Although clinical and radiographic findings play an important role in the diagnosis of TB, a positive culture of Mycobacterium tuberculosis is a definitive diagnostic evidence of this disease. However, cultures can be contaminated with organisms from the oral microbiota that avoid the multiplication of the tubercle bacili and interfere in the diagnosis, especially in paucibacillary patients. Oral antiseptics have been used as a complement to oral hygienization in order to minimize proliferation of contaminant organisms. In the present study, we assessed the efficacy of intraoral anti-sepsis methods in the reduction of culture contamination. A hundred-twenty patients with respiratory symptoms were analyzed. On the first visiting day, a sputum sample was collected after the patient was oriented to do the oral hygienization using water (control group). On the next day, the same patient was selected at random to join one of two different groups before collecting the second sputum sample: 59 patients did oral hygienization using chlorhexidine gluconate (CHX) and 61 patients did oral hygienization using cetylpyridinium chloride (CPC). The use of different concentrations of PANTA antibiotic (1X e 2X) on MGIT medium was evaluated. The contamination rate found for the group of patients that used the antiseptic CHX was significatively lower than the one observed for the group of patients that used just water for oral hygienization, especially on MGIT cultures (p= 0,0391). The contamination rate was also significatively lower when samples were inoculated on MGIT medium supplemented with PANTA 2X (p=0, 0059). These results suggest that the use of CHX in oral hygienization is effective in reducing the contamination of mycobacteria culture with other organisms. In addition, the use of MGIT medium supplemented with PANTA 2X was also helpful in reducing the culture contamination rate. / A busca de Sintomáticos Respiratórios (SRs) é uma importante estratégia para a detecção de novos casos de TB. Apesar da importância do diagnóstico clínico e da baciloscopia, a cultura continua sendo o padrão-ouro para o diagnóstico definitivo da tuberculose. No entanto, a contaminação da cultura com outros microrganismos da microbiota oral, que contaminam o meio de cultura impedindo a multiplicação dos bacilos, afeta o diagnóstico da doença, principalmente em pacientes paucibacilíferos. Uma estratégia utilizada para minimizar a presença de bactérias contaminantes e fungos que fazem parte da microbiota oral é o uso de anti-sépticos como complemento à higienização bucal. Esse estudo se propõe a avaliar através de um ensaio clínico pragmático a eficácia de métodos de anti-sepsia intrabucal na redução do número de organismos contaminantes em culturas de pacientes SRs. Para isso, foram avaliados 120 pacientes. No primeiro dia da coleta os pacientes foram orientados a realizar a higiene bucal com água (grupo controle). No dia seguinte, os mesmos pacientes foram selecionados aleatoriamente em dois grupos de estudo para realização da segunda coleta de escarro: 59 pacientes realizaram a higienização com o anti-séptico digluconato de clorexidina (CHX) e 61 pacientes fizeram a anti-sepsia com o cloreto de cetilpiridínio (CPC). Adicionalmente, foi avaliado o uso de uma concentração maior do antimicrobiano PANTA (1X e 2X) no meio MGIT. A taxa de contaminação encontrada nas amostras dos pacientes que utilizaram o anti-séptico CHX foi significativamente menor que a observada nas amostras dos pacientes que fizeram a higienização bucal somente com água, principalmente nas amostras inoculadas no meio MGIT (p= 0, 0391). Para as amostras controles inoculadas no MGIT utilizando PANTA 2X foi observada uma diminuição significativa da taxa de contaminação das culturas (p=0,0059). Esses resultados sugerem que a higienização com o anti-séptico clorexidina auxilia na diminuição da taxa de contaminação das culturas de micobactérias. Além disso, foi demonstrado que o uso de PANTA (2X) no meio MGIT ajuda na diminuição do índice de contaminação das culturas dos pacientes SRs.