Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 207338 bytes, checksum: e8ae32d5d73829fe54385cc857a2a2cd (MD5) Previous issue date: 2006-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The effects of heat shock, acid treatment, exposure to bile salts and the presence of H2O2 on antimicrobial resistance in Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 were determined. Agar diffusion assays results indicated that this bacterium is resistant to vancomycin, sulphamethoxazole, colistin, some [Beta]-lactams, aminoglycosides, nitrofurans and quinolones. It is moderately susceptible to choramphenicol, tetracycline, cephalothin, ampicillin and erythromycin. L. delbrueckii UFV H2b20 can grow on high concentrations of H2O2 and complete inhibition will be observed only at 70 µg mL-1. Diferent effects on the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) of the antimicrobials were observed when the bacterial cells were exposed to several stress conditions. Heat shock affected resistance to different aminoglycosides and [Beta]-lactams in various ways; it diminished resistance to nitrofurans and to tetracycline; however, it had no effect over resistance to choramphenicol and espiramycin. The same results were observed for acid pre-treatment at pH 3,5 for 30 min, except that it resulted in enhancement of espiramycin resistance. Cell exposure to 0,5% bile salts resulted in diminuished MICs for almost all tested antibiotics, except, apparently, furazolidone, sulphametoxol and nalidix acid, which maintained resistance to the highest concentrations tested. The presence of H2O2, 20 µg mL-1, had various effects on aminoglycosides, diminuished resistance to nitrofurans, [Beta]-lactams, tetracycline and espiramycin; however, it enhanced resistance to choramphenicol. These results demonstrate an ample diversity of responses to heat shock, acid shock, presence of H2O2, and also a general response when cells of L. delbrueckii UFV H2b20 are exposed to bile salts. / A resistência a antimicrobianos e o efeito de peróxido de hidrogênio sobre o crescimento em Lactobacillus delbrueckii UFV H2b20 foram estudados. Os efeitos de choque térmico, choque ácido, exposição a sais biliares e presença de peróxido de hidrogênio sobre a resistência a antimicrobianos nesta bactéria também foram investigados. A determinação do modelo de resistência, pelo método de difusão em meio sólido, indicou que L. delbrueckii UFV H2b20 apresenta resistência a vancomicina, a alguns [Beta]-lactâmicos, a sulfametoxol, a aminoglicosídeos, a nitrofuranos, a quinolonas e a colistina e susceptibilidade moderada a cloranfenicol, a tetraciclina, a cefalotina, a ampicilina e a eritromicina. L. delbrueckii UFV H2b20 é capaz de crescer em altas concentrações de peróxido de hidrogênio e inibição completa do crescimento só foi observada com 70 µg mL-1. Os efeitos de condições de estresse sobre a resistência a antimicrobianos foram determinados pela comparação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), realizada pelo método de microdiluição em meio líquido, de células submetidas e de não submetidas às condições de estresse citadas. O choque térmico provocou efeitos diversos sobre a resistência a aminoglicosídeos e a [Beta]-lactâmicos, diminuiu a resistência a nitrofuranos e a tetraciclina e não alterou a resistência a cloranfenicol e a espiramicina. O choque ácido também provocou efeitos diferentes sobre a resistência a aminoglicosídeos e a [Beta]-lactâmicos, diminuiu a resistência a nitrofuranos e a tetraciclina, não alterou a CIM de cloranfenicol e aumentou a resistência a espiramicina. A exposição das células de L. delbrueckii UFV H2b20 a sais biliares provocou diminuição da CIM de quase todos os antimicrobianos testados, exceto furazolidona, sulfametoxol e ácido nalidíxico, que não tiveram a resistência alterada até a concentração máxima testada. A presença de peróxido de hidrôgenio provocou efeitos diferentes sobre a resistência a aminoglicosídeos, diminuiu a resistência a nitrofuranos, a [Beta]-lactâmicos, a tetraciclina e a espiramicina e aumentou a resistência a cloranfenicol. Os resultados demonstram ampla diversidade nas respostas ao choque térmico, ao choque ácido e ao peróxido de hidrogênio e similaridade na resposta à exposição das células de L. delbrueckii UFV H2b20 a sais biliares.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:52:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 89125 bytes, checksum: 3903e49d4814eabf34674e8391c030ca (MD5) Previous issue date: 2007-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Some bacteria produce antimicrobial peptides called bacteriocins that show bactericidal or bacteriostatic effect against other bacteria from the same species or species that are phylogenetically related. These peptides have been studied mainly due to their potential application in food industry, in medicine and in livestock production. Bovicin HC5, a bacteriocin produced by Streptococcus bovis HC5, is similar to the lantibiotics and has a wide spectrum of action. Despite the great potential for practical applications, the production of bacteriocins is frequently limited by the methods used for detection, quantification and purification. However, immunoenzymatic assays can be used as an effective alternative to detect and purify antimicrobial peptides. This work aimed to produce polyclonal antibodies to detect and quantify the bacteriocin bovicin HC5 by immunoenzymatic assays and also to determine the cytotoxic effect of this bacteriocin on Vero cells. Production of the polyclonal antibodies was performed using HPLC-purified peptide followed by immunization of New Zealand rabitts and BALB/c mice. Periodical blood harvests were performed for up to 60 days. Immunoenzymatic analysis was carried out by indirect ELISA and Western blotting with samples from blood serum, S. bovis HC5 cell extracts or supernatants from cultures grown in basal media. Bovicin HC5 generated a immune response of moderated intensity. Nonspecific reactions were not observed