Neste trabalho, estudamos a interação de um peptídeo antimicrobiano com membranas modelo, por meio de dicroísmo circular (CD), fluorescência e microscopia óptica. Tal peptídeo, chamado de híbrido, foi sintetizado como uma mistura das regiões mais ativas de dois outros peptídeos antimicrobianos, chamados de pediocina A e plantaricina 149. Esse peptídeo híbrido possui carga de +8, em pH fisiológico, e as membranas estudadas foram compostas por uma mistura de fosfolipídeos zwiteriônicos (cabeça polar de fosfatidilcolina, PC) e aniônicos (cabeça polar de fosfatidilglicerol, PG), em diferentes razões molares. Os resultados de CD evidenciaram que este peptídeo se apresenta de forma desordenada em solução aquosa, porém adota uma conformação helicoidal na presença de grandes vesículas unilamelares carregadas negativamente (LUVs). A quantidade de componente helicoidal é dependente da quantidade de lipídeo negativo presente na bicamada lipídica. A fluorescência do triptofano revelou um deslocamento para o azul muito significativo, chegando a 20 nm para membranas compostas por 100 mol% de PG. Os dois resultados (CD e fluorescência) indicam que a região dos aminoácidos que contém o triptofano deve estar interagindo muito fortemente com a região hidrofóbica da membrana, numa conformação tipo-helicoidal. Experimentos de vazamento de carboxifluoresceína encapsulada em LUVs, por espectroscopia de fluorescência, demonstraram a ação lítica do peptídeo induzindo a formação de poros nas membranas, independentemente da composição das LUVs. Entretanto, a razão molar peptídeo:lipídeo necessária para induzir vazamento da sonda foi menor para membranas lipídicas compostas por bicamadas contendo altas quantidades de PG. Tal fato coloca em evidência o papel fundamental da interação eletrostática entre os peptídeos carregados positivamente com as membranas carregadas negativamente para o processo de ligação e mecanismo de ação deste peptídeo. Para estudar mais detalhadamente o mecanismo de ação, realizamos experimentos de microscopia óptica em vesículas unilamelares gigantes. Concluímos que o peptídeo provoca total desestabilização das vesículas unilamelares gigantes, com formação de poros, seguidos de ruptura da bicamada lipídica e sua transformação em pequenos e mal definidos complexos de peptídeos e fosfolipídeos. / In this work, we investigated the interaction between an antibacterial peptide with model membranes, by means of circular dichroism (CD), fluorescence and optical microscopy. Such a peptide was synthesized from the most active regions of two others antimicrobial peptides, namely pediocin A and plantaricin 149. The hybrid peptide has a net charge of ~ +8, at physiological pH, and the studied model membranes were composed of a mixture of zwitterionic phospholipids (phosphatidylcholine polar head) and anionic phospholipids (phosphatidylglycerol polar head), at differente molar ratio. The CD results evidenced that the peptide was essentially structureless in aqueous solution, but acquired an helical conformation in the presence of charged large unillamellar vesicles LUVs. The helical content is dependent on the negative charge amount on membrane surface. The tryptophan fluorescence revealed a significant blue shift of the maximium emission wavelength, up to 20 nm for the membranes composed of 100 mol% of PG in respect to the peptide fluorescence in the aqueous solution. This indicates that part of the aminoacid residues, that contains the tryptophan, must be buried into the hydrophobic medium of the lipid membrane. Leakage experiments using fluorescence spectroscopy of carboxyfluorescein encapsulated in LUVs demonstrated the lytic action of the peptide, inducing the pore formation in the membrane, regardless of lipid membrane composition. However, it should be stressed that the peptide:lipid molar ratio necessary to induce probe leakage was smaller for lipid membranes made up of large PG amounts. Such evidence points out the key role of the electrostatic interaction between a positively charged peptide and the negatively charged membrane, mediated by hydrophobic contribution. To gain further insight into the lytic mechanism of the peptide, we performed single vesicle experiments using giant unilamellar vesicles under optical microscopy observations. We conclude that the peptide provokes a total membrane desestabilization, with pore formation, followed by a membrane disruption and its transformation into smaller and not well defined complexes of phospholipids and peptides.

