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Micobacteriose não tuberculosa pulmonar em hospital de referência no Estado do Pará: espécies mais frequentes, apresentação radiológica e evolução clínica / Pulmonary nontuberculous mycobacteriosis in the State of Pará: most prevalent species, radiological, presentation and follow-upBARRETTO, Adriana Rodrigues 27 December 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013 / As micobactérias não tuberculosas (MNT) estão amplamente presentes no ambiente,
tendo sido isoladas em águas naturais, sistemas de distribuição de água, solo e animais.
Caracterizam-se pela presença de ácido micólico na parede celular. Em geral, são adquiridas
através de inalação de gotículas de água contendo micobactérias. Podem causar formas
variadas de doença como linfadenite, pulmonar, cutânea e disseminada. São patógenos
oportunistas, com patogenicidade variável, que requerem defeitos na imunidade local ou
sistêmica, congênitos ou adquiridos para causar doenças em humanos. Foram avaliados
aspectos epidemiológicos, clínicos e radiológicos de 44 casos de micobacteriose não
tuberculosa na forma pulmonar no Hospital João de Barros Barreto (HUJBB) através de
estudo retrospectivo e foram tratados e acompanhados 21/44 (47,7%) pacientes durante um
período de seis a dezessete meses através de estudo do tipo coorte prospectivo. Os dados
mostraram um incremento de mais de 100% no número de casos a partir do ano de 2010 em
relação aos anos anteriores no HUJBB. As micobactérias mais isoladas foram M.
intracellulare (22,7%) e M. massiliense (20,5%). As condições mais frequentemente
associadas à doença incluíram tratamento prévio para tuberculose (93,2%), bronquiectasias
(59%), HIV (11,4%), asma (9,1%) e doença pulmonar obstrutiva crônica (9,1%). Não foram
observadas diferenças nos aspectos radiológicos entre as espécies, exceto na análise das
radiografias de tórax, onde atelectasias foram mais frequentes nos grupo M. massiliense do
que no grupo de M. abscessus. A resposta ao tratamento de acordo com a análise das culturas
para micobactérias mostrou que em 58,8% dos casos ocorreu negativação, persistência da
positividade em 11,7% e positividade após negativação inicial em 11,7%. Durante o período
de acompanhamento, a taxa de óbito foi de 17,7%. Os dados sugerem que a forma pulmonar
da micobacteriose não tuberculosa tem se tornado uma doença com importância cada vez
maior em nossa região. Adicionalmente, a resposta ao tratamento tem sido bastante
satisfatória quando comparada à literatura. Entretanto, é necessário um seguimento desses
pacientes por período mais prolongado para estabelecer o real desfecho da nossa abordagem
terapêutica. / The nontuberculous mycobacteria are present in environment and has been isolated
from natural waters, soil, animals and water distribution systems. It’s characterized by the
presence of mycolic acid in the cell wall. In general, the disease is acquired through inhalation
of droplets containing mycobacteria. This disease can manifest itself in many ways as
lymphadenitis, pulmonary, cutaneous and disseminated. They are opportunistic pathogens of
variable pathogenicity. Immunity defects, local or systemic, are required to cause disease in
humans. We evaluated epidemiological, clinical and radiological features of 44 cases with
pulmonary nontuberculous mycobacteriosis at Hospital Universitário João de Barros Barreto.
In addition, we treated and followed 21/44 (47,7%) patients during a period of six to
seventeen months in a prospective cohort study. There was an increase more than 100% in the
number of cases in 2010 when compared to previous years. The most frequently isolated
mycobacterias were M. intracellulare (22.7%) and M. massiliense (20.5%). The conditions
associated included previous treatment for tuberculosis (93.2%), bronchiectasis (59%), HIV
(11.4%), asthma (9.1%) and chronic obstructive pulmonary disease (9.1%). In general, there
were no differences between NTM groups in radiological aspects, but when we analyzed
chest radiographs, we found atelectasis more frequently in M. massiliense group vs. M.
abscessus group. When we considered mycobacterial cultures, there was a good treatment
outcome. Negative, persistent positive and positive after an initial negative culture occurred in
58,8%, 11,7% and 11,7% of patients, respectively. During the follow-up period, the death rate
was 17,7%. Our data suggest that of pulmonary nontuberculous mycobacteriosis has become
a disease with increasing importance in our region. Additionally, the response to treatment
performed in major hospital has been quite satisfactory when compared to literature. However,
it is necessary to follow these patients for a longer period to determine the actual success rate
of our therapeutic approach.
