Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Adriana Morales / Banca: Renée Laufer Amorim / Resumo: As células-tronco (stem cells) têm um papel fundamental nos processos reparativos e regenerativos da córnea. A exata localização destas é bem conhecida no olho do homem, bem como as suas funções. Entretanto, as mesmas ainda não foram descritas em medicina veterinária, sequer a sua localização em olhos de animais de companhia, tratando-se assim, de assunto que merece novas e originais investigações. Anticorpos monoclonais que reagem superficialmente com as citoqueratinas são empregados para determinar este tipo celular presente nos tecidos, no entanto, existem outros marcadores capazes de reagir antigenicamente com núcleos celulares. Entre eles, o PCNA (antígeno nuclear de proliferação celular) e o Ki-67 (antígeno de proliferação Ki-67) são capazes de marcar células em proliferação. Uma vez que isso nunca fora descrito anteriormente, e considerando-se a necessidade e importância científica em se determinar a localização de células em proliferação na superfície ocular de cães, o presente estudo teve por objetivos: 1) determinar a expressão de células em proliferação pela marcação imunoistoquímica com anticorpos monoclonais anti-PCNA e anti-MIB-1 (anticorpo monoclonal anti-Ki-67), bem como, sua localização na superfície ocular; 2) comparar se há diferença estatística significante na marcação dessas células em diferentes idades. Para tanto, foram utilizados 24 cães jovens e adultos, sadios, dos quais o bulbo ocular esquerdo foi removido, fixado e corado pela H.E. (hematoxilina e eosina), além da imunoistoquímica empregando-se os anticorpos monoclonais anti-PCNA e anti-MIB-1. Concluiu-se que a presença de células em proliferação imunomarcadas pelo PCNA e pelo MIB-1 foi observada em diferentes tecidos da superfície ocular de cães, sendo os tecidos mais marcados: o limbo e o epitélio da córnea...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The stem-cells has a fundamental paper in process of cornea’s tissue repair and regeneration. In man, the well-know localization and functions had been descriebed a long time ago, however the same ones had not yet been descriebed in veterinary medicine, at least your localization in eyes of company animals, what deserve new and original inquiries. Monoclonais antibodies that react superficially with the cytokeratins are used to determine this cell type presence in ocular surface. However, exist another markers capable to react with cell nucleoli, for example, PCNA and MIB-1 are capable to mark proliferation cells. Considering the necessity and scientific importance to determining the localization of proliferation cells on dog’s ocular surface, a time that, never was descriebed previously, the present study had for objectives: 1) determineted the expression of proliferation cells immunohistochemically by PCNA and MIB-1 and its localization in ocular surface; 2) compare if has statistically significant difference in immunoexpression of proliferation cells in different ages. In the study was used 24 healthy dogs, young and adults, witch had the left eyes removed, fixed in buffered formalin and stained with H.E. (hematoxilin and eosin) and with monoclonal antibodies anti-PCNA and anti-MIB-1. The presence of immunostained cells was most observed in corneal ephithelium and limbo. Probably the immunostained cells are stem-cells in dog’s ocular surface, however for such evidence it is necessary ...(Complete abstract click electronic address below) / Mestre

