A doença Huanglongbing (HLB) associada a bactéria Candidatus Liberibacter spp., que coloniza os vasos do floema, é considerada uma das mais graves doenças de citros. Uma importante estratégia para o controle desta doença consiste na produção de plantas transgênicas, expressando genes que codificam peptídeos antibacterianos especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja doce, expressando o gene que codifica o peptídeo antibacteriano atacina A (attA) dirigido por promotores específicos para a expressão gênica no floema. O trabalho foi iniciado com a elaboração de construções gênicas contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 (transportador de sacarose), AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2), clonado de Citrus sinensis. Os experimentos de transformação genética foram realizados com C. sinensis cv. \'Hamlin\', \'Valência\', \'Pêra\' e \'Natal\', via Agrobacterium tumefaciens, utilizando-se segmento de epicótilo como explante. A identificação de plantas transgênicas foi realizada por meio da análise de PCR. Plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação específica para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern e Northern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas, confirmando-se a integração e transcrição do gene attA, respectivamente. A expressão do gene attA também foi confirmada pela análise de RT-qPCR. Plantas de laranja \'Hamlin\' contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 ou AtPP2 foram propagadas por enxertia, para futura avaliação da resistência a Candidatus Liberibacter asiaticus / Huanglongbing (HLB) associated to Candidatus Liberibacter spp., which colonizes the phloem, is considered one of the most serious diseases of citrus. One important strategy to control this disease consists of producing transgenic plants expressing, in the bacteria colonization tissue, genes encoding antibacterial peptides. The objective of this work was to produce transgenic sweet orange plants expressing genes encoding the antibacterial peptide attacin A (attA) driven by phoem-specific promoters. The work started with the development of the gene constructs, containing the attacin A gene (with or without signal peptide) controlled by either sucrose transporter gene (AtSuc2) or phloem protein 2 gene promoters (AtPP2) from Arabidopsis thaliana, or phloem protein 2 gene promotor (CsPP2) from Citrus sinensis. The genetic transformation of C. sinensis \'Hamlin\', \'Valencia\', \'Pera\' and \'Natal\' cultivars was done via Agrobacterium tumefaciens. Epicotyls segments collected from in vitro germinated seedlings were used as explants. Transgenic plants were identified by PCR analyses. PCR positive plants were acclimatized and transferred to specific greenhouse. Integration and transcription of the attA gene was confirmed in acclimatized transgenic plants by Southern and Northern blot analysis, respectively. The attA gene expression was validated by RT-qPCR analysis. \'Hamlin\' transgenic cultivars containing the AtSuc2 or AtPP2 promoters controlling the expression of attA (with or without signal peptide) were propagated by grafting, for future evaluation of Candidatus Liberibacter asiaticus resistance

Submitted by PPG Engenharia e Tecnologia de Materiais (engenharia.pg.materiais@pucrs.br) on 2018-06-11T12:25:49Z No. of bitstreams: 1 Investiga??o de atividades biol?gicas e potencial uso de extratos das flores de Acacia mearnsii o.pdf: 2416660 bytes, checksum: d1a24de16c6bbd6f86f46d3c0bb1dbc0 (MD5) / Approved for entry into archive by Sheila Dias (sheila.dias@pucrs.br) on 2018-06-21T18:41:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Investiga??o de atividades biol?gicas e potencial uso de extratos das flores de Acacia mearnsii o.pdf: 2416660 bytes, checksum: d1a24de16c6bbd6f86f46d3c0bb1dbc0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-21T18:54:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Investiga??o de atividades biol?gicas e potencial uso de extratos das flores de Acacia mearnsii o.pdf: 2416660 bytes, checksum: d1a24de16c6bbd6f86f46d3c0bb1dbc0 (MD5) Previous issue date: 2018-03-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Although the Acacia mearnsii tree is widely cultivated and used in the industry, its flowers are seldom researched. Considering the extensive availability of A. mearnsii flowers and the growing interest in natural products, this work aimed at the obtainment of extracts from these flowers and investigation of their composition and biochemistry properties. In this work, essential oil and aqueous extract by steam distillation and extracts were obtained with supercritical fluid. The essential oil was characterized by CG-MS and olfactometry. The main compounds identified in the essential oil were 8-heptadecene, heptadecane, nonadecane e kaurene. The main aroma detected by olfactometric analysis was roast nutty, as well as coffee, sweet, floral, vegetal and spicy. Antioxidant activity was determined and the aqueous extract showed an activity superior to rutin standard. LC-qTOF-MS identified 42 likely phenolic compounds, such as quercitrin, naringenin, myricetin, rutin, and robinetin. The extracts obtained by supercritical extraction and isolated fractions presented activity against S. aureus. The yield of the supercritical extraction was optimized using factorial planning and mass transfer parameters were obtained through mathematical models that represent the extraction curve. Thus, it was concluded that the flowers of A. mearnsii can be exploited by extractive processes used in this study to generate a plant by-product. The results indicate the aromatic and antioxidant potential of the essential oil and aqueous extract, respectively, obtained with 2.0 bar steam distillation, while the supercritical extract has antibacterial action. / A Acacia mearnsii, apesar de ser amplamente cultivada e utilizada industrialmente, n?o tem o potencial de suas flores explorado. Considerando a disponibilidade de flores da A. mearnsii e o crescente interesse por produtos naturais, esse trabalho consistiu na obten??o de extratos destas flores e na investiga??o de suas composi??es e a??es bioqu?micas. A pesquisa compreendeu a extra??o do ?leo essencial e a obten??o do extrato aquoso de flores da planta via destila??o por arraste a vapor, al?m da extra??o com fluido supercr?tico. O ?leo essencial foi analisado por GC-MS e apresentou, entre os 31 compostos identificados, 8-heptadeceno, heptadecano, nonadecano e caureno como compostos majorit?rios. Na an?lise olfatom?trica (GC-O), os principais aromas detectados no ?leo essencial foram caf?, doce, floral, vegetal e refrescante, com destaque para ?castanha/defumado?. O extrato aquoso das flores da A. mearnsii apresentou atividade antioxidante superior ? da rutina. Utilizando cromatografia de alta resolu??o (LC-qTOF/MS), foram verificados 42 prov?veis compostos fen?licos, entre eles, quercitrina, naringenina, miricetina, rutina, robinetina. Os extratos obtidos via extra??o supercr?tica e fra??es isoladas apresentaram atividade frente a S. aureus. O rendimento da extra??o supercr?tica foi otimizado utilizando planejamento fatorial e par?metros da transfer?ncia de massa foram obtidos atrav?s de modelos matem?ticos que representam a curva de extra??o. Assim, concluiu-se que as flores de A. mearnsii podem ser exploradas pelos processos extrativos empregados nesse estudo a fim de gerar um co-produto da cadeia produtiva da planta, uma vez que o ?leo essencial e o extrato aquoso, obtidos pela extra??o por arraste a vapor a 2,0 bar, possuem, respectivamente, potencial arom?tico e poder antioxidante, enquanto o extrato obtido com fluido supercr?tico apresenta a??o antibacteriana.

