Submitted by ERIKA CHRISTINA LARA null (erikalarac@gmail.com) on 2017-07-19T19:23:08Z No. of bitstreams: 1 TESE - ERIKA CHRISTINA LARA.pdf: 2409729 bytes, checksum: e194e997676a12d24a5d5381ac74c7d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-07-19T19:33:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lara_ec_dr_jabo.pdf: 2409729 bytes, checksum: e194e997676a12d24a5d5381ac74c7d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-19T19:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lara_ec_dr_jabo.pdf: 2409729 bytes, checksum: e194e997676a12d24a5d5381ac74c7d5 (MD5) Previous issue date: 2017-05-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivou-se neste trabalho avaliar os efeitos de dietas contendo silagem inoculada com Lactobacillus plantarum e Bacillus subtilis e suplementadas ou não com amilase sobre a digestibilidade aparente, fermentação ruminal e síntese de proteína microbiana em carneiros, assim como o desempenho e qualidade de carne de cordeiros. Para tanto, dois estudos foram conduzidos, no quais os animais receberam um dos quatro tratamentos (dietas): 1) silagem de milho não inoculada sem adição de amilase na mistura total da ração (MTR); 2) silagem de milho não inoculada e amilase adicionada na MRT; 3) silagem de milho inoculada com 1 × 105 UFC de L. plantarum e 1 × 105 UFC de B. subtilis, sem adição de amilase; 4) silagem de milho inoculada com 1 × 105 UFC de L. plantarum e 1 × 105 UFC de B. subtilis e amilase adicionada na MRT. A enzima utilizada foi a amilase numa taxa de aplicação de 2 g de produto / kg de matéria seca (MS) da dieta (602 unidade dextrinizante (UD) / kg de MS da dieta). A suplementação com amilase em dietas contendo silagem não inoculada aumentou (P=0,045) o consumo de matéria seca dos carneiros quando comparados com aqueles alimentados com silagem não inoculada sem suplementação com amilase (1,311 vs. 1,066 g/d), mas não diferiu dos outros tratamentos. A digestibilidade aparente da MS, MO, PB, FDN e EB aumentou (P<0,01) nos carneiros alimentos com silagem inoculada ou suplementados com amilase, sem interações entre os tratamentos. Os animais alimentados com dietas contendo silagem não inoculada e suplementados com amilase apresentaram alta proporção de ácido propiônico e baixa de ácido acético, e consequentemente baixa relação de aceitoc:propiônico. A síntese de proteína microbiana tendeu a ser maior (P=0,097) nos carneiros alimentados com silagem não inoculada e suplementados com amilase e também nos que receberam dieta contendo silagem inoculada sem suplementação com amilase (8,01; 8,05 g/d, respectivamente). Entretanto, nenhum efeito foi verificado na eficiência de síntese de proteína microbiana. No segundo estudo, cordeiros alimentados com silagem inoculada apresentaram maior consumo de FDN (P=0,019) do que aqueles alimentados com silagem não inoculada (266,5 vs. 245,0 g/d). Cordeiros que receberam dieta contendo silagem inoculada apresentam maior ganho de peso diário (P=0,019) quando comparados àqueles alimentados com silagem de milho não inoculada (232,5 vs. 211,5). A inoculação da silagem aumentou (P<0,05) o conteúdo de ácidos graxos saturados (AGS) e diminuiu (P<0,05) o conteúdo de ácidos graxos insaturados (AGI) (47,55 vs. 46,21% e 52,44 vs. 53,79%, respectivamente), e consequentemente, diminuiu a relação UFA:SFA. A suplementação com amilase no momento da alimentação tendeu (P<0,10) a diminuir a relação AGPI:AGS (0,14 vs. 0,16). O uso de amilases em dietas contendo silagem de milho inoculada não resultou em respostas positivas na digestibilidade e síntese de proteína microbiana de carneiros, bem como não alterou as características de carcaça e qualidade de carne de cordeiros. O uso de dietas contendo silagem de milho inoculada com L. plantarum e B. subtilis e não suplementadas com amilase, aumentou o ganho de peso de cordeiros. / This trial aimed to evaluate the effects of diets containing corn silage inoculated with Lactobacillus plantarum and Bacillus subtilis and supplemented or not with amylase on the apparent digestibility, ruminal fermentation and microbial protein synthesis of wethers as well as, the growth performance and meat quality of lambs. For that, two studies were carried out and in both studies the animals received one of four treatments (diets): 1) Corn silage uninoculated and without amylase added to TMR; 2) Corn silage uninoculated and amylase added to TMR; 3) Corn silage inoculated with 1×105 CFU LP [MA 18/5U] and 1×105 CFU BS [AT553098] without amylase added to TMR; 4) Corn silage inoculated with 1×105 CFU LP [MA 18/5U] and 1×105 CFU BS [AT553098] and amylase added to TMR. The enzyme utilized was amylase at the rate of 2 g of the product / kg of dietary dry matter (DM) (602 dextrinizing unit (DU)/kg of dietary DM). Amylase supplementation on the diet containing uninoculated silage increased (P=0.045) dry matter (DM) intake of wethers compared with wethers fed uninoculated silage without amylase supplementation (1,311 