Submitted by Barbara de Moura Mello Antunes (bah_tunes@hotmail.com) on 2019-01-04T18:20:43Z No. of bitstreams: 1 TESE FINAL BARBARA ANTUNES_04.01.2019.pdf: 4372364 bytes, checksum: c7b051b59637595632437c162e348471 (MD5) / Approved for entry into archive by ALESSANDRA KUBA OSHIRO ASSUNÇÃO (alessandra@fct.unesp.br) on 2019-01-04T18:55:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 antunes_bmm_dr_prud.pdf: 4372364 bytes, checksum: c7b051b59637595632437c162e348471 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-01-04T18:55:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 antunes_bmm_dr_prud.pdf: 4372364 bytes, checksum: c7b051b59637595632437c162e348471 (MD5) Previous issue date: 2018-12-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O estilo de vida sedentário associa-se com alterações no perfil lipídico, inflamação crônica de baixo grau e aumento do tecido adiposo. Frente a essa questão, levantamos a hipótese de que alterações inflamatórias e metabólicas favorecem a instalação e progressão de diversas alterações metabólicas, e estão diretamente envolvidas com aptidão cardiorrespiratória mensurada pelo consumo de oxigênio pico (baixo ou alto VO2pico). Sendo assim, o presente estudo buscou responder duas questões centrais divididas em duas etapas: ESTUDO I – avaliação das respostas metabólicas e inflamatórias periférica durante diferentes intensidades de esforço de acordo com o nível de condicionamento físico dos sujeitos; ESTUDO II – avaliação da resposta metabólica e inflamatória celular de acordo com o nível de condicionamento físico. Para o ESTUDO I foram recrutados 28 sujeitos saudáveis do sexo masculino (idade: 28,8±8,6 anos; peso: 75,8±9,9 kg; VO2pico: 50,5±8,8 mL.kg-1.min-1) que realizaram por 60 minutos ou até a exaustão voluntária três protocolos de exercício agudo em baixa (<60% VO2pico), moderada (60-75% VO2pico) e alta intensidade (>90% VO2pico). Em todas as sessões foram coletadas amostras de sangue pré, imediatamente após e 60 minutos após o término da sessão para a determinação das concentrações de citocinas (TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, PAI-1, adiponectina), hormônios (leptina e insulina) e parâmetros lipídicos (colesterol total, triacilglicerol, HDL-c e ácidos graxos livres). No ESTUDO I, observou-se que a sessão de esforço propiciou significantes modulações sobre TNF-α, IL-6, razão IL-6/IL-10, lactato e ácidos graxos, principalmente em alta intensidade; além de significantes correlações entre a produção de IL-10 durante o exercício com o nível de condicionamento físico, no sangue periférico e estimulado. Interessantemente, o exercício de alta intensidade foi capaz de aumentar as concentrações sistêmicas de PAI-1 imediatamente após a sessão. Parao ESTUDO II foram recrutados 22 sujeitos (idade: 25,8±5,7 anos; peso: 76,5±14,4 kg; VO2pico: 47,8±12,3 mL.kg-1.min-1) para avaliar a produção de citocinas e expressão gênica de marcadores associados com a atividade do PPAR-γ e NF-κB em monócitos tratados por 24h sobre a presença de lipopolissacarideo (ativador da via inflamatória TLR-4/NF-kB), rosiglitazona e GW9662 (agonista e antagonista de PPAR- γ, respectivamente). Observou-se a nível molecular que maiores concentrações de IL-6 são produzidas por monócitos de sujeitos de alto VO2pico enquanto maiores concentrações de IL-10 são produzidas em sujeitos de baixo VO2pico. Quando avaliada a expressão gênica de proteínas das vias de sinalização do PPAR-γ e NF-κB observou-se maior expressão de AMPK, TLR-4, PGC-1 e PPAR-γ no grupo de alto VO2pico. Sendo assim, conclui-se que o exercício físico em intensidades altas impõe importantes alterações metabólicas que favorecem a instalação do quadro antiinflamatório, entretanto tais adaptações periféricas são dependentes do nível de condicionamento físico, dado que indivíduos de maior aptidão cardiorrespiratória apresentam maior expressão de proteínas e receptores celulares que modulam positivamente a ativação do PPAR-γ e inibem a via inflamatória do NF-kB. Desta forma, indivíduos de alto condicionamento físico apresentam adaptações benéficas nos mecanismos celulares e moleculares que refletem nas respostas metabólicas e inflamatórias periféricas frente à prática de exercício físico. / Sedentary lifestyle is associated with changes on lipid profile, low-grade chronic inflammation and increased adipose tissue. In this line, we hypothesized that inflammatory and metabolic alterations favor the installation and progression of several metabolic disorders, and are directly involved with cardiorespiratory fitness (VO2peak uptake). Thus, the present study sought to answer two central questions