Peptídeos antimicrobianos (PAMs) fazem parte de um dos mecanismos da imunidade inata contra infecções. A microplusina é um PAM de 10.204 Da, isolado da hemolinfa livre de células e dos ovos do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus. É um PAM aniônico em pH fisiológico, possui seis resíduos de cisteína, com formação de três pontes dissulfeto, além de sete resíduos de histidina concentrados principalmente na sua porção C-terminal. O presente trabalho teve como objetivo investigar o mecanismo de ação antimicrobiana da microplusina. A microplusina recombinante é ativa contra várias bactérias Gram-positivas e fungos, porém não apresenta atividade contra bactérias Gram-negativas. Para avaliar o seu mecanismo de ação, foram utilizados dois modelos: a bactéria Micrococcus luteus e o fungo Cryptococcus neoformans. A microplusina é bacteriostática contra M. luteus e apresenta localização intracelular na bactéria. Além disso, observamos que a microplusina liga cobre e que a adição deste metal ao meio de cultivo reduz sua atividade antibacteriana. Bactérias M. luteus pré-incubadas com microplusina retomam o seu crescimento quando cobre é adicionado ao meio. Estes dados indicam que a atividade da microplusina está relacionada à sua habilidade de depletar cobre do meio extra ou intracelular, sugerindo um efeito nutricional para o peptídeo. A microplusina apresenta estrutura terciária com cinco a-hélices e sua ligação ao cobre não induz mudanças conformacionais. Observou-se que as histidinas 1, 2 e 74 da microplusina podem estar envolvidas na formação de um sítio de ligação ao cobre. Quanto à C. neoformans, verificou-se que a microplusina inibe a melanização do fungo, um fator de virulência catalisado pela lacase, uma enzima cobre-dependente. Entretanto, a microplusina não afeta a atividade da lacase, nem sua expressão gênica. O peptídeo também não inibe a auto-polimerização de substratos fenólicos que levam à melanização. Sendo assim, mais estudos são necessários a fim de avaliar o mecanismo pelo qual a microplusina inibe a melanização. Adicionalmente, a microplusina afeta a viabilidade do fungo e reduz o tamanho de sua cápsula, outro importante fator de virulência. As atividades da microplusina sobre C. neoformans sugerem o seu potencial terapêutico. Experimentos in vivo com modelo murino, mostraram que a microplusina reduz o processo inflamatório e a viabilidade de C. neoformans nos pulmões, indicando que em condições otimizadas, o peptídeo pode atuar no controle de infecções. / Antimicrobial peptides (AMPs) take part of innate immune mechanisms against infections. Microplusin is a 10,204 Da AMP, isolated from cell-free hemolymph and eggs of the tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. It is an anionic AMP at physiological pH, with six cysteine residues forming three disulfide bridges and seven histidine residues clustered mainly at the carboxy end portion. The goal of the present work was investigate the antimicrobial action mechanism of microplusin. Recombinant microplusin is active against Gram-positive bacteria and fungi, however, no activity is detected for Gram-negative bacteria. Two models were used to evaluate the action mechanism of microplusin: the bacteria Micrococcus luteus and the yeast Cryptococcus neoformans. Microplusin is bacteriostatic against M. luteus and its localization is intracellular for these bacteria. Moreover, microplusin binds copper and the addition of this metal into the medium reduces its antibacterial activity. M. luteus bacteria pre-treated with microplusin recover its growth when copper is added. These data indicate that microplusin activity is related to its ability to deplete copper present in the extracellular or intracellular environment, suggesting a nutritional effect. Microplusin presents a tertiary structure with five a-helix and the copper binding does not induce conformation changes. In addition, it was observed that histidines 1, 2 and 74 from microplusin may be involved in the formation of a copper binding site. About C. neoformans, it was verified microplusin inhibits its melanization, a virulence factor catalyzed by laccase, a copper dependent enzyme. However, microplusin does affect neither laccase activity nor its gene expression. The melanization caused by auto-polymerazation of phenolic substrates, is also not inhibited by microplusin. Hence, additional studies are required to evaluate the mechanism by which microplusin inhibits melanization. In addition, microplusin also affects the fungi viability and reduces the capsule size, another important virulence factor.The microplusin activities against C. neoformans suggest its therapeutic potential. In vivo experiments with murine model showed that microplusin reduces the inflammation and the viability of C. neoformans in the lungs, indicating that, in optimized conditions, the peptide may act in the infection control.

