Verificou-se que microssomos de fígado apresentam uma atividade azo-redutásica completamente dependente de NADPH, usando DAB como substrato. Ao contrário de outros sistemas já descritos, a atividade azo-redutásica não pode ser identificada com a NADPH-citocromo c redutase, embora nossos resultados indiquem que esta enzima participa da reação. Não se pode excluir definitivamente a participação do citocromo b5 apesar de uma série de observações afastando essa possibilidade. Verificou-se que a atividade azo-redutásica pode ser induzida por tratamento com 3-MC, paralelamente à indução do citocromo P-450 tipo II. Isto sugere fortemente a participação desse citocromo na reação apesar desta não ser inibida por CO. O citocromo P-450 induzido por tratamento com 3-MC era funcionalmente ativo. A atividade azo-redutásica foi inibida especificamente pelo tratamento oral comoDAB, possibilitando a formulação de uma hipótese sobre a ação carcinogênica deste composto. Uma série de resultados mostra que a azo-redutase estudada é altamente específica podendo ser inibida por KCN e por mersalil. Face aos fatos expostos acima, as perspectivas do sistema parecem muito interessantes. A possibilidade do uso de novos métodos de fracionamento dos microssomos pode levar à resolução do sistema da azo-redutase. As semelhanças com a dessaturação de ácidos graxos, aliadas às indicações da existência de um novo tipo de citocromo P-450 que se combina com KCN, permitem descortinar maior amplitude para os limites do sistema da azo-redutase. Enfim, trata-se de uma reação de redução de um composto exógeno, com características até agora não relatadas, envolvendo processos biológicos de importância e cujo estudo terá prosseguimento. / Not available

Foi realizada uma análise quantitativa sistemática da literatura para verificar a acurácia do biomarcador ProEx C em pacientes com ASC-US, ASCH e SIL. Metodologia: A pesquisa foi realizada no MEDLINE (PubMed e OVID), EMBASE, LILACS, IBECS, BIOSIS, Web of Science, SCOPUS, desde 1966 até Novembro de 2011. Esta revisão esteve centrada em estudos que cumpriram as três condições para a seleção do estudo, que incluem teste de Papanicolaou, teste de triagem ProEx C e histopatologia como o teste de referência. Resultados: Cinco estudos, incluindo 713 mulheres, foram analisados. Das biopsias positivas, 83% (355/429) foram positivas para ProEx C, enquanto 14% (41/284) das biópsias negativas foram positivas para ProEx C. A sensibilidade combinada foi de 83% (95% IC, 79-87) e especificidade foi de 85% (95% IC, 80-89) usando o soaftware Meta-Disc. Para lesão cervical vs biópsia positiva ou negativa, a área sob a curva (AUC) foi de 0,90 com valor do ponto Q * de 0,84. Conclusão: nossos dados concordam com a hipótese de que ProEx C representa um evento precoce na carcinogênese cervical e que poderiam estar associados com a iniciação e progressão de lesões cervicais e, se expressados nos exames estudados podem revelar maior acurácia diagnóstica destes exames. / Undertook a quantitative systematic review of the literature to ascertain the accuracy of the biomarker ProEx C in patients with ASC-US, ASC-H and SIL. Methods: A comprehensive search of the MEDLINE (PubMed and OVID interface), EMBASE, LILACS, IBECS, BIOSIS, Web of Science, SCOPUS, index from 1966 to November 2011. This review focused on studies that fulfill the three mandatory conditions for study selection that include Pap Test, triage testing ProEx C and histopathology like the reference test. Results: Five studies, including 713 women, were analyzed. 83% (355/429) of positive biopsy were positive for ProEx C activity, while 14% (41/284) of the negative biopsy were positive for ProEx C activity. Pooled sensitivity was 83% (95% IC, 79 to 87) and specificity was 85% (95% IC, 80-89) using software Meta-Disc. For cervical lesion vs positive or negative biopsy, the area under the curve (AUC) was 0.90 with Q* point value of 0.84. Conclusion: our data agree with the hypothesis that ProEx C represents an early event in cervical carcinogenesis that could be associated with the initiation and progression of cervical lesions and is expressed in the studied tests may reveal greater diagnostic accuracy of these tests.

