Made available in DSpace on 2016-12-23T13:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiane Lemos Perdigao.pdf: 4071467 bytes, checksum: 85c5c1063113c7af6b5b3131436fee6f (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O estudo da influência do alumínio (Al) em duas cultivares da espécie Passiflora edulis foi apresentado para melhor compreensão deste trabalho em dois capítulos, sendo abordado o experimento com a cultivar (cv.) FB 100 e FB 200 respectivamente. O estudo com a cv. FB100 em casa de vegetação teve como objetivo verificar alterações morfofisiológicas após 15 dias de tratamento com Al. Para as plantas da cv. FB 200 avaliou-se a relação entre a ação mutagênica e a concentração de flavonoides produzidos por estas, quando cultivadas em solos com diferentes concentrações de Al. Foram realizadas análises de massa fresca e seca dos órgãos, comprimento do caule, área foliar, análise nutricional e verificação de Al nas folhas e raízes da cv. FB100. Para a prospecção fitoquímica dos extratos das folhas das cv. FB100 e FB200 utilizaram-se reações de coloração e precipitação para identificação das principais classes químicas presentes. A concentração de flavonoides foi determinada através da quantificação espectrométrica. Para o teste de mutagenicidade verificou-se a frequência de micronúcleos em 2000 eritrócitos policromáticos utilizando o extrato das folhas da cv. FB200. Todos os parâmetros morfológicos analisados para a cv. FB100 não diferiram estatisticamente dos controles. Entretanto foi observada maior concentração de Al nas raízes no tratamento de 5,32 mM. Todos os tratamentos indicaram a presença de alcaloides, flavonoides e esteroides nas folhas das plantas. No extrato hexano/diclorometano a maior concentração de flavonoides, foi observada no tratamento 0,33 mM de Al. Os resultados observados para a cv. FB200 apresentou maior concentração de Al foliar no campo com 0,33mM de Al (T2), os grupos majoritários encontrados foram saponinas, esteroides e flavonoides. O tratamento T2 apresentou a maior concentração de flavonoides e maior potencial mutagênico. Esses resultados indicam que o Al não promoveu alterações significativas nos parâmetros morfofisiológicos da cv. FB 100. Em P. edulis cv. FB 200 saponinas, esteróides e flavonoides ocorrem independentemente da concentração de Al disponível e provavelmente a maior concentração de flavonoide pode ter induzido a mutagenicidade em células de medula óssea de camundongos / The influence of aluminum (Al) in two cultivars of Passiflora edulis is presented in two chapters: first a discussion on the experiment with the cultivar (cv.) FB 100 and second with the cultivar (cv.) FB 200. The study with cv. FB100 in greenhouse aimed to verify morphophysiological changes after 15 days of treatment with Al. For cv. FB 200 plants was evaluated the relationship between the mutagenic and the concentration flavonoids produced by them, when grown in soils with different concentrations aluminum. Analyses of fresh and dry weight organs, stem length, leaf area, nutritional analysis and verification of Al in leaves and roots were studied on cv.FB100. For the leaves of cv. FB100 and cv. FB200 phytochemical screening of extracts were used staining and precipitation reactions for identification of the main chemical classes present. The concentration of the flavonoids was determined by spectrometric measurement. To mutagenicity test was found the frequency of micronucleus in 2000 polychromatic erythrocytes using the cv. FB200 leaves extract. All cv. FB100 morphological parameters analyzed did not differ from controls. However a higher Al concentration was presented in the treatment of 5.32 mM roots. All treatments showed the presence of alkaloids, flavonoids and steroids in leaves. The extract hexane/dichloromethane at a higher flavonoid concentration, has been observed in treating 0.33 mM Al. The cv. FB200 results showed higher foliar Al concentration in the field with 0.33 mM Al (T2), and saponins, steroids and flavonoids were the major groups found. The T2 treatment had the highest flavonoids concentration and higher mutagenic potential. These results indicate that Al did not promote significant changes in cv. FB 100 morphophysiological parameters. In P.edulis cv. FB 200 saponins, flavonoids and steroids occur regardless of the Al available and possibly the largest concentration of flavonoid mutagenicity can be induced in cells of mouse bone marrow

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissLHR.pdf: 830179 bytes, checksum: 97f70fcd0bdc01f0fae0981e6e232468 (MD5) Previous issue date: 2006-03-30 / Cariophylene sesquiterpenes are chemical compounds isolated from fungi of the Pestalotiopis genus in early studies developed in our research group. In the present work, a cultivation and analysis methodology were developed for these compounds in Pestalotiopsis, isolated from plants Pinus taeda, Swietenia macrophyla and Khaya invorenses. Different procedures were optimized for the extraction and analysis of the extracts employing liquid and gas chromatography coupled with mass spectrometry techniques (LC/MS and GC/MS). These studies had the intention of to detect the sesquiterpenes in fungal extracts without theys of isolation, and to check their production profile during a fixed cultivation period. The production of volatile organic compounds by the different species of Pestalotiospsis was also evaluated using hydrodestillation in Clevenger apparatus. The sesquiterpene cariophyllene was the main compound identified. Another study involving the secondary metabolites produced by Aspergillus aculeatus, a fungus isolated from the host plant Melia azedarach, was