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliana Ferrraz de Brito.pdf: 1819028 bytes, checksum: f09d6294a2538b396426079d487e84b5 (MD5) Previous issue date: 2010-09-03 / Introdução. A acupuntura e a eletroacupuntura têm efeitos antiinflamatórios, demonstrados em modelos experimentais e em algumas observações em humanos, mas muito pouco se conhece sobre o seu impacto na evolução de infecções. Há uma observação sobre efeitos da acupuntura nas fases iniciais da sepse induzida por ligadura e punção do ceco em ratos, mostrando redução das bactérias nas primeiras 6 horas. Objetivos. Avaliar os efeitos da eletroacupuntura na evolução de uma peritonite polimicrobiana por inoculação intraperitoneal de fezes em camundongos. Material e Métodos. Camundongos suíços, machos, 6-8 semanas de idade, foram anestesiados com ketamina e xilazina e inoculados por via intraperitoneal com 4μl/g de peso corporal de uma suspensão de fezes diluídas a 1:9 (peso/vol em salina). Imediatamente após, um grupo recebia as agulhas nos pontos E-36 e VB-30, bilateralmente, permanecendo sem qualquer manipulação; o outro grupo recebeu as agulhas nos mesmos pontos, com estimulação elétrica (2 Hz) durante 30 minutos. Em um experimento se avaliou o número de neutrófilos exsudados na cavidade peritoneal 24h após a indução da peritonite e em outro experimento os animais foram acompanhados por 14 dias, quando foram eutanasiados para contagem e medida dos abscessos intraperitoneais. Resultados. Houve aumento significativo do número de neutrófilos na cavidade peritoneal e redução do número e tamanho dos abscessos intraperitoneais nos animais que receberam a eletroacupuntura. Conclusão. A eletroacupuntura aumentou a resistência dos camundongos à peritonite polimicrobiana induzida por uma suspensão de fezes. Este dado foi indicado pela maior exsudação de neutrófilos nas primeiras 24 horas e pelo menor número e tamanho dos abscessos intraperitoneais avaliados 14 dias depois da indução da peritonite. Uma explicação possível para o resultado observado seria o efeito da EA liberando mediadores do simpático e endorfinas que potencializariam a imunidade inata agindo em receptores α adrenérgicos de macrófagos peritoneais e potencializando a ação de células citotóxicas naturais / Introduction. Acupuncture and electroacupuncture have anti-inflammatory effects as demonstrated in experimental models and some observations in humans, but little is known about their impact on the evolution of infections. There is one observation on effects of acupuncture in the early stages of sepsis induced by cecal ligation and puncture in rats, showing a reduction of bacteria in the first six hours. Objectives. To study the effects of electroacupuncture on the evolution of a polymicrobial peritonitis by intraperitoneal inoculation of feces in mice. Material and Methods. Male Swiss mice, 6-8 weeks old, were anesthetized with ketamine and xylazine and inoculated by intra-peritoneal route with 4μl / g body weight of a suspension of feces diluted to 1:9 (weight / vol in saline). Immediately after, a group received the needles in points E36 and VB-30, bilaterally, remaining without any manipulation, and other group received the needles on the same points with electrical stimulation (2 Hz) for 30 minutes. In one experiment the neutrophils in the peritoneal exudates were counted 24 h after induction of peritonitis and in another experiment the animals were followed up for 14 days when they were euthanized for counting and measurement of intraperitoneal abscesses. Results. Significant increase in the number of neutrophils in the peritoneal cavity and reduction in number and size of intraperitoneal abscesses were observed in the animals receiving electroacupuncture. Conclusion. Electroacupuncture increased the resistance of mice to polymicrobial peritonitis induced by a suspension of feces. This conclusion is supported by the higher exudation of neutrophils in the first 24 hours and the lower number and size of intra-peritoneal abscesses evaluated 14 days after peritonitis induction. A possible explanation for the observed result would be the effect of EA releasing sympathetic mediators and endorphins enhancing the innate immunity by acting on α-adrenergic receptors of peritoneal macrophages and stimulating the activity of natural killer cells

