Introdução: O câncer de mama é uma doença heterogênea e complexa. Carcinomas mamários triplo negativos (CMTN) são tumores com uma agressividade biológica intrínseca, resultando em um prognóstico desfavorável. O receptor de andrógeno (RA) é um dos marcadores mais estudados na atualidade em CMTN, estando associado com a gênese e desenvolvimento do câncer de mama. Objetivo: Correlacionar a expressão do RA em pacientes com CMTN com características clínicas e patológicas referentes à idade do paciente, Ki-67, grau histológico e infiltração intratumoral de linfócitos (IIL). Métodos: O estudo foi de delineamento transversal e retrospectivo, de todos os casos de CMTN registrados em uma instituição, entre janeiro de 2012 e maio de 2014. Os materiais histológicos dos tumores mamários foram submetidos ao estudo imunoistoquimico para RA, e foram correlacionados com as variáveis idade, grau histológico, IIL e Ki-67. A positividade para RA foi determinada com o anticorpo monoclonal RA 441. Quando o RA foi positivo, a expressão foi considerada fraca quando Escore-H≤150 e forte quando Escore-H>150. A análise da porcentagem de IIL foi realizada através de um corte do tumor emblocado em parafina e corado por hematoxilina e eosina (HE) e foi definida como a porcentagem de linfócitos em contato direto com células tumorais. Resultados: 34 CMTN foram analisados. A média da idade foi de 51,9 anos (variação 30-82 anos). Das 34 amostras, 23 casos (67,7%) foram RA-negativo e 11 casos (32,3%) foram RA-positivo. Dos casos positivos, a expressão foi considerada fraca em 6 casos e forte em 5 casos. A maioria dos pacientes (n=28, 82%) apresentaram tumores pouco diferenciados. A expressão média do Ki-67 foi 65% no grupo RA-negativo e 43,6% no grupo RA-positivo (p<0,05). Observou-se uma associação estatísticamente significante entre a variável idade e a expressão do RA (p<0,005), sendo a idade média de 70,8 anos no grupo RA fortemente positivo e 42,3 anos no grupo RA fracamente positivo. Não se observou associação estatística entre a expressão do RA e as variáveis grau histológico e IIL. A porcentagem média de IIL foi 38,6% no grupo RA-positivo e 39,1% no grupo RA-negativo (p=0,3). Conclusão: A expressão do RA em CMTN esteve associada a pacientes mais idosas e a tumores com menor expressão de Ki-67. A expressão do RA em pacientes com CMTN delinou 2 subgrupos com fenótipos distintos. No entanto, não houve associação entre expressão do RA com grau histológico e IIL. / Background: Breast cancer is a heterogeneous and complex disease. Triple Negative Breast Cancer (TNBC) are characterized by intrinsic aggressive tumour biology resulting in poor prognosis. Androgen Receptor (AR) is one of newly emerging biomarker in TNBC and has been demonstrated to play an important role in the genesis and in the development of breast cancer. Objective: In the present study, we explored the correlation of AR expression with age, Ki-67, histological subtype, histological grade and value of Tumor-Infiltrating Lymphocytes (TIL) in TNBC. Methods: We identified consecutive invasive TNBC from a cancer registry in a single institution between January 2012 and May 2014. The biopsies were analyzed by immunohistochemistry for AR and were correlated with age, histological grade, TIL and Ki-67. AR positivity was determined with clone AR 441 antibody. When AR was positive, the expression was considered weak when H-score≤150 and strong when Hscore> 150. The analysis of percentage of TIL was performed on a single full-face HEstained tumor section and TIL were defined as the percentage of lymphocytes in direct contact with the tumor cells. Results: 34 TNBC have been analyzed to date. The mean age was 51.9 years (range 30- 82). Of the 34 TNBC samples, 23 cases (67.7%) were AR-negative and 11 cases (32.3%) were AR-positive. Of the positive cases, the expression was weak in 6 cases and strong in 5 cases. Most patients (n=28, 82%) presented poorly differentiated tumors and all patients presented invasive ductal carcinoma. The mean expression of Ki67 was 65% in AR-negative group and 43.6% in AR-positive group, respectively (p<0.05). Older age was associated with AR expression, the mean age in AR strong expression was 70.8 years (p<0.005) compared to 42.3 years in group with AR weak expression. The AR expressions was not associated with histological grade and TIL. The mean of TIL was 38.6% in the AR-positive group and 39.1% in the AR-negative group (p=0.3). Conclusion: The present analysis showed that AR expressiveness in TNBC was associated with older patients and tumors with lower expression of Ki67. The expressiveness of AR in patients with TNBC through IHC outlined 2 subgroups with distinctive phenotypes. However, the expression of RA in patients with TNBC was not associated with the percentage of TIL and histological grade.

