Streptococcus pneumoniae é o agente causador de diversas doenças, tais como meningite e pneumonia. PspC (Pneumococcal surface protein C) foi descrito como um importante candidato vacinal proteico de ampla cobertura e com baixo custo de produção. Trata-se de um fator de virulência, capaz de ligar-se ao Fator H (FH) e a IgA secretório (sIgA). Como PspC é um antígeno polimórfico, é crucial a avaliação da sua variabilidade. Foi determinado o grupo de PspC de treze linhagens de pneumococo isoladas no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo. Soros contra diferentes grupos de PspC foram produzidos e PspC do grupo 3 (PspC3) foi capaz de induzir anticorpos que reconhecem diferentes grupos de PspC. Foi observada ainda uma pequena redução na ligação de FH e sIgA por anticorpos anti-PspC3 em ensaios in vitro. No entanto, não foi possível observar proteção contra um modelo de colonização da nasofaringe de camundongos através da imunização com PspC3, possivelmente por deficiências no modelo experimental. / Streptococcus pneumoniae is the causative agent of several diseases, such as meningitis and pneumonia. PspC (Pneumococcal surface protein C) has been described as an important vaccine candidate protein as it could provide wide coverage with low cost of production. PspC is a virulence factor capable of binding to Factor H (FH) and secretory IgA (sIgA). PspC is polymorphic antigen, and therefore it is crucial to evaluate its variability. In the present work we have determined the PspC group of 13 pneumococcal isolates obtained at the University Hospital of the University of São Paulo. Antisera against different PspC groups were produced and PspC group 3 (PspC3) was able to induce antibodies that recognized different groups of PspC. Antibodies to PspC3 reduced binding of FH and sIgA to pneumococcus in in vitro assays. However, no protection was observed against a murine model of nasopharyngeal colonization by immunization with PspC3. This was possibly due to deficiencies in the experimental model.

A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. No mundo, aproximadamente 500.000 casos são reportados a cada ano, com 10% de taxa de mortalidade. Atualmente, vacinas contra leptospirose são compostas por células inativadas e são ineficazes em diferentes aspectos. Após analise do genoma, os genes LIC11121, LIC11087, LIC11228 e LIC11084 foram escolhidos para caracterização da imunogenicidade de suas respectivas proteínas. Esses genes foram clonados no vetor de expressão pAE e as proteínas recombinantes foram purificadas. Os resultados sugerem que essas proteínas podem estar localizadas na membrana externa, são imunogênicas, possivelmente expressas durante a infecção e que podem ter envolvimento em mecanismos de evasão do sistema imune e de patogenicidade da bactéria. Além disso, em um de dois experimentos, a proteína rLIC11084 induziu imunidade protetora parcial em hamsters imunizados frente desafio letal. / Leptospirosis is a zoonotic disease caused by pathogenic bacteria of genus Leptospira. In the world, nearly 500,000 cases are reported each year, with 10% of mortality rate. Currently, vaccines against leptospirosis are composed by inactivated cells that are ineffective in many aspects. After genome analysis, the genes LIC11121, LIC11087, LIC11228 e LIC11084 were chosen for immunogenicity characterization of their respective proteins. These genes were cloned in the pAE expression vector and the proteins encoded by LIC11087, LIC11228 and LIC11084 were purified. The results suggest the localization of these proteins in the bacterial outer membrane, are immunogenic, are possibly expressed during infection and may have involvement in mechanisms of immune system evasion and pathogenicity. Moreover, in one of two experiments, the rLIC11084 protein induced partial protective immunity of immunized hamsters against lethal challenge.