O antígeno leucocitário humano (HLA)-G corresponde a uma molécula não clássica de classe I do complexo principal de histocompatibilidade. Segundo a literatura, tal molécula pode ser expressa em ambos os contextos patológico e fisiológico. Diversos autores têm apresentado evidências acerca do papel do HLA-G na tolerância imune do feto durante a gestação, bem como para o sucesso de alotransplantes. No entanto, até o momento, há poucas informações publicadas a respeito da expressão fisiológica dessa molécula nos diferentes órgãos humanos. Em acréscimo a isso, a participação do HLA-G em eventos fisiológicos é ainda um assunto controverso entre cientistas. Tendo em vista o exposto, o objetivo desse estudo foi investigar a expressão da proteína HLA-G em órgãos fetais durante o progredir da gestação, bem como em órgãos adultos. Trata-se de um estudo descritivo, comparativo, transversal e retrospectivo realizado com base na revisão de prontuários e análise de necropsias/biópsias de diferentes órgãos de fetos e adultos através do método de imunohistoquímica. Os resultados demonstraram a existência de diferença estatística significativa na imunomarcação da proteína HLA-G em glândulas adrenais (p= 0,0003), baço (p= 0,0276), coração (p= 0,0474), fígado (p= 0,0052), pulmões (p = 0,0367), rins (p = 0,0377) e timo (p= 0,0336) na comparação entre o primeiro e segundo trimestre gestacional; em glândulas adrenais (p= 0,0329), baço (p= 0,0095), pâncreas (p= 0,0009) e placenta (p= 0,0285) na comparação entre o segundo e terceiro trimestre gestacional; e no coração (p= 0,0304), fígado (p= 0,0055), pulmões (p= 0,0150) e rins (p= 0,0312) na comparação entre o terceiro trimestre gestacional e a fase adulta. Foi verificado um aumento na expressão do HLA-G fetal a partir do segundo trimestre gestacional em órgãos como glândulas adrenais, coração, fígado, rins, timo e pulmões. Entretanto, isso não foi uma constante, pois em outros, a exemplo do baço, pâncreas e placenta, não observouse essa tendência durante o mesmo período. Durante o terceiro trimestre gestacional e a fase adulta evidenciou-se valores mais elevados para a expressão do HLA-G nos rins, e valores bastante inferiores no fígado. A expressão fisiológica do HLA-G embora positiva em todos os órgãos avaliados, nos três trimestres gestacionais e/ou na fase adulta, apresentou diferenças na intensidade e localização nos diferentes órgãos e períodos. Os achados a partir dessa pesquisa certamente representam uma importante contribuição para um melhor entendimento do mecanismo gestacional, assim como da fisiologia do HLA-G em adultos, sobretudo no que concerne o estabelecimento da tolerância imunológica em transplante de órgãos / Human leukocyte antigen (HLA)-G is a nonclassical class I major histocompatibility complex molecule. According to the literature, this molecule can be expressed in both pathological and physiological contexts. Several authors have presented evidence about the role of HLA-G in the immune tolerance of the fetus during pregnancy, as well as for the success of allotransplants. However, until now, there are very few published data regarding the physiological expression of this molecule in different human organs. Moreover, the role of HLA-G in physiological events is still a controversial subject among scientists. In view of the above, the objective of this study was to investigate the expression of HLA-G protein in fetal organs during the progression of gestation, as well as in adult organs. This was a descriptive, comparative, cross-sectional and retrospective study based on the review of medical records and immunohistochemical analysis of different organs of fetuses and adult people. The results showed a statistically significant difference in the immunostaining of HLA-G protein in adrenal glands (p = 0.0003), spleen (p = 0.0276), heart (p = 0.0474), liver (p = 0.0367), kidneys (p = 0.0377) and thymus (p = 0.0336) in the comparison between the first and second gestational trimesters; in adrenal glands (p = 0.0329), spleen (p = 0.0095), pancreas (p = 0.0009) and placenta (p = 0.0285) in the comparison between the second and third gestational trimesters; and in the heart (p = 0.0304), liver (p = 0.0055), lungs (p = 0.0150) and kidneys (p = 0.0312) in the comparison between the third gestational trimester and the adult phase. An increase of fetal HLA-G expression was observed from the second gestational