Orientador: Mary Marcondes / Banca: Wagner Luís Ferreira / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: O objetivo do presente estudo foi determinar em uma população de 302 gatos provenientes de área endêmica para leishmaniose visceral, a prevalência da infecção por Leishmania spp. e a presença de coinfecção pelo Toxoplasma gondii, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Foram evidenciadas formas amastigotas de Leishmania spp. em 9,93% (30/302) dos animais. A prevalência da leishmaniose observada por meio dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG ou exame parasitológico direto foi de 21,85% (66/302), sendo 13,64% (9/66) positivos no exame parasitológico direto e sororeagentes nas técnicas de ELISA indireto. Doze animais (70,59%) foram sororeagentes para o FIV e a Leishmania spp., enquanto 17 (25,76%) apresentaram anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Leishmania spp. e cinco (71,43%) apresentavam infecção pelos três agentes. Não foi observada coinfecção entre Leishmania spp. e o FeLV. Houve associação estatisticamente significante entre a coinfecção por Leishmania spp. e pelo vírus da imunodeficiência felina, bem como entre a presença de Leishmania spp., do vírus da imunodeficiência felina e do Toxoplasma gondii. A sensibilidade e a especificidade dos métodos de ELISA-proteína A, ELISA-IgG e reação de imunofluorescência indireta para o diagnóstico de leishmaniose felina foram de 56,6% e 89,47%, 55,55% e 90,96% e 54,55% e 96,80%, respectivamente. As concordâncias entre a RIFI e as técnicas de ELISA-proteína A e ELISA-IgG foram fracas. No entanto, houve boa concordância entre as duas últimas técnicas. O presente estudo verificou que gatos residentes em área endêmica para leishmaniose visceral são predispostos à coinfecção por Leishmania spp. e vírus da imunodeficiência felina, e que parte deles desenvolvem sintomas inespecíficos e devem ser investigados em um diagnóstico diferencial / Abstract:The aim of this study was to determine, in a population of 302 cats from an endemic area for visceral leishmaniasis, the prevalence of the infection by Leishmania spp. and the presence of co-infection by Toxoplasma gondii, feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). Amastigote forms of Leishmania spp were evidenced in 9.93% (30/302) of the animals. Prevalence of leishmaniasis by ELISA-prot A, ELISA-IgG or direct parasitological examination was 21.85% (66/302), being 13.64% (9/66) positive in both direct parasitological examination and ELISA. Twelve animals (70.59%) were seroreagent for FIV and Leishmania spp., while 17 (25.76%) showed antibodies against Toxoplasma gondii and Leishmania spp. and five (71.43%) showed antibodies against those three agents. Co-infection was not observed between Leishmania spp. and FeLV. There was statistically significant correlation between the co-infection by Leishmania spp. and by the immunodeficiency virus, as well as among the present of Leishmania spp, feline immunodeficiency virus and Toxoplasma gondii. The susceptibility and the specificities of (the methods) ELISA-prot A, ELISA-IgG and reaction of indirect immunofluorescence for the diagnosis of feline leishmaniasis were 56.6% and 89.47%, 55.55% and 90.96% and 54.55% and 96.80%, respectively. The agreements between RIFI and ELISA-prot A and ELISA-IgG techniques were weak. However, there was a good agreement between the last two techniques. This study verified that cats from endemic areas for visceral leishmaniasis are predisposed to co-infection by Leishmania spp. and feline immunodeficiency virus, and that part of them developed nonspecific symptoms and should be investigated in a differential diagnosis / Mestre

Orientador: João Pessoa Araujo Júnior / Banca: Marcelo de Souza Zanutto / Banca: Jenner karlisson Pimenta dos Reis / Banca: Valéria Maria Lara Carregaro / Banca: Regina Kiomi Takahira / Resumo: A infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) é uma das mais importantes doenças infecciosas dos felinos domésticos. Os gatos infectados apresentam sinais clínicos inespecíficos, portanto para confirmar a infecção são necessários testes laboratoriais específicos. A detecção de anticorpos anti-FIV possui uma correlação direta com a infecção viral, pois uma vez infectado o gato permanece infectado permanentemente. No presente estudo, foram produzidos antígenos recombinantes do capsídeo viral (p24) e proteína de matriz (p17) do FIV. Os fragmentos codificantes da p24 e p17 foram amplificados a partir do DNA pró-viral extraído do sangue periférico de gatos naturalmente infectados pelo FIV (subtipo B), e clonados e expressos em fase com a cauda de histidina (6xHis) na porção amino ou carboxi-terminal. Os antígenos p24, p17, p24 fundido com o epítopo transmembrana (p24/TM) e peptídeo sintético TM do FIV foram utilizados na padronização e aplicação dos testes de ELISA indireto rápido e Western blot para detecção de anticorpos anti-FIV. A reatividade dos antígenos foi analisada separadamente no ELISA indireto rápido, e permitiu a comparação dos antígenos quanto aos valores de sensibilidade e especificidade relativa. O