Neste trabalho caracterizou-se a família das nucleotídeo pirofosfatases/ fosfodiesterases do parasita S. mansoni visando avaliá-los como antígenos vacinais. O parasita possui quatro proteínas desta família (SmNPP-5a, SmNPP-5b, SmNPP-5c e SmNPP-6), sendo que duas delas possuem maior expressão gênica nos estágios que infectam o homem. Dos anticorpos produzidos, apenas o anti-SmNPP-5a apresentou especificidade para a proteína nativa e utilizando-os demonstrou-se que a SmNPP-5a é uma glicoproteína associada às membranas do tegumento dos vermes adultos. Também se verificou que esses anticorpos inibiram parcialmente a atividade da enzima em parasitas vivos. Assim avaliamos a SmNPP-5a recombinante como antígeno vacinal juntamente com uma apirase (SmATPDase) e com a fosfatase alcalina (SmAP), outras duas nucleotidases presentes no tegumento de parasitas adultos. A SmNPP-5 e a SmNTDPase apresentaram menor imunogenicidade que a SmAP. Porém só verificamos a redução da carga parasitária em animais imunizados com a SmAP e tratados com doses subcurativas de praziquantel. / In this work the family of nucleotide pyrophosphatases/phosphodiesterases (NPP) from S. mansoni was characterized in order to evaluate them as vaccine antigens. The parasite has four proteins of this family (SmNPP-5a, SmNPP-5b, SmNPP-5c and SmNPP-6), whereas two of them present higher gene expression in stages that infect humans. Only anti-SmNPP-5a anitbodies showed specificity for the native protein. We use them to characterize SmNPP-5a as a glycoprotein associated with tegument membranes from adult worms. It was also found that these antibodies were able to partially inhibit the activity of the enzyme in live parasites. Thus we evaluated SmNPP-5a as recombinant vaccine antigen together with an apyrase (SmATPDase) and alkaline phosphatase (SmAP), two other nucleotidases involved in nucleotide metabolism and present in the tegument of adult parasites. SmNTDPase and SmNPP-5 were less immunogenic than SmAP. However, we only verified the reduction of parasite burden in mice immunized with SmAP, when the animals also received a subcurative treatment with praziquantel.

Estudos epidemiológicos têm indicado que a vacinação com BCG pode induzir uma resposta imune protetora que está além daquela obtida contra tuberculose. Esta vacina está associada à indução de resposta imune Th1, aumento de anticorpos a antígenos não relacionados, menos atopia, menor anergia e redução da mortalidade infantil. No entanto, os mecanismos que sustentam estes efeitos não-específicos permanecem não esclarecidos. Nós investigamos os efeitos de diferentes preparações de BCG (BCG viável e inativados - EFD BCG e HK BCG) sobre o sistema NADPH oxidase, a expressão do TLR-2 e a modulação da produção de citocinas (IL-12p40, TNF-a, IFN-g e IL-10) por leucócitos humanos in vitro. Os resultados demonstram que diferentes preparações de BCG induzem diferentes respostas, tanto em relação à atividade do sistema NADPH oxidase como à modulação da produção de citocinas por leucócitos humanos in vitro. Além disso, demonstramos que em condições inflamatórias como a asma, a modulação da produção de citocinas pelos BCG é diferente daquela observada em sujeitos saudáveis. / Epidemiological studies have indicated that the BCG vaccination may induce a protective immune response that can go beyond what is obtained against tuberculosis. This vaccine is associated to the induction of Th1 immune response, increase antibodies response to unrelated antigen, less atopy, less anergy and a reduction in childhood mortality. Nevertheless, the mechanisms that sustain these non-specific effects remain unclear. We investigated the effects of different BCG preparations (viable BCG and two inactivated BCG EFD BCG and HK BCG) over the NADPH oxidase, the TLR-2 gene expression and over the modulation of the cytokine production (IL-12p40, TNF-a, IFN-g and IL-10) by human leukocytes in vitro. The results demonstrated that different BCG preparations induce different responses, as in respect to the activity of the NADPH oxidase system as in relation to the modulation of cytokine production by human leukocytes in vitro. Beyond this we demonstrated that in inflammatory conditions as asthma, the modulation of cytokine production by the BCG is different of that observed in healthy individuals.

O comportamento humano é influenciado por fatores sociais, culturais, econômicos e políticos, e pode aumentar ou diminuir o risco de infecção pela dengue, dependendo da relação entre a população e o inseto vetor da doença. Devido ao fato de nenhuma vacina 100% eficaz ter sido disponibilizada ainda, a disseminação da dengue só pode ser contida por técnicas de controle da população de vetores (Aedes aegypti e outros) e pela proteção individual dos componentes da população humana. Este estudo testou a hipótese de que as populações afetadas pela dengue provavelmente vão reduzir a intensidade de seus hábitos relacionados ao controle dos vetores na presença de uma vacina parcialmente protetora. Essa hipótese foi testada por uma avaliação em campo, na qual uma amostra de população de área endêmica para a dengue foi entrevistada sobre seus hábitos de controle do vetor na presença de uma vacina teórica. As entrevistas demonstraram que as pessoas que foram informadas sobre uma vacina muito eficiente iriam reduzir seus hábitos de controle do mosquito de maneira significativa mais importante do que a amostra que foi informada sobre a presença de uma vacina pouco eficaz / Human behaviors, which are influenced by social, cultural, economic and political factors, can increase or decrease the risk of dengue infection, depending on the relationship with the insect vector. Because no 100% efficacious vaccine is currently available, the spread of dengue can only be curtailed by controlling vector populations (Aedes aegypti and others) and by protecting individuals. This study tested the hypothesis that dengue-affected populations are likely to relax their vector-control habits if a potentially protective vaccine becomes available. The hypothesis was tested using an empirical field test in which the local population of an endemic area was interviewed about their vector-control habits given the presence of a theoretical vaccine. The interview showed that people who were informed that a very effective vaccine is available would reduce their vector-control habits significantly compared to a group that was informed that the vaccine is not very effective

Apesar de mais de 20 anos de esforço, o design de uma vacina anti-HIV eficaz ainda constitui um enorme desafio. Neste cenário, novas abordagens imunológicas devem ser consideradas. Monócitos de pares discordantes e de indivíduos sadios não expostos ao HIV foram diferenciados in vitro em células dendríticas (DCs), pulsadas com diferentes antígenos do HIV e co-cultivadas com linfócitos autólogos. A resposta imunológica desenvolvida pelos linfócitos T e o perfil fenotípico e funcional das DCs foram avaliados. Todas as DCs utilizadas no co cultivo apresentavam-se maduras e ativadas. Linfócitos estimulados por DC pulsadas com HIV inativado ou proteína p55Gag apresentaram maior ativação, proliferação e produção de IFN<font face=\"Symbol\">&#947 em comparação a linfócitos estimulados por DCs não pulsadas. Entretanto, as células T do grupo controle apresentaram o mesmo padrão de resposta imunológica, com exceção da produção de IFN<font face=\"Symbol\">&#947. Este modelo vacinal pode representar uma alternativa viável e promissora de vacinação terapêutica contra o HIV. / Despite more than 20 years of effort, the design of an effective HIV-1 vaccine remains an enormous challenge. In this scenario, new immunological approaches must be considered. Monocytes from HIV-serodiscordant couples and non HIV exposed controls were differentiated in vitro into dendritic cells (MoDC), pulsed with different virus antigens and cultured with autologous lymphocytes. The T lymphocyte immunological response and the MoDC phenotype and function were determined. MoDCs were shown to be fully matured and activated in all antigen-pulsing protocols. Lymphocytes stimulated by DC pulsed with inactivated HIV or p55Gag protein showed greater activation, proliferation and IFN<font face=\"Symbol\">&#947 production in comparison to those stimulated by non pulsed MoDC. Nonetheless, T cells from non-exposed controls elicited the same response, except for the IFN<font face=\"Symbol\">&#947 production. This MoDC vaccine model may represent a viable and promising alternative of therapeutic vaccination against HIV.

A esquistossomose representa um grande problema de saúde pública em regiões tropicais, negligenciado pelas empresas farmacêuticas. Três genes foram selecionados a partir do transcriptoma do S. mansoni para serem caracterizados molecularmente e testados como vacinas. O gene da Carboxipeptidase apresentou altos níveis de transcrição no estágio de cercária e uma variável expressão protéica nos estágios intra-hospedeiros. A proteína recombinante renaturada apresentou baixa atividade. O gene da Esfingomielinase apresentou alto nível transcricional em ovos, sendo expresso em todos os estágios exceto em esquistossômulos de 7 dias e fêmeas. O gene da Fosfatase Alcalina apresentou elevada transcrição em cercária, mas a expressão da proteína se eleva somente no estágio de esquistossômulo. A imunização de camundongos com cada uma das três proteínas recombinantes expressas em E. coli não levou à redução da carga parasitária após desafio. Estes resultados demonstram que diversas características de um antígeno são necessárias para que este seja um bom candidato vacinal. / Schistosomiasis is a major public health problem in tropical areas and neglected by most of the pharmaceutical companies. Three genes were selected from S. mansoni transcriptome to be molecularly characterized and tested as vaccines. The Carboxypeptidase gene showed high transcription levels in cercariae stage and a variable protein expression in intra-host stages. The refolded recombinant protein showed limited activity. The Sphingomyelinase gene showed the highest level of transcriptional activity in the egg stage and the protein is expressed in all stages but 7-day old schistosomula and females. The Alkaline Phosphatase gene showed a high transcriptional activity in cercariae stage with most of the mRNA being translated into protein as soon as it penetrates its definitive host. Immunization of mice with each of the three proteins did not show reduction in worm burden recovery after challenge. These results demonstrate that several characteristics of an antigen are important for it to be considered a good vaccine candidate.