divided into two steps: EXPERIMENT I - evaluation of the metabolic and inflammatory peripheral responses during different exercise intensities according to cardiorespiratory fitness; EXPERIMENT II - evaluation of cellular metabolic and inflammatory response according to the cardiorespiratory fitness. For EXPERIMENT I, 28 healthy male subjects were recruited (age: 28.8 ± 8.6 years, weight: 75.8 ± 9.9 kg, VO2peak: 50.5 ± 8.8 mL.kg-1.min-1) and performed for 60 minutes or until voluntary exhaustion three acute exercise protocols at low (<60% VO2peak), moderate (60-75% VO2peak) and high (> 90% VO2peak) intensities. In all sessions, blood sample was collected pre, immediately after exercise and 60 minutes after the end of each session to determine cytokine concentrations (TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, PAI-1, adiponectin), hormones (leptin and insulin) and lipid parameters (total cholesterol, triacylglycerol, HDL-c, and free fatty acids). In EXPERIMENT I, was observed that acute session provided significant modulations on TNF-α, IL-6, IL-6/IL-10 ratio, lactate and fatty free acids, mainly at high intensity; in addition, significant correlations was verified between IL-10 release during exercise and cardiorespiratory fitness in peripheral and stimulated-blood. Interestingly, high-intensity exercise was able to increase systemic concentrations of PAI-1 immediately after the session. For EXPERIMENT II, 22 subjects were recruited (age: 25.8 ± 5.7 years, weight: 76.5 ± 14.4 kg, VO2peak: 47.8 ± 12.3 mL.kg-1.min-1) to evaluate cytokine production and gene expression of markers associated with activation and/or inhibition of PPAR-γ and NF-κB in monocytes treated for 24h on the presence or absence of lipopolysaccharide (pro-inflammatory pathway activator by TLR-4/NF-κB), rosiglitazone and GW9662 (PPAR-γ agonist and antagonist, respectivetly). It was observed that higher concentrations of IL-6 are produced by monocytes of subjects with high VO2peak while higher concentrations of IL-10 are produced in subjects with low VO2peak. When the protein expression of PPAR-γ and NF-κB signaling pathways was evaluated, higher expression of AMPK, TLR-4, PGC-1 and PPAR-γ was observed in the high VO2peak group. Therefore, it is concluded that physical exercise at higher intensities imposes important metabolic changes that favor the installation of an antiinflammatory profile, however these peripheral adaptations are fitness-dependent, given that individuals with greater cardiorespiratory fitness have higher expression of proteins and cellular receptors that positively modulate the PPAR-γ activation and inhibit the NF-κB inflammatory pathway. In this sense, individuals with high physical fitness condition present beneficial adaptations in the cellular and molecular mechanisms that reflect in metabolic and inflammatory peripheral responses mediated by physical exercise practice. / FAPESP: 2014/08003-1 / FAPESP (BEPE): 2016/12369-7

Orientador: Profa. Dra. Márcia Aparecida Sperança / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2014

A carcinogênese oral é um processo multifásico, onde componentes genéticos levam a desregulação de vias de sinalização celular que controlam funções celulares básicas, como divisão, diferenciação e morte celular. Uma das maneiras de compreender a natureza biológica dos cânceres, além do curso clínico, é através do entendimento do processo de progressão e metástase destas neoplasias. Este estudo teve como objetivo avaliar a participação da proteína Twist no desenvolvimento e progressão dos carcinomas epidermóides orais. Com tal proposta, também foi avaliada a participação das proteínas caderina-E e p-Akt, e sua possível interação com Twist no processo de carcinogênese oral. O trabalho em questão analisou a expressão imuno-histoquímica destas proteínas em 30 espécimes de displasia oral, 20 de carcinoma epidermóide oral e 10 de mucosa oral normal, e avaliou também a possível inter-relação dessas proteínas em linhagens derivadas de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço por meio dos ensaios de Western Blotting e imunofluorescência. Os resultados deste estudo demonstraram uma relação inversamente proporcional entre Twist e caderina-E desde os estágios mais precoces da carcinogênese oral. Tal afirmação baseou-se na presença de diferenças significantes entre a expressão imuno-histoquímica de Twist e Caderina-E na amostras de epitélio oral, epitélio displásico e nos espécimes de carcinoma epidermóide oral. Adicionalmente, foi observada a relação inversa entre Twist e a Caderina-E nas linhagens de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, sendo