Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of this study were to characterize root-knot and lesion nematode populations of sugar cane fields of the Rio Grande do Sul state, and to evaluate the reaction of sugar cane genotypes to Meloidogyne javanica and Pratylenchus zeae. The Meloidogyne spp. populations were characterized biochemically by esterase (Est), and morphologically by the configuration of perineal region of females. The Pratylenchus populations were identified by morphological and morphometric characters. Subsequently, the reaction of ten sugar cane cultivars to M. javanica and P. zeae was evaluated at greenhouse conditions. Ninety Meloidogyne sp. populations were detected of in 67.17% of collected samples and 12 esterastic phenotypes (Est) were identified. Among the root-knot nematode populations purified and identified, 32 of them presented the Est J3 phenotype (Rm: 1.00; 1.24; 1.40), 51 populations, Est J2 (Rm: 1.00; 1.23), and four populations the phenotype Est J2a (Rm : 1.00; 1.40), typical of M. javanica, that corresponded to 19.75%, 31.48% and 2.47% of the samples, respectively. Four populations of M. incognita Est I1 (Rm: 1.02), and 25 of M. incognita Est I2 (Rm: 1.02; 1:09) phenotypes, corresponding to 2.47% and 15.43% of Meloidogyne spp. samples, respectively, were also detected and identified. In addition, 12 populations were identified as M. arenaria Est A2 (Rm: 1.26, 1.32), three populations of M. ethiopica Est E3 (Rm: Rm: 0.92; 1.15; 1.32), three of M. hapla Est. H1 (Rm: 1.17), and just one of M. luci (Rm: 1.00; 1.16; 1.34), corresponding to 7.41, 1.85, 1.85 and 0.62% of the root-knot nematode populations, respectively. Among the atypical species detected in this study, six populations of Meloidogyne sp.1 were identified with the phenotype Est Sc 1 (Rm: 0.86; 0.94), 12 Meloidogyne sp.2 as Est Sc 2 (Rm: 1.05; 1.29), and nine Meloidogyne sp.3 as Est A1 (Rm: 1.26), corresponding to 4.47, 9.05, and 6.71% of the root-knot nematodepopulations, respectively. However, by the perineal configurations, these populations could not be identified. Pratylenchus spp. was detectedin 98,8% of the collected samples. In the samples morphologica and morphometrically characterized to species of Pratylenchus, 51 populations were identified as P. zeae (84.61%) and 23 populations as P. brachyurus (35.38%). Evaluating the resistance reaction of sugar cane genotypes to both nematodes, although M. javanica and P. zeae have showed FR> 1.00 for all tested genetic materials, it was verified different levels of susceptibility. However, lower M. javanica reproduction was observed in RB008347, RB877935, RB975944, and 'RB987932; and either for P. zeae in RB987932 and RB966928 genotypes. / Teve-se por objetivo neste estudo caracterizar as populações do nematoide das galhas e das lesões em um levantamento realizado em lavouras de cana-de-açúcar do Estado do Rio Grande do Sul; e, avaliar a reação de genótipos da cultura as espécies Meloidogyne javanica e Pratylenchus zeae. As populaçõesde Meloidogyne spp. obtidas foram caracterizadas bioquimicamente através da isoenzima esterase (Est), e morfologicamente através da configuração da região perineal das fêmeas. As populações de Pratylenchus foram identificadas por meio de caracteres morfológicos e morfométricos. Posteriormente, avaliou-se em casa de vegetação a reação de 10 genótipos de cana-de-açúcar a M. javanica e P. zeae. Detectou-se 90 populações de Meloidogyne spp. em 67,17% das amostras coletadas e identificou-se 12 fenótipos esterásticos (Est). Entre as populações do nematoide das galhas purificadas e identificadas, 32 apresentaramo fenótipo Est J3 (Rm: 1.00; 1.24; 1.40), 51 populações, Est J2 (Rm: 1,00; 1,23), e, quatro com o fenótipo Est J2a (Rm: 1.00; 1.40), tipicas de M. javanica, as quais corresponderam a 19,75%, 31,48% e 2,47%, respectivamente. Também foram detectadas e identificadas quatro populações de M. incognita Est I1 (Rm: 1.02) e 25 com o fenótipo Est I2 (Rm: 1.02; 1.09), as quais corresponderam a 2,47 % e 15,43% das amostras de Meloidogyne spp., respectivamente. Além disso, foram identificadas 12 populações de M. arenaria Est A2 (Rm: 1.26; 1.32), três de M. ethiopica Est E3 (Rm: 0.92, 1.15, 1.32), três de M. hapla Est H1 (Rm: 1.17), e uma de M. luci (Rm: 1.00; 1.16; 1.34) que corresponderam a 7,41, 1,85, 1,85 e 0,62% das populações encontradas, respectivamente. Entre as populações atípicas, foram detectadas seis populações de Meloidogyne sp.1 com o fenótipo Est Sc 1 (Rm: 0.86; 0.94), 12 de Meloidogyne sp.2 Est Sc 2 (Rm: 1.05; 1.29) e nove de Meloidogyne sp.3 Est A1 (Rm: 1.26), correspondendo a 4,47, 9,05, e 6,71% das populações do nematoide das galhas, respectivamente; no entanto, pelas configurações perineais,essas populações não puderam ser identificadas. Detectou-se Pratylenchus spp. em 98,8% das amostras coletadas. Nas amostras caracterizadas morfologicamente quanto às espécies do gênero Pratylenchus, foram identificadas 51 populações de P.zeae (84,61%)e 23 populações de P. brachyurus (35,38%). Na avaliação da reação da cana-de-açúcar aos dois nematoides, embora M. javanica e P. zeae tenham apresentado FR>1,00 em todos os genótipos testados, observou-se diferentes níveis de suscetibilidade; porém, menor reprodução de M. javanicafoi observada nos genótipos RB008347, RB877935, RB975944 e RB987932; e de P. zeae em RB987932 e RB966928.

