Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-15T18:36:01Z No. of bitstreams: 1 Ricardo_Santana_de_Lima. Terapia celular...2010.pdf: 69430954 bytes, checksum: d322253f7a80d357ac3895e784330a2e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-15T18:36:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo_Santana_de_Lima. Terapia celular...2010.pdf: 69430954 bytes, checksum: d322253f7a80d357ac3895e784330a2e (MD5) Previous issue date: 2010 / Universidade Federal da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A cardiomiopatia chagásica crõnica é uma das principais causas de insuficiência cardiaca nos palses latino-americanos. Cerca de 30% dos indivlduos intectados pelo Trypanosoma cruzi desenvolvem essa forma grave e sintomática da doença, caracterizada pela presença de uma resposta inflamatória intensa seguida de fibrose no coração. Foi demonstrado previamente que o transplante de céluias da medula óssea (BMC) melhora a inflamação e a fibrose em corações de camundongos chagásicos crônicos. Neste trabalho nós investigamos alteraçôes da expressão gênica no coração de camundongos chagásicos crônicos submetidos ou não à terapia BMC. Camundongos C57Bl/6 cronicamente infectados com T. cruzi (6 meses) foram transplantados com céluias mononucleares da medula Óssea (BMC) ou solução salina intravenosamente (I.v.) e sacrificados após 2 meses. RNA foi extraido de coraçôes de animais controles normais e chagásicos. Análise de microarranjos de DNA foi realizada utilizando uma matriz de 27.400 cDNAs. imunofluorescéncia e análises morfométricas foram realizadas em secções dos corações. Foram encontradas aiterações significativas na expressão de -12% dos genes amostrados. Genes com expressão aumentada nos corações chagásicos foram associados com as respostas imune-inflamatória (quimiocinas, moléculas de adesão, catepsinas e molécuias de MHC) e fibrose (componentes da matriz extracelular, lisli oxidase e Timp1). Quando corações chagásicos de animais tratados com BMC foram comparados Com o de animais normais, cerca de 90% das alterações gênicas não foram encontradas. Muitos dos genes Com expressão moduiada pelo tratamento Com BMC foram relacionados à infiamação e fibrose. Imunofluorescência e análise morfométrica confirmaram os efeilos moduiadores da terapia com BMC no padrão de resposta inflamatória e na expressão de moléculas de adesão. Nossos resultados demonstram um importante efeito imunomodulador do BMC e indicam fatores potencialmente relevantes envolvidos na patogénese da doença, que pOdem constituir novos alvos terapéuticos para esta doença. Para investigar a contribuição natural das células da medula óssea nas lesões no coração e músculo esquelético durante a infecção aguda pelo T. cruzi, camundongos qUiméricos foram gerados através do transplante de céiulas da medula óssea GFp. em camundongos receptores do tipo selvagem letaimente irradiados que foram infectados com T. cruzi um més após o transplante. A migração de céluias derivadas da medula óssea para o coração e músculo esquelético foi vista durante e após a fase aguda da infecção, uma vez que o infiltrado inflamatório era composto por células GFp.. Cardiomiócitos e células endoteliais GFp. Foram encontrados nas secções de coração de camundongos qUiméricos infectados. Além disso, um grande número de fibras GFp. foi observado no músculo esquelético de camundongos qUiméricos em diferentes momentos após a infecção por T. cruzi. Nossos resuitados reforçam o papel das células derivadas da medula óssea na regeneração tecidual em lesões provocadas pela infecção por T. cruzi. / Chronic chagasic cardiomyopathy is a leading cause of heart failure in Latin American countries. About 30% of Trypanosoma cmz/-lnfected individuals develop this severe symptomatic form of the disease, characterized by intense inflammatory response followed by fibrosis in the heart. We have previously shown that bone marrow cell (BMC) transplantation improves inflammation and fibrosis in hearts of mice with chronic Chagas’ disease. Here we investigated alterations of gene expression in the hearts of chronic chagasic mice submitted or not to BMC therapy. [METHODS] C57BI/6 mice chronically infected with T. cruzi (6 months) were transplanted with bone marrow mononuclear cells (BMC) or saline solution intravenously (i.v.) and sacrificed 2 months later. RNA was extracted from the hearts of normal controls and chagasic mice. DNA microarray analysis was performed using an array of 27,400 mouse cDNAs. Immunofluorescence and morphometric analyses were performed in heart sections. [RESULTS] We found significant alterations in expression of -12% of the sampled genes. Extensive upregulations in chagasic hearts were associated with immune-inflammatory responses (chemokines, adhesion molecules, cathepsins and MHC molecules) and fibrosis (extracellular matrix components, lysyl oxidase and Timp1). When BMC-treated chagasic hearts were compared to normal mice, about 90% of the alterations were not found. Many of the genes with expression modulated by BMC were related to inflammation and fibrosis. Immunofluorescence and morphometric analyses confirmed the modulatory effects of BMC therapy in the pattern of inflammatory response and expression of adhesion molecules. Our results demonstrate an important immunomodulatory effect of BMC and indicate potentially relevant factors involved in the pathogenesis of the disease which may provide new therapeutic targets. To investigate the natural contribution of bone marrow cells on lesions in the heart and striated muscle during acute T. cruzi infection, chimeric mice were generated by transplanting GFP"" bone marrow cells into lethally irradiated wild-type recipient mice and infected with T. cruzi one month after transplantation. Migration of bone marrow-derived cells to the heart and striated muscle was seen during and after the acute phase of infection, since the inflammatory infiltrate was composed by GPP"" cells. GFP"" cardiomyocytes and endothelial cells were found in the heart sections of chimeric chagasic mice. In addition, a large number of GFP^ myofibers were seen in the striated muscle of chimeric mice at difl'erent time points after infection. [CONCLUSION] Our results reinforce the role of bone marrow-derived cells in tissue regeneration in lesions caused by T. cruzi infection.