A doença Huanglongbing (HLB) associada a bactéria Candidatus Liberibacter spp., que coloniza os vasos do floema, é considerada uma das mais graves doenças de citros. Uma importante estratégia para o controle desta doença consiste na produção de plantas transgênicas, expressando genes que codificam peptídeos antibacterianos especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja doce, expressando o gene que codifica o peptídeo antibacteriano atacina A (attA) dirigido por promotores específicos para a expressão gênica no floema. O trabalho foi iniciado com a elaboração de construções gênicas contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 (transportador de sacarose), AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2), clonado de Citrus sinensis. Os experimentos de transformação genética foram realizados com C. sinensis cv. \'Hamlin\', \'Valência\', \'Pêra\' e \'Natal\', via Agrobacterium tumefaciens, utilizando-se segmento de epicótilo como explante. A identificação de plantas transgênicas foi realizada por meio da análise de PCR. Plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação específica para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern e Northern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas, confirmando-se a integração e transcrição do gene attA, respectivamente. A expressão do gene attA também foi confirmada pela análise de RT-qPCR. Plantas de laranja \'Hamlin\' contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 ou AtPP2 foram propagadas por enxertia, para futura avaliação da resistência a Candidatus Liberibacter asiaticus / Huanglongbing (HLB) associated to Candidatus Liberibacter spp., which colonizes the phloem, is considered one of the most serious diseases of citrus. One important strategy to control this disease consists of producing transgenic plants expressing, in the bacteria colonization tissue, genes encoding antibacterial peptides. The objective of this work was to produce transgenic sweet orange plants expressing genes encoding the antibacterial peptide attacin A (attA) driven by phoem-specific promoters. The work started with the development of the gene constructs, containing the attacin A gene (with or without signal peptide) controlled by either sucrose transporter gene (AtSuc2) or phloem protein 2 gene promoters (AtPP2) from Arabidopsis thaliana, or phloem protein 2 gene promotor (CsPP2) from Citrus sinensis. The genetic transformation of C. sinensis \'Hamlin\', \'Valencia\', \'Pera\' and \'Natal\' cultivars was done via Agrobacterium tumefaciens. Epicotyls segments collected from in vitro germinated seedlings were used as explants. Transgenic plants were identified by PCR analyses. PCR positive plants were acclimatized and transferred to specific greenhouse. Integration and transcription of the attA gene was confirmed in acclimatized transgenic plants by Southern and Northern blot analysis, respectively. The attA gene expression was validated by RT-qPCR analysis. \'Hamlin\' transgenic cultivars containing the AtSuc2 or AtPP2 promoters controlling the expression of attA (with or without signal peptide) were propagated by grafting, for future evaluation of Candidatus Liberibacter asiaticus resistance

Submitted by Leonardo Cavalcante (leo.ocavalcante@gmail.com) on 2018-04-27T14:45:53Z No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 1693139 bytes, checksum: 05772ba5cdc4001f007fd50e10adb2b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-27T14:45:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 1693139 bytes, checksum: 05772ba5cdc4001f007fd50e10adb2b9 (MD5) Previous issue date: 2017-04-18 / Seeds, rhizomes and tubers are welcomed with sources of bioactive molecules, which are related to health promotion, such as proteins and other components of plant sources. (Dioscorea cayennensis) is part of the Brazilian food habit, it is necessary to study the proteins present in this plant. The objective of this work was to isolate and characterize biochemically the dioscorin proteic fraction (DPF) present in the tubers of D. cayennensis, characterizing the presence of antinutritional compounds and antioxidant, antibacterial and antifungal biological activities. Isolation of DPF was performed with protein extraction in Tris-HCl 0.05M pH 8.3, followed by precipitation in Ammonium Sulfate (F45-75). The molecular weight of DPF was determined by SDS-PAGE and MALDI-ToF, characterized by the presence of a major component with a mass of approximately 28 kDa corresponding to dioscorin. When tested for the presence of phytochemicals and antinutritional compounds (lectins and trypsin inhibitors), the presence of these compounds was not detected in the DPF. The amino acid composition of the fraction was determined and the antioxidant activity estimated by the ABTS and DPPH methods. Glutamic acid, Aspartic acid and Arginine were the amino acids that showed higher levels in DPF, which explains the antioxidant activity, suggesting that the interaction of these amino acids seems to act on reactive molecules making them stable. Finally, in the evaluation of the antibacterial and antifungal activity of the total extract and DPF against different strains of microorganisms, an antibacterial potential was detected between 50-500 μg/mL of protein for inhibition of the growth of strain of L. monocytogenes. / Sementes, rizomas e tubérculos são geralmente boas fontes de moléculas bioativas, as quais estão relacionadas à promoção da saúde, as proteínas e outros compostos oriundos de fontes vegetais, vem ganhando relevância em pesquisas científicas. Considerando que o consumo do tubérculo de inhame (Dioscorea cayennensis) faz parte do hábito alimentar brasileiro, faz-se necessário o estudo das proteínas presentes neste vegetal. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar bioquimicamente a fração proteica dioscorina (FPD) presente nos tubérculos de D. cayennensis, detectando a presença de compostos antinutricionais e atividades biológicas antioxidante, antibacteriana e antifúngica. O isolamento do FPD foi realizado com a extração proteica em Tris-HCl 0,05M pH 8,3, seguido de precipitação em Sulfato de Amônio (F45-75). A massa molecular da FPD foi determinada por SDS-PAGE e MALDI-ToF. Caracterizado pela presença de um componente majoritário com massa de aproximadamente 28 kDa, correspondente a dioscorina. Quando submetida a testes de avaliação da presença de fitoquímicos e compostos antinutricionais (lectinas e inibidores de tripsina), não foi detectada na FPD a presença destes compostos avaliados. A composição aminoacídica da fração foi determinada e a atividade antioxidante estimada pelos métodos de ABTS e DPPH. Ácido glutâmico, Ácido Aspártico e Arginina foram os aminoácidos que apresentaram maiores teores na FPD, o que explica a atividade antioxidante verificada, sugerindo que a interação destes aminoácidos parece atuar em moléculas reativas tornando-as estáveis. Por fim, na avaliação da atividade antibacteriana e antifúngica do extrato total e FPD frente a diferentes cepas de micro-organismos, foi detectado potencial antibacteriano entre 50-500 μg/mL de proteína para inibição do crescimento da cepa L. monocytogenes.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O gÃnero Guettarda (Rubiaceae) compreende plantas extensamente distribuÃdas em Ãreas tropicais. Com relaÃÃo à espÃcie Guettarda sericea, a literatura demonstra que existe uma ampla carÃncia acerca de estudos botÃnicos e fitoquÃmicos. Assim, o presente trabalho buscou avaliar o efeito antibacteriano do extrato etanÃlico das folhas de G. sericea (EEFGS) e suas fraÃÃes sobre o crescimento de Streptococcus oralis ATCC 10557 e S. salivarius ATCC 7073, nas formas planctÃnicas e de biofilmes. Diferentes metodologias foram empregadas para a verificaÃÃo do potencial antimicrobiano. Dentre estas estÃo a determinaÃÃo da concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (MIC), a determinaÃÃo da curva de morte e a avaliaÃÃo da concentraÃÃo bactericida mÃnima (MBC). AlÃm disso, a quantificaÃÃo da biomassa e do nÃmero de cÃlulas viÃveis do biofilme foi realizada, respectivamente, atravÃs da coloraÃÃo pelo cristal violeta e contagem de unidades formadoras de colÃnia (UFC). Os controles, negativo e positivo utilizados em todos os ensaios foram, respectivamente, DMSO 4% e Gluconato de Clorexidina com concentraÃÃo ajustada de acordo com os dados da CIM de cada micro-organismo. Para a determinaÃÃo da toxicidade do EEFGS utilizou-se o ensaio de toxicidade sobre nÃuplios de Artemia. Os dados mostraram que o extrato e as subfraÃÃes 13 a 17 da fraÃÃo clorofÃrmio apresentaram um marcante efeito antimicrobiano, sendo capazes de inibir o crescimento planctÃnico, bem como o desenvolvimento de biofilmes da cepa de S. oralis atà a concentraÃÃo de 62,5 Âg.mL-1. Com relaÃÃo a S. salivarius, apenas a subfraÃÃo 12 interferiu sobre o crescimento bacteriano. No tocante à toxicidade, foi observado que a morte dos nÃuplios de Artemia ocorreu em concentraÃÃes mais elevadas do que aquelas que apresentaram efeito antibacteriano. A partir de tais resultados pode-se concluir que EEFGS e as subfraÃÃes 13 a 17 podem ser utilizados como insumos para o controle da formaÃÃo de biofilmes de S. oralis. Em adiÃÃo, metodologias complementares que busquem a purificaÃÃo dos compostos ativos e seus efeitos citotÃxicos sobre cÃlulas eucariÃticas necessitam ser realizadas, visando sua utilizaÃÃo como um agente fitoterÃpico. / The genus Guettarda (Rubiaceae) comprises plants widely distributed in tropical areas. Regarding the Guettarda sericea species, the literature shows that there is a lack of botanical and phytochemicals studies. Thus, the present study aimed to evaluate the antibacterial effect of ethanol extract of leaves of G. sericea (EEFGS) and its fractions on the growth of Streptococcus oralis ATCC 10557 and S. salivarius ATCC 7073 in both the planktonic and biofilms states. Different methods were employed to verify the antimicrobial potential. Among these are the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) determination of the death curve and evaluation of minimum bactericidal concentration (MBC). Furthermore, quantification of biomass and the number of viable cells of the biofilm were performed, respectively, by staining with crystal violet and counting colony forming units (CFU). The negative and positive controls used in all assays were respectively 4% DMSO and chlorhexidine gluconate with concentration adjusted according to the data of the MIC of each microorganism. To determine the toxicity of EEFGS, it was used the toxicity test on Artemia nauplii. The data showed that the extract and subfractions 13 to 17 of the chloroform fraction show a remarkable antimicrobial effect, able to inhibit the growth of planktonic and development of biofilms of S. oralis strain until the concentration of 62.5 μg.mL-1. With respect to S. salivarius, only subfraction 12 interfered on bacterial growth. Regarding the toxicity, it was observed that death of Artemia nauplii occurred at higher concentrations than those that exhibited antibacterial effect. From these results it can be concluded that EEFGS and subfractions 13-17 can be used as agents for the control of biofilm formation of S. oralis. In addition, complementary methodologies that seek purification of the active compounds and their cytotoxic effects on eukaryotic cells need to be held, aiming its use as an herbal agent.