trimester in organs such as adrenal glands, heart, liver, kidneys, thymus and lungs. However, this was not a constant finding, since in other organs including spleen, pancreas and placenta, this trend was not observed during the same period. During the third gestational trimester and the adult phase, higher values for HLA-G expression in the kidneys and much lower values in the liver were observed. Although the physiological expression of HLA-G has been positive in all evaluated organs (in the three gestational trimesters and/or in adulthood), it showed differences in its intensity and location in the different organs and periods. The findings from this research certainly represent an important contribution to a better understanding of the gestational mechanism, as well as on the physiology of HLA-G in adults, especially regarding the establishment of immunological tolerance in organ transplantation

A Leishmaniose visceral é uma doença parasitária crônica em homens e cães, causada por protozoários da espécie L. (Leishmania) chagasi. O diagnóstico parasitológico é confirmado pelo achado do agente em aspirados de medula óssea, linfonodo, baço e fígado, enquanto que a sorologia IgG especifica é usada em geral para estudos epidemiológicos, apesar dos altos níveis séricos de anticorpos IgG anti-Leishmania. Existem relatos anedóticos de resultados sorológicos negativos em doença ativa, atribuído à formação de imunocomplexos. Dado que imunocomplexos podem ser dissociados por tratamento ácido, nós buscamos a padronização de um teste simples de dissociação ácida dos imunocomplexos de amostras de soro, por tratamento ácido e neutralização em poços adsorvidos com antígenos de Leishmania, seguida de ELISA (ELISA dissociativo). A confirmação da presença de antígenos foi realizada pela detecção após adsorção ácida por DOT-ELISA, usando soro de coelho hiperimune anti-Leishmania. Amostras de hamsteres infectados experimentalmente com L. (L.) chagasi mostraram a presença e interferência de imunocomplexos na sorologia principalmente nas fases iniciais da infecção, por ELISA dissociativo e DOT-ELISA. Em amostras maiores de áreas endêmicas, o ELISA dissociativo aumentou a soropositividade em 10% em amostras de cães negativas e 3,5% de amostras humanas negativas, com confirmação por DOT-ELISA. Os resultados mostram que este teste poderia ser usado no diagnóstico da LV, como abordagem alternativa para a identificação sorológica de casos assintomáticos e para indicação de métodos parasitológicos invasivos confirmatórios. / Visceral leishmaniasis, caused by Leishmania (Leishmania) chagasi, is a chronic parasitic disease of humans and dogs. Confirmation of the protozoal agent in bone marrow, lymph node or spleen aspirate is diagnostic, while specific-IgG serology is used mainly for epidemiology despite the general presence of high levels of serum immunoglobulins. Anecdotal reports of false-negative serology in active disease cases are known and are ascribed to the formation of immune complexes. Because dissociation of immune complexes can be accomplished by acid treatment, we devised a simple, routine enzyme immunoassay (ELISA) for the dissociation of immune complexes in serum samples using acid treatment and neutralization in wells adsorbed with Leishmania antigen (dELISA). Confirmatory acid DOT-ELISA was also developed for antigen detection by anti-Leishmania rabbit antiserum. In experimental L. (L.) chagasi hamster models, immune complexes interfered with ELISA mostly in the early stages of infection, according to both dELISA and antigen DOT-ELISA results. In larger samples from endemic areas, dELISA increased seropositivity by 10% in negative dog samples (7/70) and 3.5% in negative human samples (3/85), showing that dELISA could be used in the serodiagnosis of visceral leishmaniasis. Moreover, dELISA could be used as an alternative approach to screening asymptomatic visceral leishmaniasis patients, instead of invasive confirmatory testing.

