Os protozoários do gênero Leishmania são os agentes etiológicos da leishmaniose cutânea e visceral. A infecção é transmitida por insetos hematófagos, nos quais os parasitos se desenvolvem sob a forma promastigota. Nos hospedeiros mamíferos, incluindo a espécie humana, as formas encontradas são as amastigotas que proliferam nos macrófagos; estas células podem controlar a infecção produzindo radicais derivados do oxigênio e do nitrogênio. O óxido nítrico (NO) é um dos mais potentes radicais com atividade leishmanicida. Existem várias moléculas já descritas que liberam NO em meio aquoso ou quando adicionadas a suspensões celulares. São chamadas de doadoras de NO. Algumas destas vêm sendo estudadas pelo seu potencial terapêutico no tratamento das leishmanioses cutâneas. A molécula S-nitrosoglutationa (GSNO) pertence a um grupo de moléculas conhecido com S-nitroso-tióis e é um doador de NO relativamente estável. A GSNO havia sido previamente testada em culturas de formas promastigotas de L. amazonensis e causou a morte do parasito. O possível uso da GSNO na terapia das leishmanioses cutâneas demanda o conhecimento de suas ações sobre as formas amastigotas encontradas nos hospedeiros mamíferos. Terapias complementares aos antimoniais usados no tratamento da leishmaniose cutânea são necessárias porque estes são apenas injetáveis, têm efeitos colaterais e ocorrem altos índices de desistência do tratamento. O objetivo do trabalho foi analisar o efeito da molécula GSNO nas culturas de células THP-1 (linhagem de monócitos humanos leucêmicos) infectadas com L.major e o efeito da sua administração tópica diretamente na lesão ulcerada leishmaniótica de camundongos infectados. Os experimentos com células THP-1 infectadas com L. major e tratadas com GSNO, mostram marcada redução do parasitismo intracelular, dose dependente, em comparação às culturas sem tratamento. O tratamento com GSNO foi testado em camundongos Balb/c 8 infectados com L. major e em camundongos C57BL/6 desprovidos do gene de IFN<font face=\"symbol\">g- (Knockout de IFN ou IFN-<font face=\"symbol\">g KO) infectados com L. braziliensis. Grupos de animais foram infectados no dorso e após 60 dias iniciou-se o tratamento tópico com GSNO diluída em PBS, em GEL F127 ou com os respectivos veículos, como controles; ainda, outros grupos foram tratados sistemicamente (via endovenosa) com o antibiótico com ação leishmanicida, anfotericina B, ou com anfotericina B associada à aplicação tópica de GSNO. Foram feitas duas medições semanais das lesões. Decorridos aproximadamente 60 dias após o início do tratamento, os animais foram sacrificados e retirados o linfonodo drenante (inguinal superficial) e a lesão para fazer a quantificação parasitária. O tratamento tópico da infecção por L.major com a molécula GSNO reduziu o tamanho da lesão cutânea, chegando a se observar fechamento da úlcera em alguns animais; a carga parasitária no linfonodo drenante e/ou na lesão também sofreu redução. Nos camundongos IFN-<font face=\"symbol\">g KO infectados por L. braziliensis, também ocorreu inibição da progressão da lesão pelo tratamento local com GSNO em comparação ao grupo não tratado. Como conclusão, conseguimos demonstrar que GSNO apresenta efeito leishmanicida sobre formas amastigotas de L. major em cultura celular e reduz a lesão cutânea causada por L.major ou por L. braziliensis em comparação aos grupos controle. / Protozoa of the genus Leishmania are the etiological agents of cutaneous and visceral leishmaniasis. The infection is transmitted by hematophagous insects in which the parasite multiplies and differentiates as promastigotes. In the mammalian hosts, including man, the parasite proliferates as amastigotes inside macrophages; production of reactive oxygen or nitrogen intermediates (ROI and RNI) by these cells can control the infection. Nitric oxide (NO) is a very toxic RNI active against leishmania. The are many molecules that liberate NO in solution or when added to cellular suspensions. They are collectively called NO donors. A few of them have been studied because of their potential therapeutic use in cutaneous leishmaniasis. The molecule S-nitrosoglutathione (GSNO) belongs to the S-nitroso-thiols and is a relatively stable NO donor. GSNO has been previously tested and caused the death of L. amazonensis promastigotes in liquid culture. A putative application of GSNO in the treatment of cutaneous leishmaniasis requires the understanding of its activities on amastigote forms which are the parasite forms found in the mammalian host. Because the classical leishmaniasis treatment relies on injectable antimonial drugs which have many side effects, many patients abandon the treatment. Therefore, additional therapy to accelerate the cure is needed as well as new drugs are much needed. The aim of the present work is to analyze the effect of the molecule GSNO in cultures of THP-1 cells (a leukemia human monocyte cell line) infected with Leishmania major as well as the effect of administering it topically into the lesion of infected mice. The experiments done on L. major-infected THP-1 cells showed marked dose-dependent reduction of parasitism when compared to untreated infected cells. The topical treatment with GSNO was done in BALB/c mice infected with L. major and in C57BL/6 mice deprived of the IFN-<font face=\"symbol\">g gene (IFN- <font face=\"symbol\">g KO) infected with L. braziliensis. Groups of mice were infected in the shaven dorsal skin and 60 days later the topical treatment with GSNO dissolved in PBS, in GEL F127 was started. Still other groups were treated systemically (i.v.) with Amphotericin B which is leishmanicidal or with Amphotericin B associated to topically applied GSNO. The lesions were measured twice a week. After 60 days the mice were killed and the draining lymph node and the lesion were removed for quantifying the parasite numbers. The topical treatment of L. major-induced ulcer with GSNO reduced the size of the ulcer leading in some mice to complete healing; the parasitic loads in the draining lymph node or in the lesion were also reduced. In L. braziliensis-infected IFN-<font face=\"symbol\">g KO mice, inhibition of lesion growth also occurred in the mice topically treated with GSNO in comparison to the untreated control group. In conclusion we showed that GSNO is leishmanicidal to L. major intracellular amastigotes and that the topical treatment reduces the size of the lesion caused in mice by L. major or by L. braziliensis in comparison to the control groups.