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-28T17:52:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Melo-MCA_dissertacao.pdf: 6271738 bytes, checksum: ce55245b114aac78286d16fa3cabf5d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T17:52:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Melo-MCA_dissertacao.pdf: 6271738 bytes, checksum: ce55245b114aac78286d16fa3cabf5d4 (MD5) Previous issue date: 2015-07-12 / CAPES / O Staphylococcus (S.) aureus é responsável por inúmeros casos de infecções em animais e seres humanos. Essa bactéria secreta uma grande variedade de exoproteínas, incluindo quatro hemolisinas: alfa, beta, gama e delta. A atividade hemolítica da alfa-toxina (α-HL) se deve a formação de poros em membranas celulares. A α-HL é um monômero solúvel em água, que se torna mais estável ao se oligomerizar e formar poros heptaméricos transmembranares. Devido sua importância na patogênese bacteriana, essa proteína tem sido alvo de estudos no desenvolvimento de agentes terapêuticos. Sabe-se que os compostos de base de Schiff têm apresentado significativos resultados em testes de atividade biológica, incluindo antibacteriana. Neste contexto, avaliou-se a atividade de complexos de cobre-base de Schiff no bloqueio de poros da α-HL de S. aureus. Simultaneamente, foram realizados estudos conformacionais da δ-toxina em solução aquosa. Experimentos com eritrócitos de coelho expostos a α-HL foram utilizados na seleção dos compostos. Membranas lipídicas planas artificiais com canais individuais de α-HL, em condições de fixação de voltagem, foram utilizados para entender o mecanismo de ação dos compostos. Finalmente, avaliou-se através de docking molecular a interação entre os compostos e o canal de α-HL, visando corroborar o mecanismo de bloqueio. No estudo da δ-toxina, dinâmica molecular foi usada para determinar sua conformação em solução aquosa. Observou-se que os complexos de cobre inibiram parcialmente a atividade hemolítica da α-HL, devido ao bloqueio parcial dos canais desta toxina. O mecanismo molecular desse bloqueio ocorre pela interação dos compostos com a região de constrição do poro. Observou-se ainda que a δ-toxina em solução aquosa apresenta de 5 a 14 resíduos enovelados. Sugere-se que os complexos de cobre são potenciais candidatos a futuros agentes coadjuvantes no tratamento de infecções por S. aureus. / Staphylococcus (S.) aureus is responsible for a great number of infecctions in animals and humans. This bacteria produces several exoproteins and virulence factors, including four hemolysins: alfa, beta, gama and delta. The alfa-toxin (α-HL) hemolytic activity occurs due to the formation of pores in cellular membranes. α-HL is a soluble monomer in water, but becomes more stable when oligomerize and form transmembranar heptameric pores. Considering its importance for bacterial patogenesis, this protein has been target of studies on new antimicrobial agents. For example, base Schiff copper compounds have been observed to show significative results in biological activity assays, including antibacterial. In this context, the present work intended to evaluate the activity of a base Schiff-copper compounds to block the S. aureus α-HL ion channel. The most effective compounds were selected based on the exposition of rabbit erythrocytes to α-HL, and tested against control conditions. The mechanism of action of these compounds were evaluated through single channel experiments in planar lipid bilayrs, through eletrophisiological techniques. Finally, molecular docking studies were employed to confirm the blocking mechanism of such compounds. Moreover, molecular dynamics simulations were used to determine δ-toxin conformation in aqueous solutions. The obtained results indicated that the copper(II) compounds were capable of partially blocking the α-HL hemolytic activity, due to partial blockade of the ionic channels. The molecular mechanis of pore blockade was identified to mainly occur due to the interaction of the compounds to the pore constriction. Additionally, it was observed that δ-toxin in aqueous solution presents from 5 to 14 amino acids showing α-helical content. Based on these results, we suggest that such compound may be further evaluated as a coadjuvante agent for the treatment of staphylococcal infections

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-18T14:39:20Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TeseParcial(Cap.I)-RaimundoJunior-PPGQ.pdf: 1178770 bytes, checksum: 74333ca704cd865ec51c2e655679a37f (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-18T14:39:33Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TeseParcial(Cap.I)-RaimundoJunior-PPGQ.pdf: 1178770 bytes, checksum: 74333ca704cd865ec51c2e655679a37f (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-18T14:39:33Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TeseParcial(Cap.I)-RaimundoJunior-PPGQ.pdf: 1178770 bytes, checksum: 74333ca704cd865ec51c2e655679a37f (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2018-05-28 / The Myrtaceae family has 132 genera distributed in 5,760 species present in Australia, Southeast Asia, tropical and temperate America. In Brazil, it presents 1,018 species in 23 genera. Myrcia D.C is one of the largest genera with 282 species present in almost all territory, of which 220 are endemics. Its species are used in Brazilian popular medicine, with emphasis on Myrcia spp., which are used by the traditional population of the Amazon as astringents, diuretics, hypoglycemics, antihemorrhagics, antioxidants and in the treatment of hypertension and ulcers. The present study has evaluated the chemical composition of the essential oils of 13 species of Myrtaceae (Myrcia spp., Marlierea sp. and Calyptranthes sp.) from the Terra Firme ecosystem (Amazon). In addition, the cytotoxic, antibacterial, bacteriostatic, antifungal and larvicidal potentials of these oils have been described. Twenty-seven samples belonging to these thirteen species (18 individuals of 11 species of Myrcia, one of Marlierea caudata and one of Calyptranthes spruceana) were collected from the Adolpho Ducke Forest Reserve, EMBRAPA (Manaus) and the PANC site (Manaus). Its essential oils were obtained by hydrodistillation, dried and stored under refrigeration. The chemical characterization was carried out by means of CG-DIC and CG-EM analysis. The Arithmetic Indexes and the Spectral Similarity Indexes were obtained, whose results were compared with those described in the main databases. The mean chemical characterization of these oils was 95%, totaling 336 compounds identified, of which 34 have been abundant (50.7 to 96.17%). The most frequent and, in some cases, the most frequent components are: (E)-caryophyllene, δ-cadinene, Espatulenol, α-Copaene, β-elemene, α-humulene, Caryophyllene oxide, β-selinene, α-muurolene and α–cadinol (42.73% of nonoxygenated sesquiterpenes and 36.98% of oxygenated sesquiterpenes). This chemical variability is common to Myrcia species of other Brazilian ecosystems/biomes. Of the seven pairs of Myrcia individuals collected in distinct periods (dry and rainy), 242 compounds were identified, of which 125 were common, 41 and 76 of which were unique to the rainy and dry periods, respectively. Essential oils of the dry period have exhibit greater chemical variability. In addition, the chemical variability of the essential oils of Myrcia spp. of this ecosystem has been described by 51 cyclization pathways. Of these routes, thirteen have a high frequency (above 50%), four of which are the most prominent ones (Cariofilan, Cadinano, Aromadendrano and Eudesmano). The chemical results of this study have revealed a clear agreement of the chemical composition of Marlierea caudata with the chemistry composition of Myrcia spp.. On the other hand, this observation is not clearly evident for C. spruceana. Moreover, It should be noted that the chemical composition of the essential oils of M. magnoliifolia, M. minutiflora, M. fenestrata, M. amapensis and Marlierea caudata have been described for the first time. As for toxicity to cancer cells (Skmel 3 and ACPO2) and normal cells (MRC5), M. minutiflora presents moderate activity for human melanoma (Skmel 3) and gastric adenocarcinoma (ACPO2) as well as cytotoxic to non-neoplastic fibroblasts (MRC5). M. citrifolia, M. minutiflora, M. paivae and M. magnoliifolia present moderate to high activity against Staphylococcus aureus. M. fallax, M. sylvatica, M. paivae and C. spruceana present moderate activity against Staphylococcus aureus. As for the bacteriostatic action, all species tested have shown moderate to high activity against Pseudomonas aeroginosas. In relation to the insecticidal activity, M. citrifolia, M. bracteata, M. fenestrata, M. amazonica, M. paivae and C. spruceana are active, since after 24 h the mortality percentage of Aedes aegypti larvae was 100% in 25 mg.L- 1 of essential oil. Furthermore, the use of chemometric tools in this study has shown it possible to observe the segregation of samples by major terpene groups and their most influential cyclic pathways, whose substances of major relevance in this model have been (E)-Caryophyllene, δ-Cadinene, and Espatulenol. Its pharmacological activities described in the literature should suggest that they are responsible for the biological results observed in this work. However, novel biological assays with such isolated constituents must be necessary. Therefore, with respect to the chemistry of Myrcia volatile constituents occurring in Terra Firme (Amazonia), the present study has been evidenced very characteristic Amazonian chemotypes and without similarity with other species collected outside the region, which leads us to conclude how much to must be studied from the precious Amazonian biodiversity. / A família Myrtaceae apresenta 132 gêneros distribuídas em 5.760 espécies presentes na Austrália, sudeste da Ásia, América tropical e temperada. No Brasil, apresenta-se com 1018 espécies em 23 gêneros. Myrcia D.C é um dos maiores gêneros com 282 espécies presentes em quase todo território, sendo 220 endêmicas. Suas espécies são empregada na medicina popular brasileira, com destaque para Myrcia spp., as quais são usadas pela população tradicional da Amazônia como adstringentes, diuréticos, hipoglicemicas, anti-hemorrágicas, antioxidantes e no tratamento de hipertensão e úlceras. O presente estudo avalia a composição química dos óleos essenciais de 13 espécies de Myrtaceae (Myrcia spp., Marlierea sp. e Myrciaria sp.) de ecossistema de Terra Firme (Amazônia). Além disso são descritos os potenciais citotóxico, antibacteriano, bacteriostático, antifúngico e larvicida desses óleos. Vinte sete amostras pertencentes a essas treze espécies (18 indivíduos de 11 espécies de Mycia, um indivíduo de Marlierea caudata e outro de Calyptranthes spruceana) foram coletados na Reserva Florestal Adolpho Ducke, na EMBRAPA (Manaus) e no sítio PANC (Manaus). Seus óleos essências foram obtidos por hidrodestilação, secos e armazenado sob refrigeração. A caracterização química ocorreu por meio de análises por CG-DIC e CG-EM, cujos Índices Aritiméticos calculados e de Similaridade Espectral foram comparados com os descritos nas principais bases de dados. A média de caracterização química desses óleos foi de 95%, totalizando 336 substâncias identificadas, das quais 34 são abundantes (50,7 a 96,17%). Os componentes mais frequentes, e em alguns casos majoritários, são: (E)–cariofileno, δ–cadineno, Espatulenol, α–copaeno, β–elemeno, α–humuleno, Óxido de cariofileno, β–selineno, α–muuroleno e α–cadinol, prevalecendo estruturas sesquiterpênicas (42,73% de sesquiterpenos não-oxigenados e 36,98% de sesquiterpenos oxigenados). Essa variabilidade química é comum a espécies de Myrcia de outros ecossistemas/biomas brasileiros. Dos sete pares de indivíduos de Myrcia coletados em períodos distintos (seco e chuvoso), identificou-se 242 substâncias, sendo 125 comuns, com 41 exclusivas do período chuvoso e 76 são exclusivos do períoso seco. Os óleos essenciais do período seco apresentaram uma maior variabilidade química. Além disso, a variabilidade química dos óleos essenciais de Myrcia spp. desse ecossistema pôde ser descrita por 51 vias de ciclização. Dessas vias, treze apresentam elevada frequência (superior a 50%), sendo quatro vias de destaque pela maior ocorrência (Cariofilano, Cadinano, Aromadendrano e Eudesmano). Os resultados químicos desse estudo revelam uma clara concordância de Marlierea caudata com a química de Myrcia spp., porém o mesmo não se evidencia claramente para C. spruceana. Ressalta-se que a composição química dos óleos essenias de M. magnoliifolia, M. minutiflora, M. fenestrata, M. amapensis e Marlierea caudata são descritos pela primeira vez. Quanto à toxicidade frente a células cancerígenas (Skmel 3 e ACPO2) e normais (MRC5), M. minutiflora apresenta atividade moderada para melanoma humano (Skmel 3) e adenocarcinoma gástrico (ACPO2), bem como citotóxica para fibroblastos nãoneoplásicos (MRC5). M. amazonica e M. fenestrata também apresentam atividade moderada para Skmel 3. Quanto ao potencial antimicrobiano e bacteriostático, M. citrifolia, M. minutiflora, M. paivae e M. magnoliifolia apresentam atividade moderada a elevada frente a Staphylococcus aureus. M. fallax, M. sylvatica, M. paivae e C. spruceana apresentam atividade moderada frente a Staphylococcus aureus. Quanto a ação bacteriostática, todas as espécies ensaiadas apresentam atividade moderada a elevada frente a Pseudomonas aeroginosas. Em relação a atividade inseticida, M. citrifolia, M. bracteata, M. fenestrata, M. amazonica, M. paivae e C. spruceana são ativas, pois após 24 h o percentual de mortalidade das larvas de Aedes aegypti é de 100% em 25 mg.L-1 de óleo essencial. A aplicação de ferramentas quimiométricas nesse estudo possibilitou observar a segregação das amostras por grupos terpênicos majoritários e suas vias de ciclização mais influentes, cujas substâncias de maior relevância nesse modelo são: (E)-cariofileno, δ–cadineno e Espatulenol. Suas atividades farmacológicas descritas na literatura sugerem serem os responsáveis pelos resultados biológicos observados nesse trabalho. Contudo, novos ensaios biológicos com tais constituintes isolados talvez sejam necessários. Portanto, a respeito da química dos constituintes voláteis de Myrcia ocorrentes em Terra Firme (Amazônia), o presente estudo evidência quimiotipos amazônicos bem característicos e sem similaridade com outras espécies coletadas fora da região, o que nos leva a concluir o quanto ainda há a ser estudado a partir da preciosa biodiversidade amazônica.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-10-20T17:59:22Z No. of bitstreams: 2 Tese - Carolina Silva Ramos - 2015.pdf: 6414388 bytes, checksum: 297c88f1c0923c7c93393f866ba757b8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-23T10:09:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Carolina Silva Ramos - 2015.pdf: 6414388 bytes, checksum: 297c88f1c0923c7c93393f866ba757b8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T10:09:15Z (GMT). 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The study aimed to evaluate the healing process of skin wounds in rats treated with Coité (Crescentia cujete), and its bactericidal power. The second chapter, it tested the therapeutic potential of Coité in skin wounds in rats. To this end, we used 18 rats, female, 45 days old and 115 grams, on average. The animals were divided into three groups according to the proposed type of treatment (Coité alcoholic extract of 25% commercial neomycin healing ointment base to 5% and negative control saline - 0.9% NaCl). To carry out the wounded was instituted general anesthesia and skin excision in the dorsal cervical region with punch 0.6 cm. The animals of all groups were treated daily, every 12 hours until complete healing of the tissue. The results showed that the Coité extract contributed to the healing process evolved satisfactorily. In the third chapter, in addition to the healing potential, it evaluated the antibacterial power plant. The test animals included the assessment of the wounds the same way as described in chapter 2, with the difference that these lesions were contaminated with polymicrobial solution of fresh feces of rats own immediately after surgical skin removal. It was observed that the aqueous solution containing the ethanol extract of Coité to 25% helped the scar healing process with less complications and early centripetal contraction of the lesions when compared with the ointment neomycin and brine. To demonstrate the antibacterial effect of Coité, a study was conducted in vitro on Escherichia coli strains, Staphylococcus aureus, Streptococcus spp. and Enterobacter spp. by immunodiffusion in agar, with the construction of a hole for placing the liquid to be tested. The aqueous solution of Coité extract showed inhibitory activity (inhibition zone formation) in all the bacteria used. The protocol used is an effective alternative for treatment of skin lesions. / Os estudos das plantas medicinais estão se desenvolvendo cada vez mais no meio acadêmico como tratamento complementar para pessoas e animais, principalmente, devido ao aparecimento de bactérias multiresistentes aos antibióticos sintéticos. Dentre as plantas de grande uso popular encontra-se o coité, de nome científico Crescentia