este evento constatado pelo decréscimo nos níveis protéicos da Caderina-E frente a uma elevação de Twist. Estes resultados sugerem um importante papel de Twist na progressão do carcinoma epidermóide oral, e juntamente com a Caderina-E, pode representar um relevante marcador biológico do câncer oral. / The oral carcinogenesis is a multi-stage process, where genetic components leads to deregulation of cell signaling pathways that control basic cellular functions such as division, differentiation and cell death. One way to understand the biological nature of cancers, besides the clinical course, is through understanding the process of progression and metastasis of these neoplasms. This study aimed to evaluate the role of Twist protein in the development and progression of oral squamous cell carcinomas. With this proposal, was also evaluated the involvement of E-cadherin and p-Akt proteins, and its possible interaction with Twist in the process of oral carcinogenesis. The work in question examined the immunohistochemical expression of these proteins in 30 specimens of oral dysplasia, 20 oral squamous cell carcinoma and 10 normal oral mucosa, and also evaluated the possible interrelationship of these proteins in lines derived from squamous cell carcinoma of head and neck by means of Western blotting assays and immunofluorescence. The results of this study showed an inverse relationship between Twist and E-cadherin since the earliest stages of oral carcinogenesis. These results were based on the presence of significant differences between the immunohistochemical expression of Twist and ECadherin in samples of oral epithelium, dysplastic epithelium and in specimens of oral squamous cell carcinoma. In addition, we observed the inverse relationship between Twist and E-Cadherin in the lines of squamous cell carcinoma of head and neck; this event was evidenced by the decrease in protein levels of E-Cadherin forward to a high of Twist. These results suggest an important role of Twist in the progression of oral squamous cell carcinoma, and along with E-cadherin may represent a relevant biomarker of oral cancer.

Este trabalho trata do processo de transcrição para violão solo das 12 Danzas Españolas Op. 37 de Enrique Granados, escritas originalmente para piano. Tal processo desenvolveu-se através da observação de versões para violão de outras obras originais para piano, comparações entre os recursos instrumentais específicos desses dois instrumentos e de um levantamento histórico, onde foram analisadas as principais problemáticas de adaptação dos elementos musicais e estéticos da obra original em um novo meio. A fim de contextualizar esse trabalho no panorama da transcrição, visitamos a história de Granados, analisando os aspectos gerais de suas Danzas Españolas, bem como discutimos a conceituação da scordatura para, a partir daí, empregar o método de pesquisa de diferentes possibilidades de afinação na busca de viabilizar a transcrição da obra em questão, sem perder de vista, durante esse processo, a ideia original do compositor. Através dos resultados alcançados, da maneira como compreendemos os métodos empregados, constatamos um amplo campo de possibilidades a serem pesquisadas e novas soluções de adaptação e scordature a serem empregadas, estabelecendo a prática da transcrição como um procedimento válido artisticamente, desde que devidamente contextualizado. / This work deals with the process of transcription for guitar solo of the 12 Danzas Españolas Op. 37 of Enrique Granados, written originally for piano. This process was developed through the observation of guitar versions of other original works for piano, comparisons between the specific instrumental resources of these two instruments and a historical survey, where the main problems of adaptation of the musical and aesthetic elements of the original work were analyzed in a new medium. In order to contextualize this work in the transcription panorama, we visit the history of Granados, analyzing the general aspects of its Danzas Españolas, as well as discussing the conception of the scordatura to, from there, to use the research method of different tuning possibilities in the seeking to make feasible the satisfactory assimilation of the work in question, without losing sight of, during this process, the original idea of the composer. Through the results obtained, as understood by the methods employed, we find a wide field of possibilities to be researched and new solutions of adaptation and scordature to be used, establishing the practice of transcription as an artfully valid procedure, provided that it is properly contextualized.

