Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-24Bitstream added on 2014-06-13T18:06:52Z : No. of bitstreams: 1 nakaghi_ach_dr_jabo.pdf: 627442 bytes, checksum: 53f339a01b25f98c06e48eed8f59cc13 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo objetivou clonar e analisar a expressão do gene p28 da amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis e avaliar sua utilização no diagnóstico molecular e sorológico da erliquiose canina. A PCR, baseada no gene p28 de E. canis, foi capaz de detectar o DNA de um único parasita entre um bilhão de células. Amostras sangüíneas de cães com suspeita clínica de erliquiose foram testadas pela PCR, baseada no gene p28 e pela nested PCR para detecção do gene 16S rRNA. O fragmento amplificado do gene p28 foi observado em 51,25% (n=41) das 80 amostras examinadas, e todas elas foram positivas para o gene 16S rRNA de E. canis, entretanto, em outros 21,25% (n=17) das amostras apenas o gene 16S rRNA foi detectado. A caracterização molecular do gene p28 mostrou similaridade com outras amostras de E. canis. Para a expressão da proteína recombinante P28, foram testados dois sistemas diferentes com linhagens de Escherichia coli BL21(DE3), BL21 Star(DE3)pLysS, BL21(DE3) pLysS e BL21-CodonPlus(DE3)-RIL. A análise pelo Western-blotting revelou reatividade de várias frações protéicas com anticorpo policlonal anti-E. canis. Porém, quando a membrana foi incubada com anticorpo monoclonal para detecção de moléculas de histidina, não houve reatividade, mostrando a ausência de expressão da proteína P28. / The aim of this study was to clone and express the p28 gene of Ehrlichia canis Jaboticabal strain and evaluate its application in molecular and serological diagnosis of canine ehrlichiosis. The p28-based PCR was able to detect E. canis DNA of one parasite among one billion cells. Blood samples from dogs for which a diagnosis of canine ehrlichiosis was suspected were tested by p28-based PCR and by 16S rRNA-based nested PCR. Amplified fragment from p28 gene were observed in 51.25% (n=41) among 80 assayed samples and all of this positive samples were also positives for 16S rRNA gene of E. canis, however in 21.25% (n=17) only 16S rRNA gene was detected. The molecular characterization of p28 gene showed similarity with others strains of E. canis. Expression of P28 recombinant protein was tested with two different systems and in Escherichia coli BL21(DE3), BL21 Star(DE3)pLysS, BL21(DE3) pLysS and BL21-CodonPlus(DE3)-RIL strains. After expression induction, Westernblotting showed reactivity of some protein fractions against anti-E. canis antibodies. However, when samples were incubated with anti-histidine monoclonal antibodies, they did not react, demonstrating non-expression of P28 protein.

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2017-10-17T13:31:29Z No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Alvair da Silva Alves.pdf: 1886387 bytes, checksum: 3e47dd34fe738b31c6e8fbbb7f127b27 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-11-07T15:02:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Alvair da Silva Alves.pdf: 1886387 bytes, checksum: 3e47dd34fe738b31c6e8fbbb7f127b27 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T15:02:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Alvair da Silva Alves.pdf: 1886387 bytes, checksum: 3e47dd34fe738b31c6e8fbbb7f127b27 (MD5) Previous issue date: 2014-03-12 / CAPES / O objetivo do estudo foi estimar a infecção Rickettsial ( Rickettsia rickettsii , Rickettsia parkeri , ' Candidatus R. amblyommii ' , Rickettsia rhipicephali e Rickettsia bellii ) em eqüídeos , e carrapatos de uma região do Pantanal do Brasil. Amostras de 547 eqüídeos (500 cavalos e 47 asininos e muares ) foram avaliados pelo teste de imunofluorescência indireta (IFI ) . Um total de 665 adultos e 106 “pools” de ninfas de Amblyomma cajennense F.s1 , 10 carrapatos Dermacentor nitens Neumann, e 88 pools de larvas de Amblyomma sp. foram testadas por PCR . No geral 337 ( 61,6 % ) eram reactivos equídeos ( título ≥ 64 ) para pelo menos um antigénio de Rickettsia spp . Os valores de prevalência de Rickettsia foram 66%, e foram observados os maiores títulos de ponto final para 'Ca. R. amblyommii '. Na PCR, 3 ( 0,45% ) do fêmeas de A. cajennense s.l. foram positivos para 'Ca. R. amblyommii ' . Para os carrapatos imaturos foram observados uma taxa mínima de infecção de 0,75% e 0,34% para ninfas e larvas, respectivamente. As amostras positivas de carrapatos tiveram um fragmento do gene 16S rRNA