Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2016-06-15T12:09:43Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 585256 bytes, checksum: 310c60147a1c778e64cbfebb56ea932c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T12:09:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 585256 bytes, checksum: 310c60147a1c778e64cbfebb56ea932c (MD5) Previous issue date: 2015-03-03 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / This research focuses on literature produced by Elisa Lispector, immigrant writer who deals with sensitivity and uniqueness with the problematic of exile as well as the incommunicado in her literary composition. The corpus chosen for analysis is the novel No Exílio, first published in 1948. Considering the autobiographical traits constantly merged with the fiction in the novel, as pointed out by Nadia Battella Gotlib in text that is constitutes the unfinished and autobiographical work Retratos Antigos (2012), by Elisa Lispector, as well as the attempt to narrate Lispector family output a small village in Ukraine, where they lived, trying to escape the violence of the pogroms and the arrival into exile, i. e., in Brazil, in the early twentieth century. The very attempt to communicate this limit-experience and the pain of exile brings itself irrefutable testimonial traits, thus, in the wake of categories that problematize the modern world and its new conjucture permeated by disasters and traumas, seeking the support of Márcio Seligmann-Silva, especially of his studies in História, memória, literatura – o testemunho na era das catástrofes (2013), of Walter Benjamin in em A modernidade e os modernos (2000), of Friedrich Nietzsche in Genealogia da Moral (2012) and of Julia Kristeva com Estrangeiros para nós mesmos (1994), as well as other studies and theorists who have contributed significantly to the development and enrichment of research. / Esta pesquisa está centrada na literatura produzida por Elisa Lispector, escritora imigrante que trata com sensibilidade e singularidade da problemática do exílio e da incomunicabilidade em sua produção literária. O corpus escolhido para a análise é o romance No exílio, publicado pela primeira vez em 1948. Considerando os traços autobiográficos mesclados com a ficção constantes no romance (como aponta Nádia Battella Gotlib em texto que constitui a obra inacabada e autobiográfica Retratos Antigos (2012), de Elisa Lispector), bem como a tentativa de narrar a saída da família Lispector de uma pequena vila na Ucrânia, onde moravam, tentando fugir da violência dos Pogroms e a chegada ao exílio, ou seja, ao Brasil, no início do século XX. Na tentativa de comunicar essa experiência-limite e a dor do exílio a obra traz em si traços testemunhais irrefutáveis. Sendo assim, no esteio de categorias que problematizam o mundo moderno e sua nova conjuntura permeada por catástrofes e traumas, buscamos o apoio de Márcio Seligmann-Silva, principalmente com os estudos constantes em História, memória, literatura – o testemunho na era das catástrofes (2013), de Walter Benjamin em A modernidade e os modernos (2000), bem como suas Obras escolhidas I e II (1987), Friedrich Nietzsche com Genealogia da Moral (2012) e Julia Kristeva com Estrangeiros para nós mesmos (1994), bem como outros estudos e teóricos que contribuíram de maneira significativa para o desenvolvimento e enriquecimento desta pesquisa.

Submitted by RAFAEL TOMODA SATO null (rt.sato@yahoo.com.br) on 2018-03-27T20:29:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL Rafael Sato.pdf: 597893 bytes, checksum: 8e3c7ee0dff2d6c1ba511a0fb8eba69e (MD5) / Rejected by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: No arquivo pdf submetido ao repositório não consta o certificado de aprovação (documento obrigatório). Peço que insira o mesmo no arquivo pdf e depois faça uma nova submissão. Agradecemos a compreensão on 2018-03-28T13:03:19Z (GMT) / Submitted by RAFAEL TOMODA SATO null (rt.sato@yahoo.com.br) on 2018-03-28T13:35:29Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL Rafael Sato.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-03-28T16:48:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sato_rt_me_jabo.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-28T16:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sato_rt_me_jabo.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Pró-Reitoria de Pesquisa (PROPe UNESP) / O principal objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações plasmáticas de 17α,20β-dihidroxi-4-pregnen-3-one (DHP), Estradiol 17β (E2), Testosterona (T) e Prostaglandina F2α (PGF2α) e a distribuição percentual dos diferentes tipos de ovócitos presentes nos ovários ao longo do processo de hipofisação de pacu (Piaractus mesopotamicus) com ou sem uso de PGF exógena. Para isto, 23 fêmeas foram distribuídas em cinco tratamentos, com indução dividida em duas doses com intervalo de 24 horas: (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina) (T1); (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 ml PGF2α) (T2); (0,6 mg.kg-1 EBHC (extrato bruto de