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-05-22T15:50:32Z No. of bitstreams: 1 Carine Machado Azevedo. Células derivadas...2013.pdf: 3773108 bytes, checksum: 06792c88bd29e905b54c5a3d77de8db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T15:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carine Machado Azevedo. Células derivadas...2013.pdf: 3773108 bytes, checksum: 06792c88bd29e905b54c5a3d77de8db6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A contribuição das células de medula óssea na regeneração de tecidos não hematopoiéticos tem sido intensamente investigada desde a descoberta de células-tronco multipotentes neste órgão. Estudos prévios tem demonstrado que células derivadas da medula óssea podem contribuir para a formação de novos hepatócitos e cardiomiócitos. No presente estudo avaliamos a participação endógena das células-tronco de medula óssea no processo de reparo de lesões teciduais na fase crônica da doença de Chagas e esquistossomose experimentalmente induzidas. Para isso, camundongos quiméricos de medula óssea foram gerados após irradiação com dose letal e posterior reconstituição com células de medula óssea provenientes de camundongos transgênicos para a proteína fluorescente verde (GFP). Um mês após a reconstituição, as quimeras foram infectadas pelo T. cruzi ou S. mansoni. Animais quiméricos saudáveis foram mantidos como controles. Camundongos foram eutanasiados em diferentes períodos para análise morfológica, morfométrica e de marcadores específicos através de imunofluorescência do coração e músculo esquelético ou fígado de acordo com o grupo. As infecções por S. mansoni e T. cruzi causaram a mobilização de diferentes populações celulares para o sangue periférico, tais como monócitos, células-tronco hematopoiéticas e mesenquimais e progenitores endoteliais. Nos dois modelos estudados, observamos um aumento no número de células GFP+ após estímulo lesivo nos tecidos analisados. No modelo de doença de Chagas, há um aumento da expressão de MCP-1, 2 e 3 e SDF-1 no coração e músculo esquelético em comparação com animais não infectados, o que pode contribuir para o recrutamento destas células. As células GFP+ contribuem tanto para a formação da lesão, compondo o infiltrado inflamatório, como para a regeneração tecidual através da formação de miofibras, cardiomiócitos, hepatócitos e vasos sanguíneos. As poucas células GFP+ encontradas nos tecidos de camundongos quimeras normais não possuíam morfologia de células parenquimatosas. Concluímos que a medula óssea pode contribuir para a regeneração dos tecidos lesados através de células-tronco ou progenitores que originam células dos músculos cardíaco e esquelético, hepatócitos e vasos sangüíneos. / The contribution of bone marrow cells in non-hematopoietic tissue regeneration has been intensely investigated since the discovery of multipotent stem cells in this organ. Previous studies have shown that bone marrow derived cells may contribute to the formation of new hepatocytes and cardiomyocytes. In the present study, we evaluated the participation of endogenous bone marrow stem cells in the repair of tissue injury in experimentally induced chronic phases of Chagas disease and schistosomiasis. For this purpose, chimeric mice were generated from bone marrow after a lethal irradiation dose and subsequent reconstitution with bone marrow cells from green fluorescent protein (GFP) transgenic mice. A month after reconstitution, chimeras were either infected with Trypanosoma cruzi or Schistosoma mansoni, or kept healthy as controls. Mice were euthanized at different time points for histological, morphometric and specific markers by immunofluorescence analysis in heart and skeletal muscle or in the liver, according to the group. Infections caused by S. mansoni and T. cruzi resulted in the mobilization of different cell populations to the peripheral blood, including monocytes, hematopoietic and mesenchymal stem cells, and endothelial progenitors. In the two models studied, we observed an increase in the number of GFP+ cells after injury stimulus in the tissues analyzed. In the model of Chagas disease, there is an increased expression of MCP-1, 2, 3 and SDF-1 in heart and skeletal muscle compared to uninfected animals, which can contribute to the recruitment of these cells. The GFP+ cells both contribute to lesion formation, comprised of inflammatory infiltrate, as well as tissue regeneration by forming myofibers, cardiomyocytes, hepatocytes and blood vessels. The few GFP+ cells found in control chimera mice tissue lacked parenchymal cell morphology. We concluded that bone marrow may contribute to the regeneration of injured tissues through stem or progenitor cells, which gives rise cardiac and skeletal muscle cells, hepatocytes and blood vessels.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-27 / O sono é um importante evento fisiológico que diretamente influencia a saúde e está relacionado com o sistema imunológico no qual o cálcio age como um importante mensageiro. Neste estudo, nós realizamos as medidas de mobilização do cálcio citossólico em células vivas com o objetivo de compreender as mudanças na sinalização deste íon em células imunológicas do baço de camundongos após diferentes períodos de privação de sono. Esplenócitos de camundongos privados de sono por diferentes períodos (12 à 72 horas) mostraram uma progressiva perda da manutenção do cálcio intracelular proveniente do estoque do retículo endoplasmático e um comprometimento do tamponamento de cálcio transiente pela mitocôndria. Estes dados foram confirmados por mudanças no desempenho dos canais de cálcio SOCE e STIM1 e na integridade da fisiologia mitocondrial e lisossomal. Estes resultados foram corroborados pelo aumento na atividade de enzimas antioxidantes como a Superóxido Dismutase mitocondrial e citossólica, o que reforça que o rompimento na integridade da mitocôndria e lisossomos possivelmente ocorreu pela geração descontrolada de estresse oxidativo. A redução da atividade da Catalase sugere comprometimento na integridade celular, uma vez que o excesso de cálcio e radicais livres provavelmente danificaram o mecanismo de sinalização da célula. Ademais observamos resposta imunológica deficiente quando um grupo de camundongos pode dormir por 24 e por 48 horas após a privação de sono por 72 horas, seguido de infecção com parasita de malária (Plasmodium chabaudi). O envolvimento das células imunológicas foi confirmado pela redução na população de células totais do baço e, especificamente, na população de linfócitos B. Estes novos dados sugerem que a privação de sono prejudica a sinalização do cálcio provavelmente por um estresse no retículo endoplasmático, mitocôndria e lisossomos levando a um suprimento insuficiente de cálcio para eventos de sinalização com conseqüentes danos intracelulares. Estes dados confirmam mecanismos descritos previamente de efeitos imunossupressores da perda de sono. / Sleep is an important physiological event that directly influences health and is related to the immune system in which calcium acts as an important messenger. In this study, we performed measurements of cytosolic calcium mobilization in living cells in order to understand the changes in this ion signaling in immune cells from mice after different periods of sleep deprivation. Splenocytes of mice deprived of sleep for various periods (12 to 72 hours) showed a progressive