Neste trabalho investigamos efeitos de fotoirradiação e toxinas sob membranas celulares miméticas. Foram utilizadas, como modelo de membranas lipídicas, vesiculas unilamelares gigantes (GUVs) compostas pro lipídeos oxidados e não oxidados observadas por microscopia ótica de contraste de fase. Inicialmente estudamos a foto-resposta de membranas compostas por POPC e POPG dispersas em solução contendo azul de metileno (MB). Na sequência, estudamos o efeito de toxinas formadoras de poros, Esticolisina I (ST I) e Esticolisina II (ST II), em membranas contendo lipídeos oxidados e não oxidados. Os resultados de MB (10 µM) disperso em solução de membranas compostas por POPC e o lipídeo aniônico POPG indicaram que o aumento da densidade de carga negativa nas membranas das GUVs, que favorece a ligação da moléculas positivamente carregadas como MB nas membranas, tem como consequência um aumento de permeabilidade da membrana muito mais rápído em relação a membranas compostas apenas por POPC. Isto se deve ao fato que a localização preferencial do MB na membrana de POPC:POPG favorece a formação de oxigênio singlete próximo a dupla ligação da cadeia alquílica, dando início a reação de peroxidação lipídica de maneira mais efetiva que em membrana de POPC. Os resultados da ação das toxinas STI e STII (21 nM) em GUVs contendo lipídeos não oxidados PC e esfingomielina evidenciam que apenas STII é capaz de permear estas membranas a esta concentração. Mais ainda, nossos resultados sugerem que a existência de separação de fases fluida-gel na bicamada lipidica composta por PC:SM (razão molar 1:1) favorece a ação da toxina StII. Ao analisarmos membranas contendo lipídeos hidroperoxidados (POPC-OOH) dispersas em solução contendo STII (21 nM) observamos um aumento de permeabilidade na membrana num conjunto de GUVs, associado a formação de poros, apenas em bicamadas lipídicas formadas por misturas de lipídeos oxidados (POPC) e não oxidados (POPC-OOH). Quanto maior a concentração de lipídeos oxidados na membrana mais rapidamente ocorre o aumento de permeabilidade. / In this work we investigate the effects of photoirradiation and toxins on mimetic cell membranes. As a model of lipid membranes, giant unilamellar vesicles (GUVs) composed of oxidized and oxidized pro-lipids were observed by optical phase contrast microscopy. Initially we studied the photo-response of membranes composed of POPC and POPG dispersed in solution containing methylene blue (MB). Following, we studied the effect of pore-forming toxins, Sticolysin I (ST I) and Sticolysin II (ST II), on membranes containing oxidized and non-oxidized lipids. The results of MB (10 M) dispersed in solution of membranes composed of POPC and the anionic lipid POPG indicated that the increase in the negative charge density in the membranes of GUVs, which favors the binding of positively charged molecules as MB in the membranes, consequently increases membrane permeability in regard to membranes composed only of POPC. This is due to the fact that the preferred location of the MB in the POPC: POPG membrane favors the formation of singlet oxygen near the double bond of the alkyl chain, initiating the lipid peroxidation reaction more effectively than in the POPC membrane. The results of the action of the STI and STII toxins (21 nM) on GUVs containing non oxidised lipids PC and sphingomyelin show that only STII is able to permeate these membranes at this concentration. Moreover, our results suggest that the existence of fluid-gel phase separation in the lipid bilayer composed of PC:SM (molar ratio 1:1) favors the action of the StII toxin. When analyzing membranes containing hydroperoxidized lipids (POPC-OOH) dispersed in solution containing STII (21 nM) we observed an increase in membrane permeability in a set of GUVs, associated with pore formation, only in lipid bilayers formed by mixtures of oxidized lipids (POPC-OOH) and non-oxidized ones. The higher the concentration of oxidized lipids in the membrane, the faster the permeability increases.

A realização de um diagnóstico envolve várias etapas, dentre elas o exame radiográfico. Embora a experiência do profissional seja fundamental, é necessário que o mesmo se atualize constantemente, conhecendo as novas tecnologias e de que forma a era digital vem se incorporando nas mais diferentes áreas. Neste trabalho buscou-se avaliar se a tecnologia digital pode colaborar na elaboração de hipóteses diagnósticas de lesões ósseas. Para isso, foram selecionadas 24 radiografias panorâmicas nas quais existiam imagens de lesões do tipo ameloblastoma, tumor odontogênico queratocístico, mixoma e lesão central de células gigantes, atestadas por laudos anátomo-patológicos. As radiografias foram digitalizadas e entregues a 12 examinadores, sendo 3 profissionais para cada uma de 4 diferentes especialidades (radiologia, estomatologia, patologia e cirurgia buco-maxilo-facial). Os examinadores observaram as imagens em dois momentos diferentes. Primeiramente analisaram a radiografia convencional e depois a imagem digitalizada correspondente com intervalo mínimo de 30 dias. Quando do exame das imagens digitais, foi oferecida aos examinadores a opção de uso de ferramentas disponíveis no software, que pudessem auxiliá-lo no procedimento. As suas opiniões eram anotadas em formulários, cujos dados foram posteriormente tabulados e submetidos à análise estatística, por meio de equações de estimação generalizadas (EEG) e índice kappa. Os resultados possibilitaram concluir que houve equivalência na eficácia dos dois métodos avaliados, com boa concordância entre os diagnósticos dos especialistas, e que a probabilidade de acerto não depende da especialidade do observador e nem do tipo de lesão. O método digital foi o preferido para observação entre os avaliadores, sendo que a ferramenta brilho e contraste foi considerada como a melhor auxiliar na elaboração das hipóteses diagnósticas, não havendo uma padronização de valores para tal. Os resultados sugerem ainda que as ferramentas da análise digital favoreceram mais o diagnóstico de um determinado tipo de lesão em comparação aos outros. / The achievement of a diagnosis includes several steps, among them, the radiographic exam. Although the professional experience is fundamental, it is necessary that the professional has been updated constantly, learning new technologies and how the digital era has been incorporated to different areas of knowledge. This work aimed to assess if the digital technology might play a role in the elaboration of diagnostic hypothesis of bone lesions. For that, it was selected 24 panoramic radiographs in which it was possible to observe lesion images of ameloblastoma, keratinizing cystic odontogenic tumor, odontogenic myxoma and central giant cell lesion, with histophatological diagnosis. The radiographs were digitalized and delivered to 12 examiners, being 3 professionals for each one of the 4 specialties (radiology, stomatology, pathology and oral surgery). The examiners have observed the images in two different situations. First they analyzed the conventional radiography and then the corresponding digitalized images, after at least 30 days long. Joined to the digitalized images, it was provided to the examiners software facilities in order to support them in the procedures. Their opinions were filled in booking forms, whose information were tabulated and submitted to statistical analysis through generalized estimation equations (EEG) and kappa index. The outcome has indicated that there was an equivalent fficiency between the two selected methods of assessment. There was a good match of the diagnosis made by the examiners from each speciality, and the probability of a right judgment did not rely on the observer specialty nor on the type of lesion. The examiners have preferred the digital method, and the digital tools bright and contrast were considered the best support for the elaboration of diagnostic hypothesis. Moreover, it was not obtained standard values for bright or contrast. The outcome of this work also suggests that the use of digital analysis tools tends to be more effective for a specific type of lesion than others.