hipófise de carpa)) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 mL PGF2α) (T3); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC) (T4); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC e 2 mL PGF2α) (T5). Foram coletadas amostras de sangue e ovócitos para análise dos níveis plasmáticos de PGF2α, DHP, E2 e T e avaliação dos tipos de ovócitos em quatro períodos após a segunda dose. O uso de PGF2α exógena provocou um pico plasmático de PGF2α uma hora após a segunda dose hormonal. A hipofisação, com ou sem o uso de PGF2α exógena, provocou pico plasmático de PGF2α no momento da desova. O uso de PGF2α exógena juntamente hipofisação (T5) eleva a taxa de ovulação de pacu em relação a fêmeas apenas hipofisadas (T4), provavelmente em função de níveis de GVBD e de PGF2α superiores de T5, quatro horas após a segunda dose hormonal. / The main objective of this study was to determine the plasma concentrations of 17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP), 17β-Estradiol (E2), Testosterone (T) and Prostaglandin F2α (PGF2α) and the different types of oocytes present in the ovaries throughout the pacu (Piaractus mesopotamicus) hypophysation process with or without the use of exogenous PGF2α. To that, 23 females were distributed in five treatments, with induction divided into two doses with a 24-hour interval: (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline) (T1); (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T2); (0.6 mg.kg-1 CPE (crude pituitary extract)) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T3); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE) (T4); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE and 2 ml PGF2α) (T5). Blood and oocyte samples were collected for analysis of plasma levels of PGF2α, DHP, E2 and T in four periods after the second dose. The use of exogenous PGF2α caused a plasma peak of PGF2α one hour after the second hormonal dose. Hypophysation, with or without the use of exogenous PGF2α, caused a plasma peak of PGF2α at the time of spawning. The use of exogenous PGF2α together with hypophysation (T5) increased the pacu ovulation rate in relation to hypophysation only (T4), probably as a result of higher GVBD and PGF2α levels of T5, four hours after the second hormonal dose. / FAPESP: 16/20741-3

Submitted by Rafael Rovatti Pupin null (rafaelpupin@hotmail.com) on 2017-08-29T13:22:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação vs Final_Rafael R Pupin.pdf: 10462297 bytes, checksum: 951bd5aafaf22295492104d7289dc376 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-29T18:21:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pupin_rr_me_araiq.pdf: 10462297 bytes, checksum: 951bd5aafaf22295492104d7289dc376 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T18:21:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pupin_rr_me_araiq.pdf: 10462297 bytes, checksum: 951bd5aafaf22295492104d7289dc376 (MD5) Previous issue date: 2017-08-04 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A biotina (vitamina B7) pode ser acoplada a diferentes tipos de moléculas e, ainda assim, ser reconhecida seletivamente pelas proteínas avidina e estreptavidina devido à alta constante de afinidade que existe entre elas (Ka = 1,0×1015 L mol-1). Assim, essa interação proporciona excelente aumento na sensibilidade de várias análises; o que leva ao desenvolvimento métodos analíticos para determinação de diferentes compostos que são biotinilados. O uso de materiais biológicos, como anticorpos ou proteínas, em análises de rotina se torna muitas vezes dispendioso e, devido à baixa estabilidade das biomoléculas em condições adversas às mesmas, iniciou-se a síntese de materiais que possam mimetizar as interações biológicas de reconhecimento; o que vem sendo feito com sucesso pelos polímeros molecularmente impressos (MIP). Esses polímeros apresentam vantagens em relação às biomoléculas por possuirem baixo custo, fácil preparação e alta resistência mecânica e térmica. Assim, esta dissertação aborda a síntese, caracterização, otimização e aplicação de diferentes MIP que possuem biotina como molécula alvo. Os estudos iniciais focaram na síntese do MIP magnético (MMIP) com acesso restrito (RAMIP) para realizar exclusão proteica pela modificação do polímero com albumina do soro bovino (BSA) e polietileno glicol (PEG). Enquanto o RAMIP recoberto com BSA não apresentou bons resultados nos experimentos, o RAMIP recoberto com PEG, após otimização, apresentou resultados altamente satisfatórios na exclusão proteica (com valores na faixa de 98 até 99,4 % de exclusão) e bons resultados na religação da biotina (2,0 mg de biotina por grama de polímero). A segunda parte do trabalho foi focada no estudo da influência do tipo de impressão molecular (não covalente e semicovalente) na capacidade do reconhecimento seletivo dos MMIP. Para isso, foi sintetizado previamente o complexo analito-monômero (por meio de uma ligação covalente entre a biotina e o álcool alílico como monômero funcional). Esse MMIP foi submetido aos ensaios de reconhecimento da biotina utilizando-se interações