Made available in DSpace on 2014-12-17T14:05:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DeborahAC_TESE.pdf: 2567069 bytes, checksum: 17be3c292d241e19b0a9d1323613899f (MD5) Previous issue date: 2012-04-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Human multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs), also known as mesenchymal stem cells, have become an important and attractive therapeutic tool since they are easily isolated and cultured, have in vitro expansion potential, substantial plasticity and secrete bioactive molecules that exert trophic effects. The human umbilical cord as a cell source for cell therapy will help to avoid several ethical, political, religious and technical issues. One of the main issues with SC lines from different sources, mainly those of embryonic origin, is the possibility of chromosomal alterations and genomic instability during in vitro expansion. Cells isolated from one umbilical cord exhibited a rare balanced paracentric inversion, likely a cytogenetic constitutional alteration, karyotype: 46,XY,inv(3)(p13p25~26). Important genes related to cancer predisposition and others involved in DNA repair are located in 3p25~26. Titanium is an excellent biomaterial for bone-implant integration; however, the use can result in the generation of particulate debris that can accumulate in the tissues adjacent to the prosthesis, in the local bone marrow, in the lymph nodes, liver and spleen. Subsequently may elicit important biological responses that aren?t well studied. In this work, we have studied the genetic stability of MSC isolated from the umbilical cord vein during in vitro expansion, after the cryopreservation, and under different concentrations and time of exposition to titanium microparticles. Cells were isolated, in vitro expanded, demonstrated capacity for osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation and were evaluated using flow cytometry, so they met the minimum requirements for characterization as MSCs. The cells were expanded under different concentrations and time of exposition to titanium microparticles. The genetic stability of MSCs was assessed by cytogenetic analysis, fluorescence in situ hybridization (FISH) and analysis of micronucleus and other nuclear alterations (CBMN). The cells were able to internalize the titanium microparticles, but MSCs preserve their morphology, differentiation capacity and surface marker expression profiles. Furthermore, there was an increase in the genomic instability after long time of in vitro expansion, and this instability was greater when cells were exposed to high doses of titanium microparticles that induced oxidative stress. It is necessary always assess the risks/ benefits of using titanium in tissue therapy involving MSCs, considering the biosafety of the use of bone regeneration using titanium and MSCs. Even without using titanium, it is important that the therapeutic use of such cells is based on analyzes that ensure quality, security and cellular stability, with the standardization of quality control programs appropriate. In conclusion, it is suggested that cytogenetic analysis, FISH analysis and the micronucleus and other nuclear alterations are carried out in CTMH before implanting in a patient / C?lulas mesenquimais estromais multipotentes, tamb?m conhecidas como c?lulas-tronco mesenquimais humanas (CTMH), s?o c?lulas multipotentes utilizadas em v?rias pesquisas de terapia celular, pois apresentam a capacidade de se diferenciar em m?ltiplas e diferentes linhagens, t?m grande capacidade de autorrenova??o e de expans?o in vitro, excelentes propriedades imunossupressoras e s?o capazes de secretar mol?culas bioativas que exercem efeitos tr?ficos. O cord?o umbilical ? uma fonte de CTMH cuja extra??o n?o necessita de um procedimento invasivo, al?m de n?o envolver controv?rsias ?ticas, pol?ticas e religiosas. Um dos problemas que envolvem linhagens de CTMH de diferentes fontes ? a possibilidade de ocorr?ncia de altera??es cromoss?micas e instabilidade gen?tica, que podem aparecer durante a expans?o in vitro. Al?m disso, as CTMH de um dos cord?es apresentaram uma altera??o cromoss?mica constitucional: invers?o parac?ntrica no bra?o curto do cromossomo 3, cari?tipo: 46,XY,inv(3)(p13p25~26). Em 3p25-26, est?o localizados v?rios genes de grande import?ncia biol?gica, como genes envolvidos com o reparo de DNA e outros respons?veis pelo desenvolvimento de tumores. O tit?nio ? um dos materiais mais utilizado para fabrica??o de implantes ortop?dicos e dent?rios, e ? considerado um excelente biomaterial, entretanto, as part?culas derivadas de pr?teses acumulam-se nos tecidos periprost?ticos e na medula ?ssea local, disseminam-se para linfonodos, f?gado e ba?o. As implica??es biol?gicas em longo prazo da dissemina??o sist?mica de part?culas de metais e seus efeitos cito e genot?xicos n?o est?o bem caracterizados. Neste trabalho investigamos a estabilidade gen?tica de CTMH isoladas da veia do cord?o umbilical durante a expans?o in vitro, ap?s a criopreserva??o, e em diferentes condi??es de cultivo, na presen?a e na aus?ncia de tit?nio, antes e ap?s o aparecimento de c?lulas senescentes no cultivo. As c?lulas foram isoladas, expandidas, diferenciadas em osteoblastos, adip?citos e condroblastos e analisadas com citometria de fluxo para comprovar que s?o c?lulas-tronco mesenquimais. As CTMH foram tratadas com diferentes doses/ tempo de exposi??o ? micropart?culas de tit?nio. A avalia??o da estabilidade gen?tica das CTMH foi realizada atrav?s da an?lise do cari?tipo, de hibrida??o in situ por fluoresc?ncia (FISH) e da an?lise do micron?cleo e outras altera??es nucleares (CBMN). Ficou estabelecido que as CTMH foram capazes de internalizar as micropart?culas de tit?nio, mas as c?lulas mant?m sua capacidade de prolifera??o, diferencia??o e preservam os mesmos marcadores de membrana. Al?m disso, demonstrou-se que existe um aumento na instabilidade gen?tica com o decorrer do tempo de expans?o in vitro, e esta instabilidade foi maior na presen?a de grande concentra??o de micropart?culas de tit?nio que induzem estresse oxidativo. ? necess?rio sempre avaliar os riscos/ benef?cios da utiliza??o do tit?nio na terapia tecidual envolvendo CTMH, considerando a biosseguran?a da utiliza??o da regenera??o ?ssea guiada que utiliza CTMH e tit?nio. Mesmo n?o se utilizando o tit?nio, ? importante que o uso terap?utico de tais c?lulas seja baseado em an?lises que garantam a qualidade, seguran?a e estabilidade celular, com a padroniza??o de programas de controle de qualidade adequados. Como conclus?o, sugere-se que a an?lise citogen?tica, FISH e a an?lise do micron?cleo e outras altera??es nucleares sejam realizadas nas CTMH antes de implantar num paciente, sejam elas cultivadas por longo tempo ou n?o