between the antibody and the supernatants of other lactic acid cultures by Western blotting and indirect ELISA analysis. Only the purified bovicin HC5 was detected using these techniques. Agar diffusion assays indicated that the anti-bovicin HC5 anti-serum could neutralize 75 % of the bacteriocin activity. The bioassay also indicated that production of bovicin HC5 by S. bovis HC5 started during exponential phase and the biological activity of the bacteriocin increased when the culture reached stationary phase. Bovicin HC5 could be detected in the cell extract and in the supernatant of the S. bovis HC5 culture using the indirect ELISA technique. There was a direct relationship between the activity determined by the ELISA technique and the bioassays. Bovicin HC5 showed toxic effect against Vero cells at concentrations equal to or greater than 100 μg mL-1. These results indicated that immunoenzymatic assays can be used to detect bovicin HC5, but further work is needed to improve the sensitivity of the technique. The effect of bovicin HC5 on different cell lineages must also be investigated to evaluate the toxicity of the peptide and its potential application in animal production. / Algumas bactérias produzem peptídeos antimicrobianos denominados bacteriocinas, que apresentam ação bactericida ou bacteriostática sobre bactérias da mesma espécie ou de espécies filogeneticamente relacionadas. Esses peptídeos têm sido estudados principalmente devido ao potencial para aplicação na indústria de alimentos, na medicina e na agropecuária. Bovicina HC5, uma bacteriocina produzida por Streptococcus bovis HC5, apresenta similaridade com os lantibióticos e possui amplo espectro de ação. Apesar do grande potencial de aplicação das bacteriocinas, a produção destes peptídeos é frequentemente limitada pelos métodos de detecção, quantificação e purificação utilizados. Entretanto, os ensaios imunoenzimáticos podem ser utilizados como uma alternativa mais eficiente para a detecção e purificação de peptídeos antimicrobianos. Este trabalho teve como objetivo produzir anticorpos policlonais para detectar e quantificar a bacteriocina bovicina HC5 por meio de ensaios imunoenzimáticos e determinar o efeito citotóxico da bacteriocina sobre células Vero. A produção de anticorpos policlonais foi realizada com o peptídeo purificado em HPLC seguido da imunização de coelhos New Zealand e camundongos BALB/c e coleta periódica de sangue por até 60 dias. A análise imunoenzimática foi realizada por ELISA indireta e Western blotting em amostras coletadas de soro sanguíneo, extrato de células de S. bovis HC5 ou sobrenadante das culturas cultivadas em meio basal. Bovicina HC5 foi capaz de gerar resposta imunológica, de intensidade moderada. Nenhuma reação inespecífica dos anticorpos foi observada com o sobrenadante de outras culturas lácticas nos ensaios de Western blotting e ELISA indireta, sendo detectada somente a bovicina HC5 purificada. No ensaio de difusão em meio sólido, o antissoro anti-bovicina HC5 neutralizou a atividade da bacteriocina em 75 %. Bioensaios indicaram que a bovicina HC5 começou a ser produzida durante o crescimento exponencial de S. bovis HC5 e a atividade biológica da bacteriocina aumentou quando a cultura atingiu a fase estacionária de crescimento. A bovicina HC5 foi detectada no extrato de células e no sobrenadante da cultura de S. bovis HC5 pela técnica de ELISA indireta, a qual apresentou correlação com a atividade determinada por meio de bioensaios. A bovicina HC5 apresentou efeito tóxico sobre células Vero em concentrações iguais ou superiores a 100 μg mL-1. Esses resultados indicam que ensaios imunoenzimáticos podem ser utilizados para a detecção de bovicina HC5, porém outros trabalhos deverão ser realizados para aumentar a sensibilidade da técnica. O efeito de bovicina HC5 sobre diferentes linhagens celulares deverá ser determinado para avaliar o potencial tóxico deste peptídeo e sua possível aplicação na produção animal.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-01-26T21:15:50Z No. of bitstreams: 1 CirleideMarquesDantas_DISSERT.pdf: 2038614 bytes, checksum: e9187b5c1506b7b05372eae0c149b5a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-02-01T23:13:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CirleideMarquesDantas_DISSERT.pdf: 2038614 bytes, checksum: e9187b5c1506b7b05372eae0c149b5a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T23:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CirleideMarquesDantas_DISSERT.pdf: 2038614 bytes, checksum: e9187b5c1506b7b05372eae0c149b5a4 (MD5) Previous issue date: 2010-07-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Este estudo foi desenvolvido no reservat?rio Boqueir?o de Parelhas, situado em regi?o Semi-?rida do Rio Grande do Norte, e teve como objetivo geral quantificar e caracterizar diferentes grupos de microrganismos potencialmente patog?nicos, com ?nfase na fam?lia Enterobacteriaceae. Para identifica??o bacteriana as amostras foram coletadas em per?odos seco e chuvoso ?s margens do reservat?rio e semeadas no mesmo dia em meios de crescimento l?quido e s?lido por 18-24h. Para quantifica??o de bact?rias heterotr?ficas a amostragem foi realizada em dois pontos extremos do reservat?rio representados por P1 (pr?ximo ? entrada do rio afluente) e P3 (pr?ximo da barragem). As densidades foram determinadas a partir de subamostras de 5 mL coradas com laranja de acridina (AO) 0,01% (Hobbie et al., 1977) e filtradas em membrana preta de policarbonato (Millipore, GTBP), com 0,2 mm de poro. Foram obtidos 40 isolados bacterianos. As col?nias isoladas foram submetidas ? t?cnica de colora??o de Gram, seguida dos testes de fermenta??o de lactose em meio Agar Mac Conckey e da t?cnica da citocromo-oxidase (fita oxidase). O isolado com caracter?sticas de Enterobact?rias foram submetidos ao Painel de Enterobact?rias (Probac do Brasil). O resultado dos testes demonstrou predomin?ncia de isolados com caracter?sticas de enterobact?rias (37,5 %) e 5 esp?cies foram 100% identificadas pelo painel