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Bruna Malacarne.pdf: 2452979 bytes, checksum: bd4d5918bd0a11fc40527e153ad97a3d (MD5) Previous issue date: 2010-12-10 / A frequência de candidemia tem aumentado nas últimas décadas, com crescente ocorrência de espécies não-albicans. Candida tropicalis representa, em geral, a espécie não-albicans mais freqüente no Brasil e pode apresentar crescimento tipo trailing nos testes de microdiluição em caldo, frente a drogas azólicas, o que dificulta e confunde a leitura dos valores de concentração inibitória mínima (CIM). Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a ocorrência de candidemia causada por C. tropicalis no Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes (HUCAM), Vitória Espírito Santo, e seu perfil de suscetibilidade a fluconazol, itraconazol e anfotericina B, conforme metodologia de referência M27-A3 (CLSI, 2008), propor modificações deste teste, além de avaliar a influência de diferentes períodos de incubação e formas de leitura. Isolados de Candida tropicalis (82) testados pelo método referência foram selecionados e submetidos aos testes modificados, como incubação na temperatura de 42°C, adição de Tricostatina A (TSA) e do composto colorimétrico resazurina. Os resultados obtidos nos testes modificados foram avaliados através da determinação das concordâncias categóricas e essenciais com o teste padrão. Os resultados mostraram que no período de 2006 a 2009, a frequência de candidemia no HUCAM variou de 1,21 a 1,65 casos/1.000 admissões hospitalares e de 0,16 a 0,25 casos/1.000 pacientes-dia. C. albicans representou 45% dos episódios, seguida por C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%) e outras (C. krusei, C. guilliermondii e C. lusitaniae). Os maiores percentuais de resistência de C. tropicalis a fluconazol e a itraconazol ocorreram com 48 horas de incubação (26% versus 5% e 17% versus 1,2%, respectivamente). Foi observado que 28,05% dos isolados apresentaram crescimento tipo trailing para uma ou para as duas drogas testadas. As concordâncias categóricas e essenciais dos testes modificados, em relação à metodologia padrão, variaram de 70 a 87%, com 24 horas de incubação e para ambas a drogas. Com 48 horas de incubação, as modificações introduzidas (incubação a 42ºC e adição de TSA) propiciaram menores percentagens de concordâncias categóricas e essenciais que o método com adição de resazurina. A incubação a 42°C correlacionou com as melhores concordâncias entre as formas de leitura visual e espectrofotométrica, em comparação com o 9 método padrão. Diferentes perfis de crescimento tipo trailing foram observados, sendo que as três modificações realizadas foram eficazes em reduzir este fenômeno com 24 horas de incubação, mas apenas os métodos a 42ºC e com TSA foram capazes de reduzir o trailing com 48 horas de incubação. A análise de prontuários médicos permitiu verificar que isolado com crescimento tipo trailing apresentou resposta terapêutica satisfatória ao fluconazol e que isolado que permaneceu resistente nos testes modificados não respondeu a tratamento com fluconazol, in vivo / The frequency of candidemia has increased in recent decades, with raising occurrence of non-albicans species. In general, Candida tropicalis is the most frequent non-albicans species in Brazil and may present trailing growth in broth microdilution tests with azole drugs, which complicates and confuses the reading of MIC values. The objectives of this study were evaluate the occurrence of candidemia caused by C. tropicalis in HUCAM and your susceptibility profile with fluconazole, itraconazole and amphotericin B, according to reference methodology M27-A3 (CLSI, 2008) propose modifications in this test, and evaluate the influence of different incubation periods and ways of reading. Isolates of Candida tropicalis were selected and submitted to the modified tests: incubation temperature of 42°C, addition of TSA and colorimetric compound resazurin. The results obtained with modified tests were evaluated through essential and categorical agreements considering the reference methodology. The results showed that in the period of 2006 to 2009, the frequency of candidemia in HUCAM ranged from 1.21 to 1.65 cases / 1,000 admissions and 0.16 to 0.25 cases / 1,000 patient-days. C. albicans accounted for 45% of the episodes, followed by C. tropicalis (26%), C. parapsilosis (14%), C. glabrata (10%) and other ones (C. krusei, C. guilliermondii and C. lusitaniae). The highest percentages of resistance to fluconazole and itraconazole occurred with 48 hours of incubation (26% versus 5% and 17% versus 1.2%, respectively). 28.05% of the isolates showed trailing growth for one or both drugs. The categorical and essential agreements of the modified tests when compared with the standard methodology, ranged from 70 to 87%, with 24 hours of incubation and for both drugs. With 48 hours of incubation, the modifications (incubation at 42°C and addition of TSA) provided smaller percentages of categorical and essential agreements when compared with the addition of resazurin. The best agreement between ways of reading (visual and spectrophotometric) was obtained with the incubation at 42°C, compared with the standard method. Different trailing growth profiles were observed and the three modified methods were effective in reducing this phenomenon with 24 hours of incubation, but only the methods 42°C and TSA were able to reduce it at 48 hour. The analysis of medical records indicated that isolated with trailing growth showed 11 satisfactory therapeutic response to fluconazole and the isolated that remained resistant in the modified tests did not respond to treatment with fluconazole in vivo