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-11T17:13:29Z No. of bitstreams: 1 RodrigoPorpinoMafra_DISSERT.pdf: 2938922 bytes, checksum: c44070e8d06f2305cff5199e620a1c1c (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-07-15T20:45:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RodrigoPorpinoMafra_DISSERT.pdf: 2938922 bytes, checksum: c44070e8d06f2305cff5199e620a1c1c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-15T20:45:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodrigoPorpinoMafra_DISSERT.pdf: 2938922 bytes, checksum: c44070e8d06f2305cff5199e620a1c1c (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / O carcinoma epiderm?ide de l?ngua oral (CELO) apresenta um comportamento biol?gico agressivo, com elevada propens?o ao desenvolvimento de met?stases nodais. Nesse contexto, a linfangiog?nese ? considerada um fen?meno importante para a dissemina??o das c?lulas tumorais e pode sofrer influ?ncia de est?mulos do microambiente. Os mast?citos t?m sido relacionados ? progress?o de neoplasias malignas, no entanto o seu papel na forma??o de vasos linf?ticos ainda n?o est? bem estabelecido. O prop?sito desta pesquisa foi avaliar poss?veis correla??es entre a densidade linf?tica, a contagem de mast?citos e o perfil clinicopatol?gico em casos de CELO, incluindo o estadiamento cl?nico TNM, a grada??o histol?gica de malignidade (Bryne, 1998) e a presen?a/aus?ncia de met?stases nodais. A amostra foi constitu?da por 50 casos de CELO, dos quais 26 apresentavam met?stase nodal, e os 24 restantes eram isentos de met?stases. A densidade linf?tica foi estabelecida como a m?dia de vasos linf?ticos imunomarcados pelo anticorpo anti-podoplanina (D2-40), identificados em cinco campos microsc?picos (200x). Para a an?lise dos mast?citos, foram quantificadas as c?lulas imunorreativas ao anticorpo anti-triptase, em cinco campos (400x). Destaca-se que ambas as imunomarca??es foram analisadas no centro tumoral e no front de invas?o. A densidade linf?tica intratumoral (DLI) foi superior nos casos em est?gios cl?nicos avan?ados (III-IV), quando comparados ?queles em est?gios iniciais (I-II), assim como nos casos metast?ticos em rela??o aos n?o-metast?ticos (p<0,05). N?o houve diferen?as estatisticamente significativas entre os casos de baixo grau e alto grau de malignidade no tocante ? DLI (p>0,05). De outro modo, a densidade linf?tica peritumoral (DLP) e as contagens de mast?citos n?o demonstraram rela??es significativas com nenhum dos par?metros clinicopatol?gicos avaliados (p>0,05). Tamb?m n?o foram encontradas correla??es significativas entre as densidades linf?ticas e as contagens de mast?citos, seja na regi?o intratumoral (r = -0,004; p=0,977) ou na peritumoral (r = -0,154; p=0,285). Os resultados do presente estudo sugerem que os vasos linf?ticos intratumorais contribuem na progress?o do CELO. Por sua vez, a DLP pode n?o ser suficiente para justificar diferen?as no comportamento biol?gico do CELO, o que sustenta a hip?tese de envolvimento de outros mecanismos na dissemina??o metast?tica das c?lulas malignas, que complementariam os efeitos da linfangiog?nese. Os mast?citos, ainda que realizem diversas fun??es pr?- e antitumorais, parecem n?o influenciar diretamente o potencial de agressividade do CELO. Adicionalmente, ? poss?vel que a quantidade destas c?lulas n?o seja um fator determinante para a forma??o de vasos linf?ticos. / Oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC) has an aggressive biological behavior, with a high propensity for the development of lymph node metastases. In this context, lymphangiogenesis is considered an important phenomenon for the spread of tumor cells and may be influenced by microenvironmental stimuli. Mast cells have been implicated in tumor progression, although their influence in the formation of lymphatic vessels is not well established. The aim of this study was to analyze, in a case series of OTSCC (n=50), possible correlations between lymphatic vessel density (LVD), mast cell count and clinicopathological features, including tumor-node-metastasis (TNM) stage, histological grade of malignancy (Bryne, 1998), and nodal metastasis. LVD was established as the mean number of lymphatic vessels immunostained by anti-podoplanin (D2-40) antibody, identified in five microscopic fields (200x). For the analysis of mast cells, tryptase-immunoreactive cells were quantified in five fields (400x). Both immunostainings were analyzed in the tumor center and invasion front. Intratumoral lymphatic density (ILD) was higher in cases in advanced clinical stages (III-IV), compared to those in initial stages (I-II), as well as in metastatic cases in respect of non-metastatic (p<0,05). There were no statistically significant differences between low-grade and high-grade malignancy cases with respect to ILD (p>0,05). Peritumoral lymphatic density (PLD) and mast cell counts showed no significant relations with any of the clinicopathological parameters evaluated (p>0,05). Also there were no significant correlations between LVD and mast cell counts, whether in intratumoral (r = -0,004; p=0,977) or peritumoral region (r = -0,154; p=0,285). The results of the present study suggest that intratumoral lymphatic vessels may contribute in part to the progression of OTSCC, although PLD may be insufficient to justify differences in biological behavior. This supports the hypothesis of involvement of other mechanisms in metastatic spread of malignant cells, which could complement the effects of lymphangiogenesis. Although mast cells perform several pro- and antitumoral functions, they do not appear to directly influence aggressiveness of OTSCC. In addition, the quantity of these cells may not be essential for lymphatic vessel formation.