Foi realizado um experimento no aviário experimental do Departamento de Zootecnia da Universidade de São Paulo (USP), na Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA), em Pirassununga/SP com o objetivo de avaliar o efeito de dois níveis vitamínicos (comercial e OVN) com ou sem aflatoxina em dietas de frangos de corte no período de 1 a 42 dias. Foram utilizados 1800 pintinhos, machos, Cobb 500, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 2 x 2 x 2 (2 níveis vitamínicos - comercial e OVN, 2 níveis de aflatoxina - 0 ppm e 0,5 ppm, e 2 níveis de adsorventes - 0 e 10 kg/ton), totalizando 8 tratamentos com 15 repetições de 15 aves cada. As dietas foram fornecidas fareladas e a base de milho e farelo de soja, formuladas segundo os níveis praticados por uma integradora da região. Para avaliar o desempenho foram analisados o consumo de ração, ganho de peso e conversão alimentar de 1 a 49 dias. Para avaliação de carcaça (rendimento de carcaça, peito e pernas), determinação de incidência de BBS e determinação do peso das vísceras abdominais e coração foram abatidas duas aves por repetição aos 45 dias. Os resultados mostraram que frangos de corte, machos, alimentados com nível OVN de vitaminas, apresentaram melhor ganho de peso, conversão alimentar, rendimento de carcaça e peito quando comparado com o nível comercial de vitaminas (P<0,05) e que as dietas contendo 0,5 ppm de aflatoxinas resultaram em menor ganho de peso, rendimento de carcaça, porcentagem de peito e aumentou o tamanho do coração e fígado do animal (P<0,05). O uso de 10kg/ton de adsorvente só apresentou resultado positivo no final da vida dos animais (dos 39 a 49 dias) (P<0,05) e somente na conversão alimentar. Esse estudo permite concluir que a aflatoxina resulta em perdas de desempenho e rendimento de carcaças e que o fornecimento de níveis ótimos de vitaminas melhora os resultados dessas características. O uso de adsorventes se mostrou inviável nesse estudo. / An experiment was conducted in an experimental aviary the Department of Animal Science, University of São Paulo (USP), the Faculty of Animal Science and Food Engineering (FZEA) in Pirassununga/SP, to evaluate the performance, carcass characteristics and weight of offal in broiler chickens fed with two levels of vitamins (commercial and VNO) with or without aflatoxin in broiler diets. Were used 1800 chicks, male, Cobb 500 distributed in a completely randomized 2 x 2 x 2 factorial arrangement (two vitamin levels, two levels of aflatoxin and two levels of adsorbents), totaling eight treatments with 15 replicates of 15 birds each. Diets were fed mash and corn and soybean meal, formulated according to the levels charged by an integrator in the region. To evaluate the performance were analyzed feed intake, weight gain, feed conversion from 1 to 49 days. For evaluation of carcass yield (carcass, breast and legs), determination of the incidence of BBS and determination of the weight of the abdominal viscera and heart were killed two birds per replicate at 45 days. The results showed that broilers, males fed VNO level of vitamins showed better weight gain, feed conversion, carcass yield and breast when compared to the commercial level of vitamins (P<0.05) and that diets intoxicated with 0.5 ppm of aflatoxin resulted in less weight gain, carcass yield, percentage of breast and increased the size of the heart and liver of the animal (P<0.05). The use of adsorbent 10kg/ton only had a positive result at the end of life of animals (from 39 to 49 days) (P<0.05) and only in the feed. This study indicates that aflatoxin results in loss of performance and carcass yield and the provision of optimal levels of vitamins improved the results of these characteristics. The use of adsorbents in this study proved to be unfeasible.

Dentre os diversos fatores responsáveis pela instabilidade química das vitaminas nos alimentos, a exposição à radiação luminosa é determinante, principalmente em alimentos contendo vitamina B2. O presente trabalho investigou a degradação fotossensibilizada das vitaminas do complexo B (ácido fólico, piridoxal, biotina e niacina) por flavinas. O piridoxal-5\'-fosfato (PLP) mostrou-se reativo frente aos estados singleto e tripleto excitado das flavinas com constante de desativação de 1,03 1011 L mol-1 s-1 para o estado singleto, valor este superior ao valor esperado para reações bimoleculares controladas por difusão em meio aquoso. Foi observada uma dependência significativa da constante de velocidade de desativação do estado singleto excitado com a temperatura, onde o aumento da temperatura proporciona um decréscimo da constante de velocidade sugerindo a existência de um complexo [FMN...PLP] no estado fundamental o qual foi confirmado por espectroscopia de fluorescência resolvida no tempo. O PLP mostrou-se reativo frente ao estado tripleto excitado da FMN com constante de velocidade de 3kq = 3,0 108 L mol-1 s-1 em meio de tampão fosfato pH 6,4 ou em meio de óxido de deutério a 25 °C. Não foi observada diferença significativa entre as constantes de desativação do estado tripleto excitado em meio aquoso e de óxido de deutério o que corrobora com um processo direto de transferência de elétrons do PLP para a 3FMN* ao invés de um processo de transferência de átomo de hidrogênio. As vitaminas (biotina e niacina) mostraram-se não reativas frente aos estados singleto e tripleto excitados da vitamina B2 o que pode ser atribuído aos altos potenciais de oxidação, Eo > 2 V vs. NHE, observados para estas vitaminas em meio aquoso. A voltametria cíclica do PLP apresentou um processo anódico e irreversível (E= 1,07 V vs. NHE), controlada cineticamente por transferência de elétrons heterogênea do PLP para o eletrodo. O rendimento quântico de fotodegradação do PLP em meio aquoso e aerado é 2,5 vezes superior ao encontrado para a reação em meio anaeróbico, o que sugere a participação do íon superóxido no processo global de degradação do PLP. O ácido fólico demonstrou-se igualmente reativo frente ao estado tripleto excitado das flavinas (3kq= 4,8 108 L·mol-1 s-1 e Φ = 0,26 (meio aerado) e Φ = 0,32 (meio anaeróbico)) e a sua complexação pela β-LG (Φ = 0,032 (meio aerado) e Φ = 0,055 (meio anaeróbico)) uma eficiente abordagem na proteção desta vitamina frente a fotodegradação sensibilizada por flavinas. / Among several factors responsible for the chemical instability of vitamins in food, exposure to light radiation is decisive, especially in supplemented or fortified food with vitamin B2. This study investigated the photosensitized degradation of B-vitamins (folic acid, pyridoxal, biotin and niacin) by flavins. The pyridoxal-5\'-phosphate (PLP) reacted with singlet and triplet excited states of flavins with rate constant for quenching of 1kq = 1,03 1011 L mol-1 s-1 for the singlet state, this value is higher than expected value of bimolecular reactions controlled by diffusion in an aqueous solvent. A significant dependence was observed for the rate constant for deactivation of singlet excited state with temperature, the increase of the temperature leads to a decrease of the rate constant suggesting the existence of a complex [FMN...PLP] in ground state confirmed by time resolved fluorescence spectroscopy. PLP reacted with FMN triplet excited state with rate constant 3kq = 2,96 108 L mol-1 s-1 in phosphate buffer pH 6,4 or deuterium oxide at 25 °C. There was no significant difference between the rate constant of deactivation of the triplet-excited of FMN in aqueous solution or deuterium oxide which confirms a direct process of electron transfer to PLP for 3FMN* rather than a process of transfer of hydrogen atom. Biotin and niacin unreacted with singlet and triplet excited states of vitamin B2 which can be attributed to high oxidation potentials, Eo > 2 V vs. NHE, observed for this vitamins in aqueous solution. The cyclic voltammetry of PLP had an irreversible anodic oxidation process (E = 1.07 V vs. NHE) kinetically controlled by heterogeneous electron transfer from PLP to the electrode. The quantum yield of photodegradation of PLP in aerobic condition is 2.5 times higher than that found for the reaction in anaerobic condition, which suggests the of participation of superoxide ion in the PLP global degradation process. Folic acid demonstrated reactive with triplet excited state of flavins (3kq= 4,8 108 L·mol-1 s-1 and Φ = 0,26 (aerobic condition) and Φ = 0,32 (anaerobic condition)) and the complexation with β-LG (Φ = 0,032 (aerobic condition) and Φ = 0,055 anaerobic condition)) an efficient approach in protecting the vitamin against photodegradation sensitized by flavins.

Orientador: Roberto Herminio Moretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:03:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_AnaFlaviaPedrosode_M.pdf: 5724087 bytes, checksum: 5f150b453b4e7cefbf71614d42b7f60e (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: No presente trabalho, foi estudada a viabilidade do uso da garrafa PET termorresistente como embalagem para néctar de manga, através de ensaios de vida de prateleira comparativos com embalagem cartonada Tetra Brik Aseptic e lata de alumínio comercializadas atualmente, durante um período de 180 dias, com armazenamento sob temperatura ambiente. Néctar de manga comercializado em embalagem cartonada Tetra Brik Aseptic foi adicionado de ácido ascórbico e goma xantana e processado em um sistema composto por um tanque de alimentação com capacidade de 8l, dotado de pressurizador manual para transporte do fluido, e serpentina imersa em banho de água quente, para envase manual realizado à quente (75 OC) em garrafas PET termorresistentes, que foram fechadas e invertidas, e assim mantidas por 2 minutos, antes do resfriamento em água fria. Foi adotado o Planejamento Experimental Completo tipo 22 cujas variáveis independentes foram a concentração do ácido ascórbico (com adições de 14,75 à 85,25 mg/100ml) e goma xantana (com adições de 0,012 à 0,068%), com a finalidade de retardar a oxidação e obter uma viscosidade aceitável pelo consumidor. As análises foram efetuadas com uma freqüência de 45 dias (1 Q, 45Q, 90Q, 135Q e 180Q dia após o processamento). As respostas analisadas foram: ºBrix, acidez titulável, pH, viscosidade, b-carotenos, análises microbiológicas (contagem de bolores/leveduras, contagem total, termófilos e coliformes fecais), determinações do teor de Vitamina C e de Cor e avaliação sensorial. As análises de variância dos resultados indicaram que as condições de processo reais estudadas não influenciaram as características físico-químicas do néctar (ºBrix, acidez titulável, pH e viscosidade). Sob o aspecto microbiológico, foi verificada a eficiência do processo de pasteurização. Durante o período de armazenamento avaliado (180 dias), foi verificado que o produto com teores maiores que 50,0 mg/100mL de ácido ascórbico e teores intermediários de goma xantana (0,04%) resultou em maior aceitabilidade. Sensorialmente, os produtos apresentaram médias de aceitação próximas ou superiores a 7,0, para o atributo de aceitação global, situado na escala hedônica não estruturada, equivalente a "gostei muito" e "gostei moderadamente". Em relação à resposta de cor, até 90 dias, houve redução da Luminosidade (L) para todas as amostras e todos os tratamentos dos produtos em PET ficaram com valores de L próximos aos dos produtos em Tetra Brik Aseptic e lata, e depois deste período a L aumentou para estes produtos e manteve-se relativamente estável nos experimentos com garrafas de PET. Para a cromaticidade (a e b) o produto na lata de alumínio apresentou-se mais escuro, quando comparado com os demais, enquanto as amostras em PET contendo maiores teores de ácido ascórbico adicionados apresentaram menor escurecimento no decorrer do período analisado / Abstract: In this work the viability of using thermoresistant PET bottles as package for mango nectar was studied. Three types of packages were studied: aluminum cans, multifoil package (Tetra Brik Aseptic) and PET bottles, by following the shelf-life of the mango nectar, for 180 days shelf-life period, under room temperature. Commercial mango nectar in multifoil package was used for the experiment. There was added ascorbic acid and xantham gum according to the Experimental Design (Surface Response). Product was thermal treated by heating at 75OC and filled at this temperature in PET bottles, closed and kept for two minutes, before cooling at room temperature. It was used the Complete Experimental Design 22, varying the ascorbic acid (14,75 mg/100mL up to 85,25 mg/100mL) and xantham gum (0,012% up to 0,068%), with the objective of reduce oxidation and get a better viscosity. Determination of: ºBrix, pH, titrable acidity, viscosity, b-carotenes, ascorbic acid, color, sensory evaluation and microbial analysis (molds and yeasts, total count, themophylos and coliforms) were done with a frequency of 45 days (1 Q, 45Q, 90Q, 135Q e 180Q day after bottling). Analysis of Variance showed that the process condition did not influence significantly the nectar physico-chemical characteristics (ºBrix, pH, titrable acidity and viscosity). Under the