não covalente, sendo denominado de MMIP semicovalente; cujos resultados foram comparados com MMIP para biotina não covalente otimizado previamente. O MMIP semicovalente apresentou uma constante de afinidade pela biotina de 5,9×104 L mol-1, enquanto para o MMIP não covalente foi de 2,4×103 L mol-1. Finalmente, o MIP e o MMIP para biotina (sintetizados via não covalente) foram aplicados em ensaios biomiméticos utilizando as técnicas de ELISA e Fluxo Lateral. Nos ensaios ELISA avaliou-se a capacidade de reconhecimento do MMIP pela biotina-HRP e DNA biotinilado (das bactérias E. coli e Salmonella). Para biotina-HRP, o MMIP apresentou retenção (na faixa de 5,0 até 2500 ng mL-1), e uma alta intensidade de sinal. Para o DNA biotinilado, de ambas bactérias, o MMIP mostrou maior retenção do amplicon quando comparado ao NIP. A aplicação do MIP nos dispositivos de Fluxo Lateral é inédita. Assim, após a otimização de todos os parâmetros para desenhar a linha de teste contendo MIP (como solvente, massa, soluções, etc.), avaliou-se a resposta do sistema para diferentes moléculas biotiniladas: para BSA-biotina e o corante Atto 655-biotina os resultados não foram satisfatórios; para biotina-HRP, biotina 4-fluoresceína e os amplicons, MIP apresentou boa resposta no reconhecimento seletivo. Assim, os MIP mostraram-se promissores no desenvolvimento de ensaios biomiméticos. / Biotin (vitamin B7) can be attached with different types of molecules and still be selectively recognized by avidin/streptavidin proteins due to the high affinity constant between them (Ka = 1,0×1015 L mol-1). Thus, this interaction provides an excellent increase in the sensitivity of analyzes; which leads to the development of analytical methods for the determination of different biotinylated compounds. The use of biological materials, such as antibodies or proteins, in analyzes is often expensive and has low stability of biomolecules under adverse conditions, which has led to the synthesis of materials that can mimic the biological interactions of recognition; which has been successfully made by molecularly printed polymers (MIP). These polymers have advantages over biomolecules because they have low cost, easy preparation and high mechanical and thermal resistance. Thus, this dissertation explores the synthesis, characterization, optimization and application of different MIP that has biotin as the target molecule. Initial studies focused on the synthesis of magnetic MIP (MMIP) with restricted-access (RAMIP) to evaluate protein exclusion by modifying the polymer with bovine serum albumin (BSA) and polyethylene glycol (PEG). While RAMIP coated with BSA didn’t present good results in the experiments, the RAMIP coated with PEG, after optimization, presented highly satisfactory results in protein exclusion (with values ranging from 98 to 99.4% of protein exclusion) and good results in the rebiding of biotin (2.0 mg of biotin per gram of polymer). The second part of the work was focused on the study of influence of molecular imprinting (non-covalent and semi-covalent) on the capacity of the selective recognition of MMIP. For this, the analyte-monomer complex was previously synthesized (by a covalent bond between biotin and allyl alcohol as functional monomer). This MMIP was submitted to the biotin recognition assays using non-covalent interactions, being nominated as semi-covalent MMIP; whose results were compared with non-covalent biotin MMIP previously optimized. The semi-covalent MMIP had an affinity constant for biotin of 5,9×104 L mol-1, while for non-covalent MMIP it was 2,4×103 L mol-1. Finally, MIP and MMIP for biotin (synthesized via non-covalent) were applied in biomimetic assays using ELISA and Lateral Flow techniques. In the ELISA assays, it was evaluated MMIP recognition capacity by biotin-HRP and biotinylated DNA (of E. coli and Salmonella bacteria). For biotin-HRP, MMIP showed good retention results (in the range of 5.0 to 2500 ng mL-1), and good signal intensity. For biotinylated DNA of both bacteria, MMIP showed higher retention of the amplicon when compared to MNIP. The application of MIP in Lateral Flow devices it wasn’t reported before. Thus, after optimizing all the parameters to design the test line containing MIP (as solvent, mass, solutions, etc.), the system's response to different biotinylated molecules was evaluated: for BSA-biotin and Atto 655-biotin dye the results were not satisfactory; for biotin-HRP, biotin 4-fluorescein and the amplicons MIP showed good selective recognition response. Thus, the imprinted polymers are promising materials in the development of biomimetic assays. / FAPESP: 2015/04367-1 / FAPESP: 2016/07250-0