vs. 1,066 g/d), but not differed from others treatments. The apparent digestibility of DM, OM, CP, NDF and GE increased (P<0.01) in wethers fed with inoculated silages or supplemented with amylase, without interaction among inoculants and amylase. Wethers fed diets containing uninoculated silage and supplemented with amylase showed higher propionic acid and lower acetic acid proportion, with low acetic:propionic acid ratio, consequently. Microbial N supply tended to be higher (P=0.097) in wethers fed uninoculated silage with amylase supplementation and inoculated silage without amylase (8.01; 8.05 g/d). However, no effect was verified on the efficiency of microbial N synthesis. In the second study, lambs fed inoculated silage had higher NDF intake (P=0.019) than lambs fed uninoculated silage (266.5 vs 245 g/d). Lambs fed inoculated silage had higher average daily gain (P=0.019) when compared with lambs fed uninoculated silages (232.5 vs. 211.5). The inoculation of silage increased (P<0.05) the content of saturated fatty acid (SFA) and decreased (P<0.05) the unsaturated fatty acid (UFA) (47.55 vs. 46.21% and 52.44 vs. 53.79%, respectively) and consequently decreased the UFA:SFA ratio. The amylase supplementation at moment of feeding trended (P<0.10) to decrease the values of PUFA:SFA ratio (0.14 vs. 0.16). The association of amylase in diets containing inoculated silage did not provided positive responses on the digestibility and microbial N supply of wethers and did not alter the carcass and meat quality of lambs. Inoculation of silage with L. plantarum and B. subtilis improved the average daily gain of lambs when was not associated with amylase supplementation. / CNPq: 141008/2014-8

O polissacarídeo capsular (PS) é o principal fator de virulência do S. pneumoniae e é a base para sua classificação em sorotipos. O objetivo deste trabalho foi estudar o metabolismo de S. pneumoniae sorotipo 14 em cultivo contínuo e, para tanto, foi desenvolvido um ELISA de captura para quantificação do PS produzido (PS14) e a melhor cepa produtora foi escolhida. Em cultivos descontínuos em biorreator foram observados rendimentos semelhantes para crescimento e PS14 entre meio complexo e meio quimicamente definido. No entanto, diferenças no requerimento de vitaminas foram verificadas entre cultivos em frasco e biorreator, relacionadas à disponibilidade de O2. Em cultivos contínuos observou-se que: a produção de PS14 foi associada ao crescimento celular, a glicose foi o substrato com maior impacto sobre a produção de PS14 e os fatores de conversão sobre glicose e biomassa foram maiores sob limitação de glicose/colina/glutamina; o que permite concluir que estratégias de produção de PS14 devem focar na alta densidade celular e na condição de limitação de nutrientes. / The capsular polysaccharide (PS) is the most important virulence factor of S. pneumoniae and is also the basis for its classification in serotypes. This study aimed to evaluate the metabolism of S. pneumoniae serotype 14 in continuous cultivation. In order to do this, a Sandwich ELISA was developed to quantify the PS (PS14) produced and the best producer strain was selected. Similar growth and PS14 yields were observed in batch cultures conducted with complex and chemically defined media. Differences in vitamin requirements were verified in flask and batch cultivation, associated to O2 availability. In continuous cultivation, the PS14 production was associated to cell growth, the glucose was the substrate with more impact on PS14 production and in limitation of glucose/choline/glutamine the yield factors per glucose consumed and per biomass produced increased. These results showed that to improve PS14 production is necessary to adopt strategies that focuses in high cell density in addition to conditions of substrate limitation.

Submitted by Alisson Mota (alisson.davidbeckam@gmail.com) on 2015-07-22T18:33:12Z No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:23:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-23T14:26:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-23T14:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Arlena Maria Guimarães Gato.pdf: 2067444 bytes, checksum: a858fc3c2c47508ee175666940ad0251 (MD5) Previous issue date: 2009-12-10 / SUFRAMA - Superintendência da Zona Franca de Manaus / The flowers and ornamental plants cultivation stands out as an important agronomical activity. But despite the economical and market potential of these regional native species: helicônia, bastão, sorvetão and other plants, is necessary more basic studies about the use of advanced techniques in getting propagated material with quality assurance and good phytosanitary aspect. The objective of this study was to obtain plantlets from floral apices of Heliconia rauliniana and embryos rescue of H. marginata, identifies, inoculation of bacterial isolates and evaluate the effect of these microorganisms in the development of micropropagated plants. Established