A Terapia Fotodinâmica é um tratamento promissor no cura de várias doenças oftalmológicas e dermatológicas, assim como tumores. Este tratamento utiliza a combinação de luz e um composto fotossensível na presença de oxigênio. Neste trabalho objetivamos entender mecanismos de fotossensibilização em membranas. Para isso, estudamos os efeitos de irradiação em Vesículas Unilamelares Gigantes (GUVs) compostas de POPC e Cardiolipina (CL) e POPC e Colesterol (Col), contendo uma molécula fotoativa (diC12-porf) ancorada à superfície dessas membranas. GUVs compostas por POPC e POPC:Col na presença da molécula fotoativa reagem ao estímulo da luz exibindo um aumento de área seguido de flutuações. O mesmo foi observado para membranas de POPC contendo menos que 50mol% de CL. Já para composições contendo 50mol% de CL, a membrana passa a formar domínios lipídicos podendo ou não ser destruída durante a irradiação. Estes domínios podem ser suprimidos com a adição de EDTA (agente quelante de íons divalentes) na solução. Ao adicionarmos CaCl2 ao meio externo das GUVs contendo EDTA, percebemos que o efeito dos domínios e destruição da membrana reaparece. Tal fato evidencia que íons Ca++ presentes em solução devem complexar com as cargas da CL, levando à formação de domínios lipídicos. Ao quantificar o aumento de área sofrido pelas membranas percebemos que a presença de CL na membrana de POPC inibe o aumento de área para concentrações acima de 40mol% de CL. Já a presença de Col na membrana parece não contribuir significativamente para o aumento de área, embora o mesmo sofra oxidação. Além disso, evidenciou-se que na presença de CL/Col o tempo de fotoclareamento de diC12-porf é muito maior do que na ausência destes. Estes resultados evidenciam que a inclusão de CL na membrana oferece um número maior de sítios de reação para o oxigênio singlete reduzindo a foto-degradação da molécula fotoativa. Já a inclusão de Col aumenta o tempo de vida da molécula fotoativa provavelmente devido ao fato da dupla ligação do Col estar mais próxima ao centro produtor de oxigênio singlete do que a dupla ligação do POPC. / Photodynamic Therapy is a promising treatment for the cure of many diseases, like tumors. This treatment uses a combination of light and a photosensitive molecule in the presence of oxygen. In this way, our objective is to understand photosensibilization mechanisms on membranes. For this purpose, we studied the effects of irradiation in Giant Unilamelar Vesicles (GUVs) composed of POPC and Cardiolipin (CL) and POPC and Cholesterol (Chol) in the presence of a photosensitive molecule (diC12-porf). When the GUVs composed of POPC or POPC and Cholesterol (Chol) in the presence of the photosensitive molecule were irradiated, increase in surface area followed by fluctuations was observed. For GUVs composed of low concentrations of CL, the membrane photo-response was similar to that observed for pure POPC. For GUVs composed of 50 mol% CL different responses to light irradiation were observed. Some lipid domains appear for GUVs in water under irradiation and the GUV might be destroyed. When the irradiation was done in the presence of EDTA (chelant agent), the formation of the domains was prevented. Further addition of CaCl2 to this solution induced the formation of domains again leading eventually to membrane disruption. These results suggest that divalent cations have effect on the binding to CL negative polar heads, favoring lipid domain formation. We quantified the area increase obtained for the GUVs. For GUVs composed of CL we observed that until 40mol% of CL, the maximum expansion reached by the membrane area was similar to that obtained for pure POPC. For 50mol% of CL the increase of area is smaller than that found for GUVs composed only by POPC. For GUVs composed of Chol the behavior of the area is similar to that found for POPC. This means that the increase of area is mainly related to POPC peroxidation, although Chol hydroperoxide must be concomitantly formed too. Further, we observed that the diC12-porf photobleaching characteristic time for GUVs composed of CL/Chol is greater than that noted for GUVs composed of POPC. This means that when we introduce CL we are increasing the possibilities of reaction of the singlet oxygen and the photosensitive molecule is protected. The insertion of Chol in the membrane also protects the photosensitive molecule.