Made available in DSpace on 2015-03-26T12:24:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2107014 bytes, checksum: a646700aff1c3e6a44a344a0051aa176 (MD5) Previous issue date: 2009-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Polyphenols found in mango pulp, including gallotannins, flavonol glycosides, gallic acid, benzophenone derivatives and mangiferin have shown anticancer activity. Biological activities of polyphenols have been related to their bioavailability. Deglycosylation by β-glucosidases is a critical step in the metabolism and absorption of dietary polyphenols in humans, which might influence their anticancer properties. The objective of this study was to elucidate the anti-cancer effects of mango polyphenols of several varieties (Francis, Kent, Ataulfo, Tommy Atkins and Haden) in different types of cancer. The antiproliferative effects of mango polyphenols were studied in vitro using different cancer cell lines including Molt-4 leukemia, A-549 lung, MDA-MB-231 breast, LnCap prostate, SW-480 colon cancer cells and the non-cancer colon cell line CCD-18Co. Molecular mechanisms involved on the anti-cancer activities of mango polyphenols were assessed. The effect of mango polyphenols on gene expression, cell cycle regulation and reactive oxygen species production on colon cancer cells SW-480 were investigated by RT-PCR, flow cytometry and fluorescence intensity measurement, respectively. The effect of the hydrolysis of mango polyphenols with β-glucosidase on their antioxidant activity, cancer cell-growth suppression activity and in vitro intestinal absorption through human colon adenocarcinoma Caco-2 cell monolayers was evaluated. In addition, the antiproliferative effect of high and low molecular weight polyphenols rich-fractions on colon (SW-480) and breast (MDA-MB-231) cancer cells was studied. Cell lines were incubated with Ataulfo and Haden phenolic extracts, which were selected based on their superior antioxidant capacity compared to the other varieties. Ataulfo and Haden polyphenols inhibited the growth of all human cancer cell lines. SW-480 (colon cancer), MOLT-4 (leukemia) and MDA-MB-231 (breast-cancer) were statiscally equally most sensitive to Ataulfo, whereas SW-480 and MOLT-4 were the most sensitive cell lines to Haden, as determined by cell counting. The efficacy of phenolic extracts from all mango varieties in inhibiting cell growth was tested on SW- 480 colon carcinoma cells. Ataulfo and Haden demonstrated superior efficacy, followed by Kent, Francis and Tommy Atkins. At 5 mg GAE/L, Ataulfo inhibited the growth of colon SW-480 cancer cells by ~79% while the growth of non-cancer colonic myofibroblasts CCD-18Co cells was not inhibited. The growth inhibition exerted by Ataulfo and Haden polyphenols on SW-480 cells was associated with an increased mRNA expression of pro-apoptotic biomarkers (caspase 8, Bax and Bim) and cell cycle regulators (PKMYT1), cell cycle arrest and an alteration in the generation of reactive oxygen species. Phenolic extracts from mango pulp contained gallic acid, mangiferin, phenolic acid derivatives and gallotannins, which were characterized by HPLC-DAD and HPLC-ESI-MSn analysis before and after enzymatic hydrolysis (0.17 mg β- glucosidase 1000 KU/g mango pulp/ 4 h / 35°C). Phenolic acids including gallic, caffeic, ferulic, p-coumaric and p-hydroxybenzoic acids consisted the main compounds derived from enzymatic hydrolysis. Caco-2 cell monolayers were incubated for 2h on the apical side with hydrolyzed and non-hydrolyzed mango extracts. Gallic, caffeic, ferulic, p-coumaric, vanillic and p-hydroxybenzoic acids were detected on the basolateral side for hydrolyzed extract but only gallic acid was detected for the nonhydrolyzed extract. High molecular weight polyphenols, mangiferin and gallotannins, were not transported. Mango pulp polyphenols (control) from all varieties inhibited the proliferation of HT-29 colon (0-27 μg of gallic acid equiv/mL) and MDA-MB-231 breast (0-24 μg GAE/ mL) human cancer cells by up to 99.8 and 89.9 %, respectively. Despite enhanced absorption facilitated by enzymatic hydrolysis, a significant increase in antioxidant activity, phenolic content and antiproliferative effects on breast and colon cancer cells was not observed. Additionally, both high (422; 788-1852 Da) and low (138-194 Da) molecular weight polyphenols rich-fractions equally inhibited cell proliferation of colon and breast cancer cells at the same extent (0-20 μg of gallic acid equiv/mL), which may indicate that the anti-cancer efficacy of mango polyphenolics is not dependent on enzymatic hydrolysis. These results corroborate previous findings from in vivo studies, which suggest that the most of mango polyphenols are not absorbed intact through the small intestine, but may be hydrolyzed by intestinal enzymes into low molecular weight aromatic acids, which would be later absorbed; or when polyphenols are not absorbed, they likely reach the large intestine, modulating the gut microflora, and thus they contribute to reduce the risk of colon carcinogenesis. Overall, polyphenols from several mango varieties exerted anti-cancer effects, and these effects may not require enzymatic hydrolysis by β-glucosidase. / Polifenóis presentes em polpa de manga, incluindo galotaninos, glicosídeos de flavonóides, ácido gálico, derivados da benzofenona, e mangiferina, têm demonstrado propriedades anticarcinogênicas. A etapa de deglicosilação por β-glicosidases tem se