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neurocysticercosis (NC) caused by the Taenia solium metacestodes usually affects the central nervous system and can be confused with other brain pathologies, which present similar clinical and image findings. This parasitose is endemic in Brazil and the serological diagnosis of NC is of great importance in routine clinical management of patients. The search for alternative antigens for NC immunodiagnosis is importance because of the difficulty of obtaining parasites from naturally infected pigs for the preparation of metacestodes T. solium homologous antigen. Once that purified antigen is more sensitive and specific than crude saline extracts, the objective of this study was to evaluate the performance of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and Immunoblotting (IB) for the serological diagnosis of human NC, using the crude saline extract (Crude) obtained from T. saginata metacestodes and two fractions of this extract, hydrophobic or detergent fraction (D) and hydrophilic or aqueous fraction (A), purified by extraction with Triton X-114 as alternative purified antigens for the diagnosis of human NC. Serum samples were obtained from 115 individuals: 40 patients with a definitive diagnosis of NC, 45 patients with Taenia sp. and with other parasitic diseases and 30 apparently healthy individuals. The serum samples were diluted 1:200 for ELISA but only the samples positives were diluted 1:100 and evaluated in IB. ELISA sensitivity and specificity were 95% and 73.3% when using Crude, 95% and 82.6% for D phase and 65% and 61.3% for A phase, respectively. The diagnostic efficiency and Youden index were: 83.9% and 0.74 (Crude), 88.5% and 0.80 (D phase) and 72.8 % and 0.46 (A phase), respectively. IB of the antigens confirmed the results obtained by ELISA, and the D phase antigen proved to be more specific than other extracts, showing only one immunodominant protein of 70-64 kDa that was the most frequent (92.5%) among patients with NC. Our results suggest that the D phase obtained with Triton X-114 can be used as heterologous purified antigen for the serological diagnosis of human NC in the IB. / A Neurocisticercose (NC), resultado do acometimento do sistema nervoso central pelas formas metacestódeas de Taenia solium, é uma doença polimórfica podendo ser confundida com outras síndromes neurológicas que apresentam achados clínicos e de imagem similares. Uma vez que esta parasitose é endêmica no Brasil o diagnóstico sorológico é de grande importância, pois auxilia na rotina laboratorial de pacientes com suspeita clínica. A busca por antígenos alternativos se faz necessária diante da dificuldade de obtenção de suínos naturalmente infectados com metacestódeos de T. solium, para a produção do antígeno homólogo. Uma vez que antígenos purificados apresentam sensibilidade e especificidade superiores aos extratos totais, o objetivo deste estudo foi avaliar os testes enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) e Immunoblotting (IB) no diagnóstico sorológico da NC humana utilizando o extrato salino total (S) de metacestódeos de Taenia saginata e suas frações purificadas com Triton X-114 (TX-114). Uma alíquota do extrato S foi fracionada com TX-114, para obtenção das frações antigênicas: hidrofóbica ou detergente (D) e hidrofílica ou aquosa (A). Os extratos antigênicos foram analisados em SDS-PAGE 12% e utilizados no ELISA na concentração de 10μg/mL. Foram analisadas 115 amostras de soro: 40 de pacientes com diagnóstico definitivo de NC, 45 de pacientes com Taenia sp. e por outros parasitos e 30 de indivíduos saudáveis. As amostras foram diluídas a 1:200 para o ELISA, sendo apenas as positivas submetidas ao IB, na diluição de 1:100. A sensibilidade e especificidade do ELISA foram: 95% e 73,3% (S), 95% e 82,6% (D) e 65% e 61,3% (A), respectivamente. O cálculo de eficiência do diagnóstico e Youden Index foram: 83,9% e 0,74 (S); 88,5% e 0,80 (D) e 72,8 % e 0,46 (A), respectivamente. No IB a fração D apresentou com exclusividade a banda imunodominante de 70-64 kDa, sendo detectada em 92,5% dos pacientes com NC. A fração D foi significativamente mais eficiente que a fração A, tanto no ELISA quanto no IB, sendo assim, recomendada como antígeno heterólogo purificado no diagnóstico sorológico da NC humana no IB. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Introduction: Tuberculosis is an infectious disease that affects more than 9 million people each year worldwide . For tuberculosis control methods for the study of more accurate diagnostic and monitoring treatment , make it essential . Objectives: To identify biomarkers by Phage display technique and evaluate the immunoreactivity of the IG\'s clones selected sera from patients with tuberculosis to monitor treatment . Methods: Blood samples were collected from 61 individuals over 18 years , both sexes , and performed the tuberculin test ( PPD ) as a control . The samples were subjected to the process of selection of clones, the biopanning using a library of random 12 amino acid region of the protein expressed on the phage pIII . After selecting the ELISA assay was performed to analyze the immunoreactivity of selected clones . Results: after the in silico analysis , it was found that the sequence of clone F10 ( VYKTPNSTANRW ) has similarity to the membrane protein MPT64 low molecular weight , 28 to 32 kDa, immunogenicity of the M. tuberculosis complex. In ELISA clone F10 showed reactivity significant ( p < 0.05 ) and