microbiological aspect, it was concluded the efficiency of the pasteurization process. Under the studied shelf-life period of 180 days, it was observed that mango nectar with higher concentrations of ascorbic acid (over 50mg/1OOmL) and intermediary concentrations (0,04%) of xantham gum, resulted in better acceptability. Organoleptically the products were accepted with scores of 7 or higher, for the attribute "global acceptance", in the non-structured hedonic scale, equivalent to "accept very much". In relation to the color attribute up to 90 days, Luminosity (L) for all samples in all experiments of PET packaged nectar, the L values were very close to the products in multifoil package and Aluminum can, after 90 days L increased for all products and was kept stable when packed in PET. For the chromaticity a and b the canned product in aluminum can presented darker products, when compared to the other experiments. Experiments in PET bottled nectar with higher ascorbic acid content resulted clearer products than the ones with lower addition of ascorbic acid, during the shelf-life period / Mestrado / Tecnologia de Alimentos / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:06:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Furlani_ReginaPradoZanes_D.pdf: 1087020 bytes, checksum: f1d749d8e94ef61e2276c7216f394f56 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Paulo Roberto de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Educação Fisica / Made available in DSpace on 2018-07-31T22:03:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SouzaJunior_TacitoPessoade_M.pdf: 4164604 bytes, checksum: 409c66a25107459ae21f2a7368a284f5 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da suplementação de creatina na resultante da força máxima maximorum (RFMM) e variáveis antropométricas, em indivíduos submetidos a um protocolo de treinamento de força. Procedimentos metodológicos: Dezoito voluntários, com idades variando entre 19 e 35 anos (Q2=25), tendo pelo menos 1 ano de experiência em exercícios com pesos, foram selecionados e divididos aleatoriamente em 2 grupos (A: Cr, n=9; B: Placebo, n=9). Os grupos foram submetidos às medições antropométricas e testes de uma repetição máxima (1 RM). O protocolo de treinamento consistiu em 8 semanas, sendo que as 2 primeiras serviram apenas aos ajustes neurais, utilizando 50% de 1 RM. Na terceira semana teve início o treinamento de hipertrofia, com 80% de 1 RM e a suplementação com creatina monoidratada (CrH20), utilizando-se o protocolo duplo-cego. Na primeira semana de suplementação, cápsulas de CrH20 ou placebo (maltodextrina) foram consumidas (30g por dia durante 7 dias), seguidos das doses de manutenção de 5g por dia durante 42 dias. O treinamento foi realizado 6 vezes por semana com 80% de 1 RM com pausas decrescentes. Resultados: Após 8 semanas, verificou-se que tanto no grupo A como no B houve alterações estatisticamente significantes (ES) na RFMM em todos os exercícios (p=0,007 a 0,008). A análise da melhora percentual e do delta da RFMM nos exercícios de agachamento, desenvolvimento e supino fechado; mostrou que o grupo A teve alterações positivas ES superiores ao grupo B (p=0,008 a 0,038). A massa magra aumentou ES somente no grupo A (p=0,038). Contudo, o percentual de gordura corporal não mostrou alterações em nenhum dos grupos. A relação entre a melhora percentual (MP) das circunferências (C) do braço e antebraço e a MP na RFMM do exercício de desenvolvimento foi ES (r=0,481 e 0,546, respectivamente), bem como entre a MP na C da coxa e na MP da RFMM do exercício de agachamento (r=0,619). Também se verificou que a área de secção transversa muscular teve correlação ES com a RFMM em todos os exercícios dos membros superiores tanto no grupo A (r=O, 196 a 0,882) como no grupo B (r=0,776 a 0,942). Conclusão: Independente da suplementação, os grupos demonstraram alterações positivas; porém o grupo A (Cr) apresentou alterações positivas ES quando comparado ao grupo B (P), tanto na RFMM como nas variáveis antropométricas, em resposta ao treinamento de força proposto para esse estudo / Abstract: Objective: The objective of this study was to investigate the effect of the creatine supplementation in the resultant of the maximum maximorum strength (MM8) and anthropometrics variables. Methodological procedures: Eighteen volunteers, with aging between 19 and 35 years (Q2=25), with at least 1 year of experience in resistance training, were selected and randomly divided in 2 groups (A: Cr, n=9; B: Placebo, n=9). The groups were submitted to the anthropometrics measurements and tests of one repetition maximum (1RM). The heavy resistance training protocol consisted of 8 wk. The 2 first wk were only to the neural adaptation using 50% of 1 RM. In the third wk, started the hypertrophy training with 80% of 1 RM and the creatine monohydrate supplementation (CrH20), using the double-blind protoco!. In the first wk of supplementation, CrH20 or placebo capsules were consumed (30g8d-1) for 1 wk followed by a maintenance dose (5g8d1) during 42 days. The training was performed 6 times per wk with 80% of 1 RM with decreasing rest. Results: Afier 8 wk it was verified that both groups had statistically significant (88) alterations in the MM8 in ali the exercises (p=0,007 1 0,008). The analysis of the percentile improvement (PI) and the delta of the MM8 in the squat exercises, military press and close-grip-extensions, showed that the group A had higher positive alterations 88 than the group B (p=0,0081 0,038). The lean body mass only increases 88 in the group A (p=0,038). H oweve r, the percentage of body fat did not show alterations in none of the groups. The relation between the PI of the arm and forearm circumferences (C) and the PI in the MM8 of the development exercise was 88 (r=0,481 and 0,546, respectively), as well as between the PI in the thigh C and the PI of the MM8 of the squat exerci se (r=0,619). Also was verified that the muscle cross-sectional areas had correlation 88 with the MM8 in ali in such a way the exercises of the upper limb in the group A (r=0, 196/0,882) as in group B (r=0,7761 0,942). Conclusion: Independent of the supplementation, the groups had demonstrated positive alterations; however the group A (Cr) presented positive alterations SS when compared with group B (P), as much in the MMS as in the anthropometrics variables, in response to the heavy resistance training proposed for this study / Mestrado / Mestre em Educação Física

El herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi, KSHV, es el agente etiológico del sarcoma de Kaposi. Dentro del genoma viral, el receptor viral acoplado a proteína G (vGPCR) conduce a la oncogénesis y angiogénesis; su expresión persistente y actividad es necesaria para el mantenimiento del tumor. La forma hormonal activa de la vitamina D, 1α,25(OH)2D3, presenta efectos antineoplásicos en varios tipos de tumores. El potencial anti-proliferativo y antiinflamatorio del 1α,25(OH)2D3 en células endoteliales que expresan el vGPCR ha sido explorado por nuestro grupo. En los últimos años se ha incrementado el uso de análogos sintéticos del 1α,25(OH)2D3 con menor actividad calcemica para minimizar la hipercalcemia producida por dosis altas del metabolito. En este trabajo de Tesis Doctoral se profundizó en el mecanismo de acción antineoplásico del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527. Se obtuvo evidencia que ambos compuestos promueven la apoptosis a través de un desbalance entre los miembros de la familia de proteínas Bcl-2 en células vGPCR. Se observó un aumento en los niveles de expresión de la proteína pro-apoptótica BIM y disminución de A20 por un mecanismo dependiente del VDR y un pico de inactivación en la fosforilación de BAD acompañado por la formación de complejos con Bcl-2, alterando posiblemente la integridad de la mitocondria. También, se demostró que el 1α,25(OH)2D3 y TX 527 inducen autofagia a través de la inactivación del eje PI3K/Akt/mTOR y regulación de BECN1 como parte del mecanismo antineoplásico de acción. Asimismo, ambos agonistas regulan la proliferación de las células vGPCR mediante la inactivación de ERK1/2 y p38 y aumento de la expresión de las fosfatasas MKP-3 y MKP-5. Eventos regulados por la expresión del VDR, con excepción de ERK1/2, debido probablemente a una regulación no genómica de esta quinasa. El Bortezomib, inhibidor del proteasoma y de la activación de NF-ĸB, disminuyó la proliferación celular e indujo apoptosis por un mecanismo similar a los agonistas del VDR en células vGPCR. Proceso acompañado además por la activación del factor de transcripción FOXO1, disminución en la expresión génica de VEGF y aumento del inhibidor del ciclo celular, p21. Debido a las limitaciones que presentan los cultivos celulares bidimensionales, se desarrolló un método para obtener esferoides multicelulares a partir de células endoteliales y transformadas por la expresión del vGPCR. Las células vGPCR cultivadas en una superficie de baja adherencia desarrollaron esferoides de mayor tamaño y el tratamiento con 1α,25(OH)2D3 produjo cambios morfológicos con la consecuente inducción de apoptosis. A nivel molecular, se observó un aumento en la expresión génica del VDR, BIM y p21 al aumentar la dosis. Además, el 1α,25(OH)2D3 provocó un aumento en los niveles proteicos de BIM y disminuyó la activación de ERK1/2 y Akt, permitiendo concluir que las células en cultivos tridimensionales responden al agonista de manera similar a lo observado en cultivos en monocapa. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis contribuyen al conocimiento del mecanismo de acción antiproliferativo del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527 en un modelo celular de sarcoma de Kaposi. A su vez, sustenta las bases para dar continuación a otros estudios en modelos in vivo y evaluar su potencial aplicación, sólo o en combinación con Bortezomib, en el tratamiento de esta patología. / The Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus, KSHV, is the etiological agent of Kaposi's sarcoma. Within the viral genome, the viral G protein-coupled receptor (vGPCR) leads to oncogenesis and angiogenesis; its persistent expression and activity are necessary for tumor maintenance. The active hormonal form of vitamin D, 1α,25(OH)2D3, has antineoplastic effects in several types of tumors. The anti-proliferative and antiinflammatory potential of 1α,25(OH)2D3 in endothelial cells expressing vGPCR has been explored by our group. In recent years, the use of synthetic analogues of 1α,25(OH)2D3 with lower calcemic activity has been increased to minimize the hypercalcemia produced by high doses of the metabolite. In this Doctoral Thesis work, the antineoplastic mechanism of action of 1α,25(OH)2D3 and its less calcemic analogue TX 527 was studied. Evidence was obtained that both compounds promote apoptosis through an imbalance of Bcl-2 protein family members in vGPCR cells. An increase of pro-apoptotic BIM and a decrease of A20 protein expression levels by a VDRdependent mechanism was observed, as well as, a peak of inactivation of phosphorylated BAD accompanied by its association with Bcl-2, possibly altering mitochondria integrity. It was also demonstrated that 1α,25(OH)2D3 and TX 527 induce autophagy through the inactivation of the PI3K/Akt/mTOR axis and regulation of BECN1 as part of the antineoplastic mechanism of action. Moreover, both agonists regulate vGPCR cells proliferation by inactivating ERK1/2 and p38 and increasing MKP- 3 and MKP-5 phosphatases expression. These events were regulated by VDR expression, with the exception of ERK1/2, probably due to a non-genomic regulation of this kinase. Bortezomib, an inhibitor of proteasome and NF-ĸB activation, decreased cell proliferation and induced apoptosis by a similar mechanism to VDR agonists in vGPCR cells. Process also accompanied by the activation of the transcription factor FOXO1, decrease in VEGF gene expression and increase of the cell cycle inhibitor, p21. Due to the limitations of two-dimensional cell cultures, a method was developed to obtain multicellular spheroids from endothelial cells and transformed by the expression of vGPCR. vGPCR cells cultured on a low adhesion surface developed larger spheroids and treatment with 1α,25(OH)2D3 triggered morphological changes with consequent apoptosis induction. At molecular level, an increase in VDR, BIM and p21 gene expression was observed when dose was increased. In addition, 1α,25(OH)2D3 caused an increase in BIM protein levels and decreased the activation of ERK1/2 and Akt, allowing to conclude that cells in three-dimensional cultures respond to the agonist in a similar way to that observed in monolayer cultures. The results obtained in this thesis work contribute to the knowledge of the anti-proliferative mechanism of action of 1α,25(OH)2D3 and its less calcemic analogue TX 527 in a cellular model of Kaposi's sarcoma. In turn, it supports the bases to continue other studies in vivo models and evaluate their potential application, either alone or in combination with Bortezomib, in the treatment of this pathology.