mostrado necessária ao metabolismo e à absorção de polifenóis derivados da dieta pelo organismo humano, o que poderia influenciar suas propriedades anticarcinogênicas. O objetivo deste estudo foi elucidar os efeitos anticarcinogênicos de polifenóis extraídos da polpa de manga de diferentes variedades (Francis, Kent, Ataulfo, Tommy Atkins e Haden) em diferentes tipos de câncer. Os efeitos antiproliferativos de polifenóis de manga foram estudados utilizando modelos in vitro de cultura de células cancerosas, incluindo as linhagens celulares de câncer humano Molt-4 (leucemia), A-549 (câncer de pulmao), MDA-MB-231 (câncer de mama), LnCap (câncer de próstata), SW-480 (câncer de colón) e células de colón não cancerosas CCD-18Co. Os mecanismos moleculares envolvidos nas propriedades anticarcinogênicas de polifenóis de manga foram investigados. O efeito do tratamento com polifenóis na expressão gênica, na regulação do ciclo celular e na produção de espécies reativas de oxigênio em células cancerosas de colón humano SW-480 foi investigado por RT-PCR, citometria de fluxo e quantificação da intensidade de fluorescência, respectivamente. Além disso, o efeito da hidrólise de polifenóis de manga pela enzima β-glicosidase na atividade antioxidante, na supressão do crescimento tumoral e na absorção intestinal in vitro através da monocamada de células de adenocarcinoma de colón humano Caco-2 foi avaliado. Ademais, o efeito antiproliferativo de frações fenólicas enriquecidas com polifenóis de baixo e elevado peso molecular em células cancerosas de colón (SW-480) e mama (MDA-MB-231) foi estudado. Células cancerosas foram tratadas com extratos fenólicos das variedades Ataulfo e Haden, as quais foram selecionadas em razão da maior capacidade antioxidante quando comparada a outras variedades. Polifenóis de Ataulfo e Haden inibiram o crescimento de todas as linhagens celulares. SW-480 (câncer de cólon), MOLT-4 (leucemia) e MDA-MB-231 (câncer de mama) apresentaram igualmente maior sensibilidade ao tratamento com polifenóis de Ataulfo, enquanto SW- 480 e MOLT-4 mostraram-se mais sensíveis ao tratamento com polifenóis de Haden, segundo resultados obtidos por contagem de células. O efeito antiproliferativo dos extratos fenólicos de todas as variedades de manga foi avaliado em células cancerosas de colón humano (SW-480). As variedades Ataulfo e Haden demonstraram maior efeito supressor, seguidas de Kent, Francis e Tommy Atkins. Quando células cancerosas de colón SW-480 foram tratadas com 5 mg GAE/L de polifenóis de Ataulfo, o crescimento celular foi inibido em ~79%, enquanto a proliferação de miofibroblastos não cancerosos CCD-18Co não foi inibida. A supressão do crescimento celular pelo tratamento com polifenóis de Ataulfo e Haden em células de câncer de colón SW-480 foi associada com o aumento na expressão gênica de biomarcadores de apoptose (caspase 8, Bax e Bim) e reguladores do ciclo celular (PKMYT1), atraso do ciclo celular e alteração na produção de espécies reativas de oxigênio. Os extratos fenólicos da polpa de manga continham ácido gálico, mangiferina, derivados de ácidos fenólicos e galotaninos, os quais foram caracterizados por análises em HPLC-DAD e HPLC-ESI-MSn antes e após a hidrólise enzimática (0.17 mg β-glicosidase 1000 KU/g polpa de manga / 4 h / 35°C). Ácidos fenólicos incluindo ácido gálico, caféico, ferúlico, p-coumárico e p-hidroxibenzóico consistiram os principais compostos derivados da hidrólise enzimática. Monocamadas de células Caco-2 foram incubadas por 2h no compartimento apical com extratos controle e hidrolisado. Quando incubadas com o extrato hidrolisado, ácido gálico, caféico, ferúlico, p-coumárico, vanílico e p-hidroxibenzóico foram detectados no compartimento basolateral, enquanto apenas ácido gálico foi detectado quando as células foram tratadas com o extrato controle. Polifenóis de elevado peso molecular, incluindo mangiferina e galotaninos, não foram transportados. Polifenóis de polpa (controle) de todas as variedades inibiram a proliferação de células humanas de câncer de colón HT-29 (0-27 μg de ácido gálico equiv./mL) e de mama MDA-MB-231 (0-24 μg GAE/mL) em até 99.8 e 89.9 %, respectivamente. Apesar da hidrólise enzimática ter aumentado a absorção de polifenóis de manga, não houve aumento significativo na atividade antioxidante, no conteúdo fenólico e na supressão do crescimento de células cancerosas de colón e mama. Ademais, ambas as frações fenólicas enriquecidas com polifenóis de baixo (138-194 Da) e elevado (422; 788-1852 Da) peso molecular inibiram o crescimento de células cancerosas de colón e mama na mesma extensão (0- 20 μg GAE/mL), o que poderia indicar que a atividade anticarcinogênica de polifenóis de manga seria independente da hidrólise enzimática. Estes resultados corroboram resultados obtidos em estudos in vivo, que sugerem que a grande parte dos polifenóis não seriam absorvidos em sua forma intacta através do intestino delgado, mas poderiam ser hidrolisados por enzimas intestinais em ácidos aromáticos de baixo peso molecular, os quais seriam posteriormente absorvidos; ou ainda, quando não absorvidos, poderiam, alcançar o intestino grosso, modulando a microflora intestinal e, desta forma, contribuiriam para reduzir o risco de câncer de cólon. Desta forma, polifenóis de polpa de manga de diferentes variedades exibiram efeitos anticarcinogênicos em modelos de cultura de células, os quais poderiam não ser necessariamente dependentes da hidrólise enzimática pela β-glicosidase.