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-02-15T11:56:11Z No. of bitstreams: 1 AnaBeatrizMedeirosLinsDeAlbuquerqueTavares_DISSERT.pdf: 11754321 bytes, checksum: 9e9a6f52cc32b8d2dcb05449e7c48e9b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-02-16T15:39:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AnaBeatrizMedeirosLinsDeAlbuquerqueTavares_DISSERT.pdf: 11754321 bytes, checksum: 9e9a6f52cc32b8d2dcb05449e7c48e9b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-16T15:39:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaBeatrizMedeirosLinsDeAlbuquerqueTavares_DISSERT.pdf: 11754321 bytes, checksum: 9e9a6f52cc32b8d2dcb05449e7c48e9b (MD5) Previous issue date: 2017-12-08 / Quando ativado, o nosso sistema imunol?gico ? capaz de reconhecer e destruir c?lulas tumorais pela ativa??o dos chamados pontos de verifica??o imunol?gicos, essenciais para evitar eventos autoimunes, criando barreiras para a ativa??o de c?lulas T e rejei??o de tumores. Uma das principais vias de inibi??o ? feita pela prote?na PD-1, cuja ativa??o ? explorada por v?rios tipos de tumores cancer?genos, sendo considerado hoje em dia uma abordagem terap?utica nova e importante para o tratamento do c?ncer em geral incluindo o c?ncer de mama. V?rios anticorpos inibidores dos pontos de verifica??o imunol?gicos j? foram aprovados pela US-FDA (United States - Food and Drug Administration) para interromper a intera??o do receptor PD-1 com os seus ligantes PD-L1 e PDL2, atenuando os sinais inibit?rios e aumentando a resposta antitumoral.Entre eles, a droga pembrolizumab, um anticorpo inibidor do ponto de controle imune, est? sendo amplamente utilizada para bloquear eficientemente um mecanismo protetor do tumor, estimulando as c?lulas T para atacar e destruir as c?lulas cancer?genas. Dentro deste contexto, o objetivo deste trabalho ? descrever as energias de intera??o entre a prote?na PD-1, o receptor de morte celular programado, e seu inibidor, o f?rmaco pembrolizumab, usando m?todos de bioqu?mica qu?ntica, considerando-se a estrutura cristalina da prote?na PD-1 emcomplexo com seu inibidor. A energia de intera??o entre cada mol?cula de PD-1 e o f?rmaco foi calculada in silico atrav?s de abordagens qu?nticas, levando-se em conta res?duos de amino?cidos atrativos e repulsivos significativos. Foi observado poucas intera??es repulsivas, com forte predomin?ncia da contribui??o atrativa, apontando para uma forte inibi??o do receptor PD-1. Al?m disso, foram analisados v?rios aspectos bioqu?micos, especialmente ?queles relacionados aos pontos de verifica??o imune. Nossos resultados mostram que o m?todo computacional usado neste trabalho ? um primeiro passo, de baixo custo, para desvendar os res?duos de amino?cidos do f?rmaco que desempenham o papel mais importante na afinidade de liga??o do complexo pembrolizumab / PD-1. Al?m disso, pode ser considerado uma etapa qualitativa para que a imunoterapia se torne uma das ferramentas padr?o, levando ao desenvolvimento de novas e eficientes drogas farmac?uticas contra o c?ncer. / During immunosurveillance, the immune system is capable to recognize and destroy tumor cells by the activation of the so-called immunological checking points, essential to avoid autoimmune events, creating barriers to the T-cell activation and tumor rejection. One of the foremost inhibitory pathways is done by the PD-1 protein (Programmed cell death protein-1), which is activated by several types of cancerous tumors, and is now considered a new and important therapeutic approach for the treatment of cancer in general, including breast cancer. Several immune checkpoint inhibitor antibodies are already approved by the US-FDA (United States - Food and Drug Administration) to bind the protein PD-1, disrupting its interaction with the PD-L1 and PD-L2 ligands, thereby attenuating inhibitory signals and augmenting the host anti-tumor response. Among them, the drug pembrolizumab, an immune checkpoint inhibitor antibody, is being widely used to efficiently blocks a protective mechanism on cancer cells, triggering the T-cells to destroy them. The aim of this work is to describe the interaction energies between the protein PD-1 and its drug inhibitor pembrolizumab by using a quantum biochemistry calculation, taking advantage of the X-ray crystal structure of the protein PD-1 in complex with its inhibitor. The interaction energy between each PD-1 molecule and the drug was calculated in silico through quantum chemistry approaches considering any significant attractive and repulsive drug?s amino acid residues. Although it was observed few repulsive interactions, the attractive ones were predominant, pointing out to a strong inhibition of the programmed cell death receptor. Besides, several biochemical aspects were analyzed, especially those related to the immune checking points. Our results show that the computational method used in this work is a low cost efficient first step to unveil the drug?s amino-acids residues that play the most important role on the binding affinity of the pembrolizumab/PD-1 complex. Besides, it can be considered a great qualitative step for immunotherapy to become one of the standard tools leading to the development of new and effective cancer drugs.

