Die bakterielle Meningitis verursacht oft motorische Ausfälle, Anfälle, Hörverlust und kognitive Störungen trotz adäquater Antibiose. Streptococcus pneumoniae ist der häufigste Auslöser einer bakteriellen Meningitis des Erwachsenen und verursacht neuronale Apoptose im Hippocampus. Die Apoptose der Hippocampusneurone bei der experimentellen Pneumokokkenmeningitis war zum Teil durch Caspase-3 vermittelt und hing von der Entzündungsreaktion im Liquor ab. Sowohl Caspase-Inhibition als auch Hemmung der intrathekalen Entzündung reduzierten den neuronalen Zelltod. Jedoch konnte durch beide Therapiestrategien neuronaler Zelltod nicht komplett verhindert werden, was auf Caspase- und Entzündungs-unabhängige Zelltodmechanismen hinweist. Bakterielle Faktoren spielten eine wichtige Rolle für die neuronale Apoptose sowohl in vitro als auch in vivo. Pneumokokken induzierten neuronale Apoptose in vitro bei Abwesenheit von Entzündungszellen ohne jegliche Caspasenaktivierung. Vielmehr kam es dabei zu einem raschen intrazellulären Anstieg von Kalzium und reaktiven Sauerstoffradikalen sowie zu einer frühen Mitochondrienschädigung. Geschädigte Mitochondrien setzten den Apoptose-induzierenden Faktor AIF frei, welcher nach nukleärer Translokation zur Apoptose führte. Intrazytoplasmatische Injektion von anti-AIF Antikörpern blockierte die Apoptose. Diese Resultate belegen eine essentielle Rolle der Mitochondrienschädigung und AIF-Freisetzung bei der Pneumokokken-induzierten Apoptose. Als Haupttrigger neuronaler Apoptose konnten zwei Schlüsseltoxine sowohl in vitro als auch in vivo identifiziert werden: Pneumolysin und H2O2. Pneumolysin verursachte einen raschen Anstieg von intrazellulärem Kalzium, eine rasche Zerstörung von Mitochondrien und eine damit einhergehende Freisetzung von AIF. Kalzium-Chelation blockierte AIF-Freisetzung und Zelltod. In der experimentellen Pneumokokkenmeningitis verursachten Bakterien, in denen beide Toxine inaktiviert wurden, eine deutlich geringere neuronale Schädigung. Neue adjunktive Therapien für die Klinik könnten resultieren aus: Caspase-Inhibition, Blockade der Entzündung, anti-oxidative Strategien und Inaktivierung bakterieller Toxine. / Bacterial meningitis often causes motor deficits, seizures, hearing loss or cognitive impairment, despite adequate bacterial killing by antibiotics. Streptococcus pneumoniae is the most common cause of adult bacterial meningitis damaging the hippocampus by inducing neuronal apoptosis. Neuronal hippocampal apoptosis in experimental pneumococcal meningitis was mediated in part by caspase-3 and derived from the inflammatory response in the cerebrospinal fluid. Caspase inhibition and blocking of intrathecal inflammation significantly reduced hippocampal neuronal cell death. However, both strategies did not prevent completely neuronal death indicating caspase- and inflammation-independent mechanisms. Bacterial factors play an essential role in neuronal apoptosis both in vivo and in vitro. Exposure of neurons to live pneumococci in vitro in the absence of inflammation induced rapid apoptosis, which was not associated with the activation of caspases. Rather, apoptosis was attributed to rapid increase of intracellular calcium and reactive oxygen species and early damage to mitochondria. This was followed by the release of apoptosis-inducing factor (AIF) from the mitochondria, its nuclear translocation and apoptosis. Furthermore, intracytoplasmatic microinjection of AIF-specific antiserum markedly impaired pneumococcus-induced apoptosis. These findings indicate that mitochondrial damage and AIF play a central role in brain cell apoptosis and bacterial pathogenesis. Two key toxins of Streptococcus pneumoniae inducing apoptosis were identified in in vitro and in vivo experiments: pneumolysin and hydrogen peroxide. Pneumolysin induced increases of intracellular calcium, damage of mitochondria and release of AIF. Chelating calcium effectively blocked AIF release and cell death. Infection with pneumococci unable to produce pneumolysin and hydrogen peroxide significantly reduced damage in experimental pneumococcal meningitis. New adjunctive therapeutic strategies in clinics may result from caspase-inhibition, blocking of inflammation, anti-oxidative strategies and inactivation of bacterial toxins.