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-01-23T16:14:44Z No. of bitstreams: 5 saulo.pdf: 2174121 bytes, checksum: 837d6359c95ce3c616f0b0f600ff2489 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2109 bytes, checksum: aa477231e840f304454a16eb85a9235f (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-10T10:50:10Z (GMT) No. of bitstreams: 5 saulo.pdf: 2174121 bytes, checksum: 837d6359c95ce3c616f0b0f600ff2489 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2109 bytes, checksum: aa477231e840f304454a16eb85a9235f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T10:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 5 saulo.pdf: 2174121 bytes, checksum: 837d6359c95ce3c616f0b0f600ff2489 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2109 bytes, checksum: aa477231e840f304454a16eb85a9235f (MD5) Previous issue date: 2013 / Muito ainda se discute com rela??o ? fisiopatologia das les?es perif?ricas de c?lulas gigantes (LPCG) e les?es centrais de c?lulas gigantes (LCCG). Ambas as les?es apresentam caracter?sticas cl?nicas distintas, apesar de possu?rem caracter?sticas histol?gicas semelhantes. Assim, estudos imunoistoqu?micos em LPCG e LCCG est?o sendo realizados, para permitir um melhor entendimento dessas les?es. Tem sido relatado que a express?o aumentada de FASN e a angiog?nese est?o diretamente ligadas com desenvolvimento dos tumores. No entanto, ainda n?o se sabe se estes eventos est?o envolvidos na patog?nese das LPCG e LCCG. O objetivo deste trabalho foi avaliar a express?o de FASN e o grau de angiog?nese entre LPCG e LCCG, al?m de verificar a correla??o entre essas vari?veis. Assim, 13 casos de LCCG e 14 casos de LPCG foram selecionados para an?lise da express?o imunoistoqu?mica de FASN, CD34, CD105 e D2-40. A express?o de FASN foi avaliada nos componentes celulares da les?o, seguida da mensura??o da densidade microvascular (DMV) e ?rea microvascular (AMV) para cada uma das amostras selecionadas. Os dados coletados foram submetidos ? an?lise descritiva e sequencialmente aos testes de Mann Whitney, teste t para amostras independentes e testes de correla??o de Pearson e Spearman. Os resultados do nosso estudo indicam que: (1) n?o h? diferen?as na imunoexpress?o de FASN entre os grupos de les?es (CM ? 8% FASN+ / CGM ? 38% FASN+); (2) LPCG possuem maior DMV em CD34; n?o houve diferen?as na DMV em CD105 e D2-40 entre as les?es. A AMV em LPCG foi maior que em LCCG para CD34, CD105 e D2-40; (3) em LPCG houve correla??o positiva entre (CM ? FASN+ com DMV/CD105); (4) nas LCCG houve correla??o positiva entre (CM ? FASN+ com DMV/CD105), (CM ? FASN+ com AMV/CD105 e CD34), (CGM ? FASN+ com AMV/CD105). A partir dos resultados obtidos concluiu-se que os n?veis similares da express?o imunoistoqu?mica de FASN indicam processos constitutivos da manuten??o tissular de ambas as les?es. No entanto, as diferen?as na vasculariza??o, entre os grupos de les?es, parecem ser influenciadas por CM positivas para FASN. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Odontologia, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2012. / ABSTRACT There is still a lot of discussion about the pathophysiology of Peripheral Giant Cell Lesion (PGCL) and Central Giant Cell Lesion (CGCL). These lesions show distinct clinical features, although they have similar histological characteristics. Thus, immunohistochemical studies in PGCL and CGCL are being done to improve understanding these diseases. It has been reported that high level of FASN and angiogenesis are linked with tumors development. However, remains unknown whether these events are involved in the pathogenesis of LPCG and LCCG. The aim of this research was to study FASN expression and angiogenesis degree between PGCL and CGCL, in addition, verify the correlation between this variables. Thus, 13 cases of CGCL and 14 cases of PGCL were selected and examined by immunoexpression of FASN, CD34, CD105 and D2-40. The immunoexpression of FASN was assessed in components cells of lesions, followed by measurement of Microvassel Density (MVD) and Microvassel Area (MVA) for each selected sample. Data collected was submitted to descriptive analysis and followed by Mann Whitney test, ?t? test to independent samples and Person?s and Spearman?s correlation. The results of this study indicate that: (1) there are no differences in FASN immunoexpression between group lesions (MC ? 8% FASN+ / MGC ? 38% FASN+); (2) PGCL have greater MVD in CD34 than CGCL; there are no MDV differences in CD105 and D2-40 between lesions. PGCL have greater MVA in CD34, CD105 and D2-40 than CGCL; (3) in PCGL there was a positive correlation between (MC ? FASN+ and MVD/CD105); (4) in CGCL there was a positive correlation between (MC ? FASN+ and MVD/CD105), (MC ? FASN+ and MVA/CD105 and CD34), (MGC ? FASN+ and MVA/CD105). With base on these results it is concluded that similar expression of FANS levels indicate constituent process of tissue maintenance in both lesions. On the other hand, differences on angiogenesis between lesions seem be influenced by FASN+ mononuclear cells.