carried out. The target compounds in these studies were the dimeric aromatic poliketides Aurasperones A and B, Fonsesinones A and B, Orlandine and Kotanin. A poliketide production curve, obtained using HPLC, showed that the monomers are not detected during the early stage of development, indicating that probably the dimers are rapidly formed by the fungus or they are biosynthesized in the form already dimeric. Experiments of biotransformation showed that fungi possesss capacity to modify certain substracts, when cultivated in artificial ways. / Sesquiterpenos da classe dos cariofilenos são compostos químicos já isolados de fungos do gênero Pestalotiopsis no nosso grupo de estudos. No presente trabalho foram desenvolvidas metodologias de cultivo e análise de espécies de Pestalotiopsis, isoladas das plantas Pinus taeda, Swietenia macrophyla, e Khaya invorenses. Diferentes procedimentos de extração e análise desses extratos, empregando LC/MS e GC/MS, foram otimizados. Esses procedimentos visaram a detecção desses sesquiterpenos sem a necessidade de isolamento. Posteriormente foi delineada uma curva de produção desses compostos variando-se o tempo de cultivo, para posterior quantificação. A produção de compostos voláteis produzidos pelas diferentes espécies de Pestalotiopsis, foi avaliada usando a técnica de extração por hidrodestilação (através do extrator de Clevenger). Um sesquiterpeno cariofileno foi o principal composto identificado. Um outro estudo dos metabólitos secundários produzidos pelo fungo Aspergillus aculeatus, isolado da planta hospedeira Melia azedarach, foi feito tendo como alvo pré-determinado os policetídeos aromáticos diméricos como as Aurasperonas A e B, Fonsesinona A e B, Orlandina e Kotanina. Uma curva de produção desses policetídeos mostrou que os monômeros não são detectados nos tempos iniciais de cultivo, indicando uma rápida dimerização no meio ou a sua biossíntese já na forma dimerizada. Experimentos de biotransformação mostrou que o fungo possui capacidade de modificar certos substratos, quando cultivado em meios artificiais.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of natural resources as a treatment and cure of diseases is an old and still widely used method. The study aims to determine the antimicrobial activity and secondary metabolites from plants Bidens pilosa L. obtained in different crops as well as perform the physical-chemical quality control of plant drug. Studying the in vitro germination were tested different conditions and diasporas storage periods, and the ex vitro different substrate preparation. In micropropagation, they were used apical segments and nodal, and combinations of BAP and NAA. The conditions and diasporas storage period influenced the germination, with the highest percentage of germination when kept at 25°C for 30 days (60.4%), and for 120 days at 10°C (75%). With cultivation in greenhouse there was no difference in the percentage of germination among different substrate preparation (76% and 70% not autoclaved autoclaved). In micropropagation, the absence of growth regulators gave the highest percentage of shoots (37.5% apical segment and 10% nodal segment). From the plants obtained from different crops, traditional (TC), greenhouse (GC), in vitro germination (IG) and micropropagation in vitro (IM), extracts and fractions were performed, evaluating the antimicrobial activity. The best antibacterial activity was obtained with the butanol fraction (TC), with S. epidermidis (MIC-16 μg/mL) and the best antifungal activity was obtained with hexane fraction (GC) and chloroform (TC) with S. cerevisiae (MIC-16 μg/mL). The analysis identified by HPLC-DAD chlorogenic acid, caffeic acid and rutin. Where the greatest chlorogenic acid contents were to extract and acetate fraction of the greenhouse (22.92 and 10.32 mg/g, respectively) and butanol fraction of traditional cultivation (21.71 mg/g); the highest rutin content were found to extract, acetate and butanol fraction of traditional farming (46.39, 229.81 and 23.16 mg/g, respectively). The quality control parameters established for the plant material, allows the use of B. pilosa with quality and safety. The different cultures of B. pilosa provided a variation in production of secondary metabolites and the identified compounds can be attributed to antimicrobial activity on plant species. / A utilização dos recursos naturais como forma de tratamento e cura de doenças é um método antigo e ainda muito utilizado. O estudo teve por objetivo determinar a atividade antimicrobiana e os metabólitos secundários, a partir de plantas de Bidens pilosa L. obtidas em diferentes cultivos, bem como realizar o controle de qualidade físico-químico da droga vegetal. Estudando a germinação in vitro foram testados diferentes condições e períodos de armazenamento dos diásporos, e com a ex vitro diferentes preparos de substrato. Na micropropagação, foram utilizados segmentos apicais e nodais, e combinações de BAP e ANA. As condições e período de armazenamento dos diásporos influenciaram na germinação, com maior porcentagem de germinação quando mantidos a 25ºC por 30 dias (60,4%), e por 120 dias a 10ºC (75%). Com o cultivo em casa de vegetação não houve diferença na porcentagem de germinação entre os diferentes preparos de substrato (76% não autoclavado e 70% autoclavado). Na micropropagação, a ausência de fitorreguladores proporcionou a maior porcentagem de brotações (37,5% segmento apical e 10% segmento nodal). A partir das plantas obtidas dos diferentes cultivos, tradicional (CT), casa de vegetação (CV), germinação in vitro (GI) e micropropagação in vitro (MI), foram realizados extratos e frações, avaliando-se a