Apis mellifera é uma espécie de abelha bastante estudada sob diferentes perspectivas, tanto em pesquisas básicas como aplicadas. Possui uma natureza singular associada não só a interesses econômicos como produção de cera, mel, própolis, geléia real, pólen, mas também, por seu potencial agrícola como polinizador. Esta espécie tem sido alvo de muitos estudos morfométricos, principalmente pela sua importância ecológica, pela sua grande capacidade de adaptação, sua ampla distribuição e por serem capazes de se estabelecer eficientemente em diversos ambientes. A morfometria geométrica permite uma análise rigorosa da variação da forma de uma determinada estrutura em organismos de diversos tamanhos, principalmente utilizando métodos de estatística multivariada, além de ser capaz de avaliar a instabilidade no desenvolvimento de um organismo. O presente trabalho teve como objetivo estudar as variações da forma e tamanho em asas e corbículas de operárias de Apis mellifera, provenientes das 5 regiões geográficas do Brasil, utilizando análises morfogeométricas. A existência de padrões de variação de forma e tamanho das abelhas africanizadas no Brasil obtidos há 16 anos em estudo clássico realizado por Diniz-Filho e Malaspina, possibilitou uma análise espaço-temporal comparativa com os resultados obtidos utilizando recursos tecnológicos atuais para a avaliação de dados morfométricos, bem como, verificar por meio das análises de assimetria flutuante a plasticidade fenotípica no tamanho e forma da asa e corbícula dessa espécie, possibilitou ainda, avaliar se condições adversas relacionadas às ações antrópicas influenciam no aumento de desvios na simetria bilateral desses caracteres morfológicos. Foi realizada uma amostragem abrangendo as 5 regiões geográficas do Brasil, pela forma das asa e análises multivariadas verificou-se que existe um padrão geográfico entre as populações de Apis mellifera no Brasil (P < 0,001). Essas variações geográficas podem ser devidas à grande extensão territorial, além da possível associação das diferenças entre ecorregiões. Verificou-se, também, a presença de assimetria flutuante na forma das asas e das corbículas de Apis mellifera em todas as populações estudadas, porém, na análise multivariada e assimetria do tamanho não obteve significância em algumas populações, constatando-se que para estudo de assimetria e distribuição populacional a forma da asa e das corbículas é a análise mais indicada e que apresenta maior precisão. / Apis mellifera is bee specie very studied under different perspectives, as for basic studies to applied ones. They have a singular nature, not only associated to economic issues as wax, honey, propolis, royal jelly and pollen production, but also for their agricultural potential as pollinators. This specie has been long aimed for morphometric studies, because of its ecological importance, easy capacity of adaptation, large distribution and for being able of efficient establishment in diverse environments. The geometric morphometric allows rigorous analyses in shape variation of a given structure in organism of diverse sizes, especially when using multivariate statistics methods, enabling the evaluation of instability in the development of an organism. The present study aim the variations of shape and size in wings and pollen basket from workers of Apis mellifera, acquired at 5 geographic regions of Brazil, using morphogeometric analyses. The existence of variation patters in shape and size of Africanized bees in Brazil, obtained 16 years ago in classic study made by Diniz-Filho and Malaspina, made possible a comparative spatialtemporal analyses with the results obtained in this study, using updated technology resources for evaluation of morphometric data, as well as the phenotypic plasticity exam of size and shape in wings and pollen basket of this specie, using fluctuating asymmetric analysis, and evaluate if diverse conditions made by anthropomorphic actions has influence on the deviation increase among bilateral symmetry of this morphological characters. The sample was made including 5 geographic regions of Brazil. By the wings size shape and multivariate analyses, it was verified the existence of a geographic pattern among Brazilian Apis mellifera populations (P< 0,001). Those geographical variations may be caused due to the big territorial expansion, alongside with the possible association of different ecoregions. It was also verified floating asymmetric in the shape of wings and pollen basket from Apis mellifera in all studied populations, however, in the multivariate analyses the asymmetry in shape was not significant in some populations, showing that, for studies of asymmetry and populational distribution, the shape of wings and pollen basket is the most indicated and precise analyses.

O gênero Nocardia é composto por bactérias gram-positivas e filamentosas, que normalmente só causam doença em indivíduos imunocomprometidos. No entanto, certo número de infecções por nocardia têm sido relatados em pacientes imunocompetentes. Nos últimos anos, observou-se um aumento da frequência de infecções por Nocardia spp. e, com o aumento do número de espécies descritas, a identificação correta tem sido de difícil obtenção mas de grande importância para a aplicação do tratamento correto e elucidação epidemiológica. O objetivo deste estudo foi caracterizar, por métodos fenotípicos e moleculares, 72 isolados de Nocardia spp. de interesse médico, avaliando as metodologias para elaborar um algoritmo de identificação. Os isolados foram provenientes da Micoteca do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo e da rotina do Núcleo de Tuberculose e Micobacterioses do Instituto Adolfo Lutz. Os isolados foram identificados por testes fenotípicos, identificação molecular por análise de restrição (PRA-hsp65), sequenciamento dos genes hsp65 e 16S rRNA e MALDI-TOF MS (Matrix-associated laser desorption time of flight mass spectrometry). O perfil de suscetibilidade foi analisado pelo método de Concentração Inibitória Mínima (MIC) e disco difusão (DD), com os fármacos: amicacina, ciprofloxacina, minociclina, tobramicina, amoxacilina+ácido clavulânico, imipenem e sulfametoxazol+trimetoprim. Os