sequenciados e as sequências apresentaram 99% de semelhança com Amblyomma sculptum Berlese . Este estudo relata uma ampla distribuição de Rickettsia entre equídeos, sugerindo o possível envolvimento, pela primeira vez, de A. sculptum na transmissão de 'Ca. R. amblyommii ' / The aim of the study was to estimate the rickettsial (Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, ‘Candidatus R. amblyommii’, Rickettsia rhipicephali, and Rickettsia bellii) infection in equids, and ticks of a Pantanal region of Brazil. Sera of 547 equids (500 horses and 47 mules, and donkeys) were evaluated by indirect immunofluorescence assay (IFA). A total of 665 adults and 106 nymphal pools of Amblyomma cajennense F. s.l., 10 Dermacentor nitens Neumann ticks, and 88 larval pools of Amblyomma sp. were tested by PCR. Overall 337 (61.6%) equids were reactive (titer ≥ 64) to at least one antigen of Rickettsia spp. The prevalence values for Rickettsia were 66%, and the highest endpoint titers were observed for ‘Ca. R. amblyommii’. In PCR 3 (0.45%) female of A. cajennense s.l. were positive for ‘Ca. R. amblyommii’. For the immature ticks were observed a minimum rate of infection of 0.75% and 0.34 % for nymphs and larvae, respectively. Positive samples of ticks have had a fragment of the 16S mitochondrial rRNA gene sequenced and sequences showed 99% similarity to Amblyomma sculptum Berlese. This study reports a wide distribution of Rickettsia among equids, suggesting the possible involvement, for the first time, of A. sculptum in transmitting ‘Ca. R. amblyommii’.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This dissertation reports the standardization of a monoclonal antibody (MAb)-based immunoenzymatic test (ELISA) for detection of antibodies to bovine herpesvírus types 1 and/or 5 (BoHV-1 and BoHV-5). The initial steps involved the determination of the most suitable MAb, the appropriate dilutions of viral antigen and test sera; and the cut-off value of the assay. After standardization, the ELISA was validated by testing 506 cattle serum samples previously tested for neutralizing antibodies to BoHV-1 and BoHV-5 by virus neutralizing (VN) assay. Comparing to the VN for BoHV-1 antibodies, the ELISA presented sensitivity and specificity of 96.6% and 98.3%, respectively. Positive and negative predictive values were 97.6%, the concordance between the tests was 97.6% and the coefficient of correlation k (kappa) was 0.95, demonstrating an excellent correlation. Comparing to the VN for BoHV-5 antibodies, the ELISA presented 94.3% of sensitivity, 97.9% of specificity, 97.1% of positive predictive value, 95.9% negative predictive value, concordance of 96.4% and kappa coefficient of 0.92. These results demonstrate that the ELISA presents suitable specificity and sensitivity to be used for individual and herd serological diagnosis of BoHV-1 and BoHV-5, thus, representing an alternative for VN assays and imported ELISA kits. / Essa dissertação relata a padronização de um teste imunoenzimático do tipo ELISA, com base em anticorpo monoclonal (AcM), para a detecção de anticorpos séricos que reagem contra herpesvírus bovino tipos 1 e/ou 5 (BoHV-1, BoHV-5). Inicialmente, determinou-se o AcM mais adequado para a sensibilização das placas, as diluições apropriadas do antígeno e dos soros-teste e o ponto de corte do ensaio. Após a padronização, o ensaio foi validado testando-se 506 amostras de soro bovino, previamente testadas para anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1 e/ou BoHV-5 pela técnica de soroneutralização (SN). Comparando-se com os resultados da SN frente ao BoHV-1, o teste de ELISA apresentou sensibilidade e especificidade de 96,6% e 98,3%, respectivamente. Os valores preditivos positivo e negativo foram de 97,6%, a concordância foi de 97,6% e o índice de correlação (kappa) entre os testes foi de 0,95, o que indica uma excelente concordância. Comparando-se com os resultados da SN frente ao BoHV-5, o ELISA apresentou 94,3% de sensibilidade; 97,9% de especificidade; 97,1% de valor preditivo positivo e 95,9% de valor preditivo negativo. Para o BoHV-5, a concordância entre os testes foi de 96,4% e o índice de correlação foi de 0,92, também excelente. Esses resultados demonstram que o teste padronizado apresenta sensibilidade e especificidade adequados para o diagnóstico sorológico das infecções pelo BoHV-1 e BoHV-5 em nível individual e de rebanho. Dessa forma, o ensaio pode se constituir em alternativa para o teste de SN e para os kits de ELISA importados.