atividade antimicrobiana. A melhor atividade antibacteriana foi obtida com a fração butanólica (CT), com S. epidermidis (CIM-16 μg/mL) e a melhor atividade antifúngica foi obtida com as frações hexânica (CV) e clorofórmica (CT) com S. cerevisae (CIM-16 μg/mL). A análise por CLAE-DAD identificou ácido clorogênico, ácido caféico e rutina. Onde os maiores teores de ácido clorogênico foram com extrato e fração acetato de casa de vegetação (22,92 e 10,32 mg/g, respectivamente) e fração butanólica de cultivo tradicional (21,71 mg/g); os maiores teores de rutina encontradas foram com extrato, fração acetato e butanólica de cultivo tradicional (46,39; 229,81 e 23,16 mg/g, respectivamente). Os parâmetros de controle de qualidade estabelecido para o material vegetal, permite o uso de B. pilosa com qualidade e segurança. Os diferentes cultivos de B. pilosa proporcionaram uma variação na produção de metabólitos secundários, e aos compostos identificados pode ser atribuída a atividade antimicrobiana da espécie vegetal.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3286.pdf: 1985838 bytes, checksum: e5ef56af190be032fb21c75bb7198227 (MD5) Previous issue date: 2010-06-01 / Universidade Federal de Sao Carlos / Studies of marine natural products in 20 years of research have revealed a wide variety of molecules with complex structures and hitherto unknown, and potent biological activities. The aims of this study were to isolate microbial strains associated with Didemnum granulatum, to fermentate such strains for the production of crude extracts and the screening of these extracts for bioactive secondary metabolites. For the isolation of the strains, six different culture media were prepared with artificial sea water: malt extract 2% and 3%, carrot/potato, corn, oat and GPY. The strains were cultivated for 30 days in 250mL of the same culture media. The crude extracts were obtained by partition with ethyl acetate. The extracts were sent for the cytotoxic activity bioassay and analyzed by thin layer chromatography (TLC) on silica gel plate (with absorption in UV-vis). Among the 26 extracts, samples DG (M3) 6'C and DG (M3) 5'C showed potent cytotoxic activity, samples DG (B) 13, DG (M3) 1 and DG (G) 2B a moderate activity. The analysis by TLC indicated the presence of bioactive secondary metabolites in the extracts. The strains were identified as bioactive three fungal: DG (M 3) 6'C (Penicillium sp.) DG (M3) 5'C (Cladosporium sp.) DG (M3) 1 (Aspergillus sp.) And two bacterial: DG (B) 13 (Aurantimonas sp.) DG (G) 2B (Nocardiopsis sp.). These were grown on a larger scale of broth (500 mL) and extracted after 7, 14, 21 and 30 days of incubation. We carried out a cleaning process of these extracts by solid phase extraction (SPE) column of silica gel derivatized with C18 (35 mL of eluent: 100% H2O, MeOH/H2O 1:1 and MeOH 100%). The fractions generated were analyzed by HPLC-UV-MS trying to find characteristic profiles of secondary metabolites. From the DG sample (M3) 6'C (A + B), was isolated and identified the compound 13- deoxy-fomenona previously obtained by Tirilly et al. in 1983. Although this compound is not unheard of, no literature reports of studies involving bioassays cytotoxic against tumor cells and even this compound has been isolated from other species of microorganisms other than the fungus Dicyma pulvinata. / Os estudos sobre produtos naturais marinhos, durante os ultimos 20 anos de pesquisa, revelaram uma grande variedade de moleculas com estruturas complexas e ate entao desconhecidas, alem de potentes atividades biologicas. Assim, os objetivos deste trabalho foram isolar linhagens de micro-organismos associadas a ascidia Didemnum granulatum, sua posterior fermentacao para a producao de extratos brutos e a analise destes extratos na busca por metabolitos secundarios bioativos. Para o isolamento das linhagens foram utilizados os seguintes meios de cultura preparados com agua do mar artificial: extrato de malte 2% e 3%, cenoura/batata, fuba, aveia e GPY. A fermentacao das linhagens foi feita em 250 mL dos mesmos meios de cultura sem agar, durante 30 dias. Os extratos brutos foram obtidos por particao com acetato de etila. Estes extratos foram enviados para bioensaio de atividade citotoxica contra celulas tumorais e analisados por cromatografia em camada delgada (CCD) em placa de silica gel (com diferentes reveladores). Dentre os 26 extratos, as amostras DG(M3) 6 C e DG(M3) 5 C apresentaram potente atividade citotoxica, as amostras DG(B)13, DG(M3)1 e DG(G)2B uma atividade moderada. As analises por CCD indicaram a presenca de metabolitos secundarios nos extratos bioativos. As linhagens bioativas foram identificadas como sendo tres fungicas: DG(M3)6 C (Penicilium sp.); DG(M3)5 C (Cladosporium sp.); DG(M3)1 (Aspergillus sp.) e duas bacterianas: DG(B)13 (Aurantimonas sp.); DG(G)2B (Nocardiopsis sp.). Estas foram cultivadas em escala maior de meio liquido (500 mL) e extraidas apos 7, 14, 21 e 30 dias de incubacao. Realizou-se um processo de limpeza destes extratos por extracao em fase solida (SPE) em coluna de silica-gel derivatizada com C18 (35 mL dos eluentes: H2O 100%, MeOH/H2O 1:1 e MeOH 100%). As fracoes geradas foram analisadas por CLAE-UV-EM buscando-se encontrar perfis caracteristicos de metabolitos secundarios. A partir da amostra DG(M3) 6 C (A+B), foi isolado e identificado o composto 13-desoxi-fomenona, previamente obtido por Tirilly et al. em 1983. Apesar deste composto nao ser inedito, nao ha relatos na literatura de estudos envolvendo bioensaios citotoxicos contra celulas tumorais e nem mesmo deste composto ter sido isolado de outras especies de microrganismos que nao seja do fungo Dicyma pulvinata.