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Elisa Rabello Laignier.pdf: 3953920 bytes, checksum: ff30b5335f851f01e5d5f99a62c85930 (MD5) Previous issue date: 2011-03-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os métodos de Baermann-Moraes e Koga ágar, são os mais sensíveis para identificação de larvas de Strongyloides stercoralis nas fezes, mas exigem que as mesmas sejam frescas e com larvas vivas. Neste trabalho, apresentamos um método de sedimentação simples, que permite avaliar uma grande amostra de fezes, com exame de todo o sedimento obtido, utilizando microscópio invertido. Objetivos. Desenvolver e avaliar uma metodologia de diagnóstico de larvas de S. stercoralis a partir da sedimentação espontânea de fezes, examinando todo o sedimento ao microscópio invertido e comparar a metodologia proposta com o método de Hoffman, Pons e Janer (HPJ) e com o método de Baermann-Moraes, considerado de alta sensibilidade para diagnóstico de larvas de S. stercoralis. Material e Métodos. Para avaliar a eficácia da técnica proposta, foram realizadas duas observações experimentais: (a) utilização da técnica em laboratório de rotina que realizava os exames coproparasitólogicos pelo método de Hoffman, Pons & Janer; (b) realização simultânea, na mesma amostra, do método proposto e do método de Baermann-Moraes, para comparação. Para a primeira observação, a técnica proposta foi realizada no laboratório de rotina do Hospital Cassiano Antônio de Moraes (HUCAM) e no Hospital Fundação Concórdia, de Santa Maria de Jetibá. Foram examinadas 221 amostras de fezes de pacientes atendidos nos ambulatórios do HUCAM ou internados, que também foram rotineiramente examinadas pelo método de sedimentação (HPJ). No Hospital Fundação Concórdia em Santa Maria de Jetibá, foram avaliadas simultaneamente 102 amostras consecutivas de pacientes atendidos nos ambulatórios da fundação. Para a segunda observação, foram analisadas 112 amostras de pacientes internados e atendidos no HUCAM pelo método do microscópio invertido e pelo Baermann-Moraes. As amostras foram pesadas e homogeneizadas com água corrente e bastão de vidro, no próprio recipiente e em seguida, tamisadas em gaze em um cálice de sedimentação de 250 ml. Após uma hora, as amostras foram lavadas, com água corrente e sedimentadas por mais uma hora. Todo o sedimento (aproximadamente 15 ml), acrescido de duas a três gotas de lugol, foi colocado em uma câmara de vidro de 12x8x0,5 cm, coberta com lâmina de vidro com mesma superfície e examinada em microscópio invertido, com objetivas de 4X e 10X. Toda a câmara foi analisada, sendo contadas as larvas encontradas. Resultados. Das 221 amostras analisadas no Laboratório do HUCAM, larvas de S. stercoralis foram identificadas em 20 (9,05%) casos, enquanto o HPJ só identificou 9 (4,07%). Das 102 do Hospital Fundação Concórdia, onde a identificação de larvas nos seis meses anteriores não passou de 1,5%, 10 amostras foram positivas pelo exame do sedimento no microscópio invertido (9,8%). Das 112 amostras utilizadas para comparação com o Baermann-Moraes, 11 (9,82%) amostras foram positivas no exame do sedimento ao microscópio invertido, as quais foram também positivas no método de Baermann-Moraes. Conclusão. O método é simples, com as seguintes vantagens: (a) todo o sedimento obtido é examinado de uma só vez, permitindo identificar todas as larvas nele existentes; (b) como a quantidade de fezes examinada é grande (maior do que as 8 a 10g do Baermann-Moraes), a probabilidade de encontrar larvas aumenta, mesmo em casos com baixa carga parasitária; e (c) permite a identificação de larvas mortas, ao contrário do método de Baermann-Moraes, podendo, portanto ser aplicado em fezes preservadas com fixadores como formol tamponado ou MIF / The methods of Baermann-Moraes and Koga agar, are the most sensitive to identify Strongyloides stercoralis larvaes in stool, but they require a fresh stool. We present a simple sedimentation method, which allows to evaluate a large sample of feces, using an inverted microscope to observe