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-10-20Bitstream added on 2014-06-13T19:56:43Z : No. of bitstreams: 1 rollo_map_me_rcla.pdf: 1981746 bytes, checksum: d38ae96ad1c31de731acfc0d87d7f3a4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O trabalho tem por objetivo elucidar como o território brasileiro, no atual período técnico-científico-informacional vai sendo cada vez mais dinamizado segundo um ritmo imposto pelo sistema de ações hegemônicas da economia e da política. A difusão dessas ações e a respectiva materialidade são seletivamente dispostos e organizados nos lugares para servir aos interesses dos agentes econômicos. Esse uso seletivo e privilegiado do meio geográfico impõe uma dinâmica desigual e uma vida de relações de intensidades distintas entre os lugares determinando as mais profundas desigualdades sociais e territoriais. Uma tal dinâmica econômica, ritmada pelo novo modo de desenvolvimento do capitalismo hoje, impõe a formação de verdadeiros circuitos espaciais de produção. O Circuito Espacial de Produção do Café no Brasil é exemplar dessa nova dinâmica que se impõe ao território brasileiro. Os sistemas de objetos e sistemas de ações que a Cooxupé (Cooperativa Regional dos Cafeicultores em Guaxupé Ltda) comanda no Circuito Espacial de Produção do Café mostram-nos como são impostas verticalidades na área de atuação da Cooperativa, criando nos lugares onde atua, relações de solidariedade organizacional, muito ritmada e organizada segundo uma racionalidade econômica, razão pragmática e capitalista, no mais das vezes cega para tudo o mais que não seja o cálculo, o uso eficiente dos meios para atingir uma única finalidade: a riqueza de alguns. / The work is aimed to elucidate as the Brazilian territory, in the current scientific-technician-informative period is, according to a rhythm imposed by the system of hegemonic economy and politics actions. The diffusion of these actions and the respective materiality are selectively arranged and organized in places to serve to the interests of the economic agents. This selective and privileged use of the geographic environment imposes a different dynamic and a life of relations from distinct intensities between the places determining the deepest social and territorial dissemblances. Such economic dynamics, measurable by the new way of capitalism today’s development, imposes the formation of true production space circuits. The Production Space Circuit of Coffee in Brazil is exemplary in this new dynamics imposed to Brazilian territory. The object systems and action systems that Cooxupé (Cooperative Regional of the Cafeicultores in Guaxupé Ltda) commands in the Production Space Circuit of Coffee shows us the uprights in the performance area of the Cooperative, creating in the places where it acts, relations of organizational solidarity, really measurable and organized according to an economic rationality, pragmatic and capitalist reason, sometimes blind for everything else that is not the measurement and the efficient use of tatics to reach an only purpose: the wealth of some.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SauloCM.pdf: 959868 bytes, checksum: 64b02736330e52023dcc97349273dfec (MD5) Previous issue date: 2007-10-22 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / In the past 50 years, large efforts have been made toward the understanding of the stellar evolution. In the observational context, large sets of precise measurements of projected rotational velocity were produced, in particular by the Natal and Geneva groups. From these data, it is now possible to establish the behavior of stellar rotation from the turnoff to the red giant branch. In addition, these data have shown the role of tidal effects on stellar rotation in close binary systems. Nevertheless, relatively little attention has been paid to theoretical studies on the evolution of rotation along the HR Diagram, a topic itself directly associated to the evolution of the stars. Basically, there are two reasons for such a fact, (i) spherical symmetry is not assumed, what leads to a substantial increase in the numerical complexity of equations and (ii) non rotating models have been very successful in explaining relevant observational data, including the mass-luminosity relation and chemical abundances. In spite of these facts, it is clear that considerable work remains to be done on the role of rotation in the later stages of the evolution, where clear disagreements arise from confrontations between theoretical predictions and observations. In the present work we study the evolutionary behavior of stellar rotation along the HR Diagram, taking into account constraint conditions issued from recent observational survey of rotational velocity carried out with high precision procedures and new evolutionary codes / Nos ?ltimos cinq?enta anos, grandes esfor?os foram feitos no intuito de se entender a evolu??o estelar. No contexto observacional, medidas precisas da velocidade rotacional projetada foram produzidas, em particular, pelos grupos de Natal e Genebra. Destes dados ? poss?vel no presente momento estabelecer o comportamento da rota??o estelar do turnoff at? o ramo das gigantes vermelhas. Em adicional, estes dados t?m mostrado o papel dos efeitos de mar?s na rota??o estelar em sistemas bin?rios pr?ximos. Mesmo tendo sido feitos bons avan?os c no ambito observacional, pouca aten?? tem sido dada a estudos te?ricos da evolu??o da rota??o ao longo do diagrama HR, um t?pico que est? intimamente ligado a evolu??o das estrelas. Basicamente, existem dois motivos para tal fato,(i) a n?o suposi??o de simetria esf?rica leva a um aumento substancial da complexidade num?rica das equa??es, e (ii) os modelos sem rota??o t?m tido bastante sucesso na explica??o de relevantes dados observacionais, incluindo as rela??es entre massa e luminosidade e abund?ncias qu?micas. Diante do avan?o do estudo da rota??o, ainda restam trabalhos a serem feitos sobre o seu papel em est?gios mais tardios da evolu??o, uma vez que existem discord?ncias entre predi??es te?ricas e observacionais. No presente trabalho, n?s estudamos o comportamento evolucion?rio da rota??o ao longo do diagrama HR, levando em conta condi??es de contorno baseadas em recentes medidas de velocidade rotacional obtidas a partir de procedimentos de alta precis?o e novos c?digos evolutivos