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é causada por várias espécies de protozoários do gênero Leishmania e compreende um grupo de doenças que apresentam características clínicas, histopatológicas e imunológicas distintas. O diagnóstico é realizado em base epidemiológica, clínica e patológica, confirmadas por exames parasitológicos positivos e demonstração de hipersensibilidade retardada a antígeno de leishmânia. Os testes sorológicos para o diagnóstico, utilizados até o momento, apresentam várias limitações e por isso é de grande importância identificar proteínas recombinantes de leishmânia, para que sejam testadas como potenciais antígenos para o desenvolvimento de técnicas para o diagnóstico da LTA. Neste estudo, foram utilizadas duas proteínas recombinantes de leishmânia altamente conservadas, Lb8E e Lb6H, derivadas de Leishmania (Viannia) braziliensis (Lb), avaliando a sua capacidade para detectar anticorpos no soro de vários grupos de pacientes por teste imunoenzimático (ELISA). Os antígenos recombinantes reagiram com amostras de 83,3% e 100,0% (Lb6H) dos pacientes com LTA e 95,4% (Lb8E) e 89,4% (Lb6H) dos soros de pacientes de leishmaniose visceral (LV). Em amostras de indivíduos saudáveis, as reações com Lb8E e Lb6H foram altamente específicas. Soros de 219 pacientes com LTA infectados com diferentes espécies de leishmânia prevalentes no Brasil (Leishmania (Leishmania) amazonensis, L. (Viannia) braziliensis, L. (V.) guyanensis e L. (V.) shawi) e amostras de pacientes com outras infecções parasitárias foram avaliados para a presença de anticorpos anti-rLb6H, obtendo-se sensibilidade de 100,0% nas 219 amostras de LTA e especificidade geral de 93,9% (considerando 68 indivíduos saudáveis e 213 pacientes com outras doenças infecciosas). Além disso, as amostras de outras doenças infecciosas indicaram provável ausência de reação cruzada, pois apenas uma minoria de amostras de pacientes com doença de Chagas possuía anticorpos contra rLb6H e essas respostas foram baixas. Enfim, os resultados obtidos sugerem que a técnica de ELISA utilizando o antígeno rLb6H pode ser consideradoa para uso na rotina do diagnóstico sorológico da LTA. / American tegumentary leishmaniasis (ATL) is caused by various species of protozoan of the genus Leishmania and comprises a group of diseases that present distinct clinical, histopathological and immunological characteristics. The diagnosis is performed based on epidemiological, clinical and pathological features, supported by positive parasitological tests and presence of delayed hypersensitivity to Leishmania antigens. The serological tests used to date have several limitations and therefore it is of great importance to identify recombinant proteins from Leishmania so that they can be tested as potential antigens for the development of techniques for the diagnosis of ATL. In this study, two highly conserved Leishmania recombinant proteins, Lb8E and Lb6H, derived from Leishmania (Viannia) braziliensis (Lb), were used, evaluating their ability to detect antibodies in the serum of several groups of patients by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Recombinant antigens detected 83.3% (Lb8E) and 100.0% (Lb6H) ATL patients, and 95.4% (Lb8E) and 89.4% (Lb6H) visceral leishmaniasis (VL) patients. These reactions with Lb8E and Lb6H were highly specific in healthy subjects. Sera from ATL patients infected with different species of Leishmania, prevalent in Brazil, (Leishmania (Leishmania) amazonensis, L. (Viannia) braziliensis, L. (V.) guyanensis and L. (V.) shawi) and samples from patients with other parasitic infections were evaluated for the presence of anti-rLb6H antibodies. In 219 ATL, the sensitivity was 100.0% e the general specificity, considering 68 healthy subjects and 213 patients with other infectious diseases. In addition, samples from other infectious diseases indicated a probable lack of cross-reactivity, as only a minority of samples from patients with Chagas disease had antibodies against rLb6H and all of these responses were low. Finally, the results suggest that the ELISA using rLb6H antigen may be considered for routine use for serological diagnosis of ATL.