the sediment obtained. Objectives. To develop and evaluate a modified methodology to identify larvae of S. stercoralis from the sedimentation of feces, by examining all the sediment using an inverted microscope and to compare the proposed method with the Hoffman, Pons and Janer method (HPJ) and the Baermann-Moraes, considered highly sensitive for diagnosis of larvae of S. stercoralis. Material and Methods. To evaluate the effectiveness of the technique, there were two things to consider: (a) test the technique in the laboratory that performs the routine fecal examinations using the Hoffman, Pons & Janer method; (b) use the same sample, simultaneously, performing the method proposed and the Baermann-Moraes, for comparison. For the first observation, we used the routine laboratory of the Hospital Cassiano Antonio de Moraes - HUCAM and the Hopital Fundação Concordia in Santa Maria de Jetibá. We examined 221 faecal samples from patients treated in ambulatory or hospitalized in HUCAM, without any choice, they were also routinely examined by sedimentation method (HPJ). At the Hospital Fundação Concórdia in Santa Maria de Jetibá we evaluated 102 consecutive samples from patients treated in ambulatory. For the second point, 112 samples were analyzed using the inverted microscope method and the Baermann-Moraes technique. The samples were weighed and mixed with water using a glass rod in the same small container and then strained through gauze into a glass sedimentation measuring 250 ml. After an hour, the samples were washed with water and then allowed to stand for one more hour. The sediment (about 15 ml), plus two to three drops of Lugol was placed in a glass chamber measuring 12x8x0,5 cm, covered with a glass slide with the same surface and examined using an inverted microscope with 4X and 10X objective . The entire chamber was analyzed, and the number of larvae, was counted. Results. Of the 221 samples analyzed at the HUCAM laboratory, larvae of S. stercoralis were identified in 20 (9.05%) cases, in which the HPJ identified only nine (4.07%). The 102 samples from Hospital Fundação Concórdia, where the identification of larvae in the previous six months did not exceed 1.5%, 10 samples were positive using the inverted microscope (9.9%). The 112 samples used simultaneously to compare with the Baermann-Moraes technique, 11 samples were positive using the inverted microscope and all were also positive in the Baermann-Moraes method. Conclusion. The method is simple, with the following advantages: (a) the sediment obtained is examined at once, allowing the identification of all larvae existed there; (b) as the amount of stool examined is large (more than 8 to 10g used in Baermann-Moraes and 2 to 4 g used to perform the Koga agar), the probability of finding larvae increases, even in cases with low parasite load; and (c) allows the identification of dead larvae, unlike both the Baermann-Moraes and the Koga agar and could also be applied in faeces preserved with buffered formalin as fixatives or MIF

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Karina Demoner de Abreu 1.pdf: 2021937 bytes, checksum: 83c0b2fe25e5f24a5ca7dce474dfce99 (MD5) Previous issue date: 2009-04-24 / Introdução: Recidiva da hanseníase acontece nos pacientes tratados regularmente, com os esquemas oficiais vigentes e que receberam alta por cura, mas após um período de incubação reaparecem com a doença. Objetivos: 1) Determinar a freqüência da recidiva da hanseníase no Estado do Espírito Santo e 2) Avaliar os níveis séricos de citocinas Th-1 e Th-2 (TNF-a, IFN-g , IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10) e das quimiocinas (CCL2/MCP-1, CCL10/IP-10, CXCL9/MIG, CCL5/RANTES e CXCL8/IL-8) nos pacientes com recidiva. Métodos: Estudo caso-controle de 45 pacientes com recidiva de hanseníase e 19 controles (sem a doença) anteriormente tratados para hanseníase selecionados através do SINAN. Foram descritas as características clínicas e epidemiológicas do diagnóstico inicial dos casos e dos controles e na recidiva dos casos: idade, sexo, forma clínica, resultado da baciloscopia, comunicante de hanseníase, ocorrência de reação, esquema terapêutico e resultado do teste ML Flow verificando-se a associação entre as variáveis através do cálculo do Odds Ratio, intervalo de confiança de 95% e valor de p. Resultados: A mediana da idade foi de 44 anos, o sexo masculino representou 64,4% dos casos, 35 pacientes foram diagnosticados após cinco anos da alta do primeiro diagnóstico e 4 casos apresentavam a forma clínica