A doença pneumocócica invasiva é importante causa de morbi-mortalidade em crianças infectadas pelo HIV. A vacina pneumocócica conjugada 7-valente já teve sua segurança, eficácia e imunogenicidade comprovadas em crianças saudáveis, porém pouco se sabe sobre sua resposta humoral em crianças HIV-positivas. O trabalho avaliou quantitativamente a resposta com anticorpos aos 7 sorotipos pneumocócicos da vacina em um grupo de 40 crianças com infecção pelo HIV. A dosagem de anticorpos IgG contra os polissacárides da cápsula pneumocócica foi realizada através de ensaio imunoenzimático (ELISA). Os anticorpos foram dosados imediatamente antes e um mês após a aplicação da segunda dose da vacina. Utilizaram-se dois diferentes critérios para avaliar a resposta à vacina: títulos de anticorpos > 1.3 µg/mL na sorologia pós-imunização e aumento > 4 vezes nos títulos da sorologia pós em relação à pré-imunização. Observou-se aumento estatisticamente significante dos títulos geométricos médios (TGM) pós-vacinais em relação aos pré-vacinais para todos os sorotipos estudados. Não se observou diferença estatisticamente significante quando se comparou as crianças que haviam recebido a vacina polissacarídea 23-valente e as que não haviam recebido a vacina polissacarídea anteriormente. As crianças menores de 5 anos não apresentaram TGMs pós-imunização significativamente maiores para os sorotipos 6B e 19F. Não foi possível avaliar a interferência do CD4 na resposta sorológica à vacina conjugada pois 95% das crianças apresentavam CD4> 25% no momento da inclusão. Vinte e sete crianças (67.5%) tiveram resposta considerada satisfatória à vacina para 4 ou mais sorotipos vacinais quando se utilizou o valor 1.3 µg/mL como critério de resposta, enquanto, para o critério ascensão de títulos pós-imunização em relação aos pré-imunização de 4 vezes ou mais para pelo menos 4 sorotipos, a resposta foi inadequada (37.5%). / Pneumococcal invasive disease is a important cause of death in HIV-infected children. Heptavalent pneumococcal conjugate vaccine has been shown to be safe, effective and immunogenic in healthy children but little is known about it when it comes to HIV-infected children. We evaluated the quantitative antibody response to the 7 pneumococcal serotypes of the vaccine in a group of 40 HIV-infected children. An enzyme immunoassay (ELISA) was used to measure the IgG antibody response. Antibodies were measured immediately before and 1 month after the second dose of the vaccine. Two criteria of response were used: IgG titers > 1.3µg/mL in the post-immunization serology and an increase of at least 4-fold comparing the post-immunization with the pre-immunization serology. Statistically significant rises in the post-immunization geometric mean titers were observed for the seven serotypes studied. We did not find a statistically significant diference when we compared 2 groups: one that had been previously immunized with the polissacaride vacine and one that had never been immunized with that vaccine before. Children under 5 years of age did not show statiscally diferent median geometric titers for serotypes 6B and 19F when compared to the children > 5 years of age. We could not show CD4 count interference once 95% of the children had CD4 counts > 25%. Twenty-seven (67.5%) of the children were considered to respond satisfactorily to at least 4 of the serotypes included in the conjugate vaccine when the criteria was post-immunization titers > 1.3 µg/mL. When a increase of at least 4-fold between post-immunization and pre-immunization for at least 4 serotypes was used as criteria, our patients did not respond satisfactorily.

Em trabalhos anteriores o nosso grupo mostrou que a vacina celular pertussis (wP) apresenta atividade adjuvante quando combinada a proteína A da superfície de Streptococcus pneumoniae (pneumococo), PspA, A formulação PspA5-wP induz altos níveis de anticorpos e proteção em camundongos após desafio com pneumococo. Neste trabalho foram avaliados os mecanismos da ação adjuvante e os componentes de B. pertussis responsáveis por este efeito. A imunização de camundongos com PspA em combinação a mutantes de B. pertussis ou componentes desta bactéria purificados mostrou que a presença da toxina pertussis (PT) capaz é essencial para induzir altos níveis de anticorpos anti-PspA e proteção significativa contra o desafio letal com pneumococo. Este efeito não foi dependente da atividade enzimática. Anticorpos anti-PspA e as proteínas do sistema complemento foram essenciais para a proteção conferida por PspA-wP. As vacinas celulares BCG e DTP combinadas a PspA, também apresentaram atividade adjuvante, induzindo anticorpos anti-PspA e proteção contra o desafio invasivo por pneumococo. / Previously our group showed that the pneumococcal surface protein A from Streptococcus pneumoniae (pneumococcus), PspA, when combined with cellular pertussis vaccine (wP) as adjuvant, induce high levels of antibodies and mice protection on pneumococcal challenge. In this work were used mutants and purified components derived from B. pertussis for investigate the components responsible for this adjuvant effect, through of mice immunizations in combination with the PspA5 (Clade 5 PspA) antigen. Pertussis toxin (PT) was able to inducing the higher levels of PspA5 specific antibodies and significative protection against the pneumococcal lethal challenge, independently of its enzymatic effect. Was observed that in the protection conferred by the PspA5-wP formulation thus as the anti-PspA5 antibodies, the complements proteins are essentials. Lastly, prime-boost experiments showed that the cellular vaccines BCG and DTP when combined to PspA5, induced high levels of anti-PspA5 antibodies and protection against invasive challenge with pneumococcus.