Com objetivos de validar o modelo de anóxia neonatal apresentado e analisar a distribuição de neurônios imunorreativos à proteína Fos (IR-Fos) no encéfalo de ratos neonatos submetidos ao insulto anóxico, foram utilizados 24 ratos wistar neonatos machos divididos em dois grupos: Anóxia (n=12) e Controle (n=12). O grupo Anóxia apresentou decréscimo de 75% no valor da saturação periférica de oxigênio durante a exposição ao nitrogênio, enquanto o Controle não apresentou alterações nos valores (97%±0,5). A análise do número de células IR-Fos mostrou ativação de áreas encefálicas relacionadas ao controle da respiração, estruturas límbicas e núcleos da rafe. Tais dados sugerem que o modelo experimental de anóxia neonatal utilizado é eficiente em produzir privação temporária de oxigênio em ratos neonatos, levando a respostas condizentes com a anóxia. Espera-se, com estes resultados, facilitar a compreensão dos eventos relacionados à neurodegeneração e neurorregeneração após anóxia neonatal e, se possível, abrir caminho para novas abordagens e perspectivas terapêuticas. / The aim of this study is to validate the experimental model of neonatal anoxia and evaluate by Fos imunoreactivity (Fos-IR) the effects of anoxic insult. Twenty-four male wistar neonates (weighting 6-8g) were divided in two groups: Anoxia (n=12) and Control (n=12). The anoxic group presented decrease of 75% in the value of the peripheric saturation of oxygen during exposure to the nitrogen while control group did not present alterations in the values of the peripheric saturation of oxygen during the studied time (97 % ± 0,5). These data suggest that the experimental model of neonatal anoxia presented is efficient in producing temporary deprivation of oxygen in neonates rats, leading to responses that characterize anoxia. Fos-IR neurons analisis showed important activation of respiratory regions, limbic strutures and raphe nuclei in anoxic group when compared to control group. We hope facilitate the understanding of neonatal anoxia neurodegeneration and neuroregeneration and possibly contribute for new approaches and therapeutic perspectives.

As células provenientes do epitélio olfatório apresentam capacidade regenerativa durante toda a vida, embora este mecanismo ainda não esteja completamente elucidado. O potencial de diferenciação de células-tronco provenientes do epitélio olfatório de cães sem raça definida (Canis familiaris Linnaeus, 1758) foi avaliado utilizando-se 12 cães adultos e 12 cães com 60 dias de vida intra-uterina, oriundos do Hospital Veterinário da FMVZ-USP. Após coletado, o epitélio olfatório foi submetido a protocolo histológico padrão para hematoxilina-eosina, azul de toluidina e PAS. O material fixado em glutaraldeído 2,5% foi processado para observação sob microscopia eletrônica de transmissão. O índice de proliferação nuclear foi medido para detecção de PCNA e Ki67 nuclear. Células foram expandidas em cultura em meio D-MEM/F-12 acrescido de Soro Fetal Bovino hyclone (CO2-95% à 37ºC) para caracterização e diferenciação celular (osteogênica, adipogência e neurogênica). O cultivo das células provenientes do epitélio olfatório de cães com 60 dias de vida intra-uterina mostrou maior evolução em cultura quando comparados aos animais adultos, sendo as primeiras utilizadas para execução dos protocolos de caracterização e diferenciação. As células em cultivo apresentaram expressão CD29 positiva e marcação positiva para OCT-4, citoqueratina 18 (Ck18) e vimentina. A diferenciação osteogênica demonstrou, ao final de 21 dias, células com morfologia típica, caracterizadas pela coloração de Alizarin Red e Von Kossa. A diferenciação adipogênica mostrou pouco número de células, apresentando grânulos adipogênicos, corados por Oil Red, contudo sem morfologia típica. A diferenciação neurogênica demonstrou células que expressaram marcação para GFAP, Neurofilamentos, Oligodendrócitos e &beta;tubulina III. As células isoladas a partir do epitélio olfatório de cães com 60 dias de vida intra-uterina evidenciaram populações de células-tronco, determinadas pela expressão de marcadores específicos e diferenciação em outros tipos de tecido, devendo-se considerar este epitélio como uma fonte potencial para aquisição de células, particularmente progenitores neuronais, que possam somar aos estudos e seu uso em terapia celular. / Olfactory cells demonstrate regenerative capacity along life, although, its mechanism is still obscure. We evaluated the differentiation capacity of olfactory stem cell of mongrel dogs (Canis familiaris Linnaeus, 1758) in 12 adult dogs and 12 fetuses at term (60 days of pregnancy) from the Veterinary Hospital of FMVZ-USP. Following the sampling, the epithelia were submitted to standard histological process and stained with HE, toluidine blue and PAS. Samples fixed with 2.5% glutaraldehyde solution were processed for transmission electron microscopy. Proliferative index were obtained with the detection of PCNA and Ki67. Cells were kept in culture in D-MEM/F-12 medium supplemented with hyclone bovine fetal serum (CO2-95% at 37ºC) for characterization and cell differentiation (osteogenesis, adipogenesis, and neurogenesis). Cell culture of fetuses at term demonstrated higher evolution in comparison to adult animals, being submitted to the protocols of characterization and differentiation. Cell culture demonstrated positive reaction for CD29, OCT-4, Ck18 (citokeratin) and vimentin. Osteogenic differentiation demonstrated, 21 days, typical morphological cells characterized by Alizarin Red and Von Kossa staining. Adipogenic differentiation demonstrated less number of cells containing granules, stained with Oil Red, although being not typical shape. Neurogenic differentiation demonstrated positive staining for GFAP, Neurofilament, Oligodendrocyte and III &beta;-tubulin. Cells isolated from epithelia of fetuses at term demonstrated population of stem cells determined by the expression of specific-staining and differentiation into other type of cells, which lead us to consider the olfactory epithelia as a source of potential stem cells particularly for neurogenic differentiation to be applied for further studies in cell therapy.