monitoring of individuals in treatment (P < 0.005). Conclusion : the reactivity of clone F10 demonstrated that it can be used for monitoring the treatment of tuberculosis , contributing to its control. / Introdução: A Tuberculose é uma doença infectocontagiosa , que acomete mais de 9 milhões de indivíduos a cada ano em todo o mundo . Para o controle da tuberculose o estudo por métodos de diagnósticos mais acurados e o monitoramento ao tratamento, tornam se imprescindíveis. Objetivos: identificar biomarcadores pela técnica de Phage display e avaliar a imunorreatividade dos clones selecionados ás igG\'s de soros de pacientes com tuberculose para o monitoramento do tratamento. Métodos: foram coletadas amostras de sangue de 61 indivíduos maiores de 18 anos, ambos os sexos, e realizada a prova tuberculina (PPD) como controle. As amostras foram submetidas ao processo de seleções de clones, o Biopanning, utilizando uma biblioteca de 12 aminoácidos randômicos expressos na região da proteína pIII do bacteriófago. Após a seleção foi realizado o ensaio ELISA para analisar a imunorreatividade dos clones selecionados. Resultados: após as análises in silico, observou-se que a sequência do clone F10 (V Y K T P N S T A N RW), possui similaridade com a proteína MPT64 de membrana de baixo peso molecular, 28 a 32 KDa, imunogênica do complexo M.tuberculosis . No ensaio ELISA o clone F10 apresentou uma reatividade significante ( p<0,05 ) e no monitoramento dos indivíduos em tratamento ( p<0,005 ). Conclusão: a reatividade do clone F10 demonstrou que pode ser utilizada para o monitoramento do tratamento da tuberculose, contribuindo para seu controle. / Mestre em Ciências da Saúde

A Aflatoxina M1 (AFM1) é um metabólito tóxico que pode ser secretado no leite de animais contaminados com Aflatoxina B1 (AFB1). A ingestão do produto contaminado pode causar efeitos adversos de forma aguda ou crônica, sendo necessária não somente sua detecção, mas quantificação para um consumo seguro dos alimentos. Como os queijos coloniais são oriundos de pequenas propriedades rurais, muitas sem uma efetiva fiscalização e que são não somente consumidos pela família, mas também comercializados principalmente em pequenos estabelecimentos às margens de rodovias, este trabalho visa justamente avaliar o índice de contaminação em queijos coloniais produzidos artesanalmente comercializados em estabelecimentos às margens de rodovias de grande fluxo no vale do Taquari. Foram analisadas 15 amostras de queijos comercializados em estabelecimentos comerciais às margens das rodovias BR 386 e RS 287 na região do vale do Taquari, no estado do Rio Grande do Sul. A metodologia empregada na análise de Aflatoxina M1 envolveu uma partição líquido-líquido na etapa de extração e purificação e Enzimaimunoensaio em fase sólida (ELISA) para detecção e quantificação. O limite mínimo de detecção foi 16 ng/Kg (0,016 μg/Kg) e a avaliação da eficiência do método foi superior a 90% no teste de recuperação. Todas as amostras analisadas apresentaram níveis de AFM1, sendo que quatro delas apresentaram níveis superiores ao limite máximo toleradoestabelecido pela Comunidade Européia( 0,25μgKg). Nenhuma das amostras apresentou níveis superiores ao limite máximo tolerado definido pela legislação nacional (2,5 μg/Kg). Estes dados indicam a necessidade de um melhor controle na produção de queijos coloniais, principalmente das condições em que foram obtidas a matéria prima para o seu manufaturamento. / Aflatoxin M1 (AFM1) is a toxic metabolite that can be secreted into the milk of animals infected with Aflatoxin B1 (AFB1). Ingestion of the contaminated product may cause acute or chronic adverse effects, requiring not only its detection, but quantification for safe consumption of food. As the colonial cheeses come from small rural properties, many without an effective inspection and that are not only consumed by the family, but also marketed mainly in small establishments along roadsides, this work aims precisely to evaluate the contamination index in produced colonial cheeses traded in establishments along the banks of high-flow roads in the Taquari valley. Fifteen samples of cheeses marketed in commercial establishments along the BR 386 and RS 287 highways in the Taquari valley region in Rio Grande do Sul State were analyzed. The methodology used in the analysis of Aflatoxin M1 involved a liquid-liquid partition in step extraction and purification and solid phase enzyme immunoassay (ELISA) for detection and quantification. The minimum detection limit was 16 ng / kg (0.016 μg / kg) and the efficiency evaluation of the method was over 90% in the recovery test. All samples analyzed showed levels of AFM1, four of which presented levels above the maximum tolerated limit established by the European Community (0.25 μg kg). None of the samples had levels above the maximum tolerated limit defined by national legislation (2,5 μg / kg). These data indicate the need for a better control in the production of colonial cheeses, mainly from the conditions in which the raw material was obtained for its manufacture.