s?o elas: Cedecea esp?cie 5, Klebsiella planticola, Morganella morganii ss morganii, Serratia plymuthica e Enterobacter sakasakii. A densidade das bact?rias heterotr?ficas variou de 1,23 a 3,17 x 107 org.mL-1, corroborando com as elevadas densidades apresentadas em outros estudos feitos na regi?o. Com base nos resultados obtidos, aponta-se para a necessidade de um trabalho intensivo de monitoramento da qualidade da ?gua uma programa??o de a??es em educa??o ambiental e educa??o em sa?de para o esclarecimento dos problemas relacionados ? ?gua que a popula??o utiliza, com vistas a obter um uso adequado desse bem e a melhor qualidade de vida da popula??o. Resumo artigo EA O objetivo deste trabalho foi analisar a percep??o que os professores do ensino p?blico em munic?pios do Rio Grande do Norte sobre qualidade de ?gua e educa??o ambiental. Foram aplicados question?rios com profissionais do ensino de escolas p?blicas e o estudo mostrou que os professores reconhecem a exist?ncia de problemas relacionados ? qualidade da ?gua dos seus munic?pios e de que eles contribuem como agentes causadores desses problemas. Os resultados mostraram que h? a necessidade de implementa??o de atividades de educa??o ambiental e de educa??o em sa?de para uma maior sensibiliza??o dos professores e, consequentemente, de seus alunos para as quest?es que envolvem o tema qualidade da ?gua.

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-08-16T13:19:25Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ítalo Dany Cavalcante Galo - 2018.pdf: 2927565 bytes, checksum: 078e47430d5f7162d86e682c8a01e08b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-08-17T11:19:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ítalo Dany Cavalcante Galo - 2018.pdf: 2927565 bytes, checksum: 078e47430d5f7162d86e682c8a01e08b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T11:19:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ítalo Dany Cavalcante Galo - 2018.pdf: 2927565 bytes, checksum: 078e47430d5f7162d86e682c8a01e08b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-07-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Bacterial infections increase significantly the rate of morbidity and mortality in the hospital setting, which is substantially aggravated by the presence of bacterial resistance. For this reason, research that brings therapeutic alternatives that are efficient, cheap and safe in the fight against different infectious agents are necessary. One potential therapy is antimicrobial phototherapy, especially represented by blue light, which shows promise but still requires study and adjustments as to the best way of application. Thus, the present study aimed to verify the antibacterial action of blue light using different experimental protocols in order to clarify contradictions reported in the literature on the subject and to determine a reproducible protocol for the study of bacterial resistance. In vitro cultures of S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, S. epidermidis, E. faecalis and C. albicans were performed specifically for each test of light irradiation by blue ( 470 nm) or red (660 nm) light LED emitters. Different variations of light application were performed under two conditions: after inoculation and before inoculation in agar. In addition, preliminary testing was performed to verify the possible development of bacterial resistance to blue light. All of the in vitro assays evidenced important bacterial growth inhibition, showing that the possible inherent biases found in the literature can be eliminated with the adoption of specific protocol measures and that, in fact, the blue light inhibits the growth of these infectious agents. It has been demonstrated that, in all cases, the use high application times (and hence doses) of blue light is required to have better inhibition. The resistance test performed suggests higher sensitivity of S. aureus in relation to P. aeruginosa and E. coli, showing evidence that E. coli tends to become more resistant to successive applications of this photoemission. The present study evidences that the blue light has antibacterial action in all the in vitro protocols tested, being indicated the use of light application with the infectious agent in liquid medium rich in nutrients as a way of optimizing subsequent tests of greater complexity. The test of resistance to the blue light adopted evidences more tendency to resistance by the bacterium Escherichia coli in relation to other species tested. / Infecções bacterianas aumentam significativamente a morbidade e mortalidade no âmbito hospitalar, quadro que se agrava substancialmente na presença da resistência bacteriana. Por esta razão, pesquisas que tragam alternativas terapêuticas que sejam eficientes, baratas e seguras no combate a diferentes agentes infecciosos são necessárias. Uma terapia em potencial é a fototerapia antimicrobiana, representada especialmente pela luz azul, a qual se mostra promissora, mas, ainda demanda de estudo e ajustes quanto a melhor maneira de aplicação. Assim, o presente estudo teve como objetivo verificar a ação antibacteriana da luz azul utilizando diferentes protocolos experimentais a fim de esclarecer contradições reportadas na literatura sobre o tema e determinar um protocolo reprodutível para estudo de resistência bacteriana. Foram realizadas culturas in vitro de S. aureus, E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, S. epidermidis, E. faecalis e C. albicans de forma específica para cada teste de irradiação luminosa obtida por meio de emissores LED de luz azul (470 nm) ou vermelha (660 nm). Foram realizadas diferentes variações de aplicação da luz em duas condições: após semeadura e anterior à semeadura em ágar. Além disso, foi feito teste preliminar para verificação de possível desenvolvimento de resistência bacteriana à luz azul. Todas as análises in vitro adotadas evidenciam importante inibição bacteriana, mostrando que os possíveis viesses inerentes a trabalhos encontrados na literatura podem ser