O conhecimento dos estágios iniciais do desenvolvimento embrionário de peixes é de extrema importância para o estudo de espécies nativas com potencial para a piscicultura, uma vez que permite o estabelecimento de diretrizes para a criação destes animais. Este projeto estudou o desenvolvimento embrionário da piapara (Leporinus elongatus), um peixe de grande importância na pesca esportiva e profissional na bacia dos rios Pardo e Jequitinhonha, visando compreender as fases desse animal em diversos estágios de desenvolvimento, utilizando marcadores ósseos que possibilitaram visualizar o desenvolvimento ósseo da espécie. As Proteínas Ósseas Morfogenéticas (BMP-2 e BMP-4) são consideradas moléculas essenciais reguladoras no desenvolvimento embrionário e na formação óssea, sendo ainda pouco estudadas em peixes; tais proteínas puderam ser observadas apenas no estádio larval até o período juvenil, não sendo evidenciadas nos estágios anteriores. Foram utilizadas também técnicas de Microscopia Eletrônica de Varredura e histológicas, onde foi possível visualizar as fases principais do desenvolvimento embrionário, entre elas, clivagens, diferenciação do embrião, formação dos órgãos principais, abertura de boca, pigmentação dos olhos, surgimento das nadadeiras e sistema branquial, dados estes que facilitam a compreensão sobre a ontogenia; além de criar dados embriológicos e anatômicos dessa espécie ainda pouco explorada, conhecimentos estes, imprescindíveis à biologia pesqueira e cultivo das mesmas, sendo também um auxiliar a novas pesquisas. / The knowledge of the early stages of embryonic development in fish is of great importance for the study of native species with potential for aquaculture, since it allows the establishment of guidelines for the breeding of these animals. This project studied the embryonic development of piapara (Leporinus elongatus), a fish of great importance in professional and amateur fishing from the basin of the Pardo and Jequitinhonha rivers, aiming to understand the various stages of development, using bone markers that allowed observation of the bone development in this species. The Bone Morphogenetic Proteins (BMP-2 and BMP-4) are known as key regulatory molecules in embryonic development and bone formation, and information on this subject is scarce in fish. Results shown these proteins could be observed only between the larval to the juvenile stage, not being seen at earlier stages. Scanning electron microscopy and histological techniques, where it was possible to observe the main stages of embryonic development , including , cleavage , embryo differentiation , development of major organs , mouth opening , eye pigmentation , appearance of fins and gills system. This data contributed for the understanding of ontogeny, and provided embryological and anatomical data that may help other studies like reproductive biology of this species that surely will improve reproductive techniques, important goal for raising the piapara.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The cyclooxygenase 2 (Cox 2) is a molecular indicator of prognosis marker and its expression is associated with progression of mammary tumors in dogs. The purpose of this study was to investigate breast tumors of bitches Cox 2 expression by immunohistochemistry and correlated with the clinical stage, tumor size, lymph node involvement, the classification and the histological grade of carcinomas. We included in this study, 100 female dogs with mammary tumors and 131 samples were analyzed. Histological and COX 2 immunostaining evaluation were conducted. The streptavidin-biotinaperoxidase technique was used in order to do the immunohistochemistry (IHC). The IHC analysis was performaced counting the number of positive-staining cells in ten fields and the staining intensity. The COX 2 staining index was obtained by multiplying the COX 2 staining distribution and intensity scores. This gave a range of COX 2 staining indices of 0 12.Carcinoma complex was the most common histological type that we were diagnosed. The COX 2 expression was observed in the benign and malignant tumors. The weak score is more frequent, and strong score was observed in carcinomas. Simple carcinomas demonstraded a higher number of positive staining cells. There was no positive correlation between the histological type, size and lymph node involvement and the Cox 2 immunostaining. Therefore, COX 2 immunostaining is not a good prognostic factor. / A ciclooxigenase 2 (Cox 2) é um marcador molecular indicador de prognóstico e sua expressão está relacionada com a progressão do tumor mamário na cadela. Tendo isso em vista, o objetivo deste trabalho foi investigar tumores mamários de cadelas a expressão de Cox 2 por meio de imunohistoquímica