Orientador: Carla Beatriz Collares Buzato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T09:31:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_CarolinaPradodeFranca_D.pdf: 11012408 bytes, checksum: 13da099b8bd43a93f7783c961a08d48f (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O objetivo central dessa tese foi estudar o papel das junções comunicantes (GJs) no processo de maturação da célula B e na patogênese da diabetes tipo 2. Para isso, foram utilizados dois modelos animais. No modelo in vivo de maturação da célula B e do processo secretório de insulina foram empregados ratos em vários estágios do desenvolvimento (fetal, neonatal, jovem e adulto). No modelo de diabetes tipo 2 foram utilizados camundongos C57BL/6, wild-type e knockout para o gene do receptor de LDL (LDLR -/-), alimentados com dieta hiperlipídica. No primeiro modelo de estudo, observamos, por técnicas morfológicas (imunocitoquímica) e de biologia molecular (Western Blot, RT-PCR semi-quantitativo e qPCR) que a expressão gênica e protéica de Cx36 e Cx43, se altera durante o desenvolvimento. Os dados de microinjeção intracelular de traçadores confirmam tais resultados que sugerem que ilhotas de ratos recém-nascidos apresentam menor número de canais intercelulares associados à membrana e, conseqüentemente, um menor acoplamento intercelular mediado pelas junções comunicantes em comparação às ilhotas de adultos. Esses resultados estão de acordo com a observação de que a célula B durante o período perinatal mostra uma menor resposta secretória à glicose e sugerem a participação da comunicação intercelular mediada pelas junções comunicantes no processo de maturação da célula B. No caso do modelo in vivo de diabetes tipo 2, o estudo iniciou com a caracterização do quadro metabólico e de aspectos da morfologia e morfometria do pâncreas endócrino de animais submetidos ao tratamento com a dieta hiperlipídica. Os dados obtidos demonstram que os animais submetidos a essa dieta por um curto período de tempo já apresentam alterações metabólicas típicas da fase inicial da diabetes (hiperglicemia moderada, hiperinsulinemia, intolerância á glicose e resistência à insulina), bem como modificações de parâmetros da morfometria do pâncreas endócrino. Posteriormente, foi analisada a expressão e localização celular das proteínas juncionais (Cx36, Cx43 e ZO-1) e o aspecto funcional dos canais formados pela GJ, através da microinjeção de marcadores intracelulares. Observamos que os animais tratados com dieta hiperlipídica apresentam tendência de diminuição de expressão de Cx36 acompanhada por alteração no padrão de marcação para essa proteína. Esses dados estão de acordo os de microinjeção que revelam uma pequena diminuição do grau de acoplamento celular após o tratamento com a dieta hiperlipídica. As alterações observadas para Cx36 foram acompanhadas por modificações no grau de expressão e de localização celular de ZO-1, proteína envolvida em processos como a organização dos canais intercelulares da GJ na membrana e no turnover de vários subtipos de conexina. Esses resultados indicam que a comunicação intercelular, particularmente a mediada por canais formados pela Cx36 parecem desempenhar importante papel na patogênese da diabetes tipo 2, desde sua fase inicial. / Abstract: Intercellular communication and adhesion among pancreatic B-cells are crucial for a proper insulin biosynthesis and secretion. The aim of this work was to investigate the role of gap junction (GJ) mediated-intercellular communication in the processes of maturation and dysfunction of B-cells. It is well known that fetal and neonatal rat pancreatic B-cells exhibit a reduced insulin secretory response to glucose and to other secretagogues as compared to adult ones. Based on this finding, we have used Wistar rats at different stages of development (fetal, neonatal, young and adult) as a model of B-cell maturation. As a model of type 2 diabetes, C57BL/6 mice (wild-type) and LDL receptor-deficient mice were fed a high fat diet up to 60 days. The cellular expression of GJ connexin (Cx) subtypes found in the endocrine pancreas (Cx36, Cx43 and Cx45) was assessed by immunohistochemistry, Western Blot, quantitative and semi-quantitative RTPCR. Our results indicate that young and adult endocrine pancreas express relatively high levels of Cx36 on B-cells in comparison with the other groups. Meanwhile, fetal and neonatal islets express predominantly Cx43 on non B-cells located at the islet periphery. Islet microinjection of GJ tracers revealed that neonatal B-cells display lower intercellular exchange of the cationic molecule Ethidium Bromide (EB) in comparison with the adult ones, which is in accordance with their differences in Cx36 expression. No significant differences were found in expression and localization of Cx45 among all animal groups. Regarding the animal type 2 diabetic model, a metabolic characterization showed that the high-fat diet for 60 days induces glucose intolerance, insulin resistance, hyperinsulinemia and moderate hyperglycemia in both mice groups (LDLr knockout and wild-type groups). High-fat fed mice showed a subtle decrease in Cx36 islet expression and in the B-cell intercellular exchange of EB in comparison with the chow-fed group (control). We also observed an alteration in the pattern of Cx36 labeling in immunohistochemistry assays. The high-fat diet induced a redistribution of Cx36 within the islets from a disorganized pattern (more commonly seen in control mice) to a sub domain-pattern where Cx36 plaques demarcate groups of B-cells. These changes in Cx36 islet distribution observed in high-fat fed mice were accompanied by a similar pattern of immunolabeling for ZO-1, but an increase in its islet expression, a tight junctional protein that seem to be involved in Cx turnover and membrane organization of Cx-made channels. Taken all together, these findings suggest that cell-cell coupling mediated by GJ may play an important role in the pancreatic B-cell maturation observed during endocrine pancreas development as well as in the early stages of type 2 diabetes pathogenesis. / Doutorado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-10-26T16:54:27Z No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-27T14:38:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-27T14:38:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The resistance acquired by some tumor cell lines retricts the use of drugs made of platinum because of Ruthenium compounds have been objects of great attention for presenting antimetastatic properties and low toxicity. Ruthenium compounds form compounds with the most different chemical binders, presenting good behavior and expanding the possibilities offor biological applications. A wide variety of coordination has enabled studies on ruthenium complexes, andseveral oxidation stages (Ru (II), Ru (III), and Ru (IV)) under physiological conditions and the rate of binder substitution. This study ranges the citotoxic activity of ruthenium (III) compound cis- Tetraammine(oxalato)Ruthenium(III) Dithionate - {Cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)} to