the plants micropropagation process, it was isolated from matrices root, bacterial isolates and, according to the classification criteria of activity levels of nitrogen biological fixation, phosphate solubilisation and auxin production, it was selected six Heliconia rauliniana isolates and eight of Heliconia marginata. The first experiment were inoculated in in vitro plants of H. rauliniana, the B4, B5, B8, B13, B16 and B18 bacterial isolates and on H. marginata micropropagated plants, the B1, B2, B4, B6, B7, B10, B12, B14 and B16 isolates and, then transferred to plastic boxes containing sterilized substrate Plantmax (Horticulture) and maintained under greenhouse. After 60 days of inoculation, it was realized the evaluation of root growth promotion, selecting the three isolates that showed the best results: B18, B5 and B13 (H. rauliniana) and B7, B6 and B10 (H. marginata). In the second experiment we used the B18, B5, B13 and B6, B7, B10 selected in the first experiment and inoculated in 60 plants, distributed on five treatments: control, B18, B5 and B13, cocktail x plant and control, B6, B7, B10, cocktail x plant with 12 plants per treatment. The results presented after 60 days, don’t were significant on the level of 0.05% and one good faith coefficient of 95% (ANOVA) for root growth promotion, number of leaves, plant height, fresh weight and dry weight. The plants survive was 83.3%. For microorganisms identify, it was used the analysis of the fragment about 800 bp of the 16S rDNA (Primer 27f). The sequencial analysis via Blast showed three bacterial groups: Burkholderia, Ralstonia e Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia). / O cultivo de flores e plantas ornamentais tropicais destaca-se como importante atividade agrícola. Mas, apesar das potencialidades econômicas e de mercado dessas espécies nativas da região: helicônia, bastão, sorvetão e outras, são necessários mais estudos básicos sobre a utilização de técnicas avançadas na obtenção de material de propagação com garantia de qualidade e bom aspecto fitossanitário. O objetivo deste trabalho foi obter mudas micropropagadas a partir de ápice floral de Heliconia rauliniana e de resgates de embriões de H. marginata, identificação, inoculação dos isolados de bactérias e avaliar o efeito desses microrganismos no desenvolvimento das plantas micropropagadas. Estabelecido o processo de micropropagação das plantas foram isolados das raízes das matrizes, isolados bacterianos e, de acordo com os critérios de classificação dos níveis de atividades em fixação biológica de nitrogênio, solubilização de fosfato e produção de auxina, foram selecionados seis isolados da Heliconia rauliniana e oito da Heliconia marginata. No primeiro experimento, foram inoculados nas plantas micropropagadas de H. rauliniana, os isolados bacterianos B4; B5 (Enterobacter); B8; B13 (Ralstonia); B16; B18 (Enterobacter) e nas plantas micropropagadas de H. marginata, os isolados B1; B2; B4; B6 (Enterobacter); B7 (Enterobacter); B10 (Burkholderia); B12; B14 e; B16 e, posteriormente transferidas para caixas plásticas contendo substrato esterilizado PlantMax (Horticultura) e mantidas em casa de vegetação. Após 60 dias de inoculação foi realizada a avaliação de promoção de crescimento de raiz, selecionando-se os três isolados que apresentaram os melhores resultados por espécie: Heliconia rauliniana, Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B18 e B5 Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia e B13 (Ralstonia) e Heliconia marginata B7 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B6 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia) e B10 Burkholderia. No segundo experimento foram utilizados os isolados bacterianos B18 Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia): B5 Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia, B13 Ralstonia e B6, Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B7, Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B10, Burkholdeia selecionados no primeiro experimento e inoculados em 60 plantas, distribuídas em cinco tratamentos: controle, B18 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia: B5 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia e B13 Ralstonia, coquetel x planta e controle, B6 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B7 Entereobacteriaceae (Pantoea/Erwinia), B10 (Burkholderia), coquetel x planta com 12 plantas por tratamento. Os resultados apresentados após 60 dias, não foram significativos a nível de 0,05 % e um coeficiente de confiança de 95 % (A NOVA) para promoção de crescimento de raiz, número de folhas, altura de planta, peso fresco e peso seco. A sobrevivência das plantas foi de 83,3 %. Para identificação dos microrganismos foi usado o seqüenciamento de fragmento de aproximadamente 800 pb do gene 16S rDNA (“primer 27f). A análise das sequencias via Blast mostrou três grupos de bactéria: Burkholderia, Ralstonia e Enterobacteriaceae (Pantoea/Erwinia).