A idade e crescimento da lula Doryteuthis plei da região do litoral norte do Estado de São Paulo é descrita com base em 424 exemplares entre 1,58 a 267 mm de comprimento de manto (ML). Os estatólitos foram utilizados como ferramenta de análise de idade, bem como foi realizado um estudo ontogenético de sua morfometria e morfologia. Com o objetivo de analisar e aprimorar a curva e a taxa de crescimento de D. plei, o presente estudo deu ênfase aos indivíduos em estágios iniciais do ciclo de vida. O formato dos estatólitos foi descrito e demonstrou semelhança à de outros loliginídeos, porém com características particulares, suficientes para a identificação da espécie. Houve relação entre ML e o comprimento dos estatólitos (SL), obtido pelo modelo de ajuste logarítmico. A idade dos exemplares amostrados foi estimada e com isto foi possível obter a curva de crescimento (relação idade e ML) da população em estudo, a qual foi ajustada pelo modelo logístico. O mesmo modelo de ajuste houve para os machos, porém para as fêmeas e para os juvenis, o melhor modelo foi o Gompertz. A longevidade da espécie no local de estudo foi estimada em aproximadamente oito meses. A taxa de crescimento e suas variações conforme as estações do ano foram estimadas. Foram evidenciados valores sendo em mm/dia quando em estádio imaturos em relação aos adultos e decrécimo acelerado após atingir 60 mm ML. Foram observadas diferenças da taxa de crescimento entre os sexos quando os exemplares atingem 150 mm de ML. Espécimes nascidos no inverno apresentaram maiores taxas de crescimento em relação aos nascidos em outras estações do ano. Através do retro-cálculo da idade, foi observado que durante todo o ano ocorrem nascimentos de D. plei, em maior frequência no primeiro semestre. É possível estimar a idade de D. plei tendo apenas as medidas de SL ou comprimento dos domos, sendo que para cada relação, o ajuste obtido foi o logarítmico. Os parâmetros de crescimento apresentados no presente estudo oferecem recursos para estudos de avaliação do estoque pesqueiro e biologia populacional. / Age and growth of the squid Doryteuthis plei from the northern shelf off São Paulo are described based on 424 specimens from 1.58 to 267 mm mantle length (ML). Statoliths were used as microstructures for aging, and an ontogenetic study of their morphological and morphometric was performed. The present study aimed to analyze and improve the growth curve and growth rate estimate of individuals of D. plei, emphasizing those in early stages of life cycle. The shape of statoliths was described and demonstrated similarity other loliginids, with particular characteristics sufficient to identify the species. There was a relationship between ML and statoliths length (SL) by the logarithmic model. The age of sampled specimens was estimated and it was possible to obtain the growth curve (relationship between age and ML) of the population in study, was better fitted by the logistic model. The same adjustment was found for males, but for females and juveniles, the Gompertz model was best suitable. The longevity of the species from place of study was estimated at approximately eight months. The growth rate and its variations were estimated according to the seasons, which evidenced higher values in mm/day in immature stage when compared to adults. In addition, individuals after reaching 60 mm ML accelerated a decrease in growth rate. Differences in growth rate between sexes were found after specimens reach 150 mm ML. Specimens born in winter had higher growth rates when compared to those born in other seasons. Through retro-calculation of age, it was observed that births of D. plei occur throughout the year, but most frequently in the first half. The study enables the age estimate of D. plei having only measures of SL or length of the statolith\'s domes. Growth parameters obtained provide information useful for stock assessment and population biology.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337734.pdf: 3377384 bytes, checksum: 41c3085f595d79158f356834905b6bcd (MD5) Previous issue date: 2015 / Neste estudo, foi avaliado o potencial de um novo tratamento para lesões cutâneas baseado em dois componentes da engenharia de tecidos: células e arcabouço. Foi utilizado como arcabouço o hidrogel de carragenana, um polímero termo reversível de origem natural, associado a células estromais multipotentes (CEM) humanas no tratamento de lesões cutâneas em modelo murino. Inicialmente foi realizada a caracterização química da carragenana teste, obtida da alga Kappaphycus alvarezii cultivada em Florianópolis e da carragenana comercial (Sigma®). Os resultados mostraram que a carragenana teste é da classe kappa e apresenta porcentagem de sulfato semelhante à encontrada na carragenana comercial (Sigma®). Em seguida, foi avaliada a regeneração cutânea após 3, 7 e 14 dias de pós-operatório. Os resultados mostraram que o tratamento com CEM encapsuladas no hidrogel de carragenana teste (HCT) não altera a densidade do infiltrado leucocitário, a vascularização e a espessura da epiderme, além de aumentar o tecido de granulação e o depósito de colágeno quando comparado ao grupo sem tratamento (S/T). Além disso, o tratamento com CEM + HCT apresenta um menor infiltrado leucocitário, não altera a espessura do tecido de granulação e a vascularização, aumenta o depósito de colágeno quando comparado aos grupos HCT e CEM. Os resultados mostraram também que as células humanas permanecem no tecido cicatricial murino após 3 dias de pós-operatório. Em conclusão, este estudo mostrou que a carragenana obtida da alga K. alvarezii cultivada em Florianópolis representa um material de baixo custo com potencial para aplicações terapêuticas. Apesar da associação do hidrogel de carragenana teste com as CEM humanas não apresentar melhora quando comparado ao grupo sem tratamento, demostrou bons resultados quando comparado aos tratamentos isoladamente (grupos HCT e CEM) e representa uma abordagem nova, barata e potencialmente aplicável na engenharia de tecidos.<br> / Abstract : This study evaluated the potential of a new treatment for cutaneous wound based on two components of tissue engineering: cells and scaffold. Carrageenan hydrogel, a thermo reversible polymer of natural origin was used as a scaffold for the delivery of human multipotent stromal cells (MSC) for treatment of cutaneous wound in mice. At first the chemical characterization of native carrageenan obtained from seaweed Kappaphycus alvarezii grown in Florianopolis and commercial carrageenan (Sigma®) was carried out. The results showed that the native carrageenan belongs to the kappa class and shows a percentage of sulphate similar to that found in commercial sample. Evaluation of mouse skin wound healing was carried out by three steps: excisional wound in the dorsal region, treatment application and coating with Tegaderm® dressing. The results after 3, 7 and 14 days post-wounding showed that treatment with MSC encapsulated in native carrageenan hydrogel (NCH) does not change the density of the leukocyte infiltrate, vascularity and the thickness of the epidermis, and increase granulation tissue and collagen deposition when compared to the control untreated group. Furthermore, treatment with MSC encapsulated in NCH has a lower leukocyte infiltration, does not change the thickness of the granulation tissue, epidermis and vascularity, and increase collagen deposition when compared with MSC and NCH groups. In addition, human cells were detected in the scar tissue within 72 h post-wounding. In conclusion, this study showed that the carrageenan obtained of seaweed K. alvarezii cultivated in Florianopolis is a low cost material with potential therapeutic applications. The carrageenan hydrogel association with human MSC did not showed improvement compared to untreated group, but showed good results when compared to NCH and MSC groups. Thus, MSC encapsulated NCH represents a new approach applicable in tissue engineering.