Orientador: Aparecida Machado de Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T14:06:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pimentel_CamilaBianco_M.pdf: 2170672 bytes, checksum: 382d051a461d1bf38d120f7595ee3e8d (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A criocirurgia é uma técnica terapêutica muito eficaz no tratamento de diversas lesões cutâneas benignas e malignas. O principal mecanismo de ação desta técnica está relacionado aos seus efeitos vasculares no tecido tratado. Após o procedimento criocirúrgico ocorre a formação de um tecido de granulação exuberante no local da aplicação, provavelmente por estímulo angiogênico do criógeno e da resposta inflamatória, particularmente nas células endoteliais. Objetivos: avaliar e comparar os efeitos angiogênicos da criocirurgia, por método histopatológico (hematoxilina-eosina), na pele normal e previamente submetida a injúria experimental de ratos, utilizando-se o nitrogênio líquido como criógeno de escolha. Métodos: Foram realizadas duas feridas experimentais no dorso de 20 ratos, machos, linhagem Lewis, adultos jovens, com peso entre 180 e 220gramas, utilizando-se punch de 5mm, distantes 2 cm uma da outra. Após 3 dias, foi realizada criocirurgia com nitrogênio líquido em uma delas, utilizando-se a técnica do spray aberto por 15 segundos. Os animais foram divididos de forma aleatória em dois grupos de dez animais. Após 7 dias (grupo I) e 14 dias (grupo II), as amostras foram coletadas e encaminhadas para análise histológica, para avaliação da celularidade (angiogênese) local nos diferentes momentos e situações. Resultados: Foi possível comprovar que a criocirurgia, apesar de promover morte celular logo após sua aplicação e um processo inflamatório local acentuado, induz em um segundo momento, uma rápida proliferação celular e a manutenção desta taxa de celularidade, quando comparada ao mesmo fenômeno na cicatrização tecidual sem este procedimento. Conclusão: Estes achados, juntamente com o conhecimento de que existe uma relação direta entre as células mononucleares e neovascularização, e que há o desenvolvimento de um rico sistema de novos vasos em injúria causada pelo frio, sugerem que a criocirurgia, apesar de levar a uma cicatrização completa em um tempo mais prolongado, possuí estímulo angiogênico / Abstract: Cryosurgery is a very efficient therapeutic technique to treat benign and malignant cutaneous diseases. The primary active mechanism of cryosurgery is related to vascular effects in treated tissue. After a cryosurgical procedure, exuberant granulation tissue is formed at the injection site, probably as a result of angiogenic stimulation of the cryogen and inflammatory response, particularly in endothelial cells. The objective of this study is to evaluate the angiogenic effects of freezing, as part of the phenomenon of healing rat skin subjected to previous injury. Methods: 20 young adult Lewis strain male rats were used, weighing between 180 and 220 grams. Each rat received two wounds that were administered 2 cm apart using a 5mm punch. After 3 days, cryosurgery with liquid nitrogen for 15 seconds, using the open spray technique, was done in one of them. These rats were divided randomly into two groups of 10 animals, group I (GI) and group II (GII). After 7 days (GI) and 14 days (GII), samples were collected cut and stained to realize histopathological examination, to assess the local angiogenesis in differents moments and situations. Results: It was possible to demonstrate that cryosurgery, in spite of promoting cell death and accentuated local inflammation soon after its application, induces a more rapid cell proliferation in the affected tissue and maintenance of this rate in a second phase, than in tissue healing without this procedure. Conclusion: These findings, together with the knowledge that there is a direct relationship between mononuclear cells and neovascularization (the development of a rich system of new vessels in injury caused by cold), suggest that cryosurgery possesses angiogenic stimulus, even if taking longer for complete healing to occur / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Eneida de Paula, Michelle Franz Montan Braga Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T07:56:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sobral_VivianeRobertaVieira_M.pdf: 3065834 bytes, checksum: 821d44f8c5c07441498c0b9a0426b822 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Benzocaína (BZC) é um anestésico local do tipo éster usado principalmente em formulações de uso tópico, dérmico ou em mucosas. Em estudos anteriores de nosso laboratório, a interação da BZC com lipossomas convencionais compostos de fosfatidilcolina de ovo, colesterol e alfa-tocoferol foi caracterizada. No entanto, estudos recentes têm demonstrado que lipossomas elásticos, preparados com adição de um tensoativo, apresentam vantagens em relação aos convencionais, pois conseguem atravessar de maneira mais eficiente o estrato córneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar e caracterizar, sob o aspecto físico-químico e farmacêutico, diferentes formulações em gel de benzocaína: BZC a 10% e 20%, BZC a 10% encapsulada em lipossomas convencionais (LC) ou lipossomas elásticos (LE) e formulação comercial (contendo BZC a 20%). A quantificação do teor de benzocaína nas formulações foi realizada através de cromatografia líquida de alta eficiência e validada segundo o Guia de Validação de Métodos Analíticos e Bioanalíticos (Brasil, 2003). Em estudos de estabilidade acelerada (Brasil, 2005) foram avaliados: peroxidação lipídica, pH, teor e comportamento reológico das formulações. As formulações recém-preparadas foram avaliadas também quanto à citotoxicidade, liberação e permeação in vitro. Todas as formulações mostraram-se estáveis por até 6 meses, com pequenas variações de pH e teor; a peroxidação lipídica aumentou ao final deste período, porém a quantidade de peróxidos formados não ultrapassou 1% do total de lipídios presentes na formulação.... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Benzocaine (BZC) is an ester type local anesthetic mainly used in topical formulations for either dermal or mucosa. In previous studies from our laboratory, the interaction of BZC with conventional liposomes composed of egg phosphatidylcholine, cholesterol and alpha-tocopherol was characterized. However, recent studies have demonstrated that elastic liposomes prepared with the addition of a surfactant, show advantages over conventional vesicles, as they can effectively cross the stratum corneum. The objective of this study was to evaluate and characterize the physicochemical and pharmaceutical aspects of different gel formulations of BZC: 10% and 20% of BZC, 10% BZC encapsulated into conventional (CL) or elastic liposomes (EL) and commercial formulation (containing 20% BZC). The quantification of BZC in the formulations was performed by high performance liquid chromatography (HPLC) and validated according to the Guide for Validation of Analytical and Bioanalytical Methods (Brazil, 2003). Accelerated stability studies (Brazil, 2005) were used to evaluate lipid peroxidation, pH, and rheological behavior of the formulations. The freshly prepared formulations were submitted to cytotoxicity and in vitro release tests. All formulations were stable up to 6 months, with minor variations in pH and content of BZC; although the lipid peroxidation increased at the end of that period, the amount of peroxides produced was less than 1% of the total lipids in the formulation. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:15:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8381_1.pdf: 622681 bytes, checksum: f4eba58efda34a2ea285519f13a326f1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introdução: a avaliação do estado nutricional e do crescimento infantil são ações da prática pediátrica, e o seu melhor conhecimento favorece a adoção de medidas que permitem corrigir os seus desvios e melhorar as condições de vida da criança e suas famílias. Objetivos: no primeiro capítulo, revisar os fatores que interferem no crescimento na infância, dando ênfase ao problema do baixo peso ao nascer, por sua reconhecida importância nesse processo. Foram também revisados os principais indicadores antropométricos usados na avaliação da proporcionalidade corpórea. No segundo capítulo, verificar a influência do peso ao nascer de crianças nascidas a termo, e de fatores socioeconômicos e biológicos, sobre o estado nutricional, aos oito anos de idade, avaliado através da espessura da prega cutânea tricipital. Método: no capítulo de revisão foram utilizadas informações coletadas a partir de artigos científicos indexados nos bancos Lilacs, Scielo e Medline, em livros e teses de pós-graduação. O estudo do artigo original foi realizado a partir de um corte transversal em uma coorte inicial de 375 crianças, da qual foram estudadas 213, sendo 86 com baixo peso ao nascimento (BPN) e 127 com peso adequado. Aos oito anos de idade foram medidas a espessura das pregas cutâneas tricipital e subescapular e a circunferência do braço, e as mães foram entrevistadas quanto às condições socioeconômicas e ambientais familiares e tiveram o peso e a altura medidos. Resultados: a revisão da literatura evidenciou a multicausalidade do crescimento infantil e os principais indicadores antropométricos utilizados na sua avaliação. No artigo original observou-se que as crianças com BPN apresentaram médias menores em todos os indicadores nutricionais estudados, embora essa relação só tenha apresentado associação estatisticamente limítrofe (p=0,06) em relação à área muscular do braço. Encontrou-se ainda associação significante da média da espessura da PCT dos escolares com os fatores socioeconômicos familiares, representados pela renda familiar, escolaridade materna e posse de alguns bens domésticos. O mesmo foi observado em relação à ocorrência de hospitalização da criança, no ano anterior ao estudo, e com o estado nutricional materno, avaliado através do índice de massa corpórea. Conclusão: os fatores socioeconômicos eambientais familiares, o índice de massa corpórea materno e a ocorrência prévia de hospitalização da criança tiveram uma influência maior no estado nutricional de escolares nascidos a termo, avaliados através do depósito de gordura subcutânea, do que o peso ao nascer

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-01-22T14:30:44Z No. of bitstreams: 1 hudsoncaetanopolonini.pdf: 5158429 bytes, checksum: e80426644833041649bdb5efa0029dcc (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-01-25T18:54:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 hudsoncaetanopolonini.pdf: 5158429 bytes, checksum: e80426644833041649bdb5efa0029dcc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T18:54:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 hudsoncaetanopolonini.pdf: 5158429 bytes, checksum: e80426644833041649bdb5efa0029dcc (MD5) Previous issue date: 2014-04-16 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / No capítulo primeiro, objetivou-se avaliar o desempenho de permeação do veículo transdérmico magistral Pentravan para sistemas de distribuição transdérmica contendo Progesterona (P), Estradiol (E2) e Estriol (E3), isoladamente ou em associação de E2 + E3 (Biest). Um modelo experimental de pele humana feminina excisada foi utilizado para prever a permeação e a retenção das substâncias ativas em todas as camadas da pele. Além disso, o processo de fabricação para as formulações foi avaliado quanto à uniformidade de conteúdo das emulsões. Os métodos analíticos eco-friendly desenvolvidos para quantificação de hormônios sexuais femininos em emulsões transdérmicas foram adequados aos objetivos, o que foi comprovado através da validação dos mesmos. A avaliação do processo de manipulação das emulsões revelou que as embalagens à vácuo atualmente utilizadas por farmácias magistrais foram adequadas ao uso, e a utilização de moinho de rolos desempenhou papel fundamental na uniformidade de conteúdo de Eemuls e Biest. As taxas de liberação in vitro dos fármacos a partir de suas formulações foram adequadamente altas, e todas as formulações seguiram cinética de pseudo-primeira ordem, típica de produtos semissólidos. O estudo de permeação ex vivo demonstrou que todos as formulações foram capazes de promover a absorção transdérmica dos hormônios em quantidades comparáveis às praticadas atualmente por produtos industrializados. No capítulo segundo, duas partículas de titanato de bário (BT), da ordem micrométrica e manométrica, foram avaliadas quanto ao seu impacto em ambientes aquáticos. Uma caracterização dos materiais foi realizada. A seguir, utilizou-se duas algas (Chlorella vulgaris e Euglena gracilis) e uma cianobactéria (Anabaena flos-aquae) como organismos-modelo para avaliação da toxicidade. Tanto BT MP (micropartícula) quanto BT NP (nanopartícula) se mostraram carregadas negativamente, facilmente agregáveis, com uma taxa de liberação de íons Ba2+ para os meios de cultura que não ultrapassa 1,5%. BT mostrou um efeito tóxico estatisticamente significativo (p<0,05) no crescimento e na viabilidade celular de C. vulgaris desde 1 ppm, o que parece ser mediado por um estresse oxidativo induzido pelas próprias partículas ou pelos íons Ba2+ liberados no meio de cultura. BT tem um efeito tóxico muito baixo no crescimento de A. flos-aquae, porém ambas partículas afetam a viabilidade celular desde a menor concentração testada, o que ocorre por efeito indireto das mesmas no estresse