resultados revelaram que a identificação fenotípica foi insuficiente para definir as espécies. Apenas 24 (33,4%) isolados tiveram identificação fenotípica concordante com o sequenciamento do gene 16S rRNA. Na analise feita pela técnica de PRA-hsp65 foram observados 20 (27,8%) N. brasiliensis, seis (8,3%) isolados de outras espécies de nocardias e 38 (52,8%) foram considerados novos padrões (NP). Foi detectado um isolado misto e em cinco isolados não foi obtido produto de amplificação. O sequenciamento do gene hsp65 proporcionou a identificação de 51 isolados como Nocardia, 14 foram identificados como pertencentes a outros gêneros, dos quais, um apresentou mistura de nocardia e micobactéria, sendo identificado como Mycobacterium abscessus no gene hsp65 (análise in silico) e N. otitidiscaviarum no gene 16S rRNA. Sete isolados não foram sequenciados devido à ausência de amplificação do fragmento. Os isolados analisados através do sequenciamento do gene 16S rRNA, foram identificados como Nocardia (57-79,2%), Gordonia (7-9,7%), Rhodoccocus (3-4,2%), Tsukamurella (2-2,8%), Mycobacterium (2-2,8%) e Streptomyces (1-1,3%). Para a análise de MALDI-TOF MS foi observado que, dos 72 isolados estudados, 49 foram identificados como Nocardia, 11 como pertencentes a outros gêneros e 12 amostras não puderam ser identificadas devido aos valores de leitura não serem adequados para análise. Pela primeira vez o corante resazurina foi utilizado para leitura de MIC de Nocardia sp. Entre os fármacos testados através do MIC, os que apresentaram maior sensibilidade foram amicacina (100%) e tobramicina (84%). As maiores resistências foram encontradas com os fármacos sulfametoxazol+trimetoprim (76%) e imipenem (54%). Devido à ausência de critérios interpretativos de disco difusão para o gênero Nocardia, foi elaborado um critério para o presente estudo. Os resultados obtidos no teste de DD mostraram 100% de sensibilidade para os fármacos amicacina, minociclina e sulfametoxazol+trimetroprim. Os isolados apresentaram a maior porcentagem de resistência ao fármaco ciprofloxacina (64%). Comparando os resultados de DD com os obtidos no MIC, observamos que os fármacos ciprofloxacina, imipenem e sulfametoxazol+trimetoprim apresentaram porcentagem de discordância acima de 20%. O fármaco sulfametoxazol+trimetoprim teve a maior discordância (>75%), com elevada porcentagem de isolados resistentes na MIC, mas baixa porcentagem de resistência em DD. O único fármaco com 100% de concordância entre os resultados foi amicacina. Foi elaborado um algoritmo de identificação que utiliza técnicas fenotípicas para triagem para diferenciar nocardias de outros gêneros. A identificação por PRA-hsp65 será útil na rotina de laboratório de micobactérias como identificação presuntiva. A identificação definitiva das espécies deve ser obtida pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. / The genus Nocardia comprises filamentous gram-positive bacteria that usually cause disease only in immunocompromised individuals. However, a number of Nocardia infections have been reported in immunocompetent patients. Overall, it has been reported in the recent years an increased frequency of infections caused by Nocardia spp. due to an also increasing number of species, making the correct identification of the species more difficult. Correct identification assumes a major importance with respect to antimicrobial treatment\'s choice as well a for epidemiological investigation purposes. The objective of this study was to characterize by phenotypic and molecular methods 72 isolates of Nocardia spp. of medical interest, designing the methodologies for an identification algorithm. The isolates were obtained from the fungal collection of the Tropical Medicine Institute of São Paulo and the routine service of the Tuberculosis and Mycobacteriosis Center of the Adolfo Lutz Institute. The isolates were identified by phenotypic testing, molecular identification by restriction analysis (PRA-hsp65), hsp65 and 16S rRNA genes sequencing, and MALDI-TOF MS (matrix-associated laser desorption time-of-flight mass spectrometry). The susceptibility profile was analyzed by the Minimum Inhibitory Concentration method (MIC) and disk diffusion (DD), with the following drugs: amikacin, ciprofloxacin, minocycline, tobramycin, amoxicillin+ clavulanic acid, imipenem and sulfamethoxazole trimethoprim. The results showed that the phenotypic identification was insufficient to define the species. Only 24 (33.4%) of the isolates had phenotype identification that was concordant with the 16S rRNA gene sequencing. In the analysis made with the PRA-hsp65 technique were observed 20 (27.8%) N. brasiliensis and six (8.3%) isolates from other species of Nocardia spp., while 38 isolates (52.8%) were considered as new standards (NP). Also by this technique a mixed isolate was detected and an amplification product was not obtained in five isolates. The hsp65 gene sequencing provided identification of 51 isolates as Nocardia, 14 were identified as belonging to other genera, one of them being identified either as Mycobacterium abscessus by in silico analysis of the hsp65 gene and as N. otitidiscaviarum by the 16S rRNA gene sequencing. Seven isolates were not sequenced due to the absence of the amplified fragment. The isolates analyzed by 16S rRNA gene sequencing were identified as Nocardia (57 to 79.2%), Gordonia (7 to 9.7%), Rhodoccocus (3 to 4.2%), Tsukamurella (2-2, 8%), Mycobacterium (2 to 2.8%) and Streptomyces (1-1.3%). By MALDI-TOF MS analysis of the 72 isolates, 49 were identified as Nocardia, 11 were identified as belonging to other genera and 12 isolates could not be identified because the samples provided reading values that were inadequate for analysis. For the first time, to our knowledge, the resazurin dye was used to determine the MICs of Nocardia sp. Among the drugs tested, the most sensitives were amikacin (100%) and tobramycin (84%). The higher resistances were found with trimethoprim-sulfamethoxazole (76%) and imipenem (54%). Due to the absence of establishe criteria for the interpretation of the disk diffusion assay with Nocardia, we designed a specific criterion for this study. The