dimorfa. Os pacientes paucibacilares produziram mais TNF-a e IFN-g do que os multibacilares com índice baciloscópico positivo. Os níveis séricos da IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10 não diferiram entre os grupos paucibacilar e multibacilar. A avaliação dos níveis séricos das quimiocinas foi elevada nos multibacilares quando comparada aos paucibacilares. Conclusões: A freqüência da recidiva foi de 2,41%; os níveis das citocinas TNF-a e IFN-g corroboraram os dados da literatura em relação aos pacientes com hanseníase nunca tratados, o mesmo não foi verificado nos níveis das IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10 / Introduction: Leprosy relapse occurs in patients, who underwent regular anti-leprosy therapy, were considered cured, and in whom after a certain period post-treatment disease reappears. Objectives: 1) Determine the frequency of leprosy relapse in the state of Espirito Santo, and 2) Evaluate the serum levels of Th-1 and Th-2 cytokines (TNF-a, IFN-g , IL-2, IL-4, IL-5 & IL-10) and of chemokines (CCL2/MCP-1, CCL10/IP-10, CXCL9/MIG, CCL5/RANTES & CXCL8/IL-8) in patients with relapsing leprosy. Methods: Fourty-five patients with relapsing leprosy, and 19 controls (without disease but who had leprosy treated and cured) were enrolled in this case-control study. Clinical characteristics and demographical data for all cases and controls were recorded, such as: age, gender, initial clinical form, baciloscopy results, leprosy household contactants, leprosy reaction, therapeutic regimen, and ML Flow test results. Association between these parameters were also evaluated. Results: Observed median age for patients and controls was 44 years, 64.4% were males and 35 patients were diagnosed as relapsing leprosy cases after Five years post-cure of first leprosy episode, and dimorphous leprosy were diagnosed in 40 out of 45 patients. Serum levels of TNF-a and IFN-g were higher among paucibacillary patients whem compared with multibacillary patients with a positive baciloscopic índex. Similar levels of IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10 were observed for these two groups. On the other hand, multibacillary patients presented higher levels of chemokines when compared to paucibacillary patients. Conclusions: The observed relapsing frequency was 2.41%; TNF-a and IFN-g data are in agreement with previous published data for non-treated patients. However, data for IL-2, IL-4, IL-5 & IL-10 do not agree with previous reports.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Flavia Dias Coelho da Silva.pdf: 4558177 bytes, checksum: eadcc2f337a0bf938bf5970abe9f7578 (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Tuberculose (TB) ainda é uma ameaça global à humanidade, sem vacina eficaz disponível até momento. Estudos epidemiológicos têm demonstrado que o Mycobacterium tuberculosis (MTB) e os helmintos são coendêmicos em muitas regiões no mundo, e que as coinfecções com esses patógenos são freqüentes. A infecção por helmintos intestinais pode ser um dos fatores de risco para o desenvolvimento da TB pulmonar ativa. Através de marcações fenotípicas e dosagem de citocinas e quimiocinas, pretendemos mostrar que os vermes são capazes de desviar a resposta Th-1 protetora para a Tuberculose para a Th-2 característica nas helmintíases intestinais. Cultura de sangue total para dosagem de citocinas e quimiocinas pela técnica de microesferas marcadas para leitura em citômetro de fluxo, em conjunto com a imunofenotipagem de células dendríticas (DCs) e monócitos/macrófagos através de marcadores extra e intracelulares via citometria, foram utilizadas com o objetivo de se estudar alguns aspectos da imunidade inata em pacientes com TB, com TB e helmintíases intestinais (TB+HELM), com helmintos, e controles saudáveis. Para tal foram avaliados: a) o número e fenótipo de DCs e monócitos/macrófagos do sangue periférico; e b) a produção de citocinas (IL-10, IL-12, TNF- , IL-6 e IL-1 ) e de algumas quimiocinas (CCL2, CCL5, CXCL-8, CXCL9 e CXCL-10) no sobrenadante de cultura de sangue total após estímulo com antígenos de MTB. A análise de células dendríticas e macrófagos circulantes, e a avaliação de citocinas e quimiocinas em pacientes com TB+HELM, nos permite concluir que: a) A maioria das DCs apresentava fenótipo de células imaturas. Entre as células com fenótipo de células maduras, existiam células mDC DC-SIGN+ e pDC CD123+CD40+, fenótipos compatíveis com DCs maduras indutoras de resposta Th-2; b) A maior parte dos macrófagos avaliados estava