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PedroPAS.pdf: 6126862 bytes, checksum: 3ae3ec2483d9e09d3a05fcd73782e862 (MD5) Previous issue date: 2008-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The giant cell fibroma is a benign neoplasm characterized by the presence of mono, bi or multinucleate cells, which can have a connection to the presence of mast cells. This research aims to analyze, descriptively and comparatively, the immunohystochemistry expression of the tryptase in mast cells of the giant cell f ibroma, f ibrous hyperplasia and samples of the normal oral mucosa. Thirty cases of giant cell fibroma, ten cases of fibrous hyperplasia and ten cases of normal oral mucosa were selected for the analysis of the immunohistochemistry expression, determination of the number of present mast cells, as well as their location and shape. It could be stated that there was a statistically signif icant difference (p<0,001) in relation to the quantity of mast cells among other samples analyzed where the giant cell f ibroma presented lesser quantity of mast cell and the hyperplasia showed higher concentration of this cellular type. Although the oral mucosa has presented a higher quantity of mast cells when compared to the giant cells fibroma, these were found in usual locations in the connective tissue in normal tissues. There could be noticed a statistically significant difference in relation to the number of non-granulated mast cells (p<0,001). On the areas of fibrosis, we could observe a statistically signif icant difference (p<0,006) among the samples. In relation to the present mast cells in perivascular location, no statistically signif icant difference was found. On the morphological analysis there was a predominance of oval mast cells. It was concluded that despite of the fact there was a lesser quantity of mast cells present in cases of giant cell f ibroma, they appeared to have a stronger relation to the present giant fibroblasts in this lesions, around 59,62%, being also evidenced a strong relation between these cells and the fibrosis areas in both cases of giant cell f ibroma and f ibrous hyperplasias and samples of normal oral mucosa, used as control group in our study, confirming, this way, the role of the mast cells as fibrinogenous inductor / O fibroma de c?lulas gigantes constitui-se de uma neoplasia benigna, caracterizada pela presen?a de c?lulas gigantes, mono, bi ou multinucleadas, c?lulas estas que podem guardar rela??o com a presen?a de mast?citos. O prop?sito desta pesquisa consistiu em analisar descritiva e comparativamente a express?o imuno-histoqu?mica da triptase em mast?citos de fibroma de c?lulas gigantes, hiperplasia fibrosa e esp?cimes de mucosa oral normal. Foram selecionados 30 casos de fibroma de c?lulas gigantes, 10 casos de hiperplasia fibrosa e 10 casos de mucosa oral normal, para a an?lise da express?o imuno-histoqu?mica, determina??o do n?mero de mast?citos presentes, bem como a sua forma e localiza??o. Constatou-se diferen?a estatisticamente significativa (p<0,001) em rela??o a quantidade de mast?citos entre os esp?cimes analisados, onde o fibroma de c?lulas gigantes apresentou a menor quantidade de mast?citos e a hiperplasia exibiu a maior concentra??o deste tipo celular. Embora a mucosa oral tenha apresentado uma maior quantidade de mast?citos quando comparado com os casos de f ibroma de c?lulas gigantes, estes se encontravam em localiza??es usuais no tecido conjuntivo em tecidos normais. Verif icou-se, diferen?a estatisticamente significativa, no que diz respeito ao n?mero de mast?citos n?o degranulados (p<0,001). Nas ?reas de fibrose, observamos diferen?a estatisticamente signif icativa (p<0,006) entre os esp?cimes. Com rela??o aos mast?citos presentes em localiza??o perivascular n?o se observou diferen?a estatisticamente significativa. Na an?lise morfol?gica verif icou-se uma predomin?ncia de mast?citos ovais. Concluiu-se que embora uma menor quantidade de mast?citos estivesse presente nos casos de fibroma de c?lulas gigantes, estes exibiam maior rela??o com os fibroblastos gigantes presentes nestas les?es em torno de 59,62%, sendo evidenciada tamb?m uma forte rela??o entre estas c?lulas e ?reas de fibrose tanto nos casos de fibroma de c?lulas gigantes como de hiperplasias fibrosas e esp?cimes de mucosa oral normal, utilizados como controle em nosso estudo, confirmando desta forma, o papel dos mast?citos como indutor fibrinog?nico