oxidativo das células. BT apresentou um efeito tóxico estatisticamente significativo (p<0,05) no crescimento e na viabilidade celular de E. gracilis desde 1 ppm, efeito relacionado à endocitose das partículas numa quantidade tal que levou a uma ruptura de suas membranas. BT induziu estresse em todos os organismos-teste, o que foi evidenciado pelo aumento na atividade da superóxido dismutase, pela diminuição da eficiência fotossintética e pela dimuição dos níveis intracelulares de ATP. O comportamento de BT em meios de cultura sintéticos e naturais são diferentes, sendo os efeitos tóxicos mais pronunciados quando o crescimento é dado em água do Rio Sena. O tamanho de BT parece não influenciar os efeitos produzidos sobre o crescimento dos micro-organismos – embora a inibição do crescimento tenha sido pronunciada com o nanomaterial. / In Chapter 1, we aimed to evaluate the performance of the transdermal permeation of Pentravan vehicle for transdermal delivery of coumpounded systems containing progesterone (P), estradiol (E2) and estriol (E3), alone or as a combination of E2 + E3 (Biest). An experimental model of female excised human skin was used to predict the permeation and the retention of the active substances in all skin layers. Moreover, the manufacturing process for formulations were evaluated for content uniformity of the emulsions. The eco-friendly methods developed for quantification of female sex hormones in transdermal emulsions were appropriate, which has been proven through validation studies. The evaluation of the coumpounding process for the emulsions showed that the vacuum packaging currently used by pharmacies are suitable for use, and the use of roll mill played a key role in the uniformity of content for Eemuls and Biest. The in vitro release rates of the drugs from their formulations were adequately high, and all formulations followed pseudo-first order kinetics, typical of semisolid product. The ex vivo permeation study showed that all the formulations were able to promote transdermal absorption of hormones comparable to those currently practiced by industrialized products. In chapter 2, two particles of barium titanate (BT), micro- and nanosized, were evaluated for their impact on aquatic environments. A detailed characterization of the materials was carried out. We used two algae (Chlorella vulgaris and Euglena gracilis) and a cyanobacterium (Anabaena flos-aquae) as model-organisms for assessing toxicity. Both BT MP (microparticle) and BT NP (nanoparticle) were negative, easily aggregated, with a release rate of Ba2+ ions to media that did not exceed 1.5%. BT has a statistically significant toxic effect on cell growth and viability of C. vulgaris, from 1 ppm, which appears to be mediated by oxidative stress induced by the particles themselves or by Ba2+ ions released into the culture medium. BT has a very low toxic effect on the growth of A. flos-aquae, but both particles affect cell viability since the lowest concentration tested, which occurs by indirect effect on the cells. BT has a statistically significant toxic effect on cell growth and viability of E. gracilis, from 1 ppm, related to the effect of endocytosed particles in such an amount that a rupture of their membranes was caused. BT was able to stress all test-organisms, which was evidenced by the increase in superoxide dismutase activity, decreased photosynthetic efficiency and the decreased intracellular ATP levels. The behavior of BT in means of synthetic and natural culture was different, and the most pronounced toxic effects occurred when growth was given in water from the River Seine. The size of BT did not influence the effects on the growth of microorganisms - although growth inhibition has been more pronounced with the nanomaterial.

Em áreas endêmicas para leishmaniose visceral, a AIDS aumenta o risco de aparecimento desta doença de cem a mil vezes. Conhecem-se muitos estudos sobre leishmaniose visceral (LV) em HIV/AIDS no Mediterrâneo, mas, pouco sobre leishmaniose tegumentar (LT) em HIV/AIDS. No Brasil não se constatou, até o momento, um aumento de casos de co-infecção HIV-Leishmania, mas, isto pode ser conseqüente ao subdiagnóstico por várias causas incluindo o não conhecimento da apresentação clínica nesses casos. Pela prevalência maior da LT em relação à LV no Brasil, é de se supor que ocorram com freqüência casos de co-infecção com a forma tegumentar de leishmaniose no nosso meio. Como no Brasil não dispomos de estudos de descrição sistemática da apresentação clínica nos casos de co-infecção, um parâmetro importante visando o diagnóstico, realizou-se um estudo transversal e descritivo, durante um período de dois anos a partir de fevereiro de 2002, em dois centros de tratamento de doenças infecciosas em São Paulo. Partimos de uma população alvo de 113 pacientes com sorologia positiva para HIV, procedentes de área endêmica para leishmanioses, 69 com algum sintoma sugestivo de leishmaniose visceral ou tegumentar e 44 assintomáticos. Em dez pacientes foi diagnosticada leishmaniose por encontro de parasitos ou antígeno de Leishmania em tecidos, maioria (8/10) por busca ativa, sendo cinco casos de LV e cinco de LT. Baseados nesses casos, observamos que, o contato com área endêmica de leishmaniose mesmo por um período curto como duas semanas deva ser valorizado, principalmente se foi recente. Houve dificuldade no encontro de casos porque a leishmaniose não é considerado como diagnóstico diferencial de infecções intercorrentes nos casos de HIV/AIDS no nosso meio, houve presença concomitante de outras doenças oportunistas mais prevalentes e manifestações clínicas atípicas ou semelhantes a infecções oportunistas. xvi Os casos de LV apresentaram manifestações clássicas, enquanto que os casos de LT apresentaram lesões diversas, desde úlcera única até lesões múltiplas e polimórficas (placas infiltrativas, pápulas, nódulos, máculas), com tendência à disseminação atingindo mucosa e pele, incluindo área genital (em quatro dos cinco pacientes com LT). Em dois pacientes observaram-se aparecimento de lesões (num caso) e piora (noutro caso), após início da terapia antirretroviral altamente efetiva (HAART), com características sugestivas de síndrome inflamatória de recuperação imune. Quanto à classificação de HIV segundo CDC, oito pacientes eram C3 e dois B3 e todos apresentavam contagem de linfócitos T CD4+ menor que 200 células/?l. A sorologia para leishmaniose foi positiva em todos os casos de LV mas, positiva em três dos cinco casos de LT. O teste de Montenegro foi negativo nos dois casos de LV onde o teste foi realizado e positivo em todos os três pacientes de LT submetidos ao teste. No tratamento da leishmaniose, freqüentemente os pacientes apresentaram efeitos adversos aos medicamentos e