Esta dissertação apresenta doze transcrições, realizadas pelo próprio autor, de obras selecionadas de Maurice Ravel e Claude Debussy. A realização das transcrições teve como referencial teórico a análise de duas das mais importantes transcrições da história do violão: - Siete Canciones Populares Españolas - original de Manuel de Falla para piano e voz, transcritas para violão e voz por Miguel Llobet - Venetian Gondola Song - original de Felix Mendelssohn para piano (livro I das Canções sem palavras, op. 19), transcrita por Francisco Tárrega O livro Guidelines for Style Analysis, de Jan LARUE foi o referencial teórico para as análises musicais. Os comentários analíticos se restringem à sua relação com os processos de transcrição. A arte da transcrição está diretamente associada ao violão e seu desenvolvimento. Uma perspectiva da história da transcrição para violão a partir do final do século XIX é apresentada e discutida. Soma-se a esta discussão a figura de Franz Liszt, um dos principais transcritores (para piano) da história da música. As transcrições são analisadas a fim de se abordar a problemática que cada uma envolve. A \"fidelidade musical\" é o principal foco deste trabalho, ou seja, a realização dos elementos musicais e ideia estética da obra original em seu novo meio: o violão. Para isso é necessário realizar uma transcrição idiomática, e os processos utilizados para esta busca são também apresentados e discutidos. / This dissertation presents twelve transcriptions, made by the own author, of selected works by Maurice Ravel and Claude Debussy. The realization of the transcriptions had as a theorical referential the analysis of two of the most important transcriptions of the history of the guitar: - Siete Canciones Populares Españolas - original work by Manuel de Falla for piano and voice, transcribed for guitar and voice by Miguel Llobet - Venetian Gondola Song - original work by Felix Mendelssohn for piano (book I from the Songs without words, op. 19), transcribed by Francisco Tárrega The book Guidelines for Style Analysis, by Jan LARUE was the theorical reference for the musical analysis. The analytical comments are confined to their relationship with the processes of transcription. The art of transcription is directely associated to the guitar and its development. A perspective of the history of transcription for the guitar starting at the middle of the XIX century is presented and discussed. Adds to this discussion the figure of Franz Liszt, one of the most important transcribers (for the piano) in the history of music. The transcriptions are analysed in order to address the problem that each one involves. The \"musical fidelity\" is the main focus of this work, namely the realization of musical elements and aesthetic idea of the original work on its new instrument: the guitar. To achieve this is necessary to work on an idiomatic transcription, and the processes used on this quest are also presented and discussed.

A conclusão do seqüênciamento do genoma de múltiplos vertebrados trouxe um importante desafio para entender e predizer função, particularmente para seqüências não-codificantes, a partir de seqüências primarias de DNA. A hipótese de que a conservação evolutiva prediz seqüências funcionais é comumente aceita, inclusive para seqüências envolvidas na regulação da transcrição gênica, mesmo que a conservação de seqüências tenha gerado imperfeitas predições de enhancers (acentuadores) funcionais. O colágeno tipo XVIII é um componente da maioria das membranas basais; mutações no gene COL18A1 levam a síndrome de Knobloch, uma doença autossômica recessiva caracterizada por degeneração vitreoretiniana e macular e encefalocele occipital. O COL18A1 tem 43 exons que transcrevem três isoformas a partir de dois promotores diferentes. As três isoformas apresentam um complexo modelo de expressão tecido-específico, incluindo expressão em rim, pulmão, cérebro e retina. Os níveis de expressão do COL18A1 são considerados clinicamente importantes na vasculogenese, e em predisposição para o hepatocarcinoma e diabetes tipo 2. Dessa forma, a identificação de regiões regulatórias fornecerá indícios sobre a regulação da expressão do COL18A1 em estados normal e patogênico. Além disso, a endostatina e o FRZC18 são fragmentos proteolíticos do colágeno XVIII envolvidos na sinalização Wnt. No entanto, o papel in vivo do FRZC18 ainda não foi estudado. Uma profunda investigação do papel deste domínio na via de sinalização Wnt é indubitavelmente necessária, bem como a compreensão da regulação do COL18A1 pela via de Wnt. Empregamos um sistema eficiente de teste em zebrafish para analisar o potencial funcional de