cujete. A Bignoniaceae, conhecida também como cabaça ou cuieira é uma espécie nativa da América tropical e pode ser facilmente encontrada no Brasil. É usada para combater a hipertensão, diabetes, problemas urinários, tosses e anemias, entre outros. Há relatos do uso popular do extrato do coité para o tratamento de feridas em humanos e animais, mas nenhuma comprovação científica deste uso encontra-se atualmente disponível. Diante do exposto, com o desenvolvimento deste estudo objetivou-se avaliar o processo cicatricial das feridas cutâneas em ratos, tratados com coité (Crescentia cujete), bem como o seu poder bactericida. No segundo capítulo, testou-se o potencial terapêutico do coité em feridas cutâneas de ratos. Para tal, foram utilizados 18 ratos, fêmeas, 45 dias de idade e 115 gramas, em média. Os animais foram separados em três grupos de acordo com o tipo de tratamento proposto (extrato alcoólico de coité a 25%, pomada cicatrizante comercial à base de neomicina a 5% e controle negativo com solução salina – NaCl 0,9%). Para a realização das feridas foi instituída anestesia geral e exérese cutânea na região cervical dorsal com Punch de 0,6 cm. Os animais de todos os grupos foram tratados diariamente, a cada 12 horas, até completa cicatrização do tecido. Os resultados apontaram que o extrato de coité contribuiu para que o processo de cicatrização evoluísse satisfatoriamente. No terceiro capítulo, além do potencial cicatrizante, foi avaliado o poder antibacteriano da planta. O teste nos animais compreendeu a avaliação das feridas da mesma forma como descrita do capítulo 2, com o diferencial que estas lesões foram contaminadas com solução polimicrobiana de fezes frescas dos próprios ratos, logo após a extirpação cutânea cirúrgica. Foi observado que a solução aquosa contendo extrato etanólico de coité a 25% auxiliou no processo de reparação cicatricial, com menores intercorrências e retração centrípeta precoce das lesões, quando comparados à pomada de neomicina e solução salina. Para comprovar o efeito antibacteriano do coité, foi realizado um estudo in vitro em cepas de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus spp. e Enterobacter spp., pelo método de difusão em ágar, com a construção de um orifício para a colocação do líquido a ser testado. A solução aquosa do extrato de coité demonstrou atividade inibitória (formação do halo de inibição) em todas as bactérias utilizadas. Concluiu-se que o protocolo utilizado é uma alternativa eficaz para o tratamento de lesões cutâneas, mesmo contaminadas.

Submitted by Neusa Fagundes (neusa.fagundes@unioeste.br) on 2018-07-12T19:16:44Z No. of bitstreams: 2 Roberta_Rodrigues2016.pdf: 550322 bytes, checksum: 270469fe680e8ab3e1299ebd0c7bcd19 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T19:16:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Roberta_Rodrigues2016.pdf: 550322 bytes, checksum: 270469fe680e8ab3e1299ebd0c7bcd19 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Adhesive technology has been developed quickly since its introduction about fifty years ago. Its goal is to produce a close contact within enamel and dentin. Failures in this process could result in microleakage, and allow the infiltration of bacteria, fluids and ions. Recent studies have been shown the use of chlorhexidine associated with adhesive systems can be able to inhibit the bacteria action. The aim of this study was to evaluate the addiction of different percentages of chlorhexidine to a self-etch adhesive. The solution of digluconate chlorhexidine was increased to the primer of the two pass self-etch adhesive to create a 0,5%, 1,0% and 2,0% chlorhexidine primer solution and after they were distributed in four groups (G1, G2, G3 and G4). Saliva samples (N=10) were used to test bacteria activity. They were spread in a blood medium with filter paper disks containing the different treatments. After the incubation, the inhibitions halos formation were evaluated. This study demonstrated that, in vitro, the addition of different percentages of chlorhexidine digluconate to the self-etch adhesive induced inhibited halos at bacteria of saliva samples, independent from their concentration. / A tecnologia adesiva vem se desenvolvendo rapidamente desde que foi introduzida há mais de 50 anos. Seu principal objetivo é alcançar um íntimo contato entre a estrutura dental e o material restaurador e fornecer adequada adesão entre o esmalte e a dentina. Falhas nesse processo adesivo podem resultar em microinfiltração marginal com passagem de bactérias, fluidos ou íons entre a parede cavitária e o material restaurador. Recentes estudos têm demonstrado que a utilização da clorexidina associada ao sistema adesivo pode ser capaz de inibir a ação das bactérias. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antibacteriano de um sistema adesivo auto-condicionante de dois passos associado a diferentes concentrações de solução de digluconato de clorexidina. A solução de digluconato de clorexidina a 20% foi adicionada ao primer do sistema adesivo nas concentrações de 0,5, 1,0 e 2,0% e distribuídas em quatro grupos (G1, G2, G3 e G4). Para o teste de atividade antibacteriana foram utilizadas amostras de saliva (N=10) semeadas em meio de ágar sangue e discos de papel filtro contendo os diferentes grupos. Após incubação, as amostras foram inspecionadas quanto à formação de halo de inibição dos microrganismos através da utilização do paquímetro digital de precisão(0,0001mm) (Mitutoyou Sul Americana Ltda/ Starret Tools®). Este trabalho demonstrou que, in vitro, a adição de diferentes concentrações de digluconato de clorexidina ao sistema adesivo produziu halo de inibição dos microrganismos presentes nas amostras de saliva, independente da concentração utilizada.