Submitted by PPG Pediatria e Sa?de da Crian?a (pediatria-pg@pucrs.br) on 2018-02-16T19:08:17Z No. of bitstreams: 1 Tese Vers?o Final Tiago Fazolo 18_01_2018.pdf: 3827531 bytes, checksum: b081e8333d16cb49ba00d0df25dff485 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-02-22T17:20:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Vers?o Final Tiago Fazolo 18_01_2018.pdf: 3827531 bytes, checksum: b081e8333d16cb49ba00d0df25dff485 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T17:35:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Vers?o Final Tiago Fazolo 18_01_2018.pdf: 3827531 bytes, checksum: b081e8333d16cb49ba00d0df25dff485 (MD5) Previous issue date: 2017-03-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Respiratory syncytial virus (RSV) is the most common etiologic agent in severe lower respiratory tract infections (LRTI) in children. RSV-associated LRTI is the main cause of bronchiolitis, pneumonia and exacerbation of asthma. This infection is responsible for the high rates of hospitalizations related to respiratory diseases worldwide, especially in children younger than 2 years. Currently, annual mortality rate due to RSV infections is worrying worldwide and is estimated at approximately two hundred thousand cases. The treatment strategies to RSV infections are limited. Ribavirin is an approved drug for use in RSV infections, but its use is limited due to adverse side-effects and risks posed to health professionals who handle it. Palivizumab is a monoclonal antibody which targets RSV F glycoprotein and its use is only indicated as a prophylactic measure. This treatment is already accepted in several countries for groups of high risk children (premature children, with chronic lung disease and with congenital heart disease). However, palivizumab has a high cost for public health and is not available in all countries. The development of an effective RSV vaccine to generate a long-lasting immunological memory response that prevents infection may be the best alternative because it will reduce high public health expenditures with antiviral drugs and monoclonal antibodies. The first attempt in the search for a vaccine against RSV was in the 1960s. This vaccine produced high levels of serum antibodies but could not protect against infection. Children who were vaccinated developed a more serious disease when later infected with the same virus. To date, there is no licensed vaccine for RSV, so the search for effective vaccines is an important focus of research. Natural RSV infections do not induce lasting protective memory, and multiple reinfections can occur lifetime. Nasal secretions from infected infants presented a small number of regulatory CD4 T cells (Treg) in peripheral blood, an increase in interleukin 4 (IL-4) production and T helper type 2 (Th2) response. Treg cells are important for controlling an exacerbated increase in immune responses. A reduction of the Tregs caused by the RSV infection generates an exacerbation of the pulmonary disease due to a Th2 response. The M209-223 RSV peptide was identified to increase IFN-? production by peptide-specific CD4 T cells after challenge with the virus. The treatment with this peptide also induced an increase in pulmonary Treg frequency in infected mice. Recently, it has also been shown that Tregs aid in the development of a T CD8+ effector response, which is crucial for the control of RSV viral load. Our hypothesis is that the RSV M209-223 peptide impacts in the differentiation of CD4 T cells, increasing the population of specific Treg, reducing lung inflammation and modulating the anti-RSV immune response. This peptide in animal model induces the differentiation of specific Treg. Our findings suggest that vaccination with M209-223 peptide results in the differentiation of specific CD4 T cells into conventional effectors and Treg cells. Vaccination with this peptide decreased the expansion of a Th2 response in animals infected with RSV, protecting both the infection site and systemically. We believe that this approach could be an important component in vaccination strategies against this virus. / O v?rus sincicial respirat?rio (VSR) ? o agente etiol?gico mais comum nas infec??es graves do trato respirat?rio inferior (TRI) em crian?as. As infec??es do TRI associada com o VSR s?o a principal causa de bronquiolite, pneumonia e exacerba??o da asma. As TRI causadas pelo VSR s?o respons?veis pelas altas taxas das hospitaliza??es relacionadas ?s doen?as respirat?rias em todo o mundo, principalmente em crian?as menores de dois anos. Atualmente a taxa de mortalidade anual mundial devido ?s infec??es pelo VSR ? preocupante e ? estimada em aproximadamente duzentas mil crian?as. As estrat?gias de tratamento contra o VSR utilizadas s?o limitadas. A ribavirina ? um f?rmaco aprovado no uso para infec??es pelo VSR, por?m sua utiliza??o ? limitada devido aos efeitos secund?rios adversos e aos riscos que representam para os profissionais da sa?de que o manipulam. O palivizumabe ? um anticorpo monoclonal dirigido contra a glicoprote?na F do v?rus e sua utiliza??o ? apenas como medida profil?tica. Este tratamento j? ? aceito em v?rios pa?ses nos grupos de crian?as de alto risco (crian?as prematuras, com doen?a pulmonar cr?nica e com cardiopatia cong?nita). Entretanto o palivizumabe tem um alto custo para sa?de p?blica, n?o sendo disponibilizado em todos os pa?ses. O desenvolvimento de uma vacina eficaz contra o VSR pode ser a melhor alternativa, pois ao gerar resposta de mem?ria duradoura que previne a infec??o e reduz, desta forma, os altos gastos com a sa?de p?blica, com os f?rmacos antivirais e com os anticorpos monoclonais. A primeira tentativa na busca de uma vacina contra o VSR foi na d?cada de 60. A vacina produzida estimulou n?veis moderadamente elevados de anticorpos no soro, mas n?o conseguiu proteger contra ? infec??o. As crian?as que foram vacinadas desenvolveram uma doen?a mais grave quando mais tarde infectados com o v?rus. At? o presente momento n?o existe nenhuma vacina licenciada para o VSR. Desta forma, a busca de