El metabolito activo de la vitamina D es el calcitriol o 1α,25(OH)2 vitamina D3 (1,25D). El 1,25D ingresa a la célula difundiendo a través de la membrana plasmática y se une a su receptor, el receptor de la vitamina D (VDR). Este complejo desencadena acciones rápidas, no genómicos (como la activación de vías de señalización MAPKs, y la generación de segundos mensajeros, como el aumento del Ca2+ intracelular) o efectos genómicos que requieren generación de nuevas proteínas. Dado que la mayor parte de los efectos del 1,25D reportados involucran al VDR y éste se expresa en la mayoría de los tejidos, esta hormona esteroide se considera pleiotrópica. En el laboratorio donde trabajo, se ha demostrado que el VDR se expresa en el músculo esquelético y que el tratamiento con 1,25D (10-9 M) es capaz de promover a proliferación y la activación de vías de señalización como las MAPKs, Akt, con la participación de Src, muy rápidamente, tanto en mioblastos proliferativos como en miotubos diferenciados. Por otro lado está ampliamente documentado que el 1,25D tiene efectos anti-proliferativos y pro-apoptóticos en varios tipos de cáncer. En este trabajo de Tesis Doctoral, se evidenció que en la línea de músculo esquelético normal C2C12, durante la fase proliferativa, el tratamiento con 1,25D (10-9 M) promueve la expresión del VDR y la activación de p38 MAPK y ERK 1/2, que promueven la expresión de las CDK 4/6. Más tarde, durante el arresto promotor de diferenciación, iniciado por el 1,25D, la expresión del VDR y la activación de la p38 MAPK son esenciales para inducir el aumento en la expresión de la ciclina D3, de los CKIs p21Cip1/WAF1 y p27Kip1, y del marcador de diferenciación muscular miogenina, el cual también requiere que la ciclina D3 se exprese. En las células C2C12 que están en la etapa de diferenciación temprana, en la fase de alineación (previo a la fusión celular para la formación del miotubo), la hormona esteroide 1,25D unida a su receptor tiene la capacidad de activar la tirosina quinasa no receptora Src y las MAPKs ERK 1/2 y p38 MAPK, a tiempos cortos (hasta de una hora), sin embargo no es capaz de modificar la expresión de proteínas (como las ciclinas D1 y D3 o la caveolin-1). El rabdomiosarcoma (RMS) es el cáncer de tejido blando más común entre los niños y tiene características de músculo esquelético, a pesar de tener múltiples orígenes. La línea RD es una línea celular de rabdomiosarcoma humano, originada de biopsias de una paciente caucásica de siete años de edad. A pesar de la evidencia acumulada de los efectos antineoplásicos de la hormona esteroide 1,25D, en diferentes tipos de cáncer, solo existe un reporte de los efectos de este esteroide en RMS, en líneas diferentes a la línea RD. En esta Tesis Doctoral, se evidenció que las células RD expresan basalmente VDR y que el tratamiento con la hormona durante 24 y 48 horas promueve un incremento de este receptor. Además el 1,25D (10-9 M) promueve la activación de p38 MAPK, vía su quinasa upstream inmediata MKK 3/6 y Src a tiempos cortos en las células RD. De relevancia, se observó que la activación de p38 MAPK es necesaria para la activación de Src, pese a ser esta una quinasa upstream de las MAPKs. El tratamiento con 1,25D durante 72 horas provoca una marcada disminución en la expresión del VDR junto con una inhibición en la proliferación (ya que decrece la cantidad de células vivas y aumenta la expresión de p15INK4). Conjuntamente, la hormona no promueve la diferenciación celular (ya que no se observan cambios morfológicos y disminuye la expresión de marcadores de diferenciación tempranos) y estimula la apoptosis (aumentando la expresión de los mediadores ciclina D1 y CDK4 y causando picnosis mitocondrial y pérdida de la red mitocondrial). En conclusión, el metabolito activo de la vitamina D, el calcitriol tiene efectos opuestos en el músculo esquelético normal y el transformado, ya que en el primero promueve la proliferación seguida de un arresto pro-diferenciativo, mientras que en RMS es capaz de inducir la apoptosis. / The vitamin D active metabolite is the calcitriol or 1α,25(OH)2-vitamin D3 (1,25D). The 1,25D diffuse into the cell through the plasmatic membrane and it binds to its receptor, the vitamin D receptor (VDR). This complex triggers non-genomic, rapid actions (like activation of MAPKs pathways, and second messengers, like intracellular Ca2+ increase) or genomic effects that require protein synthesis. Almost all of the 1,25D actions require the VDR, and this receptor is expressed in almost all tissues, this steroid hormone is pleiotropic. In the laboratory where I investigate, it was demonstrated that the VDR is expressed in skeletal muscle and 1,25D treatment promotes proliferation and activation of MAPK, Akt, and the tyrosine kinase Src, quickly, in both proliferating myoblast and differentiated myotubes. By another hand, it was largely reported that 1,25D exerts antiproliferative and proapoptotic effects in many different cancer types. In this Ph.D. Thesis, it was evidenced that in normal skeletal muscle cell line C2C12, in the proliferative state, 1,25D (10-9 M) treatment promotes VDR expression and p38 MAPK and ERK 1/2 pathways activation, and all these together induce CDK 4/6 expression. Then, during pro-differentiative arrest induced by 1,25D, the VDR expression, and p38 MAPK activation are key events to promote an increase in Cyclin D3, CKIs p21cip1/WAF1 and p27kip1 and myogenin expression. In C2C12 cell, in an early differentiation state, during myoblast alignment, 1,25D through its receptor induce Src, ERK 1/2 and p38 MAPK pathways activation, within a few minutes, but this short treatment cannot modify some proteins expression involved in differentiation process (like Cyclin D3 and D1, or caveolin-1). Rhabdomyosarcoma (RMS) is the soft tissue cancer most common in children with skeletal muscle features, although it has different origins. The RD cell line is a human RMS cell line, originated from biopsies from a seven years old Caucasian patient. There is accumulated evidence about antineoplastic effects of 1,25D, in different cancer types; nevertheless, there is only one report relative to the effects of this steroid hormone treatment developed in RMS cell lines different to RD. In this PhD. Thesis, it was shown that RD cells express basally VDR and hormone treatment during 24 and 48 hours promotes an increase of this receptor. Moreover, 1.25D (10-9 M) promotes p38 MAPK activation via its immediate upstream kinase, MKK 3/6, and Src at short times of steroid exposition. Of relevance, it was observed that p38 MAPK activation is necessary for the activity of Src, despite this being an upstream kinase of MAPKs. Treatment with 1.25D for 72 hours causes a decrease in VDR expression and the inhibition in proliferation (since it decreases the amount of living cells and increases the expression of p15INK4). This steroid treatment does not promote differentiation, since no morphological changes were observed and the expression of early differentiation markers falls. Furthermore, 1,25Dstimulates apoptosis increasing the expression of cyclin D1 and CDK4 mediators and causing mitochondria pyknosis and disruption of mitochondrial network). In conclusion, the active metabolite of vitamin D, calcitriol has opposite effects on normal and transformed skeletal muscle cells, since in the normal cells it promotes proliferation followed by a pro-differentiative arrest, whereas in RMS it is capable of inducing apoptosis.

Acute pancreatitis (AP) is a severe disease in about 20% of patients, causing hospitalization and death, mainly due to associated systemic complications. The treatment of this condition is still insufficient to control the intrinsic inflammatory process and is focused on managing the complications and symptoms of patients. Among the many factors involved in AP, the inflammatory response and oxidative stress can be highlighted. In this context, rutin is presented as a natural substance with important potential to treat AP, by considering its anti-inflammatory and antioxidant activities. The aim of this study is to investigate the pharmacological effects of rutin on experimental AP induced by L-arginine administration in mice. Adult male Swiss mice (25-30 g) were used in this study and all experiments were approved by this institution´s Ethics Committee in Animal Research (43/2012). For the induction of AP, mice received 2 injections of L-arginine (8%, 4 g/kg, i.p., with an interval of 1 h). The control group received the same volume of saline (0.9%) instead of L-arginine. Mice submitted to AP induction were treated with rutin (37.5, 75 or 150 mg/kg, p.o.) or saline (vehicle) after 24, 36, 48 and 60 h of the first injection of L-arginine. The control group was treated with vehicle at the same time points. The euthanasia occurred after 72 h of induction and was accompanied by blood and organ (pancreas, lung, liver and kidney) collection. We investigated parameters that permitted us to infer about pancreatic and systemic inflammation and evaluate serum concentrations of pancreatic enzymes, abdominal hyperalgesia and oxidative stress. In animals injected with L-arginine, it was detected the increase of inflammatory and biochemical parameters that confirmed the induction of AP, when compared with saline-injected animals. The treatment with rutin reduced the myeloperoxidase activity in pancreas (p<0.001 for 37.5, 75 or 150 mg/kg), but not in lung, reduced the pancreatic edema index (p<0.001 for 37.5 mg/kg and p<0.05 for 75 and 150 mg/kg) and the serum concentration of amylase (p<0.001 for 75 and 150 mg/kg). From these experiments, we chose the dose of 75 mg/kg for the next steps. In this way, treatment with this dose of rutin also reduced the serum lipase (p<0.001), C reactive protein (p<0.001) and interleukin-6 (p<0.001) concentrations, as well as decreased the abdominal hyperalgesia (p<0.05), when compared with Vehicle + L-arginine group after 72 h of L-arginine injection. The administration of rutin also diminished lipid peroxidation induced by L-arginine in pancreas, liver and kidney (p<0.001) and increased both the activity of catalase in pancreas (p<0.001), glutathione peroxidase in pancreas (p<0.05) and superoxide dismutase in pancreas (p<0.01) and liver (p<0.05). Besides, it decreased the expression of 3-nitrotyrosine in pancreas (p<0.05). Altogether, these results demonstrate that rutin exert anti-inflammatory, antinociceptive and antioxidant actions during AP induced by L-arginine, which are suggestive that this flavonoid is of interest for developing future studies or approaches focused on new alternatives to treat AP in humans. / A pancreatite aguda (PA) é uma doença grave em cerca de 20% dos casos, que causa hospitalização e óbito dos pacientes devido às complicações sistêmicas associadas. Seu tratamento clínico tem se mostrado insuficiente para controlar o processo inflamatório intrínseco da doença e é focado no manejo dos sintomas e complicações. Dentre os diversos fatores envolvidos na PA, destacam-se a resposta inflamatória e o estresse oxidativo. Neste contexto, a rutina, um flavonoide conhecido por suas atividades antioxidante e anti-inflamatória, apresenta-se como uma substância natural em potencial a ser utilizada no tratamento da PA. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos farmacológicos da rutina em modelo de pancreatite aguda experimental induzida por L-arginina em camundongos. Foram utilizados camundongos Swiss machos adultos (25-30 g) e os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Animais da UFS (43/2012). Para a indução da pancreatite os animais receberam duas injeções de L-arginina (8%, 4 g/kg, i.p., com intervalo de 1 h entre elas). O grupo controle recebeu duas injeções de salina (0,9%, i.p.). Os animais submetidos à indução da pancreatite foram tratados com rutina (37,5, 75 ou 150 mg/kg, v.o.) ou salina (veículo), após 24, 36, 48 e 60 h da 1° injeção de L-arginina. O grupo controle foi tratado com veículo nos mesmos tempos. A eutanásia dos animais foi realizada 72 h após a indução, com subsequente coleta de sangue e de órgãos (pâncreas, pulmão, fígado e rim). Foram avaliados parâmetros que permitiram inferir sobre o quadro inflamatório pancreático e sistêmico e avaliar as concentrações séricas de enzimas pancreáticas, a hiperalgesia abdominal e o estresse oxidativo. Os animais que receberam as injeções de L-arginina apresentaram aumento significativo dos parâmetros inflamatórios e bioquímicos preditivos de pancreatite, quando comparados aos animais que receberam salina. O tratamento com rutina reduziu a atividade de mieloperoxidase no pâncreas (p<0,001 para 37,5, 75 ou 150 mg/kg), mas não no pulmão, reduziu o índice de edema pancreático (p<0,001 para 37,5 mg/kg e p<0,05 para 75 e 150 mg/kg) e a concentração sérica de amilase (p<0,001 para 75 e 150 mg/kg). A partir destes resultados a dose de 75 mg/kg foi escolhida para ser utilizada nos experimentos posteriores. O tratamento com esta dose de rutina também diminuiu as concentrações séricas de lipase (p<0,001), proteína C reativa (p<0,001) e de interleucina 6 (p<0,001), bem como reduziu a hiperalgesia abdominal (p<0,05), após 72 h da injeção de L-arginina, quando comparados ao grupo L-arginina + Veículo. O tratamento com rutina (75 mg/kg) também reduziu a peroxidação lipídica induzida pela L-arginina em pâncreas, fígado e rim (p<0,001) e aumentou a atividade de catalase pancreática (p<0,001),de glutationa peroxidase (p<0,05) de superóxido dismutase no pâncreas (p<0,01) e no fígado (p<0,05), além de diminuir a expressão de 3-nitrotirosina no pâncreas (p<0,05). Estes resultados evidenciam que a rutina exerce efeito anti-inflamatório, antinociceptivo e antioxidante durante a PA induzida por L-arginina, os quais sugerem que este flavonoide seja de interesse para abordagens ou estudos futuros objetivando novas alternativas no tratamento da PA em humanos.

Introdução: Fatores de risco para doenças cardiovasculares (DCV) tornaram-se prevalentes em crianças e adolescentes. Ácidos graxos (AGs) ?3 auxiliam na prevenção de DCV, porém seu consumo alimentar na infância é reduzido. Há a hipótese de que as vitaminas B2, B6, B12 e folato possam contribuir para o aumento da concentração de ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) no plasma e nos eritrócitos, além de reduzir os níveis de homocisteína total (tHcy), e auxiliar na prevenção de DCV. Por essa razão, o presente estudo teve como objetivo verificar a associação entre perfil lipídico, perfil de ácidos graxos, homocisteína e biomarcadores para vitaminas do complexo B em crianças e adolescentes. Métodos: Este estudo transversal incluiu 249 crianças e adolescentes entre 9 e 13 anos de idade. O consumo alimentar foi avaliado por meio do questionário de frequência alimentar, recordatório de 24 horas e índice de qualidade da dieta (IQD). O perfil lipídico e os biomarcadores para vitaminas B2, B6, B12 e ácido fólico foram dosados no plasma. O perfil de AGs e os metabólitos do ciclo da homocisteína (metionina, SAM, SAH, tHcy, cistationina e cisteína) foram dosados nas células vermelhas do sangue. As associações foram testadas com modelos de regressão linear múltiplos, ajustados para sexo, estadiamento puberal, índice de massa corporal e IQD. Resultados: Não houve associação entre as vitaminas do complexo B e baixos níveis de colesterol total, triglicérides e LDL-c. Porém, houve associação positiva entre os níveis séricos de vitamina B2 e folato plasmático com PUFAs ?3 e ?6. O aumento de 1 nmol/L de vitamina B2 esteve associado ao aumento de 0,19 mg/dL de EPA e 0,21 mg/dL de ARA e DHA (p<0,01). O aumento de 1 ng/mL de folato plasmático esteve associado ao aumento de 0,14 mg/dL de EPA (p<0,05), 0,22 mg/dL de ARA e 0,17 mg/dL de DHA (p<0,01). Estas vitaminas não estiveram associadas à redução dos níveis de tHcy (p>0,05). As vitaminas B6 e B12 estiveram associadas à redução dos níveis de tHcy (p<0,01), mas não se associaram a maiores níveis de PUFAs (p>0,05). Houve associação negativa entre os níveis séricos de vitamina B6 com PUFAs ?3 e ?6. O aumento de 1 nmol/L de vitamina B6 esteve associado à redução de 0,15 mg/dL de ARA e 0,14 mg/dL de DHA (p<0,05). Os níveis de tHcy foram associados positivamente com os níveis de PUFAs (p<0,01). Conclusão: Maiores concentrações plasmáticas de vitamina B2 e folato estão associadas a maiores níveis deResumo PUFAs ?3 e ?6 nos eritrócitos. A via metabólica mais provável para explicar tais associações é o metabolismo de um-carbono, apesar destas vitaminas não terem se associado a menores níveis de tHcy. Estes dados sugerem que níveis plasmáticos adequados de vitamina B2 e folato podem melhorar o perfil de AGs circulantes. O equilíbrio nas concentrações séricas de AGs ?3 e ?6 contribui para o desenvolvimento do sistema nervoso central na infância e para a prevenção de DCV, cada vez mais comuns em decorrência do sedentarismo, má alimentação e excesso de gordura corporal, em crianças e adolescentes. / Introduction: Risk factors for cardiovascular disease (CVD) have become prevalent in children and adolescents. Fatty acids (FA) ?3 help prevent CVD, but the intake of food sources of this FA during childhood is reduced. It is hypothesized that vitamins B2, B6, B12 and folate may contribute to the increased concentration of polyunsaturated fatty acids (PUFAs) in plasma and in erythrocytes, in addition to reducing total homocysteine levels (tHcy), and assisting in the prevention of CVD. For this reason, the present study aimed to verify the association between lipid profile, fatty acid profile, homocysteine and B-vitamins biomarkers in children and adolescents. Methods: This cross-sectional study included 249 children and adolescents, aged 9 to 13 years old. Dietary intake was assessed by the food frequency questionnaire, 24-hour recall, and healthy eating index (HEI). The lipid profile and biomarkers for vitamins B2, B6, B12 and folate were measured in plasma. The FA profile and metabolites from homocysteine cycle (methionine, SAM, SAH, tHcy, cystathionine and cysteine) were measured in red blood cells. The associations were tested with multiple linear regression models, adjusted for sex, pubertal status, body mass index and HEI. Results: There was no association between B vitamins and low levels of total cholesterol, triglycerides and LDL-c. However, there was a positive association between serum levels of vitamin B2 and plasma folate with PUFAs ?3 and ?6. An increase of 1 nmol/L in vitamin B2 was associated with an increase of 0.19 mg/dL of EPA and 0.21 mg/dL of ARA and DHA (p<0.01). An increase of 1 ng/mL in plasma folate was associated with an increase of 0.14 mg/dL of EPA (p<0.05), 0.22 mg/dL of ARA and 0.17 mg/dL of DHA (p<0.01). These vitamins were not associated with reduced tHcy levels (p>0.05). Vitamins B6 and B12 were associated with reduced tHcy levels (p <0.01), but were not associated with higher levels of PUFAs (p> 0.05). There was a negative association between serum levels of vitamin B6 with PUFAs ?3 and ?6. The increase of 1 nmol/L in vitamin B6 was associated with a reduction of 0.15 mg/dL of ARA and 0.14 mg/dL of DHA (p <0.05). Homocysteine levels were positively associated with PUFA levels (p <0.01). Conclusion: Higher plasma concentrations of vitamin B2 and folate are associated with higher levels of PUFAs ?3 and ?6 in erythrocytes. The most likely metabolic pathway to explain such associations is the one-carbon metabolism, although these vitamins have not been associated with lower tHcy levels. These data suggest that adequate plasma levels of vitamin B2 and folate may improve the profile of circulating FA. TheAbstract balance in the serum concentrations of FA ?3 and ?6 contributes to the development of the central nervous system in childhood and to the prevention of CVD, increasingly common due to sedentary lifestyle, poor diet and excess body fat, in children and adolescents.

O pólen além de ser a principal fonte de alimento não líquido, para as abelhas, tem sido utilizado como um suplemento da dieta humana. Apesar de muitos autores afirmarem que os produtos apícolas são ricos em nutrientes, pouco se sabe sobre a composição do pólen apícola especialmente em relação à presença das vitaminas do complexo B. De forma original este estudo teve por objetivo avaliar a estabilidade das vitaminas do complexo B (B1, B2, B6 e PP) incluindo seus vitâmeros, durante o período de um ano de estocagem, em amostras de pólen apícola desidratado. Verificou-se também o efeito do processamento sobre o conteúdo dessas vitaminas além da possível influência dos tipos polínicos sobre a composição centesimal e conteúdo vitamínico. Foram analisadas concentrações das vitaminas no tempo zero e após 4, 8 e 12 meses, estocadas sob três condições distintas: em temperatura ambiente (com e sem exposição à luz) e em freezer. As vitaminas, após a extração simultânea, foram quantificadas por CLAE, com detecção por fluorescência. Todas as vitaminas propostas foram encontradas nas amostras analisadas e o processo de desidratação não interferiu no conteúdo das mesmas (p<0,05). As variações foram (base seca): 0,59 a 1,09 mg/100g para vitamina B1; 1,73 a 2,56 mg/100g para a vitamina B2; 6,43 a 15,34 mg/100g para a vitamina PP e 0,33 a 0,68 mg/100g para a vitamina B6 . Todas as amostras foram classificadas como pólen heterofloral, em função da grande variabilidade dos tipos polínicos presentes. Após um ano de estocagem pode-se afirmar que a concentração da vitamina B1 se manteve constante enquanto que para as demais vitaminas o decaimento da concentração foi dependente do tempo de armazenamento e não da condição de estocagem das amostras (p<0,05). Todas as amostras foram consideradas fonte da vitamina B2. Foi possível explicar matematicamente, através de equações de regressão linear oriundas da análise multivariada, a influência do tempo de armazenamento nas concentrações das vitaminas B6 e PP, com explicabilidade de 76 e 60% respectivamente. / Pollen is the main source of non liquid food for bees and it has been used as a supplement for human diet. Although many authors cited that bee products are rich in nutrients, it is known a little about the composition of bee pollen and, in particular, the presence of the B vitamin complex in this product. This original study has the objective of evaluate the stability of B complex vitamins (B1, B2, B6 and PP), including its vitamers for a period of one year of storage in dried samples of bee pollen. It was also analyzed the effect of processing on vitamin content and the possible influence of polinic types on proximate composition and vitamin content. Samples were analyzed at time zero, after 4, 8 and 12 months. They were storaged under three different conditions: room temperature (with and without exposure to light) and freezer. The vitamins were quantified by HPLC with fluorescence detection after simultaneous extraction. All proposed vitamins were found in the analyzed samples and the dehydration process did not interfere in vitamin content (p<0.05). The variations were (dry basis): 0.59 to 1.09 mg/100g for vitamin B1; 1.73 to 2.56 mg/100g for vitamin B2; 6.43 to 15.34 mg/100g for vitamin PP and 0.33 to 0.68 mg/100g for vitamin B6. All samples were classified as heterofloral pollen, according to the big variability of polinic types. After one year of storage, it can be stated that vitamin B1 concentration remained constant, while for the other vitamins, the concentration loose was dependent on time and not on the storage condition (p<0.05). All samples were considered Vitamin B2 source. It was possible to explain mathematically, through linear regression equations of multivariate analysis, the influence of storage time in the concentrations of vitamin B6 and PP, they were explained as 76 and 60% respectively.