e correlacionar com o estadiamento clínico, o tamanho tumoral, o envolvimento linfonodal, a classificação e o grau histológico dos carcinomas. Foram incluídas neste estudo, 100 cadelas com neoplasia mamária e dessas, 131 amostras foram analisadas. A avaliação histológica e da imunomarcação de Cox 2 foram conduzidas. Para a imunohistoquímica (IHQ), utilizou-se a técnica de estreptoavidina-biotinaperoxidase. Para análise das lâminas de IHQ contou-se o número de células marcadas em dez campos e verificou-se a intensidade de marcação. O escore de marcação foi obtido pelo produto do número de células marcadas e a intensidade de marcação. O tipo histológico mais frequente diagnosticado foi o carcinoma complexo mamário. A expressão de Cox 2 foi observada nos tumores benignos e malignos. A marcação fraca é mais frequente, sendo a marcação forte observada nos carcinomas. Os carcinomas simples apresentaram maior número de células marcadas. Não houve correlação positiva entre o tipo histológico, tamanho e o envolvimento linfonodal e a imunomarcação de Cox 2. Sendo assim, a imunomarcação de Cox 2 não demonstrou ser um bom fator de prognóstico. / Mestre em Ciências Veterinárias

Objetivo: Avaliar in vivo a resposta tecidual de dentes de cães após perfuração de furca e recobrimento com Biodentine&trade;, em comparação ao MTA e à guta-percha, por meio de análise histopatológica, histoenzimológica, imunohistoquímica e por imunofluorescência. Métodos: Foram utilizados 30 dentes de 3 cães, divididos em 3 grupos: I - Biodentine; II - MTA; e III - Guta-Percha (controle). Após tratamento endodôntico e limpeza da câmara pulpar, perfurações no centro do assoalho foram realizadas intencionalmente em cada dente, as quais foram preenchidas com os diferentes materiais. Após 120 dias, os animais foram eutanasiados e as peças contendo os dentes e tecidos perirradiculares foram submetidas ao processamento histotécnico. Foram realizadas análises histopatológicas semi-quantitativas para avaliação da neoformação de tecido mineralizado e da reinserção de fibras, além de análise imunohistoquímica das proteínas osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP) e imunofluorescência para proteína morfogenética óssea (BMP-2), proteína de adesão do cemento (CAP), sialoproteína óssea (BSP), osteocalcina (OCN) e proteína do cemento 1 (CEMP1) no tecido mineralizado neoformado e na região adjacente. Paralelamente, foi realizada a histoenzimologia para a atividade da TRAP e contagem dos osteoclastos. Os dados foram submetidos aos testes qui-quadrado e Kruskal-Wallis, com nível de significância de 5%. Resultados: Na avaliação do tecido mineralizado neoformado, o grupo controle foi significantemente diferente dos demais grupos (p<0,0001), sendo que não houve formação de tecido mineralizado em nenhum espécime desse grupo. Nos grupos tratados com MTA e Biodentine houve formação de tecido mineralizado em 88% e 92% dos espécimes, respectivamente, sem diferença entre eles (p>0,05). Ainda, o grupo controle apresentou fibras colágenas paralelas à perfuração. Nos grupos tratados com MTA ou Biodentine também houve fibras colágenas paralelas à perfuração, porém com algumas fibras reinseridas perpendicularmente em diferentes áreas do tecido mineralizado neoformado. Todos os tratamentos induziram a expressão de OPN e ALP, porém em menor intensidade no grupo controle e em maior intensidade no grupo tratado com MTA (p<0,05). Apenas o tecido mineralizado formado após o tratamento com MTA expressou BMP-2, BSP, OCN, CAP e CEMP1. Com relação à avaliação dos osteoclastos, não foi possível encontrar diferença estatística entre os grupos (p=0,97). Conclusão: Com base nos parâmetros analisados, pôde-se concluir que o MTA e a Biodentine apresentaram resposta tecidual satisfatória, com formação de tecido mineralizado e reinserção parcial de fibras, podendo ser indicados para o selamento de perfurações de furca. Além disso, o presente estudo elucidou alguns mecanismos de ação pelo quais o MTA e a Biodentine induzem a formação do tecido mineralizado, com expressão dos marcadores da mineralização ALP e OPN, sem interferência na quantidade de osteoclastos. Apenas o MTA estimulou a expressão de proteínas associadas à formação de tecido mineralizado semelhante ao cemento / Aim: This study evaluated in vivo tissue response in dogs teeth after sealing of furcation perforations with Biodentine&trade;, MTA and gutta-percha, by means of histopathological, histoenzymological, immunohistochemical and immunofluorescence analysis. Methods: Thirty teeth of 3 dogs were used, divided in 3 groups: I - Biodentine; II - MTA; and III - Guta-Percha (control). After endodontic treatment, perforations were made on the pulp chamber floor and filled with the different