Submitted by Jefferson Filgueira Alcindo (jefferson.alcindo@yahoo.com.br) on 2018-04-18T19:55:54Z No. of bitstreams: 1 Tese doutorado Jefferson.pdf: 1217923 bytes, checksum: 08592edaa8bb1967844d2d8dd8a6ae88 (MD5) / Approved for entry into archive by Isabel Pereira de Matos (isabel@fmva.unesp.br) on 2018-04-19T13:33:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alcindo_jf_dr_araca_int.pdf: 1217923 bytes, checksum: 08592edaa8bb1967844d2d8dd8a6ae88 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T13:33:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alcindo_jf_dr_araca_int.pdf: 1217923 bytes, checksum: 08592edaa8bb1967844d2d8dd8a6ae88 (MD5) Previous issue date: 2018-04-04 / Esse trabalho teve como objetivo avaliar, em um rebanho com presença de animais com sinais clínicos da enfermidade, a aplicabilidade e eficácia das medidas de controle para a atrite-encefalite caprina e perdas produtivas associadas. Os animais foram testados sorologicamente e algumas medidas de controle foram instituídas, entre elas: segregação dos rebanhos (positivo e negativo), retirada dos cabritos ao nascimento, aleitamento dos neonatos com colostro/leite de vaca ou de cabra tratados termicamente, linha de ordenha e manejo reprodutivo de acordo com status sorológico e descarte orientado de animais reagentes. Dados produtivos tais quais produção de leite, taxa de prenhez, peso dos animais adultos e crias, taxa de morbidade, mortalidade e descarte foram avaliados. Os custos relacionados à implantação do programa e perdas associadas à produtividade também foram analisados. A soroprevalência da doença decresceu a partir da segunda sorologia, atingindo a menor taxa na quarta sorologia (40,54%) e voltando a aumentar no final do estudo (50,72%). Animais soropositivos e com duas lactações produziram 0,26 litros a menos de leite diariamente quando comparados aos animais soronegativos. O peso das crias ao nascimento também foi menor em animais que provinham de mães sororeagentes. Conclui-se que as medidas de controle são aplicáveis em rebanhos comerciais, entretanto possuem sérias implicações quanto a sua eficácia em rebanhos com soroprevalência intermediária e alta, contribuindo pouco para a redução de novos casos. O impacto produtivo refletiu-se, principalmente, na produção de leite e o custo para implantação do programa de controle foi elevado. / The objective of this study was to evaluate the application and efficacy of control measures for caprine arthritis encephalitis and associated productive losses in a herd with the presence of animals with clinical signs of the disease. The animals were tested serologically and some control measures were instituted, including: segregation of herds (positive and negative), removal of goats at birth, suckling of newborns with colostrum / cow's milk or thermally treated goat's milk, management line and reproductive management according to serological status and discarded oriented of reactive animals. Productive data such pregnancy rate, adult and calf weight, mortality rate, mortality and discards. Costs related to program implementation and losses associated with productivity were also analyzed. The seroprevalence of the disease decreased after the second serology, with a lower rate in the fourth serology (40.54%) and increasing again at the end of the study (50.72%). Seropositive animals with two lactations produced 0.26 liters less milk daily when compared to seronegative animals. The weight of the offspring at birth was also lower in animals that came from mothers who were seroreagentes. It is concluded that control measures are approached, such as their efficacy in herds with intermediate and high seroprevalence, contributing little to a reduction of new cases. The productive impact was mainly reflected in milk production and in the cost to implement the high-level control program

Orientador: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca: Luiz Claudio Nogueira Mendes / Banca: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Sara Vilar Dantas Simões / Banca: Josir Laine Aparecida Veschi / Resumo: Esse trabalho teve como objetivo avaliar, em um rebanho com presença de animais com sinais clínicos da enfermidade, a aplicabilidade e eficácia das medidas de controle para a atrite-encefalite caprina e perdas produtivas associadas. Os animais foram testados sorologicamente e algumas medidas de controle foram instituídas, entre elas: segregação dos rebanhos (positivo e negativo), retirada dos cabritos ao nascimento, aleitamento dos neonatos com colostro/leite de vaca ou de cabra tratados termicamente, linha de ordenha e manejo reprodutivo de acordo com status sorológico e descarte orientado de animais reagentes. Dados produtivos