Submitted by JELENA PURIC (jelena0puric@gmail.com) on 2018-04-16T12:39:06Z No. of bitstreams: 1 Jelena Puric Dissertação de Mestrado.pdf: 2830343 bytes, checksum: 555cfd034f96e02e12c50107d2077d5f (MD5) / Rejected by Adriana Aparecida Puerta null (dripuerta@rc.unesp.br), reason: Prezada Jelena, Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: 1) A folha de aprovação está em local errado. No arquivo enviado, está em primeiro lugar, antes da capa. O correto de acordo com as normas vigentes é que a folha de aprovação venha após a ficha catalográfica (que o seu arquivo também não tem) e venha antes do Resumo. 2) Falta a ficha catalográfica, que deve ser solicitada pelo site da biblioteca da Unesp de Rio Claro e inserida após a folha de rosto no arquivo pdf e no verso da folha de rosto na versão impressa. O documento enviado não foi excluído. Para revisá-lo e realizar uma nova tentativa de envio, acesse: https://repositorio.unesp.br/mydspace Agradecemos a compreensão e aguardamos o envio do novo arquivo. Atenciosamente, Biblioteca Campus Rio Claro Repositório Institucional UNESP on 2018-04-16T14:20:27Z (GMT) / Submitted by JELENA PURIC (jelena0puric@gmail.com) on 2018-04-16T14:31:14Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Jelena Puric.pdf: 2938364 bytes, checksum: b7379106bbe1a2cdf5ce930d5337096b (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Aparecida Puerta null (dripuerta@rc.unesp.br) on 2018-04-16T18:28:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 puric_j_me_rcla.pdf: 2383486 bytes, checksum: e2cb2e6c5d3d71426040a339c65c55ce (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T18:28:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 puric_j_me_rcla.pdf: 2383486 bytes, checksum: e2cb2e6c5d3d71426040a339c65c55ce (MD5) Previous issue date: 2018-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho teve como objetivo obter extratos contendo metabólitos secundários de fungos filamentosos isolados de sedimentos marinhos da Antártica e avaliar sua potencial atividade antibacteriana em Xanthomonas citri subsp. citri, Xanthomonas euvesicatoria e Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (bactérias fitopatogênicas que causam doenças em cítricos, pimenta e tomate, e maracujá, respectivamente). Entre os 90 extratos brutos intracelulares e extracelulares obtidos a partir de fungos, 19 mostraram a capacidade de impedir o crescimento de X. citri subsp. citri e X. euvesicatoria in vitro e 22 mostraram a capacidade de dificultar o crescimento de X. axonopodis pv. passiflorae in vitro. Os extratos extracelulares inibiram em média 97,12% de X. citri subsp. citri, 95,94% de X. euvesicatoria e 96,58% de X. axonopodis pv. passiflorae a 3,0 mg / mL. / This work aimed to obtain extracts containing secondary metabolites from filamentous fungi isolated from marine sediments from Antarctic and assess their potential antibacterial activity on Xanthomonas citri subsp. citri, Xanthomonas euvesicatoria and Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (phytopathogenic bacteria causing diseases in citrus, pepper and tomato, and passionfruit, respectively). Among the 90 raw intracellular and extracellular extracts obtained from fungi, 19 showed the ability to hamper the growth of Xanthomonas citri subsp. citri and X. euvesicatoria in vitro and 22 showed the ability to hamper the growth of X. axonopodis pv. passiflorae in vitro. The extracellular extracts inhibited on average 97,12% of Xanthomonas citri subsp, 95,94% of X. euvesicatoria and 96,58% of X. axonopodis pv. passiflorae at 3,0 mg/mL.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-03-13T17:45:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Mestrado Jessica Guido.pdf: 2910682 bytes, checksum: 6e5a54efeb07a20e49a541a5149ab676 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T17:45:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao Mestrado Jessica Guido.pdf: 2910682 bytes, checksum: 6e5a54efeb07a20e49a541a5149ab676 (MD5) Previous issue date: 2015-08-05 / Rhizophora mangle L. é a espécie arbórea mais frequente no mangue brasileiro e tem intenso uso popular no tratamento de doenças mucocutâneas. A fim de fornecer base científica para sua utilização, este estudo teve por objetivos avaliar a atividade cicatrizante de creme de extrato aquoso de folha de Rhizophora mangle L. em ratos Wistar, e investigar a ação citotóxica e o perfil fitoquímico dos extratos aquosos das folhas, caule e raiz de R. mangle. O screening fitoquímico dos extratos aquosos de folhas, caule e raiz da planta foi realizado a partir da identificação dos compostos majoritários. Realizou-se a investigação da citotoxicidade dos extratos das três partes da planta, com concentrações de 100; 10; 1; 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001 e 0,00001 μg/mL frente as células Hela (104 células/mL), e como controle utilizou-se o Dimetilsufóxido (0,1%). Para avaliação da atividade cicatrizante do creme de extrato aquoso foram utilizados 45 ratos Wistar, fêmeas, submetidos à indução de ferida cirúrgica e divididos em 3 grupos (controle negativo, padrão e tratado). Cada grupo recebeu, respectivamente, aplicação de soro fisiológico a 0,9%, dexpantenol a 5% em creme e extrato aquoso da folha da R. mangle. a 5% em creme, e foram acompanhado até o 5o, 10o e 15o dia de pós-operatório para avaliação dos aspectos macroscópicos das feridas e avaliações morfométrica e histomorfométrica. O grupo tratado apresentou feridas uniformes e sem infecção, quando comparado aos outros dois grupos, porém a análise morfométrica não mostrou no 15o dia diferença estatística