treat human erythroleukemia (K562) tumor cell lineand the complex of ruthenium (II) coordinated a phosphine ligand and nitrile front tumor lineage S180 through the techniques of assay cell viability, assay kinetics of cell cycle phases, annexin V assay/ propidium iodide, test of mitochondrial membrane potential, test comet and gene expression through real time PCR. Both antiproliferative and cytotoxic activity revealed that K562 cells cultured with ruthenium (III) compound showed meaningful decrease in proliferation. Ruthenium(III) compound induced the IC50 value was of 18.28 μM set againts the cell cycle profiles cells not treated. Flow cytometric analysis indicated a sub-G1 arresting effect of ruthenium compound on K562 cells. Through the cell viability assay through MTT reduction technique, it was found that the complex of ruthenium (II) phosphine coordinated and nitrile presented cytotoxic activity when facing the tumor strain S180 with IC50 17.02±8.21μM and IC50 de 53.73 ± 5.71 μM for lymphocyte. When analyzing the cell cycle of tumor cells S180 treated with complex of ruthenium (II) caused increase in cells in G0/G1 and in S phase decreased. We observed an increase G2 / M. In the analysis of apoptosis assays, the results pointed that the complex ruthenium (II) induced cell death via apoptosis in tumor strain S180 as proved the increase in annexin cells V positive, depolarization of the mitochondrial membrane potential, activation of caspase 3 (Casp3) and 8 (Casp8) and increased expression levels of caspase-3 (Casp3) (mRNA), Bax (mRNA) and Tp53. The results lead to the conclusion that both complexes of ruthenium (II) and (III) induce cytotoxic activity against cell models tested, and that this activity correlates with alterations in cell cycle phases and induction of cell death via apoptosis. / Fármacos à base de cisplatina ainda são os anticancerígenos mais utilizados no mundo. Os compostos de rutênio têm sido objetos de grande atenção devido as suas propriedades antimetastática, baixa toxicidade e vários estados de oxidação (Ru (II), Ru (III) e Ru (IIV)) em condições fisiológicas. O presente trabalho teve como objetivo investigar in vitro os efeitos citotóxico e mecanismo de morte do complexo Ditionato de cis-Tetraamino(oxalato)rutênio(III) na linhagem tumoral de leucemia mielóide crônica (K562) e do complexo de rutênio (II) coordenado a ligante fosfina e nitrila [RuCl(bcn)(bipy)(dppe)]PF6, em linhagem tumoral S180 a partir das técnicas de ensaio de viabilidade celular, ensaio de cinética das fases do ciclo celular, ensaio anexina V/Iodeto de Propídeo, ensaio de potencial de membrana mitocondrial e expressão gênica por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o complexo de rutênio (III) provoca uma significativa redução na proliferação de células K562. O complexo de rutênio (III) induziu uma IC50 =18,28 μM. A análise por citometria de fluxo indicou um efeito sub-G1 dos complexos de rutênio sobre células de K562. O composto provocou um aumento de dano significativo nas células em todas as concentrações testadas em comparação ao controle negativo, o que pode ser associado à citotoxicidade com efeito direto sobre o DNA das células de K562. A partir do ensaio de viabilidade celular pela técnica de redução do MTT, verificou-se que o complexo de rutênio (II) coordenado a fosfina e nitrila apresentou atividade citotóxica frente à linhagem tumoral S180 com IC50 17,02±8,21μM e IC50 de 53,73 ± 5,71 para linfócito. Na análise do ciclo celular de células tumorais S180 tratadas com o complexo de rutênio (II), casou indução de G0/G1, fase S e G2/M. Na análise dos ensaios de apoptose, os resultados demonstraram que o complexo de rutênio (II) induziu morte celular via apoptose na linhagem tumoral S180, como evidenciado pelo aumento no número de células anexina V positivo, despolarização do potencial de membrana mitocondrial, ativação das caspase 3 (Casp3) e 8 (Casp8) e aumento dos níveis de expressão de caspase-3 (Casp3) (mRNA), Bax (mRNA) e Tp53 . A partir dos resultados conclui-se que ambos os complexos de rutênio (II) e (III) induzem atividade citotóxica frente aos modelos de células testadas, sendo que a atividade está correlacionada às alterações nas fases do ciclo celular e indução de morte celular via apoptose.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2017-09-29T19:13:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - William Andrés López Arboleda - 2015.pdf: 1579315 bytes, checksum: 378fd0e65f3b2919d56630143950ed75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-02T13:35:40Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - William Andrés López Arboleda - 2015.pdf: 1579315 bytes, checksum: 378fd0e65f3b2919d56630143950ed75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-02T13:35:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - William Andrés López Arboleda - 2015.pdf: 1579315 bytes, checksum: 378fd0e65f3b2919d56630143950ed75 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Sclerotinia sclerotiorum is a phytopathogenic fungus that infects more than 400 plant species, including common bean. Genetic variability studies in connection with phenotypic traits of agronomic interest are important to drive the control strategies against this pathogen. The aims of this study were: to evaluate the genetic variability, fungicide sensitivity, aggressiveness and to determine the proportion of MAT (Mating Type) alleles of 79 isolates of S. sclerotiorum distributed in four populations from common bean. Two populations represented a single sampling location in two different times (2000 and 2013 growing seasons). To evaluate the fungicide sensitivity a cell viability test based on the alamarBlue dye using mycelial growth was standardized. Dose-response curves for fluazinam, procymidone and benomyl were estimated using this test and were compared with dose-response curves estimated by the mycelial growth inhibition on PDA plate and the FRAC (Fungicide Resistance Action Committee) protocol. Despite the differences to assess the fungicide sensitivity between the three methods, the dose-response curves showed similar trends for the three fungicides. The fungicide sensitivity assessment at the four populations showed low sensitivity to benomyl in the Planaltina population. Furthermore, this population presented a principally clonal population structure, with a haplotype represented by 18 out of 20 isolates. Significant population differentiation in all pairwise comparisons of phi, except the comparison between EV_2013-NH, was detected. Five genetically homogeneous groups were inferred by the DAPC analysis. No group was conformed by isolates from the four populations. Only two haplotypes between the two populations from the same sampling location were shared. The hypothesis of random mating was rejected at the four populations; however this hypothesis was not rejected at the two major populations inferred by the DAPC analysis. The screening of mating type locus showed a dominance of Inv+ isolates and a high proportion of Inv+/Inv- isolates (presumable heterokaryons). / Sclerotinia sclerotiorum é um fungo fitopatogênico capaz de colonizar mais de 400 hospedeiras, sendo o agente causal do mofo branco no feijoeiro. Estudos de variabilidade genética associados a características fenotípicas de interesse agronômico, como a sensibilidade a fungicidas, oferecem informações importantes para direcionar estratégias de controle sobre este patógeno. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a variabilidade genética, sensibilidade a fungicidas e agressividade de 79 isolados de S. sclerotiorum distribuídos em quatro populações procedentes de culturas de feijoeiro em pivô central. Duas destas populações representaram um único local de coleta em duas épocas diferentes (2000 e 2013). Para avaliar a sensibilidade a fungicidas foi padronizado um teste de viabilidade celular baseado no corante alamarBlue® sobre o crescimento micelial em microplaca de 96 poços. Curvas de dose-resposta para os fungicidas fluazinam, procimidona e benomyl, usando um isolado de S. sclerotiorum, foram estimadas com este método, e comparadas com curvas de dose-resposta obtidas com os métodos de inibição do crescimento em placa e o proposto pelo Fungicide Resistance Action Committee (FRAC). Apesar das diferentes abordagens as curvas dose-resposta mostraram tendências semelhantes para os três fungicidas. A avaliação da sensibilidade a fungicidas nas quatro populações indicou uma alta insensibilidade ao benomyl na população de Planaltina. Por outro lado, a estrutura populacional foi principalmente clonal com um haplótipo representado por 18 dos 20 isolados desta população. Diferenciação populacional significativa foi detectada em todas as comparações par a par do phi, com a exceção da comparação EV-2013-NH. A analise DAPC identificou cinco grupos geneticamente homogêneos. Nenhum dos grupos esteve constituído por isolados das quatro populações. Só dois haplótipos foram compartilhados pelas populações EV_2000 e EV_2013. A hipótese de acasalamento aleatório foi rejeitada nas quatro populações, no entanto não foi rejeitada nas duas maiores populações sugeridas pelo DAPC. O screening do Mating type locus (MAT) mostrou uma prevalência de isolados Inv+ e uma alta proporção de isolados Inv+/Inv-

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-12-20T16:28:52Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Juliana Macêdo Silvestre - 2015.pdf: 815128 bytes, checksum: 3bea2ad6d4ab6f0e783b901523c0d838 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-12-26T14:12:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Juliana Macêdo Silvestre - 2015.pdf: 815128 bytes, checksum: 3bea2ad6d4ab6f0e783b901523c0d838 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-26T14:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Juliana Macêdo Silvestre - 2015.pdf: 815128 bytes, checksum: 3bea2ad6d4ab6f0e783b901523c0d838 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Cerrado is a biome that occupies about 25% of Brazilian territory. The seasonality, hot-humid and cold-dry periods, is one of the most striking features of the Cerrado. Reduced rainfall reduces the availability of water in the surface layers of the soil and increases the evaporative demand of air leading to the formation of litter cooperating in cycling soil nutrients. Another important factor in the Cerrado is the occurrence of fires that influence the dispersion, bloom, sprouting and diversity of certain species of plants. The relationship between seasonality, low fertility of soils and naturally occurring fires has shaped vegetative and reproductive strategies of plants from the Cerrado biome. Ichthyothere terminalis (Spreng.) Blake Asteraceae species occurring in the Cerrado, accumulates large amounts of fructans in the underground organs as reserve carbohydrates. Fructans are fructose polymers which are synthesized by the enzymes 1-SST (sucrose: sucrose fructosyltransferase) and FFT (fructan: fructan fructosyltransferase) and depolymerized by 1-FEH (exohidrolase fructan) and invertase. This study investigated the effect of freezing in the production of the enzymes 1-SST, 1-FEH and Invertase in I. terminalis. The partial characterization of these enzymes was performed. The samples were frozen immediately after collection (EB2) or after 6 hours of transport to the laboratory (EB1). The highest amount of protein was found in EB1 (97.81 μg.mL-1) as compared to EB2 (11,90 μg.mL-1). The results showed that the extraction method was efficient, since there was a significant reduction in reducing sugars and the activity of enzymes 1-SST, 1-FEH and Invertase were detected, mainly in the EB1. Enzymes 1-SST and Invertase showed a pH optimum between pH 6 and 7, while the 1-FEH enzyme had a greater spectrum ranging from pH 5 to 7. The three enzymes had an optimum temperature in the range 40 to 50 (°C). This work represents an important step towards understanding the role of these enzymes in the fructan metabolism in I. terminalis. / O Cerrado é um bioma que ocupa cerca de 25% do território brasileiro. A sazonalidade climática, períodos quente-úmido e frio-seco, é uma das características mais marcantes do Cerrado. A redução pluviométrica diminui a disponibilidade de água nas camadas superficiais do solo e eleva a demanda evaporativa do ar levando a formação de serrapilheira que coopera na ciclagem de nutrientes do solo. Outro fator importante no Cerrado é a ocorrência de queimadas que influenciam na dispersão, floração, rebrota e diversidade de certas espécies de plantas. A relação entre sazonalidade climática, baixa fertilidade dos solos e ocorrência natural de queimadas tem moldado estratégias vegetativas e reprodutivas das plantas do bioma Cerrado. Ichthyothere terminalis(Spreng.) Blake, espécie da família Asteraceae ocorrente no Cerrado, acumula grandes quantidades de frutanos em seus órgãos subterrâneos como carboidratos de reserva. Os frutanos são polímeros de frutose sintetizados pelas enzimas 1-SST (sacarose: sacarose frutosiltransferase) e FFT (frutano:frutano frutosiltransferase) e despolimerizados pela 1-FEH (frutano exohidrolase) e invertase. O presente trabalho objetivou estudar o efeito do tempo de congelamento na produção das enzimas 1-SST, 1-FEH e Invertase em I. terminalis. Além disso, a caracterização parcial destas enzimas foi realizada. As amostras coletadas foram congeladas imediatamente após a coleta (EB2) ou após 6 horas de transporte até o laboratório (EB1). A análise da quantidade de proteína extraída mostrou que EB1 apresentou maior quantidade de proteínas (97,81 μg.mL-1) quando comparada com EB2 (11,90 μg.mL-1). O método de extração foi eficiente, pois houve uma redução significativa em açúcares redutores e a atividade das enzimas 1-SST, 1-FEH e Invertase foram detectadas, principalmente no EB1. As enzimas 1-SST e Invertase apresentaram um pH ótimo entre pH 6 e 7, ao passo que a enzima 1-FEH teve um espectro maior variando de pH 5 a 7. As três enzimas apresentaram uma temperatura ótima na faixa de 40 a 50 (°C). Este trabalho representa um passo importante para o entendimento do papel destas enzimas no metabolismo de frutanos em I. terminalis.