tais quais produção de leite, taxa de prenhez, peso dos animais adultos e crias, taxa de morbidade, mortalidade e descarte foram avaliados. Os custos relacionados à implantação do programa e perdas associadas à produtividade também foram analisados. A soroprevalência da doença decresceu a partir da segunda sorologia, atingindo a menor taxa na quarta sorologia (40,54%) e voltando a aumentar no final do estudo (50,72%). Animais soropositivos e com duas lactações produziram 0,26 litros a menos de leite diariamente quando comparados aos animais soronegativos. O peso das crias ao nascimento também foi menor em animais que provinham de mães sororeagentes. Conclui-se que as medidas de controle são aplicáveis em rebanhos comerciais, entretanto possuem sérias implicações quanto a sua eficácia em rebanhos com soroprevalência intermediária e alta, contribuindo p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the application and efficacy of control measures for caprine arthritis encephalitis and associated productive losses in a herd with the presence of animals with clinical signs of the disease. The animals were tested serologically and some control measures were instituted, including: segregation of herds (positive and negative), removal of goats at birth, suckling of newborns with colostrum / cow's milk or thermally treated goat's milk, management line and reproductive management according to serological status and discarded oriented of reactive animals. Productive data such pregnancy rate, adult and calf weight, mortality rate, mortality and discards. Costs related to program implementation and losses associated with productivity were also analyzed. The seroprevalence of the disease decreased after the second serology, with a lower rate in the fourth serology (40.54%) and increasing again at the end of the study (50.72%). Seropositive animals with two lactations produced 0.26 liters less milk daily when compared to seronegative animals. The weight of the offspring at birth was also lower in animals that came from mothers who were seroreagentes. It is concluded that control measures are approached, such as their efficacy in herds with intermediate and high seroprevalence, contributing little to a reduction of new cases. The productive impact was mainly reflected in milk production and in the cost to implement the high-level control p... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientadora: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Fernando Luiz de Lucca / Banca: Maria Célia Bertolini / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Resumo: O presente estudo objetivou clonar e analisar a expressão do gene p28 da amostra Jaboticabal de Ehrlichia canis e avaliar sua utilização no diagnóstico molecular e sorológico da erliquiose canina. A PCR, baseada no gene p28 de E. canis, foi capaz de detectar o DNA de um único parasita entre um bilhão de células. Amostras sangüíneas de cães com suspeita clínica de erliquiose foram testadas pela PCR, baseada no gene p28 e pela nested PCR para detecção do gene 16S rRNA. O fragmento amplificado do gene p28 foi observado em 51,25% (n=41) das 80 amostras examinadas, e todas elas foram positivas para o gene 16S rRNA de E. canis, entretanto, em outros 21,25% (n=17) das amostras apenas o gene 16S rRNA foi detectado. A caracterização molecular do gene p28 mostrou similaridade com outras amostras de E. canis. Para a expressão da proteína recombinante P28, foram testados dois sistemas diferentes com linhagens de Escherichia coli BL21(DE3), BL21 Star(DE3)pLysS, BL21(DE3) pLysS e BL21-CodonPlus(DE3)-RIL. A análise pelo Western-blotting revelou reatividade de várias frações protéicas com anticorpo policlonal anti-E. canis. Porém, quando a membrana foi incubada com anticorpo monoclonal para detecção de moléculas de histidina, não houve reatividade, mostrando a ausência de expressão da proteína P28. / Abstract: The aim of this study was to clone and express the p28 gene of Ehrlichia canis Jaboticabal strain and evaluate its application in molecular and serological diagnosis of canine ehrlichiosis. The p28-based PCR was able to detect E. canis DNA of one parasite among one billion cells. Blood samples from dogs for which a diagnosis of canine ehrlichiosis was suspected were tested by p28-based PCR and by 16S rRNA-based nested PCR. Amplified fragment from p28 gene were observed in 51.25% (n=41) among 80 assayed samples and all of this positive samples were also positives for 16S rRNA gene of E. canis, however in 21.25% (n=17) only 16S rRNA gene was detected. The molecular characterization of p28 gene showed similarity with others strains of E. canis. Expression of P28 recombinant protein was tested with two different