elementos enhancers na regulação transcricional do COL18A1. Identificamos quatro elementos enhancers que controlam a transcrição consistente com o COL18A1 endógeno de zebrafish, em tecidos incluindo retina, rim, vasos sanguíneos, intestino, cartilagem e fígado. Apesar dos algoritmos utilizados não tenham detectado conservação em seqüências não-codificantes de humanos à teleósteos no lócus do COL18A1 estudado, as seqüências humanas funcionaram apropriadamente em zebrafish transgênicos. Adicionais análises computacionais post hoc revelaram similaridade entre seqüência humana e de zebrafish dentro ou próximo das quatro regiões enhancers. Testamos funcionalmente o FRZC18 com superexpressão de seu RNAm em embriões de zebrafish. Este experimento resultou em embriões com fenótipos que assemelharam à mutantes da via não-canônica de Wnt (slb e ppt). Este resultado aponta o FRZC18 como um antagonista da via de sinalização não-canônica de Wnt, possivelmente por interação com Wnt11 e Wnt5. Dissecamos o promotor 1 do COL18A1, o qual mostrou características de genes housekeeping e similaridades com o promotor 2 do COL18A1. Também mostramos possível ligação de TCF/LEF aos promotores do COL18A1. A via de Wnt levou à redução de atividade dos promotores do COL18A1 e também redução dos níveis de expressão através de superexpressão de &#946;-catenina. Este trabalho elucidou de forma geral, os elementos regulatórios em cis do COL18A1 e melhor caracterizou o seu papel na via de sinalização Wnt como um antagonista também da via não-canônica e como um alvo da via canônica. / The completion of multiple vertebrate genome sequences has presented an important challenge to understand and predict function from primary DNA sequence, particularly for noncoding sequence. It is commonly hypothesized that evolutionary conservation predicts functional DNA sequences, including those involved in regulating gene transcription, although sequence conservation has proven to be an imperfect predictor of enhancer function. Type XVIII collagen is a component of most basement membranes; mutations in the COL18A1 gene lead to Knobloch Syndrome, an autosomal recessive disease characterized by vitreoretinal and macular degeneration and occipital encephalocele. COL18A1 has 43 exons that transcribe three isoforms from two different promoters. The three isoforms display complex patterns of tissue-specific expression, including in kidney, lung, brain, and retina. Expression levels of COL18A1 are thought to be clinically important in vasculogenesis, and in predisposition to hepatocarcinoma and diabetes type 2. Therefore, identification of the regulatory regions will provide insight into normal and pathogenic regulation of COL18A1 expression. Furthermore, endostatin and FRZC18 are cleaved fragments from collagen XVIII that are involved in Wnt signaling, however in vivo role of FRZC18 has not been investigated yet in any model organism. Thus, a deeper investigation of FRZC18 role in Wnt signaling is indubitable necessary, as well as a comprehension of COL18A1 regulation by Wnt signaling. We have employed an efficient system of transgenesis in the zebrafish to functionally evaluate potential enhancer elements regulating COL18A1 transcription. We identified four enhancer elements that control transcription consistent with zebrafish endogenous COL18A1, in tissues including retina, kidney, blood vessels, gut, cartilage and liver. Although the algorithms we used did not detect noncoding conservation from human to teleosts at the COL18A1 locus, the human sequences functioned appropriately in zebrafish transgenics. Additional post hoc computational analysis revealed detectable sequence similarities between human and zebrafish in or near two of the four enhancer regions. We tested one of these zebrafish regions and confirmed orthologous enhancer activity. We functionally tested FRZC18 with its mRNA overexpression in zebrafish embryos. This experiment resulted in embryos with phenotype remaining slb and ppt, mutants of non-canonical wnt components. This result points FRZC18 as an antagonist of non-canonincal Wnt signaling possibly by interaction with Wnt11 and Wnt5. We dissected COL18A1 promoter 1 and it showed characteristics of a housekeeping gene and similarities with promoter 2 and we also showed possible TCF/LEF binding to COL18A1 promoters. Wnt signaling responded to downregulate promoter activity of COL18A1 and also decrease its expression by overexpression of s-catenin. This work broadly elucidated COL18A1 cis regulatory elements and better characterized its role in Wnt signaling as an antagonist of noncanonical and also as a target of canonial signaling.