THI1 é provavelmente uma proteína bifuncional, uma vez que está envolvida na biossíntese de tiamina e na estabilidade do DNA organelar, notadamente o mitocondrial. Interessantemente, a biossíntese de tiamina ocorre em compartimentos distintos em plantas (cloroplastos) e em leveduras (mitocôndrias). Ensaios de complementação funcional mostraram que o gene thi1 de Arabidopsis thaliana é capaz de complementar uma cepa mutante de levedura para o gene ortólogo. A proteína THI1 de Arabidopsis thaliana é codificada por um único gene. Uma análise detalhada da região N-terminal da proteína, responsável pela sua localização na células, revelou a presença de duas sequências de direcionamento adjacentes. Na extremidade N-terminal encontra-se um peptídeo de trânsito cloroplástico seguida por uma região capaz de formar uma α-hélice anfifílica, tipicamente encontrada em pré-sequências de direcionamento mitocondriais. Com o objetivo de avaliar se a localização final de THI1 pode apresentar um tipo de regulação temporal ou espacial, foram obtidas plantas transgênicas expressando a proteína THI1 fundida a GFP ("green fluorescent protein"). Análises dessas plantas por meio de microscopia confocal revelaram que THI1 está presente majoritariamente em cloroplastos e raramente em mitocôndrias. Ao contrário do que acontece em Arabidopsis thaliana, em cana de açúcar foram encontrados pelo menos três isoformas/parálogos de thi1. O alinhamento da seqüência de aminoácidos dessas isoformas com a THI1 de Arabidopsis thaliana revelou alta similaridade, inclusive na seqüência de direcionamento. Com o intuito de avaliar o padrão de direcionamento dessas isoformas de cana de açúcar foram obtidas construções gênicas contendo ou a seqüência de direcionamento completa ou o peptídeo de trânsito cloroplástico ou a pré-seqüência mitocondrial, fundidas a GFP sob o comando do promotor 35S. A expressão transiente dessas construções em epiderme de cebola, revelou que no caso das construções contendo a seqüência de direcionamento completa ou o peptídeo de trânsito, o direcionamento ocorreu apenas para os cloroplastos. No caso das construções contendo somente a seqüência de direcionamento mitocondrial a GFP permaneceu difundida no citoplasma. Além do aspecto do direcionamento, THI1 foi avaliada sob o ponto de vista filogenético. As análises filogenéticas mostram que thi1 é raramente encontrado em bactérias mas é amplamente distribuído em Archaea. As distâncias genéticas indicam que provavelmente os eucariontes herdaram thi1 de Archaea. As poucas bactérias que possuem esse gene provavelmente obtiveram-no por meio de herança horizontal. / THI1 is probably a bifunctional protein, since it is involved in thiamin biosynthesis and organelar genome stability mainly the mitochondrial. Interestingly, the thiamin biosynthesis occurs at different compartments in plants (chloroplasts) and yeasts (mitochondria). Functional complementation assays showed that Arabidopsis thaliana thi1 gene is able to complement a yeast mutant strain for the hortolog gene. The Arabidopsis thaliana THI1 is encoded by a single copy gene. A detailed analysis of the THI1 N-terminal region, that is responsible for its targeting in cells, reveled the presence of two in tanden directing sequences. At N-terminal region there is a chloroplastic transit peptide followed by a region able to form an anfifilic α-helix frequently present in mitochondrial presequences. Aiming to evaluate if the THI1 final localization could present a temporal or spacial regulation, transgenic plants expressing THI1 fused to GFP ("green fluorescent protein") where obtained. Confocal microscopy analysis of these transgenic plants showed that THI1 is mainly found in chloroplasts and barely found in mitochondrias. Different from what happens in Arabidopsis thaliana, in sugar cane where founded at least three thi1 isoforms/paralogs. The amino acids sequence alignment of these isoforms with the thi1 one, reveled high similarity including the targeting sequence. To evaluate the directing standard of these sugarcane isoforms, gene constructions made by the complete targeting sequence or the chloroplastic transit peptide or the mitochondrial presequence, fused to GFP under the guidance of 35S promotor, where obtained. A transient expression of these gene constructios in epidermal onion cells prove that in the case of the constructions containing either the complete targeting sequence or the chloroplastic transit peptide the directing occurred only to chloroplasts. On the other hand, the constructions containing the mitochondrial pre sequence, GFP were kept defused in the citoplasm. Besides the directing aspect, THI1 were evaluated under the filogenetic point of view. Filogenetic analysis showed that thi1 is rarely found in bacteria but is widely distributed in Archaea. The genetic distances pointed out that probably eucaryotes THI1 came from Archaea. This gene in a few bacterias probably were inherited by lateral transference.