A doença de von Willebrand (DvW) é um defeito qualitativo/quantitativo do fator de von Willebrand (FvW), uma glicoproteína que desempenha um papel essencial na adesão e agregação plaquetária. Cães acometidos por esta diátese hemorrágica hereditária podem ser assintomáticos, ou apresentar sinais clínicos de um problema hemostático primário, especialmente hemorragias em superfícies mucosas. O diagnóstico da DvW baseia-se na quantificação do FvW plasmático, este sendo atualmente realizado por ELISA – antígeno FvW (Ag:FvW). O presente trabalho desenvolveu um ensaio para quantificação do Ag:FvW em amostras caninas e aplicou o teste em uma população de cães. Também determinou intervalos de referência para o ensaio e para tempos de coagulação. O ensaio apresentou R² médio de 0,9810, com coeficientes de variação intra-teste de 1,83 a 4,54% e entre-teste de 9,02 a 17,75%. Valores de referência para Ag:FvW, Tempo de Protrombina e Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada obtidos foram de 24,87 a 224,5%, 6,0 a 9,3 segundos e 15,2 a 24,5 segundos, respectivamente. Completando, foi feita uma revisão da literatura sobre a doença em cães. Em conclusão, a determinação do Ag:FvW é um teste essencial para pacientes com histórico de diátese hemorrágica sem coagulopatia e/ou trombocitopenia e pode ser conclusivo para o diagnóstico de DvW. Obter valores de referência para a população local e padronizar os reagentes e instrumentos utilizados são extremamente importantes para um diagnóstico acurado dos distúrbios de hemostasia. Finalmente, um caso clínico de um cão com DvW também foi descrito. / The von Willebrand disease (vWD) is a von Willebrand factor (vWF) quantitative/qualitative defect. This glycoprotein plays a crucial role on platelet adhesion and aggregation. Dogs affected by the hemorrhagic diathesis may be asymptomatics, or show clinical signs of a primary hemostatic disturbance, such as bleeding from mucosal surfaces. The diagnosis is based on vWF quantification by ELISA techniques – vWF antigen (vWF:Ag). The current study developed an assay for vWF:Ag quantification on canine samples, and the test was conducted on a dog population. Also, reference intervals were determined for this assay and for clotting times. The assay achieved a mean R² of 0.9810, with coefficient of variation for intra-assay of 1.83 to 4.54% and for inter-assay of 9.02 to 17.75%. The vWF:Ag assay, Prothrombin Time and activated Partial Thromboplastin Time reference intervals were 24.87 to 224.5%, 6.0 to 9.3 seconds and 15.2 to 24.5 seconds, respectively. In addition, a literature review about the disease in dogs was done. In conclusion, vWF:Ag determination is an essential assay for patients with hemorrhagic diathesis history without coagulopathy and/or thrombocytopenia, and might be conclusive for the disease diagnosis. Reference values for local population and standard protocols are extremely important for an accurate diagnosis of disorders of hemostasis. Finally, a case report of a dog with vWD was also described.

Autoantikroppar är antikroppar som attackerar en individs egen vävnad. Riktas dessa mot antigener från cellkärnan kallas de för ANA. Exempel på dessa är anti-dsDNA antikroppar som associeras med sjukdomen SLE. Med hjälp av metoderna ELISA, CLIFT eller FARR-radioimmunoassay kan anti-dsDNA antikroppar analyseras och tillsammans med kliniska symptom såsom ansiktserytem kan diagnosen SLE ställas. Syftet med examensarbetet var att undersöka analys av anti-dsDNA antikroppar med hjälp av instrumentet Phadia 250 vars princip är en automatiserad ELISA, för att se om det kan användas som screeningmetod istället för CLIFT. 20 EQUALIS-serumprover (externa kontrollprover) analyserades med Phadia 250 och de Phadia 250-positiva proverna analyserades ytterligare en gång med CLIFT. Därefter analyserades 44 patienters serumprover (21 positiva och 23 negativa, tidigare analyserade med CLIFT) med Phadia 250. Patientprovernas resultat gav 70 % sensitivitet och 86 % specificitet med Phadia 250. Phadia 250-resultat som ej överensstämde med förväntade resultat på EQUALIS- och patientproverna erhölls i flera fall. Vid en noggrannare granskning av EQUALIS-proverna noterades att liknande resultat erhållits av andra laboratorier som använt likartade metoder. EQUALIS-proverna var initialt analyserade och kategoriserade enligt CLIFT, vilket innebar att hög överensstämmelse kunde förväntas med den egna CLIFT-metoden. Slutsatsen av studien är att underlaget för att införa metoden i rutindiagnostiken är inte tillräckligt utifrån de erhållna resultaten. Det krävs ytterligare studier samt granskning av inkluderade patienters journaler för att säkrare bedöma metodernas korrelation till sjukdomen.