antígeno FIVp24/TM apresentou melhor desempenho, com concordância de 100% com o teste SNAP® FIV/FeLV Combo test (n=110). A validação do ELISA indireto rápido com o antígeno FIVp24/TM mostrou características desejáveis para o uso comercial, tais como alta precisão e manutenção da reatividade durante o armazenamento. Pode-se concluir que a produção de antígenos recombinantes do FIV foi eficiente e possibilitou o desenvolvimento de um teste rápido (ELISA indireto rápido) e um teste confirmatório (Western blot) para o diagnóstico da infecção pelo FIV / Abstract: Infection with feline immunodeficiency virus (FIV) is one of the most important infectious diseases of domestic cats. Infected cats exhibit non-specific clinical signs, so specific laboratory assays are necessary to confirm the diagnosis of FIV infection. Detection of anti-FIV antibodies has a direct correlation with the viral infection, because once a cat has been infected it will remain infected permanently. In the present study, we produced FIV recombinant capsid antigen (p24) and matrix protein (p17). The coding fragments of p24 and p17 were obtained from proviral DNA extracted from peripheral blood of cats naturally infected with FIV (subtype B). These fragments were cloned and expressed in phase with amino or carboxi-terminal histidine tag (6xHis). The antigens FIVp24, FIVp17, p24 fused to transmembrane epitope (FIVp24/TM) and synthetic peptide TM were used for standardization and implementation of rapid indirect ELISA and Western blot assays for detection of anti-FIV antibodies. The reactivity of the antigens was analyzed separately in rapid indirect ELISA and allowed the determination of relative sensitivity and specificity of the antigens. The FIVp24/TM antigen has better performance, with 100% of agreement with SNAP® FIV/FeLV Combo test (IDEXX laboratories). The validation of the FIVp24/TM rapid indirect ELISA showed desirable characteristics for commercial use, such as high precision and maintenance of reactivity during storage. In conclusion, production of FIV recombinant antigens was efficient and allowed the development of a rapid test (rapid indirect ELISA) and a confirmatory test (Western blot) for diagnosis of FIV infection / Doutor

The aimed of this study was to determine and compare seroprevalence of Bovine Leukosis between beef and dare cattle in the city of Catalão, Goiás and identify epidemiological factors that influence the disease. Twenty properties were chosen ten with dare ability and ten cut ability, comprising 120 animals of each one. The epidemiological variables considered were: ability (beef or dare), gender, age, replacement of animals on the property, needle exchange among animals, intense presence of vectors practice of milking, fomites sharing, veterinary care and supply of silage. Serum samples were examined by AGID - LEB and produced by TECPAR. In beef properties, 20 calves were positive (16.67%), whereas in dairy herd cattle 49 (40.83%) were positive for leukemia. In simple regression, there was an increase of probability of 3,45 times of the animal is seropositive for leukemia in dare ability. The age group with the highest percentage of positive was that of over 36 months. A higher positivity rate (34.57%) on the properties who do needle exchange than no standard exchange. When analyzed individually, needle exchange did not influence the frequency of the disease. In the multivariate analysis, needle exchange influenced the leukemia frequency, being higher in properties that practiced exchange. Vectors presence on the property and providing silage influence the greatest number of positive animals. Females had a higher percentage of positive animals for leukemia than males. Properties that practiced replecement of animals from other areas had lowest percentage of positivity. In properties where cows were milked, denotes to increase 1,28 times of chance of the animal been positive for leukemia. Fomites sharing practice influenced the higher positivity of the herd in the properties that used this practice. Failure of veterinary treatment was responsible for over 50% of cases of animals with leukemia. Of the ten risk factors, five were significant (ability, age, needle exchange, presence of vectors and supply of silage) when evaluated together for the presence of the disease and five as unrepresentative (sex, replacement of animals, milking, sharing fomites and veterinary care). In dairy cattle observed increase in the probability of being positive for leucosis more than 5,21 times. For each age group that evolves, is increased by 0,16times of the chance of finding disease. Already needle exchange represented an increase of 2,83 times of probability of having leukemia. Intense presence of vectors increased 7,14 times of chance to present leukemia. Providing silage represents an increase of 5,2 times of probability of bovine be positive. In multivariate regression, gender, replacement of animals, milking, sharing fomites and veterinary care together not correlate with seropositivity for enzootic bovine leukemia. 8.34% (20/240) of positive population belongs to beef cattle and 20.42% (49/240) belongs to dairy cattle. In conclusion, Enzootic Bovine Leukosis occurs most frequently in dairy cattle in the court, in the Catalan / GO region. The risk factors that together account for significant prevalence of the disease are: animals over 36 months, needle exchange, intense presence of vectors and supply of silage. / Objetivou-se determinar e comparar soroprevalência da Leucose Enzoótica Bovina entre bovinos de corte e leite no município de Catalão, Goiás e identificar fatores de risco que influenciam na doença. Foram escolhidas vinte propriedades, sendo dez com aptidão leite e dez com aptidão corte, contendo 120 animais de cada aptidão. As variáveis epidemiológicas consideradas foram: aptidão (leite ou corte), sexo, faixa etária, reposição de animais na propriedade, troca de agulhas entre animais, presença de vetores, prática de ordenha, compartilhamento de fômites, assistência veterinária e fornecimento de silagem. Amostras séricas foram examinadas pelo IDGA. Nas propriedades de corte, 20 bovinos foram positivos (16,67%), enquanto no rebanho leiteiro 49 bovinos (40,83%) foram positivos para leucose. Na regressão simples, observou-se aumento de probabilidade de 3,45 vezes de o animal ser soropositivo para leucose na aptidão leite. A faixa etária com maior porcentagem de positivos foi a de acima de 36 meses. Observou-se maior índice de positividade (34,57%) nas propriedades que praticam troca de agulhas do que não procedem a troca. Quando analisada individualmente, troca de agulha não influenciou na frequência da doença. Na análise multivariada troca de agulhas influenciou na frequência de leucose, sendo maior nas propriedades que praticavam troca. Presença de vetores na propriedade e fornecimento de silagem influenciaram no maior número de animais positivos. Fêmeas apresentaram maior percentual de animais positivos para leucose que machos. Propriedades que praticavam compra de animais de outros locais apresentaram menor percentual de reagentes. Nas propriedades onde vacas eram ordenhadas, denota-se incremento de 1,28 vezes na chance de o animal ser positivo para leucose. Prática de compartilhamento de fômites influenciou na maior positividade do rebanho nas propriedades que utilizavam tal prática. Falta de assistência veterinária foi responsável por mais de 50% dos casos de animais com leucose. Dos dez fatores de risco, cinco foram significantes (aptidão, faixa etária, troca de agulhas, presença de vetores e fornecimento de silagem) quando em conjunto, para a presença da doença e cinco como não representativos (sexo, reposição de animais, ordenha, compartilhamento de fômites e assistência veterinária). No gado de leite observou-se aumento na probabilidade de ser positivo para leucose de 5,21 vezes. Para cada faixa etária que se evolui, aumenta-se 0,16 vezes a chance de se encontrar doença. Já troca de agulha representou aumento de 2,83 vezes de probabilidade de ter leucose. Presença de vetores aumentou em 7,14 vezes a chance de apresentar leucose. Fornecimento de silagem representou aumento de 5,2 vezes na probabilidade do bovino ser positivo. Na regressão multivariada, variáveis sexo, reposição de animais, ordenha, compartilhamento de fômites e assistência veterinária, em conjunto, não apresentam correlação com soropositividade para leucose enzoótica bovina. 8,34% (20/240) da população positiva pertence ao gado de corte e 20,42% (49/240) pertence ao gado de leite. Conclui-se que Leucose Enzoótica Bovina ocorre com maior frequência no gado leiteiro que no de corte, na região de Catalão/GO. Fatores de risco que representam em conjunto significância para prevalência da doença são: animais acima de 36 meses, troca de agulha, presença de vetores e fornecimento de silagem. / Mestre em Ciências Veterinárias

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-19T14:08:54Z No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-19T14:08:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Glanders is a highly contagious disease caused by Burkholderia mallei solipeds, a Gram - negative bacterium, not motility and aerobic coccobacillus, primarily infecting horses, donkeys and mules, though humans are considered accidental hosts . The Burkholderia mallei is listed in the list of the World Organisation for Animal Health (OIE) as an important public health disease, and due to its high potential for infection is referred to as a bioterrorism agent. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals. This method of diagnosis is recommended in Brazil by Normative Instruction Nº 24 Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply by its high sensitivity and specificity. Serological qPCR showed 76 (16.7%) positivity and a sensitivity of 24.7% and a specificity of 89 % when compared to the gold standard western blotting used. The results show that the use of the qPCR may be used as a complementary technique to other methods for rapid and accurate identification of Burkholderia mallei. About statistical results showed that the ELISAi showed the highest sensitivity (35.5%) and specificity (97.6 %) when compared to western blotting. The results show the importance of preparation and use of antigens that are produced with local strains, resulting in higher sensitivity and specificity of the test. / O Mormo constitui-se em uma doença altamente contagiosa dos solípedes causada pela Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa, não móvel e cocobacilo aeróbio, infectando primariamente cavalos, burros e mulas, entretanto humanos são considerados hospedeiros acidentais. A Burkholderia mallei está relacionada na lista de doenças da Organização Mundial para a Saúde Animal (OIE) como doença de importância de saúde pública, e devido ao seu alto potencial de infecção é referenciada como agente de bioterrorismo. De acordo com a OIE o diagnóstico compreende o teste sorológico, alérgico e o isolamento bacteriano, sendo a fixação do complemento, o teste oficial a ser realizado para trânsito de animais. Este método de diagnóstico está preconizado no Brasil pela Instrução Normativa Nº 24 do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento por apresentar alta sensibilidade e especificidade. A qPCR sorológica apresentou 76 (16,7%) positividade e uma sensibilidade de 24,7% e especifidade de 89% quando comparado ao western blotting padrão ouro utilizado.. Os resultados mostram que a utilização da qPCR pode ser utilizada como técnica complementar de outras metodologias para identificação rápida e precisa da Burkholderia mallei. Em relação aos testes sorológicos, os resultados estatísticos mostraram que o ELISAi apresentou a maior sensibilidade (35,5%) e especificidade (97,6%) quando comparado ao western blotting. Os resultados mostram a necessidade da preparação e utilização de antígenos que sejam produzidos com cepas locais, determinando maior sensibilidade e especificidade ao teste.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-29T12:33:02Z No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T12:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Claudia Campos.pdf: 321055 bytes, checksum: 88970805d9ffc7abbb04f6a510d226df (MD5) Previous issue date: 2008-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The contagious agalactia of ovine and caprine (CAOC) is characterized by a decline and subsequent failure of milk production, arthritis and keratoconjunctivitis causing economic losses in dairy goats and sheep herds. Classic diagnostic is performed by culture and identification of mycoplasmas species. The utilization only of this method to diagnostic has contribute for dissemination of infection and reduced efficiency of the controls measures because your necessity of long time to the diagnostic conclusion. The objective this study was performed and standardized an indirect ELISA using conjugate with protein-G (ELISA-G) and two types of obtained by growth of M. agalactiae antigen. Whole bacterial and sonicated culture was used as antigen to sensibility on microtitre plates. A total of 46 serum sample were obtained in infected goat herd with clinical signs in forty-five period and 40 samples in free herds of disease to standardization and application of ELISA test. The infection status was confirmed by culture of M. agalactiae from milk. Do not had statistical difference between positive and negative controls serum (P/N) when whole or sonicated antigen wereused. The sensibility of ELISA-Gt and ELISA-Gs were of 77,27% and 88,63%, respectively. Specificity were 95,24% for both ELISA. In conclusions, the indirect ELISA-Gt or ELISA-Gs should be utilized as tools for diagnostic of contagious agalactia in goats. / A Agalaxia Contagiosa dos Ovinos e Caprinos (ACOC) é uma enfermidade caracterizada clinicamente por mastite, agalaxia, artrite e ceratoconjuntivite, determinando grandes perdas econômicas em rebanhos ovinos e caprinos leiteiros. O diagnóstico clássico é feito pelo cultivo e isolamento dos micoplasmas envolvidos. A utilização dessa técnica como único método diagnóstico, contribui para a disseminação da infecção e dificulta a implantação de medidas eficazes de controle por requerer longo tempo para conclusão diagnóstica. Por isso, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA indireto utilizando a proteína G (ELISA-G) como conjugado e aplicação de dois tipos de antígenos produzidos a partir de M. agalactiae. Antígeno total e sonicado foram utilizados para sensibilizar as microplacas. A padronização da técnica foi realizada utilizando soros caprinos com e sem sinais clínicos de agalaxia contagiosa. Quarenta e seis soros caprinos coletados com intervalo de 45 dias, obtidos em rebanho infectado com sinais clínicos e 40 soros caprinos de rebanhos livres da infecção foram utilizados para avaliação da técnica. A presença de M. agalactiae no rebanho foi confirmada por cultivo de leite em meio Hayflick modificado. Não houve diferença significativa entre os valores da razão positivo/negativo (P/N) dos soros controles quando utilizado antígeno total ou sonicado. A sensibilidade relativa do ELISA-Gt e ELISA-Gs foi de 77,27% e 88,63%, respectivamente, enquanto que a especificidade foi de 95,24% para ambos. Pesquisa de anticorpos em rebanho com quadro clínico característico revelou aumento significativo dos percentuais de densidade óptica (DO) em soros caprinos, coletados com intervalo de 45 dias. Conclui-se que os ELISA podem ser úteis para identificação de rebanhos infectados por agalaxia contagiosa de pequenos ruminantes, com uma relativa vantagem para o ELISA-Gs.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-11T13:48:24Z No. of bitstreams: 1 Geraldo Vieira de Andrade Filho.pdf: 343219 bytes, checksum: 804718cf3c5fa3f4864f8630c7e71816 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T13:48:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Geraldo Vieira de Andrade Filho.pdf: 343219 bytes, checksum: 804718cf3c5fa3f4864f8630c7e71816 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Canine leptospirosis is considered a zoonosis of worldwide distribution and takes on considerable importance as an economic problem and public health, especially in developing countries. The objective was determine the frequency of aglutinins anti-Leptospira spp. and more prevalent serovars of dogs from Metropolitan Region of Recife and Fernando de Noronha island, Pernambuco, Brazil. Between 2008 to 2011 sera of 286 dogs were collected; 187 dogs were of five municipialities (Camaragibe, Jaboatão dos Guararapes, Olinda, Paulista and Recife) and 63 districts for Metropolitan Region of Recife, and 99 dogs from Fernando de Noronha island, both sexes and variable ages. Dogs from Metropolitan Region of Recife were Veterinary Clinical of “Centro de Vigilância Ambiental” (CVA Recife) (n=83), Veterinary Hospital of Department of Veterinary Medicine of “Universidade Federal Rural de Pernambuco – UFRPE (n=11), and Kennel of CVA Recife (n=18), and district of Dois Irmãos (n=75). Sera were examined by Microscopic Agglutination Test (MAT 100) with 25 serovars. Out of 187 sera of dogs examined from Metropolitan Region of Recife, 7 (3.7%) were seropositive to aglutinins anti-Leptospira spp. from Olinda (2/7,28.6%), and Recife (5/7, 71.4%). Most prevalent serovars were Icterohaemorrhagiae in 4/7, Copenhageni in 2/7, Castellonis in 1/7 and Pomona in 1/7. There was no statistically significant difference for the variables sex, age and race. In relation of sera of dogs from Fernando de Noronha Island, out of 99 dogs examined, 10 (10.1%) were seropositive and the most prevalent serovars were Copenhageni, Grippotyphosa and Autumnalis. This is the first serological survey of leptospirosis in dogs from Fernando de Noronha Island; the dogs of the areas examined were exposed to the Leptospira spp. in environments possibly contaminated by synantropic rodents; and the dogs can serve as sentinel animals for infection by Leptospira spp. to public health agencies. / A leptospirose canina é considerada uma zoonose distribuída mundialmente e assume considerável importância como problema econômico e de saúde pública, principalmente em países em desenvolvimento. Objetivou-se com o presente trabalho determinar a frequência de aglutininas anti-Leptospira spp. e os sorovares mais prevalentes em cães da Região Metropolitana do Recife e da Ilha de Fernando de Noronha, Pernambuco, Brasil. Durante os anos de 2008 a 2011 foram colhidos soros sanguíneos de 286 cães, sendo 187 cães de cinco municípios (Camaragibe, Jaboatão dos Guararapes, Olinda, Paulista e Recife) e de 63 bairros da Região Metropolitana do Recife e de 99 cães da Ilha de Fernando de Noronha, de ambos os sexos e idades variadas. Os cães da Região Metropolitana do Recife foram procedentes da Clínica Veterinária do Centro de Vigilância Ambiental (CVA) do Recife (n=83), do Hospital Veterinário do Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco – UFRPE (n=11), do canil do CVA (n=18) e do bairro de Dois Irmãos (n=75). Os soros sanguíneos foram examinados pela Microtécnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM 100) com 25 estirpes de leptospiras vivas. Dentre os 187 soros sanguíneos de cães examinados da Região Metropolitana do Recife, 7 (3,7%) foram sororeatores para aglutininas anti-Leptospira spp., dos quais dois cães foram de Olinda (28,6%) e cinco de Recife (71,4%). Os sorovares mais prevalentes foram Icterohaemorrhagiae (4/7), Copenhageni (2/7), Castellonis (1/7) e Pomona (1/7). Não houve diferença estatisticamente significante para as variáveis sexo, idade e raça. Com relação aos soros sanguíneos de cães da Ilha de Fernando de Noronha, dentre os 99 cães examinados, 10 (10,1%) foram sororeatores e os sorovares mais prevalentes foram Copenhageni, Grippotyphosa e Autumnalis. Este trabalho representou o primeiro inquérito sorológico de leptospirose em cães da ilha de Fernando de Noronha; os cães das áreas estudadas foram expostos à bactéria Leptospira spp. em ambientes contaminados possivelmente por roedores sinantrópicos; e os cães podem servir animais sentinelas para a infecção por Leptospira spp. aos órgãos de saúde pública.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T08:34:02Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-01T08:37:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T08:37:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danielle de Freitas Mizoguti - 2013.pdf: 1318732 bytes, checksum: 8084d20c2bec9e4264a71581ca4d04b2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Introduction: Leprosy Type 1 ( T1R) and type 2 reactions ( T2R) are considered the major complicators in the clinical management of leprosy patients. Leprosy reactions can occur before, during or after multidrug therapy (MDT). T1R is associated with exacerbated Th1 type cell mediated immunity (CMI) whereas T2R is associated with Th2 type immunity characterized by strong antibody production and in some cases transitory CMI to M. leprae antigens. Objective: Assess the serological reactivity to LID-1 fusion protein and to PGL-I M. leprae antigens among multibacillary (MB), paucibacillary (PB) leprosy patients that developed reaction at diagnosis or during MDT compared to reaction free MB and PB patients. Material and Methods: Paired serum samples from 73 leprosy patients were tested by ELISA to detect IgG antibodies to LID-1 and IgM responses to PGL-I. Leprosy patients included MB that developed T1R or T2R at diagnosis or during MDT and PB patients that developed T1R at diagnosis or during MDT compared to reaction free MB and PB patients. For T1R and T2R patients, samples collected during reactions and in the absence of reactions were tested and for reaction free patients samples collected at diagnosis and after MDT were tested. Results: The decline of anti LID-1 and anti PGL-I antibodies levels was significant among MB patients with T1R at diagnosis (p <0,05). Among MB patients with T2R at diagnosis and non reactional MB leprosy patients, the decline of antibodies was significant only to LID-1 (p <0,05). Higher levels of anti LID-1 antibodies were observed in MB patients who developed T2R at diagnosis compared with unreactional patients (p = 0.020) and patients who developed T1R at diagnosis (p = 0.008). Moreover, different antibody levels were seen in patients who developed T2R during MDT compared with unreactional MB patients after MDT (p = 0.020). Conclusions: Our data suggest that high anti LID-1 antibody levels may be associated with higher risk of T2R in MB patients. / Introdução: As reações hansênicas (tipo 1/RT1 e tipo 2/RT2) são as principais complicações no manejo clínico de pacientes com hanseníase e podem ocorrer antes, durante e após multidrogaterapia (MDT). A RT1 está associada a exacerbação da imunidade mediada por células (CMI) do tipo Th1 para antígenos do Mycobacterium leprae. Já a RT2 está associada com a resposta imunitária do tipo Th2, caracterizada por forte produção de anticorpos e em alguns casos ativação transitória da CMI. Objetivo: Avaliar a reatividade sorológica a proteína de fusão LID-1 e ao PGL-I do M. leprae em pacientes com hanseníase multibacilares (MB) e paucibacilares (PB) com reação hansênica e em pacientes MB e PB que não desenvolveram reação. Materiais e Métodos: Foram testadas amostras um total de 73 pacientes com hanseníase MB que desenvolveram RT1 ou RT2 ao diagnóstico ou durante MDT e em pacientes PB que desenvolveram RT1 ao diagnóstico ou durante MDT comparados com pacientes MB e PB que não desenvolveram reação hansênica ao diagnóstico nem durante MDT. A presença de IgG anti LID-1 e IgM anti PGL-I foi testada por ELISA. Resultados: O declínio dos níveis de anticorpos anti LID-1 e anti PGL-I foi significativo dentre os pacientes MB que estavam em RT1 ao diagnóstico (p< 0.05). Dentre os pacientes MB que estavam em RT2 ao diagnóstico e pacientes MB não reacionais, o declínio dos anticorpos foi significante apenas para LID-1 (p< 0.05). Níveis mais altos de anticorpos anti LID-1 foram observados nos pacientes MB que desenvolveram RT2 ao diagnóstico quando comparados com pacientes MB que desenvolveram RT1 ao diagnóstico (p=0.008) ou pacientes MB não reacionais (p=0.020). Pacientes MB que desenvolveram RT2 durante a MDT também apresentaram níveis mais altos de anticorpos anti LID-1 comparados com pacientes MB não reacionais após MDT (p=0.020). Conclusões: Nossos resultados sugerem que altos níveis de anticorpos anti LID-1 podem estar associados ao maior risco de desenvolvimento de RT2 em pacientes MB.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 isolina.pdf: 450784 bytes, checksum: c6721c6f52877717341c489e21cf2261 (MD5) Previous issue date: 2006-03-31 / Essa dissertação é composta de duas pesquisas complementares, realizadas no período de primeiro de janeiro de 2004 a 30 de setembro de 2005. No primeiro estudo, realizou-se a sorologia para IgG e IgM anti-toxoplasma no sangue do cordão de 1514 RN pela técnica MEIA e a comparação entre os resultados dos anticorpos IgG e IgM no sangue de cordão e periférico de 167 RN (86 suspeitos e 81 normais). A sorologia por MEIA permitiu que fossem selecionados 86 RN suspeitos de toxoplasmose congênita, cujas amostras foram testadas para detecção de IgM pela técnica ELFA. A comparação entre a sorologia para IgG e IgM por MEIA mostrou não haver diferença significativa entre os resultados obtidos no sangue de cordão e periférico. A triagem sorológica dos 1514 RN pela técnica MEIA revelou que: 0,59% (09/1514) apresentavam IgG e IgM reagentes; 64,60 (978/1514) apresentavam IgG reagente e IgM não reagente; 0,46% (7/1514) apresentavam IgG indeterminada e IgM não reagente e 34,35% (520/1514) apresentaram IgG e IgM não reagentes. A incidência da toxoplasmose diagnosticada pela presença de IgM pelas técnicas MEIA e ELFA foi de 6,6/1000 nascimentos, contudo essa incidência não reflete o número de RN infectados, pois muitos RN não produzem anticorpos de classe IgM ao nascer, sendo necessário que os 76 RN suspeitos e que tiveram IgM não reagentes sejam acompanhados até dois anos de idade. O segundo estudo foi realizado nas crianças suspeitas de toxoplasmose congênita acompanhadas no Ambulatório de Infecções Congênitas do HC. Das 86 encaminhadas para acompanhamento, apenas 56 retornaram para consulta. As amostras dessas crianças foram testadas para IgM anti T.gondii pelas técnicas MEIA, ELFA e IFI e para IgA por ELISA captura. O diagnóstico da infecção congênita foi concluído em 44 RN, sendo que 28 estavam infectados e 16 não estavam. Dos 28 infectados, 42,9% (12/28) apresentaram IgM reagente pelas técnicas usadas. A sensibilidade, 84 especificidade, acurácia, valores preditivos positivo e negativo das técnicas MEIA e ELFA foram iguais, respectivamente de 36,7%, 100%, 100%, 47,1% e 59,1%; da IFI 28,6%, 87,5%, 80,0%, 44,4% e 50% e da IgA de 25,0%, 100%, 100%, 43,2% e 52,3%. A IgM foi reagente em 81,8% (9/11) das crianças sintomáticas, demonstrando sua relação com a gravidade da transmissão vertical, com maiores concentrações em crianças mais afetadas pelo processo infeccioso intra-uterino. Por outro lado, não foi detectada em 57,1% (16/28) dos infectados, provavelmente em conseqüência do tratamento da mãe. A sensibilidade da IgM anti T.gondii, associando três técnicas (MEIA, ELFA e IFI) foi de 42,9% (12/28) e da IgA foi de 25% (7/28), mostrando que a suspeita de toxoplasmose congênita não pode ser afastada apenas pela ausência desses anticorpos.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-05T14:30:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-05T14:31:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T14:31:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao - Adriano Badotti Grassi - 2007.pdf: 1439206 bytes, checksum: 031af098879a0122f9c34462d0323a5f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / Objectives: This study compared two leprosy rapid tests detecting (1) IgM against PGL-I (ML-Flow test, KIT, Amsterdam, Netherlands) or (2) IgM, IgG and IgA against PGL-I (ML-ICA, Yonsei University, South Korea). Methods: Whole blood and serum from untreated multibacillary (MB; n=50) and paucibacillary (PB; n=48) leprosy patients (Reference Center for Diagnosis and Treatment, Goiania, central Brazil), MB household contacts (HHC; n=35) and healthy endemic controls (EC; n=50) were tested. Leprosy patients were classified by dermato-neurological evaluation, bacillary index (BI) and histopathology. Median age was 29 years, 39.9% males. MB patients had BB-BL-LL leprosy (median BI=2.0), PB patients had TT-BT leprosy. Results: (1) Using sera, ML Flow positivity of MB patients was comparable to ML-ICA positivity. (2) For ML-Flow tests, the positivity was comparable with whole blood and serum. (3) Among PB leprosy ML- flow positiviy was comparable for whole blood and serum but it was higher than the ML-ICA seropositivity in whole blood and serum. (4) Among MB leprosy patients positivity of ML Flow test in serum and whole blood was comparable to the positivity of ML-ICA in serum. Conclusion: ML-Flow test is more field applicable than ML-ICA since high positivity was observed among MB patients using whole-bood. / Objetivos: Este estudo comparou dois testes rápidos para hanseníase que detectam (1) IgM anti-PGL-I (ML-Flow test, KIT, Amsterdam, Holoanda) ou (2) IgM, IgG e IgA anti-PGL-I (ML-ICA, Yonsei University, Coréia do Sul). Materiais e Métodos: Foram testados sangue-total e soro de pacientes com hanseníase multibacilar (MB; n=50) e paucibacilar (PB; n=48), virgens de tratamento (Centro de Referência em Diagnóstica e Terapêutica, Goiânia, GO), contactantes intradomiciliares de MB (CD; n=35) e indivíduos saudáveis de área endêmica (CS; n=50). Pacientes com hanseníase foram classificados segundo avaliação dermato-neurológica, índice baciloscópico (IB) e exame histopatológico. A mediana da idade foi de 29 anos, 39.9% do sexo masculino. Pacientes MB apresentavam as formas BB-BL-LL (mediana do IB=2.0), Pacientes PB apresentavam as formas TT-BT. Resultados: (1) Para o grupo MB não observamos diferença significante entre os resultados dos testes ML-Flow em amostras de sangue-total e soro e os resultados do ML-ICA em amostras de soro; (2) Em todos os grupos (MB, PB, CD e CS) que não observamos diferença estatisticamente significativa entres os resultados do ML-Flow em sangue-total ou soro; (3) Entre os pacientes PB o ML-Flow apresentou sensibilidade significativamente maior que o teste ML-ICA, em amostras de sangue-total e em soro; (4) O teste ML-ICA em soro discriminou melhor os pacientes MB e PB. Conclusão: O teste ML-Flow mostrou-se melhor para utilização em situações de campo que o ML-ICA, pois apresentou alta reatividade em sangue-total em pacientes MB.

Neospora caninum é um parasito intracelular obrigatório, formador de cistos, que acomete vários animais domésticos e silvestres, tendo maior importância nas espécies canina e bovina, nas quais causa problemas nervosos e reprodutivos. Os canídeos do gênero Canis são os únicos reconhecidos como hospedeiros definitivos do N. caninum até o momento, nos quais ocorre a fase sexuada de multiplicação, resultando na eliminação de oocistos pelas fezes. Toxoplasma gondii também é um coccídio responsável por uma das zoonoses de maior importância e ocorrência em todo o mundo. A fase assexuada de desenvolvimento do T. gondii ocorre nos mamíferos e aves (hospedeiros intermediários) com formação de cistos teciduais e a fase sexuada de desenvolvimento ocorre no intestino delgado dos hospedeiros definitivos, que são os membros da família Felidae. Este estudo teve por objetivo determinar a soroprevalência de anticorpos contra Neospora spp. e T. gondii em equídeos de diferentes regiões do Brasil e o isolamento e caracterização genética destes coccídios em amostras de tecidos de equídeos. A sorologia para T. gondii e Neospora spp. foi realizada em 453 amostras de soros por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta com ponto de corte de 50 para Neospora spp e 64 para T. gondii. Deste total, oito (1,75%) amostras (sete de jumentos e um de cavalo) foram positivas para Neospora spp. e 129 (28,47%) amostras (82 jumentos, 32 cavalos e 15 mulas) para T. gondii. Para o isolamento do T. gondii foram realizados 29 bioensaios em camundongos, sendo 19 de animais soropositivos e 10 de pools de tecidos de cavalos soronegativos. Por meio dessa prova biológica, foi possível o isolamento em uma amostra de jumento (Equus asinus) de Mossoró, RN, ocorrendo a morte dos dois únicos camundongos infectados, no 16o e 17o dia pós-inoculação. A caracterização genotípica do isolado foi realizada pela PCR-RFLP utilizando 12 marcadores genotípicos. A genotipagem dessa amostra evidenciou o genótipo #60 TgCkBr220, já isolado em galinha do Arquipélago de Fernando de Noronha, PE, Brasil. O isolamento de Neospora spp em gerbilos não pode ser feito uma vez que não foi possível a obtenção de tecidos dos equídeos soropositivos. / Neospora caninum is an obligate intracellular parasite, forming cysts that affect many domestic and wild animals, having greater importance in canine and bovine species due neurological and reproductive problems. Canids of the genus Canis are recognized as the only definitive hosts of N. caninum until the moment in which sexual phase occurs multiplication, resulting in the elimination of oocysts in the feces. Toxoplasma gondii is also a coccidian parasite responsible for a zoonotic disease of great importance and occurrence around the world. The asexual developmental stage of T. gondii occurs in mammals and birds, the intermediate hosts, resulting in the formation of cysts and the sexual stage occurs in the small intestine of definitive hosts, which are the felids, occurring oocysts formation. This study aimed to determine the seroprevalence of antibodies against Neospora spp. and Toxoplasma gondii in equids from different regions of Brazil and the isolation and genetic characterization of these parasites from equids tissue. Serology for T. gondii and Neospora spp. was performed in 453 serum samples by Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Of this total, eight (1.75%) samples (seven of donkeys and one of horse) were positive to Neospora spp. antibodies and 129 (28.47%) samples (82 donkeys, 32 horses, 15 mules) were T. gondii seropositive. For the isolation of T. gondii, bioassay was performed in mice. A sample of one donkey (Equus asinus) from Mossoró, RN, was obtained with two of the 20 inoculated mouse infected. The mouse died at day 16th and 17th post inoculation. The genotypic characterization of the isolate was performed by PCR-RFLP using 12 genotypic markers. Genotyping showed the genotype #60 TgCkBr220, already described in chickens from Fernando de Noronha, PE, Brazil. Due the impossibility of acquisition of tissue from Neospora spp seropositive equids, isolation of this coccidian by gerbil bioassay was not possible to be done.