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Plasmídios são DNA extracromossômicos, com capacidade de se duplicarem de forma independente das células que os albergam, e são responsáveis pela expressão de uma variedade de características, como fatores de virulência. O material do presente estudo se constituiu da cepa receptora E. coli K12-R23, e de cepas de Klebsiella pneumoniae e de Escherichia coli, doadoras de plasmídios R e transconjugantes. O objetivo do presente estudo foi analisar os fenótipos conferidos em cepas transconjugantes de ambas bactérias pela transferência de plasmídios R de cepas doadoras para a receptora. Para a análise dos fenótipos, utilizaram-se, nas cepas do estudo, algumas variáveis: sensibilidade a antimicrobianos e a ERO, aderência a células HEp-2, e formação de slime e de biofilme. O marcador da presença de plasmídio, neste trabalho, foi a presença de resistênca à gentamicina nas cepas doadoras. Os resultados indicaram que houve transferência de plasmídio, pois as cepas transconjugantes de K. pneumoniae e de E. coli apesentaram este marcador (foram resistentes à gentamicina); além disso, as cepas transconjugantes mostraram perfis distintos da receptora em relação à sensibilidade aos antimicrobianos, às ERO, aos padrões de aderência às células HEp-2 e à formação de slime, apesar de a formação de biofilme nestas cepas não ter sofrido modificações. Observou-se, contudo, que várias características das cepas doadoras não foram encontradas nas cepas transconjugantes de E. coli e de K. pneumoniae. / Plasmids are extrachromosomal DNA that have the ability to duplicate independently of the host cells. Plasmids are responsible for the expression of a variety of characteristics of the cells, such as virulence factors. The present study utilized a receptor strain of E. Coli K12-R23 and strains of Klebsiella pneumoniae and E. coli which were R plasmids donor strains and transconjugant ones. The objective of this study was to analyze the attributed phenotypes of transconjugant strains in both bacteria caused by transference of R plasmids from the donor strains to the receptor ones. In order to analyze these phenotypes, the following variables were selected: sensitivity to antimicrobials and ROS, adherence to HEp-2 cells, and slime and biofilm structures. The marker of the presence of plasmids was gentamycin resistance in the donor strains. The observed results indicated that there was plasmid transfer; given that Klebsiella pneumoniae and E. coli strains presented the marker (e.g. they became resistant to gentamycin). Moreover, transconjugant strains have showed distinct profiles from the receptor strain concerning sensitivity to antimicrobials, ROS, adherence patterns to HEp-2 cells and slime structure. On the other hand, the biofilm structure of these strains did not present modifications. Yet, it was observed that several characteristics of the donor strains were not found in the transconjugant strains of E. coli and K. pneumoniae.

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This is a population-based study that was conducted immediately after the introduction of the vaccine in order to determine the carriage rate of this pathogen in children attending in day care centers in Goiania. These data may be used as a predictor for evaluating the dynamic of the circulating serotypes into the community after the vaccine introduction. Between October and November 2010, nasopharyngeal swabs were collected from 853 children ranging from 36 to 59 months attending in day care centers in Goiania. Isolation and identification of S. pneumoniae were done after the incubation step on broth-enriched for 6 h and posterior plating on blood agar. Isolates that were α-haemolytic, optochin-sensitive and soluble in bile were identified as S. pneumoniae. The isolates were serotyped by cmPCR. The database had been built with the statistical program SPSS (Chicago, IL, USA) version 18.0. The possible risk factors were assessed by multivariate Poisson regression. The level of probability of 0.05 (two-tailed) was used to determine statistical significance. The prevalence of pneumococcus carrier was 57.6% (CI95%: 54.2% - 60.9%). According to the multivariate Poisson regression analysis, children aged 36-47 months (IRR: 1.117; CI95%: 1.007-1.238; p: 0.035) and children in whose houses had four or more residents (IRR: 1.1214; CI95%: 1.078-1.368; p 0.001) were considered risk factors independently associated to pneumococcal colonization. The variable family income equal to or greater than three minimum wages was considered a protective factor independently associated to pneumococcal colonization (IRR: 0.787; CI95%: 0.627-0.990; p 0.041). The most prevalent serotypes and serogroups founded were 6A/6B/6C/6D (n=80; 16.3%), 14 (n=47; 9.6%), 23F (n=46; 9.4%), 19F (n=43; 8.8%), 15B/15C (n=30; 6.1%), 11A/11D (n=28; 5.7%), 3 (n=22; 4.5%) and 19A (n=16; 3.3%). Our results showed a high prevalence of pneumococcal colonization among the study population, indicating that colonization by this microrganism is common among children, especially in environments that favor crowding. The main serotypes/serogroups are cover by PCV10. / Streptococcus pneumoniae é o patógeno responsável pelas maiores taxas de morbidade e mortalidade em crianças, principalmente em países em desenvolvimento. A colonização da nasofaringe é a chave para o desenvolvimento das doenças pneumocócicas, bem como para a transmissão horizontal desse patógeno na comunidade. Crianças são o principal reservatório de S. pneumoniae e atuam como vetores dentro da cadeia de transmissão desse microrganismo. As vacinas pneumocócicas conjugadas (PCV) protegem contra as doenças pneumocócicas causadas pelos sorotipos vacinais, atuando também na proteção contra a colonização pelos mesmos sorotipos. Em 2010, o Brasil introduziu a PCV10 no programa de imunização infantil. Este trabalho é um estudo de base populacional que foi conduzido