A neurocisticercose (NC) é uma doença provocada por larvas de Taenia solium (Tso) no sistema nervoso central. Seu diagnóstico fundamenta-se em critérios clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. A utilização de antígenos parasitários no imunodiagnóstico apresenta desvantagens como: necessidade de animais, ausência de homogeneidade entre lotes, baixo rendimento, e contaminação com proteínas suínas. Assim, os antígenos recombinantes podem otimizar o imunodiagnóstico da NC, pois são reagentes simples e reprodutíveis, sem requerer animais. Este estudo teve como objetivo a obtenção, caracterização e análise da reatividade de proteína recombinante baseada em antígenos de líquido vesicular de Taenia crassiceps (Tcra). Assim, o cDNA foi obtido por amplificação a partir de RNAm de cisticercos de Tcra. A proteína recombinante Tc14 foi produzida em Escherichia coli (DE3) BL21 utilizando-se o vetor de expressão pET-22b e purificada por cromatografia de afinidade. A caracterização antigênica deu-se por Imunoblot (IB) utilizando anticorpos monoclonais (AcMo). Houve reatividade com todos os AcMo utilizados (AcMo anti-antígeno de excreção/secreção de Tcra, AcMo anti-líquido vesicular de Tcra, AcMo antilíquido vesicular de Tso e AcMo anti-antígeno total de Tso), exceto com o AcMo anti-antígeno de escólex de Tso. Utilizando-se 22 amostras de soro e 19 de líquor (LCR) de pacientes com NC, 48 soros e 28 LCR do grupo controle negativo (GCN) e 17 soros de hidatidose do grupo outras parasitoses (OP) em Imunoblot foi observada reatividade na região de 14kDa, correspondente a Tc14, em todas as amostras NC, mas não nos GCN e OP. Em ELISA com Tc14 obteve-se sensibilidade (S) e especificidade (E) de 100% com LCR (29 amostras de NC e 35 do GCN) e S de 95,1% e E de 100% com soro (41 amostras de NC, 52 do GCN). Dentre 51 soros de OP, mostraram-se reagentes um de hidatidose e outro de estrongiloidíase. A análise comparativa entre diferentes antígenos e testes sorológicos apresentou índice de positividade de 100% em IB utilizando os antígenos Tc14 ou LLG (antígeno purificado de Tso com lentil-lectina); já em ELISA, os índices foram de 83,4% para Tc14 e 91,6% para 18/14 (antígeno purificado de líquido vesicular de Tcra com AcMo). Em ensaios de linfoproliferação a porcentagem de respondedores no grupo NC foi de 16,6% (com 0,05 e 0,6 µg de Tc14/poço), 50% (com 0,4 µg de Tc14/poço), 44,4% (com 1,0 µg de Tc14/poço) e 20% (com 2,0 µg de Tc14/poço). Não houve proliferação no GCN. A dosagem de citocinas em sobrenadante de cultura apresentou reatividade diferenciada entre o GCN e NC para IL-10, sendo uma amostra do GCN reagente e duas amostras de NC não reagentes. Não foi possível detectar IFN-γ. Em ELISA para IgG total 91,7% dos plasmas do grupo NC apresentaram reatividade, sendo a positividade para os isótipos IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 respectivamente, de 75; 33,3; 50 e 25%. O antígeno recombinante mostrou-se como ferramenta promissora para imunoensaios na NC, abrindo nova perspectiva envolvendo estudos a serem realizados sobre diferentes sistemas de expressão e antigenicidade frente a um número maior de amostras. / The neurocisticercosis (NC) disease is caused by the presence of Taenia solium (Tso) larvae in the central nervous system. Its diagnosis is based on clinical criteria, epidemiological studies and laboratorial exams. Nevertheless, the use of parasite antigenic extracts into the immunodiagnosis presents some disadvantages: it requires animals, lacks of homogeneity between lots, low yield and may become contaminated with swine proteins. Consequently, the utilization of recombinant antigens could optimize the immunodiagnostic of NC, as they are simple and reproducible reagents that do not require animals. This study aimed the capture, characterization and reactivity analysis of the recombinant protein based on antigens of the vesicular fluid of Taenia crassiceps (Tcra). In order to do so, the cDNA was obtained through the amplification deriving from RNAm of cysticerci of Tcra. The recombinant