As mutações no gene PROP1 são a causa genética mais comum da deficiência combinada de hormônios hipofisários. Até o momento, diversas mutações missense e pequenas deleções foram descritas sendo a mutação 301-302 delAG a mais freqüente. Nosso objetivo foi estudar as mutações em DNA de pacientes com hipopituitarismo e padronizar a extração de DNA de células de swab oral, usando um método com NaCl e comparar com um kit comercial (Purigene, Minneapolis, EUA). Amplificamos os 3 exons do gene PROP1 do DNA obtido de células orais e de sangue periférico. Identificamos a mutação 301-302delAG em 6 pacientes, 4 em homozigose (33%) e 2 em heterozigose (16%) e a mutação G51A em heterozigose em um único paciente. Em dois irmãos, filhos de pais consangüíneos, não foi possível amplificar os 3 exons do gene PROP1 enquanto que os os genes LHX3 e LHX4 foram amplificados com sucesso. Para confirmar a hipótese de deleção do PROP1, o Southern blotting foi realizado usando como sonda o produto de PCR do exon 2 do gene PROP1 e um fragmento do gene CYP21A2 como sonda controle. A banda referente ao CYP21A2 estava presente nos pacientes e nos controles enquanto a banda referente ao PROP1 estava ausente nos irmãos e presente na mãe e nos controles. Para definir a extensão da deleção usamos um mapa de STS próximos ao gene e o STS GDB:314805 localizado a 6,0 kb a montante do PROP1 não foi amplificado nos pacientes. Entretanto, o gene Q8N6H0 a 18 kb a juzante e o STS WI-16216 a 59 kb a montante do PROP1 foram amplificados com sucesso nos pacientes e controles indicando que a deleção está localizada dentro de 81 Kb. Para determinar os limites da deleção, várias reações de PCR foram realizadas com primers desenhados progressivamente distantes de gene PROP1, cobrindo toda a região. Isto nos permitiu determinar a região deletada de 9,6 kb a juzante e 11 kb a montante do gene PROP1, com o tamanho máximo deletado de 18,4 kb. Por ambos os métodos de extração obtivemos um DNA de boa qualidade, permitindo o amplificação dos 3 exons do gene PROP1. A extração com NaCl foi mais rápida e mais barata resultando em maior quantidade de DNA quando comparada com o kit comercial. Em conclusão, descrevemos a deleção completa do gene PROP1 em dois irmãos com o fenótipo clássico de hipopituitarismo associado à hipófise hipoplásica ou aumentada e padronizamos a extração de DNA de células de mucosa oral com NaCl, que apresentou custo mais baixo e resultado mais rápido quando comparado a extração por um kit comercial, indicando que o swab oral é uma fonte prática de obtenção de DNA para estudos genéticos. / PROP1 gene mutations are the most common cause of genetic combined pituitary hormone deficiency. To date, several missense mutations and small deletions have been described and the 301-302 del AG is the most frequent. Our objective was to study PROP1 mutations in patients with hypopituitarism and standardize DNA extraction from an oral swab, using the NaCl method, comparing it with a commercial kit (Purigene, Minneapolis, USA). We amplified the 3 exons of PROP1 gene in DNA obtained from oral cells and peripheral blood cells. We identified the delAG301-302 mutation in 6 patients, 4 in homozygous (33%) and 2 in heterozygous (16%) state and G51A mutation in heterozygous state in a single patient. In two siblings, a boy and a girl, born to consanguineous parents we failed to amplify PROP1 gene by PCR whereas LHX3 and LHX4 genes were successfully amplified. To confirm the hypothesis of PROP1 gene deletion, Southern blotting was performed using PROP1 exon 2 gene PCR product as a probe and a fragment of CYP21A2 gene as a control probe. The CYP21A2 band was present in patients and controls whereas PROP1 band was absent in both siblings and present in their mother and in controls. To define the extension of this deletion we used STS mapping approach and no amplification for a STS GDB:314805 6.0 kb downstream of PROP1 was found. However, Q8N6H0 gene located 18 kb upstream and the STS WI-16216 located 59 kb downstream of PROP1 were successfully amplified indicating that the deletion is placed within 81 Kb. To determine the limits of the deletion a number of PCR covering this region were then carried out with primers located progressively distant from PROP1. This allowed us determine the deleted region from 9.6 kb upstream to 11 kb downstream of PROP with a maximum deletion size of 18.4 kb. Both methods yielded good quality DNA, allowing the amplification of 3 exons of PROP1 gene. The NaCl method showed to be faster and less expensive, resulting in a larger amount of DNA when compared with the commercial kit. In conclusion, we describe a complete deletion of PROP1 gene in two siblings with classical hypopituitarism phenotype associated with hypoplastic or enlarged pituitary gland and standardized the DNA extraction of oral cells with NaCl, which presented lower costs and faster results, when compared with the extraction by a commercial kit indicating that oral swabs are a reliable DNA source for genetic studies.