vacinas eficazes constitui um importante foco de pesquisa em todo mundo. As infec??es naturais pelo VSR n?o induzem mem?ria protetora duradoura, ocorrendo m?ltiplas reinfec??es ao longo da vida. Em crian?as infectadas, observou-se um n?mero reduzido de c?lulas T CD4+ regulat?rias (Treg) no sangue perif?rico, um aumento na produ??o de interleucina 4 (IL-4) e uma resposta T helper do tipo 2 (Th2) nas secre??es nasais. As c?lulas Treg s?o importantes para controlar um aumento exagerado da resposta imunol?gica. Por este fato acredita-se que quando h? uma redu??o das Tregs causada pela infec??o do VSR ocorre uma exacerba??o da doen?a pulmonar devido uma resposta Th2. Foi identificado que o pept?deo M209-223 do VSR aumenta a produ??o de IFN-? nas c?lulas T CD4+ ap?s o desafio com VSR. O tratamento com este mesmo pept?deo tamb?m apresentou um aumento na frequencia de c?lulas Treg ap?s infec??o prim?ria pelo VSR. Recentemente tamb?m foi demonstrado que as Tregs auxiliam no desenvolvimento de uma resposta efetora T CD8+, que ? crucial para o controle da carga viral do VSR. Nossa hip?tese ? que o pept?deo M209-223 do VSR influencia na diferencia??o das c?lulas T CD4+, aumentando a popula??o de c?lulas T efetoras e regulat?rias espec?ficas, reduzindo a inflama??o pulmonar e modulando a resposta imune. Os nossos resultados sugerem que a vacina??o com pept?deo M209-223 resulta na diferencia??o de c?lulas T CD4+ espec?ficas em efetoras convencionais, que produzem mais IFN-? e em c?lulas Treg. A vacina??o com este pept?deo diminuiu a expans?o de uma resposta Th2 nos animais infectados com o VSR, protegendo da inflama??o exacerbada tanto no local da infec??o como sistemicamente. Acreditamos que esta abordagem pode constituir um componente importante nas estrat?gias de vacina??o contra este v?rus.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432976.pdf: 13950952 bytes, checksum: 85bef78387928925cf69df3245a8d8b9 (MD5) Previous issue date: 2011-03-30 / Os defeitos ?sseos podem ser considerados cr?ticos ou n?o, de acordo com sua capacidade de reparo normal pelo organismo evitando sequelas ?sseas. O tempo decorrido para ocorrer esse reparo acabar? trazendo alguma sequela tempor?ria para o paciente. Esse estudo teve como objetivo avaliar e comparar a influ?ncia de c?lulas mesenquimais indiferenciadas, cultivadas sob membranas de col?geno, no reparo de defeitos ?sseos em f?mur de ratos. Dos 14 animais utilizados na pesquisa, dois foram doadores de medula ?ssea e doze compuseram a amostra. Os animais foram submetidos a quatro danos teciduais no f?mur direito: Grupo 1, com c?lulas mesenquimais indiferenciadas dilu?das em soro fisiol?gico e recobertas por membrana de col?geno; Grupo 2, com c?lulas mesenquimais indiferenciadas dilu?das em gel de hidroxipropilmetilcelulose (HPMC); Grupo 3, com c?lulas mesenquimais indiferenciadas dilu?das em gel de HPMC e recobertas com membrana de col?geno; e Grupo 4, controle: reparo espont?neo. Quatro animais foram eutanasiados nos per?odos de 7, 18 e 30 dias p?s-operat?rios e avaliados por meio de histologia com hematoxilina e eosina em micorscopia de luz e demicroscopia eletr?nica de varredura. Todos os grupos estudados tiveram reparoda cavidade ?ssea formada, muito embora somente o grupo controle tenha apresentado forma??o de cortical ?ssea na sua por??o externa em 30 dias. O presente estudo sugere que o uso de c?lulas mesenquimais indiferenciadas n?o contribui para acelerar o processo de reparo ?sseo em defeitos n?o cr?ticos. O uso desses biomateriais pode inclusive atrasar o processo de reparo ?sseo, uma vez que o organismo ter? que reabsorver esse biomaterial, ao mesmo tempo que dever? estar formando novo osso

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RaniereFMS.pdf: 3115798 bytes, checksum: 664aaedacd292e8b8c2d08a15e193378 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The corn cob is an agricultural by-product still little used, this in part due to the low knowledge of the biotechnological potential of their molecules. Xylan from corn cobs (XSM) is a polysaccharide present in greater quantity in the structure of plant and its biotechnology potential is little known. This study aimed to the extraction, chemical characterization and evaluation of biological activities of xylan from corn cobs. To this end, corncobs were cleaned, cut, dried and crushed, resulting in flour. This was subjected to a methodology that combines the use of alkaline conditions with waves of ultrasound. After methanol precipitation, centrifugation and drying was obtained a yield of 40% (g/g flour). Chemical analysis indicated a high percentage of polysaccharides in the sample (60%) and low contamination by protein (0.4%) and phenolic compounds (> 0.01%). Analysis of monosaccharide composition indicated the presence of xylose:glucose:arabinose:galactose:mannose:glucuronic acid in a molar ratio 50:20:15:10:2.5:2.5. The presence of xylan in the sample was confirmed by nuclear magnetic resonance (?H and ??C) and infrared spectroscopy (IR). Tests were conducted to evaluate the antioxidant potential of XSM. This showed a total antioxidant capacity of 48.45 EAA/g sample. However, did not show scavenging activity of superoxide and hydroxyl radical and also reducing power. But, showing a high capacity chelating iron ions with 70% with about 2 mg/mL. The ability to XSM to influence cell proliferation in culture was also evaluated. This polymer did not influence the proliferation of normal fibroblast cells (3T3), however, decreased the rate of proliferation of tumor cells (HeLa) in a dose-dependent, reaching an inhibition of about 50% with a concentration around 2 mg/mL. Analyzing proteins related to cell death, by immunoblotting, XSM increases the amount of Bax, Bcl-2 decrease, increase cytochrome c and AIF, and reduce pro-caspase-3, indicating the induction of cell death induced apoptosis dependent and independent of caspase. XSM did not show anticoagulant activity in the PT test. However, the test of activated partial thromboplastin time (aPTT), XSM increased clotting time at about 