loss of the intracellular calcium maintenance from the endoplasmic reticulum store and a commitment of transient calcium buffering by mitochondria. These data were confirmed by changes in the performance of calcium channels SOCE and STIM1 and in the integrity of lysosomal and mitochondrial physiology. These results were corroborated by the increase in activity of antioxidant enzymes such as mitochondrial and cytosolic superoxide dismutase, which reinforces the idea that the disruption in the integrity of mitochondria and lysosomes possibly occurred by uncontrolled generation of oxidative stress. The reduction of catalase activity suggests involvement in cellular integrity, since excess of calcium and free radicals probably compromise cell signaling. Moreover, deficient immune response was observed when a group of mice was allowed to sleep for 24 and 48 hours of sleep deprivation for 72 hours, followed by infection with malaria parasites (Plasmodium chabaudi). The involvement of the immune cells was confirmed by the reduction in the total population of cells in the spleen and, specifically, the population of B lymphocytes. These new data suggest that sleep deprivation affects calcium signaling probably by a stress in the endoplasmic reticulum, mitochondria and lysosomes, leading to an insufficient supply of calcium to signaling events and consequent intracellular damage. These data confirm previously described mechanisms of immunosuppressive effects of sleep loss. / TEDE

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-09-28. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:13Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12890a.pdf: 1928691 bytes, checksum: e1cbc3ab85af6e4bc90c10550766fe7d (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:13Z : No. of bitstreams: 2 Publico-12890a.pdf: 1928691 bytes, checksum: e1cbc3ab85af6e4bc90c10550766fe7d (MD5) Publico-12890b.pdf: 1540336 bytes, checksum: 7786d4d28a3b5762f4bd7f7137c3c3c0 (MD5) / A ativacao de receptores B1 de cininas no endotelio vascular desencadeia vias de sinalizacao que resultam na elevacao do Ca+2 intracelular e ativacao da enzima oxido nitrico sintase (NOS), seguido por producao de NO e vasodilatacao. Embora a inducao do receptor B1 e sua funcao durante a inflamacao tenha sido abordada por diversos estudos, a importancia de receptores B1 na homeostase vascular em condicoes fisiologicas nao esta totalmente elucidada. Para esclarecer essa questao, o presente estudo analisou a funcao endotelial e a producao de NO em camundongos nocaute do receptor B1 (B1 -/-) e selvagens (WT). O leito arteriolar mesenterico foi perfundido por solucao Krebs e respostas vasculares para Acetil-colina (ACh), nitroprussiato de sodio (SNP) e norepinefrina (NE) foram analisadas por um sistema de aquisicao de dados. Niveis plasmaticos de NO (ƒÊmol/L) foram analisados por deteccao dos derivados nitritos/nitratos atraves de metodo de quimioluminescencia e a producao vascular de NO foi avaliada em cortes histologicos de arteriolas mesentericas incubadas com DAF-2 DA, um marcador fluorescente de NO (unidades arbitrarias, u.a.). A atividade da NOS (pmol/mg.min) foi mensurada atraves da conversao bioquimica de L-[3H]arginina para L-[3H]citrulina em homogenatos de vasos mesentericos na presenca de substrato e co-fatores. Celulas endoteliais primarias foram incubadas com DAF-2 DA e as imagens obtidas em microscopio confocal foram analisadas por densitometria optica (u.a.). Celulas foram estimuladas com ACh [1 mmol/L] na presenca ou ausencia de Larginina, o substrato da NOS, ou tetrahidrobiopterina (BH4), co-fator da NOS, ou acido ascorbico, composto antioxidante. Producao de anion superoxido (u.a.) foi avaliada em celulas endoteliais incubadas com di-hidroetidina, um marcador fluorescente de anion superoxido, na presenca ou ausencia de BH4 ou acido ascorbico. Arteriolas mesentericas de B1 -/- exibiram severo comprometimento da vasodilatacao mediada por ACh, sem alteracoes na resposta ao NPS e NE. Os niveis circulantes de NO foram consideravelmente reduzidos em B1 -/- (49,6 } 10,5*; n=6) vs WT (141,9 } 17,3; n=6 ), acompanhado por reducao da producao basal de NO em arteriolas mesentericas de B1 -/- (0,16 } 0,03*; n=6) quando comparado a WT (0,58 } 0,08; n=4). A atividade da NOS foi elevada em amostras de B1 -/- (3,4 } 0,58*; n=4) em comparacao a WT (1,9 } 0,05; n=5). A producao de NO mediada por ACh foi significantemente reduzida em celulas endoteliais de B1 -/- (35,8 } 3,1*; n=4) quando comparado a celulas de WT (66,9 } 3,2; n=4). A producao de NO em celulas endoteliais de B1 -/- foi revertida por incubacao com BH4 (54,3 } 1,7; n=4) e acido ascorbico (101,8 } 6,0; n=4), mas nao por L-arginina, enquanto incubacao de celulas endoteliais de WT com BH4, acido ascorbico ou L-arginina nao teve efeito. A producao elevada de anion superoxido em celulas endoteliais de B1 -/- (77,1 } 2,5*; n=4) quando comparado a WT (29,3 } 6,9; n=4) foi revertida pela incubacao com acido ascorbico (35,3 } 6,4; n=3). O severo comprometimento da vasodilatacao mediada pelo endotelio acompanhado por reducao da biodisponibilidade de NO, apesar do aumento da atividade da NOS, sugere a exacerbacao da inativacao de NO em endotelio de B1 -/-. A producao elevada de anion superoxido em endotelio de B1 -/- provavelmente e responsavel pela exacerbacao da inativacao de NO nestes animais. Adicionalmente, a inativacao de BH4 por peroxinitrito pode acarretar em desacoplamento da NOS e producao de anion superoxido pela enzima. / Activation of B1 receptor in the vascular endothelium triggers diverse signaling pathways that results in elevation of intracellular Ca2+ and Nitric Oxide Synthase (NOS) activation, followed by NO production and vasodilation. Although much has been investigated about the B1-induction and functionality during inflammation, the importance of B1 subtype in normal vessels remains unclear. To clarify this question, the present study analyzed endothelial function and endothelial NO generation in B1 receptor knockout (B1 -/-) and Wild Type (WT) mice. Mesenteric arteriolar bed was perfused with Krebs solution and vascular responses to Acetilcholine (ACh), sodium nitroprusside (SNP) and norepinephrine (NE) were evaluated by a data acquisition system. Plasmatic NO levels (μmol/L) were analyzed by NO derivatives nitrate and nitrite using NO Analyzer (NOATM280, Sievers Instruments) and vascular NO generation was assessed in mesenteric arterioles slices using DAF -2 DA, a fluorescent cell permeable dye for NO (arbitrary units, a.u.). NOS activity (pmol/mg.min) was measured by the biochemical conversion of L-[3H] arginine to L-[3H] citrulline in homogenates of mesenteric vessels in the presence of optimal levels of substrate and co-factors. Primary endothelial cells were incubated with DAF-2 DA and images obtained in a confocal microscope were analyzed by optic