systems and in Escherichia coli BL21(DE3), BL21 Star(DE3)pLysS, BL21(DE3) pLysS and BL21-CodonPlus(DE3)-RIL strains. After expression induction, Westernblotting showed reactivity of some protein fractions against anti-E. canis antibodies. However, when samples were incubated with anti-histidine monoclonal antibodies, they did not react, demonstrating non-expression of P28 protein. / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Rickettsiosis is a human disease caused by bacteria of the genus Rickettsia, and its main vector ticks (Ixodidae), which are also considered reservoirs of the Spotted Fever Group rickettsiae in Brazil. Small mammals are frequent hosts for immature stages of rickettsial diseases vector ticks, and it is known that some species of small mammals are hosts amplifiers for Rickettsia sp..The aim of this study was to determine seropositivity against five species of Rickettsia and tick fauna of small mammals captured in periurban region of Uberlândia, MG, Brazil. For this purpose, 416 small mammals representing 13 species of wild rodents and marsupials were captured between the months of July 2011 to August 2012. Of these, 48 were infested with ticks of the genus Amblyomma and Ixodes, and 70 (16.8%) of the animals were seropositive for Rickettsia spp.. Our results indicate the circulation of four species of Rickettsia, R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali and R. bellii, in the periurban area of Uberlândia. The first two Rickettsia species are considered pathogenic to man and thus a more thorough investigation to confirm the species of bacteria and epidemiological aspects related to these Rickettsia spp. is the detection locations. / Riquetsiose é uma doença causada em humanos por bactérias do gênero Rickettsia, e tem como principais vetores os carrapatos, que são considerados também reservatórios de riquétsias do grupo da febre maculosa no Brasil. Frequentemente os estágios imaturos de carrapatos vetores de riquetsioses têm pequenos mamíferos como hospedeiros, e sabe-se que algumas espécies de pequenos mamíferos são hospedeiros amplificadores para Rickettsia sp.. O objetivo deste trabalho foi determinar a sororreatividade contra cinco espécies de riquétsias e a fauna de carrapatos de pequenos mamíferos na região periurbana de Uberlândia, MG, Brasil. Foram capturados, entre julho de 2011 a agosto de 2012, 416 animais representando 13 espécies de roedores silvestres e marsupiais. Destes, 48 estavam infestados com carrapatos dos gêneros Amblyomma e Ixodes, e 70 (16,8%) dos animais foram soropositivos para Rickettsia spp.. Nossos resultados indicam a circulação de quatro espécies de riquétsias, R. rickettsii, R. parkeri, R. rhipicephali e R. bellii, próximo à área urbana do município de Uberlândia. As duas primeiras espécies são consideradas patogênicas ao homem, evidenciando a necessidade de se realizar uma investigação mais minuciosa tanto para a confirmação das espécies de bactérias circulantes, quanto para a compreensão do ambiente que mantém as riquétsias nos locais de detecção. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

O presente estudo foi conduzido com o objetivo de determinar se a sensibilidade do teste de Soroneutralização (SN) seria afetada quando utilizados distintos subtipos de herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5). Dessa forma, soros de bovinos, coletados randomicamente (n= 287) foram testados por SN frente a três amostras de BoHV-1 (BoHV-1.1: EVI123/98 e Los Angeles (LA); BoHV-1.2a: SV265/96) e três amostras de BoHV-5 (BoHV-5a: EVI88/95; BoHV-5b: A663 e BoHV-5c: ISO 97/95), utilizando um período de incubação soro-vírus de 24 horas. A sensibilidade da SN variou significativamente dependendo da amostra viral utilizada. Esta variação foi de 77% (80/104 soros positivos) até 91% (95/104) com as amostras ISO 97/95 e LA, respectivamente, quando cada vírus foi considerado individualmente. A sensibilidade máxima (104/104) foi obtida quando os resultados positivos de uma combinação particular de quatro vírus (LA + EVI123 + SV265 + A663), algumas combinações de cinco vírus, ou ainda, todos os seis vírus foram adicionados. Estes resultados evidenciaram que quando a SN é realizada frente a uma única amostra viral, a sensibilidade pode variar significativamente, podendo comprometer programas de controle e erradicação das infecções por estes agentes. Além disso, a realização de SN frente a diferentes isolados virais mostrou aumentar significativamente a sensibilidade do teste. Com isso, a caracterização de novos isolados de campo pode favorecer futuras avaliações de diferentes subtipos de BoHV-1 e BoHV-5 e contribuir com a escolha de amostra e/ou combinação de amostras mais