5 times with 600 ?g of sample compared with the negative control. The presence of sulfate on the XSM was discarded by agarose gel electrophoresis and IR. After carboxyl-reduction of XSM the anticoagulant activity decreased dramatically. The data of this study demonstrate that XSM has potential as antioxidant, antiproliferative and anticoagulant compound. Future studies to characterize these activities of XSM will help to increase knowledge about this molecule extracted from corn and allow their use in functional foods, pharmaceuticals and chemical industries. / O sabugo de milho ? um subproduto agr?cola ainda pouco utilizado, isto se deve em parte ao baixo conhecimento do potencial biotecnol?gico de suas biomol?culas. Xilana de sabugo de milho (XSM) ? um polissacar?deo presente em maior quantidade na estrutura do vegetal e seu potencial biotecnol?gico ? pouco conhecido. Este trabalho teve como objetivo a extra??o, caracteriza??o qu?mica e avalia??o de atividades biol?gicas de XSM. Sabugos de milho foram limpos, cortados, desidratados e triturados, dando origem a uma farinha. Esta foi submetida a uma metodologia que combina o uso de meio alcalino com ondas de ultra-som. Ap?s precipita??o metan?lica, centrifuga??o e secagem obteve-se um rendimento de 40% (g/g de farinha). An?lises qu?micas indicaram um alto percentual de polissacar?deos na amostra (60%) e baixa contamina??o por prote?nas (0.4%) e compostos fen?licos (>0.01%). An?lises da composi??o monossacar?dica por cromatografia em papel e por cromatografia l?quida de alta performance (CLAE) indicaram a presen?a de xilose:glicose:arabinose:galactose:manose:?cido glucur?nico em uma propor??o molar de 50:20:15:10:2,5:2,5. A presen?a de xilana na amostra foi confirmada por resson?ncia magn?tica nuclear (13C e 1H) e por espectroscopia de infravermelho (IR). Testes foram realizados para avalia??o do potencial antioxidante de XSM. Esta mostrou uma capacidade antioxidante total de 48.45 EAA/g de amostra. Contudo, a mesma n?o mostrou atividade sequestradora de super?xido, radical hidroxila bem como poder redutor. Em contra partida, apresentou 70% de atividade quelante de ?ons de ferro na concentra??o de 2 mg/mL. A capacidade de XSM em influenciar a prolifera??o celular em cultura tamb?m foi avaliada. Este polissacar?deo n?o influenciou a prolifera??o de c?lulas fibrobl?sticas normais (3T3), entretanto, diminuiu a taxa de prolifera??o de c?lulas tumorais (HeLa) de maneira dose-dependente, chegando a uma inibi??o de aproximadamente 50% com concentra??o em torno de 2 mg/mL. Analisando prote?nas relacionadas ? morte celular, atrav?s de immunoblotting, XSM aumenta a quantidade de Bax, citocromo c e AIF e diminui Bcl-2 e procaspase- 3, indicando a indu??o de morte celular por apoptose dependente e independente de caspase. XSM n?o apresentou atividade anticoagulante pelo teste de PT. Todavia, no teste de tempo de tromboplastina parcial ativada (aPTT), XSM aumentou o tempo de coagula??o em cerca de 5 vezes utilizando 600 ?g de amostra, quando comparadas com o controle negativo. A presen?a de sulfato ligado a XSM foi descartada por eletroforese em gel de agarose e por IR. Ap?s carboxirredu??o de XSM a atividade anticoagulante diminuiu drasticamente. Os dados deste trabalho demonstram que XSM apresenta potencial como composto antioxidante, antiproliferativo e anticoagulante. Estudos futuros de caracteriza??o dessas atividades do XSM contribuir?o para aumentar o conhecimento sobre esta mol?cula extra?da de milho e permitir?o a sua utiliza??o em alimentos funcionais, produtos farmac?uticos e ind?strias qu?micas.

Made available in DSpace on 2015-03-03T15:38:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AguidaCGH_TESE_1-57.pdf: 2629224 bytes, checksum: 19fff6c5e19163ae1d9d46fdf2e5f708 (MD5) Previous issue date: 2012-10-09 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The low level laser therapy (LLLT) has shown to be effective in promoting the proliferation of different cells in vitro, including keratinocytes, osteoblasts, endothelial cells and stem cells. It has been speculated that the biostimulatory effect of LLLT could cause undesirable enhancement of tumor growth in neoplastic diseases, since the malignant cells are more susceptible to proliferative stimuli. Within this context, this study evaluated the effect of LLLT on epidermoid carcinoma of the tongue cell line (SCC25) proliferation and invasion. Cultured cells were irradiated with an InGaAIP diode laser, 660nm, 30mW using two energy densities (0.5J/cm2 and 1.0J/cm2). Proliferative activity was assessed through trypan blue staining method and through cell cycle analysis using flow cytometry. The invasive potential was measured through cell invasion assay using matrigel. Cyclin D1, E-cadherin, -catenin and MMP-9 expressions were analyzed by immunofluorescence and flow cytometry and related to the investigated biological activities. Proliferation curve demonstrated that SCC25 irradiated with 1.0J/cm2 had the highest proliferative rate when compared to the control group and the group irradiated with 0.5J/cm2 (p<0.05). LLLT affected cell cycle distribution and energy density of 1.0 J/cm2 promoted a higher percentage of cells in S/G2/M phases, with statistically significant differences at 24h interval (p<0.05). LLLT, mainly with 1.0J/cm2, revealed significantly higher potential for invasion and influenced the expression of cyclin D1, E-cadherin, -catenin and MMP-9, promoting the malignant phenotype. In conclusion, our results indicate that LLLT has an important stimulatory effect on proliferation and invasion of SCC25 cells, likely due to altered expression of proteins associated with these processes / O aumento da prolifera??o celular ap?s utiliza??o do laser de baixa pot?ncia (LBP) tem sido observado em muitos tipos de c?lulas in vitro, incluindo ceratin?citos, fibroblastos, osteoblastos, c?lulas endotelias e c?lulas-tronco. Tem sido especulado que o crescimento de c?lulas malignas tamb?m pode ser estimulado pela irradia??o laser, uma vez que estas c?lulas s?o mais suscept?veis aos