densitometry (a.u.). Cells were stimulated with ACh [1 mmol/L] in presence or absence of the NOS substrate Larginine, or the co-factor tetrahydrobiopterin (BH4), or the antioxidant compound ascorbic acid. Production of superoxide anion (a.u.) was assessed in endothelial cells incubated with dihydroethidine, a fluorescent cell permeable dye for superoxide anion, in the presence or absence of BH4 or ascorbic acid. Mesenteric arterioles from B1 -/- exhibited a severe impairment of ACh-vasodilation for all tested doses, with no changes in the response to SNP and NE. Circulating NO was markedly decreased in B1 -/- (49.6 ± 10.5*; n=6) vs WT (141.9 ± 17.3; n=6 ), accompanied by reduced basal NO release in mesenteric arterioles from B1 -/- (0.16 ± 0.03*; n=6) when compared to WT (0.58 ± 0.08; n=4). NOS activity was elevated in mesenteric homogenates from B1 -/- (3.4 ± 0.58*; n=4) in comparison to WT (1.9 ± 0.05; n=5). ACh-induced NO release was markedly reduced in primary cultured endothelial cells from B1 -/- (35.8 ± 3.1*; n=4) in comparison to WT cells (66.9 ± 3.2; n=4). NO release in endothelial cells from B1 -/- was reversed by incubation with BH4 (54.3 ± 1.7; n=4) and ascorbic acid (101.8 ± 6.0; n=4), but not by L-arginine, while incubation of endothelial cells from WT with BH4, ascorbic acid or L-arginine had no effect. Elevated production of superoxide anion in endothelial cells from B1 -/- (77,1 ± 2,5*; n=4) in comparison to WT (29,3 ± 6,9; n=4) was reversed by incubation with ascorbic acid (35,3 ± 6,4; n=3). The severe impairment in the endothelial-mediated vasodilation accompanied by decreased NO bioavailability, despite the augmented NOS activity, strongly indicates an exacerbation of NO inactivation. Reduced NO availability may be preceded by exacerbation of NO inactivation by superoxide anion, which can leads to inactivation of BH4 in vascular endothelium, resulting in NOS uncoupling and NOS derived production of superoxide anion. / TEDE

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-29T20:29:44Z No. of bitstreams: 1 Sheilla Andrade deOliveira. Estudo do potencial terapêutico de células mononucleares de medula óssea em lesões hepáticas crônicas em camundongos - UFBA-FIOCRUZ-CPqGM - Tese Doutorado.pdf: 16762445 bytes, checksum: f804f2624774de877295c8841f4ff9c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-29T20:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sheilla Andrade deOliveira. Estudo do potencial terapêutico de células mononucleares de medula óssea em lesões hepáticas crônicas em camundongos - UFBA-FIOCRUZ-CPqGM - Tese Doutorado.pdf: 16762445 bytes, checksum: f804f2624774de877295c8841f4ff9c1 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O potencial terapêutico das células-tronco em doenças hepáticas vem sendo investigado. Estudos em modelos animais têm servido de base para a realização de ensaios clínicos utilizando células de medula óssea. Embora os resultados iniciais venham sendo bastante promissores, os mecanismos envolvidos na melhora hepática ainda não estão claros e novas avaliações em modelos experimentais se fazem necessárias. O objetivo da presente investigação foi avaliar a eficácia terapêutica de células mononucleares de medula óssea em doenças hepáticas crônicas. Inicialmente estabeleceu-se cirrose hepática no camundongo C57Bl/6, pela administração de uma solução de 20% de tetracloreto de carbono (CCI4) diluído em azeite de oliva combinado com 5% de etanol (EtOR) na água. Neste estudo observamos que, após seis meses de administração dos agentes hepatotóxicos, ocorre o desenvolvimento de lesões crônicas características de cirrose hepática. O segundo modelo utilizado foi o da infecção crônica pelo Schistosoma mansoni. Uma vez estabelecidas as lesões hepáticas crônicas nos animais, os estímulos "lesivos foram retirados e células mononucleares de medula óssea (3xl07) obtidas de tíbia e fêmures de camundongos transgênicos para proteína fluorescente verde (GFP) foram infundidas. A avaliação da capacidade migratória das células infundidas, bem como das alterações ocorridas após a terapia celular foi avaliada por meio de métodos histológicos, de imunofluorescência, morfológicos e imunológicos no tecido hepático. Após a terapia celular, observamos, nos dois modelos de fibrose hepática analisados, que as células GFP+ infundidas foram capazes de migrar e permanecer nas áreas de lesão do fígado. Inicialmente estas células apresentam formas arredondadas sem adentrar o tecido fibroso. Posteriormente, estas células tendem a invadir o tecido fibroso e assumem formas fusiformes. Uma redução do tecido fibroso foi verificada no 2° mês pós-terapia, em todos os grupos que receberam a terapia celular tanto nas áreas de fibrose septal e portal, quanto nas áreas dos granulomas. Os níveis de TGF-B no tecido hepático estavam diminuídos, após a terapia celular. O número de células ovais, conhecidas como células-tronco do fígado, estava aumentado no parênquima hepático após terapia celular. Os animais esquistossomóticos tratados com células de medula óssea recuperaram parcialmente a produção de albumina, quando comparado aos animais infectados. As observações sobre a terapia celular nos dois modelos de lesão crônica dos fígados avaliados nos permitem concluir que o transplante de células mononucleares de medula óssea diminui as alterações teciduais decorrentes de agressões crônicas ao fígado e reforçam a utilização deste tratamento para pacientes portadores de lesões hepáticas crônicas. / The therapeutic potential of stem cells on chronic liver diseases has been widely investigated. Based on results obtained mainly in studies using experimental models of acute liver injury, phase I clinical trials have already been carried out in patients with chronic liver diseases using therapy with bone marrow cells. Although the initial results were promising, the mechanisms involved on improvement of hepatic function are not clear and new evaluations with experimental models akin to human chronic liver diseases are needed. The object of the present investigation was the evaluation of the therapeutic efficacy of bone marrow mononuclear cells in chronic hepatic disease models. InitialIy, a mouse model of hepatic cirrhosis was induced in C57BI/6 mice by administration of 20% carbon tetrachloride solution (CCI4) diluted in olive oil combined with 5% ethanol (EtOH) in water was established. In this study we observed the development of chronic lesions characteristic of cirrhosis afier at least 6 months of administration of the hepatotoxic agents. The second model used was hepatic fibrosis caused by chronic infection by Schistosoma mansoni. Once the chronic lesions were established, the lesion stimulus was suspended and bone marrow mononuclear cells (3x I 07) obtained from tibiae and femurs of green fluorescence protein (GFP) transgenic mice were administered. The