entre os grupos devido ao formato retangular da ferida inicial. O estudo histomorfométrico demonstrou que todos os animais tratados com o creme de R. mangle apresentaram reepitelização completa no 15o dia de pós-operatório (0,00 ± 0,00) em relação ao padrão (1.26 ± 0.77) e controle negativo (2.45 ± 0.62). Houve proliferação de células Hela sob ação das diferentes concentrações de 0,001 a 100 μg/mL nos extratos das folhas e caule, e na raiz em 100 μg/mL com p>0,05. O perfil fitoquímico revelou presença de taninos nos três extratos, além de flavonóides na folha; flavonóides, triterpenos e saponinas no caule, e na raiz revelou também a presença de triterpenos. Através de ensaios fitoquímicos ficou comprovado a presença de taninos, flavonóides, triterpenos e saponinas nos extratos aquosos de R. mangle e foi também observado efeito mitogênico em células HeLa. Este estudo revelou que o uso tópico do EAF. R. mangle a 5% em creme apresenta efeito significativo na reepitelização de feridas cirúrgicas em ratos e reforçou a importância da realização da histomorfometria na correlação com os achados morfométricos. / Rhizophora mangle L. is the most common species in Brazilian mangrove and has intense popular use in treatment of mucocutaneous disease. In order to provide scientific basis for its use, this study aimed to evaluate the healing activity of aqueous extract cream of Rhizophora mangle L. leaves in rats, and to investigate the cytotoxic activity and phytochemical screening of aqueous extracts of leaves, stem and root of R. mangle. Phytochemical screening of aqueous extracts of leaves, stem and root of the plant was done by identification of major compounds. The cytotoxicity of the extracts of the three parts of the plant, with concentrations of 100; 10; 1; 0.1; 0.01; 0.001; 0.0001 and 0.00001 ug / mL was evaluated on Hela cells (104 cells / ml) and dimethylsulfoxide (0.1%) was used as control. To evaluate the healing activity of aqueous extract cream were used 45 Wistar rats, females undergoing induction wound and divided into 3 groups (negative control, standard and treated). Each group received respectively 0.9% saline, 5% dexpanthenol in cream and 5% aqueous extracts of leaves of R. mangle in cream, for a period of 5th, 10th and 15th day postoperatively to evaluate the macroscopic aspects of the wounds and morphometric and histomorphometric evaluations. The treated group showed uniform wounds without infection when compared to the other two groups, but the morphometric analysis did not show on the 15th day statistical difference between the groups due to the rectangular shape of the original wound. The histomorphometric study showed complete epithelialization of the animals treated with R. mangle cream on the 15th day after surgery (0,00 ± 0,00) compared to the standard (1.26 ± 0.77) and negative control (2.45 ± 0.62). There was proliferation of Hela cells different concentrations from 0.001 to 100 mg/mL of the extract of leaves and stem, and 100 mg / ml of root with p> 0.05. The phytochemical profile revealed the presence of tannins in the three extracts, and flavonoid in leaves; flavonoids, saponins, triterpenes in stem, and in root was also revealed the presence of triterpenes. Through phytochemical assays it was proven the presence of tannins, flavonoids, triterpenes and saponins in aqueous extracts of R. mangle and mitogenic effect was also observed in HeLa cells. This study showed that th topical use of aqueous extract of leaves of R. mangle in cream at 5% has significant effect on epithelialization of surgical wounds in rats and reinforced the importance of holding the histomorphometry in correlation with the morphometric findings.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-08-25T13:30:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Nélly Mara Vinhote da Silva.pdf: 662011 bytes, checksum: 008fdae35511497291f0cd0b8ca08a91 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-08-26T20:41:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Nélly Mara Vinhote da Silva.pdf: 662011 bytes, checksum: 008fdae35511497291f0cd0b8ca08a91 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-08-26T20:44:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Nélly Mara Vinhote da Silva.pdf: 662011 bytes, checksum: 008fdae35511497291f0cd0b8ca08a91 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-08-26T20:44:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Nélly Mara Vinhote da Silva.pdf: 662011 bytes, checksum: 008fdae35511497291f0cd0b8ca08a91 (MD5) Previous issue date: 2008-03-11 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The study of habitats that have been few explored with purpose of obtaining composts with biotechnological interest that has been produced by the Amazonian’s biological diversity it’s a strategy that will allow the discovery of important bioactive principles. In microbial biodiversity, the actinomycetes represents the most important bacterial group. They have a filamentous organization that occur in great varieties of substrata and present a great application in pharmaceutical industry. The scope of this work was to analyze taxonomically the actinomycetes associated at lichens and to determine the capability of these bacteria for antibiotic producing. Ten samples of foliose lichens were collected in area Federal University of Amazonas (UFAM), South Section. For the isolation of actinomycetes were utilized the culture media Yeast Extract-Malt Extract Agar–Starch (ISP-2A), Casein-Starch Agar (CAA), Raffinose-Histidin Agar (RHA) and Water Agar (AA), added with antifungics. Were