ativada e expressava DC-SIGN (fenótipo é compatível com macrófagos M2); c) A produção de citocinas mostrou-se significativamente maior para IL-10, TNF-e IL-6, enquanto IL-1teve uma tendência ao aumento. No entanto, os níveis de IL-12 permaneceram semelhantes ao grupo controle; d) Redução significante da produção de CCL-2, tendência à menor produção de CXCL-8 e aumento não significativo de CXCL-10 foram observados, ao passo que quimiocinas CXCL-9 e CCL-5 não foram detectadas. Embora o número de casos estudados não permita uma afirmação conclusiva, as observações admitem a possibilidade de que a infecção com helmintos intestinais em pacientes com tuberculose possa estar interferindo na resposta Th-1 aos antígenos de MTB / The Tuberculosis (TB) remains a global threat to humanity, which no effective vaccine available until now. Epidemiological studies have shown that Mycobacterium tuberculosis (MTB) and helminths are co-endemic in many regions in the world, and that co-infections with these pathogens are frequent. The intestinal helminths infection may be a risk factor to the development of active pulmonary TB. Through phenotypic markings and dosage of cytokines and chemokines, we aimed to show that the worms are capable to deviate the Th-1 response TB protective to the Th-2 response, characteristic in intestinal helminthiasis. Blood culture for cytokines and chemokines dosage was done by the technique of marked microspheres for reading on flow cytometry, in conjunction with immunophenotyping of dendritic cells (DCs) and monocytes / macrophages through extra and intracellular markers by cytometry were used to study some aspects of innate immunity in TB patients, TB and intestinal helminths patients (TB + HELM), patients with helminths, and healthy controls. Were analyzed: a) The number and phenotype of DCs and monocytes/macrophages in peripheral blood, and b) The production of cytokines (IL-10, IL-12, TNF- , IL-6 and IL-1 ) and of some chemokines (CCL2, CCL5, CXCL8, CXCL9 and CXCL10) in the culture supernatant of whole blood after stimulation with MTB antigens. The analysis of circulating dendritic cells and macrophages, and evaluation of cytokines and chemokines in patients with TB + HELM, should us conclude that: a) The majority of DCs were immature cell phenotype. Among the cells with mature cell phenotype, there were cells mDC DC-SIGN + and CD40 + CD123 + pDC, phenotypes consistent with mature DCs to induce Th-2 response; b) Most of the activated macrophages was assessed and expressed DC-SIGN (phenotype compatible with M2 macrophages); c) The production of cytokines was significantly greater for IL-10, TNF-and IL-6, while IL-1had a tendency to increase. However, the levels of IL-12 remained similar to control group; d) significant reduction of the production of CCL-2, a trend to lower production of CXCL-8 and no significant increase of CXCL-10 were observed, whereas the chemokines CXCL CCL-5 and -9 were not detected. Although the number of cases does not permit a conclusive statement, the observations allow the possibility that infection with intestinal helminths in TB patients may be interfering with the Th-1 response to antigens of MTB

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Carolina Frizzera Dias.pdf: 1373936 bytes, checksum: cdd56b204fe24dd11732bd91c88c9b83 (MD5) Previous issue date: 2011-06-28 / Introduction: The main indicator of monitoring the reduction on HIV infection in children is the incidence rate of AIDS incidence in children under five years ols. Objectives: Describe the profile of children exposed to HIV attending the reference center for AIDS in chldren at The Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (HINSG) and determine the vertical transmission rate and clinical signs and simptoms among the infected ones. Methods: Descriptive study in children exposed to HIV infection by vertical transmission attending a pediatric public hospital in Vitoria (ES) from January 2005 to December 2008. A questionnaire including epidemiological and clinical data of mother and child was applyed. Associations between HIV positive and negative cases were tested using chi-square test. Odds Ratio and confidence intervals were calculated and multivariate logistic regression was used. Results: Two hundred and twenty-one children (97.8%) were exposed to HIV during pregnancy or childbirth. A total of 47 (21.3%) children were diagnosed with AIDS; 25 (53.2%) have already entered service with the diagnosis and 22 (44.8%) became positive during follow-up. A