migratory capacity of the administered celIs, as well as the alterations occurring afier the celI therapy, was evaluated by histological, immunofluorescence, morphological and immunological methods in the liver tissue. After cell therapy in both hepatic fibrosis models it was observed that administered GFP+ cells were able to migrate and remain on hepatic lesion areas. Initially those celIs presented an oval shape outside thc fibrous tissue. At latter timepoints, those cells invadcd the fibrous tissue and acquired a fusifonll shape. A reduction of fibrosis was verified after the second month oftherapy in alI groups that received the celI therapy in the granuloma areas, as welI as in areas of septal and frontal fibrosis. The levels of TGF-~ were lower after the cell therapy, with statistical significance only in schistossomotic animaIs. The number of oval cells, known as liver stem cells, was increased in hepatic parenchyma afier cell therapy. The schistossomotic animaIs treated with bone marrow celIs recovered partialIy the production of albumin when compared to infected controls. Based on our observations about cell therapy in both models of chronic liver diseases evaluated we conc1ude that bone marrow mononuclear cell transplantation decreases tissue alterations caused by chronic aggressions to the liver and reinforce the use of this therapy in patients with chronic liver lesions.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 thiago_martins_ioc_mest_2008.pdf: 2240776 bytes, checksum: 22f0d88555ae7a38778dfd03f1dd7c9c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os citocromos P450 (CYP) desempenham importantes papéis na biotransformação de xenobióticos e no metabolismo de substâncias endógenas. A subfamília CYP1A foi bem conservada ao longo da evolução dos vertebrados, tendo sido encontrada em todas as espécies de peixes mandibulados estudadas até o momento. Em trabalho anterior, verificamos que algumas espécies de cascudos da família Locariidae não apresentavam atividade da etoxiresorufina-O-desetilase (EROD) em microssomos hepáticos. Como EROD é atividade catalisada predominantemente por CYP1A em diversos vertebrados, esse achado nos motivou a investigar em detalhe os CYP, em especial da subfamília 1A, em cascudos. Este trabalho é um estudo comparativo da capacidade de cascudos (Hyposthomus luetkeni e H. affinis), tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus; Cichlidae) e camundongos, controles e tratados com indutores conhecidos de CYP1A [50 mg/kg ip; B-naftoflavona (BNF), ou 7-12 dimetil-benzoantraceno (DMBA)] de: i - catalisar diversas reações químicas sabidamente mediadas por CYP, ii - expressar a proteína CYP1A no tecido hepático, e iii - ativar o pró-mutágeno DMBA. Nos microssomos hepáticos das tilápias e dos camundongos, detectamos atividades constitutivas de EROD e também de desalquilação de outros ésteres da resorufina (MROD, PROD e BROD). Nessas duas espécies, as atividades dessas monooxigenases foram induzidas pelos tratamentos com BNF e DMBA. Nos cascudos, controles e tratados com os indutores de CYP1A, as atividades das alcoxi-resorufina-O-desalquilases não foram detectadas. A atividade da etoxicumarina desetilase (ECOD) foi cerca de cinco vezes maior no fígado de cascudos e de camundongos do que no das tilápias. O CYP1A não parece ter papel importante na catálise de ECOD nessas duas espécies de peixes Os resultados também mostraram que dois anticorpos anti-CYP1A de peixe reconheceram proteínas com massa moleclar compatível com o de CYPs nos microssomos hepáticos de tilápias e camundongos tratados com indutores de CYP1A. Nos cascudos, entretanto, a detecção de CYP1A por immunoblotting com esses anticorpos não foi consistente. Com o emprego de espectrometria de massas, identificamos o CYP1A em microssomos hepáticos de tilápias induzidas, mas não nos cascudos controles ou induzidos. Em conjunto, os resultados sugerem que, em contraste com o observado com tilápias e camundongos, os cascudos não exibem atividade catalítica de CYP1A e não expressam as proteínas correspondentes no fígado, ou as expressam apenas em níveis constitutivos extremamente baixos. Apesar de não apresentarem atividade catalítica de CYP1A, os cascudos foram capazes de ativar o pró-mutágeno DMBA que, em outras espécies, é ativado por enzimas da família CYP1, em especial das subfamílias 1A e 1B / The cytochrome P450 (CYP) superfamily plays im portant roles in the biotransformation of xenobiotic and endogenous compounds. The CYP1A subfamily is well conserved in vertebrates and has been found in all jawed fish studied to date. In a previous study, we had found that suckermouth armored catfishes of the Loricariidae family ( Hyposthomus luetkeni and H.affinis ) did not show ethoxy-resorufin- O -deethylase (EROD) activity in liver microsomes. Since EROD is a marker of CYP1 A catalytic activity in vertebrates, this unexpected finding prompted us to investigate in depth the CYP system of loricariid catfishes, particularly the CYP1A subfamily. In this study, we compared the capacities of suckermouth armored catfishes (Loricariidae), Nile tilapias ( Oreochromis niloticus , Cichlidae) and mice (Swiss Webster), control and treated with CYP1A-inducing agents (50 mg/kg ip ß- naphthoflavone, BNF, and 7-12 dimethyl-benzoanthracene, DMBA) to: i - catalyze several activities that are known to be catalyzed by CYPs, ii - express CYP1A protein in liver tissue and iii – activate the pro-mutagen DMBA. In liver microsomes of tilapias and mice, constitutive activities of EROD, and of other alkoxy-resorufin- O -dealkylases (XROD: MROD, PROD and BROD) were found. In the two species, activities of these monooxygenases were induced after treatment with BNF and DMBA. In suckermouth armored catfishes (control and induced) no XROD activities were noted. In liv er microsomes of suckermouth catfishes and mice, the ethoxycoumarin-deethylase activity (ECOD) was found to be approximately five- fold the ECOD activity recorded in tilapias. CYP1A apparently did not take part in the catalysis of ECOD reaction in the two fish species. Results also showed that two antibodies against- fish CYP1A recognized liver microsomal proteins with a CYP-compatible molecular weight in induced tilapias and mice. These putative CYP1A proteins, however, were not consistently detected in suckermouth catfish liv er microsomes. Taken together, findings from this study suggested that, in contrast to t ilapias and mice, suckermouth catfishes do not show CYP1A catalytic activity and do not express, or do express only tiny amounts of constitutive CYP1A proteins in the liver. Alt hough not showing CYP1A catalytic activity in the liver, armored suckermouth catfishes were able to convert the pro-mutagen DMBA into its genotoxic metabolites, a metabolic activation us ually mediated by CYP1 family enzymes, in particular, CYP1A and 1B.