imediatamente após a introdução da PCV10 para determinar a taxa de portador desse patógeno em crianças não vacinadas que frequentam creches no município de Goiânia. Esses dados poderão ser utilizados como linha de base epidemiológica para avaliação da dinâmica dos sorotipos circulantes na comunidade após a introdução da vacina. Foram coletados, nos meses de outubro e novembro de 2010, 853 swabs de secreção da nasofaringe em crianças entre 36 a 59 meses que frequentavam creches no município de Goiânia. Para o isolamento e identificação de S. pneumoniae as amostras foram incubadas por 6 h em caldo enriquecido e semeadas em ágar sangue. Colônias α-hemolíticas sensíveis à optoquina e à bile foram identificadas como S. pneumoniae. Os isolados foram sorotipados por PCR multiplex convencional. A base de dados foi construída com o programa estatístico SPSS (Chicago, IL, USA) versão 18.0. Os possíveis fatores de risco foram avaliados por regressão de Poisson multivariada. O nível de probabilidade de 0,05 (bi-caudal) foi utilizado para determinar a significância estatística. A prevalência de portador do pneumococo foi de 57,6% (IC95%: 54,2% - 60,9%). De acordo com a análise multivariada crianças com idade entre 36-47 meses de idade (IRR: 1,117; IC95%:1,007 – 1,238; p= 0,035) e crianças em cujos domicílios haviam quatro ou mais pessoas residentes (IRR: 1,1214; IC95%: 1,078 – 1,368; p= 0,001) foram considerados fatores de risco independentemente associados para a colonização pneumocócica. A variável renda familiar igual ou superior a três salários mínimos foi considerada um fator protetor independentemente associado para a colonização pneumocócica (IRR: 0,787; IC95%: 0,627 – 0,990; p= 0,041). Os sorotipos/sorogrupos mais prevalentes foram 6A/6B/6C/6D (n=80; 16,3%), 14 (n=47; 9,6%), 23F (n=46; 9,4%), 19F (n=43; 8,8%), 15B/15C (n=30; 6,1%), 11A/11D (n=28; 5,7%), 3 (n=22; 4,5%) e 19A (n=16; 3,3%). Nossos resultados mostraram uma alta prevalência de colonização por pneumococo entre a população estudada, indicando que a colonização por esse microrganismo é comum entre crianças, principalmente em ambientes que favorecem a aglomeração. Os principais sorotipos/sorogrupos encontrados são contemplados pela PCV10.

A doença pneumocócica invasiva é importante causa de morbi-mortalidade em crianças infectadas pelo HIV. A vacina pneumocócica conjugada 7-valente já teve sua segurança, eficácia e imunogenicidade comprovadas em crianças saudáveis, porém pouco se sabe sobre sua resposta humoral em crianças HIV-positivas. O trabalho avaliou quantitativamente a resposta com anticorpos aos 7 sorotipos pneumocócicos da vacina em um grupo de 40 crianças com infecção pelo HIV. A dosagem de anticorpos IgG contra os polissacárides da cápsula pneumocócica foi realizada através de ensaio imunoenzimático (ELISA). Os anticorpos foram dosados imediatamente antes e um mês após a aplicação da segunda dose da vacina. Utilizaram-se dois diferentes critérios para avaliar a resposta à vacina: títulos de anticorpos > 1.3 µg/mL na sorologia pós-imunização e aumento > 4 vezes nos títulos da sorologia pós em relação à pré-imunização. Observou-se aumento estatisticamente significante dos títulos geométricos médios (TGM) pós-vacinais em relação aos pré-vacinais para todos os sorotipos estudados. Não se observou diferença estatisticamente significante quando se comparou as crianças que haviam recebido a vacina polissacarídea 23-valente e as que não haviam recebido a vacina polissacarídea anteriormente. As crianças menores de 5 anos não apresentaram TGMs pós-imunização significativamente maiores para os sorotipos 6B e 19F. Não foi possível avaliar a interferência do CD4 na resposta sorológica à vacina conjugada pois 95% das crianças apresentavam CD4> 25% no momento da inclusão. Vinte e sete crianças (67.5%) tiveram resposta considerada satisfatória à vacina para 4 ou mais sorotipos vacinais quando se utilizou o valor 1.3 µg/mL como critério de resposta, enquanto, para o critério ascensão de títulos pós-imunização em relação aos pré-imunização de 4 vezes ou mais para pelo menos 4 sorotipos, a resposta foi inadequada (37.5%). / Pneumococcal invasive disease is a important cause of death in HIV-infected children. Heptavalent pneumococcal conjugate vaccine has been shown to be safe, effective and immunogenic in healthy children but little is known about it when it comes to HIV-infected children. We evaluated the quantitative antibody response to the 7 pneumococcal serotypes of the vaccine in a group of 40 HIV-infected children. An enzyme immunoassay (ELISA) was used to measure the IgG antibody response. Antibodies were measured immediately before and 1 month after the second dose of the vaccine. Two criteria of response were used: IgG titers > 1.3µg/mL in the post-immunization serology and an increase of at least 4-fold comparing the post-immunization with the pre-immunization serology. Statistically significant rises in the post-immunization geometric mean titers were observed for the seven serotypes studied. We did not find a statistically significant diference when we compared 2 groups: one that had been previously immunized with the polissacaride vacine and one that had never been immunized with that vaccine before. Children under 5 years of age did not show statiscally diferent median geometric titers for serotypes 6B and 19F when compared to the children > 5 years of age. We could not show CD4 count interference once 95% of the children had CD4 counts > 25%. Twenty-seven (67.5%) of the children were considered to respond satisfactorily to at least 4 of the serotypes included in the conjugate vaccine when the criteria was post-immunization titers > 1.3 µg/mL. When a increase of at least 4-fold between post-immunization and pre-immunization for at least 4 serotypes was used as criteria, our patients did not respond satisfactorily.