isolated 71 actinomycetes associated to foliose lichens. The isolated were tested for antimicrobial activity against eight microorganisms-test by the techniques with cultivation in solid medium and broth culture. Among the actinomycetes tested by solid medium 80% shown antimicrobial activity, mainly against Aspergillus niger, Candida albicans and Staphylococcus aureus. In assay by broth cultivation 79% of the actinomycetes inhibited the growth of microorganisms-test, although the higher activities were against Mycobacterium smegmatis and Staphylococcus aureus. The isolated antimicrobial activity varied from moderate (halo=13 at 18 mm) to high (halo=19 at 35 mm) activity. It was observed that 68% of isolated presented high antimicrobial activity. The identification of the actinomycetes was done by the macro and micromorphological determination, physiologic tests and by the determination of aminoacids from the cell wall, and most of them belonging to genus Streptomyces. The microorganisms were preserved by freezing at -20 oC and by preservation of actinomycetes colony directly in water (Castellani’s method). / O estudo de habitats pouco explorados com a finalidade de obter biocompostos de interesse biotecnológicos produzidos pela diversidade biológica da Amazônia é uma estratégia que permitirá a descoberta de importantes princípios bioativos. Dentre a biodiversidade microbiana, destacam-se os actinomicetos, que são um grupo de bactérias de organização filamentosa que ocorrem em uma grande variedade de substratos e apresentam múltiplas aplicações na indústria farmacêutica, principalmente no que tange a produção de antimicrobianos. Este trabalho teve como escopo analisar taxonomicamente os actinomicetos associados a liquens e determinar a capacidade destas bactérias em produzir antibióticos. Foram coletadas dez amostras de liquens folhosos das árvores presentes na área do Campus Universitário, Setor Sul, da Universidade Federal do Amazonas (UFAM). Para o isolamento dos actinomicetos foram utilizados os meios de cultivo: Ágar Extrato de Levedura-Extrato de Malte-Amido (ISP-2A), Ágar Caseína-Amido (CAA), Ágar Rafinose-Histidina (RHA) e Ágar-Água (AA), suplementados com antifúngicos. Como resultados foram isolados 71 actinomicetos associados aos liquens. Os isolados foram testados quanto à caracterização da atividade antimicrobiana contra oito microrganismos-teste, através de técnicas em meio sólido e em meio líquido. Das linhagens de actinomicetos testados, 80% apresentaram atividade antimicrobiana em meio sólido, principalmente contra Aspergillus niger, Candida albicans e Staphylococcus aureus. No ensaio em meio líquido, 79% das linhagens foram capazes de inibir o crescimento dos microrganismos-teste, sendo que as maiores atividades foram detectadas contra Mycobacterium smegmatis e Staphylococcus aureus. A atividade antimicrobiana dos isolados variou de moderada (halo=13 a 18 mm) a alta (halo=19 a 35 mm) atividade. Observou-se que 68% dos isolados em meio sólido apresentaram alta atividade antimicrobiana frente aos microrganismos-teste. A identificação dos actinomicetos se deu em nível de gênero, através da determinação da micromorfologia, testes fisiológicos e da determinação de aminoácidos da parede celular, sendo a grande maioria pertencente ao gênero Streptomyces. Os microrganismos foram preservados por congelamento a -20 oC e através da técnica de preservação em água (método de Castellani).

Actinobactérias ocorrem em diversos ambientes e possuem grande potencial na produção de enzimas, antibióticos e fármacos. O presente trabalho teve como objetivo o isolamento, a identificação e a bioprospecção de actinobactérias da rizosfera de milho. Foram isoladas 60 linhagens de actinobactérias de plantas sadias de milho, cultivadas em diferentes regiões do Estado de São Paulo. Os isolados com maior atividade, CCMA30 e CCMA33, foram identificados por meio do seqüenciamento parcial do gene 16S rRNA como pertencentes à espécie Streptomyces griseorubiginosus, nestes isolados foi também detectada a presença de genes PKS.O fracionamento do extrato bruto da linhagem CCMA 33 revelou que a fração 7 (m/z 719-768) com atividade antifúngica, foi submetida a fragmentação (MS/MS), onde pelas buscas no dicionário de produtos naturais confirmou-se a presença de Julichromes Q 6-6, substância sintetizada por policetídeos e de mais duas Julichromes (Q 1-3 e Q 3-3). Estes resultados evidenciam a produção de biocompostos de interesse biotecnológico por actinobactérias da rizosfera. / Actinobacteria occur in different environments and have a great potential in producing enzymes, antibiotics and medical molecules. The present work aimed the isolation, identification and the bioprospection by rhizosphere actinobactérias. Sixty strains were isolated from healthy plants of maize, cultivated in different regions Socorro, Serra Negra and Ribeirão Preto. The two isolates with higher activity CCMA30 and CCMA33 were identified by the partial sequencing of the 16S rDNA gene as belonging to the species Streptomyces griseorubiginosus. In these isolates it was detected the presence of PKS genes. The fractioning of the crude extract of the strain CCMA 33 has revealed that fraction 7 (m/z 719-768) displayed antifungal activity and it was submitted to fragmentation (MS/MS), where by searches in the dictionary of natural products detected the presence of Julichromes Q6-6 and the presence of two other Julichromes (Q1-3 and Q3-3). These results highlight the production of secondary metabolites of biotechnological interest by rhizosphere actinobacteria.