Estudos populacionais, assim como modelos animais demonstram que além dos fatores já conhecidos, como uma dieta não balanceada e sedentarismo, insultos nutricionais no período gestacional ou durante a lactação, causam alterações metabólicas importantes que levam ao surgimento da obesidade, Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) e doenças cardiovasculares em longo prazo. Nesse estudo, analisamos o pâncreas de camundongos hiperalimentados adultos (150 dias) e camundongos hiperalimentados jovens (21 e 28 dias). Os camundongos hiperalimentados de 21 dias receberam transplante de células mononucleares de medula óssea (CMO) e o resultado desse transplante foi observado aos 28 dias, quando os animais foram sacrificados. Nós investigamos: a apoptose das células beta através do fator pró-apoptótico Bax; a proliferação das células da ilhota pancreática através do antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA); a expressão da citocina TNF-α, relacionado com a resistência à insulina em animais obesos e a expressão de células tronco CD133 com o objetivo de estudar a participação dessa célula na renovação da massa de células beta durante o estabelecimento da DM2. As análises das proteínas citadas no pâncreas foram realizadas através de microscopia de luz, microscopia confocal, microscopia eletrônica e Western blotting. O peso dos animais, a morfometria das ilhotas pancreáticas, bem como os níveis de glicose e insulina plasmáticos também foram determinados. Nossos resultados confirmaram que os camundongos hiperalimentados adultos apresentavam elevados níveis de glicose e insulina plasmática quando comparados ao grupo controle. Além disso, camundongos hiperalimentados adultos apresentaram aumento na expressão de Bax, indicando apoptose das células beta, maior expressão de TNF-α nas ilhotas pancreáticas, e presença de células CD133 nas ilhotas e ductos pancreáticos de camundongos hiperalimentados. Ao analisarmos os animais com 21 dias também observamos elevados níveis de glicose e insulina plasmática no grupo hiperalimentado. Após o transplante de CMO, os camundongos hiperalimentados apresentaram os níveis de glicose e insulina normalizados em relação ao grupo controle, porém os níveis de TNF-α no pâncreas continuavam elevados. A expressão de células CD133 foi observada tanto aos 21 quanto aos 28 dias nas ilhotas pancreáticas nos grupos hiperalimentados. Porém, a expressão estava aumentada no pâncreas dos animais que receberam transplante de CMO aos 28 dias. Portanto, podemos concluir que camundongos hiperalimentados durante a lactação quando adultos se encontram em um estágio inicial do estabelecimento da DM2, com hiperglicemia e hiperinsulinema, ilhotas pancreáticas hipertrofiadas, evidência de apoptose das células beta, neogênese de células beta a partir de células do ducto pancreático, replicação de células beta já existentes e células tronco endógenas marcadas com CD133. Nos camundongos jovens, além dos parâmetros também observados nos animais adultos, observamos os benefícios das CMO para o restabelecimento da glicemia e insulinemia nos camundongos hiperalimentados. Além disso, demonstramos pela primeira vez, células CD133 marcadas com insulina nas ilhotas pancreáticas. O aumento da expressão de células CD133 no pâncreas de camundongos hiperalimentados que mantinham níveis elevados de TNF-α e receberam transplante de CMO, nos sugere a importância dessa citocina para o recrutamento e diferenciação das células tronco CD133 para melhoria do percurso da diabetes. / Population studies as well as animal models show that besides the factors already known as an unbalanced diet and sedentary lifestyle, nutritional insults during pregnancy or during lactation, causes important metabolic changes that lead to the emergence of obesity, type 2 diabetes mellitus (DM2) and cardiovascular diseases in long-term. In this study, we analyzed the pancreas of overfed adult mice (150 days) and young mice (21 and 28 days). At day 21, overfed mice were transplanted with bone marrow mononuclear cells (BMCs) and the results of this transplantation were observed at day 28. We investigated beta-cell apoptosis through pro-apoptotic factor Bax, the proliferation of pancreatic islet cells by proliferating cell nuclear antigen (PCNA), expression of TNF-α which has been linked to insulin resistance in obese animals and the expression of CD133 stem cells, in order to study the participation of this cell on the recovery of beta-cell mass during the establishment of DM2. The protein analysis, were performed using light microscopy, Confocal microscopy, electron microscopy and Western blotting. The animals weight, morphology of pancreatic islets, as well as plasma levels of glucose and insulin were also determined. Our results confirmed that adult overfed mice had high levels of blood glucose and insulin when compared to control mice. Moreover, overfed adult mice showed an increased expression of Bax, indicating apoptosis of beta cells, also confirmed by transmission electron microscopy, increased expression of TNF-α in pancreatic islets when compared with the control group, and interestingly we observed the presence of CD133 cells in the pancreas of overfed mice. By analyzing the animals with 21 days, we also observed high levels of blood glucose and insulin in the overfed group, but we did not observe Bax expression at this lifetime. The expression of TNF-α was also increased in the pancreas of overfed mice at day 21. After BMCs transplantation, the overfed group showed normal levels of blood glucose and insulin when compared with the control group, but the levels of TNF-α remained high. The expression of CD133 cells was observed in the pancreatic islets both at 21 and 28 days in overfed groups. However, the expression of CD133 was increased in the pancreas of animals that received BMCs transplantation at day 28. Therefore, we conclude that overfed mice when adults are at an early stage of stablishment of DM2 with hyperglycemia and hyperinsulinemia, pancreatic islet hypertrophy, evidence of apoptosis and neogenesis of beta cells from pancreatic duct cells, replication of existing beta cells and endogenous stem cells. In young mice, further the parameters observed in adult animals, we observed the benefits of the BMCs for the restoration of glucose and insulin in overfed mice. Moreover, we demonstrated for the first time the CD133 stem cells in pancreatic islets in colocalization with insulin, suggesting that CD133 could be a progenitor beta cell marker in pancreas. Also, the increased expression of CD133 cells in the pancreas of overfed mice with elevated levels of TNF-α after BMCs transplantation, suggests the importance of this cytokine for the recruitment and recovery of CD133 stem cells to improve the course of diabetes.