eliminados com a adoção de medidas protocolares específicas e que, de fato, a luz azul inibe o crescimento destes agentes infecciosos. Foi demonstrado que, em todos os casos, é necessário o uso de elevados tempos de aplicação (e, consequentemente, doses) de luz azul para se ter melhor inibição. O teste de resistência realizado sugere maior sensibilidade da S. aureus em relação a P. aeruginosa e E. coli, e mostra evidências de que a E. coli tende a se tornar mais resistente à aplicações sucessivas desta fotoemissão. O presente estudo evidencia que a luz azul possui ação antibacteriana em todos os protocolos in vitro testados, sendo indicado o uso de aplicação da luz com o agente infeccioso em meio líquido rico em nutrientes como forma de otimizar testes de maior complexidade subsequentes. O teste de resistência à luz azul evidencia maior tendência à resistência por parte da bactéria Escherichia coli em relação a outras espécies testadas.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_rita_de_cassia_dos_santos_da_conceicao.pdf: 1008237 bytes, checksum: 314712b961ce0f1c183271a96a57f4ea (MD5) Previous issue date: 2012-12-21 / Salmonella spp. is the most commonly bacterium transmitted through contamined food. The foods of animal are the most responsible for the worldwide distribution of this bacterium. Salmonella spp. is able to induce a variety of diseases, ranging from an enteric fever, septicemia, gastroenteritis and infections focused. This is due to the bacteria produce different pathogenicity factors and these factors, the flagellum was the target of our study and it is one of the pathogenicity factors induced by Quorum Sensing. Quorum Sensing is a bacterial signaling system that operates through the so-called autoinducer (AI). Gram-negative bacteria produce three auto-inducers. Studies find that catecholamines are able to use the same pathway the autoinducer 3 (AI-3) to active certain genes. Epinephrine and norepinephrine are catecholamines that are present in the mammalian gastrointestinal tract can modulate bacterial gene expression. This work had as objectives to evaluate the Quorum Sensing signaling system on motility, on the growth and flagellar assembly gene expression of Salmonella enterica serovar Typhimurium (ST) and do a review about pathogenicity factors of Salmonella spp. induced by Quorum Sensing. ST was exposed to different concentrations of epinephrine and conditioned medium and its association. The combination of 500 μM epinephrine with 50 % conditioned medium increased ST bacterial motility, growth and increased the expression of the fliC, motA, motB and fliA genes. These results suggest that epinephrine in association with conditioned medium increases ST growth and motility, by modulating the expression of genes involved in flagellum assembly. These observations provide valuable insight into the association between catecholamine and autoinducer and their role in the outcome of Salmonella spp. infection. / Salmonella spp. é um dos principais patógenos transmitidos por alimentos. Os produtos de origem animal são os maiores responsáveis pela distribuição mundial desta bactéria. Salmonella spp. é capaz de induzir uma série de doenças, que vão desde uma febre entérica, septicemia, gastroenterite e infecções focalizadas. Isto é decorrente da bactéria produzir diferentes fatores de patogenicidade e dentre estes fatores, o flagelo foi o alvo no nosso estudo e é um dos fatores de patogenicidade induzidos por Quorum Sensing. Este é um de sistema de sinalização entre as bactérias, através de substâncias denominadas de auto-indutores (AI). As bactérias Gram-negativas produzem três auto-indutores. Estudos verificaram que catecolaminas são capazes de usar a mesma via de sinalização do auto-indutor 3 (AI-3) para ativar determinados genes. Adrenalina e noradrenalina são catecolaminas presentes no trato gastrointestinal de humanos e animais que são capazes de modular a expressão de gênica de bactérias. O presente trabalho teve por objetivos avaliar o sistema de sinalização Quorum Sensing (AI-3) na motilidade, no crescimento celular e na expressão de genes envolvidos na montagem do flagelo de Salmonella enterica sorovar Typhimurium (ST) e fazer uma revisão bibliográfica de fatores de patogenicidade de Salmonella spp. induzidos por Quorum Sensing. ST foi exposta a diferentes concentrações de adrenalina e esta associada ao meio condicionado. A combinação de 500 μM de adrenalina + 50% de meio condicionado aumentou a motilidade de ST, o crescimento celular e induziu a expressão dos genes motA, motB, fliA e fliC. Estes resultados sugerem que a maior motilidade de ST foi decorrente de uma maior expressão de genes envolvidos com a montagem do flagelo. Estas observações fornecem dados valiosos sobre a associação da adrenalina com os auto-indutores e seu papel na infecção causada por Salmonella spp..

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_daniela_fernandes_ramos.pdf: 1004504 bytes, checksum: d8fd2e285277928c8af06e08c3527471 (MD5) Previous issue date: 2012-11-30 / Bovine tuberculosis (BTB) caused by Mycobacterium bovis is an infectious disease of zoonotic which mainly affects cattle and buffaloes, and cause economic losses in the production of meat and milk in many countries. In Brazil, the official rates are at 1.3% of the national herd infected, corresponding to approximately 2.5 million animals. To contribute to the control of BTB, many molecular techniques have been developed in order to differentiate isolates and establish epidemiological correlations between them. Among these techniques, the most used are the Restriction Fragment Lenght Polymorphism (RFLP), Polymorphic Guanine-cytosine-Rich Sequence [1], Spoligotyping [2], Mycobacterial Interspersed Repetitive Units - Variable Number of Tandem Repeat (MIRU-VNTR) and Exact Tandem Repeat [3]. The spoligotyping and MIRU-VNTR are today considered standard methods of molecular techniques for typing of M. bovis. Both are based on PCR techniques that evaluate polymorphism in the number of repeat sequences present in the genome. Taking into account that the molecular characterization enables to increase our knowledge on the epidemiology of M. bovis and in tuberculosis control, this study aimed at the molecular characterization of isolates of M. bovis in the north and south of the Brazil, by isolating agent, identification of M. bovis by amplification of the region RD7 Multiplex PCR and genotyping using the techniques of spoligotyping, MIRU-VNTR and ETR. Nine-nine lymph nodes were collected from beef cattle in the north of the region and 162 dairy cattle in southern Brazil, and only 10 samples were positive for M. bovis in the north and 85 in the south region. Through analysis of molecular combination of spoligotyping and VNTR was possible to identify different genotypic patterns in the regions studied demonstrating the genetic diversity of M. bovis in our country. / A tuberculose bovina (BTB) causada pelo Mycobacterium bovis é uma doença infecto-contagiosa de caráter zoonótico que acomete principalmente bovinos e bubalinos, e causa prejuízos econômicos na produção de carne e leite em muitos países. No Brasil, os índices oficiais estão em 1,3% do rebanho nacional infectado, correspondendo a, aproximadamente, 2,5 milhões de animais. Visando contribuir para o controle da BTB, muitas técnicas moleculares vêm sendo desenvolvidas com o objetivo de diferenciar isolados e estabelecer correlações epidemiológicas entre eles. Dentre essas técnicas, as mais usadas são o Restriction Fragment Lenght Polymorphism (RFLP), Polymorphic Guanine-cytosine-Rich Sequence [1], Spoligotyping [2], Mycobacterial Interspersed Repetitive Units - Variable Number of Tandem Repeat (MIRU-VNTR) e Exact Tandem Repeat [3]. O spoligotyping e MIRU-VNTR são, hoje, considerados métodos padrões de técnicas moleculares para tipagem de M. bovis. Ambas são técnicas baseadas em PCR que avaliam o polimorfismo do número de sequências repetidas presentes no genoma. Levando em conta que a caracterização molecular possibilita aumentar nosso conhecimento na epidemiologia do M. bovis e no controle da tuberculose, este trabalho teve como objetivo a caracterização molecular de isolados de M. bovis da região norte e sul do Brasil, através do isolamento do agente, identificação de M. bovis pela amplificação da região RD7 por PCR Multiplex e genotipagem usando as técnicas de spoligotyping, MIRU-VNTR e ETR. Foram coletadas 99 linfonodos de bovinos de corte da região norte e 162 de bovinos de leite da região sul do Brasil, sendo que apenas 10 amostras foram positivas para M. bovis no norte e 85 na região sul. Através da análise molecular da combinação de spoligotyping e VNTR foi possível identificar diferentes padrões genotípicos nas regiões estudas demonstrando a diversidade genética de M. bovis no nosso país.

Alzheimer´s disease (AD) is a neurodegenerative disorder responsible for the largest number of cases of dementia in the elderly. The brain regions associated with the frontal cortex and the hippocampus are the most affected by the changes arising from the AD, resulting in loss of neuronal function, and the loss of memory and cognitive ability. In the cellular level, AD is associated with reduced levels of acetylcholine (ACh) in the synaptic process, decreasing cortical cholinergic neurotransmission. ACh is a neurotransmitter found in the brain and at(in the) neuromuscular junctions, forming part of the parasympathetic nervous system, your activity and staying in the synaptic cleft is regulated by hydrolysis catalyzed by acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BuChE) enzymes that modulate the levels of Ach in the nervous system. The outlook for new targets cholinesterase inhibitors has stimulated research using bioactive compounds of natural products and also the use of an animal model that provides better understanding of the mechanisms of cognitive development. Because they are microorganisms that produce secondary given this, metabolites of great importance for bioprospecting, a study of the anticholinesterase activity of compounds isolated from the endophytic fungus Phomopsis sp. (PE) associated with mangabeira (Hancornia speciosa). Furthermore, it was investigated the effect of menthol on the adult zebrafish memory in the passive avoidance test. The menthol was selected taking to account the screening conducted by our research group in previous work, where this compound showed potent anticholinesterase activity. In the search for promising compounds to anticholinesterase drugs, the present study aimed to evaluate the in vitro activity of the crude extract of the fungus, as well as their isolated compounds 5-methyl mellein (1), nectriapyrone (2), tyrosol (3) and tryptophol (4) in AChE and BuChE in vivo evaluation the effect of menthol on the acquisition of learning and memory consolidation. In all assays were obtained encouraging results. The crude extract of PE and its isolated compounds were effective to inhibit cholinesterase, and the tryptophol (4) was the most promising because it showed dual action on the enzymes being selective to BuChE. The study of exposure to menthol zebrafish showed that this compound produces no effect on memory. On the other hand, at all doses tested menthol reverses amnesia induced by scopolamine. This study, therefore, demonstrated the potencial use of these compounds isolated from PE as source of novel agents for the treatment of AD and that menthol may be indicated as therapeutic alternative for the treatment of memory deficits. / A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa responsável pelo maior número de casos de demência em idosos. As regiões cerebrais associadas ao córtex frontal e ao hipocampo são as mais comprometidas pelas alterações decorrentes da DA, resultando em perda da função neuronal, além de perda progressiva da memória e declínio cognitivo. Em nível celular, a DA está associada à redução das taxas de acetilcolina (ACh) no processo sináptico, diminuindo aneurotransmissão colinérgica cortical. A ACh é um neurotransmissor encontrado no cérebro e nas junções neuromusculares, compondo parte do sistema nervoso parassimpático, sua atividade e permanência na fenda sináptica são reguladas por hidrólise catalisadapela acetilcolinesterase (AChE) e pela butirilcolinesterase (BuChE) enzimas que modulam os níveis de ACh no sistema nervoso. A perspectiva por novos alvos inibidores das colinesterases tem estimulado pesquisas utilizando compostos bioativos de origem natural e também a utilização de modelo animal que proporcione melhor compreensão dos mecanismos do desenvolvimento cognitivo. Diante disso, pelo fato deserem microrganismos produtores de metabólitos secundários de grande importância para bioprospecção, foi realizado um estudo da atividade anticolinesterásica de compostos isolados do fungo endofítico Phomopsis sp. (PE) associado à mangabeira (Hancornia speciosa Gomes). Além disso, foi investigado o efeito do mentol sobre a memória de zebrafishadulto através do teste da esquiva passiva. O mentol foi selecionado tomando-se como base o screening realizado por nosso grupo de pesquisa, onde esse composto apresentou potente atividade anticolinesterásica. Na busca por compostos promissores a fármacos anticolinesterásicos, opresente trabalho teve como objetivo a avaliação in vitroda atividade do extrato bruto do fungo, e de seus compostos isolados 5-metil meleína (1), nectriapirona (2), tirosol (3) e triptofol (4) frente às enzimas AChE e BuChE, assim como a avaliação in vivodo efeito do mentol sobre a aprendizagem e consolidação da memória. O extrato bruto do PE e os seus compostos isolados apresentaram efeito na inibição das colinesterases, sendo o triptofol (4) o mais promissor, pois apresentou ação dual sobre as enzimas sendo seletivo para BuChE. O estudo da exposição de zebrafishao mentol revelou que este composto não produz efeito sobre a memória. Por outro lado, em todas as concentrações testadas o mentol foi capaz de reverter a amnésia induzida por escopolamina. Diante dos resultados, conclui-se que os compostos isolados do PE podem ser considerados como alternativas para o desenvolvimento de novos fármacos anticolinesterásicos e que o mentol pode ser indicado como alternativa terapêutica para tratamento de déficits de memória.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-10-20T18:58:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thais Augusto Marinho - 2012.pdf: 1266028 bytes, checksum: cd93decbadceaf3e44ca429c0702442e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-20T20:08:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thais Augusto Marinho - 2012.pdf: 1266028 bytes, checksum: cd93decbadceaf3e44ca429c0702442e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-20T20:08:18Z (GMT). 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This study aimed to investigate the epidemiological and molecular profile of the hepatitis C virus infection among recyclable waste collectors in Goiânia, Goiás. A total of 431individuals were interviewed for socio-demographic characteristics and risk factors for HCV infection. Blood samples were collected and sera were tested for the presence of antibodies to HCV (anti-HCV) using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunoblot. All samples were submitted to HCV RNA detection by polymerase chain reaction (PCR) with primers complementary to the conserved area of the 5’ non-coding (NC) region of HCV. Positive HCV RNA samples were genotyped by direct sequencing analysis of the NS5B region of viral genome, followed by phylogenetic analysis. The HCV infection prevalence was 1.6% (95% CI: 0.6-3.6) in recyclable waste collectors in Goiânia-GO. In a multivariate analysis, history of sexually transmitted disease was independently associated with this infection, while the variables history of blood transfusion and number of sexual partners showed an association with a borderline P value (p = 0.05 and p = 0.07, respectively). Viral RNA was detected in five of the seven anti-HCV positive samples, and the genotype 1, subtypes 1a (n = 1), 1b (n = 2) and 1a/1b (n = 2) were identified in the study population. Although the HCV infection prevalence found among recyclable waste collectors in Goiânia-GO is similar to that observed in local blood donors (1.4%), this population is in risk to HCV by sexual and parenteral transmission. / A hepatite C representa um importante problema de saúde pública. Apesar da infecção aguda pelo vírus da hepatite C (HCV) ser geralmente assintomática, 50 a 85% dos casos evoluem para cronicidade, podendo desenvolver cirrose hepática e carcinoma hepatocelular. Acidentes com objetos perfurocortantes contaminados podem ocorrer em catadores de materiais recicláveis como consequência do contato com vidros, materiais ferrosos pontiagudos, agulhas e seringas, evidenciando-se, assim, o risco aumentado desses profissionais em adquirir infecções por via parenteral, como a hepatite C. São escassos os trabalhos sobre a infecção pelo HCV em catadores de materiais recicláveis. O presente estudo teve como objetivo investigar o perfil soroepidemiológico e molecular da infecção pelo vírus da hepatite C em catadores de materiais recicláveis em Goiânia, Goiás. Um total de 431 indivíduos foi entrevistado sobre características sociodemográficas e fatores de risco para infecção pelo HCV. Amostras de sangue foram coletadas e os soros testados para detecção de anticorpos para o HCV (anti- HCV), por ensaio imunoenzimático (ELISA) e immunoblot. Todas as amostras foram submetidas à detecção do RNA viral por reação em cadeia da polimerase (PCR) com iniciadores complementares as região 5’ não codificante (NC) do HCV. As amostras RNA-HCV positivas foram genotipadas por sequenciamento direto da região NS5B do genoma viral, seguido de análise filogenética. A prevalência da infecção pelo HCV em catadores de materiais recicláveis em Goiânia-GO foi de 1,6% (IC 95%: 0,6–3,6). Pela análise multivariada, história de doença sexualmente transmissível foi independentemente associada a esta infecção, enquanto as variáveis história de transfusão e número de parceiros sexuais apresentaram associação marginal (p = 0,05 e p = 0,07, respectivamente). O RNA viral foi detectado em cinco das sete amostras anti- HCV positivas, sendo identificado o genótipo 1, subtipos 1a (n=1), 1b (n=2) e 1a/1b (n=2) na população estudada. Apesar da prevalência da infecção pelo HCV em catadores de materiais recicláveis em Goiânia-GO ser semelhante a observada previamente em doadores de sangue (1,4%), a referida população mostrou-se em risco transmissão sexual e parenteral do HCV.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-18T17:34:04Z No. of bitstreams: 2 Tese - Benedito R Neto da Silva Neto - 2013.pdf: 6956298 bytes, checksum: 49e69215087afc3b1ae2471385d29585 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-18T17:34:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Benedito R Neto da Silva Neto - 2013.pdf: 6956298 bytes, checksum: 49e69215087afc3b1ae2471385d29585 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-18T17:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Benedito R Neto da Silva Neto - 2013.pdf: 6956298 bytes, checksum: 49e69215087afc3b1ae2471385d29585 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-05-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The thermally dimorphic fungal pathogen Paracoccidioides is the agent of paracoccidioidomycosis. This disease is characterized by a granulomatous inflammation with clinical forms ranging from a benign localized infection to a disseminated one. The triazole drugs are broad-spectrum antifungal agents and are currently used to treat infections caused by various pathogenic yeast and molds. The mechanism of action of azoles has been elucidated in some fungi, although little is known in Paracoccidioides. Here we aim to investigate the mechanism of action of itraconazole on Paracoccidioides by using Representational Difference Analysis from Paracoccidioides yeast cells grown in the absence and presence of itraconazole for 1 and 2 h. Among the Paracoccidioides genes up-regulated by itraconazole were those mainly involved in cellular transport, metabolism/energy, transcription, cell rescue, defense and virulence. ERG11, ERG6, ERG3, ERG5 and ERG25 were up-regulated when evaluated in a timely manner. In vivo infection experiment in mice corroborated in vitro results. The glyoxylate cycle and its key enzymes isocitrate lyase and malate synthase (MLS) play a crucial role in the pathogenicity and virulence of various fungi such as the human pathogens. Here, we describe a study conducted to develop rational ligands as candidates to inhibit receptor PbMLS. The important step in the search for ligands for this receptor based on structural homology, molecular docking and molecular dynamics involving scanning virtual (virtual screening) through the program AutoDock Vina. Identified from the database of natural compounds (ZINC data bank) potential candidate ligands to inhibit the activity of PbMLS when compared to the original binder. This process led us to monoterpene indole alkaloids of the genus Palicourea (Rubiaceae) comprises about 230 species from shrubs and small trees distributed mainly in tropical regions. From the molecular docking fifteen compounds were tested as to its effectiveness in inhibiting the activity of PbMLS. The specific activity of PbMLS was affected by the compounds. Four indol alkaloids showed ability to reduce the enzyme activity. Since PbMLS is a linked surface protein that behaves as an anchorless adhesin, and PbICL is here described as adhesin, we also investigated if those compounds inhibit the adhesion of the protein to extracellular. Twodimensional gel electrophoresis we used to investigate the proteins expressed differentially during treatment with itraconazole and amphotericin B. Gels of three independent biological replicates were digitalized and the images were analyzed using the ImageMaster 2D Platinum 6.0 software (GE Healthcare). Spot intensities were normalized and the statistics analyses were estimated by one-way ANOVA. The spots of interest were excised, in-gel digested with trypsin, and the peptides were then analyzed by MS and/or MS/MS and and sequenced. The results obtained here should assist in understanding the mode of action of drugs in Paracoccidioides, and outline studies identifying compounds with antifungal activity. / O fungo patógeno termodimórfico Paracoccidioides é o agente da paracoccidioidomicose. Esta doença é caracterizada por uma inflamação granulomatosa onde as formas clínicas vão da infecção localizada benigna a uma uma disseminada. As drogas triazólicas são antifúngicos de amplo espectro e são usadas atualmente para tratar infecções causadas por vários fungos patogênicos e fungos. O mecanismo de ação dos azólicos foi elucidado em alguns fungos, embora pouco se sabe em Paracoccidioides. Aqui, em primeiro lugar pretendemos investigar o mecanismo de ação do itraconazol em Paracoccidioides usando análise de diferença representacional de Paracoccidioides células de levedura crescidas na ausência e na presença de itraconazol por 1 e 2 horas. Entre os genes Paracoccidioides up-regulados pelo itraconazol foram os envolvidos, principalmente no transporte celular, metabolismo/energia, transcrição, defesa e virulência. ERG11, ERG6, ERG3, ERG5 e ERG25 foram regulados quando avaliados de forma temporal. Experimentos de infecção em camundongos corroborou resultados in vitro. O ciclo do glioxilato e suas enzimas chave isocitrato liase (ICL) e malato sintetase (MLS) desempenham um papel fundamental na patogenicidade e virulência de vários fungos, assim como patogênese em humanos. Neste trabalho, descrevemos um estudo realizado para desenvolver ligantes racionais como candidatos pra inibir o receptor PbMLS. Apresentamos um passo importante na busca de ligantes para este receptor baseando-se em homologia de estruturas, dinâmica molecular e acoplamento molecular envolvendo varredura virtual (virtual screening) por meio do programa AutoDock