O gene de RNAr 16S tem sido amplamente utilizado na inferência filogenética de organismos procariotos, entretanto, sequências desse gene de cianobactérias isoladas de manguezais brasileiros são inexistentes. Neste estudo, 42 sequências inéditas do gene de RNAr 16S de cianobactérias isoladas de manguezais brasileiros foram geradas. Na análise BLAST as sequências apresentaram similaridades variando de 91 a 99% com outras sequências conhecidas de cianobactérias depositadas no GenBank. Na análise filogenética do gene de RNAr 16S várias sequências do gênero Chlorogloea ficaram agrupadas com sequências do gênero Synechococcus e algumas sequências de Nostoc ficaram mais próximas de sequências de Nodularia. As sequências de Leptolyngbya agruparam-se separadas das típicas de Leptolyngbya. Esses resultados corroboram com outros estudos, os quais mostraram que o filo Cyanobacteria necessita de revisão taxonômica. Na avaliação do potencial de produção de substâncias bioativas de 44 isolados de manguezais utilizando a técnica de PCR e dois conjuntos de oligonucleotídeos iniciadores degenerados específicos para sequências gênicas codificantes de peptídeo sintetase não ribossômica (NRPS) e policetídeo sintase (PKS) modular, 10 linhagens apresentaram resultado positivo para presença de NRPS e todos os isolados apresentaram resultado positivo para PKS. Na tentativa de atribuir função a esses genes e posteriormente explorar as potencialidades das linhagens, um produto da PCR de NRPS e 19 de PKS foram sequenciados, as sequências obtidas foram traduzidas para aminoácidos e utilizadas na construção de árvores filogenéticas. A análise filogenética da sequência de aminoácido do domínio de adenilação da NRPS indicou uma possível síntese de sideróforo pela linhagem Phormidium CENA135. Extratos extracelulares dessa linhagem analisados por Q-TOF/MS e RMN indicaram a produção de um sideróforo anfifílico com massa molecular e estrutura similar ao sideróforo synechobactina A. As sequências de aminoácidos do domínio da cetossintase de PKS das 19 linhagens mostraram relações filogenéticas com várias PKSs de linhagens conhecidas por produzirem substâncias, tais como sideróforo, algicida, microginina, oscilaginina B, hectoclorina e scytonemina. No teste da atividade antimicrobiana contra micro-organismos patogênicos dos extratos intra e extracelulares das 44 linhagens, 17 delas inibiram o crescimento de vários dos micro-organismos testados. Os extratos ativos foram analisados por Q-TOF/MS e 34 substâncias putativas conhecidas foram identificadas, tais como fungicidas, inibidores de proteases, antimaláricos e outras de funções desconhecidas. O teste imunológico ELISA específico para detecção da hepatotoxina microcistina (MC) apresentou resultado positivo para 16 das 23 linhagens testadas. Fragmentos de sequências do gene mcyA envolvido na síntese de MC foram amplificados por PCR em cinco linhagens (Synechococcus CENA136, Phormidium CENA135, Chlorogloea CENA142, Chlorogloea CENA146 e Nostoc CENA160), inclusive em dois gêneros sem registro de produção dessa toxina (Synechococcus e Chlorogloea). O teste ELISA específico para detecção da neurotoxina saxitoxina (SXT) apresentou resultado positivo para três linhagens. Entretanto, a análise em Q-TOF/MS e FT-ICR/MS de 15 linhagens, inclusive das que apresentaram resultado positivo no ELISA, não confirmaram a produção de saxitoxinas. / The 16S rRNA gene has been widely used in phylogenetic inference of prokaryotic organisms, however, sequences of this gene of cyanobacteria isolated from Brazilian mangroves are absent. In this study, 42 newly sequences of 16S rRNA gene of cyanobacteria isolated from Brazilian mangroves were generated. BLAST analysis of the sequences showed similarities ranging from 91-99% with other known cyanobacterial sequences deposited in GenBank. Phylogenetic analysis of several 16S rRNA sequences from the genus Chlorogloea were clustered with sequences from the genus Synechococcus and some sequences of Nostoc were closer to sequences of Nodularia. The Leptolyngbya sequences clustered separated from those of typical Leptolyngbya. These results corroborate with other studies which showed that the phylum Cyanobacteria need taxonomic revision. In assessing the potential of bioactive compounds production of 44 mangrove isolates using PCR technique and two sets of degenerated primers specific for gene sequences encoding non-ribosomal peptide synthetase (NRPS) and modular polyketide synthase (PKS), 10 strains showed positive results for the presence of NRPS and all isolates were positive for PKS. In an attempt to assign function to these genes and further explore the potential of the strains, a PCR product of NRPS and 19 PKS were sequenced and the sequences obtained were translated into amino acids and used to construct phylogenetic trees. Phylogenetic analysis of amino acid sequence of the NRPS adenylation domain indicated a possible synthesis of siderophore by the Phormidium strain CENA135. Extracellular extracts of this strain analyzed by Q-TOF/MS and NMR indicated the production of an amphiphilic siderophore with molecular mass and structure similar to the siderophore synechobactin A. The amino acid sequences of the PKS ketosynthase domain of 19 strains showed phylogenetic relationships with several PKSs of strains known to produce compounds such as siderophore, algicide, microginin, oscillaginin B, hectochlorin and scytonemin. In the antimicrobial activity test against pathogenic microorganisms of the intra- and extracellular extracts of 44 strains, 17 of them inhibited the growth of various microorganisms tested. The active extracts were analyzed by Q-TOF/MS and 34 putative known substances were identified such as fungicides, protease inhibitors, antimalarials, and others of unknown function. The immunological test ELISA specific for detection of the hepatotoxin microcystin (MC) was positive for 16 of the 23 strains tested. Sequence fragments mcyA gene involved in the synthesis of MC were amplified by PCR in five strains (Synechococcus CENA136, Phormidium CENA135, Chlorogloea CENA142, Chlorogloea CENA146 and Nostoc CENA160), including two genera with no record of production of this toxin (Synechococcus and Chlorogloea). Specific ELISA test for detection of the neurotoxin saxitoxin (SXT) showed positive results for three strains. However, analysis by Q-TOF/MS and FT-ICR/MS of 15 strains, including those that showed positive ELISA results, did not confirm the saxitoxin production.