Realizamos um estudo de corte transversal para investigar os fatores de risco para colonização de recém-nascidos por Klebsiella pneumoniae produtora de betalactamase de espectro estendido durante surto em unidade neonatal de risco intermediário. O surto se deveu à colonização crônica de profissional de saúde portadora de onicomicose. Cento e vinte recém-nascidos internados na unidade neonatal durante um período de três meses foram rastreados para colonização por Klebsiella pneumoniae produtora de ESBL através de cultura de swab retal, sendo detectados 27 colonizados. A análise multivariada mostrou que a colonização se associou de forma independente ao uso prévio de antimicrobianos e à ausência de aleitamento materno. Os antimicrobianos mais utilizados foram penicilina e amicacina. Uso prévio de antimicrobianos apresentou odds ratio (OR) igual a 12,3 [intervalo de 95% de confiança (IC): 3,66-41,2, P<0,001]. Aleitamento materno foi associado à redução do risco de colonização (OR: 0,22; IC95%: 0,05-0,99; P=0,049). Nove isolados recuperados no primeiro estágio do surto e 27 isolados de culturas de rastreamento foram posteriormente tipadas por eletroforese em gel de campo pulsado, revelando seis apresentações distintas (A a F). No primeiro estágio do surto ocorreram os clones A, C e E, enquanto entre os 27 isolados das culturas de rastreamento os seis clones foram identificados. O clone A também foi identificado nas mãos de técnica de enfermagem portadora de onicomicose. Pudemos concluir que uso prévio de antimicrobianos predispôs à colonização. O possível efeito do aleitamento materno como fator protetor deve ser mais bem investigado. A detecção de diferentes genótipos de K. pneumoniae sugere que a disseminação de elementos móveis portando o gene ESBL tenha se superposto à simples disseminação de um clone durante o surto / We describe a cross-sectional survey to identify risk factors for colonisation of neonates by extended-spectrum beta-lactamase producing Klebsiella pneumoniae. This occurred following exposure to a colonised healthcare worker during an outbreak in an intermediate-risk neonatal unit. In total, 120 neonates admitted consecutively during a three-month period were screened for ESBL-producing K. pneumoniae by rectal swabbing and 27 were identified as colonised. Multivariate analysis showed colonisation to be independently associated with use of antibiotics and absence of breastfeeding. Previous use of antibiotics presented an odds ratio (OR) of 12,3 [95% confidence interval (CI): 3,66-41,2, P<0,001]. The most commonly used antibiotics were penicillin and amikacin. Breastfeeding was associated with reduced risk for colonisation (OR: 0,22; 95% CI: 0,05-0,99; P=0,049). Nine isolates recovered during the first stage of the outbreak and 27 isolates from surveillance cultures were typed thereafter by pulsed-field gel electrophoresis, revealing six different profiles (A - F). Clones A, C, and E were implicated in the first stage of the outbreak, whereas among the 27 strains recovered from surveillance cultures, all six clones were identified. Clone A was also found on the hand of a nursing auxiliary with onychomycosis. We concluded that prior antimicrobial use predisposed to colonisation. The possible role of breastfeeding as a protective factor needs to be further elucidated. Detection of different genotypes of ESBL-producing K. pneumoniae suggests that dissemination of mobile genetic elements bearing the ESBL gene may have been superimposed on the simple dissemination of a clone during the outbreak

A doença pneumocócica invasiva é um grande desafio global. Bacteremia está fortemente relacionada às condições clínicas de imunodepressão. Pacientes com câncer raramente são alvo de estudos clínicos. Neste estudo, nosso objetivo primário foi avaliar os fatores prognósticos em pacientes com câncer com bacteremia pneumocócica. Os objetivos secundários foram descrever os episódios de bacteremia e as características fenotípicas das cepas isoladas. O desenho foi uma coorte retrospectiva, que incluiu pacientes com câncer com mais de 18 anos de idade que tiveram bacteremia pneumocócica, de janeiro de 2009 a junho de 2015, no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo. Os critérios de infecção foram aqueles delineados pelo NHSN/CDC. Os desfechos avaliados foram mortalidade em 48h e em 10 dias, e sobrevida dos pacientes. As variáveis independentes analisadas foram: idade, sexo, etnia, ECOG, Karnofsky escore, SOFA, diagnóstico do câncer, presença de metástases, quimioterapia, radioterapia, neutropenia, uso prévio de antibióticos, internação hospitalar prévia, internação prévia em UTI, comorbidades (DPOC sistêmica, Hipertensão Arterial, Diabetes Mellitus e Insuficiência Cardíaca), tabagismo, vacinação antipneumocócica prévia, sítio de infecção, infecção polimicrobiana, suscetibilidade antimicrobiana, sorotipo e tratamento. A associação das características com os desfechos foi verificada por meio dos testes qui-quadrado, teste de razão de verossimilhança ou teste exato de Fisher. A análise multivariada foi realizada por regressão logística stepwise, incluindo todas as variáveis com P < 0,10. A sobrevida foi estimada de acordo com cada característica avaliada pela função de Kaplan-Meier, seguida de testes log-rank para comparar a sobrevida entre as categorias das variáveis qualitativas. As Razões de Risco (HR) foram calculadas com os respectivos intervalos de confiança de 95% usando regressão de Cox bivariada. Todas as variáveis que apresentaram nível de significância de 0,10 (p < 0,1) foram testadas no modelo múltiplo, e as variáveis do modelo final foram selecionadas pelo método stepwise com critério de seleção Backward com entrada e saída de 5%. Os testes foram realizados com nível de significância de 5%. Foram detectadas 165 bacteremias pneumocócicas no período do estudo em 161 pacientes oncológicos; destas, 4 episódios foram excluídos por se tratarem de recidivas. Assim, 161 episódios foram incluídos para análise descritiva e estatística. A casuística foi composta em sua maioria por homens (62,7%), com uma média de idade de 61,3 anos. A maioria da casuística foi composta por indivíduos com tumores sólidos (121/75,2%). Entre os tumores sólidos, os mais prevalentes foram os do trato gastrointestinal, seguido dos tumores de cabeça e pescoço e trato respiratório. Entre as neoplasias hematológicas (40/24,8%), as mais prevalentes foram mieloma múltiplo (20/50,0%), seguidos de linfomas não Hodgkin (14/35,0%). A mortalidade em 48h e em 10 dias foi, respectivamente, de 20,5% e 33,5%. Entre 120 cepas testadas, 61 (50,8%) corresponderam aos encontrados na vacina VCV13 e 89 (74,2%) na VPV23. As variáveis associadas a mortalidade em 48h, na análise multivariada, foram: SOFA (OR 1,37, p < 0,001) bacteremia polimicrobiana (OR 3,78, p0,018). Na análise multivariada para mortalidade em 10 dias, os fatores associados foram: febre 48h antes da bacteremia (OR 0,35, p0,026), neutropenia vigente (OR 4,01, p0,011), ECOG ¾ (OR 5,83, p0,001), SOFA (OR 1,41, P < 0,001 - um aumento unitário do SOFA resultou em um aumento de 59% na chance de mortalidade) e uso de quinolonas (OR 0,08, p0,023). Na sobrevida global, as variáveis relacionadas detectadas foram: presença de metástases (HR 1,97, p < 0,001), KARNOFSKY < 90 (HR 1,56, p0,021), SOFA (HR 1,27, p < 0,001), uso de anticorpos no último mês (HR 3,25, p0,026) e bacteremia polimicrobiana (HR 1,69, p0,046). Em conclusão, a bacteremia pneumocócica apresentou alta mortalidade em pacientes oncológicos, com prognóstico relacionado a fatores intrínsecos do hospedeiro e aos episódios de infecção, como o SOFA presente como preditor de mortalidade em 48h, 10 dias e piora da sobrevida global. A presença de bacteremia polimicrobiana associou-se a mortalidade em 48h e piorou a sobrevida. Presença de febre e uso de quinolonas foram fatores de proteção para a mortalidade em 10 dias; a presença de febre provavelmente encurtou o tempo entre o início da sepse e a demanda por serviços de saúde, com antibioticoterapia mais precoce. Não foi possível estimar o efeito protetor da vacinação antipneumocócica devido ao pequeno número de pacientes vacinados / Invasive pneumococcal disease is a major global challenge. Bacteremia is strongly related to the clinical conditions of immunodepression. Patients with cancer are rarely the target of clinical trials. In this study, our primary objective was to evaluate the prognostic factors in patients with pneumococcal bacteremia. The secondary objectives were to describe the episodes of bacteremia and the phenotypic characteristics of the isolated strains. The design was a retrospective cohort that included cancer patients over 18 years of age who had pneumococcal bacteremia from January 2009 to June 2015 at the \"Instituto do Câncer do Estado de São Paulo\". The criteria for infection were those outlined by the NHSN / CDC. The outcomes evaluated were mortality in 48h and 10 days and overall survival. The independent variables analyzed were: age, sex, ethnicity, ECOG, Karnofsky score, SOFA, diagnosis of cancer, presence of metastasis, chemotherapy, radiotherapy, neutropenia, previous use of antibiotics, previous hospital admission, previous ICU admission, comorbidities (systemic COPD, Hypertension, Diabetes mellitus and Congestive Heart Failure), smoking, previous antipneumococcal vaccination, site of infection, polymicrobial infection, antimicrobial susceptibility, serotype and treatment. The association of the characteristics with the outcomes was verified using chi-square tests, likelihood ratio test or Fisher\'s exact test. Multivariate analysis was performed by stepwise logistic regression, including all variables with P < 0.10. Survival was estimated according to each characteristic assessed by the Kaplan-Meier function, followed by log-rank tests to compare survival between categories of qualitative variables. The Hazard Ratios (HR) were calculated with the respective 95% confidence intervals using bivariate Cox regression. All variables that presented a significance level of 0.10 (p < 0.1) were tested in the multiple model, and the variables of the final model were selected by stepwise method with Backward selection criterion with input and output of 5%. The tests were performed with a significance level of 5%. We detected 165 pneumococcal bacteremias during the study period in 161 cancer patients; of these, 4 episodes were excluded because they were recurrences. Thus, 161 episodes were included for descriptive and statistical analysis. Our study consisted mostly of men (62.7%), with a mean age of 61.3 years. The majority of cases were individuals with solid tumors (121 / 75.2%). Among the solid tumors, the most prevalent tumors were those of the gastrointestinal tract, followed by tumors of the head and neck and respiratory tract. Among the hematological malignancies (40/24.8%), the most prevalent were multiple myeloma (20 / 50.0%), followed by non-Hodgkin\'s lymphomas (14 / 35.0%). Mortality in 48h and 10 days was, respectively, 20.5% and 33.5%. Among 120 strains tested, 61 (50.8%) corresponded to those found in the VCV13 vaccine and 89 (74.2%) in the VPV23. The variables associated with 48-h mortality in the multivariate analysis were: SOFA (OR 1.37, p < 0.001) and polymicrobial bacteremia (OR 3.78, p 0.018). In the multivariate analysis for 10-day mortality, the associated factors were: fever 48h before bacteremia (OR 0.35, p 0.026), current neutropenia (OR 4.01, p 0.011), ECOG ¾ (OR 5.83 , p 0.001), SOFA (OR 1.41, P < 0.001 - a unit increase of SOFA resulted in a 59% increase in chance of mortality) and use of quinolones (OR 0.08, p0.023). In the overall survival, the related variables detected were: presence of metastases (HR 1.97, p < 0.001), KARNOFSKY < 90 (HR 1.56, p0.021), SOFA (HR 1.27, p < 0.001), use of antibodies in the last month (HR 3.25, p0.026) and polymicrobial bacteremia (HR 1.69, p0.046). In conclusion, pneumococcal bacteremia presented high mortality in cancer patients, with a prognosis related to intrinsic host factors and infection episodes, such as SOFA present as a predictor of mortality in 48h, 10 days and worsening of overall survival. The presence of polymicrobial bacteremia was associated with 48-h mortality and worsened survival. Presence of fever and use of quinolones were protective factors for mortality in 10 days; the presence of fever probably shortened the time between the onset of sepsis and the demand for health services, with earlier antibiotic therapy. It was not possible to estimate the protective effect of anti-pneumococcal vaccination due to the small number of patients vaccinated

Chlamydophila pneumoniae (C. pneumoniae) has been suggested as a stimulator of chronic inflammation in atherosclerosis. C. pneumoniae DNA was demonstrated in aortic biopsies in 50% of patients with stable angina pectoris or acute coronary syndrome undergoing coronary artery bypass grafting. C. pneumoniae mRNA, a marker of replicating bacteria, was demonstrated in 18% of the aortic biopsies. Inflammation may have a role in the pathogenesis of thoracic aortic aneurysm, aortic dissection and aortic valve stenosis. C. pneumoniae DNA was demonstrated in aortic biopsies in 26% of thoracic aortic aneurysm patients and in 11% of aortic dissection patients undergoing thoracic surgery and in 22% of stenotic aortic heart valves from patients undergoing aortic valve replacement. No bacterial mRNA was demonstrated in these aortic biopsies, nor in the valves, suggesting that the infection has passed into a persistent state. C. pneumoniae DNA was demonstrated in peripheral blood mononuclear cells in only 5% of aortic valve stenosis patients and not in thoracic aortic aneurysm or aortic dissection patients, suggesting that the bacterium disseminated to the cardiovascular tissue long before the patient required surgery. The copper/zinc ratio in serum, a marker of infection/inflammation, was significantly elevated in thoracic aortic aneurysm patients, supporting an inflammatory pathogenesis. Patients positive for C. pneumoniae in the aortic valve had more advanced coronary atherosclerosis, further supporting a possible role for C. pneumoniae in atherosclerosis. Mice were infected with C. pneumoniae that disseminated to all organs investigated (i.e. lungs, heart, aorta, liver and spleen). Trace element concentrations were altered in infected animals with an increased copper/zinc ratio in serum, a progressively increased iron concentration in the liver and a progressively decreased iron concentration in serum. Iron is important for C. pneumoniae metabolism, and a changed iron homeostasis was noted in infected mice by alterations in iron-regulating proteins, such as DMT1 and hepcidin.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-18T18:53:21Z No. of bitstreams: 1 Vivian Galvão. Caracterizaçao de cepas...2012.pdf: 1132531 bytes, checksum: c5a7374a74f6f74d8bd7cc7573c224f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-18T18:53:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vivian Galvão. Caracterizaçao de cepas...2012.pdf: 1132531 bytes, checksum: c5a7374a74f6f74d8bd7cc7573c224f5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A doença pneumocócica invasiva (DPI) continua sendo uma das principais causas de morbidade e mortalidade no mundo, mesmo com a disponibilidade atual de terapias antimicrobianas e vacinas conjugadas. O objetivo desse estudo foi caracterizar o perfil fenotípico e genotípico das cepas invasivas de Streptococcus pneumoniae isoladas