O óxido nítrico (NO) constitui um dos mais importantes mediadores intra e extracelulares e tem sido descrita sua participação tanto em processos biológicos como patológicos. Nosso objetivo foi verificar se o aumento ou a diminuição do óxido nítrico apresenta um efeito benéfico na proteção do tecido pulmonar no enfisema pulmonar induzido por fumaça de cigarro em camundongos. Para tanto, utilizamos o L-NAME (inibidor do NO), a L-arginina (substrato para a formação do NO) e os comparamos com a N-acetilcisteína (utilizada no tratamento da DPOC). Foram utilizados 65 camundongos C57BL/6 machos. Cinquenta animais foram divididos em grupos controle, fumaça de cigarro (FC), fumaça de cigarro + L-NAME (FC+LN), fumaça de cigarro + L-arginina (FC+LA), fumaça de cigarro + N-acetilcisteína (FC+NAC) (n=10, por grupo). Durante sessenta dias 40 animais foram expostos a 12 cigarros comerciais por dia, 3 vezes ao dia. Os grupos controle e FC foram submetidos à gavagens orogástricas com o veículo. Os grupos FC+LN, FC+LA, FC+NAC receberam gavagens diárias de L-NAME (60 mg/kg), L-arginina (120 mg/kg) ou NAC (200 mg/kg) respectivamente. Quinze animais (n = 5, por grupo) foram expostos ao ar ambiente e tratados apenas com L-NAME, L-arginina e NAC. Realizamos a análise do perfil das células do lavado broncoalveolar após o sacrifício. O pulmão direito foi removido para as análises histológicas do alargamento dos espaços aéreos determinado pela medida do diâmetro alveolar médio (Lm) e da densidade de superfície (Sv) dos septos alveolares. Os pulmões esquerdos foram removidos e homogeneizados para a as análises da atividade enzimática (SOD, CAT e MPO) e do sistema glutationa (GSH/GSSG), para a análise dos valores de nitrito e da expressão de 4-HNE, MMP-12, NE, TIMP-1, TIMP-2. Nossos resultados apontam que o L-NAME tem uma ação voltada para a matriz extracelular (via protease-antiprotease), enquanto que a L-arginina possui uma ação voltada para os oxidantes, assim como a NAC. Porém a NAC atua aumentando os níveis de glutationa, o que interfere diretamente nos oxidantes (via oxidante-antioxidante), enquanto a L-arginina interfere aumentando o burden oxidativo concomitante a um aumento da velocidade de ação dos oxidantes o que aumenta as células inflamatórias, mas diminui seu tempo de ação permitindo uma maior proteção. Concluímos que tanto o favorecimento para a produção e liberação do NOatravés da administração da L-arginina quanto a inibição do NOpela utilização do L-NAME foi eficiente na proteção do pulmão, apesar de não terem alcançado um resultado tão bom quanto a NAC. / Nitric oxide (NO) represents one of the most important intra and extracellular mediators/messengers. It takes part in both biologic and pathologic processes. This study aimed to verify NO role in pulmonary emphysema induced by cigarette smoke (CS) in mice. So L-NAME (LN) (a NOinhibitor) and L-arginine (LA) (a substract for NO formation) were analyzed and compared to N-acetylcysteine (NAC) (which is used in COPD treatment). A total of 65 C57BL/6 male mice were used. Fifty of them were divided in control, cigarette smoke (CS), cigarette smoke + L-NAME (CS+LN), cigarette smoke + L-arginin (CS+LA) and cigarette smoke + N-acetylcysteine (CS+NAC) groups (n = 10, each group). Forty animals were exposed to 12 commercial cigarettes 3 times a day for sixty days. Control and CS groups were submitted to orogastric gavages with saline. FC+LN, FC+LA, FC+NAC groups received daily gavages with L-NAME (60 mg/kg), L-arginine (120 mg/kg) and NAC (200 mg/kg) respectively. Fifteen animals (n=5, each group) were exposed to ambient air and treated with L-NAME, L-arginine and NAC alone. Cell profile of bronchoalveolar lavage was analyzed and the right lung was removed in order to perform histological analysis of air space enlargement. This was done measuring median alveolar diameter (Lm) and total alveolar septal volume (Sv) of alveolar septa. Left lungs were removed and homogenized to perform enzymatic activity (SOD, CAT and MPO) and glutathione ratio analysis (GSH/GSSG). Besides it, nitrite values and the expression of 4-HNE, MMP-12, NE, TIMP-1 and TIMP2 were also performed. L-arginine administration favored NOproduction and release, while L-NAME use inhibited. Briefly, we suggest L-NAME action to be directed to extracellular matrix (via proteinase-antiproteinase), while L-arginine action is directed to oxidants, similar to NAC. Our results showed that NAC acts raising glutathione levels which interfere directly with oxidants (via oxidant-antioxidant) while L-arginine acts raising oxidative burden at the same time it raises oxidants time of action. This also increases inflammatory cell numbers, but decreases their time of action, allowing a longer remodeling period. In conclusion, NOand both effects were efficient in lung protection/remodeling, although this remodeling was not as effective as when NAC was administrated.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Metabólitos ativos da cafeína apresentam toxicidade, podendo causar efeitos deletérios em muitos órgãos no período fetal pelo consumo materno. O estudo objetivou avaliar o papel da administração de cafeína durante a gestação em vários parâmetros importantes para a função testicular em camundongos adultos C57BL/6. Fêmeas grávidas foram divididas em: grupo controle (C), que receberam injeções de sol. salina (0,9% NaCl) e grupo cafeína (CF), que receberam diariamente injeções subcutâneas de 20 mg / kg de cafeína. Filhotes tiveram livre acesso à ração padrão desde o desmame até três meses de idade, quando foram mortos. O grupo CF apresentou uma redução no consumo alimentar (C = 4,36 0,14; CF = 3,79 0,05/g, p<0,05) e ganho de massa corporal (C = 25,73 0,14; CF = 21,08 0,41/g, p=0,0001). Ainda este grupo, apresentou alterações estruturais nos testículos da prole, como redução no peso relativo (C = 0,078 0,003; CF = 0,063 0,002/g, p=0,002), diâmetro tubular (C = 455,4 2,7; CF = 393,5 3,1/m, p=0,0001), lume tubular (C = 310,6 2,5; CF = 254,8 2,9/m, p=0.0001) e altura do epitélio seminífero (C = 144,8 0,9; CF = 138,7 1,3/m, p=0,0005) observados pela técnica de morfometria. Testosterona sérica avaliada por quimioluminescência foi reduzida (C = 6,6 2,8; CF = 0,5 0,2/ng/ml, p=0.04). Western Blotting foi utilizado para análise de expressão protéica. Houve aumento do receptor de leptina (C = 0,81 0,04; CF = 1,28 0,15/g, p=0,01), do receptor para o hormônio leteinizante (C = 0,92 0,05; CF = 0,74 0,05/g, p=0,01),da aromatase (C = 0,32 