Orientador: Karina Gonzales Silvério Ruiz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T13:33:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Albiero_MayraLaino_M.pdf: 1767389 bytes, checksum: 14c8bc6c823503f78c08850abc5ed95b (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar se a exposição das células mesenquimais indiferenciadas do ligamento periodontal (PDLMSCs) ao lipopolissacarídeo da Porphyromonas gingivalis (Pg) e da Escherichia coli (Ec), levaria a alterações biológicas que comprometessem as propriedades relacionadas ao fenótipo mesenquimal indiferenciado. Para testar essa hipótese, inicialmente foi verificado se as cinco populações de células mesenquimais indiferenciadas purificadas para o antígeno de superfície CD105 (células CD105+) expresssavam os receptores Toll-like 2 e 4 (TLR2 e 4). Em seguida, as células foram cultivadas na presença do LPS da Pg e da Ec, e avaliadas quanto a sua viabilidade e proliferação pelo ensaio do MTS, expressão dos genes para citocinas inflamatórias IL-1?, IL-6, IL-8 e TNF-? (técnica do PCRq), imunomarcação para STRO-1 e expressão do gene identificador de pluripotencialidade - Oct-4, e capacidade de diferenciação osteoblástica/cementoblástica através dos ensaios para identificação de nódulos minerais e expressão dos genes para RUNX2, ALP e OCN. Os resultados mostraram que todas as populações celulares apresentaram fenótipo mesenquimal indiferenciado com marcação positiva para STRO-1, além de se mostrarem positivas para os receptores TRL2 e 4. O ensaio de MTS revelou que a exposição às três concentrações de LPS da Pg e da Ec (100 ng, 1 ?g e 10 ?g/ml) não comprometeu a viabilidade celular, mantendo todas as populações de PDLMSCs proliferativas ao longo dos 10 dias de cultivo. Em paralelo, verificou que LPS da Pg não alterou os níveis de RNAm para citocinas estudadas enquanto que, o LPS da Ec promoveu um aumento significativo na expressão de IL-6 e IL-8, quando aplicado nas concentrações de 100 ng e 1 ?g/ml. Adicionalmente, os resultados revelaram que a exposição celular aos LPS bacterianos, ambos na concentração de 1?g/ml, não alterou o fenótipo mesenquimal indiferenciado destas populações, uma vez que a expressão do gene OCT-4 e a marcação positiva para STRO-1 mantiveram-se semelhantes às células do grupo controle. Além disso, as células mantiveram a capacidade de diferenciação em fenótipo osteoblástico/cementoblástico, confirmado pela produção de nódulos minerais (ensaio de vermelho de alizarina) e expressão dos genes para RUNX-2, ALP e OCN semelhante ao grupo controle (células cultivadas em meio osteogênico). Somente foi observado um aumento significativo (p<0,05) na produção de nódulos minerais quando as células foram cultivadas na presença de 1?g/ml do LPS de Ec. Contudo, esse aumento da matriz mineral não está relacionado ao aumento nos níveis de RNAm para os genes relacionados ao fenótipo osteogênico comparado ao grupo controle. Dentro das condições experimentais avaliadas, concluí-se que a exposição das PDLMSCs ao LPS da Porphyromonas gingivalis e da Escherichea coli não alterou as propriedades biológicas destas células, mantendo assim, as características que conferem a estas a condição de mesenquimal indiferenciada / Abstract: The aim of this study was to evaluate if the exposure of mesenchymal stem cells of the periodontal ligament (PDLMSCs) to lipopolysaccharide (LPS) of Porphyromonas gingivalis (Pg) and Escherichia coli (Ec), would lead to biological changes that compromised the properties related to undifferentiated mesenchymal phenotype. To test this hypothesis, initially it was checked whether the five populations of mesenchymal stem cells purified by surface antigen CD105 (CD105+ cells) expressed the Toll-like receptors 2 and 4 (TRL2 and 4). Then, cells were cultured in the presence of LPS from Pg and Ec, and evaluated for viability and proliferation by the MTS assay, expression of proinflammatory cytokines IL-1?, IL-6, IL-8 and TNF-? (PCRq technique), immunostaining for STRO-1 and OCT-4 gene expression, an identifier of pluripotency, and osteoblast/cementoblastic differentiation capacity through assays to identify minerals nodules, as well as the gene expression of RUNX2, ALP and OCN. All these assays were carried out also in the presence of LPS from Escherichia coli (Ec), which is not considered a periodontal pathogen. The results showed that all cell populations with undifferentiated mesenchymal phenotype had positive staining for STRO-1, and also showed to be positive for the receptors TLR2 and 4. The MTS assay revealed that exposure to the three concentrations of Pg and Ec LPS (100 ng, 1?g and 10?g/ml) did not affect cell viability, keeping all PDLMSCs populations proliferative over 10 days of culture. In parallel, it was found that the LPS Pg did not alter mRNA levels for the cytokines studied, while the Ec LPS caused a significant increase in IL-6 and IL-8, when applied concentrations of 100ng/ml and 1?g/ ml. Additionally, the results revealed that cellular exposure to both LPS in the concentration of 1?g/ml, did not alter the undifferentiated mesenchymal phenotype of these populations, since the expression of gene OCT-4 and positive STRO-1 staining remained similar to cells in the control group. In addition, these cells retained their ability to differentiate into osteoblastic/cementoblastic phenotype confirmed by production of mineral nodules (alizarin red assay) and expression of the genes for RUNX-2, ALP and OCN similar to cells control group (cultured in osteogenic medium only). It was only observed a significant increase (p<0.05) in the production of mineral nodules when cells were cultured in the presence of 1?g/ml Ec LPS. However, this increase in the mineral matrix it is not related to increased levels of mRNA for genes related to osteogenic phenotype compared to the control group. Within the experimental conditions, it can be concluded that exposure of PDLMSCs to LPS of Porphyromonas gingivalis and Escherichia coli did not alter the biological properties of these cells thereby, maintaining the characteristics that confer to these cells the condition of mesenchymal stem cells / Mestrado / Periodontia / Mestra em Clínica Odontológica