Porphyromonas gingivalis é um dos principais organismos associados à periodontite crônica e apresenta intensa diversidade, que poderia refletir em sua virulência. A maioria dos estudos sobre a virulência de P. gingivalis foi realizada com cepas de referência, e pouco se conhece sobre este aspecto em isolados clínicos. A capacidade de indução de abscessos difusos em modelos animais experimentais parece estar associada a cepas capsuladas, enquanto a expressão de fímbrias e a capacidade de internalização em células epiteliais não fagocíticas, foram relacionadas à cepa não capsulada. Em P. gingivalis, o lócus de biossíntese do polissacarídeo capsular (BPC) apresenta características de ter sido adquirido por transferência horizontal de genes. O objetivo do presente estudo foi testar a hipótese de que a estrutura populacional de P. gingivalis relaciona-se com a variabilidade do lócus BPC e características fenotípicas como produção de cápsula e hidrofobicidade. Foram analisadas 28 cepas de P. gingivalis pertencentes aos 5 genótipos fimA quanto a, presença da cápsula por microscopia óptica, hidrofobicidade e detecção de genes do lócus BPC por PCR. A análise filogenética foi realizada por tipagem através de seqüenciamento de genes housekeeping (multilocus sequence typing, MLST). Dezesseis entre 28 amostras estudadas apresentaram cápsula, e não foram detectadas diferenças na hidrofobicidade dos isolados clínicos capsulados e não capsulados. O gene pg0106 foi detectado por PCR em 78% das amostras capsuladas e em 80% das amostras não capsuladas, enquanto pg0111 foi detectado em apenas 25% de amostras capsuladas. Apenas um isolado clínico e a amostra padrão W83 foram classificados como K1, por apresentarem o gene pg0118. Através do MLST foi possível identificar grande variabilidade entre as amostras de P.gingivalis. Foi observada relação entre STs e o tipo fimA ou hidrofobicidade, mas nenhum cluster foi associado à presença da cápsula ou aos genes do lócus de biossíntese do polissacarídeo capsular. Os dados indicam associação entre o lócus BPC e produção de cápsula, porém a diversidade deste lócus parece ser maior do que a relatada na literatura. O lócus BPC e a produção de cápsula não se relacionam com a origem filogenética da cepa, indicando a intensa recombinação que ocorre em P. gingivalis. / Porphyromonas gingivalis is one of main organisms associated with chronic periodontitis and is largely diverse, which could reflect in its virulence. Most studies on the virulence of P.gingivalis were performed with reference strains, and little is known about this aspect in clinical isolates. The ability to induce diffuse abscesses in experimental animal models seems to be associated with encapsulated strains, while expression of fimbriae and the ability to internalize into non phagocytic epithelial cells were related to noncapsulated strains. In P.gingivalis, the locus of biosynthesis of the capsular polysaccharide (GP) has characteristics of having been acquired by horizontal gene transfer. This study aimed to test the hypothesis that the structure population of P.gingivalis is related to the variability of the GPC locus and phenotypic characteristics such as capsule production and hydrophobicity. 28 P.gingivalis isolates representing fimA genotypes were screened for presence of capsule by light microscopy, hydrophobic properties and detection of genes in the GPC locus by PCR. The phylogenetic analysis was performed by sequencing of housekeeping genes typing (multilocus sequence typing, MLST). Sixteen of 28 studied samples had capsule, and there were no differences in the hydrophobic properties of capsulated and non capsulated clinical isolates. The pg0106 gene was detected by PCR in 78% of capsulated isolates and in 80% of not capsulated while pg011 was detected in only 25% of encapsulated isolates. One clinical isolate and reference strain W83 were classified as K1, due to the presence of pg0118 gene. MLST detected large variations within the P.gingivalis population. MLST clustering analysis revealed a relation between sequence type (STs) and fimA genotype or hydrophobic property, but there was no association of STs with the presence of capsule or the genes encoding for the biosynthesis of capsular polysaccharide. The data indicated an association between GPC locus and capsule production but the diversity of this locus appeared to be greater than that reported in the literature. The GPC locus and capsule production were not related to the phylogenetic origin of the strain, indicating intense recombination in P. gingivalis.

Os microrganismos constituem dois terços da diversidade biológica na Terra, no entanto, muitos deles não podem ser cultivados por técnicas tradicionais. Portanto, o acesso a esta diversidade tem sido feita através da utilização de técnicas independentes de cultivo. Diante deste panorama, a metagenômica apresenta-se como uma alternativa, pois dispensa a necessidade de cultivo. Tal técnica possibilita inclusive a identificação e utilização do potencial metabólico destes organismos para o desenvolvimento de novos processos e produtos. Os polihidroxialcanoatos (PHAs) são poliésteres bacterianos, acumulados intracelularmente em forma de grânulos, cujas propriedades são similares a de alguns plásticos de origem petroquímica. O objetivo deste trabalho foi identificar e avaliar a diversidade de genes relacionados à produção de PHAs em bibliotecas metagenômicas de solo. A prospecção realizada resultou na identificação de clones contendo o gene phaC. De uma forma geral, pôde-se concluir que ainda há uma grande diversidade deste gene a ser descoberta no ambiente estudado. / Microorganisms constitute two third of the Earth\'s biological diversity, however, many of them cannot be cultured by standard techniques. Therefore, access to this diversity has been achieved through the use of culture-independent techniques. Facing this scenario, the metagenomic presents itself as an alternative, since it eliminates the need for cultivation. This technique also allows the identification and use of the metabolic pathways of these organisms to develop new processes and products. The polyhydroxyalkanoates (PHAs) are bacterial polyesters accumulated as granules, whose properties are similar to some plastics of petrochemical origin. The aim of this work was to identify and access the diversity of genes related to PHAs production in soil metagenomic libraries. The screening resulted in the identification of clones containing the phaC gene. In a general way, it was concluded that there is still a considerable diversity of this gene to be discovered in the study environment.