Saccharomyces cerevisiae é o organismo de escolha para produção de etanol combustível, apresentando-se adaptadas ao ambiente hostil das dornas de fermentação. Adaptações como floculação, formação de espuma e de biofilme são características fenotípicas indesejáveis ao processo brasileiro. Por isso, a pronta identificação destas características faz-se necessária no intuito de minimizar perdas de rendimento e diminuir o custo da produção. Sabe-se que proteínas codificadas pela família de genes FLO estão relacionadas a estes fenótipos, os quais são regulados pela proteína Flo8p, a qual possui papel fundamental na apresentação destas características fenotípicas indesejáveis. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo analisar o fenótipo e o comportamento metabólico, relacionando-os com a regulação via Flo8p. Os resultados obtidos revelam o papel fundamental de Flo8p na regulação positiva destes fenótipos em linhagem isolada do ambiente industrial (FT02). Verificou-se uma forte tendência da participação do gene FLO11 na formação de espuma, via Flo8p. Além disso, através da deleção do FLO8 da linhagem FT02, observou-se a influência positiva de Flo8p na floculação e hidrofobicidade celular, filamentação e poder invasivo. / Saccharomyces cerevisiae is the chosen organism for fuel ethanol production, presenting adapted to the hostile environment of the fermentation vats. Adaptations like flocculation, d foam formation and biofilm are undesirable phenotypes for the Brazilian process. Hence, the early identification of these characteristics is necessary to minimize yield losses and lower the production cost. Proteins codified by FLO gene family are related with these phenotypes, which are positively regulated by Flo8p protein, showing fundamental role in the expression of the undesirable phenotypes. So, the present work aimed to analyze the phenotypes and the metabolic behavior of an industrial strain isolated directly from Brazilian ethanol production process (FT02), relating them with the Flo8p regulation. Our results showed that the Flo8p plays a fundamental role in the regulation of these characteristics in the industrial strain FT02. We also verified a strong tendency of the FLO11 gene participation in the foam formation, by Flo8p. Moreover, by FLO8 deletion in FT02 strain, we could identify the positive influences of the Flo8p in flocculation and cellular hydrophobicity, filamentation and invasive growth.

Introdução: A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença autoimune desmielinizante que afeta drasticamente a capacidade motora, cognitiva, e sensitiva dos pacientes. Acreditase que o Retrovírus Endógeno Humano da família W (HERV-W) possa ter um papel na patogênese da doença. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar o transcriptoma desses indivíduos, e analisar os loci do HERV-W diferencialmente ativos. Materiais e Métodos: PBMC e soro de pacientes com EM em surto (GS), em condições avançadas (GA) e indivíduos saudáveis (GC) foram coletadas. Amplicons de envelope de HERV-W foram sequenciados em Ion Torrent e o RNAm foi sequenciado na plataforma Illumina HiSeq2500. Além da análise do HERV-W, análises de interação gênica foram feitas e citocinas inflamatórias e quimiocinas foram testadas. Resultados: Foram analisados 23 indivíduos com EM (16 GS e 7 GA) e 36 do GC. Os pacientes com EM apresentam 3x mais expressão de HERV-W do que os indivíduos controle. O sequenciamento de amplicon revelou que os grupos com EM apresentavam mais loci ativos do que o GC. Apesar limitações decorrentes de variações entre corridas, o transcriptoma demonstrou que o HERV-K11 era diferencialmente expresso no GS, e no GA, 19 HERVs estavam diferencialmente expressos. Loci novos e já descritos como ativos em outros estudos foram encontrados no presente trabalho. O perfil de interação gênica do GS demonstrou um caráter inflamatório, confirmados pela dosagem de citocinas, onde IL-6, IL-1?, TNF-?, IFN-? estavam elevadas nos indivíduos do GS. Já os indivíduos do GA apresentavam um perfil não inflamatório com vias de reparo neuronal inativadas. Conclusões: Os pacientes com EM apresentam maior nível de expressão e maior diversidade de expressão de HERV-W do que o GC. Apesar os perfis semelhantes de expressão, há loci diferencialmente expressos dependente do grupo estudado. Os pacientes com EM apresentam perfis distintos de expressão gênica onde os indivíduos GS apresentam um perfil inflamatório e no GA, um perfil neurodegenerativo. / Introduction: Multiple Sclerosis (MS) is an autoimmune disease which drastically affects motor, cognitive and sensitive capability of the patients. It seems that Human Endogenous Retrovirus W family (HERV-W) may play a role in MS pathogenesis. Therefore, the aim of this study was to analyze the transcriptome of these individuals and to analyze the HERV-W loci differentially expressed. Materials and Methods: PBMC and serum samples were collected from MS patients in relapsing conditions (GS), MS patients in advanced conditions (GA) and healthy individuals (GC). HERV-W Env amplicon was sequenced in Ion Torrent and mRNA was sequenced in illumina HISeq2500 platform. Besides HERV-W analysis, genic pathways analysis