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T07:35:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_MayaraLustosade_M.pdf: 4413688 bytes, checksum: 0a8f97c5671981f59c6a55ef98721b62 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os avanços tecnológicos dos últimos anos exigem novas posturas nos ambientes de ensino de modo a diminuir as distâncias entre o cotidiano dos estudantes e o dia-a-dia na sala de aula. O presente projeto teve por objetivo o desenvolvimento de uma interface adaptativa (IA), de modo a atender essa necessidade presente, estimulando os alunos ao estudo e facilitando o processo de ensino aprendizagem. O espaço virtual desenvolvido neste caso foi um site <http://biocelunicamp.wix.com/ppg>. Foram construídas três abas destinadas a três grupos de usuário: Básico (Ensino Fundamental), Médio (Ensino Médio) e Avançado (Ensino Superior). Todas as abas da IA tratam do tema "proliferação celular", no entanto, foram utilizados recursos e linguagem adaptados a cada nível. Para avaliação do recurso, o site foi aplicado para estudantes do ensino fundamental de escolas adventistas (4 classes - 117 alunos), do ensino médio do Colégio COTUCA (4 classes - 131 alunos) e do ensino superior para o curso de Ciências Biológicas da Unicamp (2 classes - 95 alunos). Todos os grupos foram divididos randomicamente em: experimental (recebe a aula com a IA) e controle (aula convencional sobre o mesmo assunto). Vale ressaltar que os estudantes do grupo controle também tiveram aula com a IA, após a avaliação da mesma. Antes da aplicação da IA, os estudantes responderam a um pré-teste para verificar os conhecimentos prévios e analisar a homogeneidade entre as turmas. Após a aplicação da aula com e sem a interface, todos os estudantes responderam a um pós-teste e construíram um mapa conceitual. Além destes instrumentos, as avaliações formais da disciplina também foram utilizadas para verificar a eficácia da IA. Entrevistas foram realizadas com os estudantes e uma carta avaliativa solicitada aos professores. Aplicando ANOVA (one way) aos resultados dos pré-testes, foi possível verificar que não houve diferença significativa entre as turmas do ensino médio (p=0.49), do ensino fundamental (p=0.92) e do ensino superior (p=0.09). Quando comparados os pós-testes, percebeu-se diferença significativa entre os grupos controle e experimental de todos os níveis (p<0.05), demonstrando que os estudantes que tiveram aula com a interface apreenderam melhor o conhecimento. Ao avaliar os mapas conceituais percebeu-se que os mapas dos grupos controle possuem um maior grau de generalidade, ou seja, são menos específicos e contêm menos conceitos em relação aos mapas dos grupos experimentais. Foi observada também uma menor quantidade de conectivos e proposições nos mapas dos grupos controle, diminuindo também o número de inter-relações na estrutura. A carta de todos os professores demonstrou aprovação à metodologia e interesse em aplicá-la em outras oportunidades. Sendo assim, podemos afirmar que esta sugestão de redesenho das aulas e da metodologia corrente, utilizando a IA, além de estimular os alunos a estudar de modo mais ativo e participativo, motivou os professores e, por conseguinte, permitiu a facilitação do processo de ensino-aprendizagem em mão dupla / Abstract: The technological advances of recent years require new attitudes in learning environments, in order to bridge the gaps between the daily lives of students, and the daily activities in the classroom. The aim of this project was to develop an adaptive interface (AI), in order to meet this current need, encouraging students to study and facilitating the teaching-learning process. The virtual space developed in this case was a website <http://biocelunicamp.wix.com/ppg>. Three tabs were built for three user groups: Basic (Elementary School), Medium (High School) and Advanced (College). All AI tabs had the same subject, cell proliferation. However, adapted resources and language were used for each model. For evaluation of the resource developed, the site was used with elementary school students from Adventist Schools (4 classes - 117 students), high school students from COTUCA school (4 classes - 131 students) and Higher Education students of the Biological Sciences course from Unicamp (2 classes - 95 students). All groups were randomly divided into experimental (receiving class with AI) and control groups (conventional lecture of the same subject). It is important to stress that students in the control group also had class with the AI, but only after the evaluation. Before the implementation of the AI, students answered a pre-test to verify the previous knowledge and examine whether there were differences between the groups. After applying the lesson, with and without the interface, all students answered a post-test and built a conceptual map. In addition to these instruments, formal evaluations of the course were also used to verify the effectiveness of the AI. Interviews were conducted with students and an evaluation letter was requested to the teachers. Applying ANOVA (one way) to the results of the pre-tests, we found that there was no significant difference between the high school (p = 0.49), the basic education (p = 0.92) and the college groups (p = 0.09). Comparing the post-test results, we noticed a significant difference between the control and experimental groups at all levels (p <0.05), demonstrating that students who had classes with the interface did get better grades. When evaluating the conceptual maps, we found that maps from the control groups had a higher degree of generality, ie, are less specific and contain less concepts in comparison with the experimental groups maps. There was also a smaller amount of connective propositions on the maps from the control groups, reducing the number of inter-linkages in the structure. The evaluation letters by the teachers showed approval and interest to apply the AI in other opportunities. Thus, we conclude that this suggestion of innovating the classes and the methodology currently applied, using the AI, besides of