est?mulos proliferativos. Assim, em pacientes portadores de c?nceres de cabe?a e pesco?o, as c?lulas tumorais podem estar presentes no campo de irradia??o ou pr?ximas a ele, sendo a laserterapia n?o intencional um fator estimulante da progress?o tumoral. Neste contexto, este estudo avaliou o efeito do LBP sobre o potencial de prolifera??o e invas?o de uma linhagem celular derivada do carcinoma epiderm?ide de l?ngua (SCC25). As c?lulas cultivadas foram irradiadas com um laser diodo (InGaAlP) com 30mW, 660nm e doses de 0.5 e 1.0J/cm2. A atividade proliferativa foi investigada atrav?s da curva de prolifera??o utilizando o m?todo de colora??o por azul de tripan e an?lise do ciclo celular atrav?s da marca??o por iodeto de prop?dio em citometria de fluxo. O potencial invasivo das c?lulas SCC25 foi verificado atrav?s da realiza??o de um ensaio de invas?o celular utilizando o matrigel. A an?lise da express?o da ciclina D1, E-caderina, -catenina e MMP-9, atrav?s da imunofluoresc?ncia e citometria de fluxo, foi relacionada ?s altera??es nas atividades biol?gicas estudadas. A curva de prolifera??o revelou maior crescimento das c?lulas irradiadas com dose de 1.0 J/cm2 (p<0.05). O LBP influenciou a distribui??o do ciclo celular, com destaque para a dose de 1.0J/cm2, a qual favoreceu a maior porcentagem de c?lulas na fase S/G2/M com diferen?a estatisticamente significativa no intervalo de 24 horas (p<0,05). O LBP, principalmente com dose de 1.0J/cm2, promoveu maior invas?o das c?lulas estudadas e foi capaz de influenciar a express?o da ciclina D1, -catenina, E-caderina e MMP-9, favorecendo o fen?tipo maligno. Dessa forma, nossos resultados indicam que a laserterapia teve um importante efeito estimulat?rio nas atividades de prolifera??o e invas?o das c?lulas SCC25, provavelmente por influenciar a express?o de prote?nas que possuem papel importante nestes processos.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FelipeRM.pdf: 2960586 bytes, checksum: f36dd0983baaaf9fe7c3bb48e095490e (MD5) Previous issue date: 2010-02-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Central giant cell lesion (CGCL) and peripheral giant cell lesion (PGCL) of the jaws have a distinct clinical behavior, although they share histopathologic features. It is still unclear whether these clinical differences are supported by a distinct pattern of immunoexpression of markers for multinucleated giant cells (GC) and mononuclear cells (MC). The purpose of this study was to compare the immunohistochemical expression of VEGF, MMP-9 in CG and MC and measure the vascularization by vWF to check whether there are differences in expression of these biomarkers between CGCL and PGCL. Paraffin wax blocks of 20 cases of LCCG and 20 LPCG were retrieved. MMP-9 immunoreactivity was greater in the CM of PGCL compared to VEGF (p<0.05). VEGF expression was greater in the CM of CGCL compared to PGCL (p<0.05) and it was greater in the overall expression of CGCL compared to PGCL (p<0.05). Vascularity was quantified by microvascular counting (MVC). MVC was greater in the PGCL compared CGCL (p<0.05). MMP-9 showed a greater tendency of expression in CGCL, though was not significant (p>0.05). We tested correlation between the proteins studied in each group and found a significant negative correlation between VEGF and vWF in CGCL (p<0.05). These results suggest that there are differences in the expression of VEGF in CM and overall expression between the lesions, although no statistically significant difference in the overall expression of the MMP-9. Then, there was a trend in increased expression of MMP-9 and VEGF in CGCL, possibly by the involvement of both proteins in osteoclastogenesis. Additionally, the results of this study indicate a higher degree of vascularization in PGCL compared to CGCL, fact that can be directly linked to the reactive nature of the PGCL, where the inflammatory process with its rich angiogenesis contributes significantly to these findings. / Les?es centrais (LCCG) e perif?ricas de c?lulas gigantes (LPCG) dos maxilares possuem um comportamento cl?nico distinto, embora compartilhem caracter?sticas histopatol?gicas semelhantes. Ainda ? obscuro se essas diferen?as cl?nicas s?o apoiadas por um padr?o distinto de imunoexpress? o de marcadores para c?lulas gigantes multinucleadas (CG) e mononucleadas (CM). O escopo do presente trabalho foi realizar um estudo imuno-histoqu?mico comparativo, analisando quantitativamente c?lulas gigantes multinucleadas e mononucleadas imunorreativas ? MMP-9 e ao VEGF e mensurar a vasculariza??o atrav?s do FvW para verificar se h? ou n?o diferen?as de express?o desses biomarcadores entre as LCCG e LPCG. Foram selecionados 20 casos de LCCG e 20 de LPCG emblocados em parafina. Constatou-se diferen?a significativa (p<0.05) em rela??o ? imunorreatividade na CM para MMP-9 e VEGF nas LPCG, sendo a MMP-9 mais expressa. O VEGF foi mais expresso nas CM das LCCG em rela??o ?s LPCG (p<0.05), assim como sua express?o global (p<0.05). A MMP-9 apresentou uma tend?ncia maior de express?o nas LCCG, embora n?o significativa estatisticamente (p>0.05). Na mensura??o dos vasos atrav?s da contagem microvascular (MVC), verificou-se maior MVC nas LPCG do que nas LCCG (p<0.05). Testou-se correla??o entre as prote?nas estudadas em cada grupo de les?es e constatou-se uma correla??o negativa significativa entre VEGF e FvW nas LCCG (p<0.05). Diante dos achados deste estudo, observa-se que h? diferen?a na express?o do VEGF nas CM, bem como na express?o global entre as les?es. Observou-se uma tend?ncia na maior express?o da MMP-9 nas LCCG, embora n?o significativa estatisticamente. Dessa forma, sugere-se que a maior express?o de ambas as prote?nas nas LCCG esteja mais relacionada possivelmente com a osteoclastog?nese. Adicionalmente, os resultados do presente estudo apontam um maior grau de vasculariza??o nas LPCG quando comparadas com as LCCG, fato este que pode estar relacionado diretamente com a natureza reacional das primeiras, em que o processo inflamat?rio com sua rica angiog?nese contribui sobremaneira para estes achados.