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Caracterização antigênica, físico-química e biológica do vírus BE AR 701405, obtido a partir de mosquitos da espécie Psorophora (Jan) ferox, capturados em Altamira – ParáARAÚJO, João Batista dos Santos 26 March 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-03-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O vírus BE AR 701405 foi obtido de um lote de mosquitos da espécie Psorophora (Jan.) ferox, capturados em Altamira, estado do Pará, no ano de 2006. O objetivo deste estudo foi caracterizar físico-química, biológica e antigenicamente o vírus BE AR 701405, com o objetivo de obter dados que auxiliassem sua classificação taxonômica. Camundongos recém-nascidos manifestaram alterações neurológicas, como tremores e ausência de coordenação motora, após a infecção pelo vírus BE AR 701405. O vírus praticamente não determinou efeito citopático (ECP) nas células de Aedes albopictus, clone C6/36, entretanto, causou ECP em células Vero com aproximadamente 48 horas pós- infecção. O título do vírus obtido foi de 10-4,1 DL50/ 0,02 mL e o título após a ação do DCA foi de 10−2,6 DL50/0,02 mL. O vírus BE AR 701405 reagiu antigenicamente com o soro hiperimune do Virus Pixuna. Portanto, o vírus BE AR 701405 é sensível ao DCA o que indica que é um vírus envelopado. Ele é um membro do grupo antigênico A, do gênero Alphavirus, família Togaviridae, relacionado ao Virus Pixuna. Camundongos recém-nascidos e células Vero e C6/36 são suscetíveis à infecção pelo vírus BE AR 701405. Estudos posteriores são necessários para esclarecer o relacionamento antigênico do vírus BE AR 701405 com o Virus Pixuna. / The BE AR 701405 virus was isolated from a pool of Psorophora (Jan.) ferox mosquitoes captured in the municipality of Altamira, Para state, Northern Brazil, in 2006. The objective of this study was the physicochemical, biological and antigenic characterization of the BE AR 701405 virus in order to provide data for it taxonomic classification. Newborn mice inoculated by intracerebral route showed evidences of neurological manifestations, such as chill and motor disorders after the infection with the virus BE AR 701405. Cytophatic effect (CPE) was in infected Aedes albopictus C6/36 cells was not clearly observed, however in VERO cells CPE was observed after 48 hors post infection. The virus load was determined in 10-4,1 LD50/ 0.02 mL and the titer after DCE analysis was calculated in 10−2,6 LD50/0,02 mL. The BE AR 701405 virus reacted antigenically with Pixuna virus hiperimmune serum. In conclusion, the studied vírus was sensible to the DCA solvent suggesting that it is an enveloped virus. Furthermore, by serology this virus was identified as a member of the group A, genus Alphavirus, family Togaviridae, more closely related to Pixuna virus. In addition, newborn mice, as well as C6/36 and VERO cells demonstrated to be sensible to the infection by the BE AR 701405 vírus. Further studies are needed to better understand the antigenic relationship between the BE AR 701405 virus and Pixuna virus.
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Caracterização molecular de Klebsiella pneumoniae produtoras de ß-lactamases de espectro ampliado e Carbapenemase tipo KPC isoladas de pacientes hospitalizados em Belém, estado do ParáMARQUES, Patrícia Bentes 13 December 2016 (has links)
Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-04T12:06:25Z
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Previous issue date: 2016-12-13 / A resistência aos antimicrobianos em bactérias da família Enterobacteriaceae está aumentando de forma alarmante no mundo todo. As K. pneumoniae constituem um importante grupo de patógenos humanos, causadores de infecções hospitalares e comunitárias. Nestas bactérias, a produção de beta-lactamases é um dos principais mecanismos de resistência aos antimicrobianos e responsável pela falha da terapia antimicrobiana. Este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização molecular de espécimes de K. pneumoniae produtoras de ESBL e KPC quanto a resistência aos antimicrobianos em pacientes hospitalizados em Belém-PA. Foram analisadas 124 espécimes de K. pneumoniae oriundas de um hospital público de Belém-Pará. Foram realizadas nesses espécimes testes de suscetibilidade a antimicrobianos, testes fenotípicos para detecção de betalactamases de espectro ampliado (ESBL) e K. pneumoniae produtora de carbapenemase (KPC). Posteriormente foram realizadas reações de cadeia de polimerase (PCR) e o sequenciamento de DNA para identificar os genes determinantes de resistência aos antimicrobianos. Foi observado que 83% dos isolados apresentaram o gene bla CTX-M, 85,5% o bla SHV, 83% o bla TEM e 5% o gene bla KPC. Quanto aos genes que codificam ESBL o gene bla CTX-M-71 foi isolado com maior freqüência e foi identificado em 60% dos isolados analisados. Os outros genes que codificam ESBL foram bla SHV-38 (5%), bla SHV-100 (5%) and bla SHV-12 (3,5%). O gene bla KPC-2 foi detectado em 100% dos isolados. Estas enterobactérias apresentaram fenótipos de multidroga resistência com elevados níveis para os quinolonas e aminoglicosideos. Foram observadas associações entre os genótipos e à resistência aos antibióticos. A presença de micro-organismos multirresistentes em unidades hospitalares reforça a necessidade de medidas para a rápida contenção de possíveis infecções causadas por esses patógenos. / The antimicrobial resistance in Enterobacteriaceae is increasing worldwide. The K. pneumoniae constitute an important group of human patogen, causing of hospital and communitarian infections. In these bacteria, the production of extended spectrum beta-lactamases (ESBL) is one of the main mechanisms of resistance the antimicrobials, responsible for the imperfection of the therapy against infections for gram-negative bacilli. This work aimed to do the molecular characterization of the K. pneumoniae producing ESBL and KPC about antimicrobial resistence in pacients from Belém-PA. A total of 124 K. pneumoniae isolates were collected from public hospital from Belém-PA and susceptibility test was performed to detect its susceptibility patterns antibiotics. Phenotypic tests for extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) and carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae (KPC) producing strains were performed to detect the resistance phenotype of the isolates. Then PCR amplification and sequencing analysis were performed for the drug resistance determinants genes. The results showed that 83% strains harbored bla CTX-M gene, 85,5% carried bla SHV , 83% carried bla TEM and 5% carried bla KPC. The most frequent gene ESBL detected was bla CTX-M-71, which was observed in 60% of isolates. Other ESBL genes were bla SHV-38 (5% of isolates), bla SHV-100 (5% of isolates) and bla SHV-12 (3,5% of isolates). O gene bla KPC-2 was detected in 100% of isolates.These enterobacterias showed multidrug resistance phenotypes with high levels for quinolones and aminoglycosides. Associations between genotypes and antibiotic resistance were observed.The presence of multidrug resistant micro-organisms in hospitals, reinforces the need for measures for rapid containment of possibles infections caused by these pathogens.