encouraging the students to study in a more active and participative way, it motivated the teachers, and therefore facilitated the teaching-learning process in both directions / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Hernandes Faustino de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T03:24:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Randi_MarcoAntonioFerreira_D.pdf: 2781895 bytes, checksum: 93ebae9e821938a5b437a4230c96b539 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O aluno que se envolve com seu processo de aprendizagem aprende melhor. A partir dessa premissa, nosso objetivo no presente estudo foi desenvolver, aplicar e avaliar uma nova ferramenta didática em disciplinas de Biologia Celular, baseada em aulas com RPG (roleplaying game). O RPG é um sistema de jogo cooperativo onde os participantes têm objetivos comuns e precisam atuar em grupo para alcançá-los. Aplicado à educação, acreditamos que funciona como um facilitador da aprendizagem ativa, sendo o aluno o construtor de seu conhecimento enquanto participa da aula, orientado pelo professor. A criação e aplicação dessas aulas constitui desafio estimulante para professores, e a formação de professores também constituiu foco dentro desse estudo. A metodologia incluiu: pesquisas teóricas sobre o assunto a ser trabalhado na aula (um processo celular como síntese de ATP, por exemplo) e subsequente criação da aula na forma de uma aventura; testes das aulas criadas; aplicação das aulas a alunos de nível superior em diferentes cursos em três diferentes universidades; avaliação dos resultados através de notas em provas regulares das disciplinas, questionários, construção de mapas conceituais, depoimentos dos alunos e dos professores participantes, e observações dos alunos durante as aulas. Também foi avaliada a retenção do conteúdo em médio prazo, pela aplicação de um teste sem aviso prévio, um ano após a aula ter sido ministrada. Para comparar as médias de desempenho dos alunos as turmas foram divididas de forma que, enquanto metade dos alunos participou da aula com uso do RPG (GRPG), a outra metade participou de uma aula expositiva "tradicional" (GC). GC e GRPG tiveram notas iguais nas avaliações formais, exceto por uma questão na qual o GC teve melhor desempenho, embora ambos os grupos tenham tido notas muito baixas. Na avaliação de médio prazo, o GRPG foi melhor em duas questões. A maioria dos alunos que participaram do GRPG considerou que essa é uma boa metodologia didática que deve ser utilizada em sala de aula; entende que ela deve ser utilizada como ferramenta complementar à aula expositiva; sentiu-se estimulada a ler mais sobre os temas das aulas. Os alunos sentiram-se mais seguros em responder questões sobre os temas de Biologia Celular após as aulas com RPG. A análise dos mapas conceituais, construídos pelos alunos antes e depois da aula com RPG, permitiu concluir que novos conceitos foram incorporados à teia de conhecimento dos alunos, e que houve melhora significativa na forma como os conceitos foram correlacionados nos mapas. Professores e estudantes (voluntários e bolsistas, de graduação e pós-graduação), que atuaram como professores nas aulas consideraram essa ferramenta didática como um bom instrumento de aprendizagem. Nós concluímos que a aula com RPG é uma metodologia didática que pode trazer benefícios em termos da construção de conteúdos em Biologia Celular e é um potencial promotor da aprendizagem ativa e do desenvolvimento de habilidades como cooperação e criatividade / Abstract: Student who gets involved with their learning process learns better. Starting from this premise, the aim of this study was to develop, implement and evaluate a new teaching method in the disciplines of cell biology, the RPG-based class. The RPG (role-playing game) is a cooperative game where the players have common goals and must work together actively to achieve the goals. Each student builds his own knowledge while participating in the classroom guided by the teacher. Creating and implementing these classes was an exciting challenge for teachers, and teacher training using this approach was also a focus of this study. The methodology included: theoretical research on the topics of cellular biology (a cellular process such as ATP synthesis, for example) and the subsequent creation of the class in the form of an RPG adventure, testing the created classes, and applying the material to students of higher education in three different universities. The students attended either an RPG-based class (GRPG) or a lecture (GC) on specific cellular biology topics. Pre- and post-class questionnaires, conceptual maps, regular exam scores and on an unannounced test one year later (medium-term retention) were compared to assess student attitudes and learning in the two groups. The evaluation also consisted of testimonials from students, interviews with participating teachers, and observations of students during class. GC scored better than GRPG in 1 of 20 regular exam questions, but the score for this one question was very low in both groups. In the medium-term evaluation the RPG group showed higher scores on 2 of 22 questions and left fewer questions unanswered. Most students who participated in the GRPG considered that this is a good teaching/learning method, that it should be used as a complementary tool to lecture, and felt more confident and encouraged to read more about the class topics. The analysis of concept maps constructed by students before and after school, shows that new concepts were incorporated into the web of knowledge of students, and a significant improvement in the concepts' connections were established as assessed by concept maps. Teachers and students who acted as teachers in the RPG-based classes considered this a good teaching/learning tool, and were willing to apply this tool in their own classrooms. Our results showed that RPGs is quantitatively as good as formal lectures, but can be an educational tool that gives students the chance to learn actively and potentially lead to a better retention of the acquired knowledge / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural