Resumo não disponível.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2912_1.pdf: 1186353 bytes, checksum: 92f2c91c8d664cec12729055eb4aaf14 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fatores genéticos, imunológicos e ambientais estão envolvidos na patogênese de diversas doenças. Dentre essas influências, o sistema de histocompatibilidade (HLA) se destaca pelo seu polimorfismo e capacidade de conferir susceptibilidade ou resistência a vários distúrbios imunomediados. De acordo com o grupo étnico-racial estudado, observam-se variações no perfil HLA relacionadas a idade de surgimento, o curso clínico e resposta ao tratamento de algumas doenças (2). Os genes do HLA são os mais polimórficos dos mamíferos (2,6). É possível que o polimorfismo exista para garantir a sobrevivência das espécies (5). A herança de um haplótipo materno e paterno em co-dominância faz com que cada pessoa possa expressar em suas células diferentes moléculas do HLA, o que lhe confere a vantagem de apresentar mais peptídeos antigênicos às células T, possibilitando assim uma maior cobertura da resposta imune (7). Quanto maior o polimorfismo do HLA numa população, maior será a probabilidade de um indivíduo herdar haplótipos diferentes e, portanto, ser heterozigoto para todos os loci (7). Para a compreensão dos mecanismos de associação das moléculas de histocompatibilidade com as doenças é imprescindível conhecer a nomenclatura dos diversos componentes do MHC, os métodos pelos quais os antígenos e os alelos de histocompatibilidade são identificados, e ainda a função das moléculas de HLA no sistema imune. Assim, torna-se mais fácil o entendimento dos mecanismos pelos quais as moléculas de histocompatibilidade participam da patogenia das doenças, conferindo susceptibilidade ou proteção contra o seu desenvolvimento (2). Os produtos dos genes HLA-DRB1*, DQB1* e DPB1* são as moléculas clássicas de histocompatibilidade de classe II, que estão envolvidas na rejeição contra enxertos e na apresentação de peptídeos aos receptores dos linfócitos T (8).legais foram pesquisadas as páginas de instituições nacionais e internacionais na Internet, perfazendo um total de 52 referências. O segundo artigo, original, configura-se em estudo sobre a necessidade de entender melhor a resposta imune do organismo frente a infecção pelo HBV em amostras de doadores de sangue da Fundação HEMOPE, realizado no período de dezembro de 2008 a dezembro de 2009, com desenho de estudo do tipo caso controle. Tem como objetivo principal descrever e comparar a frequência genotípica para os alelos HLA de classe II presentes nos lócus DRB1* em doadores de sangue com a infecção pelo HBV e imunes contra esta infecção no Estado de Pernambuco

Orientador: Ângelo Pires do Prado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:23:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RaquelSoaresBinottide_D.pdf: 2064191 bytes, checksum: 947400e01f2da61b9ec537f4350e8793 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Ácaros são os principais agentes relacionados ao quadro de sensibilização respiratória de indivíduos atópicos no Brasil, sendo responsáveis por crises de asma, rinite e conjuntivite alérgicas, dentre outros. São encontrados nas residências principalmente em colchões, sofás e tapetes, onde alguns métodos podem ser utilizados para controlar sua infestação. O objetivo desse estudo foi o de avaliar a eficácia acaricida in vitro do produto a base de óleo essencial das plantas Lavandula officinalis e Mentha piperita (Labiatae) contra ácaros Dermatophagoides pteronyssinus e Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae). O efeito acaricide do Produto-Teste foi comparado com vários outros produtos químicos em estudos in vitro e de intervenção. O estudo in vitro foi realizado utilizando culturas acarinas, nas quais os produtos foram diretamente aplicados e em placas de Petri onde um número de ácaros foram colocados em contato com as substâncias testadas. A mortalidade acarina foi avaliada e utilizada para a comparação. O estudo de intervenção foi realizado em 30 residências de pacientes atópicos com asma e/ou rinite. A eficácia do Produto-Teste foi comparada com um produto acaricida comercializado no país através da quantificação de alérgenos acarinos Der p1 e Der f1 por ELISA e pela contagem do número de corpos acarinos nas amostras de poeira coletadas de colchões, sofás e tapetes tratados com um dos produtos pelo período de 6 meses. As implicações clínicas como sintomas alérgicos e segurança aos humanos dos produtos também foram avaliados. O estudo in vitro demonstrou que o efeito acaricida do Produto-Teste foi similar aquele observado com os produtos químicos. No estudo de intervenção, houve uma diminuição significativa nas concentrações dos alérgenos Der p1 e Der f1 nos 3 substratos tratados. Essa diminuição foi semelhante aquela observada com o produto comercial utilizado como controle. Apesar dos resultados, o número de corpos acarinos nas amostras de poeira dos 3 substratos não demonstrou alteração significativa após os 6 meses de tratamento para ambos os produtos testados. Além disso, os produtos foram considerados seguros para uso humano, desde que não foram observados efeitos adversos ou sinais de irritação significativos, embora fosse observado que alguns patientes atópicos presentes no recinto quando da aplicação do produto reclamaram de sintomas respiratórios. Os resultados demonstram que o acaricida contendo óleos essenciais de Lavandula officinalis e Mentha piperita (Labiatae) apresenta significativo efeito in vitro contra ácaros Dermatophagoides pteronyssinus e Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae) e causa uma diminuição significativa nos níveis de Der p1 e Der f1 na poeira de colchões, sofás e tapetes tratados. O produto foi considerado seguro para uso por humanos. / Abstract: House dust mites (HDM) are the greatest source of indoor allergens in Brazil, being closely implicated in respiratory allergic diseases such as asthma and rhinitis. In dwellings, HDM allergens are mainly found on mattresses, sofas and rug surfaces, where several methods such as mattress-covers and acaricides, can be used to control indoor mite infestation. The aim of this study was to evaluate the acaricide effect of an herbal product containing essential oils from Lavandula officinalis and Mentha piperita (Labiatae) against mites Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae). The acaricide effect of the Test-product was compared with several other chemical products in in vitro and clinical studies. The in vitro study was conducted using mite cultures, in which the chemical products were directly applied and in Petri dishes where a number of mites were placed in contact with the chemicals tested. Mite mortality was counted and used as comparison. The clinical study was conducted in 30 dwellings of atopic patients with asthma and/or rhinitis. The efficacy of the Test-product was compared with a Brazilian commercial acaricide and was done by ELISA quantification of the mite allergens Der p1 and Der f1 and by the number of body mites on dust collected from a mattress, sofa and rug treated with one of the products for 6 months. Clinical implications in allergic symptoms and the toxicity of the products for humans were also evaluated. The in vitro study showed that the acaricide effect of the Test-product was similar to that observed with the chemical products. In the clinical study, a significant decrease in Der p1 and Der f1 allergens concentrations were observed in all 3 treated sources. This decrease was similar to that observed with the commercial product used as control. Despite these results, the number of mite bodies on dust from all 3 sources presented no significant difference after the 6- months of treatment for both Test- and Control-products. Also, both products were considered safe for human use, since no significant adverse effects or toxicity signals were observed, although, atopic patients who were present in the room when the product was applied complained of respiratory symptoms. Our findings showed that the acaricide containing essential oils from Lavandula officinalis and Mentha piperita (Labiatae) has a significant in vitro effect against mites Dermatophagoides pteronyssinus and Dermatophagoides farinae (Pyroglyphidae) and caused a significant decrease in Der p1 and Der f1 levels on dust from treated mattresses, sofas and rugs. The product was considered safe for human use. / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T00:42:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_RosangelaJunqueira_D.pdf: 4641170 bytes, checksum: aedf4a1570b3ee1a0bf27ff37fbccd29 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Para a detecção de antígenos de T. gondii na urina e plasma de camundongos infectados com o parasito foi utilizada técnica de ELISA de captura. Na técnica, IgG humana anti,T. gondii, obtida por cromatografia de afinidade, foi utilizada para o revestimento da placa de ELISA com o intuito de capturar antígenos específicos. Nas reações positivas, os antígenos de T. gondii foram reconhecidos por IgG de coelho anti, T. gondii obtida por cromatografia de afinidade. Utilizou,se o conjugado IgG de cabra anti,lgG de coelho marcado com peroxidase e como substrato a ortofenilenodiamina. Em cada placa de reação foram incluídos padrões contendo concentrações conhecidas de proteínas de taquizoitos (AgS T. gondii). A concentração de proteínas presentes nas amostras testadas foram expressas em J.1g1 mI. A técnica eviqenciou alta reprodutibilidade, com limite inferior de sensibilidade de 0,05 Ilg/mI. Foi observada antigenúria em camundongos inoculados com 1000, 25000, 50000 e 100000 taquizoitos da linhagem N de alta virulência de Toxoplasma gondii ,durante a fase aguda da infecção. Camundongos inoculados com 1, 6 ou 12 cistos da linhagem P de moderada virulência de T. gondii apresentaram antigenúria e antigenemia na fase aguda e crônica da infecção. Os primeiros cistos foram detectados no cérebro dos camundongos infectados com a linhagem P, 11 dias após a infecção. O número de cistos e o volume médio aumenta com o tempo de infecção, independentemente do número de cistos inoculados. Na fase crônica da infecção dos animais observou,se o ocorrência simultânea de cistos grandes e pequenos, indicando neoformação de cistos. A neoformação de cistos e antigenúria na fase crônica da infecção, indicam a possibilidade de reagudização periódica da infecção pelo T. gondii / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Sumiko Arita Matsuura / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T13:08:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amorim_ClaudioRobertoNobrega_M.pdf: 3407710 bytes, checksum: 3bcfb4652357a5fa35b5a91e15d4f0d2 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Colibacilose ocorre em leitões recém-nascidos e pós-desmame. A doença é caracterizada por diarréia aguda, desidratação progressiva e morte, o que leva a uma considerável perda econômica. Para a Escherichia coli causar doença, ela necessita de pelo menos dois fatores de virulência: a) produção de enterotoxinas e, b) produção de adesinas. A proposta deste estudo foi a detecção, isolamento, purificação e caracterização de uma nova adesina, conhecida como 2134P, em amostras de E. coli enterotoxigênica (ETEC) isoladas de leitões com diarréia no Brasil. Esta adesina foi detectada numa freqüência alta (30,0%) em amostras de ETEC, que não expressavam as adesinas K88, K99, 987P, F41 e F42. Isto sugere um papel importante da adesina 2134P na enteropatogenia da colibacilose suma. A adesina 2134P isolada foi purificada por cromatografia em Sepharose CL 4B e analisada por SDS-P AGE corado com Coomassie Blue, apresentando uma única banda de 17 KDa., reconhecida pelo antissoro 2134P por "Westem blot". A técnica de "gold immunolabeling" revelou que a adesina 2134P é uma estrutura do tipo fimbria localizada na superfície da bactéria. A seqüência dos quinze primeiros aminoácidos da porção N-terminal da adesina 2134P foi obtida, a qual apresentou uma homologia de 10 aminoácidos (66%) com a porção N-terminal da fimbria FI07 (FI8ab) / Abstract: Enterotoxigenic colibacillosis occurs in newbom piglets and weaned pigs. It is characterizated by acute diarrhea, progressive dehydratation and death in a few days which lead to considerable economic loss. Disease is caused by two mainly virulence factors of Escherichia cali: a) production of enterotoxins and, b) production of adhesins. The purpose of this study was the detection, isolation purification and characterization of a novel adhesin, referred as 2134P, in Escherichia calí enterotoxigenic (ETEC) strains isolated from piglets with diarrhea in Brazil. This adhesin was detected in a high frequency (30.0%) in these ETEC strains, which didn't present the adhesins K88, K99, 987P, F41 and F42. Its suggests the important role of adehsin 2134P in porcine enter pathogenesis. The adhesin 2134P was purified on Sepharose CL 4B column chromatography, and was analyzed by SDS-PAGE stained with Coomassie Blue, and presented only one band of approximately 17 KDa identified in Westem blot using specific anti-2134P serum. Gold immunolabeling technique revealed that adhesin 2134P is a fimbrial structure on bacterial surface. It was obtained the first fifteen amino acids sequencing-signal of the N-termini portion of the adhesin 2134P, with a homology of 10 amino acids (66%) with the FI07 (FI8ab) fimbriae / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faucldade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T08:43:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Omoto_Ricardo_M.pdf: 806455 bytes, checksum: 919c6c6ffefecaf298fe52f6907eabfc (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Introdução: As bases moleculares responsáveis pelas variantes do gene GYPB ainda não estão estabelecidas para a população de Brasileiros descendentes de Africanos. O presente estudo foi realizado para analisar os mecanismos moleculares que originam o fenótipo S-s- e determinar a frequência do gene GYPB*S silencioso no fenótipo S-s+, em uma população de doadores de sangue descendentes de Africanos. Materiais e Métodos: Foram selecionadas 165 amostras de sangue de Brasileiros descendentes de Africanos (Nordeste do Brasil) fenotipados como S-s- (n=17) e S-s+ (n=148) por hemaglutinação. Com a finalidade de identificar as formas variantes do gene GYPB, realizamos a genotipagem dessas amostras pelas técnicas de PCR Alelo-específico (AS-PCR) e PCR-RFLP. Resultados: Em 13 das 17 amostras S-s- (76,5%) ambos os alelos GYPB*S e GYPB*s estavam deletados. Em 137 das 148 amostras fenotipadas como S-s+ (92,6%), o resultado da genotipagem pela técnica AS-PCR foi consistente com o fenótipo S-s+. Em 4 das amostras S-s- (23,5%) e em 11 das amostras S-s+ (7,4%) foi identificada a presença do alelo GYPB*S associado com o silenciamento do antígeno S. Das amostras de DNA de doadores com o fenótipo S-s- que demonstraram a presença do alelo GYPB*S, 2 apresentaram a variante GYP(P2), 1 a variante GYP(NY) e, em 1 amostra encontramos ambas as formas variantes de GYPB: GYP(P2) e GYP(NY) Em 11 doadores com o fenótipo S-s+ houve heterozigosidade para o alelo GYP(P2) (n=8) e heterozigosidade para o alelo GYP(NY) (n=3). Conclusão: Esse estudo relata pela primeira vez os mecanismos moleculares responsáveis pelo fenótipo S-s- em uma população de Brasileiros descendentes de Africanos e promove o conhecimento de uma nova informação sobre a frequência (7,4%) e as bases moleculares do gene GYPB*S silencioso nesta população. / Abstract: Background: The molecular background of variant forms of GYPB is not well studied in Brazilians of African descent. The present study was carried out to determine the molecular bases of the S-s- phenotype and the frequency of GYPB*S silent gene for the S-s+ phenotype in a blood donor population of African Brazilians. Methods: We selected 165 blood samples from African Brazilians (Northeastern Brazil) who phenotyped as S-s- (17) and S-s+ (148) by hemagglutination. AS-PCR and PCR-RFLP were used to identify the variant forms of GYPB. Results: In 13 of 17 S-s- samples (76.5%) both GYPB were deleted. In 137 of the 148 S-s+ samples (92.6%), the AS-PCR was consistent with the S-s+, phenotype. In 4 of the S-s- samples (23.5%) and 11 of the S-s+ samples (7.4%) showed the presence of the GYPB*S allele associated with silencing of the S antigen. In the 4 donors with the S-s- phenotype there was homozygosity (or hemizygosity) for the GYP(P2) allele (n=2), homozygosity (or hemizygosity) for the GYP(NY) allele (n=1) and heterozygosity for the GYP(P2) and GYP(NY) alleles (n=1). In the 11 donors with the S-s+ phenotype there was heterozygosity for GYP(P2) allele (n=8) and heterozygosity for GYP(NY) allele (n=3). Conclusion: This study reports for the first time the molecular mechanisms responsible for the S-s- phenotype in a population of African Brazilians and provides a new information about the frequency and molecular bases of GYPB*S silent gene (7.4%) in this population. / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La tripanosomiasis americana es una enfermedad crónica transmitida principalmente por vectores. Estos vectores triatominos hematófagos transmiten Trypanosoma cruzi a una amplia variedad de mamíferos, que por lo general son su fuente de alimento. Esta Memoria de Título tuvo como objetivo determinar el perfil de la alimentación de Mepraia spinolai, un vector triatomino silvestre, presente en zonas endémicas de Chile. Los insectos fueron capturados en las regiones de Coquimbo, Valparaíso y Metropolitana. Las muestras de contenido intestinal fueron analizadas por un ensayo de inmunoabsorción ligado a una enzima (ELISA) estandarizado en este estudio, que identifica y discrimina la presencia de antígenos séricos de Homo sapiens sapiens y nueve especies de animales (Canis familiaris, Felis catus, Capra hircus, Mus musculus, Gallus gallus, Octodon degus, Thylamys elegans, Phyllotis darwini y Oryctolagus cuniculus). Los anti-sueros contra estas especies se utilizaron a diluciones de 1: 40.000 a 1: 800.000, seguido de una IgG de cabra anti-conejo (anticuerpo secundario) diluido 1: 2000, y la adición del sustrato azino-bis 3-etilbenzotiazolin- 6-ácidosulfónico (ABTS). Las absorbancias se leyeron a 405 nm de longitud de onda en un lector de ELISA (Bio-Rad ®). Los resultados se expresaron en forma descriptiva en frecuencias. Nuestros resultados indican que la fuente de alimentación más frecuente en esta área fue P. darwini, seguido de O. degus, O. cuniculus, M. musculus, G. gallus, T. elegans, C. familiaris, F. catus y C. hircus. También se identificaron las fuentes de alimentación mixtas. / American trypanosomiasis is a chronic disease transmitted mainly by vectors. The hematophagous triatomine vectors transmit Trypanosoma cruzi to a wide variety of mammals, which usually are their food source. This Undergraduate Thesis aimed to determine the feeding profile of Mepraia spinolai, a sylvatic triatomine vector, present in endemic areas of Chile. The insects were captured in the regions of Coquimbo, Valparaiso and Metropolitana. Samples of intestinal contents were analyzed by an Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) standardized in this study, that identifies and discriminates the presence of serum antigens from Homo sapiens sapiens and nine animal species (Canis familiaris, Felis catus, Capra hircus, Mus musculus, Gallus gallus, Octodon degus, Thylamys elegans, Phyllotis darwini and Oryctolagus cuniculus). Anti-sera against these animals were used at dilutions of 1: 40,000 to 1: 800,000, followed by a secondary goat anti-rabbit IgG diluted 1: 2000, and the addition of azino-bis substrate 3-etilbenzotiazolin- 6-ácidosulfónico (ABTS). The absorbances were read at 405 nm wavelength on an ELISA reader (Bio-Rad ®). The results were descriptively expressed in frequencies. Our data indicate the most frequent feeding source in this area was P. darwini, followed by O. degus, O. cuniculus, M. musculus, G. gallus, T. elegans, C. familiaris, F. catus and C. hircus. Mixed food sources were also identified. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1100339 y Proyecto Fondecyt Iniciación No. 11110251.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-16T15:20:48Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1293935 bytes, checksum: b779340631eccc4bf24d086b2784d036 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-16T15:20:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1293935 bytes, checksum: b779340631eccc4bf24d086b2784d036 (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A dengue é a doença mais importante causada por um arbovírus no mundo. O vírus da dengue pertence à família Flaviviridae e possui 4 sorotipos antigenicamente distintos. São vírus de RNA fita simples, polaridade positiva, com o genoma de aproximadamente 11 Kb que é traduzido em uma poliproteína subdividida em três proteínas estruturais e sete proteínas não- estruturais (que estão relacionadas com a replicação viral, expressão das proteínas virais e virulência dos sorotipos). Nos últimos vinte anos têm sido observado um incremento significativo na atividade epidêmica, expansão da distribuição geográfica e transmissão contínua dos diferentes sorotipos em áreas onde a doença não era prevalente. Um dos eventos mais alarmantes tem sido o aumento do número de casos da Febre da Dengue Hemorrágica (FDH) nas Américas. Um ponto ainda limitante dos testes diagnósticos que capturam o anticorpo presente no soro de pacientes infectados consiste na dificuldade de obtenção de baixo custo e produção em grande escala dos antígenos. Diante destas considerações objetivou-se expressar a proteína não-estrutural (NS1) do vírus dengue-2 em plantas transgênicas de Arabidopsis thaliana. O gene da proteína NS1 foi otimizado para a expressão em plantas e clonado no plasmídeo pCAMBIA3301. O vetor de expressão pCAMBIA3301/NS1 foi utilizado para transformação de Arabidopsis thaliana. A terceira geração de plantas transformadas foi selecionada em homozigose dominante. A transformação de Arabidopsis thaliana foi evidenciada pela imunolocalização da proteína NS1 marcada dentro do lúmen do retículo endoplasmático em tecidos foliares. Este sistema será utilizado para obtenção do antígeno NS1 com finalidade de aplicação em testes de diagnóstico da dengue. / Dengue fever is the most important disease caused by an arbovirus in the world. The dengue virus belongs to the Flaviviridae family and has four antigenically distinct serotypes. They are single stranded RNA viruses, positive polarity, with a genome of approximately 11 Kb which is translated into a polyprotein subdivided in three structural proteins and seven non-structural proteins (that are related to viral replication, expression of viral proteins and virulence of serotypes). In the last twenty years, it was observed a significant increase in the epidemic activity, expansion of the geographical distribution and streaming of different serotypes in areas where the disease was not prevalent. One of the most alarming events was the increase in the number of cases of dengue hemorrhagic fever (DHF) in the Americas. A further limiting point of the diagnostic tests that capture antibody present in the serum of infected patients is the difficulty of obtaining low-cost and large-scale production of the antigens. Due to this factor, we aimed to build a system in transgenic Arabidopsis thaliana expressing the nonstructural protein (NS1) of the dengue-2 virus. The gene of the NS1 protein was optimized for expression in plants and cloned into the plasmid pCAMBIA3301. The expression vector pCAMBIA3301/NS1 was used for transformation of Arabidopsis thaliana. The third generation of transformed plants were selected by dominant homozygous. The construction of a transgenic Arabidopsis thaliana system was demonstrated by immunolocalization of the NS1 protein into the lumen of the endoplasmic reticulum in the leaf tissues. This system will be used to obtain the NS1 antigen with application purpose of dengue diagnostic tests.

A toxoplasmose, causadas por protozoário Apicomplexa, Toxoplasma gondii, é amplamente disseminada e pouco sintomática. A infecção crônica mantém cistos residuais por toda a vida, mas protege da reinfecção. Neste cenário complexo, vacinas com cistos residuais não são factíveis e vacinas de subcomponentes resultam em baixa proteção. A radiação ionizante foi usada para aprimoramento de imunógenos tanto vivos ou de subcomponentes. O uso da radiação gama em extratos solúveis de taquizoítos de T. gondii foi eficiente na proteção de camundongos contra a infecção utilizando diferentes cepas, sem adjuvantes e de fácil conservação. O antígeno irradiado passa por alterações físicas sem adição de novas moléculas, com agregação de proteínas, quebras de cadeias e reações oxidativas, que podem melhorar seu direcionamento a receptores celulares em células apresentadoras de antígeno (APC). Os extratos irradiados apresentaram alterações estruturais mínimas afetando 60% das proteínas, mas com manutenção das características antigênicas e imunogênicas. O extrato irradiado a 1500Gy (STag 1500Gy) induziu maior proteção e maior resposta humoral que o extrato nativo (p<0.05), mais evidente na dose de 10?g/animal, com altos índices de anticorpos IgG específicos e maior maturação da afinidade de IgG específica, com eficiência similar ou inferior em doses maiores. Animais imunizados com STag 1500Gy apresentaram maiores proporções de linfócitos B e T CD4+ de memória, enquanto que a imunização com taquizoítos íntegros irradiados mostrou aumento de linfócitos T CD8+, ambas muito maiores que a induzida por STag nativo. Construímos STag marcados por via biossintética ou por acoplamento a diferentes marcadores não-oxidativos. STag3H 1500Gy apresentou captação maior e mais duradoura por macrófagos, sem degradação como STag3H nativo. O uso de STags fluorescentes, mostrou que a maior ligação do STag 1500Gy não é relacionada a susceptibilidade a proteases, dada a mesma sensibilidade dos extratos para as peptidases testadas, além de permanecer na célula por muito mais tempo. Na presença de bloqueadores de receptores Scavengers Dextran sulfato (SRA) e Probucol (CD36), a ligação e captação por macrófagos do STag 1500Gy foi mais afetada por inibidores de radicais oxidados (CD36) do que por inibidores de radicais negativos (SRA). Em macrófagos peritoneais de camundongos deficientes do receptor Scavenger CD36 (KOCD36-/-), observamos uma cinética inversa a que foi obtida em macrófagos normais, com menor incorporação do STag 1500Gy, fato comprovado tanto por ensaios quantitativos como por ensaios em células individuais por citometria de fluxo. Os animais KOCD36-/- não mostram produção significativa de IgG específica em todos os imunógenos usados, e foram altamente suscetíveis ao desafio com cepas viáveis de T. gondii agressivas ou cistogênicas. O transplante de macrófagos peritoneais normais \"primados\" com STag 1500Gy em animais KOCD36-/- mostrou aumento de IgG específica em soro de animais recipientes. A melhor imunogenicidade dos antígenos irradiados deve ser relacionada a captação de proteínas oxidadas via CD36, que dirige estes antígenos para via intracelular favorável à sua apresentação para resposta imune adaptativa. Nossos resultados mostram que a radiação ionizante foi capaz de modificar proteínas dos STag tornando seu processamento por células imunes mais eficiente, sem a adição de adjuvantes ao processo. / Toxoplasmosis, caused by the protozoan Apicomplexa, Toxoplasma gondii, is widely disseminated and little symptomatic. Chronic infection maintains residual cysts throughout life, but protects from reinfection. In this complex scenario, vaccines with residual cysts are not feasible and vaccines of subcomponents result in low protection. Ionizing radiation was used for enhancement of either live or subcomponent immunogens. The use of gamma radiation in soluble extracts of T. gondii tachyzoites was efficient in protecting mice against infection using different strains, without adjuvants and easy management. The irradiated antigen undergoes physical changes without addition of new molecules, with protein aggregation, chain breaks and oxidative reactions, which can improve its targeting to cellular receptors in antigen-presenting cells (APCs). The irradiated extracts showed minimal structural alterations affecting 60% of the proteins, but with maintenance of the antigenic and immunogenic characteristics. The extracts irradiated at 1500Gy (STag 1500Gy) induced greater protection and higher humoral response than the native extract (p <0.05), more evident at a dose of 10?g/animal, with high specific IgG antibody levels and increased maturation of specific IgG affinity, with similar or lower efficiency at higher doses. Animals immunized with STag 1500Gy presented higher proportions of memory lymphocytes B and CD4+ while immunization with irradiated intact tachyzoites showed an increase in CD8+ lymphocytes, both much larger than that induced by native STag. We construct STag labeled by biosynthetic pathway or by coupling to different non-oxidative markers. STag3H 1500Gy showed greater and longer uptake by macrophages, with no degradation as STag3H native. The use of fluorescent STags showed that the greater binding of the STag 1500Gy is not related to the loss of protease susceptibility, given the same sensitivity of the extracts for peptidases, besides remaining in the cell for much longer time by fluorescence. In the presence of Scavengers receptor blockers Dextran sulfate (SRA) and Probucol (CD36), binding and uptake of STag 1500Gy in macrophages was more affected by oxidized radical (CD36) inhibitors than by negative radical inhibitors (SRA). In peritoneal macrophages of Scavenger receptor CD36 deficient mice (KOCD36-/-), we observed an inverse kinetics, with less incorporation of STag 1500Gy, as evidenced by both quantitative assays and individual cells by cytometry flow, compared to wild type macrophages. KOCD36-/- animals did not show significant production of specific IgG in all immunogens used, and were highly susceptible to challenge with viable strains of aggressive or cistogenic T. gondii strains. Transplantation of normal peritoneal macrophages \"primed\" with STag 1500Gy induced increase of specific IgG in sera from CD36-/-recipient animals. The best immunogenicity of the irradiated antigens should be related to the uptake of oxidized proteins via CD36 in APCs, which directs these antigens to the intracellular route favorable to their presentation for adaptive immune response. Our results show that ionizing radiation was able to modify STag proteins, making its processing by immune cells more efficient without the addition of adjuvants to the process.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A leishmaniose visceral ou calazar é uma doença negligenciada, fatal que afeta a população pobre nos países em desenvolvimento. Há falha no controle da transmissão da doença devido à demora no diagnóstico, tratamento e toxicidade das drogas utilizadas, necessitando de novas estratégias. Dentre as estratégias seria de extrema importância o desenvolvimento de uma vacina a fim de minimizar a frequência dos casos e eliminar a doença. Nesse estudo, avaliamos a resposta imune celular a 10 antígenos recombinantes (SMT, CPB, NH, A2, KMP11, VIZ92, NS, A2MAT, 8NSA e NSA) bem assim ao antígeno solúvel de Leishmania (SLA), dosando as seguintes citocinas: IL-1ß, IL-12p70, IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-27, TNF-α. Células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de 37 indivíduos: LV ativa, LV curado, DTH+ e controles sadios foi estimulado com os antígenos acima por 72 horas a 37ºC/5% de CO2. Ressaltamos que não houve alteração significativa de outras citocinas, além do INF-γ, TNF-α e IL-10, em resposta aos demais antígenos recombinantes não destacados nos resultados deste estudo. Assim, observamos concentração elevada de INF-γ e/ou TNF-α acompanhados de resposta ao IL-10 em indivíduos mais protegidos em resposta ao estímulo dos antígenos: CPB, VIZ92 e 8NSA; destacamos que em relação ao antígeno CPB tem-se concentração significativa de INF-γ no grupo DTH+ se comparado ao grupo LV ativa e correlação direta entre as concentrações de INF-γ e TNF-α entre estes dois grupos. Sugerimos que os antígenos CPB, VIZ92 e 8NSA possam estar associados à indução de resposta protetora e ser promissores para utilização em imunoterapia e imunoprofilaxia. / A leishmaniose visceral ou calazar é uma doença negligenciada, fatal que afeta a população pobre nos países em desenvolvimento. Há falha no controle da transmissão da doença devido à demora no diagnóstico, tratamento e toxicidade das drogas utilizadas, necessitando de novas estratégias. Dentre as estratégias seria de extrema importância o desenvolvimento de uma vacina a fim de minimizar a frequência dos casos e eliminar a doença. Nesse estudo, avaliamos a resposta imune celular a 10 antígenos recombinantes (SMT, CPB, NH, A2, KMP11, VIZ92, NS, A2MAT, 8NSA e NSA) bem assim ao antígeno solúvel de Leishmania (SLA), dosando as seguintes citocinas: IL-1ß, IL-12p70, IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-27, TNF-α. Células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de 37 indivíduos: LV ativa, LV curado, DTH+ e controles sadios foi estimulado com os antígenos acima por 72 horas a 37ºC/5% de CO2. Ressaltamos que não houve alteração significativa de outras citocinas, além do INF-γ, TNF-α e IL-10, em resposta aos demais antígenos recombinantes não destacados nos resultados deste estudo. Assim, observamos concentração elevada de INF-γ e/ou TNF-α acompanhados de resposta ao IL-10 em indivíduos mais protegidos em resposta ao estímulo dos antígenos: CPB, VIZ92 e 8NSA; destacamos que em relação ao antígeno CPB tem-se concentração significativa de INF-γ no grupo DTH+ se comparado ao grupo LV ativa e correlação direta entre as concentrações de INF-γ e TNF-α entre estes dois grupos. Sugerimos que os antígenos CPB, VIZ92 e 8NSA possam estar associados à indução de resposta protetora e ser promissores para utilização em imunoterapia e imunoprofilaxia.