Os fungos endofíticos têm sido reconhecidos pela sua grande importância para as plantas hospedeiras, pois podem conferir proteção contra insetos herbívoros e patógenos, promover o crescimento vegetal, além de produzir metabólitos secundários com atividades biológicas diversas, entre outros. A cana-de-açúcar é uma cultura de grande importância social e econômica no Brasil, especialmente para o estado de São Paulo. Ultimamente esta cultura vem recebendo especial atenção devido ao crescente aumento da demanda de matéria prima, principalmente em função do acréscimo no consumo de etanol como biocombustível. Fungos do gênero Penicillium habitam os tecidos e a rizosfera de cana-de-açúcar, onde podem estabelecer associações mutualísticas com a planta e conferir diversos benefícios. Dentro deste contexto, estudos que avaliem a interação de Penicillium spp. com cana-de-açúcar são bastante promissores para geração de conhecimentos que auxiliem na otimização da agricultura. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivos a avaliação do potencial biotecnológico dos endofíticos de raiz e da rizosfera, do gênero Penicillium, pertencentes à comunidade fúngica de cana-de-açúcar, por meio de ensaios de antagonismo, produção de enzimas, solubilização de fosfato inorgânico e produção de ácido indol acético; assim como o estudo da interação de um isolado de P. pinophilum com cana-de-açúcar a partir do desenvolvimento de um sistema de transformação genética mediada pela bactéria Agrobacterium tumefaciens. Tanto a análise da atividade antimicrobiana como a produção de metabólitos apresentaram extensa variação fisiológica entre os isolados avaliados. Um isolado da espécie P. pinophilum (linhagem 44) foi escolhido para ser usado na transformação genética por mostrar-se superior estatisticamente em relação aos demais isolados nos ensaios anteriores. Para aumento da eficiência deste sistema de transformação foram avaliados diferentes parâmetros, dentre eles: tempo de co-cultivo (24 e 48 horas), concentração do indutor acetoseringona (200 M e 400 M) e tipos de membrana (papel filtro e náilon). O sistema de agrotransformação apresentou alta eficiência (482 transformantes por 107 conídios), gerando uma elevada quantidade de transformantes resistentes à higromicina B e expressando GFP. Dentre os parâmetros avaliados, a combinação que deu origem aos melhores resultados de transformação envolveu o co-cultivo por 48 horas sobre membrana de náilon, em meio de cultura contendo 200 M de acetoseringona. A interação fungo-planta foi avaliada a partir da inoculação de P. pinophilum linhagem selvagem e transformantes, em plântulas de cana-de-açúcar, seguida da análise por microscopia óptica de epifluorescência e reisolamento. Os resultados revelaram a natureza não patogênica desse fungo, uma vez que ele foi capaz de colonizar endofiticamente cana-de-açúcar e persistir nas raízes desta planta, sem levar ao desenvolvimento de qualquer sintoma de doença. Além disso, os ensaios de agrotransformação deram origem a uma biblioteca com mil e cem transformantes insercionais, o que constitui uma ferramenta importante para o estudo molecular do metabolismo secundário desse fungo endofítico e poderá contribuir para o entendimento da interação do complexo fungo-cana-de-açúcar, possibilitando no futuro a sua aplicação no melhoramento vegetal e exploração do seu potencial biotecnológico. / Endophytic fungi have been recognized for its great importance for the host plants, they may provide protection against herbivores and pathogens, promote plant growth, and produce secondary metabolites with biological activity, among other benefits. Sugarcane is a socially and economically important crop in Brazil, especially for the state of São Paulo. Lately, this culture has received special attention due to the growing demand for raw materials, mainly due to the increase in consumption of ethanol as a biofuel. Fungi Penicillium inhabit the tissues and rhizosphere of sugarcane, where they can establish mutualistic associations with the plant and provide several benefits. Within this context, studies evaluating the interaction of Penicillium spp. with sugar cane are very promising to generate knowledge in order to assist in the agriculture optimization. Thus, this study aimed to evaluate the biotechnological potential of endophytic Penicillium from root and rhizosphere, belonging to the fungal community of sugarcane, through tests of antagonism, enzyme production, solubilization of inorganic phosphate and indole acetic acid production, as well as studying the interaction of an isolate of P. pinophilum with sugarcane using the development of a system for genetic transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens. Both the analysis of antimicrobial activity and the production of metabolites showed extensive physiological variation among isolates. An isolate of the species P. pinophilum (strain 44) was chosen to be used in genetic transformation for being statistically superior than the other strains in previous trials. Different parameters were evaluated to increase the efficiency of this transformation system, among them: co-culture time (24 and 48 hours), concentration of the inducer acetosyringone (200 µM and 400 µM) and types of membrane (filter paper and nylon). Agrotransformation system showed high efficiency, generating a high amount of hygromycin B resistant transformants that expressed GFP. Among the factors evaluated, the combination that showed the best results involved the transformation with a co-cultivation for 48 hours on a nylon membrane, in culture medium containing 200 µM of acetosyringone. The plant-fungus interaction was assessed from the inoculation of wild type and transformants P. pinophilum in seedlings of sugarcane followed by analysis by epifluorescence microscopy and reisolation. Results revealed the non-pathogenic nature of this fungus, since it was capable of endophytically colonize sugarcane and persisted in the roots of this plant, without developing any symptoms of illness. In addition, agrotransformation tests gave rise to a library with a thousand and one hundred insertional transformants, which is an important tool for molecular study of secondary metabolism of endophytic fungus, and may contribute to the comprehension of the complex interaction of fungus-sugarcane, allowing its future application in plant breeding and exploitation of their biotechnological potential.