A transmissão de parasitas da malária por mosquitos vetores é dependente do desenvolvimento bem sucedido das formas infectantes de Plasmodium sp., especialmente os esporozoítas, que são as formas que infectam o hospedeiro vertebrado. A manipulação genética de mosquitos vetores tem sido uma estratégia alternativa na tentativa de controle da malária. Um componente extremamente importante desta estratégia é a escolha de uma molécula efetora capaz de reduzir a transmissão do patógeno. Microplusina é um peptídeo antimicrobiano rico em cisteína, originalmente descrito como um componente antimicrobiano da hemolinfa e dos ovos de carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Testes anteriores utilizando o modelo experimental mosquito Aedes aegypti infectado por Plasmodium gallinaceum mostraram que a microplusina é altamente tóxico para esporozoítas de Plasmodium gallinaceum em concentração relativamente baixa, sem apresentar toxicidade aos mosquitos vetores Aedes aegypti. Nosso objetivo foi analisar a expressão da microplusina e seu efeito na infecção de P. gallinaceum em mosquitos transgênicos. Obtivemos quatro linhagens através da integração de um transgene contendo a região promotora do gene da vitelogenina de Ae. aegypti, peptídeo sinal maltase-like I de Ae. aegypti e a sequência codificadora da microplusina (PMOS [3xP3-EGFP-AeVg Micro]). A atividade anti esporozoítas da microplusina expressa pelos mosquitos transgênicos mostrou diferença significante as linhagens. O desenho de novas moléculas utilizando como molde moléculas efetoras existentes e testadas, possibilitará o aperfeiçoamento da expressão de genes exógenos em mosquitos transgênicos, tornando-os refratários ao parasita. / Transmission of malaria parasites by mosquito vectors is dependent on the successful development of Plasmodium sp. infective forms, particularly the sporozoites, which are the forms that enter the vertebrate host. The genetic manipulation of mosquito vectors has been a strategy for malaria control. An extremely important component of this strategy is the effector molecule of choice which reduces parasite transmission. Microplusin is a cysteine-rich antimicrobial peptide originally described as an hemolymph and eggs antimicrobial component of the cattle tick Boophilus microplus. Previous tests using the experimental model Plasmodium gallinaceum infected Aedes aegypti showed that microplusin is highly toxic to P. gallinaceum sporozoites in relatively low concentration, without showing toxicity to the mosquito vector A. aegypti. Our goal was to analyze transgenic mosquitoes expressing microplusin and its effect on infection of P. gallinaceum. We obtained four lines through the integration of transgene that containing the promoter region of the A. aegypti vitelogenin gene, the maltase-like I signal peptide of A. aegypti and microplusin coding sequence (pMos[3xP3-EGFPAeVg-Micro]). The activity anti sporozoites microplusin expressed by transgenic mosquitoes showed significant differences between strains. The design of effector molecules using information from existing and tested molecules as template will enable the improvement of the expression of foreign genes in transgenic mosquitoes, making them resistant to the parasite.

Haemophilus influenzae tipo b (Hib) é uma patógeno causador de doenças como meningite. O polissacarídeo capsular (PRP) é usado como antígeno vacinal. O alto custo da vacina provém da instabilidade do PRP. Este trabalho tem por finalidade otimizar o processo de produção do PRP. Primeiro, foi escolhido um modelo matemático para a descrição da cinética de Hib. Em seguida, foi realizado um desenho experimental para avaliar os efeitos de pH e temperatura sobre a cinética. Tanto a produtividade de PRP quanto sua massa molecular foram máximas em pH 7,1, porém em temperaturas mais altas a produtividade foi maior e a massa molecular menor. As condições otimizadas foram definidas como pH 7,1 e 30 °C. Nestas condições, a massa molecular foi cerca de 78 % maior que nas condições da literatura de 37°C e pH 7,5, com uma produção de PRP equivalente. Isto resultou em maior recuperação na primeira etapa de purificação, comprovando que a condição de cultivo otimizada pode contribuir em melhores rendimentos durante o processo e assim impactar na redução do custo final da vacina. / Haemophilus influenzae type b (Hib) is a pathogen responsible for deseases like meningitis. The capsular polysaccharide (PRP) is used as antigen in vaccines. The high cost of the vaccine is due to instability of PRP. The goal of this work is to optimize the production of PRP. First, a mathematical model was selected to describe Hib kinetics. Then, an experimental design was carried out to evaluate the effects of pH and temperature. Both PRP productivity and molecular mass were optimal in pH 7.1, but at higher temperature productivity increased and molecular mass decreased. The optimal conditions were set at pH 7.1 and 30 °C. In these conditions, the molecular mass was 78 % higher, with the same amount of PRP produced. This resulted in higher recovery at the first step of purification, ensuring that the improved conditions may contribute with processes efficiency and enable reduction of the final cost of the vaccine.