materials. The animals were euthanized after 120 days and the teeth and surrounding tissues were processed for histopathological analysis of new mineralized tissue formation and collagen fiber reinsertion, immunohistochemical analysis of osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP) and immunofluorescence analysis for bone morphogenetic protein (BMP-2), cementum attachment protein (CAP), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OCN) and cementum protein1 (CEMP1). Histoenzymology was performed for TRAP activity and osteoclast count. Data were submitted to chi-square and Kruskal-Wallis tests (=0.05). Results: Gutta-percha did not induce mineralized tissue formation. MTA and Biodentine formed mineralized tissue in 88% and 92% of specimens, respectively, with no significant difference (p>0.05). In addition, the control group had collagen fibers parallel to the perforation. In the groups treated with MTA or Biodentine there were also collagen fibers parallel to the perforation, but with some fibers reinserted perpendicularly in different areas of the neoformed mineralized tissue. All materials induced OPN and ALP expression, weakest for gutta-percha and strongest for MTA (p<0.05). Only MTA induced BMP-2, BSP, OCN, CAP and CEMP1 expression. Osteoclast count was similar in the groups (p=0.97). Conclusion: Thus, according to the parameters analyzed in this present study, MTA and Biodentine presented satisfactory tissue response, with formation of mineralized tissue and partial reinsertion of fibers, and could be indicated for sealing furcation perforations. In addition, the present study elucidated some mechanisms of action by which MTA and Biodentine induce the formation of mineralized tissue, with expression of ALP and OPN mineralization markers, without interference in number of osteoclasts. Only MTA stimulated the expression of proteins associated with the formation of a cement-like mineralized tissue

O objetivo desse estudo in vivo foi avaliar a intensidade de expressão de moléculas indicadoras da diferenciação celular com fenótipo mineralizador em dentes de cães com rizogênese incompleta e lesão periapical induzida experimentalmente submetidos à irrigação dos canais radiculares por pressão apical negativa (EndoVac®) e à irrigação por pressão apical positiva (irrigação convencional). Foram utilizados 30 dentes (60 raízes), divididos em 3 grupos: Grupo EndoVac® Irrigação com pressão apical negativa (n=20), Grupo Convencional Irrigação com pressão apical positiva (n=20); e Grupo Controle com Lesão Periapical (n=20). Após indução de lesões periapicais, os canais radiculares dos grupos Endovac e Convencional foram instrumentados com limas manuais, empregando o sistema de irrigação correspondente. Decorridos 90 dias, os animais foram eutanasiados e os espécimes submetidos ao processamento histotécnico. Cortes representativos de cada grupo foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição histopatológica das regiões apical e periapical. Os cortes foram submetidos à para marcação de osteopontina (OPN), fosfatase alcalina (ALP) e fator de transcrição RUNX2 nas regiões apical e periapical das raízes. Para avaliação da intensidade da expressão desses marcadores foi realizada uma análise semi-quantitativa por meio de um sistema de escores. Os dados foram analisados estatisticamente pelo teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn e o nível de significância adotado foi de 5%. Com relação à descrição histopatológica, achados distintos foram observados em cada grupo. Resumidamente, o grupo Endovac demonstrou um tecido conjuntivo bem organizado, invaginando-se para o interior do canal radicular, e exibiu um processo de reparo mais avançado, com relação aos demais grupos. A avaliação das imunomarcações para RUNX2 revelou que no grupo Endovac® houve marcação significantemente mais intensa (p=0,03), em comparação ao grupo controle. Com relação à expressão de OPN, não foi possível encontrar diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,15). Após análise das imunomarcações para ALP, observou-se diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,0021), sendo que o grupo Endovac® apresentou marcação significantemente mais intensa com relação ao grupo controle. Os resultados do presente estudo in vivo permitiram concluir que a irrigação por pressão apical negativa (EndoVac®) apresentou potencial mineralizador, indicando ser o melhor sistema de irrigação para dentes com ápice incompleto e lesão periapical / The objective of this in vivo study was to evaluate the expression intensity of molecules indicating cell differentiation with mineralizing phenotype in immature dogs teeth with experimentally induced apical periodontitis subjected to irrigation of