protein Tc14 was produced in Escherichia coli (DE3) BL21 using the expression vector pET-22b and purified by affinity chromatography (nickel resin). The antigenic characterization was performed by immunoblotting (IB) using monoclonal antibodies (MoAb). The recombinant protein presented reactivity with all the MoAb used (Anti-secretion/excretion antigens from Tcra MoAb, anti-vesicular fluid from Tcra MoAb, anti-vesicular fluid from Tso MoAb and anti- total antigen from Tso MoAb), except with the anti-antigen from Tso scolex MoAb. The immunoblot was performed using 22 serum samples and 19 cerebrospinal fluid (CSF) from patients with NC, 48 serum and 28 CSF from the negative control group (GCN) and 17 hydatidosis serum from other parasitosis\' group (OP). It showed reactivity in the 14kDa region, correlated to Tc14, in all NC samples, but not presented on GCN and OP. In ELISA with Tc14, the sensibility (S) and specificity (E) of 100% was obtained with CSF (29 NC samples and 35 GCN samples) and 95.1% of S and 100% of E with serum (41 NC samples, 52 GCN samples). Among 51 OP serums, one from hydatidosis and one from strongyloidiasis demonstrated reactivity. The comparative analysis amongst different antigens and serological tests demonstrated positivity of 100% in IB when using the Tc14 antigens or LLG (purified antigen of Tso with lentil lectin). In ELISA, the positivity indicated was of 83.4% for Tc14 and 91.6% for 18/14 (vesicular fluid purified antigen with MoAb from Tcra). In lymphoproliferation tests, the percentage of responders in NC group was of 16.6% (with .0.5 and 6 µg of Tc14/well), 50% (with 0.4 µg of Tc14/well). No proliferation occurred in GCN. The dosage of cytokines in culture supernatants presented different reactivity amongst GCN and NC for IL-10, as one sample of GCN reacted and two NC samples did not. It was not possible to detect IFN-γ. In ELISA for total lgG, 91.7 % of plasmas from NC group presented reactivity, with positivity for the isotypes lgG1, lgG2, lgG3 and lgG4, 75 %, 33.3 %, 50 % and 25 %, respectively. The recombinant antigen prevails as a promising tool for immunoassays in NC, opening a new perspective involving studies to be performed concerning different expression and antigenicity ahead of a larger number of samples.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-05-17T21:14:35Z No. of bitstreams: 1 AnaGiseliaNascimento.pdf: 3146962 bytes, checksum: 2e04b37893415a3b55c8a3bcd2cf19b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T21:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaGiseliaNascimento.pdf: 3146962 bytes, checksum: 2e04b37893415a3b55c8a3bcd2cf19b9 (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / Pituitary adenomas represent 10-15% of all intracranial tumors with an incidence of 1/1000 of the population. They are considered benign and mostly slow growth. Despite this, about 35% may present with invasion of parasellar compartments and a significant number have a clinically aggressive behavior with early recurrence during follow-up, despite surgery and other therapeutic approaches. Such aggressive tumors should be identified early in order to provide a more incisive treatment and / or a strict clinical and radiological follow-up, with prompt djunctive therapy institution in persistence or recurrence of these tumors. Despite these considerations, to date, no clinical, radiological and histological marker predicting such behavior has been established. This study aims to reassess the role of Ki-67 through an improved immunohistochemical technique for the expression of these antigens and correlate it to demographic and clinicopathological parameters of pituitary adenomas. This is a crosssectional study conducted from November 2015 to August 2016 were used pituitary adenoma tissue from 62 patients from the Endocrinology Service of the University of the Federal University of Maranhão Hospital. For evaluation of adenomas of medical records data were analyzed, namely: clinical and serum levels of related hormones as well as magnetic resonance imaging of