A persistência bacteriana correlacionada à formação de biofilmes bacterianos é, há algum tempo, fonte de grande preocupação médica em virtude de sua ampla associação com a dificuldade de tratamento de infecções crônicas. Por outro lado, as perspectivas de utilização de biofilmes bacterianos em novas aplicações biotecnológicas e até mesmo para fins terapêuticos são promissoras. Há, portanto, grande interesse em compreender os mecanismos que levam as células bacterianas a deixar o estado planctônico, de vida livre, e associarem-se nesses conglomerados celulares altamente complexos. Ao longo das últimas décadas, o segundo mensageiro c-di-GMP &ndash; em conjunto com as moléculas que catalisam sua síntese (diguanilato ciclases) e sua degradação (fosfodiesterases) e seus receptores &ndash; estabeleceu-se como um elemento central de regulação de uma série de respostas celulares que determinam a formação ou a dispersão de biofilmes. Curiosamente, as proteínas que participam do metabolismo deste segundo mensageiro estão, frequentemente, codificadas múltiplas vezes em um mesmo genoma bacteriano. Em vista dessa observação, estudos mais recentes apontam que, para reger paralelamente uma variedade tão ampla de fenótipos, este sistema opera em modo de alta especificidade de sinalização e que, portanto, o sinal metabolizado por determinados conjuntos de diguanilato ciclases e fosfodiesterases tem alvos celulares específicos. Evidências robustas, porém isoladas até o momento, apontaram que um dos meios pelo qual ocorre a segregação entre sinal produzido e alvo específico é a interação direta entre as proteínas componentes das vias de sinalização. Mais, demonstrou-se que, em algumas vias, a transmissão de sinal ocorre exclusivamente via interação proteica, dispensando a intermediação do sinalizador em si. Para avaliar a validade e relevância global deste mecanismo, propôs-se, neste estudo, a investigação da rede total de interações entre as proteínas tipicamente associadas às vias de sinalização por c-di-GMP em Pseudomonas aeruginosa, utilizando ensaios de duplo-hibrido bacteriano. Para tanto, foram construídas duas bibliotecas de DNA direcionadas e foram feitos testes de interação de forma estratégica para possibilitar o esgotamento e averiguação de todas as possíveis interações entre as proteínas alvo identificadas. O resultado obtido, um mapa inicial, porém abrangente, da rede de interações proteicas em P. aeruginosa, indica uma grande probabilidade de que os mecanismos previamente descritos sejam realmente recorrentes e relevantes para o intermédio da sinalização nesse organismo. Algumas das interações mais robustas encontradas são bastante interessantes e serão, em estudos futuros, mais extensivamente estudadas. / Persister bacteria are correlated to biofilm formation and have been a source of great medical concern due to its close association with the impairment of traditional treatment in combating chronic infections. On the other hand, using bacterial biofilms to create original biotechnological applications or even as a means of therapeutic treatment in medical settings constitutes a promising prospect. There is, therefore, a great interest in understanding the mechanisms that allow bacteria to leave the free-living planktonic lifestyle and associate in these highly complex cellular aggregates. Over the last decades, the second messenger c-di-GMP &ndash; and also the molecules involved in its synthesis (diguanylate ciclases) and degradation (phosphodiesterases) along with its receptors &ndash; has been established as a key element implicated in regulation of a series of cellular responses that determine biofilm formation or dispersion. Curiously, the proteins that play a part in the metabolism of this second messenger are frequently coded multiple times in single bacterial genomes. Taking this into account, recent studies indicate that, in order to control such a wide range of phenotypes, this system operates via high specificity of signaling &ndash; which means that the signal metabolized by a certain set of diguanylate ciclases and phosphodiesterases has specific cellular targets. Robust but yet isolated evidence indicate that a means by which a signal is segregated with its correlated phenotypic response is through direct protein-protein interaction involving the components of these signaling pathways. Even more, there has been strikingly evidence that, in some of these pathways, signal transduction occurs exclusively through protein-protein interaction, entirely dismissing any mediation by the signal molecule. In order to validate and evaluate the global relevance of this type of mechanism, this study proposed the investigation of the entire network of interactions between proteins typically associated with c-di-GMP signaling pathways of Pseudomonas aeruginosa by employing bacterial two-hybrid system assays. To make that possible, two DNA libraries were constructed and interaction essays were performed in a strategic way so that all possibilities of interaction between target proteins were explored. The results obtained from these experiments allowed the construction of a broad map of interactions that, although still primitive, indicates that, chances are, the mechanisms previously described are both recurrent and relevant to signaling regulation in this organism. Some of the interaction partners found are particularly interesting and will be further investigated in future studies.