Vina. Identificamos a partir de banco de compostos naturais (data bank ZINC) potenciais ligantes candidatos a inibir a atividade de PbMLS quando comparados ao ligante original. Este processo nos conduziu aos alcalóides indólicos monoterpênicos do gênero Palicourea (Rubiaceae) que compreende cerca de 230 espécies entre arbustos e pequenas árvores distribuídas, principalmente, nas regiões tropicais.A partir da ancoragem molecular quinze compostos foram testados quanto à sua eficácia na inibição da atividade de PbMLS. A atividade específica de PbMLS foi afetado pelos compostos. Quatro alcalóides indólico mostraram capacidade de reduzir a atividade da enzima. Desde que PbMLS é uma proteína associada à superfície que se comporta como uma adesina ancorada também foi investigado se os compostos inibem a adesão da proteína às matrizes extracelulares. O processo de eletroforese em gel bidimensional foi utilizado para investigar as proteínas diferencialmente expressas durante o tratamento com itraconazol e anfotericina B. Gel de três réplicas biológicas independentes foram digitalizadas e as imagens foram analisadas usando o software 6.0 Platinum 2D ImageMaster (GE Healthcare). Intensidades dos spots foram normalizados e foram estimadas as análises estatísticas por ANOVA one-way. Os spots de interesse foram excisadas do gel digerida com tripsina e os péptidos foram analisados por MS e / ou MS / MS e sequenciados. Os resultados obtidos aqui devem ajudar na compreensão do mecanismo de ação de drogas em Paracoccidioides, e delinear estudos de identificação de compostos com atividade antifúngica.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-02-03T15:39:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tamiris Augusto Marinho - 2013.pdf: 1742779 bytes, checksum: bdad0a86938bf149e3128fa15a41e2c9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-02-03T15:39:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tamiris Augusto Marinho - 2013.pdf: 1742779 bytes, checksum: bdad0a86938bf149e3128fa15a41e2c9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-03T15:39:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Tamiris Augusto Marinho - 2013.pdf: 1742779 bytes, checksum: bdad0a86938bf149e3128fa15a41e2c9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-01-11 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Hepatitis B virus (HBV) remains a major cause of liver disease worldwide despite vaccination programs implemented over the last decade. Worldwide, it is estimated that 2 billion people are infected with HBV and that more than 240 million are chronically infected. Patients with chronic hepatitis B are at risk for developing liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Recyclable waste collectors have a lifestyle that is characterized by unfavorable social and environmental factors. There is currently very little data on HBV infection in this population. Therefore, the aim of the present study was to investigate the epidemiological profile of HBV infection in a population of recyclable waste collectors in Goiânia-GO. A cross-sectional survey was carried out with 431 individuals who were recruited in all 15 recycling cooperatives in Goiânia-GO. All individuals were interviewed, and their serum samples were tested for the presence of HBV serological markers. HBsAg and anti-HBc-positive samples were tested for HBV-DNA by polymerase chain reaction, and were genotyped by sequencing of the S region. The overall HBV prevalence infection was 12.8% (95% CI: 9.8-16.2). A multivariate analysis of risk factors showed that age >40 years and illicit drug use were independently associated with HBV infection. HBV-DNA was detected in 2/3 HBsAg-positive samples, and in 1/52 anti-HBc-reactive samples, resulting in an occult HBV infection rate of 1.9%. HBV genotypes A (subgenotype A1), D (subgenotype D3) and F (subgenotype F2) were identified. Only 12.3% of this population showed serological evidence of previous hepatitis B vaccination. These findings highlight the need of public health programs to recyclable waste collectors, including the hepatitis B vaccination. / O vírus da hepatite B (HBV) continua a ser uma das principais causas de doença hepática em todo o mundo, apesar dos programas de vacinação implementados ao longo da última década. Estima-se que 2 bilhões de indivíduos já foram expostos ao HBV e mais de 240 milhões estão cronicamente infectados em todo mundo. Os indivíduos com hepatite B crônica apresentam risco elevado para o desenvolvimento de cirrose hepática e carcinoma hepatocelular. Catadores de materiais recicláveis vivem em condições sociais e ambientais precárias. Atualmente, existem poucos dados sobre a infecção pelo HBV nesta população. Portanto, o objetivo geral do presente estudo foi investigar o perfil epidemiológico da infecção pelo HBV em uma população de catadores de materiais recicláveis em GoiâniaGO. Estudo transversal realizado com 431 indivíduos recrutados nas 15 cooperativas de reciclagem em Goiânia-GO. Todos os participantes foram entrevistados e suas amostras de soro testadas para os marcadores sorológicos do HBV. As amostras HBsAg e anti-HBc positivas foram submetidas à detecção do HBV-DNA pela reação em cadeia da polimerase, e genotipadas por sequenciamento da região S. A prevalência global da infecção por HBV foi de 12,8% (IC 95%: 9,8-16,2). A análise multivariada dos fatores de risco mostrou que idade superior a 40 anos e uso de drogas ilícitas foram independentemente associados à infecção pelo HBV. O DNA viral foi detectado em 2/3 amostras HBsAg positivas e em 1/52 amostras anti-HBc reagentes, resultando, assim, em um índice de infecção oculta pelo HBV de 1,9%. Os genótipos A (subgenótipo A1), D (subgenótipo D3) e F (subgenótipo F2) foram identificados. Apenas 12,3% da população mostrou evidência sorológica de vacinação prévia contra hepatite B. Estes achados evidenciam a necessidade de programas de saúde pública voltados para os catadores de materiais recicláveis, incluindo a vacinação contra hepatite B.