0,03; CF = 0,48 0,05/g, p=0,03) e do regulador pró apoptose (C = 0,27 0,02; CF = 0,42 0,03/g, p=0,01) enquanto o receptor para hormônio folículo estimulante (FSHR) (C = 0,76 0,06; CF = 0,56 0,04/g, p=0,02), o receptor para proteína reguladora da esteroidogênese (C = 1,009 0,065; CF = 0,584 0,060/g, p=0,0007), a proteína do fator de crescimento vascular endotelial (C = 0,33 0,08; CF = 0,05 0,01/g, p=0,009), o receptor de androgênio (C = 0,97 0,11; CF = 0,59 0,07/g, p=0,02) e o antígeno nuclear de proliferação celular (C = 0,93 0,11; CF = 0,48 0,07/g, p=0,01) foram reduzidos. Este estudo sugere que o consumo de cafeína durante a gravidez parece ser nocivo à fertilidade de animais machos, caracterizando o fenômeno de programação, o que gera alterações funcionais e estruturais nos testículos da prole adulta. / Active metabolites of caffeine present toxicity, may cause deleterious effects on many organs in the fetal period by maternal consumption. This study aimed to evaluate the role of caffeine administration during pregnancy on several parameters of adult male testis in C57BL/6 mice. Pregnant C57BL/6 female mice were divided into two groups (n = 10): Control group (C), dams were injected with the vehicle only (saline 0.9 % NaCl); Caffeine group (CF), dams received daily a subcutaneous injection of 20 mg/kg of caffeine/day (1 mg/mL saline). Pups had free access to standard chow since weaning to 3 months of age, when they were killed. Treatment of dams with caffeine did not produce any visible signs of maternal toxicity. At adulthood CF group presented a reduction in the food consumption (C = 4.36 0.14, CF = 3.79 0.05/g, p<0.05) and body weight gain (C = 25.73 0.14, CF = 21.08 0.41/ g, p=0.0001). Several alterations were seen in testis structure sighted by morphometry: testicular weight (C = 0.078 0.003, CF = 0.063 0.002/g, p=0.002), tubular diameter (C = 455.4 2.7, CF = 393.5 3.1/m, p=0.0001), tubular lumen (C = 310.6 2.5, CF = 254.8 2.9/m, p=0.0001) and epithelial height (C = 144.8 0.9; CF = 138.7 1.3/m, p=0.0005). Chemioluminesense was performed to evaluate testosterone serum levels, which was decreased (C = 6.6 2.8, CF = 0.5 0.2/ng/ml, p=0.04). Western blotting showed an increase in the protein expression of leptins receptor (C = 0.81 0.04, CF = 1.28 0.15/g, p=0.02), luteinizing hormone receptor (C = 0.92 0.05, CF = 0.74 0.05/g, p=0.01), aromatase (C = 0.32 0.03, CF = 0.48 0.05/g, p=0.03) and apoptose proteins (C = 0.27 0.02; CF = 0.42 0.03/g, p=0.002), while follicle stimulant hormone receptor (C = 0.76 0.06, CF = 0.56 0.04/g, p=0.02), steroidogenesis protein receptor (C = 1.009 0.065, CF = 0.584 0.060/g, p=0.0007), vascular-endotelial growth factor (C = 0.33 0.08, CF = 0.05 0.01/g, p=0.009), androgen receptor (C = 0.97 0.11, CF = 0.59 0.07/g, p=0.02) and proliferating cell nuclear antigen (C = 0.93 0.11; CF = 0.48 0.07/g, p=0.01) were reduced by maternal caffeine treatment. This study suggests that caffeine consumption during pregnancy appears to be detrimental to fertility in male offspring, by testicular programming, which generates disturbances in testicular function.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A aplicação tópica de doadores de óxido nítrico é conhecida pelos seus efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da associação de biomateriais com doadores de óxido nítrico no reparo tecidual cutâneo de camundongos. Camundongos swiss machos foram submetidos a lesões excisionais por punch de biópsia de 8 mm no dorso. Os animais foram separados em 4 grupos (n=6 em cada grupo) de acordo com a aplicação do curativo de polivinil álcool e hidrogel sobre a lesão de punch: a) grupo polivinil álcool com grupos tiol e Pluronic F-127 (PVA-SH/F127) - tratado com hidrogel sem S- nitrosoglutationa (GSNO) e filme sem óxido nítrico; b) grupo polivinil álcool S-nitrosado (PVA-SNO/F127-GSNO) - tratado com hidrogel contendo GSNO e filme com óxido nítrico; c) grupo PVA-SNO - tratado apenas com filme óxido nítrico e d) grupo PVA-SNO/ F127 - tratado com hidrogel sem GSNO e filme com óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com aplicação diária de curativos com seus respectivos biomateriais. Após 7 dias de tratamento, foram retirados os curativos e as lesões foram deixadas cicatrizar por segunda intenção. O grupo tratado com filme de PVA-SNO (d) associado ao hidrogel F127, comparado com os demais grupos descritos acima, apresentou melhora no reparo tecidual, melhora da contração da lesão, diminuição do gap epitelial e densidade celular, aceleração da fase inflamatória, aumento da diferenciação miofibroblástica e aumento da expressão de colágeno do tipo III (p<0,05, ao menos). Com base nesses dados, a combinação de filmes PVA liberadores de óxido nítrico com F-127 pode representar uma nova abordagem para o tratamento de lesões cutâneas. / Topical application of nitric oxide donors is known for its beneficial effects on skin tissue repair. The objective of this study was to evaluate the effects of biomaterials association with nitric oxide donors in skin tissue repair in mice. Males swiss mice underwent excisional lesion 8 mm biopsy punch on the back. The animals were separated in 4 groups (n=6 in each group) in according with dressing application of polyvinyl alcohol and hydrogel on punch lesion: a) poly (vynil alcohol) with thiol groups and Pluronic F-127 hydrogels (PVA-SH/F127) group - treated with hydrogel without S- nitrosoglutathione (GSNO) and film without nitric oxide; b) poly(vinyl alcohol) S-nitrosated (PVA-SNO/F127-GSNO) group - treated with hydrogel with GSNO and film with nitric oxide; c) PVA-SNO group - treated only with film containing nitric oxide and d) PVA-SNO/ F127 group - treated with hydrogel without GSNO and film with nitric oxide. The animals were treated for 7 consecutive days with daily application of dressings to the respective biomaterial. After 7 days of treatment, the dressings were removed and the lesions were allowed to heal by second intention. The group treated with PVA-SNO film associated with the hydrogel F127 (d), compared with the other groups described above, showed improvement in tissue repair, enhancing wound contraction, decreased wound gap and cellular density, acceleration of the inflammatory phase, increased myofibroblast differentiation and increased expression of collagen type III (p<0,05, at least). Based on these data, the combination of PVA films releasing nitric oxide with F-127 may represent a new approach treatment of cutaneous lesions.