results obtained in the DD test showed 100% sensitivity for the drugs amikacin, minocycline and trimethoprim-sulfamethoxazole. The isolates showed the highest percentage of resistance to ciprofloxacin drug (64%). Comparing the results with those obtained with DD and MIC, we observed that ciprofloxacin, imipenem and sulfamethoxazole-trimethoprim showed a percentage of disagreement above 20%. The sulfamethoxazole-trimethoprim drug had the highest discrepancy (> 75%), with high percentage of resistant isolates with MIC but low percentage of resistance in DD. The only drug with 100% agreement between the both results was amikacin. We designed a recognition algorithm using phenotyping techniques to screen and differentiate nocardias from other genera. The identification by PRA-hsp65 will be useful in routine mycobacteria laboratory as a presumptive identification tool. The final identification of the species should be obtained by sequencing the 16S rRNA gene.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-10-13T17:13:38Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Victor de Melo Caixeta - 2015.pdf: 2750656 bytes, checksum: c7c2c97e0c6537b3d17aa54409152ad3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-10-14T20:03:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação Victor de Melo Caixeta - 2015.pdf: 2750656 bytes, checksum: c7c2c97e0c6537b3d17aa54409152ad3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T20:03:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Victor de Melo Caixeta - 2015.pdf: 2750656 bytes, checksum: c7c2c97e0c6537b3d17aa54409152ad3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-10-15 / Background: Corticobasal Degeneration (CBD) is an rare and heterogeneous disease in its presentations, representing an great diagnostic challenge. There aren´t, in Brasil, large CBD case series, and there aren´t many in the world as well. Its cognitive and behavioural aspects have received little (despite growing) attention. Objectives: To describe sociodemographic, clinic, neuropsychiatric, neuropathological, and neuroradiologic aspects in a large brazilian DCB case series. To perform a literature review on CBD, with special focus on cognitive and behavioural aspects. Methods: 70 patients data was collected, with CBD diagnosis according to the Cambridge criteria modified by Bak and Hodges (2011). The patients underwent clinical, neuropsychiatric, neuroradiologic (structural and functional) and pathologic (in six cases) retrospective analysis. There were studied clinical, sociodemographic, neuropsychiatric, neuroanatomic variables and family history. Results and Discussion: The mean age at onset was 62.8 years (sd=9,5), and both sexes were equally affected (52,9% male). Hemispheric asymmetry was present in 97% of cases, and the left brain hemisphere was the most affected (68,2% of cases). The most frequent initial presentation was “psychiatric” (with changes in behaviour and/or mood), present in 68,1% of cases, followed by motor-extrapyramidal presentation (54.3%). In the course of the disease, the predominant clinical form (phenotype) was the extrapyramidal-motor with 61.4% of cases, followed by "psychiatric" with 51.4%. There were five cases with presentation of Posterior Cortical Atrophy (PCA) In 37.7% there were not found classic CBD syndromes (e.g., alien hand syndrome). We found 18.7% of cases with family DCB, with four families presenting a phenotype not yet described, of CBD with NPH (Normal Pressure Hydrocephalus). We also observed cognitive and functional impairments in the evaluated scales (MMSE, Pfeffer and CDR), and frequent medical and psychiatric comorbidities, especially diabetes mellitus (23.5%), hypothyroidism (22.1%) and Bipolar Spectrum Disorders (46, 4%), the last two significantly more frequent in the sample. There were six cases of rapidly progressive DCB and six confirmed by autopsy CBD cases in the sample. Conclusion: We observed, in agreement with the literature, a wide variety of CBD presentations, including new and little described phenotypes (NPH and PCA). In the characterization of the sample, we observed a great prevalence and importance of cognitive, affective and behavioural presentations. / Introdução: A Degeneração Corticobasal (DCB), é uma doença rara e heterogênea em suas apresentações, representando um grande desafio diagnóstico. Não há descrições de grandes amostras de DCB no Brasil, e poucas no mundo. Seus aspectos cognitivos e comportamentais têm recebido pouca (apesar de crescente) atenção. Objetivos: Descrever aspectos sociodemográficos, clínicos, neuropsiquiátricos, neuropatológicos e de neuroimagem em uma grande série de casos brasileiros com DCB. Realizar uma revisão da literatura sobre a DCB, com especial enfoque em aspectos cognitivos e comportamentais. Metodologia: Foram colhidos dados de 70 pacientes com DCB de acordo com critérios de Cambridge modificados por Bak e Hodges (2011). Os pacientes foram submetidos à avaliação retrospectiva clínica e neuropsiquiátrica, de neuroimagem estrutural e funcional e seis pacientes ao exame neuropatológico. Foram estudadas variáveis sociodemográficas, clínicas, neuropsiquiátricas, neuroanatômicas, e antecedentes familiares. Resultados e Discussão: A idade média de início dos sintomas foi de 62,8 anos (dp=9,5), sendo os dois sexos igualmente afetados (52,9% masculino). Assimetria hemisférica esteve presente em 97% dos casos e o hemisfério esquerdo foi o mais acometido (68,2% dos casos). A apresentação inicial mais freqüente foi a “psiquiátrica” (com alterações do comportamento e/ou humor), presente em 68,1% dos casos, seguida da apresentação motora-extrapiramidal (54,3%). No decorrer da doença, a forma clínica (fenótipo) predominante foi a motora-extrapiramidal, com 61,4% dos casos, seguida da “psiquiátrica”, com 51,4%. Houve cinco casos com apresentação de Atrofia Cortical Posterior (ACP). Em 37,7% não ocorreram achados clássicos da DCB (por exemplo, síndrome da mão estrangeira). Encontramos 18,7% de casos com DCB familiar, com quatro famílias apresentando um fenótipo ainda não descrito, de DCB com HPN (Hidrocefalia de Pressão Normal). Observamos também prejuízos cognitivos e funcionais nas escalas avaliadas (MEEM, Pfeffer e CDR), e comorbidades clínicas e psiquiátricas frequentes, em especial Diabetes Mellitus (23,5%), hipotireoidismo (22,1%) e Transtornos do Espectro Bipolar (46,4%), os dois últimos com frequência na amostra significativamente maior que na população. Houve seis casos de DCB rapidamente progressiva e seis casos confirmados por necropsia na amostra. Conclusão: Observamos, em consenso com a literatura, uma grande variedade de apresentações da DCB, inclusive com formas novas e pouco descritas (HPN e ACP). Na caracterização da amostra, percebemos grande frequência e importância das apresentações comportamentais, afetivas e cognitivas.