obervou-se mortalidade alta (40%) e freqüência alta de recidiva nos pacientes sobreviventes (100% dos LT e 66% dos LV) / In endemic areas of visceral leishmaniasis (VL), AIDS increases the risk for VL in 100 to 1000 times. There are many studies on VL in HIV/AIDS patients from the Mediterranean basin but data on tegumentary leishmaniasis (TL) are scarce. In Brazil, no increase in the number of cases of HIV/Leishmania co-infection was reported so far, but it may be due to subdiagnosis owing to various reasons including ignorance on clinical features of the co-infected patients.. Since the prevalence of TL is greater than VL in Brazil, we presume that cutaneous or mucosal leishmaniasis would be frequent in cases of coinfection in our country. Since there are no studies on systematic description of clinical manifestations of HIV/Leishmania co-infection in Brazil, an important basis for diagnosis, study was done for a period of two years from February 2002 aiming description of clinical manifestations in a transversal study in two infectious disease reference centers in Sao Paulo city, Brazil. The target population was constituted by 113 HIV positive patients that reported some kind of contact with endemic area for leishmaniasis, 69 being with some symptoms suggestive of visceral or tegumentary leishmaniasis, and 44 asymptomatic. In ten patients diagnosis of leishmaniasis was established by the detection of amatigotes or Leishmania antigens in tissue samples, five presented VL and five TL. Eight of 10 were found by active search. Based in these cases, we noted that contact with endemic area, even for short time like two weeks has to be considered in the diagnosis, mainly if it occurred recently. The search for these cases were difficult because leishmaniasis is not considered within differential diagnosis ofopportunistic infections in HIV positive patients among physicians, and in addition more prevalent opportunistic infections were concomitantly present and the clinical features were atypical for leishmaniasis or similar to other opportunistic infections. Clinical manifestation of VL was classic, while that of TL was quite variable, ranging from single to multiple ulcers, with polimorphic xviii presentations (papules, nodules, infiltrative plaques, macules) that tended to disseminate to the other areas of skin and mucosa, including genital area (in four from five TL patients). In two patients appearance of lesions (in one case) and worsening of tegumentary manifestations (in another case) after introduction of highly active anti-retroviral therapy (HAART) were observed that were suggestive of the so called immune reconstitution inflammatory syndrome. Concerning CDC classification of HIV, eight patients were C3 and two B3, and all presented CD4+ T cell count lower than 200/?l. All the VL patients had anti-Leishmania antibody test positive, however in TL three of five cases of was positive. Leishmanin skin (Montenegro) test was negative in two cases of VL submitted to this test, and positive in all three TL patients evalued. Frequent toxicity and adverse events with treatments were observed, as well as high mortality (40%), and high frequency of relapses among survivors (100% of TL and 66% of VL cases)

Em áreas endêmicas para leishmaniose visceral, a AIDS aumenta o risco de aparecimento desta doença de cem a mil vezes. Conhecem-se muitos estudos sobre leishmaniose visceral (LV) em HIV/AIDS no Mediterrâneo, mas, pouco sobre leishmaniose tegumentar (LT) em HIV/AIDS. No Brasil não se constatou, até o momento, um aumento de casos de co-infecção HIV-Leishmania, mas, isto pode ser conseqüente ao subdiagnóstico por várias causas incluindo o não conhecimento da apresentação clínica nesses casos. Pela prevalência maior da LT em relação à LV no Brasil, é de se supor que ocorram com freqüência casos de co-infecção com a forma tegumentar de leishmaniose no nosso meio. Como no Brasil não dispomos de estudos de descrição sistemática da apresentação clínica nos casos de co-infecção, um parâmetro importante visando o diagnóstico, realizou-se um estudo transversal e descritivo, durante um período de dois anos a partir de fevereiro de 2002, em dois centros de tratamento de doenças infecciosas em São Paulo. Partimos de uma população alvo de 113 pacientes com sorologia positiva para HIV, procedentes de área endêmica para leishmanioses, 69 com algum sintoma sugestivo de leishmaniose visceral ou tegumentar e 44 assintomáticos. Em dez pacientes foi diagnosticada leishmaniose por encontro de parasitos ou antígeno de Leishmania em tecidos, maioria (8/10) por busca ativa, sendo cinco casos de LV e cinco de LT. Baseados nesses casos, observamos que, o contato com área endêmica de leishmaniose mesmo por um período curto como duas semanas deva ser valorizado, principalmente se foi recente. Houve dificuldade no encontro de casos porque a leishmaniose não é considerado como diagnóstico diferencial de infecções intercorrentes nos casos de HIV/AIDS no nosso meio, houve presença concomitante de outras doenças oportunistas mais prevalentes e manifestações clínicas atípicas ou semelhantes a infecções oportunistas. xvi Os casos de LV apresentaram manifestações clássicas, enquanto que os casos de LT apresentaram lesões diversas, desde úlcera única até lesões múltiplas e polimórficas (placas infiltrativas, pápulas, nódulos, máculas), com tendência à disseminação atingindo mucosa e pele, incluindo área genital (em quatro dos cinco pacientes com LT). Em dois pacientes observaram-se aparecimento de lesões (num caso) e piora (noutro caso), após início da terapia antirretroviral altamente efetiva (HAART), com características sugestivas de síndrome inflamatória de recuperação imune. Quanto à classificação de HIV segundo CDC, oito pacientes eram C3 e dois B3 e todos apresentavam contagem de linfócitos T CD4+ menor que 200 células/?l. A sorologia para leishmaniose foi positiva em todos os casos de LV mas, positiva em três dos cinco casos de LT. O teste de Montenegro foi negativo nos dois casos de LV onde o teste foi realizado e positivo em todos os três pacientes de LT submetidos ao teste. No tratamento da leishmaniose, freqüentemente os pacientes apresentaram efeitos adversos aos medicamentos e obervou-se mortalidade alta (40%) e freqüência alta de recidiva nos pacientes sobreviventes (100% dos LT e 66% dos LV) / In endemic areas of visceral leishmaniasis (VL), AIDS increases the risk for VL in 100 to 1000 times. There are many studies on VL in HIV/AIDS patients from the Mediterranean basin but data on tegumentary leishmaniasis (TL) are scarce. In Brazil, no increase in the number of cases of HIV/Leishmania co-infection was reported so far, but it may be due to subdiagnosis owing to various reasons including ignorance