Com este estudo, objetivou-se avaliar o efeito de estirpes de Bacillus thuringiensis (Bt) na degradabilidade e digestibilidade da dieta, emissão de gases, microbiota ruminal, parâmetros sanguíneos e desempenho de ovinos. O estudo foi dividido em 2 experimentos: ensaio in vitro de produção de gases para a avaliação de 6 diferentes estirpes de Bt (907, 1192, 2036, 2493, 2496 e S1185) e ensaio in vivo com a estirpe selecionada 2036 para investigação de possíveis interferências na digestão e saúde dos animais. A simulação do ambiente ruminal foi realizada em garrafas de vidro incubadas a 39 oC por 24 h. O delineamento foi o inteiramente casualizado com 7 tratamentos (Sem Bt (controle), Bt 907, Bt 1192, Bt 2036, Bt 2493, Bt 2496 e Bt S1185) com 4 repetições em duplicata. O processo fermentativo foi avaliado pelos resultados de matéria seca degradada (MSD), matéria orgânica degradada (MOD), produção líquida de gases totais, produção líquida de metano e eficiência da conversão de metano. Produtos da fermentação (pH, nitrogênio amoniacal (N-NH3) e ácidos graxos de cadeia curta (AGCC)) e micro-organismos ruminais (Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, fungos anaeróbicos, arqueas metanogênicas e protozoários) também foram estudados. Apenas a estirpe Bt 907 reduziu a MSD e MOD em relação ao controle, com manutenção da população de F. succinogenes, pois as demais estirpes reduziram a população desta bactéria. No ensaio in vivo 20 cordeiros Santa Inês com 3 meses de idade e 18 ± 3,5 kg PV foram utilizados e divididos em 2 grupos: 10 animais tratados com 2,5x106 esporos de Bt 2036 por kg PV/d e 10 animais não tratados (controle). Estes foram alojados em baias individuais em delineamento inteiramente casualizado e receberam dieta composta de feno de capim Tifton-85 (Cynodon spp.) ad libitum e 300 g/animal/d de concentrado, que foi ajustado de acordo com as exigências de crescimento. O período experimental in vivo teve duração de 63 dias, dos quais 53 compreendeu o teste de desempenho dos animais, com aferição do consumo 3 vezes na semana e pesagem quinzenal, e os 10 dias subsequentes destinou-se aos ensaios de digestibilidade aparente, balanço de nitrogênio, síntese de proteína microbiana e emissão de metano entérico. Durante todo o experimento, coletas se sangue foram realizadas quinzenalmente a fim de avaliar os parâmetros hematológicos (hemácias, hemoglobina, hematócrito e leucócitos) e bioquímicos (glicose, proteínas totais, albumina, aspartato aminotransferase, ureia e creatinina) dos animais para o diagnóstico de possível intoxicação. Características da fermentação ruminal também foram investigadas em 3 momentos (início, meio e fim do experimento) sobre as variáveis pH, N-NH3, AGCC, abundância relativa das espécies F. succinogenes, R. flavefaciens, populações de arqueas metanogênicas, fungos anaeróbicos e contagem de protozoários, por meio de coletas de líquido ruminal. Não houve influência da estirpe sobre as variáveis estudadas. Conclui-se que na avaliação in vitro apenas a estirpe Bt 907 reduziu a MSD e MOD com manutenção da população F. succinogenes e no experimento in vivo a inclusão de esporos de Bt 2036 na dieta não afetou de forma negativa o desempenho e nem a saúde dos ovinos / The objective of present study was to evaluate the effect of Bacillus thuringiensis (Bt) strains on degradability and digestibility of the diet, gas production, ruminal fermentation, blood parameters and performance in sheep. The study was divided into 2 experiments: in vitro gas production to evaluate six different Bt strains (907, 1192, 2036, 2493, 2496 and S1185) and in vivo assay with the selected strain (Bt 2036) to investigate possible interference in digestion and health of animals. The rumen simulation was performed in glass bottles incubated at 39 °C for 24 h. A completely randomized design with 7 treatments (No Bt (control), Bt 907, Bt 1192, Bt 2036, Bt 2493, Bt 2496 and Bt S1185) was used, with 4 replications in duplicate. The fermentation process was evaluated using dry matter degradability (DMD), organic matter degradability (OMD), net gas production, methane output and conversion efficiency. Fermentation products (pH, ammonia nitrogen (N-NH3), short chain fatty acids (SCFA)) and ruminal microorganisms (Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus flavefaciens, anaerobic fungi, methanogenic archaea and protozoa) were also studied. Only strain Bt 907 reduced DMD and OMD in relation to the control and F. succinogenes populations were maintained, whereas other strains of this bacterium population were reduced. An in vivo assay using 20 Santa Ines lambs at 3 months of age and 18 ± 3.5 kg BW was carried out. These animals were divided into 2 groups: 10 animals treated with 2.5x106 spores of Bt 2036 per kg BW/d and 10 untreated animals (control). These were housed in individual pens in a completely randomized design and were fed a diet of Tifton-85 (Cynodon spp.) hay ad libitum and 300 g/animal/d of concentrate, which was adjusted according to animal growth. The in vivo experimental period lasted 63 days, of which 53 included the performance test of the animals, with measurement of feed consumption three times a week and fortnightly weighing. The final 10 days was devoted to tests of digestibility, nitrogen balance, microbial protein synthesis and enteric methane emission. Throughout the experiment, blood was collected fortnightly to assess hematological parameters (erythrocytes, hemoglobin, packed cell volume and leukocytes) and biochemical profiles such as (Glucose, total protein, albumin, aspartate aminotransferase, urea and creatinine) for the diagnosis of possible intoxication. Ruminal fermentation characteristics were investigated at three times (Initial, middle and end of the experiment) using pH, N-NH3, SCFA, microorganism population size (such as F. succinogenes, R. flavefaciens, methanogenic archaea, anaerobic fungi and protozoa) through ruminal fluid collections. There was no influence of Bt 2036 on ruminal fermentation characteristics. It is concluded that, for the in vitro evaluation, only strain Bt 907 reduced DMD and OMD, with F. succinogenes population being maintained and for the in vivo studies, the inclusion of Bt 2036 spores in the diet did not negatively affect health and performance of lambs