Neste trabalho, estudamos a interação de um peptídeo antimicrobiano com membranas modelo, por meio de dicroísmo circular (CD), fluorescência e microscopia óptica. Tal peptídeo, chamado de híbrido, foi sintetizado como uma mistura das regiões mais ativas de dois outros peptídeos antimicrobianos, chamados de pediocina A e plantaricina 149. Esse peptídeo híbrido possui carga de +8, em pH fisiológico, e as membranas estudadas foram compostas por uma mistura de fosfolipídeos zwiteriônicos (cabeça polar de fosfatidilcolina, PC) e aniônicos (cabeça polar de fosfatidilglicerol, PG), em diferentes razões molares. Os resultados de CD evidenciaram que este peptídeo se apresenta de forma desordenada em solução aquosa, porém adota uma conformação helicoidal na presença de grandes vesículas unilamelares carregadas negativamente (LUVs). A quantidade de componente helicoidal é dependente da quantidade de lipídeo negativo presente na bicamada lipídica. A fluorescência do triptofano revelou um deslocamento para o azul muito significativo, chegando a 20 nm para membranas compostas por 100 mol% de PG. Os dois resultados (CD e fluorescência) indicam que a região dos aminoácidos que contém o triptofano deve estar interagindo muito fortemente com a região hidrofóbica da membrana, numa conformação tipo-helicoidal. Experimentos de vazamento de carboxifluoresceína encapsulada em LUVs, por espectroscopia de fluorescência, demonstraram a ação lítica do peptídeo induzindo a formação de poros nas membranas, independentemente da composição das LUVs. Entretanto, a razão molar peptídeo:lipídeo necessária para induzir vazamento da sonda foi menor para membranas lipídicas compostas por bicamadas contendo altas quantidades de PG. Tal fato coloca em evidência o papel fundamental da interação eletrostática entre os peptídeos carregados positivamente com as membranas carregadas negativamente para o processo de ligação e mecanismo de ação deste peptídeo. Para estudar mais detalhadamente o mecanismo de ação, realizamos experimentos de microscopia óptica em vesículas unilamelares gigantes. Concluímos que o peptídeo provoca total desestabilização das vesículas unilamelares gigantes, com formação de poros, seguidos de ruptura da bicamada lipídica e sua transformação em pequenos e mal definidos complexos de peptídeos e fosfolipídeos. / In this work, we investigated the interaction between an antibacterial peptide with model membranes, by means of circular dichroism (CD), fluorescence and optical microscopy. Such a peptide was synthesized from the most active regions of two others antimicrobial peptides, namely pediocin A and plantaricin 149. The hybrid peptide has a net charge of ~ +8, at physiological pH, and the studied model membranes were composed of a mixture of zwitterionic phospholipids (phosphatidylcholine polar head) and anionic phospholipids (phosphatidylglycerol polar head), at differente molar ratio. The CD results evidenced that the peptide was essentially structureless in aqueous solution, but acquired an helical conformation in the presence of charged large unillamellar vesicles LUVs. The helical content is dependent on the negative charge amount on membrane surface. The tryptophan fluorescence revealed a significant blue shift of the maximium emission wavelength, up to 20 nm for the membranes composed of 100 mol% of PG in respect to the peptide fluorescence in the aqueous solution. This indicates that part of the aminoacid residues, that contains the tryptophan, must be buried into the hydrophobic medium of the lipid membrane. Leakage experiments using fluorescence spectroscopy of carboxyfluorescein encapsulated in LUVs demonstrated the lytic action of the peptide, inducing the pore formation in the membrane, regardless of lipid membrane composition. However, it should be stressed that the peptide:lipid molar ratio necessary to induce probe leakage was smaller for lipid membranes made up of large PG amounts. Such evidence points out the key role of the electrostatic interaction between a positively charged peptide and the negatively charged membrane, mediated by hydrophobic contribution. To gain further insight into the lytic mechanism of the peptide, we performed single vesicle experiments using giant unilamellar vesicles under optical microscopy observations. We conclude that the peptide provokes a total membrane desestabilization, with pore formation, followed by a membrane disruption and its transformation into smaller and not well defined complexes of phospholipids and peptides.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2017-11-30T12:02:40Z No. of bitstreams: 1 PDF - Hellen Bandeira de Pontes Santos.pdf: 24212742 bytes, checksum: 773b9381f25af4929aa22886d6f91f25 (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2017-12-06T18:42:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Hellen Bandeira de Pontes Santos.pdf: 24212742 bytes, checksum: 773b9381f25af4929aa22886d6f91f25 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-06T18:42:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Hellen Bandeira de Pontes Santos.pdf: 24212742 bytes, checksum: 773b9381f25af4929aa22886d6f91f25 (MD5) Previous issue date: 2016-07-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The multinucleated giant cells (MGCs) reaction has been reported in several epithelial malignancies. However, the nature and potential prognostic implication of this reaction in these neoplasms remain under discussion. In intra-oral squamous cell carcinoma (SCC), studies have suggested that MGCs may represent a foreign body reaction to the keratin produced by tumor cells and that, possibly, these cells are formed from the fusion of M2 macrophages. In the context of lower lip SCCs, there are no studies about a probable relationship between MGC reactions and the tumor progression (Pubmed Database, Scopus, Web of Science, LILACS, SIGLE – access on July 8, 2016). Thus, this study aimed to evaluate the frequency, distribution, and polarization profile (M1 - HLA-DR / M2 - CD163 ) of MGC reaction in 91 cases of lower lip SCC and to verify the association of this microscopic finding with clinicopathological parameters (tumor size, node metastasis, distant metastasis, clinical stage, and histopathological grade of malignancy). Under light microscopy, hematoxylin–eosin-stained histological sections were evaluated for the presence and distribution of MGCs reaction in high-power fields (HPFs). To evaluate the histopathological grade of malignancy, the systems proposed by Bryne et al. (1992) and the World Health Organization (WHO) (CARDESA et al., 2005) were used. Only cases containing MGCs reaction were included in the immunohistochemical study. The anti- CD68 antibody was used to confirm the monocytic/ macrophagic nature of the MGCs reaction. To identify the polarization profile of these cells, the percentage of HLA-DR and CD163 MGCs was established for each case. Thirty-six (39.6%) cases contained MGCs reaction. Significant associations between the presence of MGCs reaction and clinical parameters were not observed (p > 0.05). The occurrence of MGCs reaction in well and moderately differentiated cases (CARDESA et al., 2005) was 3.3 higher than in poorly differentiated cases (p = 0.006; PR: 3.30; 95% CI: 1.12-9.68). At the tumor invasive front (BRYNE et al., 1992), no associations between the presence of MGCs reaction and the histopathological grade of malignancy (p = 0.674), the nuclear pleomorphism (p = 0.359), the pattern of invasion (p = 0.277), and the inflammatory infiltrate (p = 0.653) were seen. Nonetheless, the occurrence of these cells in highly and moderately keratinized tumors at the invasive front was 2.03 higher than in lesions with minimal or no keratinization (p = 0.012; PR: 2.03; 95% CI: 1.11-3.71). Regarding the distribution analysis, eighteen (50%) cases had MGCs in up to 3 HPFs. Significant associations between the distribution of MGC reaction and the clinicopathological parameters were not observed (p > 0.05). Immunohistochemical analysis revealed that MGCs were CD68 in all cases. Furthermore, it was observed a predominance of HLA-DR over CD163 cells (p = 0.031). The findings of the current study suggest that MGCs reaction is not involved with tumor progression in lower lip SCCs. In these malignancies, MGCs tend to exhibit predominantly an M1 phenotype and may represent a foreign body reaction to the keratin produced by tumor cells. / A reação de células gigantes multinucleadas (CGM) tem sido relatada em diversas neoplasias malignas epiteliais. Todavia, a natureza e a potencial implicação prognóstica dessa reação nessas neoplasias permanecem assunto de discussão. No carcinoma de células escamosas (CCE) intraoral, estudos têm sugerido que as CGM podem representar uma reação do tipo corpo estranho à ceratina produzida pelas células tumorais e que, possivelmente, essas células são formadas a partir da fusão de macrófagos M2. No contexto dos CCE de lábio inferior, até o presente momento, não há estudos sobre uma possível relação das reações de CGM com a progressão tumoral (Pubmed Database, Scopus, Web of Science, LILACS, SIGLE – acesso em 08/07/2016). Dessa forma, este estudo objetivou avaliar a frequência, a distribuição e o perfil de polarização (M1 – HLA-DR / M2 – CD163 ) da reação de CGM em 91 casos de CCE de lábio inferior e verificar a associação desse achado microscópico com parâmetros clínico- patológicos (tamanho do tumor primário, metástase linfonodal regional, metástase à distância, estádio clínico e grau histopatológico de malignidade). Sob microscopia de luz, cortes histológicos corados em hematoxilina e eosina foram avaliados quanto à presença e à distribuição da reação de CGM em campos de grande aumento (high power fields - HPF). Para avaliar o grau histopatológico de malignidade, foram utilizados os sistemas propostos por Bryne et al. (1992) e pela Organização Mundial da Saúde (OMS) (CARDESA et al., 2005). No estudo imunoistoquímico, foram incluídos apenas os casos contendo reação de CGM. O anticorpo anti- CD68 foi utilizado a fim de confirmar a natureza monocítica/ macrofágica da reação de CGM. Para identificar o perfil de polarização dessas células, foi estabelecido o percentual de positividade das CGM aos anticorpos anti-HLA-DR e anti-CD163 para cada caso. Trinta e seis (39,6%) casos exibiram reação de CGM. Associações significativas entre a presença da reação de CGM e os parâmetros clínicos não foram observadas (p > 0,05). A ocorrência da reação de CGM em casos bem e moderadamente diferenciados (CARDESA et al., 2005) foi 3,3 vezes maior que naqueles casos pobremente diferenciados (p = 0,006; RP: 3,30; 95% IC: 1,12-9,68). No front de invasão (BRYNE et al., 1992), não foram observadas associações entre a presença da reação de CGM e o grau histopatológico de malignidade (p = 0,674), o pleomorfismo nuclear (p = 0,359), o padrão de invasão (p = 0,277) e o infiltrado inflamatório (p = 0,653). Por sua vez, a ocorrência dessas células em casos com alto e moderado grau de ceratinização no front de invasão tumoral, foi 2,03 vezes maior que naqueles com mínima ou sem ceratinização (p = 0,012; RP: 2,03; 95% IC: 1,11-3,71). Na análise da distribuição, dezoito (50%) casos exibiram reação de CGM em até 3 HPF. Associações significativas entre a distribuição da reação de CGM e os parâmetros clínico-patológicos não foram observadas (p > 0,05). A análise imunoistoquímica revelou que as CGM eram CD68 em todos os casos. Além disso, foi observado um predomínio de células que expressavam HLA-DR em relação a CD163 (p = 0,031). Os achados do presente estudo sugerem que a reação de CGM não está envolvida com a progressão tumoral em CCE de lábio inferior. Nessas neoplasias, as CGM tendem a apresentar um fenótipo predominantemente M1 e podem representar uma resposta do tipo corpo estranho à ceratina produzida pelas células tumorais