on clinical features of the co-infected patients.. Since the prevalence of TL is greater than VL in Brazil, we presume that cutaneous or mucosal leishmaniasis would be frequent in cases of coinfection in our country. Since there are no studies on systematic description of clinical manifestations of HIV/Leishmania co-infection in Brazil, an important basis for diagnosis, study was done for a period of two years from February 2002 aiming description of clinical manifestations in a transversal study in two infectious disease reference centers in Sao Paulo city, Brazil. The target population was constituted by 113 HIV positive patients that reported some kind of contact with endemic area for leishmaniasis, 69 being with some symptoms suggestive of visceral or tegumentary leishmaniasis, and 44 asymptomatic. In ten patients diagnosis of leishmaniasis was established by the detection of amatigotes or Leishmania antigens in tissue samples, five presented VL and five TL. Eight of 10 were found by active search. Based in these cases, we noted that contact with endemic area, even for short time like two weeks has to be considered in the diagnosis, mainly if it occurred recently. The search for these cases were difficult because leishmaniasis is not considered within differential diagnosis ofopportunistic infections in HIV positive patients among physicians, and in addition more prevalent opportunistic infections were concomitantly present and the clinical features were atypical for leishmaniasis or similar to other opportunistic infections. Clinical manifestation of VL was classic, while that of TL was quite variable, ranging from single to multiple ulcers, with polimorphic xviii presentations (papules, nodules, infiltrative plaques, macules) that tended to disseminate to the other areas of skin and mucosa, including genital area (in four from five TL patients). In two patients appearance of lesions (in one case) and worsening of tegumentary manifestations (in another case) after introduction of highly active anti-retroviral therapy (HAART) were observed that were suggestive of the so called immune reconstitution inflammatory syndrome. Concerning CDC classification of HIV, eight patients were C3 and two B3, and all presented CD4+ T cell count lower than 200/?l. All the VL patients had anti-Leishmania antibody test positive, however in TL three of five cases of was positive. Leishmanin skin (Montenegro) test was negative in two cases of VL submitted to this test, and positive in all three TL patients evalued. Frequent toxicity and adverse events with treatments were observed, as well as high mortality (40%), and high frequency of relapses among survivors (100% of TL and 66% of VL cases)

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-30T14:49:37Z No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-30T14:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) Previous issue date: 2010 / Fiocruz / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: A imunidade mediada por células tem um papel importante na resposta imune do hospedeiro à Leishmania. Em pacientes com leishmaniose cutânea, a presença de células ativadas tem sido correlacionada positivamente com o tamanho das lesões. Já a atividade citolítica de células T CD8 + vem sendo associada ao dano tecidual e à gravidade da forma mucosa. No entanto, não se sabe o perfil fenotípico induzido nas células de indivíduos clinicamente curados quando estes reencontram os antígenos de Leishmania. Objetivo: Identificar perfis imunológicos associados à cura clínica na leishmaniose cutânea, com foco na análise das características fenotípicas e funcionais de linfócitos T específicos para a Leishmania. Materiais e Métodos: Foram estudados 26 indivíduos curados de leishmaniose cutânea (LCC) divididos em dois grupos de acordo com o tempo de cura: (i) menor que 2 anos (<2 anos, n=13) e (ii) 2 a 5 anos (2-5 anos, n=13). Como grupo controle, foram utilizados 12 indivíduos sadios (IS) sem histórico prévio de leishmaniose. As células mononucleares do sangue periférico foram analisadas ex vivo e após cultivo in vitro na presença de antígenos de Leishmania (Ag-Lb). Foi analisada a expressão de moléculas de superfície relacionadas ao fenótipo dos linfócitos (CD3, CD4 e CD8), ao fenótipo funcional dos linfócitos de memória central (TMC) ou de memória efetora (TME) - (CCR7 e CD45RO), à ativação (CD69 e CD25), à citotoxicidade (C1.7) e à migração linfocitária (CLA). Essas moléculas foram avaliadas dentro da subpopulação de células T CD4+ e T CD8+. Resultados: A média da razão TCD4+/TCD8+ nos pacientes LCC foi similar nas células ex vivo e nas células estimuladas por Ag-Lb. Nos LCC, houve um aumento significativo do percentual de células CD25+ e CD69+ em T CD4+ e em T CD8+ após o estímulo com Ag-Lb. Houve uma correlação negativa entre o tempo de cura e o percentual de células T ativadas pelo antígeno (CD25 + e CD69+). Nos pacientes LCC, o percentual de linfócitos TME em CD4+ e CD8+ aumentou após o estímulo com Ag-Lb, quando comparado com as células ex vivo. Já o percentual de células TMC não se modificou. O percentual de células C1.7+ dentro de T CD8+ e de células CLA+ em T CD4+ e T CD8+ foi similar na análise de células ex vivo e após estímulo com Ag-Lb, em pacientes LCC. Nos IS, não foi observado aumento do percentual de células T para nenhuma das moléculas avaliadas, quando comparadas às células ex vivo e estimuladas com Ag- Lb. Conclusão: À medida que aumenta o tempo de cura clínica, há uma redução de moléculas associadas à ativação tanto em linfócitos T CD4+ quanto em T CD8+. Esses indivíduos apresentam um aumento de células de ME que poderiam participar no controle dos parasitos caso ocorra uma reinfecção. Além disso, as células expandidas não apresentaram moléculas de superfície relacionadas à citotoxicidade ou migração para a pele. Considerando que os pacientes curados possuem um padrão de resposta imunoprotetor, tal padrão pode ser considerado um parâmetro importante para a seleção de antígenos candidatos para uma vacina. / Introduction: The cell-mediated immunity plays an important role in the immune response of the host to Leishmania. In cutaneous leishmaniasis patients, the presence of activated cells has been positively correlated with lesion size. The cytolytic activity of T CD8+ cells has been associated with tissue damage and the severity of mucosal form. However, the phenotypic profile induced in cells of clinical cured individuals, when they are exposed to Leishmania antigens again, is not known. Objective: Identify imunological profiles associated with clinical cure in cutaneous leishmaniasis, with emphasis on phenotypical and functional characteristics of Leishmania-specific T cells. Materials and Methods: In the study, 