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Neuropatologia experimental induzida pelos Rabdovírus Itacaiunas e Curionopolis: um estudo da resposta imune inataBARRETO, Leilane de Holanda 14 April 2011 (has links)
Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-20T15:56:14Z
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Previous issue date: 2011-04-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Muitos esforços têm sido dedicados para o entendimento da neuropatogênese das encefalites virais a partir de trabalhos experimentais. Porém, poucos estudos investigaram a neuropatologia experimental de rabdovírus amazônicos, como a induzida pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, recentemente agrupados em um novo gênero denominado Bracorhabdovirus, proposto para a família Rhabdoviridae. Esses vírus apresentam tropismo por neurônios do SNC de camundongos neonatos infectados experimentalmente, entretanto, pouco se conhece a respeito da resposta imune do SNC contra esses agentes. O presente trabalho analisou aspectos da resposta imune de células residentes do SNC de camundongos neonatos, após infecção experimental pelos vírus Itacaiunas e Curionopolis, in vivo e in vitro. Para alcançar esses objetivos, foram utilizadas técnicas histoquímica e imunohistoquímica para detecção de microglias ativadas e astrócitos, respectivamente, em secções de cérebros de camundongos infectados. A quantificação das células ativadas foi realizada em regiões do hipocampo, utilizando técnicas estereológicas. Além disso, foi investigada a expressão de citocinas pró e antiinflamatórias produzidas por células do SNC em cultivos primários infectados com os vírus Itacaiunas e Curionopolis por ensaios imunoenzimáticos (ELISA), a partir de sobrenadantes de co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios e de astrócitos/neurônios. Foi também analisada a expressão de óxido nítrico por citoquímica utilizando o reagente DAF-FM diacetato (4-amino-5-methylamino-2,7′-difluorofluorescein diacetate). Os resultados mostraram que cérebros de camundongos infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i. e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. apresentaram discreta ativação microglial, porém, em camundongos infectados com o vírus Curionopolis 5d.p.i houve intensa ativação. A imunohistoquímica revelou marcação de poucos astrócitos em animais infectados com os vírus Curionopolis 2d.p.i e Itacaiunas 4 e 7d.p.i. no hipocampo. Por outro lado, nos camundongos infectados com Curionopolis 5d.p.i., houve aumento de astrócitos, principalmente na região da fissura hipocampal. Os resultados obtidos a partir dos ensaios imunoenzimáticos mostraram que houve grande produção de IL-12p40 nas culturas de células do SNC infectadas com os vírus, 48 e 96h.p.i. Baixos níveis de TGF-β foram detectados após 48 horas de infecção com os vírus em estudo, no entanto, observou-se aumento da expressão dessa citocina após 96h.p.i. Também foi demonstrado, com 48 horas de infecção, baixos níveis da citocina IL-10, aumentando após 96 horas para ambos os vírus, principalmente nas co-culturas enriquecidas de microglias/neurônios infectados pelo vírus Itacaiunas. Culturas de células do SNC infectadas com os vírus Itacaiunas 48 e 96h.p.i. e Curionopolis 48h.p.i. mostraram discreta produção de óxido nítrico, porém houve aumento nessa produção em culturas infectadas com o vírus Curionopolis 96h.p.i. Esses resultados sugerem que há predominância de uma resposta pró-inflamatória nos tempos iniciais da infecção para ambos os vírus e uma tentativa de modulação dessa resposta com a produção de citocinas antiinflamatórias nos tempos tardios. / Experimental studies are making many efforts to understand the neuropathogenesis of viral encephalitis. However, a few is known about the Central Nervous System (CNS) response against amazonic rhabdovirus. The virus Itacaiunas e Curionopolis were classified preliminary as members of the Rhabdoviridae family. It was suggested for these virus to be included in a new genus, Bracorhabdovirus. They are neurotropic virus and little is known about the inflammatory response of the CNS against these virus. This study examined aspects of the immune response of newborn mice CNS resident cell after experimental infection by Itacaiunas and Curionopolis virus, in vivo and in vitro. To achieve these goals, histochemical and immunohistochemical techniques were used to detect activated microglia and astrocytes, respectively, in sections of the brains of infected mice. The quantification of these cells were performed in hippocampal regions using stereological techniques. Furthermore, was investigated the expression of proinflammatory and anti-inflammatory cytokines produced by CNS cells in primary cultures infected with virus Itacaiunas and Curionopolis by using enzyme immunoassay (ELISA) from supernatants co-cultures enriched of microglia/neurons and astrocytes/neurons. The expression of nitric oxide was also analyzed by using cytochemical reagent DAF-FM diacetate (4-amino-5-methylamine-2,7-difluorofluorescein-diacetate). As a result, age matched control animals of each group did not present activated microglia or astrocytosis, as well as, both Curionopolis and Itacaiunas infected subjects early after the inoculation (2d.a.i. and 4d.a.i respectively). However at 5th d.a.i., Curionopolis infections significant increase in the number of activated microglias and reactive astrocytes were detected whereas at the 7th d.a.i. after Itacaiunas infection only minimal activation of microglia and reactive astrocytosis was detected. The results from immunoassays showed great production of IL-12p40 in cultures of CNS cells infected with both virus, 48 and 96 hours after infection (h.a.i.). Low levels of TGF-β and IL-10 were detected after 48 hours of infection with both virus, however, was observed increased expression of this cytokines after 96 hours. CNS cell cultures infected with Curionopolis virus 48h.p.i. and Itacaiunas virus 48 and 96h.a.i. showed a slight production of nitric oxide, but it was increased in cultures infected with Curionopolis virus 96h.a.i. These results suggest that the proinflammatory response is dominant in both virus, however, it seems that the anti-inflammatory cytokines try to modulate the inflammatory response of the late days pos-inoculation.
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Imunopatogenia da interação entre acrófagos e/ou células de Langerhans e Lacazia loboiYAMANO, Suellen Sirleide Pereira 24 April 2014 (has links)
Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-10-24T21:35:18Z
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Previous issue date: 2014 / A lobomicose é uma infecção subcutânea crônica, granulomatosa, causada pela implantação traumática do fungo Lacazia loboi nos tecidos cutâneo e subcutâneo. Ocorre predominantemente na região Amazônica e atinge qualquer grupo populacional. Histologicamente, observa-se reação inflamatória crônica caracterizada por intensa
histiocitose e fibroplasia, abundante número de macrófagos, células gigantes multinucleadas
do tipo corpo estranho e presença de considerável número de células leveduriformes. Os
macrófagos são células fagocíticas que participam do reconhecimento e da resposta a
patógenos através da fagocitose, da apresentação de antígenos aos linfócitos T e da produção
de citocinas. As células de Langerhans (LC) são um grupo de Células dendríticas (CD)
derivadas da medula óssea situadas principalmente em uma camada suprabasal da epiderme.
Estudos envolvendo a interação fungo-hospedeiro na doença de Jorge Lobo são escassos.
Assim, Este estudo é um passo importante para o melhor entendimento da biologia e
patogenia do L. loboi, e para o estudo da imunopatologia da interação patógeno versus
hospedeiro desta doença emergente e pouco conhecida. O objetivo do presente trabalho foi
analisar a interação in vitro entre macrófagos peritoneais não ativados e/ou LC, isolados de
camundongos BALB/c, com L. loboi recém-isolado de pacientes com doença de Jorge Lobo,
bem como determinar os índices de infecção, fagocitose e fusão, e medir a produção das
citocinas TNF-α, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12. Os resultados demonstraram que L. loboi é
fagocitado por macrófagos, mas não por LC. O índice de infecção na interação entre
macrófagos e L. loboi foi semelhante à interação entre macrófagos, LC e L. loboi em todos os
tempos analisados. A média do número de fungos por macrófago também foi praticamente
igual entre as interações e ao longo do tempo, variando de 1,2 a 1,6 fungos/macrófagos. Não
houve a formação de células gigantes em macrófagos cultivados ou LC cultivadas
isoladamente e em nenhum dos co-cultivos. Não houve diferença significante na produção de
IL-4, IL-2 e IL-10 nas interações estudadas. Os níveis de TNF-α diminuem ao longo do
tempo na interação entre macrófagos e L. loboi, enquanto a adição de LC induz aumento da
produção de TNF-α, principalmente após 48 horas. LC modulam negativamente a produção
de IL-6 por macrófagos e L. loboi também inibem essa produção por macrófagos
isoladamente ou em co-cultivo com LC. L. loboi estimulam significativamente a produção de
IL-12 por macrófagos co-cultivados com LC, mas não em LC ou macrófagos isoladamente. / Lobomycosis is a chronic, granulomatous, fungal infection of the skin and
subcutaneous caused by the fungus Lacazia loboi. This mycosis occurs predominantly in
Amazon region and affect all populations groups. Histologically, there is a chronic
inflammatory reaction characterized by the intense fibroplastia and histiocytosis, abundant
number of macrophages, multinucleated giant cells and presence of large numbers of yeast.
Macrophages are phagocytic cells that participate in the recognition and response to
pathogens through phagocytosis, antigen presentation to T lymphocytes and cytokine
production. Langerhans cells (LC) are a group of dendritic cells (DC) derived from bone
marrow, which are located mainly in the suprabasal layer of the epidermis. Studies on hostfungal
interaction in Jorge Lobo's disease are scarce. Therefore, this study constitutes an
important step towards a better understanding of L. loboi biology and pathogenesis, enabling
in vitro culture of this organism endemic in Amazon region and study of their antigenic
properties, as well as new therapeutic approaches. The objective of this study was to analyze
the in vitro interaction between non-activated peritoneal macrophages and/or Langerhans cells
isolated from BALB/c mice and L. loboi, calculating infection, phagocytosis and cellular
fusion rates; also measuring the production of TNF, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12. Results
showed that L. loboi is phagocytosed by macrophages but not by LC. Phagocytosis and
infection rates in the interaction between macrophages and L. loboi was similar to interaction
between macrophages, Langerhans cells and L. loboi at all times analyzed. The mean number
of yeast cell per macrophage was almost equal among interactions and over time, with mean
variation from 1.2 to 1.6 yeast/macrophages. No giant cells formation in coculture studied. No
significant difference occurred in IL-4, Il-2 and IL-10 production between interactions
studied. TNF levels decrease in interaction between macrophages and L. loboi while adding
LC induces increased production of TNF-α, especially after 48 hours. LC negatively modulate
IL-6 production by macrophage and L. loboi also inhibits this production by macrophages
alone or cocultured with LC. L. loboi stimulated significantly IL-12 production by
macrophages co-cultured with LC, but not for LC alone or macrophages.
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Replicação viral, padrão de expressão de citocinas e cinética de morte celular em cultura primária de células neurais infectadas pelo vírus rocioSOUTO, Adriano da Paixão 13 July 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-07-13 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os arbovírus pertencentes ao gênero Flavivirus (Família Flaviviridae) são responsáveis por considerável morbi-mortalidade, podendo causar quadros graves de encefalite, febre hemorrágica, hepatite e doença febril em vertebrados, incluindo humanos. O flavivírus Rocio (VROC) é de grande importância para a saúde pública no Brasil, pois representa uma grave ameaça de ocorrência de súbitos surtos de encefalite. A imunopatologia das encefalites causadas por flavivírus ainda não está completamente esclarecida e muitos aspectos inerentes à modulação das respostas imunes do SNC carecem por ser desvendados. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi analisar o padrão de expressão gênica de citocinas em cultura primária de células neurais submetidas à infecção pelo vírus Rocio. Culturas primárias mistas (neurônio/glia), obtidas a partir de cérebros de camundongos isogênicos neonatos da linhagem BALB/c, foram inoculadas com o VROC (MOI igual a 2) no sétimo dia de cultivo, a confirmação da infecção foi feita por imunocitoquímica (anti-VROC). Quantificou-se a replicação viral nas culturas primárias infectadas, em função do período infeccioso, pelo método da titulação viral. O RNA celular total foi extraído e utilizado para a detecção de citocinas através da técnica de RT-qPCR em tempo real. O estudo demonstrou que cultura primária de células neurais constitui um bom modelo experimental para estudo de infecções do SNC pelo flavivírus Rocio. O VROC infectou eficientemente a cultura primária de células neurais gerando alterações citopatogênicas a partir do 2º dia p.i., momento em que se detectou maior título viral. A cultura primária infectada com o VROC sobreviveu até 7 dias p.i. e a quantificação da carga viral revelou uma cinética de replicação viral compatível com a cinética de morte celular da cultura infectada pelo VROC. Durante os cinco primeiros dias p.i. da cultura primária, houve redução da expressão gênica de INF-α, INF-β, INF-γ e IL-1β, não houve alteração na expressão de TNF-α e houve aumento na expressão de TGF-β no 1º, 3º e 5º dia p.i. Os achados deste estudo sugerem que o VROC tem a capacidade de regular negativamente a expressão de citocinas moduladoras das respostas imunes antivirais e inflamatórias e que, neste modelo experimental, a imunorregulação exercida pelo TGF-β predomina sobre a modulação das respostas imunes antivirais e inflamatórias, sendo necessários maiores estudos para elucidar a imunopatologia da infecção do SNC pelo VROC. / Arboviruses belonging to the genus Flavivirus (Flaviviridae family) are responsible for considerable morbidity and mortality, may cause severe cases of encephalitis, hemorrhagic fever, hepatitis and febrile disease in vertebrates, including humans. Rocio flavivirus (ROCV) is very important for public health in Brazil, as it represents a serious threat of occurrence of sudden encephalitis outbreaks. The immunopathology of encephalitis caused by flavivirus is not yet fully understood and many aspects involved in modulation of immune responses in the CNS need to be unraveled. Thus, the aim of this study was to analyze the pattern of gene expression of cytokines in primary culture of neural cells when exposed to infection with Rocio. Mixed primary cultures (neuron/glia), obtained from the brains of BALB/C lineage isogenic newborns mice were inoculated with ROCV (MOI equal to 2) on the seventh day of culture and confirmation of infection was made by immunocytochemistry (anti-VROC). Viral replication was quantified in infected primary cultures, depending on the infectious period, by viral titer method. Total cellular RNA was extracted and used for detection of cytokines by real time RT-qPCR techniques. The study showed that primary cultures of neural cells is a good experimental model for the study of CNS infections by Rocio flavivirus. ROCV efficiently infected the primary cultured neural cells leading to cytopathic changes from the 2nd day a.i., when it detected the higher viral titer. The ROCV-infected primary culture survived up to 7 days a.i. and quantification of viral load showed a viral replication kinetics compatible with cell death kinetics of culture infected by ROCV. During the first five days a.i. of the primary culture, there was reduction of IFN-α gene expression, IFN-β, IFN-γ and IL-1β, there was no change in TNF-α expression and there was an increase in TGF-β expression in the 1st, 3rd and 5th day a.i.. The findings of this study suggest that ROCV has the ability to downregulate modulators cytokines of antiviral and inflammatory immune responses and, in this experimental model, immunoregulation exerted by TGF-β predominates over the modulation of inflammatory and antiviral immune responses, larger studies are needed to elucidate immunopathology of CNS infection by ROCV.
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Relação entre níveis de células T CD4+ e pressão seletiva nos genes env e vif do HIV-1 subtipos B e CPEREIRA, Raimundo Cristovão Ferreira 31 August 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-08-31 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudos anteriores mostraram haver uma relação direta entre níveis de linfócitos T CD4+ e taxas evolutivas do HIV-1 (DIAZ et al., 2008; LEMEY et al., 2007; NOSTROM et al., 2014). Além disso, outros fatores também afetam a variabilidade do no gene env: por exemplo ação de anticorpos neutralizantes - Nabs (FROST et al., 2005), a variação nos sítios de glicosilação (LEAL et al., 2012; LEAL et al., 2008), a ligação nos receptores da célula alvo (i.e., CD4, CXCR4, CCR5), e ainda, a escolha dos receptores CCR5 para CXCR4 (MILD et al., 2013). Com isso a relação entre diversificação viral e níveis células T CD4+ no gene env pode ser circunstancial. O gene vif, por outro lado, é mais conservado e não sujeito ao viés presente no gene env (i.e., sítios de glicosilação, etc.). Assim, para estudar a influência dos níveis de células T CD4+ na variabilidade do HIV, foi usado a estimativa do regime seletivo (dN e dS) através do modelo de códons e análise filogenética de indivíduos não relacionados (inter-hospedeiro). Foram utilizadas sequências do HIV-1 de indivíduos não correlacionados, obtidas a partir do banco de dados de Los Alamos. As sequências foram separadas em categorias de níveis de linfócitos T CD4, e posteriormente analisadas. A análise mostrou não haver relação direta entre os níveis de células T CD4+ e as taxas evolutivas em gp120 e no gene vif do HIV-1 dos subtipos B e C em uma abordagem populacional. / Previous studies have shown a direct relationship between levels of CD4+ Tlymphocytes and evolutionary rates of HIV-1 (DIAZ et al, 2008; LEMEY et al, 2007; NOSTROM et al, 2014.). Other factors also affect the variability of the env gene: for example function of neutralizing antibodies - Nabs (FROST et al., 2005), the variation in glycosylation sites; (LEAL et al, 2012 LEAL et al., 2008), binding to target cell receptors (i.e, CD4, CXCR4, CCR5), and also the switch from CCR5 to CXCR4 receptor (MILD et al., 2013). Thus, the relationship between viral levels diversification and CD4 + T cells in the env gene can be circumstantial. The vif gene, on the other hand, it is retained and not subject to bias present in the env gene (i.e, glycosylation sites, etc.). Thus, to study the influence of CD4 + T cells levels in HIV variability, the estimate of the selective regimes was used (Nonsynonymous Substitutions - dN and Synonymous Substitutions - dS) by a codon-based model and phylogenetic analysis of unrelated individuals (inter-host). HIV-1 sequences were used of the not-correlated individuals, obtained from the Los Alamos Database. The sequences were separated into CD4+ levels of categories and then analyzed. The analysis revealed no direct correlation between CD4+ T cell levels and evolutionary rates in gp120 and vif gene from HIV-1, subtypes B and C in a population approach.