Esta tese compreende estudos sobre diagnóstico, caracterização antigênica e molecular de amostras do vírus da raiva e sobre o desenvolvimento de testes sorológicos para detecção de anticorpos contra o vírus rábico. O primeiro capítulo descreve dois casos de raiva no Estado do Rio Grande do Sul (RS). O primeiro trabalho do primeiro capítulo descreve a ocorrência de raiva em um canino no município de Tapes, leste do RS. Após a confirmação do diagnóstico, a amostra de vírus isolada foi submetida à caracterização antigênica e molecular. Tal amostra apresentava características compatíveis com amostras de vírus rábico isoladas de morcegos insetívoros Tadarida brasiliensis. Portanto, o primeiro caso de raiva canina no RS após 19 anos, ocorreu devido a um contato incidental entre um morcego não hematófago e o canino infectado. Assim, o status de região livre de raiva urbana pode ser mantido no Estado. O segundo trabalho do primeiro capítulo descreve a primeira ocorrência no RS de raiva em morcegos frugívoros da espécie Artibeus lituratus. Neste caso, a amostra isolada apresentou características de amostras isoladas de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A identificação de vírus rábico em um morcego frugívoro, com tal perfil, não representa fato novo na história recente da raiva, mas a descrição deste caso ilustra que a raiva em morcegos frugívoros no RS apresenta características semelhantes à raiva em morcegos frugívoros de outras regiões do Brasil e sugere que o mesmo foi contaminado devido ao contato com morcegos hematófagos. Com o objetivo de permitir o monitoramento sorológico da raiva em morcegos e a identificar novos potenciais reservatórios do vírus, no segundo capítulo desta tese é reportado o desenvolvimento de dois testes sorológicos para a detecção de anticorpos contra raiva. O primeiro teste desenvolvido é a inibição da imunoperoxidase (“immunoperoxidase inhibition assay”; IIA), que foi testada frente a 422 amostras de soros humanos. A IIA foi muito eficiente, tendo demonstrado uma acurácia de 97.63%. Esta técnica provavelmente poderá ser utilizada para detecção de anticorpos contra raiva em outras espécies, embora no presente estudo tenha sido avaliada apenas com soros humanos. Com o objetivo de pesquisar anticorpos contra raiva em diferentes espécies animais utilizando pequenos volumes de soro foi desenvolvido um ensaio imunoenzimático do tipo “sandwich” (“sandwich enzyme linked immunosorbent assay”; S-ELISA). O S-ELISA foi inicialmente comparado com um teste padrão FAVN (Fluorescent Antibody Vírus Neutralization test) e a seguir empregado na pesquisa de anticorpos em soros de diferentes espécies, incluindo morcegos, sagüis, raposas, felinos silvestres, guaxinis, quatis, bovinos, camundongos e humanos. Os resultados mostraram que o S-ELISA foi eficiente na detecção de anticorpos contra o vírus da raiva em diferentes espécies, com uma acurácia de 87,5%. A caracterização de amostras de vírus rábico em situações epidemiológicas específicas, assim como o desenvolvimento de testes sorológicos a fim de identificar anticorpos em distintas espécies e identificar novos possíveis reservatórios para raiva, contribuirão para o maior conhecimento da biologia da raiva na natureza, particularmente em nosso Estado, possibilitando assim a tomada de medidas de controle mais adequadas. / This thesis describes studies about diagnosis, antigenic and molecular characterization of rabies vírus strains and about serological assays development for antibodies against rabies virus detection. The first chapter describes two cases of rabies in State of Rio Grande do Sul (RS). This first work of the first chapter on this thesis, describes the canine rabies in Municipality of Tapes, east of RS. After the diagnosis confirmation, the rabies virus strain was submitted to antigenic and molecular characterization. The sample shown similar characteritics with rabies vírus isolates from insectivorous bats Tadarida brasiliensis. Thus, the first canine rabies in RS after 19 years occurred by an incidental contact between the contamined canine and a non-haematophagous bat. In view of that, the status of urban rabies free of the area should not be compromised. The second work of first chapter describes the first occurrence in RS of rabies in frugivorous bats Artibeus lituratus. In this case, the isolated sample shown characteristics similar to characteristics from haematophagous bats Desmodus rotundus. The rabies virus identification in a frugivorous bat with this profile, does not represent a new fact in the recent history of rabies, but the description of this case illustrates that the rabies in frugivorous bats in RS has similar characteristics to rabies in frugivorous bats in other regions of Brazil and suggests that it was contamined due to contact with haematophagous bats. With the purpose to allow the serological monitoring of rabies in bats and identify new potential reservoirs of the virus, in the second chapter of this thesis is reported the development of two serological tests for detection of antibodies against rabies. The first developed assay is the immunoperoxidase inhibition assay (IIA), that was tested with 422 sera from humans. The IIA was very efficient, with 97.63% of accuracy. This assay probably can be used to antibodies detection against rabies in other species, in despite of the present study, it was tested only with sera from humans. With the aim to research rabies antibodies in different animal species with small volume of serum, was developed the sandwich enzyme linked immunosorbent assay (S-ELISA). The S-ELISA was initially compared with the gold standard test Fluorescent Antibody Vírus Neutralization test and after used to search antibodies in sera from different species including bats, marmosets, foxes, wild felines, raccoons, coatis, bovines, mices and humans. The S-ELISA was efficient to detect antibodies in different species with 87.5% of accuracy. The characterization of rabies virus strains in specific epidemiological situations as well as the serological assays development to identify antibodies in distinct species and identify new potential rabies reservoirs for rabies, contribute to greater understanding of the biology of rabies in nature, particularly in our State, allowing the taking of appropriate control measures.