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-23T15:45:38Z No. of bitstreams: 2 Tese - Gilmarcos de Carvalho Corrêa - 1999.pdf: 2739710 bytes, checksum: 8a4b2be8043e18364d31b49cc239f5ec (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-23T15:46:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Gilmarcos de Carvalho Corrêa - 1999.pdf: 2739710 bytes, checksum: 8a4b2be8043e18364d31b49cc239f5ec (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-23T15:46:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Gilmarcos de Carvalho Corrêa - 1999.pdf: 2739710 bytes, checksum: 8a4b2be8043e18364d31b49cc239f5ec (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 1999-03-26 / This study was carried out with 150 plants of baru (Dipteryx alata Vog.) from three regions of Goiás State. It had 50 plants per region, and it were randomizes choiced at 1995. The purpose was to verify the occurence and distribution of genetic variation among tested populations. Fruits and seeds were analysed about morphological characters. Emersion and initial development of plantas were analysed too. The experiment was planted as hierarchal model with regions level, plants within regions and fruits within plants. There was variation to all morphological characters in fruits and seeds at regions and plants within regions levels. There was no variation about plant emersion percentage and emersion velocity index (EVI). There ws variation about emersion velocity (days). Plant height and basis diameter at 30 days after emersion showed variation at regions and plants within regions levels. The most variation proportion was founded at plants within regions level with high levels of transmission to all characters. / O estudo foi conduzido com 150 plantas de baru (Dipteryx alata Vog.), 50 plantas por região, originárias de três regiões do Estado de Goiás, escolhidas, aleatoriamente, no ano de 1995. O objetivo foi verificar a ocorrência e distribuição da variabilidade genética das populações amostradas. Foram avaliados caracteres morfológicos de frutos e sementes, além de características de emergência e desenvolvimento inicial de plantas. Adotou-se, para o experimento, o modelo hierárquico com os níveis de regiões, plantas dentro de regiões e frutos dentro de plantas. Houve variação para todas as variáveis morfológicas de frutos e sementes, entre plantas de diferentes regiões, e entre plantas dentro de regiões. Não houve variação entre frutos dentro de plantas para nenhuma das variáveis avaliadas. Não houve variação entre progênies das plantas, para percentual de emergência de plantas e índice de velocidade de emergência (IVE), em qualquer dos níveis testados. As progênies apresentaram variação, entre e dentro de regiões, para velocidade de emergência em dias, e altura e diâmetro basal de plantas aos 30 dias após a emergência das mesmas. Maior proporção da variabilidade foi observada entre plantas dentro de regiões, com altos níveis de herdabilidade, no sentido amplo, para todas as variáveis estudadas.

A família Baculoviridae é um grande grupo de vírus com cerca de 700 espécies de insetos hospedeiros, com dois fenótipos: o ODV (occlusion derived virion), que faz a infecção primária do intestino médio; e o BV (budded virus), responsável pela infecção sistêmica. No Brasil, o nucleopoliedrovírus Anticarsia gemmatalis (AgMNPV) é utilizado como controle biológico da lagarta-da-soja Anticarsia gemmatalis. O genoma do AgMNPV-2D contém 152 ORFs, 26 das quais codificam proteínas estruturais. Entre elas, a glicoproteína GP64 é fundamental para infecção secundária. Este estudo visa identificar proteínas estruturais do AgMNPV-2D por duas abordagens de espectrometria de massas. Também comparar a variabilidade da gp64 de isolados geográficos por sequenciamento por Sanger e de alta cobertura. Assim, identificamos as substituições de gp64 e vimos que ela não suporta a separação geográfica dos isolados. Também identificamos 44 e 33 proteínas em ODV e BV, respectivamente. Seis novas proteínas foram identificadas no ODV e sete delas no BV. Além disso, 11 proteínas celulares foram identificadas no AgMNPV-2D, possivelmente necessárias para infecção. Este achado contribui para o entendimento da morfogênese do AgMNPV e fatores associados à multiplicação viral. / Baculoviridae are arthropod-specific viruses with more than 700 host insects, which produce two phenotypes: the budded virus (BV) and, the occlusion-derived virus (ODV) for intra and across host spread, respectively. Brazil uses the Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) as a biological control agent of the velvet bean caterpillar (A. gemmatalis). The genome of the AgMNPV-2D carries 152 ORFs, 26 of which code for structural proteins. Herein, the structural proteins of AgMNPV-2D were analyzed by two mass spectrometry techniques. The additional objective was to compare the gene gp64. of different geographical populations by Sanger and next generation sequencing. This analysis allowed us to observe the substitutions of gp64 and refuted the notion of a geographical isolation of the samples. We also observed a total of 44 proteins of the ODV and 33 of the BV. Six new proteins were found in the ODV and seven in the BV. Furthermore, 11 cellular proteins were also identified, which are possibly assorted during viral morphogenesis. These findings may provide novel insights into AgMNPV biology and its host interaction, leading us to a better understanding about morphogenesis and also the associated factors of the viral multiplication.