root canals using negative apical pressure (EndoVac®) and positive apical pressure (conventional irrigation). Thirty teeth (60 roots) were divided into 3 groups: EndoVac® Group - negative apical pressure irrigation (n=20), Conventional Group - positive apical pressure irrigation (n=20); and Control Group with apical periodontitis (n=20). After induction of periapical lesions, the root canals of the EndoVac ® and Conventional groups were instrumented with hand files, using the corresponding irrigation system. After 90 days, the animals were euthanized and the specimens were submitted to histotechnical processing. Representative sections of each group were stained with hematoxylin and eosin (HE) for histopathological description of the apical and periapical regions. The sections were submitted to osteopontin (OPN), alkaline phosphatase (ALP) and RUNX2 transcription factor Immunostaining in the apical and periapical regions of the roots. A semi-quantitative analysis was performed to evaluate the expression intensity of these markers, using a score system. Data were statistically analyzed by the Kruskal-Wallis non-parametric test and Dunn post-test, and the significance level was set at 5%. Regarding the histopathological description, different findings were observed in each group. Briefly, the EndoVac® group demonstrated a well-organized connective tissue, invaginating into the root canal, and exhibited a more advanced repair process in relation to the other groups. RUNX2 immunostaining revealed that in the EndoVac® group there was a significantly stronger (p=0.03) immunostaining in comparison to the control group. Regarding the OPN expression, it was not possible to find a statistically significant difference between the groups (p=0.15). After analyzing ALP immunostaining, a statistically significant difference was observed between the groups (p=0.0021), and the EndoVac® group showed a markedly stronger mark immunostaining than the control group. The results of the present in vivo study allowed concluding that negative apical pressure irrigation (EndoVac®) presented mineralizing potential, indicating that it is the best irrigation system for teeth with an open apex and apical periodontitis

As lesões periapicais ocasionam destruição dos tecidos apicais e periapicais, por meio da exacerbação da resposta inflamatória e imune. O sistema imunológico é ativado e células são recrutadas para o local da lesão, incluindo os macrófagos, que podem ser polarizados em macrófagos M1 e M2.O presente estudo teve como objetivo quantificar macrófagos M1 e M2 em cistos periapicais de dentes decíduos e permanentes.Foram selecionados 15 casos de cistos periapicais de dentes decíduos e 10 cistos periapicais de dentes permanentes. Em todos os casos foi realizada análise histopatológica em HE, classificando o tipo e o grau do infiltrado inflamatório, por meio de escores. Além disso, foi realizada a quantificação dos marcadores CD68 (M1+, M2+) e CD163 (M1-,M2+) por meio da análise imunohistoquímica. Os resultados obtidos foram submetidos ao teste de Mann Whitney, com nível de significância de 5%.Embora tenham sido detectados macrófagos M1 e M2 tanto nas lesões dos dentes decíduos quanto dos permanentes, houve maior prevalência de macrófagos M2 (p<0,05). A comparação entre dentes decíduos e permanentes evidenciou maior quantificação de macrófagos M1 nas lesões dos dentes permanentes (p=0,002). Pôde-se concluir que os macrófagos M1 e M2 estão presentes nos cistos periapicais de dentes decíduos e permanentes, com maior quantidade de células M2. Além disso, os cistos periapicais dos dentes permanentes apresentaram maior quantidade de macrófagos M1, em comparação aos cistos dos dentes decíduos / The radicular lesion leads to the apical and periapical tissues destruction throughout an inflammatory and immune response. The immune system is activated and cells are recruited to the lesion site, which includes macrophages that can be polarized into M1 and M2 macrophages. The objective of this study was to quantify M1 and M2 macrophages in radicular cysts in permanent and deciduous teeth. In total, 15 radicular cysts cases in deciduous teeth and 10 in permanent teeth were selected. A histopathologic analysis in HE was performed, allowing the type and inflammatory infiltrates level classification in scores. In addition, the CD68 (M1+, M2+) and CD163 (M1-, M2+) markers were quantified through an immunohistochemistry analysis. The data acquired were submitted to a Mann Whitney test, with a 5% significance level. A higher prevalence of M2 macrophages (p<0.05) was observed, despite both M1 and M2 macrophages have been detected in the permanent and deciduous teeth lesions. The comparison between permanent and deciduous teeth presented a higher M1 macrophages quantity in permanent teeth lesions (p=0.002). In summary, the M1 and M2 macrophages are present in deciduous and permanent teeth radicular cysts, with a higher quantity of M2 cells. Moreover, the radicular cysts in permanent teeth have shown a higher M1 macrophages quantity when compared to cysts in deciduous teeth