the pituitary gland. To analyze the expression of Ki-67 was performed immunohistochemical technique using the anti-human monoclonal primary antibody, expressed by the percentage of labeled nuclei in the form of labeling index Ki-67. In our sample of 62 patients, 31 patients were female (50%) with a mean age at surgery of 46.2 (± 13.3) years, ranging from 16 to 73 years. Ki-67 index, as well as their median had to be higher in females, with p = 0.04 and p = 0.02, respectively. There was no predominance of expression and Ki-67 index with respect to age and diagnosis. Adenomas giant had higher median Ki-67 with respect to non giants with p = 0.04, but there was no correlation of Ki-67 with tumor invasion. The pituitary adenomas previously submitted to specific pharmacotherapy showed expression of Ki-67 lower, however, only when the somatotropinomas were analyzed separately, there was statistically significant with p = .0,03. The Ki-67 antigen, a marker of tumor proliferative activity, play an important role in pituitary adenomas. In conjunction with other biomarkers such as tumor invasion, large volume adenoma the initial presentation of patients and / or rapid tumor growth rate documentation can lead to identification of patients which show an aggressive clinical behavior, in order to conduct a multimodal therapeutic approach more effective or more strict postoperative follow-up. / Adenomas hipofisários representam de 10-15% de todas as neoplasias intracranianas com prevalência de um caso para 1000 habitantes. Apresentam grande variação de comportamento clínico, sendo a maioria de crescimento indolente, enquanto cerca de 35% podem ser invasivos e um pequeno grupo francamente agressivo. Até o presente momento, não há um biomarcador que possa predizer seu comportamento de forma confiável, o que possibilitaria uma terapia adjuvante mais agressiva ou um seguimento clínico mais rigoroso. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão e o índice do marcador imuno-histoquímico de proliferação celular, antígeno Ki-67 em adenomas hipofisários e correlacioná-lo a parâmetros demográficos e clínico-patológicos, visando definir sua relevância prognóstica. Trata-se de um estudo transversal realizado no período de novembro de 2015 a agosto de 2016. Foram utilizados tecidos de adenomas hipofisários de 62 pacientes oriundos do Serviço de Endocrinologia do Hospital Universitário da Universidade Federal do Maranhão. Para avaliação dos adenomas foram analisados dados dos prontuários, a saber: avaliação clínica e dosagens séricas de hormônios relacionados, assim como ressonância nuclear magnética de hipófise. Para analisar a expressão do Ki-67, foi realizada a técnica de imuno-histoquimica utilizando-se o anticorpo primário monoclonal anti-humano expressado pela percentagem de núcleos imunopositivos sob forma de índice de marcação de Ki-67. Na amostra de 62 pacientes, 31 pacientes foram do sexo feminino (50%) com a média de idade à época da cirurgia de 46,2 (±13,3) anos, variando de 16 a 73 anos. O antígeno Ki-67 apresentou expressão em 37 (59,7%) pacientes, variando o seu índice de 0,1% a 2,4%. O índice Ki-67, assim como a sua mediana apresentaram-se mais elevados no sexo feminino com p=0,04 e p=0,02, respectivamente. Não houve predominância da expressão e do índice de Ki-67 com relação a idade e diagnóstico. Adenomas gigantes apresentaram mediana de Ki-67 mais elevada com relação aos não gigantes com valor de p=0,04, mas não houve qualquer correlação de Ki-67 com a invasão tumoral. Os adenomas hipofisários previamente submetidos à farmacoterapia específica apresentaram expressão de Ki-67 mais baixos, no entanto, somente quando os somatotropinomas foram analisados de forma isolada, houve significância estatística com p=0,03. O antígeno Ki-67, marcador de atividade proliferativa tumoral, tem papel relevante em adenomas hipofisários. Em conjunto com outros biomarcadores, como invasão tumoral, grande volume do adenoma à apresentação inicial dos pacientes e/ou documentação de rápida velocidade de crescimento do tumor, pode levar a identificação de pacientes que demonstrem um comportamento clínico agressivo, de forma a conduzir a uma abordagem terapêutica multimodal mais efetiva ou a um seguimento pós operatório mais estrito.