As células dendríticas (DCs) são consideradas como apresentadoras de antígenos profissionais, iniciando e modulando as respostas imunológicas. O direcionamento de diferentes antígenos para essas células têm sido uma estratégia promissora para a avaliação das respostas imunológicas humoral e celular. Nesse trabalho, o alvo de direcionamento é o subtipo de DCs CD8&#945;+ DEC205+, por apresentarem características importante, como por exemplo, a apresentação cruzada para linfócitos T CD8+ via molécula de MHC II. Os antígenos de escolha para serem direcionados foram diferentes domínios da proteína do envelope (E) do vírus da dengue tipo 2, assim como a proteína na sua forma inteira. Os resultados mostraram que o direcionamento dos diferentes domínios da proteína do envelope viral foi capaz de induzir uma celular robusta nos animais quando comparada com o não direcionamento das mesmas proteínas. Além disso, com o direcionamento para DCs CD8&#945;+ DEC205+ foi possível mapear regiões importantes da proteína E durante a indução da resposta imune. Portanto, os dados obtidos nesse trabalho, sugerem que o direcionamento da proteína do E e dos seus domínios ( EDI/II e EDIII) foi eficiente em induzir resposta imune celular contra o vírus da dengue tipo 2. / Dendritic cells (DCs) are considered to present professional antigens, initiating and modulating immune responses. The targeting of different antigens to these cells has been a promising strategy for the evaluation of humoral and cellular immune responses. Thus, the antigen of interest is directed to the population of DCs desired. In this work, the targeting target is the subtype CD8&#945; + DEC205 + DCs, because they present important characteristics, such as cross-presentation to CD8 + T lymphocytes via the MHC II molecule. The antigens of choice for targeting the CD8&#945; + DEC205 + DCs subtype were different domains of the envelope protein (E) of dengue virus type 2 as well as the protein in its entire form. The results showed that the targeting of the different domains of the viral envelope protein was able to induce a robust cell in the animals when compared to the non-targeting of the same proteins. Furthermore, with the targeting for CD8&#945; + DEC205 + DCs it was possible to map important regions of the E protein during the induction of the immune response. Therefore, the data obtained in this work suggest that the targeting of E protein and its domains (EDI / II and EDIII) was efficient in inducing cellular immune response against dengue virus type 2.

Orientador: Artênio José Isper Garbin / Banca: Renato Moreira Arcieri / Banca: Paula Caetano Araújo / Resumo: A hepatite B e a AIDS são doenças virais de grandes destaques na saúde pública, devido seus elevados índices epidemiológicos, de morbidade e mortalidade. O estigma criado às doenças virais, principalmente pelo vírus da hepatite B (VHB) e vírus da imunodeficiência humana (HIV), repercute de forma negativa e impactante à vida da pessoa infectada, gerando atitudes discriminatórias e preconceituosas, principalmente no acesso aos serviços de saúde. Entre as duas doenças, a hepatite B é a única que tem a imunoprevenção, a qual é realizada através da vacinação. A imunização contra VHB é a principal forma de prevenção da doença, além de ser uma medida de autocuidado que deve ser preconizado no exercício da odontologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o conhecimento e a existência da discriminação, através das atitudes dos graduandos em odontologia, frente à representação da Hepatite B e HIV/AIDS; e verificar a imunização dos graduandos, contra o vírus da hepatite B utilizando o teste imunocromatográfico, para o rastreamento de anticorpos anti-HBs. No primeiro capítulo, o universo amostral do estudo foi composto de todos os alunos de graduação regularmente matriculados (n=525). Foi criado um inquérito semiestruturado e autoaplicável, exclusivamente para este estudo, que versava sobre HIV/AIDS e Hepatite B. No segundo capítulo, foram convidados a participar da pesquisa, todos os alunos que desenvolviam atividades clínicas (n=263). Como instrumento de pesquisa, foi utilizado ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: To assess the knowledge, and the existence of discrimination by the attitudes of academic dentistry when facing HIV / AIDS and hepatitis B. Method ology: This is an exploratory cross - sectional study conducted in a public college of dentistry. The sample consisted of 462 (88%) academics who agreed to participate. In data collection, we used a semi - structured questionnaire, created exclusively for this study, addressing the theme HIV / AIDS and hepatitis B. In the data analysis, we used the chi - square test of proportions, in order to verify the associations between the study variabilities and the academic level. The significance level was 5% (0.050). Re sults: It was found that although 85.5% and 88.7% of the students affirm that they knew or have had some information about AIDS and hepatitis B, only 58.9% and 55.8% respectively, had some knowledge on etiological agents. The statistical differences found in relation to the knowledge of the disease and the success of the etiological agent of AIDS, was evident as in undergraduate students it's been noticed a relevant raise on statistical data but the knowledge of the etiology of hepatitis B was significant at the beginnin g of the course. On the attitudes of students in dental treatment of patients infected with HIV and HBV, 85.3% and 91.8% respectively they said that would accept performing it, however, a considerable part of the students believed that there are difference s in clinical procedures to be followed, with statistical values significant for those who attend the first year of graduation. When asked to participants if they would accept to be treated by a dental surgeon with AIDS or hepatitis B, only 31.4% and 38.7% would consent to do the treatment. Conclusion: We conclude that there are gaps in knowledge of students in relation to AIDS and Hepatitis B. The attitudes of students, compared ... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Os papilomavírus constituem uma extensa família de vírus associados a lesões epiteliotrópicas, assim como acometem o tecido mucoso onde podem causar tumores benignos que podem evoluir para a malignização. A papilomatose bovina é uma doença economicamente relevante, já que há a desvalorização dos animais a serem comercializados devido à aparência e depreciação do couro. Em humanos, a identificação dos tipos de papilomavírus (HPV) envolvidos bem como o relato de co-infecções são bem estabelecidos. Já foram descritos na literatura mais de 200 tipos de HPVs, o que ainda é pouco explorado na área da Medicina Veterinária, em que somente 21 tipos de papilomavírus bovino (BPV) foram caracterizados até o momento. A presente dissertação visou investigar a diversidade de BPV presentes em um papiloma de um bovino oriundo do Estado de Rondônia. A partir do DNA extraído da lesão, foi realizada a rooling circle amplification (RCA) seguida do sequenciamento de última geração (Ilumina MiSeq). O emprego dessas metodologias culminou na identificação do BPV13, que atualmente é bem caracterizado, e de três prováveis novos tipos de BPVs que haviam sido descritos em um único estudo recente. Estes resultados confirmam a presença de co-infecção em lesões de papilomatose bovina e demonstram que estas técnicas possibilitaram a detecção de espécies que não são identificadas pelos métodos convencionais. Este conhecimento sobre a diversidade de BPV servirá de base para o melhor entendimento da biologia do vírus e para a geração de vacinas profiláticas ou terapêuticas eficazes. / Papillomaviruses are an extensive family of viruses associated with epitheliotropic lesions, as well as affecting mucosal tissue where they can cause benign tumors that may progress to malignancy. Bovine papillomatosis is an economically relevant disease, since there is a devaluation of the animals to be marketed due to the appearance and depreciation of the leather. In humans, the identification of the types of papillomavirus (HPV) involved as well as the reporting of co-infections is well established. More than 200 types of HPV have been described in the literature, which is still little explored in the area of Veterinary Medicine, in which only 21 types of bovine papillomavirus (BPV) have been characterized. This study aimed to investigate the diversity of BPV present in a papilloma of a bovine animal from the State of Rondônia. From the DNA extracted from the lesion, the rooling circle amplification (RCA) was performed followed by the last generation sequencing (Ilumina MiSeq). The use of these methodologies culminated in the identification of BPV13, which is currently well characterized, and of three putative new BPVs types that had been described in a single recent study. These results confirm the presence of co-infection in bovine papillomatosis lesions and demonstrate that these techniques enabled the detection of species that are not identified by conventional methods. This knowledge on BPV diversity will serve as a basis for a better understanding of the biology of the virus and for the generation of effective prophylactic or therapeutic vaccines.