was performed and inflammatory cytokines and chemokines were tested. Results: A total of 23 MS patients (16 from GS and 7 from GA) and 36 from GC were enrolled in the study. MS patients presented 3-fold higher expression than healthy individuals. Amplicon sequencing revealed that MS groups presented more active loci than GC. Despite the limitations due to variations between sequencing runs, the transcriptome revealed that HERV-K11 was differentially expressed in GS, and 19 HERVs were differentially expressed in GA. New HERV-W loci and other loci that were reported as active loci previously are described here. The genic pathway analysis revealed that individuals from GS presented an inflammatory profile, also confirmed by cytokines dosage, where IL-6, IL-1?, TNF-?, IFN-? were significantly higher in GS. In the other hand, individuals from GA presented a non inflammatory profile with neuronal repair pathways inactivated Conclusions: MS patients present higher level and diversity of HERV-W expression than GC. Regardless the similar profile of HERV-W expression in MS groups, there are differentially expressed HERV-W loci depending of each MS group. MS patients present distinct genic expression profile, where GS presented an inflammatory pathway with vascular permeability, whereas GA presented a neurodegenerative profile

Sérgio Rebello Abreu e seu irmão Eduardo Abreu se notabilizaram como dois dos maiores violonistas em atividade nos anos 60-70. A carreira do duo se interrompeu em aproximadamente 1975 e Sérgio Abreu prosseguiu como solista e camerista até 1981. O impacto que eles causaram no meio musical permanece até hoje, mas sua contribuição não foi analisada sistematicamente. Este trabalho, portanto, versa sobre a herança histórica de Sérgio Abreu, que trabalhou por mais tempo com o violão e era o encarregado das transcrições tocadas pelo Duo, através de suas transcrições e gravações. A fim de contextualizar a transcrição no panorama da história do violão, visitamos a história da transcrição no contexto do desenvolvimento do instrumento desde o Renascimento até o Classicismo, a partir de onde detalhamos mais a análise histórica, e deste ao século XX. Esse panorama procura construir o discurso da reabilitação da prática da transcrição como procedimento válido artisticamente, desde que devidamente contextualizado. Procura, no duplo contexto da história das transcrições e da herança histórico-poética, demonstrar em que elementos musicais se encontram as referências poético-musicais que confluem para o trabalho do Duo Abreu, a saber, Miguel Llobet, Emílio Pujol, Andrés Segovia e Monina Távora. A partir de uma análise de algumas de suas transcrições e de suas gravações, tenta-se recompor a inteligibilidade da poética musical na qual se modelaram as interpretações do Duo Abreu, relacionando para isso a idéia de historicidade com o processo de produção musical, da maneira como nos foi compreendida pelas leituras de Pareyson (Os problemas da estética) e Heidegger (A origem da obra de arte). Discute também a relação entre a reflexão acadêmica e a práxis artística, procurando e sugerindo caminhos, através da análise das transcrições e do legado fonográfico de Sérgio e Eduardo Abreu, para uma superação dessa dicotomia e para o pensamento de uma integração entre as esferas de trabalho dessas duas instâncias. / Sérgio Rebello Abreu and his brother Eduardo Abreu became famous as the two greatest guitarists in activity in the 60 and 70s. Their dual career came to an end around 1975 and Sérgio Abreu went on as a soloist and chamberist up until 1998. Their impact on the musical scene has remained to these days but their contribution has not been systematically analysed. This paper is about Sérgio Abreus legacy, which worked more time in music and had the responsibility of transcriptions and the repertoire, through his transcriptions and recordings. In order to contextualize transcription in the framework of the guitars history, we revisit the history of transcription throughout the development of this instrument from the Renaissance to the Classical Era and from then to the twentieth century. This overview tries to construct the speech for the rehabilitation of the practice of transcription as an artistically valid art procedure, granted that it is duly contextualized. In the context of the history of transcriptions, this overview points out the musical elements on which the poetical-musical references of the Abreu Duo are based, that is, Miguel Llobet, Emílio Pujol, Andrés Segovia and Monina Távora. Based on the analysis of some of their transcriptions and recordings, this paper tries to reconstruct the intelligibleness of the musical poetry on which the Abreu Duos interpretations were modeled by relating the idea of historicity to the process of musical production, according to the teachings of Pareyson (Os problemas da estética) and Heidegger (A origem da obra de arte). Through the analysis of Sérgio and Eduardo Abreus transcriptions and phonographic legacy, this paper also discusses the relationship between academic thinking and the art praxis, searching for and suggesting ways to overcome this dichotomy and integrate the work of these two areas.