26 individuals cured from cutaneous leishmaniasis (CCL) were divided in two groups according to the time of cure: (i) less than 2 years (<2 years, n=13) and (ii) from 2 to 5 years (2-5 years, n=13). As the control group, 12 healthy subjects (HS) without previous history of leishmaniasis were used. Peripheral blood mononuclear cells were evaluated ex vivo and after in vitro culture in the presence of Leishmania antigens (Lb-Ag). It was analysed the expression of surface molecules related with lymphocytes phenotype (CD3, CD4 and CD8), functional phenotype of central memory (TCM) or effector memory lymphocytes (TEM) - (CCR7 and CD45RO), activation (CD69 and CD25), citotoxicity (C1.7) and lymphocyte migration (CLA). These molecules were evaluated within subpopulations of CD4 + and CD8+ T cells. Results: The mean ratio T CD4+/T CD8+ in CCL patients was similar in ex vivo cells and in Lb-Ag stimulated cells. In CCL, there was a significant increase in the percentual of CD25 + and CD69+ in CD4+ and in CD8+ T cells after Lb-Ag stimulus. There was a negative correlation between the time of cure and the percentual of T cells activated by the antigen (CD25+ and CD69+). In CCL patients, the percentual of TEM lymphocytes in CD4+ and in CD8+ increased after Lb-Ag stimulus, when compared to ex vivo cells. The percentual of TMC cells has not altered. The percentual of C1.7+ cells within CD8+ T cells and CLA+ in CD4+ and in CD8+ T cells was similar to the analysis of ex vivo cells and after Lb-Ag stimulus, in CCL patients. In the HS, it was not observed an increase in the percentual of T cells in any of the molecules analised, when comparing ex vivo to Lb-Ag stimulated cells. Conclusions: As the time of cure increases, there is a decrease of molecules related to activation in both CD4+ and CD8+ T cells. These individuals present an increase in EM cells that could take part in the parasite control in case of reinfection. Moreover, expanded cells have not presented surface molecules related to citotoxicity or migration to skin. Considering that cured patients have a imunoprotective response profile, such profile should be considered as an important parameter for selection of antigen candidates for the development of a vaccine.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-30T22:59:34Z No. of bitstreams: 1 cintia_x_mello_ipec_pesquisaclinicadi_0002_2011.pdf: 6418751 bytes, checksum: 25c0176616e7ab31ae6bd91f77c3fd69 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-30T22:59:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cintia_x_mello_ipec_pesquisaclinicadi_0002_2011.pdf: 6418751 bytes, checksum: 25c0176616e7ab31ae6bd91f77c3fd69 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosa, causada por parasitas do gênero Leishmania, que apresenta características complexas em diferentes aspectos. O diagnóstico, sempre que possível, deve ser feito com base em evidências epidemiológicas, aspecto clínico e exames laboratoriais. Para pesquisa direta do parasito, são utilizados os procedimentos de escarificação e “imprint”, sendo a escarificação o método mais rápido, de menor custo e de fácil execução. Baseado nas características dos exames diretos para a confirmação dos casos de LTA, o Ministério da Saúde tem incentivado a implantação do procedimento de escarificação em todos os laboratórios centrais de saúde pública, sendo importantes tanto o conhecimento dos parâmetros de acurácia deste método quanto a padronização relacionada a forma de coleta e leitura, para que possa ser aplicado de forma uniformizada em todo o Brasil. Neste estudo, objetivamos avaliar a sensibilidade dos métodos diretos (“imprint”e escarificação), comparados com o teste padrão de referência (cultura). Além disso, buscamos estabelecer critérios de coleta e leitura com fins de uniformização do método para propor sua aplicação em diferentes regiões brasileiras. A população do estudo foi constituída de 110 pacientes com suspeita clínica de LTA que foram atendidos no Laboratório de Vigilância em Leishmanioses (VigiLeish/IPEC/Fiocruz) para avaliação clínica e coleta das amostras. Dentre os 110 pacientes analisados 40 foram confirmados com LTA. O “imprint” foi positivo em 28 pacientes conferindo sensibilidade de 70%, a escarificação realizada em borda externa foi positiva em 17 pacientes e em borda interna em 25 alcançando sensibilidade de 42,5% e 62,5% respectivamente. Além de mais sensível o material obtido da borda interna da lesão apresentou uma maior quantidade de células brancas e menos hemácias facilitando a leitura da lâmina. Os parâmetros de acurácia encontrados para os métodos diretos foram satisfatórios demonstrando que essas metodologias podem ser implantadas em todo o Brasil para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana. / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is an infectious disease caused by parasites of the genus Leishmania, which has complex characteristics in different aspects. The diagnosis, whenever possible, should be based on epidemiological evidence, clinical aspect and laboratory tests. Imprint and scraping procedures are used for direct detection of the parasite. Scraping is the quickest, low-cost and easy to conduct. Based on the characteristics of direct examination for the confirmation of ATL cases, the Brazilian Ministry of Health has encouraged the implementation of the scraping procedure in all Central public health laboratories. Thus the knowledge of the accuracy parameters of this procedure and the standardization of collection and reading methods are important for its application in a uniform manner throughout Brazil. In this study, we aimed to evaluate the sensitivity of direct methods (imprint and scraping), compared with the reference standard test (culture). Besides, we sought to establish collection and reading criteria with the purpose of standardizing the method to propose its application in different Brazilian regions. The study population comprised 110 patients with clinical suspicion of ATL who were treated at the Laboratory of Leishmaniasis Surveillance (VigiLeish/IPEC/Fiocruz) for clinical evaluation and sample collection. Among the 110 patients studied, 40 were confirmed with ATL. The imprint was positive in 28 patients granting sensitivity of 70%, scraping conducted in the outer edge was positive in 17 patients and in the inner edge in 25, reaching sensitivity of 42.5% and 62.5% respectively. The material obtained from the inner edge of the lesion was more sensitive and presented a larger amount of white cells and lesser red cells, favoring slide reading. Accuracy parameters found for the direct methods were satisfactory showing that they may be implemented in all Brazilian regions for the diagnosis of American tegumentary leishmaniasis.