Linhagens de camundongos AIRmax e AIRmin diferem quanto a reatividade inflamatória aguda às partículas de Biogel. A AIR divergente nessas linhagens está bem estabelecida, no entanto, diferenças na resposta inflamatória crônica ao Biogel ainda não foram descritas. Assim, nós decidimos verificar se o processo de seleção que modificou a resposta inflamatória aguda nessas linhagens, também afetou o desenvolvimento da resposta inflamatória crônica. A infiltração de células no exsudado da linhagem AIRmax foi maior que na linhagem AIRmin em ambos os períodos avaliados (48h e 30d), e no período de 48 horas, os animais AIRmax apresentaram alta produção de citocinas no exsudato inflamatório. Essa linhagem mostrou ainda maior número de genes ativados envolvidos na transdução de sinal, resposta imune e inflamatória. Alguns genes envolvidos com a resposta inflamatória aguda, também apresentaram diferenças após 30 dias. Esses resultados indicam que o processo de seleção para a inflamação aguda pode ter afetado também o desenvolvimento da resposta inflamatória crônica ao Biogel. / AIRmax and AIRmin mouse lines differ in terms of acute inflammatory response after Biogel injection. The distinct AIR in these lines is well established, however, differences in late or chronic inflammatory response to Biogel were not described yet. Thus, we decided to check if the genetic selection that modified the acute inflammatory response in these lines, also affected the development of a chronic inflammatory response. We found that AIRmax mice had higher cellular influx in the inflammatory exudate than AIRmin mice in both analyzed periods (48h and 30d) and that after 48 hours of Biogel injection, AIRmax mice showed higher cytokine levels in inflammatory exudates. This line also showed higher number of up regulated genes in AIRmax than in AIRmin mice involved with inflammatory response, immune response and signal transduction. Some acute inflammatory response genes also showed differences on day 30. Our results indicate that the genetic selection for acute inflammatory response may also have affected the chronic inflammatory response to Biogel.

O presente trabalho tem os seguintes objetivos: propor uma sistemática para o estudo e a interpretação da estabilidade e adaptabilidade fenotípica, através de duas técnicas de análise multiway (PARAFAC e Tucker3); propor a construção de um gráfico, denominado de Triplot, que possibilita avaliar as relç]oesoes entre os 3 modos (genótipos, locais e anos); implementar uma rotina computacional para a análise de dados, segundo os modelos multiway; implementar uma rotina computacional para a construção do Triplot. Os dados a serem uti- lizados são relativos a experimentos com 13 genótipos de feijão que foram conduzidos em 9 ex- perimentos distintos constituídos pelos anos agrícolas de 2000/2001, 2001/2002 e 2005/2006, pelos municípios de Dourados e Aquidauana, sendo que os experimentos foram instalados na época das águas (Dourados)e também na época da seca (Dourados e Aquidauana). Cada local é constituído de município e uma época de instalação. Os resultados indicaram que o gráfico triplot e joint plot, facilitam o entendimento da interação tripla e traz ao pesquisador informações mais reais sobre a interação tripla, do que a modelagem AMMI de duas entradas; o gráfico triplot, ajuda a identificar genótipos, locais e anos estáveis, dentro de um grande grupo de genótipos, locais e anos; de uma maneira geral recomenda-se, utilizar o triplot e o joint plot juntos, para obter melhores interpretações dos resultados; dentre os genótipos estudados, o genótipo 6 é o que menos contribui para a interação e o os genótipos 12, 9 e 5 são os que mais contribuem para a interação. / The present work has the following objectives: to propose a systematics for the study and the interpretation of the phenotypic stability and adaptability, through several multiway models (PARAFAC and Tucker3); to propose a graphic, called of Triplot, that it makes possible to evaluate the relations between the 3 ways (genotypes, locations and years); to implement a computational routine for the data analysis, according multiway models; to implement a computational routine for the construction of Triplot. The used data are relative the experiments with 13 genotypes of beans that had been lead in 9 experimental distinct ones constituted by agricultural years of 2000/2001, 2001/2002 and 2005/2006, by Dourados and Aquidauana cities, where the experiments had been installed at the time of waters (Dourados) and also at the time of dries (Dourados and Aquidauana). Each location is constituted of city and time of installation. The results indicated that the graphic triplot and joint plot, facilitate the agreement of triple interaction and bring to the researcher more real information about triple interaction, of what AMMI model of two way; the graphic triplot, helps to identify stabels genotypes, locations and years, inside of a great group of genotypes, location and years; in a general recommend to use triplot and joint plot together, to get better interpretations of the results; the genotype 6 is what less contributes for the triple interaction and genotypes 12, 9 and 5 are the that more contribute for the interaction.

Saccharomyces cerevisiae é o organismo de escolha para produção de etanol combustível, apresentando-se adaptadas ao ambiente hostil das dornas de fermentação. Adaptações como floculação, formação de espuma e de biofilme são características fenotípicas indesejáveis ao processo brasileiro. Por isso, a pronta identificação destas características faz-se necessária no intuito de minimizar perdas de rendimento e diminuir o custo da produção. Sabe-se que proteínas codificadas pela família de genes FLO estão relacionadas a estes fenótipos, os quais são regulados pela proteína Flo8p, a qual possui papel fundamental na apresentação destas características fenotípicas indesejáveis. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo analisar o fenótipo e o comportamento metabólico, relacionando-os com a regulação via Flo8p. Os resultados obtidos revelam o papel fundamental de Flo8p na regulação positiva destes fenótipos em linhagem isolada do ambiente industrial (FT02). Verificou-se uma forte tendência da participação do gene FLO11 na formação de espuma, via Flo8p. Além disso, através da deleção do FLO8 da linhagem FT02, observou-se a influência positiva de Flo8p na floculação e hidrofobicidade celular, filamentação e poder invasivo. / Saccharomyces cerevisiae is the chosen organism for fuel ethanol production, presenting adapted to the hostile environment of the fermentation vats. Adaptations like flocculation, d foam formation and biofilm are undesirable phenotypes for the Brazilian process. Hence, the early identification of these characteristics is necessary to minimize yield losses and lower the production cost. Proteins codified by FLO gene family are related with these phenotypes, which are positively regulated by Flo8p protein, showing fundamental role in the expression of the undesirable phenotypes. So, the present work aimed to analyze the phenotypes and the metabolic behavior of an industrial strain isolated directly from Brazilian ethanol production process (FT02), relating them with the Flo8p regulation. Our results showed that the Flo8p plays a fundamental role in the regulation of these characteristics in the industrial strain FT02. We also verified a strong tendency of the FLO11 gene participation in the foam formation, by Flo8p. Moreover, by FLO8 deletion in FT02 strain, we could identify the positive influences of the Flo8p in flocculation and cellular hydrophobicity, filamentation and invasive growth.