O presente estudo objetivou analisar o envolvimento diferenciado dos núcleos da rafe nas respostas homeostáticas de ratos machos jovens submetidos a exercício físico. Foram formados os grupos de animais treinados (T) e sedentários (S). Para os animais do grupo T foi adotado o protocolo de natação moderada, por meio do qual os animais foram treinados durante oito semanas consecutivas, apresentando, cada semana, cinco dias de treinamento e dois de descanso. Após o período de treinamento, os animais foram perfundidos transcardiacamente e o encéfalo removido, pós-fixado, crioprotegido e criosecionado em cortes coronais de 40&#61549;m, para processamento com técnicas de imunoperoxidase pelo método ABC contra a proteína Fos, utilizando-se DAB como cromógeno. A análise da ativação neuronal foi efetuada pela expressão da proteína Fos. Os cortes foram analisados em microscopia de campo claro e uma série adjacente foi montada em lâminas gelatinizadas e coradas com tionina, método de Nissl, para controle citoarquitetônico. Durante o experimento, notou-se a adaptação dos animais ao exercício (grupo T), sendo necessária a adição, em sua cauda, de pesos relativos ao peso corpóreo do animal, proporcionando uma adequada seqüência de treinamento. A análise quantitativa evidenciou diferentes densidades de marcação nos diferentes núcleos entre os grupos experimentais. A análise estatística ANOVA e o teste Tuckey evidenciaram diferenças estatísticas entre os grupos, onde os animais do grupo T apresentaram maior ativação de neurônios em relação aos animais do grupo S. O núcleo RPa apresentou o maior número médio de células ativadas, fato evidenciado pela contagem dos neurônios Fos-imunorreativos (Fos-IR), respectivamente, nos grupos T e S: (57,74 e 44,40); seguido pelos núcleos DR (56,67 e 47,15), RMg (42,68 e 36,09), ROb (23,98 e 19,70), MnR (23,89 e 21,19) e PnR (20,18 e 14,07). No núcleo PMnR foi observada, contrariamente aos demais grupos, um maior número médio de células ativadas no grupo S em relação ao grupo T (5,35 e 4,08, respectivamente). Entretanto, estatisticamente, esse dado não é representativo. Assim, de forma inédita, verificou-se a participação diferenciada dos núcleos da rafe nos mecanismos homeostáticos relacionados ao exercício físico em animais treinados. / The aim of this work was to study the distinguished involvement of the raphe nuclei in homeostatic mechanisms of young male rats submitted to physical exercises. Trained (T) and sedentary (S) animals constituted the experimental groups. For animals of group T, the method applied were the moderate swimming protocol, when the animals were trained consecutively for eight weeks (five days training, two days for rest). After the training, the animals were transcardiacally perfused and their brain were removed, post-fixated, cryoprotected and cryosectioned in coronal sections of 40&#61549;m, which were processed with ABC-DAB anti-Fos immunoperoxidase techniques. The analysis of the neuronal activation was observed by the expression of Fos protein. The sections were analyzed in light microscopy and an adjacent series was mounted in gelatinous slides and stained with tionin, Nissl method, for cytoarchitectonical control. Animals of group T adaptation to exercise was observed during the experiment when heaviness, equivalent to the animal’s body weight, was added in their tails, giving an adequate training sequence. The quantitative analysis highlighted different densities of mark in different nuclei between the experimental groups. The statistic analysis ANOVA and Tuckey test presented different densities between experimental groups, in which the T group of animals showed bigger activation of neurons in relation to the S group of animals. The RPa nucleus showed the higher median number of labeled cells, fact evidenced through the counting of Fos-immunoreactive neurons (Fos-IR), respectively, between T and S groups: (57,74 and 44,40); followed by DR (56,67 and 47,15), RMg (42,68 and 36,09), ROb (23,98 and 19,70), MnR (23,89 e 21,19) and PnR (20,18 and 14,07) nuclei. In the PMnR nucleus was observed, against the other groups, higher number of median numbers of labeled cells in the S group in relation to T group (5,35 and 4,08, respectively). Thus, the distinguished raphe nuclei’s participation in homeostatic mechanisms related with physical exercises in trained animals was evidenced for the first time.