A Leishmaniose é uma doença parasitária emergente em algumas regiões do Brasil causada por protozoário do gênero Leishmania. No ano de 2002 foi notificado o primeiro caso humano autóctone de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no município de Porto Alegre/RS, Bairro Lomba do Pinheiro. No meio urbano, o cão tem papel importante, servindo como fonte de infecção e reservatório do protozoário. Este estudo teve como objetivo avaliar o emprego de ELISA e PCR no diagnóstico da LTA em cães domiciliados na Estrada do Rincão, Bairro Lomba do Pinheiro, Porto Alegre. JESUS (2006) coletou e submeteu 200 amostras de soro de cães oriundos desta área de risco à Imunofluorescência Indireta (IFI) encontrando uma soroprevalência de 3,5% (7/200). Em nosso estudo, empregaram-se o ensaio imunoenzimático para diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina, kit Biomanguinhos/FIOCRUZ, com 61 (30,5%) dos 200 soros caninos sororeagentes e nestes foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) na qual apenas a amostra 12C de uma fêmea, sem raça definida, com quatro anos de idade, replicou o DNA de Leishmania spp. Utilizando o Teste Exato de Fisher para a análise estatística quanto à idade, sexo e raça, observou-se que houve associação significativa com a positividade em ELISA e a idade dos cães (p=0,0037), enquanto que quanto ao sexo (p=0,0687) e raça (p=0,1261) não encontramos associação significativa na positividade em ELISA. O Teste de McNemar`s foi aplicado aos resultados obtidos pelas técnicas de ELISA e IFI evidenciando uma diferença muito significativa entre as duas técnicas (p<0,0001). A identificação de cães soropositivos, sem sintomatologia, em área de baixa endemicidade no município de Porto Alegre, com casos humanos autóctones, serve como alerta e ponto de partida para mais investigações sobre a epidemiologia da LTA no RS e também sobre o emprego de outras técnicas de diagnóstico mais sensíveis. / Leishmaniasis is an emerging parasitic disease in some areas of Brazil caused by a protozoa of the genus Leishmania. In the year of 2002 it was notify the first autochthon human case of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) in the city of Porto Alegre /RS, Bairro Lomba do Pinheiro. In the urban way, the dog has important paper, serving as source of infection and reservoir of the protozoa. This study it had as objective to evaluate the job of ELISA and PCR in the diagnosis of the ATL in dogs domiciliated in the Road of the Rincão, Bairro Lomba do Pinheiro, Porto Alegre. JESUS (2006) collected and submitted 200 samples of serum of deriving dogs of this area of risk to Indirect immunofluorescent reaction (IFI) finding a soroprevalence of 3,5% (7/200). In our study, they had used for diagnosis Canine Visceral Leishmaniasis, kit Biomanguinhos/FIOCRUZ, with 61 (30.5%) positives samples of the 200 canine serum and in these the reaction in chain of polimerase in which only the sample 12C of a female, without defined race, with four years of age, presented the response of the DNA of the Leishmania genus in the PCR. Using the Accurate Test of Fisher for the analysis statistics how much to the age, sex and race, it was observed that it had significant association it enters the positividade in ELISA and the age of the dogs (p=0,0037), whereas how much to the sex (p=0,0687) and race (p=0,1261) we do not find significant association with the positividade in ELISA. The Test of McNemar `s was applied to the results gotten for the techniques of ELISA and IFI having evidenced a significant difference very between the two techniques (p< 0,0001). The identification of soropositives dogs, without symptons, in area of low endemicity in the city of Porto Alegre, with autochthon human case, also serves as alert and starting point for more inquiries on the epidemiology of the ATL in the RS and on the job of others techniques of more sensible diagnosis.