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Isolamento e cultivo in vitro do agente etiológico da Doença de Jorge Lobo: morfologia, fisiologia e genoma de Candida loboi sp. novCOSTA, Patricia Fagundes da 18 December 2015 (has links)
Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-22T12:43:50Z
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Previous issue date: 2015-12-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / FADESP - Fundação de Amparo e Desenvolvimento da Pesquisa / A Doença de Jorge Lobo é uma infecção crônica, granulomatosa, que se desenvolve após a implantação traumática do fungo na pele. Manifesta-se com lesões nodulares, verrucosas e/ou queloidiformes, localizadas principalmente nos membros inferiores e pavilhões auriculares. Doença prevalente na região Amazônica e, atualmente considerada como emergente, com casos novos em outros continentes em humanos e golfinhos. Pouco se conhece sobre o agente etiológico da doença de Jorge Lobo, principalmente pela impossibilidade do cultivo in vitro, dificultando a caracterização correta do agente. Este trabalho teve como objetivo isolar, cultivar e caracterizar cepas do agente etiológico da doença de Jorge Lobo provenientes de pacientes atendidos na Unidade de Referência em Dermatologia Sanitária do Estado do Pará Dr. Marcello Candia, Marituba no estado do Pará. Durante alguns anos foram acompanhados 23 pacientes, a maioria lavradores do sexo masculino, entre 14 e 80 anos de idade, com material biológico coletado por raspado dérmico e biópsia, para confirmação do diagnóstico pelo exame micológico direto e histopatologia, com posterior tratamento. O material biológico coletado foi processado para o isolamento, com a obtenção de células leveduriformes características do agente etiológico da doença de Jorge Lobo após 7 a 14 dias em meio RPMI com a enzima dispase II. Depois de 2 a 6 meses em RPMI (5% CO2, 37ºC) observamos a fragmentação das células-mãe provenientes das lesões e a presença de células leveduriformes, variando de 1 a 7 μm de diâmetro. A partir deste momento, foi possível manter as cepas do agente etiológico da doença de Jorge Lobo em meio líquido RPMI ou em ágar Sabouraud-dextrose à temperatura ambiente, onde formaram colônias pastosas, branco-acastanhadas, cerebriformes, por vezes lanuginosas. Células destas cepas foram analisadas por diferentes técnicas de microscopia óptica e eletrônica, bioquímicas e genéticas, culminando com a descrição do genoma da cepa de um paciente, logo após o isolamento enzimático e antes da diferenciação em cultura, definindo aseguinte identificação taxonômica:Eukaryota; Fungi; Dikarya; Ascomycota; Saccharomycotina; Saccharomycetes; Saccharomycetales; Debaryomycetaceae; Candida/Lodderomyces clade; Candida; Candida sp. LDI48194. A apresentação de características clínicas peculiares, associada a aspectos morfológicos únicos, propriedades fisiológicas e genéticas, que não permitem a definição de uma espécie já identificada, indicam que o agente da doença de Jorge Lobo é, na realidade, uma nova espécie, para a qual propomos a nomenclatura de Candida loboi. / Jorge Lobo’s disease is a chronic granulomatous infection developing after traumatic implantation of the fungus in the skin. It presents with nodular, verrucous or keloid-like lesions mainly on legs and ears. The highest prevalence is at Amazon Region and it has been considered an emergent disease, presenting new cases on other continents in both, humans and dolphins. Little is known about L. loboi, and the absence of in vitro culture impairs the correct characterization of the fungus. This work had as the main goal to isolate, culture and characterize strains of the etiological agent of Jorge Lobo´s disease, obtained from patients attended at the Dr Marcello Candia Reference Unit in Sanitary Dermatology of the State of Pará, in Marituba, Pará, Brazil. During many years 23 patients were diagnosed and followed by our team. Most of them were male farmers, with age varying from 14 to 80 years-old. After biopsy of the lesion for confirming the diagnosis, the patients initiated treatment and the material was processed with dispase II at liquid medium RPMI, 37º C, 5% CO2 for 1-2 weeks to isolate yeast cells from human tissue. After 2-6 months in the medium, we observed fragmentation of mother cells and the presence of new yeast cells with diameter varying from 1 to 7μm. From that moment, it was possible to grow the strains in different liquid or solid mediums at 37º C or RT, where creamy, whitish cerebriform, sometimes hairy colonies were observed. Cells from those strains were analyzed by different techniques of optical and electron microscopy, biochemistry and genetics, ending with the description of the genome of one patient just after isolation of the fungal cells from the lesional skin, defining the following taxonomic identification: Eukaryota; Fungi; Dikarya; Ascomycota; Saccharomycotina; Saccharomycetes; Saccharomycetales; Debaryomycetaceae; Candida/Lodderomyces clade; Candida; Candida sp. LDI48194. The peculiar clinical presentation associated to unique morphological, physiological and genetic characteristics that do not permit the definition of a known species indicate that the etiological agent of Jorge Lobo’s disease is a new species, for which we propose to use the name Candida loboi.
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Imunoreatividade para os receptores de neurotrofinas P75NTR e TrkA na zona subventricular de ratos adultos após isquemia estriatalTAVARES, Patrycy Assis Noronha 21 August 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-08-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / Neurotrofinas são fatores de crescimento expressos por células do Sistema Nervoso, tanto durante o desenvolvimento quanto na vida adulta. O Fator de Crescimento Nervoso (NGF, do inglês- Nerve Growth Factor), o Fator Neurotrófico derivado do Cérebro (BDNF- do inglês- Brain-derived Neurotrophic Factor), Neurotrofina-3 (NT-3) e Neurotrofina-4/5 (NT-4/5), desempenham inúmeras funções relacionadas a maturação e resposta do tecido nervoso à patologias, como o Acidente Vascular Encefálico (AVE). Nesta condição, o aumento da expressão das neurotrofinas pode interferir no grau de neurogênese na Zona sub-ventricular (SVZ), bem como redirecionar a corrente migratória das Células-tronco Neurais Adultas (CTNAs) para a região isquêmica. A presença dos receptores de neurotrofinas p75NTR e TrkA, em CTNAs da SVZ, indica que eles podem participar na regulação da neurogênese nessa região. Neste trabalho, descrevemos a influência de uma isquemia experimental, através de uma microinjeção do peptídeo vasconstritor Endotelina-1, restrita ao estriado adjacente à SVZ; sobre o padrão de imunoreatividade para os receptores p75NTR e TrkA em diferentes tempos de sobrevida. Foi analisado o padrão histopatológico do estriado isquêmico e a citoarquitetura da SVZ, seguidos de análises imunoistoquímicas para os receptores. Inúmeras células p75NTR + foram encontradas na SVZ contra e ipsilateral ao sítio de injeção, ocorrendo uma redução de imunorreatividade no primeiro e terceiro dia após a isquemia. Raríssimas células TrkA+ foram encontradas na SVZ de ambos os grupos, porém, observamos inúmeros terminais axonais TrkA+ na SVZ ipsilateral a isquemia. Logo, após o processo isquêmico, houve espessamento da SVZ, concomitante à redução da imunorreatividade para o p75NTR e surgimentos de terminais axonais TrkA+. / Neurotrophins are growth factors expressed by cells of the nervous system both during development and in adulthood. The Nerve Growth Factor (NGF, the English- Nerve Growth Factor), brain-derived neurotrophic factor (English- BDNF- of Brain-Derived Neurotrophic Factor), Neurotrophin-3 (NT-3), Neurotrophin-4/5 ( NT-4/5), have many functions related to aging and response of nervous tissue to the pathology such as vascular accident (CVA). In this pathology, the increase of the neurotrophin expression can interfere with the degree of neurogenesis in the sub-ventricular zone (SVZ) and redirect the rostral migratory flow of Adult Neural Stem Cells (CTNAs) to the ischemic region. The presence of neurotrophin receptors TrkA and p75NTR in the CTNAs of SVZ indicates that they may participate in the regulation of neurogenesis in this region. Here we describe the influence of an experimental ischemia by microinjection of a vasconstritor Endothelin-1 peptide, which is restricted to the striatum adjacent SVZ; on the pattern of immunoreactivity for TrkA and p75NTR receptors in different survival times. The histopathological pattern of ischemic striatum and the cytoarchitecture of the SVZ, followed by immunohistochemical analysis to the receptors were analyzed. Numerous p75NTR + cells were found in the ipsilateral SVZ and against the injection site, with had a reduction in immunoreactivity at first and third day after ischemia. Few TrkA + cells were found in SVZ of both groups, however, many TrkA + axonal terminals were saw in the ischemic ipsilateral SVZ. Soon after the ischemic process, there was thickening of the SVZ, the concomitant reduction in immunoreactivity for p75NTR and TrkA + arisings of axonal terminals.
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Efeito de fungos da podridão branca sobre a qualidade nutricional de resíduos agroindustriais ligninocelulósicos / Effect of white rot fungi on the nutritional quality of lignocellulosic agroindustrial residuesBento, Cláudia Braga Pereira 30 April 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-04-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The increase in world population demands ever more food and consumer goods, with a consequent increase in the production of agroindustrial residues natives from logging, alcohol fuel plants and industries for beneficiary eligibility of agricultural products. Several studies have demonstrated the potential of white rot fungi to decompose of lignocellulosic substrates, but the use of such residues in ruminant diets has not been properly examined. The objective of this study was to determine the chemical composition and in vitro digestibility of agroindustrial residues (eucalyptus bark, sawdust, sugarcane bagasse, corn kernels, coffee bark, coconut fiber and lump of cotton) inoculated with white rot fungi (Pleurotus ostreatus and Lentinula edodes), and determine the activity of cellulase, xylanase and laccase in ruminal fluid incubated in vitro with corn kernels or sugarcane bagasse ground at different particle sizes. When the residues were treated with L. edodes the content of CP in eucalyptus bark increased 91 % and 78 % in the treatments added with rice bran or urea, respectively. The content of ADL decreased 70% in fructified sawdust added with rice bran compared to the controls. The NDF of sugarcane bagasse decreased 5 % when added with rice bran and 21 % when added with urea. When the residues were treated with P. ostreatus the levels of CEL and ADL of eucalyptus bark decreased 22 % and 137 %, respectively. With sawdust, the concentrations of NDF and ADF decreased 19 % and 27 %, respectively, after fruit body formation. The EE increased 402 % in sugarcane bagasse treated with P. ostreatus. With corn kernels, the content of ash increased 130 % compared to controls in the treatment showing fruit body formation. There was a reduction of 60 % in the LDA content of coffee barks after fructification. Fungus fructification in the coconut fiber reduced the levels of LDA and CEL in 25 % and 20 %, respectively. There were no significant differences between treatments for CP, ADF, CEL, HEM and ADL contents in the lump of cotton. However, there was significant difference in IVDMD between the enriched fructified substrates treated with L. edodes. An average increase 111 % and 98 % was observed for the fructified fungus added with rice bran or urea, respectively, compared to controls. The biggest increase in IVDMD after fructification in residues treated with P. ostreatus was obtained for the eucalyptus bark (200 %), followed by corn kernels (67 %) and sugar cane bagasse (13 %). The highest cellulase activity in corn kernels residues was obtained when using particles with a diameter of 0.6 mm. The xylanase activity was higher than the activity of cellulase for all treatments and sizes of particles tested. The particle size of 0.6 mm in the inoculated treatment yielded maximum xylanase activity after 48 hours of incubation (118.17 U/mL). The activity of cellulase in sugarcane bagasse was superior for all treatments and particle sizes when compared to corn kernels residues. The highest activity of xylanase (78.89 U/mL) in the fructified sugarcane bagasse was obtained after 48 hours of incubation and particles size of 0.6 mm. The changes in chemical composition and IVDMD showed that L. edodes (UFV 73) and P. ostreatus (PLO 06) could improve the nutritional quality of ruminant rations by increasing the content of CP and IVDMD and reducing the levels of NDF, ADF and ADL of agroindustrial residues, allowing its use in ruminant rations. / O aumento da população mundial demanda cada vez mais alimentos e bens de consumo, com conseqüente aumento na produção de resíduos agroindustriais oriundos de madeireiras, usinas de álcool combustível e indústrias de beneficiamento de produtos agrícolas. Diversos estudos têm demonstrado o potencial de fungos da podridão branca em decompor substratos ligninocelulósicos, mas a utilização desses resíduos na alimentação de ruminantes ainda tem sido pouco explorada. O objetivo deste trabalho foi determinar a composição bromatológica e a digestibilidade in vitro de resíduos agroindustriais (casca de eucalipto, serragem de eucalipto, bagaço de cana-de-açúcar, sabugo de milho, casca de café, fibra de coco e casca de caroço de algodão desengordurado) inoculados com fungos causadores da podridão branca (Pleurotus ostreatus e Lentinula edodes), assim como determinar a atividade enzimática de celulase, xilanase e lacase em três diferentes tamanhos de partículas dos resíduos sabugo de milho e bagaço de cana-de-açúcar incubados com líquido ruminal in vitro, visando avaliar o potencial hidrolítico das comunidades microbianas do rúmen. Quando os resíduos foram tratados com L. edodes o teor de PB do resíduo casca de eucalipto aumentou 91 % e 78 % no tratamento enriquecido com farelo de arroz e uréia, respectivamente. O teor de LDA diminuiu 70 % na serragem de eucalipto frutificada e enriquecida com farelo de arroz comparada ao controle. A FDN do resíduo bagaço de cana diminuiu 5 % quando enriquecido com farelo e 21 % quando enriquecido com uréia. Quando os resíduos foram tratados com P. ostreatus os teores de CEL e LDA da casca de eucalipto diminuíram 22 % e 137 %, respectivamente, após o tratamento. Na serragem de eucalipto as concentrações de FDN e FDA diminuíram 19 % e 27 % no tratamento frutificado, respectivamente. O EE aumentou 402 % no tratamento frutificado no bagaço. No sabugo o conteúdo de cinzas aumentou 130 % no tratamento frutificado em relação ao controle. Houve redução de 60 % no teor de LDA da casca de café após a frutificação. A frutificação fúngica reduziu os teores de LDA e CEL em 25 % e 20 %, respectivamente na fibra de coco. Não houve diferenças significativas entre os tratamentos para os teores de PB, FDA, CEL, HEM e LDA no resíduo casca de caroço de algodão desengordurado. Houve diferença significativa na DIVMS entre os enriquecimentos dos resíduos tratados com L. edodes, tendo sido observado aumento médio de 111 % e 98 % quando frutificado e adicionado de farelo de arroz e uréia, respectivamente, em relação ao controle O maior incremento de DIVMS no tratamento frutificado nos resíduos tratados com P. ostreatus foi obtido para a casca de eucalipto (200 %), sabugo de milho (67 %) e bagaço de cana-de-açúcar (13 %). As maiores atividades de celulase no resíduo sabugo de milho foram obtidas quando se utilizou partículas com 0,6 mm de diâmetro. A atividade de xilanase foi maior quando comparada à atividade de celulase em todos os tratamentos e tamanhos de partículas testados. O tamanho de partícula 0,6 mm no tratamento inoculado foi o que apresentou atividade máxima de xilanase após 48 horas de incubação (118,17 U/mL). A atividade de celulase no resíduo bagaço de cana-de-açúcar foi superior em todos os tratamentos e tamanhos de partículas quando comparado ao resíduo sabugo de milho. O tamanho de partícula 0,6 mm apresentou as maiores concentrações de xilanase no bagaço de cana-de-açúcar, tendo sido observado valor máximo após 48 horas de incubação de 78,89 U/mL no tratamento frutificado. As mudanças na composição química e na DIVMS indicam que L. edodes (UFV 73) e P. ostreatus (PLO 06) melhoram o valor nutricional dos resíduos tratados, aumentando o teor de PB e DIVMS e reduzindo os teores de FDN, FDA e LDA dos resíduos agroindustriais, com possibilidade de utilização na alimentação de ruminantes.
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