sensíveis. Deste modo, buscou-se caracterizar isolados de campo de BoHV-1 e BoHV-5 com base na análise molecular da região carboxi-terminal do gene que codifica a glicoproteína C (gC) e na análise com enzima de restrição (REA) do genoma viral. Para tanto, a multiplicação de 24 isolados da América do Sul foi realizada em células CRIB para posterior extração do DNA viral, PCR e sequenciamento. As seqüências foram alinhadas utilizando o programa ClustalX2 para uma inferência filogenética pelo método de Neighbor-Joining (Mega 4.0), Kimura 2-parâmetros. O alinhamento das seqüências de nucleotídeos revelou níveis de identidade variando de 70 a 99,6% entre os isolados de BoHV-1; de 66,9 a 100% entre os isolados de BoHV-5 e de 62,9 a 92,8% entre os isolados BoHV-1 e BoHV-5. A árvore filogenética mostrou o agrupamento dos vírus de acordo com o tipo (BoHV-1 e BoHV-5) e subtipo de BoHV-1 (BoHV-1.1 e BoHV-1.2). No entanto, essa técnica não permitiu a diferenciação dos isolados em diferentes subtipos de BoHV-5. Do mesmo modo, a análise por restrição enzimática não proporcionou uma clara diferenciação dos isolados em subtipos devido à presença de variações nos padrões de restrição. Somente um isolado (ISO 94/232) pode ser diferenciado como subtipo 5a. Todavia, este estudo mostrou que a análise filogenética utilizada representa uma potencial ferramenta para a diferenciação e classificação dos vírus em BoHV-1.1, BoHV-1.2 e BoHV-5. No entanto, ambas as técnicas podem ser empregadas, de maneira complementar, quando maiores informações sobre estes vírus forem requeridas. Além disso, com o presente estudo, foi possível expandir o número de amostras caracterizadas, fornecendo subsídios para estudos futuros. / This study was carried out to determine whether the sensitivity of serum neutralization (SN) tests would be affected by the use of distinct subtypes of bovine herpesvirus 1 (BoHV- 1) and 5 (BoHV-5) as test challenge viruses. Bovine sera collected from a randomized sample (n = 287) were tested in a 24 hour incubation SN against three type 1 viruses (BoHV-1.1 strains „„Los Angeles‟‟ (LA) and „„EVI 123‟‟; BoHV-1.2a strain „„SV 265‟‟) and three type 5 viruses (BoHV-5a strain „„EVI 88‟‟; BoHV-5b strain „„A 663‟‟ and BoHV-5c „„ISO 97‟‟). SN sensitivity varied greatly depending on the challenge virus used in the test, particularly when results against each virus were considered individually, where it ranged from 77% (detecting 80 out of 104 antibody-positive sera) to 91% (95/104) with ISO 97/95 and LA strain, respectively. Maximum sensitivity (104/104) was achieved when positive results to a particular combination of four of the challenge viruses (LA + EVI 123 + SV 265 + A 663) or some combinations of five viruses (or all six viruses) were added cumulatively. These results clearly shown that when SN is performed with single test challenge viruses, sensitivity could vary significantly that might compromise control or eradication efforts. Performing SN against a number of different viruses demonstrated to improve significantly the test‟s sensitivity. Thus, news field isolates characterization could aid future evaluations of different BoHV-1 and BoHV-5 subtypes and also provide the better strain and/or strains combination choice. In such case, this study aimed to characterize field isolates of BoHV-1 and BoHV-5 by molecular analyses of glycoprotein C (gC) carboxy-terminal region and viral genome restriction enzymatic analysis (REA). The 24 isolates from South America were propagated in CRIB cells for viral DNA extraction, PCR and sequencing. The sequences were aligned in ClustalX2 to perform a distance–based phylogenetic analysis by Neighbor-Joining method in MEGA 4.0 software under de Kimura 2-parameter. The nucleotide sequence alignments revealed levels of genomic similarity ranging from 70% to 99.6% between BoHV-1 isolates; from 67% to 100% among BoHV-5 isolates and from 63% to 93% between BoHV-1 and BoHV-5 isolates. The phylogenetic tree clustered the viruses according to types (BoHV-1 and BoHV-5) and BoHV-1 subtypes (BoHV-1.1, -1.2). However, this method did not allow clearly differentiated in BoHV-5 subtypes. Likewise, REA did not clear showed differentiation in subtypes due presence variation in restriction pattern. Only one isolate (ISO 94/232) could be differentiated in subtype 5a. The results suggest that the phylogenetic analysis performed could be an important tool for differentiation and classification of such viruses in BoHV-1.1, BoHV-1.2, BoHV-5. However, when adiccional informations were resquested both techniques should be performed. Furthermore, with this work it was possible to expand the number of samples characterized to support future investigation of these viruses.

Na prática hemoterápica em todo mundo, a triagem e o diagnóstico da infecção pelo HCV continua sendo um desafio. Desta forma, considerando as variáveis genéticas do vírus da Hepatite C e as variáveis populacionais de cada região, o conhecimento mais profundo da realidade da epidemiologia molecular do vírus da Hepatite C na população de doadores de sangue em regiões específicas se torna cada vez mais imprescindível. Desta forma, este estudo visou realizar a caracterização sorológica e molecular da infecção pelo Vírus da Hepatite C (HCV) em doadores de sangue do Estado do Amazonas a fim de subsidiar conhecimentos para interpretação dos diferentes perfis laboratoriais e clínicos, além de contribuir para o conhecimento das rotas de transmissão e da epidemiologia da infecção do Amazonas. Foram estudados 154 doadores de sangue do Estado do Amazonas com sorologia repetidamente reativa para anti-HCV. Foram realizados testes sorológicos por ELISA e Imunoblot, testes de detecção de RNA viral plasmático por Nested PCR, determinação da carga viral e genotipagem do vírus por sequenciamento. O estudo foi realizado no período de setembro de 2005 a abril de 2007 quando o índice de descarte por anti-HCV reativo foi de 0,37%. Foi observado que 50% dos casos de Imunoblot indeterminado apresentaram positividade no Nested PCR indicando a presença de RNA plasmático. A carga viral baixa foi um fator limitante para a determinação do genótipo viral pelo método de sequenciamento de algumas amostras. A freqüência de casos presumidos de clearance viral plasmático na amostra estudada foi de 18,8%. O genótipo mais prevalente do HCV nos doadores do Estado do Amazonas foi o genótipo 1 (87,5%) seguido do genótipo 3 (12,5%). Considerando as nuances da história natural da Hepatite C e os diversos momentos clínicos que os doadores possam se encontrar devem ser adotadas mudanças de condutas do acompanhamento dos doadores sororeativos para anti-HCV no banco de sangue do Amazonas e no fluxograma de diagnóstico da infecção. / The screening and diagnostic of HCV infection continue to be a challenge on the hemotherapic practice because the unique characteristics of each population and the molecular variability of the virus. The aim of this study was to characterize the serologic and molecular profile of 154 anti-HCV+ Amazon blood donors from the Amazon Hematology and Hemoterapy Foundation. Screening for anti HCV antibody was performed using ELISA and recombinant Imunoblot assay. Seropositive samples were assessed further with Nested PCR, viral load and genotyping techniques. In the study period, 2005-2007 the anti-HCV discard rate was 0,37%. We observed that 50% of the indeterminate Immunoblot cases showed HCV RNA presence in plasma by Nested PCR. The most prevalent genotype between subjects of this study was genotype 1 (87,5%), followed by genotype 3 (12,5%). The presumed plasma clearance frequency was 18,8%. The low viral load was a determinant critical factor to the genotype determination in some samples. Considering the different stages of the HCV natural infection different conducts may be adopted with inclusion of molecular testes as the first option for confirmation to the follow up of the positive anti-HCV blood donors in the Amazon blood bank and in the algorithm of the infection diagnostic, saving resources and providing a better counseling for the reactive donors.

A toxocaríase é uma zoonose muito difundida em todo o mundo. Trata-se da infecção humana, em especial pelas larvas de Toxocara canis, um nematóide comum de cães. O objetivo do presente estudo foi levantar a soropositividade a anticorpos anti-Toxocara spp, identificar os fatores de risco em grupos de escolares da cidade de Fernandópolis/SP e avaliar a contaminação do solo por ovos desse e de outros geo-helmintos entre os anos de 2007 e 2008. Foi realizado um estudo transversal utilizando-se amostragem complexa e estratificada, por renda, para a avaliação da toxocaríase humana. O método diagnóstico empregado foi o teste de ELISA para detecção de anticorpos IgG anti-Toxocara spp. O estudo da contaminação do solo deu-se por meio da avaliação de amostras de solo de praças, parques públicos e escolas municipais e pela avaliação de amostras de fezes provenientes de 10 praças públicas. Foram avaliados 252 indivíduos em dois estratos, o primeiro representando baixa renda com 120 (47,6%) crianças e o segundo com 132 (52,4%) representando renda elevada. A frequência geral de positividade ao antígeno TES foi de 15,4% (39), sendo 28,3% (34) para o primeiro estrato contra 3,7% (5) do segundo (p<0,000). A exposição à geofagia (exposto OR ajustado 14,65 - IC95% = 2,14 a 89,25 e muito expostos OR ajustado 19,15 a IC95% = 2,96 a 123,94), o hábito de levar objetos à boca (exposto OR ajustado 9,31 - IC95% = 1,63 a 53,03 e muito expostos OR ajustado 42,29 a IC95% = 5,49 a 326,01) e a presença de mais de dois cães em domicílio (OR ajustado 21,25 = 1,7 a 264,87) foram variáveis associadas à positividade. O hábito de lavar as mãos antes das refeições (OR ajustado 0,01 - IC95% 0,00 a 0,05) representou importante fator de proteção. Foram avaliadas 225 amostras de solo, sendo 71% (160) provenientes de praças e parques públicos e 29% (65), de escolas municipais. Foi observado alto grau de contaminação de praças e parques públicos 28,4% (64), ao passo que nas escolas a positividade foi de 1,7% (6). Os parasitos encontrados com maior frequência foram de Toxocara spp 79,6% (47), Trichuris spp 13,5% (8) e ancilostomídeo 6,4% (4). Foram avaliadas ainda 400 amostras de fezes de cães, e observou-se uma positividade de 23,7% (95). Os parasitos observados com maior frequência nas amostras positivas foram ancilostomídeo símile 74,7% (71) e Toxocara canis, 53,6% (51). A positividade a anticorpos anti-Toxocara spp em indivíduos de 1 a 12 anos de idade, provenientes de cinco escolas do município de Fernandópolis/SP, foi relativamente baixa. Os principais fatores de risco/proteção dizem respeito às questões modificáveis como a geofagia, o hábito de levar objetos à boca, a existência de mais de dois cães em domicílio e o hábito de lavar as mãos antes das refeições. Os solos de praças e parques públicos de Fernandópolis/SP e amostras de fezes recolhidas em ambiente estavam altamente contaminados com geo-helmintos zoonóticos e representam fonte de infecção relevante para a população / Toxocariasis is a zoonosis of worldwide occurrence. It is defined as the human infection by larvae of nematodes, especially Toxocara canis, common intestinal parasite of dogs. The aim of this study was to estimate the frequency of anti-Toxocara spp antibodies, identify risk factors in groups of school children from the city of Fernandópolis/SP and evaluate soil contamination by eggs of this and other geohelminths between 2007 and 2008. It was conducted a cross-sectional study using complex sampling for the assessment of human toxocariasis. The diagnostic method used was the ELISA test for detection of IgG anti-Toxocara spp antibodies. The study of soil contamination was done through evaluation of soil samples from public places, sand boxes of municipal schools and evaluation of dogs stool samples from 10 public places. Two hundred and fifty two children were evaluated in two strata, the first with 120 children (47.6%) from low income families and the second with 132 (52.4%) from high income ones. The overall frequency of antibodies anti-Toxocara spp was 15.4% (39), being 28.3% (34) for the first stratum compared with 3.7% (5) of the second (p <0.000). The exposure to geophagy (exposed: adjusted OR 14.65 - CI 95% = 2.14 to 89.25; very exposed: adjusted OR 19.15 - CI 95%= 2.96 to 123.94), the habit of rising objects up to the mouth (exposed: adjusted OR 9.31 1.63 to 53.03; very exposed: adjusted OR 42.29 - CI 95%= 5.49 to 326.01) and the presence of more than two dogs at home (adjusted OR 21.25 - 1.7 to 264.87) were variables associated with positivity. The habit of washing hands before meals (adjusted OR 0.01 - CI 95% = 0.00 to 0.05) represented an important protective factor. Were evaluated 225 samples of soil: 71% (160) from public places and 29% (65) of municipal schools. It was observed a high contamination of public places with 28.4% (64) being positive, while in school positivity was 1.7% (6). The most frequent parasites eggs found were Toxocara spp 79.6% (47), Trichuris spp 13.5% (8) and Ancylostomatidae 6.4% (4). They were also evaluated 400 fecal samples of dogs and observed a positivity of 23.7% (95). The most frequent parasites observed in positive samples were Ancylostoma simile 74.7% (71) and Toxocara canis 53.6% (51). The anti-Toxocara spp antibodies positivity in school children from Fernandópolis/SP was relatively low. The main factors of risk/protection concern to modifiable issues like geophagy, the habit of rising objects up to the mouth, the existence of more than two dogs at home and the habit of washing hands before meals. The soil of public places of Fernandópolis/SP and feces samples collected from the environment were highly contaminated with zoonotic helminths and represent important source of infection for the population