de diferentes sítos de infecção que circulam em hospitais públicos e privados da cidade de Salvador-Brasil no período de janeiro de 2008 a julho de 2011. Os isolados de S. pneumoniae de doença invasiva foram identificados por métodos microbiológicos clássicos e submetidos à determinação capsular através da técnica de Multiplex-PCR. A sensibilidade aos antimicrobianos foi determinada pela técnica de microdiluição em caldo. A caracterização genotípica foi realizada por PFGE e MLST. No período do estudo foram identificados 75 casos de DPI com cultura positiva, sendo 82,7% provenientes de hemocultura, 9,3% de líquido pleural e 8,0% de líquor. As crianças representaram 37,9% e os idosos 24,0% da população em estudo. Os sorotipos mais prevalentes foram o 14 (14,7%), 19F (13,3%), 6B (10,7%), 23F (9,3%), 3 (9,3%) e 19A (6,7%). Um total de 57,3% dos sorotipos identificados estão representados na vacina PCV10. Não-susceptibilidade à penicilina (CIM ≥ 4μg/mL) foi observada em 5,3% dos isolados. Para o SMX-TMP, tetraciclina e eritromicina, os índices de não-susceptibilidade foram de 55%, 15% e 11%, respectivamente. A tipagem por PFGE classificou 61,3% dos isolados de DPI como não-clonais e 29 (38,7%) em 10 perfis clonais. Quando comparados aos isolados de meningite isolados no Hospital Couto Maia, 22,7% apresentaram perfis semelhantes, que foram distribuídos em seis grupos clonais (quatro grupos clonais com isolados não-susceptíveis à penicilina e dois sensíveis). Foram encontrados 22 STs diferentes entre as 26 amostras caracterizadas por MLST. Quando comparado aos clones já caracterizados pelo PMEN, verificou-se que na cidade de Salvador circulam clones já identificados em outros países, a exemplo dos clones: Colombia23F-26 (SLV 338), Portugal19F-21 (ST 177), Spain9V-3 (SLV 156) e Netherlands3-31 (ST 180). Os isolados de pneumococos deste estudo apresentam maior taxa de resistência, incluindo resistência a múltiplas drogas quando comparados aos dos casos de meningite identificados em casos de meningite, com exceção da penicilina. Embora os clones mais frequentemente associados aos casos de meningite pneumocócia em Salvador tenham sido identificados nesta casuistica, os isolados de pneumococos provenientes de outras formas de doença invasiva apresentaram uma maior diversidade fenotípica e genotípica, ressaltando a importância do monitoramento contínuo das cepas invasivas nas diferentes manifestações da doença pneumocócica no tempo das vacinas conjugadas. / Invasive pneumococcal disease (IPD) remains one of the major causes of morbidity and mortality worldwide, even with the current availability of antimicrobial therapies and conjugate vaccines. The objective of the present study was to characterize the phenotypic and genotypic profiles of invasive pneumococcal isolates obtained from patients admitted to public and private hospitals in Salvador, from the period of Jan/2008 to Jul/2011. The pneumococcal isolates from invasive disease were identified by classical microbiological methods and submitted to capsular deduction by multiplex-PCR. The antimicrobial susceptibility was performed by broth microdilution method. The genotypic profile was accessing by PFGE and MLST. During the study period, 75 consecutive culture-positive cases of IPD were characterized, being 82.7% from blood, 9.3% from pleural fluid and 8.0% from CSF. The study population comprised of 37.9% of children (under 5 years old) and 24.0% of elderly (upper 64 years old). The most prevalent serotypes were: 14 (14.7%), 19F (13.3%), 6B (10.7%), 23F (9.3%), 3 (9.3%) and 19A (6.7%). A total of 57.3% of the serotypes identified are represented in the vaccine PCV10. Non-susceptibility to penicillin (MIC ≥ 4μg/mL) was observed in 5.3% of the isolates. The non-susceptibility rate for SMX-TMP, tetracycline and erythromycin was found in 55%, 15% and 11% of the isolates, respectively. The PFGE pattern analysis classified 61.3% of IPD isolates as non-clonal and 29 (38.7%) isolates were clustered in ten PFGE profiles. When the clonal strains were compared with pneumococcal meningitis isolates from Hospital Couto Maia, 22.7% showed similar profiles by PFGE, being distributed into six clonal groups (four clonal groups of penicillin non-susceptible and two of penicillin susceptible). Twenty-two STs were observed among the 26 samples characterized by MLST. When compared to already characterized PMEN clones, it was found that some circulating clones in the city of Salvador have been identified in other countries, such as: Colombia23F-26 (SLV 338), Portugal19F-21 (ST 177), Spain9V-3 (SLV 156) and Netherlands3-31 (ST 180). The pneumococcal strains in the study have a higher rate of resistance, including multidrug resistance when compared to cases of meningitis identified in the HCM, except for penicillin. Although the clones most frequently associated with cases of meningitis in Salvador have been identified in this study, isolates of pneumococci from other forms of IPD had a higher phenotypic and genotypic diversity, highlighting the importance of continuous monitoring of invasive strains in different manifestations of pneumococcal infection in the time of conjugate vaccines.