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-07-21T16:25:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_SistemaLiberacaoControlada.pdf: 1661147 bytes, checksum: baf9d5ff827500cf82f2018daaf113c2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-09-08T14:37:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_SistemaLiberacaoControlada.pdf: 1661147 bytes, checksum: baf9d5ff827500cf82f2018daaf113c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-08T14:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_SistemaLiberacaoControlada.pdf: 1661147 bytes, checksum: baf9d5ff827500cf82f2018daaf113c2 (MD5) Previous issue date: 2012 / A utilização do antígeno Vi em vacinas é bastante promissor devido a este proporcionar um alto nível de imunidade em vacinas parenterais. A necessidade pela busca por alternativas para administração de vacinas levou à aplicação da tecnologia da liberação controlada de fármacos no campo da imunização. Nestes sistemas de liberação controlada, as doses administradas são diminuídas, porém o período de imunidade aumenta, já que prolonga a quantidade liberada do antígeno ao longo do tempo. O presente estudo propôs desenvolver e caracterizar um sistema de liberação controlada contendo antígeno Vi, utilizando como polímero veiculador a quitosana. As técnicas de RMN H-1 e espectroscopia de infravermelho mostraram que o método de extração do antígeno Vi empregado foi satisfatório qualitativamente. A caracterização da quitosana e das nanopartículas através de ensaios de análise térmica mostrou maior estabilidade das partículas em relação à quitosana, além do aumento da temperatura de degradação nas nanopartículas à medida que aumenta a concentração da quitosana. Em relação ao potencial zeta todas as nanopartículas tiveram cargas positivas em pH 7,2, enquanto que, no tamanho, as partículas foram menores à medida que aumentou a quantidade de quitosana no sistema. Na microscopia eletrônica de transmissão, as partículas mostraram-se morfologicamente homogêneas e com formato esférico. Na cinética de adsorção o antígeno, contido em solução, sofreu uma adsorção de 55% nas partículas de quitosana. Com isso, observou-se que é possível criar um sistema de liberação controlada envolvendo nanopartículas de quitosana e antígeno Vi de Salmonella enterica sorotipo Typhi. / The use of the Vi antigen in vaccines is very promising because this provides a high level of immunity in parenteral vaccines. The need for the search for alternatives for administration of vaccines has led to the application of technology controlled release of drugs in the field of immunization. In such controlled delivery systems, the doses are decreased, but the period of immunity increases, extending the amount of antigen released over time. This study aimed to develop and characterize a controlled delivery system containing Vi antigen, using as disseminator polymer chitosan. The techniques of H-1 NMR and infrared spectroscopy showed that the method of extracting the Vi antigen used was qualitatively satisfactory. The characterization of chitosan and nanoparticles by tests thermal analysis showed greater stability of the particles in relation to chitosan, besides increasing the degradation temperature of the nanoparticles increases as the concentration of chitosan. Regarding the zeta potential nanoparticles were all positive charges at pH7.2, while the particles were smaller size as they increased the amount of chitosan in the system. In transmission electron microscopy showed the particles are morphologically homogeneous and spherical. In the adsorption kinetics of antigen contained in solution, suffered a 55% adsorption of the particles of chitosan. With this, we observed that it is possible to create a controlled delivery system involving nanoparticles of chitosan and Vi antigen of Salmonella enterica serotype Typhi.

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:44:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Objetivo: Relacionar o nível sérico e o conteúdo tecidual do antígeno carcinoembrionário (CEA) no carcinoma colorretal, correlacionado-os aos aspectos morfológicos e ao estadiamento da neoplasia. Método: Operou-se 45 doentes com carcinoma colorretal extirpável. Determinou-se o nível sérico do CEA, a distribuição e o conteúdo do CEA por estudo imunoistoquímico e por análise de imagem assistida por computador. Classificou-se a imunocoloração de acordo com o padrão de distribuição tecidual, intensidade e capacidade celular de polarização do CEA. Os carcinomas colorretais foram agrupados segundo características morfofuncionais. Analisaram-se as seguintes variáveis: tabagismo, localização e dimensão da lesão colorretal primária, metástase à distância, invasão angioneural, infiltração parietal, comprometimento linfonodal, tipo histológico, grau de diferenciação celular, distribuição, conteúdo tecidual e capacidade celular de polarização do CEA. As lesões foram estadiadas pelas classificações de Dukes, Astler-Coller e TNM. Resultados: O nível sérico do CEA foi mais elevado nos carcinomas colorretais com invasão angiolinfática (p=0,009), na localização citoplasmática do antígeno (p=0,02), nos estádios avançados nas classificações TNM (p=0,003), de Dukes (p=0,03) e de Astler-Coller (p=0,008), com graus progressivos de perda morfofuncional (p=0,04) e da capacidade celular de polarização do CEA (p=0,03), nos diferentes graus de diferenciação celular quando relacionado ao padrão de distribuição celular do CEA (p=0,05) e à capacidade celular de polarização do CEA em carcinomas em estádios iniciais da classificação TNM (p=0,01). A combinação de múltiplas variáveis foi responsável pela elevação dos níveis séricos do CEA, em especial a dimensão da lesão primária, presença de metástase à distância e invasão angioneural (p=0,0001), enquanto nas lesões iniciais, a invasão angioneural e a perda da capacidade celular de polarização do antígeno foram os principais preditores dos níveis séricos do CEA (p=0,003). Conclusões: O conteúdo tecidual do CEA, quantificado por análise de imagem assistida por computador, relacionou-se ao nível sérico do antígeno, ao menor grau de diferenciação celular, e à perda da capacidade celular de polarização do CEA. O nível sérico do CEA elevou-se com a perda da característica morfofuncional, da capacidade celular de polarização do CEA e da diferenciação celular, com a maior dimensão, presença de invasão angioneural, distribuição citoplasmática do antígeno e com os estádios mais avançados das classificações TNM, Dukes e Astler-Coller no carcinoma colorretal. / Objective: To determine the serum carcinoembryonic antigen (CEA) levels and tissue CEA content in colorectal carcinoma cases, and to correlate these with morphological characteristics and staging of the neoplasia. Method: Forty-five patients with resectable colorectal cancer underwent surgical treatment. Serum CEA levels, distribution and tissue content were determined by immunohistochemical study and computer-assisted image analysis. Immunostaining was classified in accordance with the tissue CEA distribution pattern, intensity and polarization capacity of cells. The colorectal carcinomas were grouped according to morphofunctional characteristics. The following variables were analyzed: smoking, location and size of the primary colorectal lesion, distant metastasis, angioneural invasion, parietal infiltration, lymph node involvement, histological type, degree of cell differentiation, CEA distribution, tissue CEA content and CEA polarization capacity of cells. The lesions were staged using the Dukes, AstlerColler and TNM classifications. Results: The serum CEA levels were higher in colorectal carcinomas with angiolymphatic invasion (p=0.009); with cytoplasmic location of the antigen (p=0.02); with more advanced staging via the TNM (p=0.003), Dukes (p=0.03) and Astler-Coller (p=0.008) classifications; with progressive degrees of morphofunctional loss (p=0.04) and CEA polarization capacity of cells (p=0.03); at different degrees of cell differentiation in relation to the CEA distribution pattern in cells (p=0.05); and with regard to CEA polarization capacity of cells in carcinomas at the initial stages of the TNM classification (p=0.01). This combination of multiple variables was responsible for raising the serum CEA levels, particularly the size of the primary lesion, presence of distant metastasis and angioneural invasion (p=0.0001), while in the initial lesions, angioneural invasion and loss of CEA polarization capacity of cells were the principal predictors for the serum CEA levels (p=0.003). Conclusions: The tissue CEA content, as quantified by computer-assisted image analysis, was related to the serum CEA level, lower degree of cell differentiation and loss of CEA polarization capacity of cells. The serum CEA levels increased with the loss of morphofunctional characteristics, CEA polarization capacity of cells, cell differentiation, greater size, presence of angioneural invasion, cytoplasmic distribution of the antigen and more advanced stages in the TNM, Dukes and Astler-Coller classifications of colorectal carcinoma cases. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

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