frequencia de infecção de HIV foi de 21,3% (IC 95% 15,9%-26,7%). One hundred and ninety-three (87.3%) children were admitted in the hospital in their first year of life, 51.1% vs. 97.1% (p <0.001), when comparing AIDS cases with those with negative serology. The frequency of HIV infection was 21.3% (IC 95% 15.9%-26.7%). Regarding children s mothers included in the study, diagnosis of HIV infection was performed before pregnancy in 97 (43.3%) cases, in 56 (25.0%) during the prenatal period, and in 59 (26,4%) at birth or after delivery. In 12 cases (5.4%), mode of maternal diagnosis was unknown. Among factors independently associated with vertical transmission of HIV: having entered the service before the first year of life [OR = 0.08 (0.17 to 0.37)], be alive [OR = 0.12 (0, 31 to 0.47)] and have received complet prophylaxis [OR = 0.29 (0.09 to 0.97)] were protective factors while being born by vaginal delivery [OR = 4.45 (1.47 - 13.47)] was a risk factor for HIV infection. Regarding clinical symptms in children, the most common was anemia for more than 30 days (65.9%), followed by wasting syndrome (59.6%) and bacterial meningitis, pneumonia or sepsis (57.4%). Sixteen children (32% of cases) were classified in category C3, the most serious of all. Conclusions: The results showed high frequency of HIV in children. Received the omplet prophylaxis and joining the service less than one year of life were protectors factors. Being born through vaginal delivery was risk factor for transmission. Most children had moderate to severe manifestations of AIDS, demonstrating importance of constant monitoring of prophylactic measures for mother and child for controling HIV among children / Introdução: O principal indicador de monitoramento da redução da infecção pelo HIV em crianças é a taxa de incidência de AIDS em menores de cinco anos de idade. Objetivos: Descrever o perfil das crianças atendidas do SAE de AIDS pediátrico do Hospital Infantil Nossa Senhora da Glória (HINSG) em relação à infecção pelo HIV nas crianças e as manifestações clínicas diagnosticadas. Metodologia: Estudo descritivo realizado com crianças expostas à infecção pelo HIV por via vertical acompanhadas no Serviço de Assistência Especializado em AIDS Pediátrica de um hospital público em Vitória (ES), no período de janeiro de 2005 a dezembro de 2008. O questionário utilizado continha perguntas sobre dados clínicos da mãe e da criança. As comparações entre os casos positivos de HIV e os casos que negativaram foram testadas através de testes de qui-quadrado. Odds Ratio e intervalos de confiança foram calculados e análise multivariada de regressão logística foram utilizados. Resultados: Duzentas e vinte e uma crianças (97,8%) foram expostas ao HIV durante a gestação ou parto. Um total de 47 (21,3%) crianças foi diagnosticado como doente de AIDS, sendo que 28 (56%) já entraram no serviço com o diagnóstico e 22 (44%) soroconverteram no período de seguimento. A frequência de infecção de HIV foi de 21,3% (IC 95% 15,9%-26,7%). Um total de 193 (87,3%) crianças deram entrada no serviço no primeiro ano de vida, 51,1% vs. 97,1% (p<0,001), quando comparamos os casos de AIDS com aqueles com sorologia negativa. Em relação às mães das crianças incluídas no estudo, o diagnóstico da infecção pelo HIV foi feito antes da gravidez em 97 (43,9%) casos e em 56 (25,3%) durante o pré-natal. Entre os fatores independentemente associados com a transmissão vertical do HIV: ter entrado no serviço antes do primeiro ano de vida [OR=0,08 (0,17 0,37)], estar vivo [OR=0,12 (0,31 0,47)] e ter feito a profilaxia completa [OR=0,29 (0,09-0,97)] foram fatores protetores, enquanto que ter nascido de parto vaginal [OR=4,45 (1,47 13,47)] foi fator de risco para a infecção pelo HIV. Em relação às manifestações clínicas nas crianças, a mais frequente foi ter anemia por mais de 30 dias (65,9%), seguida pela síndrome de emaciação (59,6%) e meningite bacteriana, pneumonia ou sepse (57,4%). Dezesseis crianças (32%) foram classificadas como da categoria C3, a mais grave de todas. Conclusão: Os resultados mostraram uma alta frequência de infecção pelo HIV entre as crianças. Fazer a profilaxia completa e ter idade de entrada no serviço menor que 1 ano foram fatores de proteção e ter nascido de parto por via vaginal foi fator de risco para a infecção. Grande parte das crianças infectadas apresentaram manifestações moderadas e graves da AIDS, demonstrando a importância do monitoramento constante das medidas profiláticas para a mãe e a criança para o controle da aids em crianças