O suco de laranja possui características que dificultariam ou mesmo impediriam o crescimento de microrganismos, mesmo assim já foram isolados fungos filamentosos, leveduras, bem como bactérias lácticas e termorresistentes. Dentre as bactérias termorresistentes e deteriorantes está a Alicyclobacillus acidoterrestris que tem causado prejuízos no setor de suco de laranja concentrado e congelado. Esta bactéria está apta a crescer em temperaturas abaixo de 35°C, constituindo um risco aos sucos de laranja que estejam contaminados. Mesmo os que já passaram por tratamento térmico, se forem estocados em local sem refrigeração, podem sofrer deterioração. Como os métodos tradicionais de descontaminação e conservação não têm se mostrado eficientes na inviabilização dessa bactéria, outras formas de esterilização tornam-se necessárias, dentre elas destacam-se as radiações gama e ultra-sônica. A radiação gama é capaz de esterilizar alimentos e reduzir as cargas microbiológicas, permitindo assim ampliar o período de armazenamento. A aplicação de ultra-som tem sido utilizada atualmente com o objetivo de controle microbiológico, sendo essa técnica eficiente por causar a destruição das células microbianas. Sendo o Brasil o maior produtor e exportador de suco de laranja concentrado congelado, no presente trabalho foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de determinar a resistência da bactéria A. acidoterrestris às radiações gama e ultra-sônica, em suco de laranja previamente contaminado. As amostras de suco de laranja foram diluídas a 11,5 °Brix e inoculadas com uma suspensão bacteriana, passando pelos processos de radiação gama com as doses de 0, 2; 4; 6 e 8, kGy e ultra-sônica com as freqüências de 25, 35 e 42 kHz e com os tempos de exposição de 0, 1, 5, 10 e 20 minutos. Após o tratamento, as amostras foram armazenadas em temperatura ambiente (25±2°C) e de refrigeração (4±1°C). Para as análises microbiológicas as amostras foram diluídas em escala decimal, plaqueadas pela técnica de \"pour plate\". As placas de Petri permaneceram em estufa a46±2°C, por 48 horas, após esse período procedeu-se a contagem das UFC mL-1. A qualidade microbiológica do suco foi avaliada em determinados períodos de armazenamento (1, 10, 20, 30 e 40 dias). Através de análise de variância dos experimentos conduzidos com as radiações, observou-se que houve efeito significativo (p<0,05) com relação à dose de radiação gama que apresentou uma redução da carga microbiana com o aumento da dose de radiação e à interação do período com a temperatura de armazenamento demonstrou que houve uma oscilação na contagem total para a temperatura ambiente, mas para a temperatura de refrigeração uma diminuição gradativa com o aumento do período de armazenamento, A freqüência do ultra-som mostrou uma diminuição da contagem microbiana com o aumento da freqüência e o período de armazenamento apresentou a maior contagem no primeiro dia. Os dois tratamentos mostraram-se eficientes na redução bacteriana, mas não na completa eliminação da A. acidoterrestris. / The orange juice has attributes could make that hard or even block the growth. of microorganisms, even so already have been isolated filamentous fungi, yeast, as well lactics and heat resistant bacteria. Alicyclobacillus acidoterrestris is a heat resistant bacteria that has done damage in the orange juice concentrated and frozen business. This bacterium is able the grown in temperatures below 35°C constituting a risk to orange juices that have been contaminated. Even those that already pass trough thermal treatment may deteriorated, if they are storage in place without refrigeration. As the traditional methods of decontamination and conservation have not been effective in inviabilizated this bacterium, others methods of sterilization are need, among them are gamma and ultrasound radiation. The gamma radiation is able to sterilize foods and reduce the microbiology density, allowing in this way to enhance the period of storage. The ultrasound application has been used currently with the aim to microbiology control, been this technique effective in the microbial cell destruction. The Brazil, are the major producer and exporter of concentrated frozen orange juice, due to it, the present work was carried out to two experiments with the aim to determinate the resistance of the bacterium Alicyclobacillus acidoterrestris to gamma and ultrasound irradiation, in the orange juice, priory contaminated. The orange juice samples was diluted to 11,5°Brix and the bacteria suspensions was added, passed by process of radiation gamma with dose of 0, 2, 4, 6 and 8 kGy and ultrasonic with the frequency of 25, 35 and 42 kHz and with the time of exposition of 0, 1, 5, 10 and 20 minutes. After the treatment, the samples were storaged in room temperature (25±2°C) and of refrigeration (4±1°C). For the microbial analyses, the samples were diluted in to decimal scale, plated by \"pour plate\" technique. The Petri plates were storage in warn temperature (46±2°C) by 48 hours, after it the UFC was counted mL. The microbiological quality of the juice was evaluated in determinated period of storaged (1, 10, 20, 30 e 40 days). By statistical of variance of the experiment conducted with the radiations, it was noted that has been significant effect (p>0,05) to gamma radiation doses where occurred microbial density reduction with the raised of radiation doses and the interaction of the period with the storage temperature, where at room temperature occurred a oscillation in the total counting of bacteria, but for refrigeration temperature the total counting of bacteria reduced with the raised of storage period. The ultrasound frequency showed also reduction to the microbial counting with the raised of the ultrasound frequency and the period of storage showed the highest bacteria counting in the first day. Both treatment, were effective to promote bacteria reduction, but not completed elimination of A. acidoterrestris.