Pólipos adenomatosos colorretais são conhecidos como lesões pré-malignas. Mutações germinativas nas enzimas de reparo (MMR) hMLH1, hMSH2 e hMSH6 são causas reconhecidas de câncer colorretal hereditário não polipóide, induzindo um fenótipo mutante caracterizado por instabilidade de microssatélite (MSI). A MSI também é detectada em cânceres colorretais esporádicos. O Cox-2 é uma enzima induzível que regula a síntese de prostaglandina, sendo fortemente manifestada em locais de inflamação, pólipos adenomatosos colorretais e câncer. Objetivos: Avaliar a imunoexpressão do hMLH1, hMSH2 e Cox-2 em pólipos ressecados através da colonoscopia e associar às características clínico-patológicas (idade, sexo, localização, tamanho, histologia e grau de displasia). Métodos: 138 pacientes com pólipos colônicos, 6 com mucosa colônica normal e 23 pacientes com adenocarcinoma colorretal foram incluídos no estudo. Nenhum paciente apresentava histórico familiar de câncer colorretal. Cento e sessenta e sete amostras foram coletadas e imunocoradas para hMLH1, hMSH2 e Cox-2, usando a técnica ABC-imunohistoquímica e amplificação por tiramida biotinilada. Resultados: A média de idade foi 60,2 + 13,8 (variando de 21 a 90 anos de idade) sendo 77 homens (55,8%) e 61 mulheres (44,2%). Adenomas tubulares estavam presentes em 81,4%, tubulo-viloso em 15,9%, serrilhados em 1,8% e vilosos em 0,9%. A maioria dos adenomas localizava-se na região retossigmoideana (63,5%), seguido pelo ascendente em 14,2%, descendente em 8,2%, ceco em 7,5% e o transverso em 6,7%. Displasia de alto grau foi detectada em 46 (40,4%) e de baixo grau em 68 (59,6%) dos adenomas. Perda de imunoexpressão hMLH1 e hMLH2 foi observada em 20% e 15,5% dos adenomas, respectivamente. O Cox-2 foi positivo em 9% dos adenomas e em 40% dos adenocarcinomas. Além disso, a imunoexpressão Cox-2 foi associada à multiplicidade de adenomas no mesmo paciente (p=0,001). Não houve associação entre a imunoexpressão de marcadores e o sexo, idade, localização, tamanho, histologia ou grau de displasia. Conclusões: 1. A perda de imunoexpressão hMLH1 e hMLH2 em adenomas é relativamente freqüente em pacientes sem histórico familiar de câncer colorretal; 2. O Cox-2 é fortemente manifestado em pólipos adenomatosos e adenocarcinomas colorrretais sendo que sua positividade em adenomas pode indicar um risco maior de lesões múltiplas. / Colorectal adenomatous polyps are known as premalignant lesions. Mutations in the mismatch repair (MMR) enzymes hMLH1, hMSH2 and hMSH6 are recognized causes of hereditary nonpolyposis colorectal cancer and act by inducing a mutator phenotype characterized by microsatellite instability (MSI). MSI is also detected in sporadic colorectal cancers. Cox-2 is an inducible enzyme that regulates prostaglandin synthesis and is overexpressed at sites of inflammation, in colorectal adenomatous polyps and cancer. Aims: To evaluate the immunoexpression of hMLH1, hMSH2 and Cox-2 in resected polyps through colonoscopy, and to associate to the clinicopathologic characteristics (age, gender, location, size, histology and grade of dysplasia). Methods: 138 patients with colonic polyps, 6 with normal colonic mucosa and 23 patients with colorectal adenocarcinoma were enrolled in this study. All patients had no familial history of colorectal cancer. The 167 samples were collected and immunostained for hMLH1, hMSH2 and Cox-2 using the ABC-immunohistochemistry technique and amplification by biotinylated tyramide. Results: The mean age was 60.2 + 13.8 (varying from 21 to 90 years-old) where 77 (55.8%) were men and 61 women (44.2%). Tubular adenomas were present in 81.4%, tubulous-villous in 15.9%, serrated in 1.8%, and villous in 0.9%. The majority of the adenomas were located in the retossigmoid region (63.5%), followed by ascendent in 14.2%, descendent in 8.2%, cecum in 7.5% and transverse in 6.7%. High-grade dysplasia was detected in 46 (40.4%) and low-grade dysplasia in 68 (59.6%) of the adenomas. Loss of hMLH1 and hMLH2 immunoexpression was observed in 20% and 15.5% of the adenomas, respectively. Cox-2 was positive in 9% of the adenomas, and in 40% of the adenocarcinomas. Moreover, Cox-2 immunoexpression was associated to the multiplicity of adenomas in the same patient, p=0.001. There was no association between marker immunoexpression and gender, age, location, size, histology or grade of dysplasia. Conclusions: 1. Loss of hMLH1 and hMLH2 immunoexpression in adenomas is relatively frequent in patients without colorectal cancer familial history; 2. Cox-2 is overexpressed in colorectal adenomatous polyps and adenocarcinomas, and its positivity in adenomas may indicate higher risk for multiple lesions.