A maioria dos estudos da interação parasito-hospedeiro tem focado na interação de um único patógeno. Porém, o hospedeiro em um ambiente natural é comumente exposto a múltiplos patógenos sequencialmente ou mesmo simultaneamente. Diversos estudos têm utilizado o modelo de Ligadura e perfuração do Ceco (CLP) para estudar a sepse, mas nenhum deles apresentou modelo de coinfecção ou estudo avaliando o papel de infecções prévias no desfecho da sepse polimicrobiana experimental. Neste contexto, nossa hipótese é de que a infecção crônica por parasitos poderia alterar o curso da resposta durante a sepse polimicrobiana. Para testar essa hipótese, animais C57BL/6 ou BALB/c foram infectados com 5 ou 20 cistos da cepa ME 49 de Toxoplasma gondii e 40 dias após a infecção os animais foram induzidos à sepse polimicrobiana. Em nosso estudo, 100% dos animais cronicamente infectados por T. gondii morreram num período de 24 horas após CLP. O mesmo não foi observado quando animais foram infectados cronicamente com os parasitos Leishmania major e Trypanosoma cruzi ou com o fungo Paracoccidioides brasiliensis. Um dado interessante em nosso estudo foi que, nos animais previamente infectados com T. gondii, constatamos melhora na eliminação de bactérias liberadas pela CLP e aumento do recrutamento celular para o sítio da infecção. Apesar de esses animais apresentarem melhora na resposta contra as bactérias, verificamos a presença de lesão intestinal e maior infiltrado inflamatório neste órgão, associado a um aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias (IFN-, TNF-, IL-6 e IL-1) e consequente aumento de óxido nítrico (NO), num período de 24 horas depois da CLP. Verificamos que as células TCD4+ e TCD8+ são responsáveis pela produção de IFN- e TNF- nesse modelo de coinfecção, e em modelo in vitro, que macrófagos podem ser responsáveis pela produção de IL-1 dependente de ativação do inflamassoma NLRP3/ASC/Caspase 1. Neste estudo, observamos que a rápida resposta contra a CLP acontece em função da presença de células de memória de padrão Th1, induzidas na infecção por T. gondii. Dessa forma, esse trabalho mostra que a infecção crônica por T. gondii agrava a sepse polimicrobiana subletal, por aumentar a produção de citocinas pró-inflamatórias IL-6, TNF- e IL-1, com a indução de hipotensão, predispondo ao choque séptico. / Most studies of parasite-host interaction have focused on the interaction of a single pathogen with cells or organism of the host. However, in a natural enviroment, the host is commonly exposed to multiple pathogens sequentially or even simultaneously. Several studies have used the model of cecal ligation and puncture (CLP) to study sepsis, but none of them evaluated the effect of the presence of previous infections to the outcome of polymicrobial sepsis. In this context, we hypothesized that chronic infection with Toxoplasma gondii could alter the course of host response against polymicrobial sepsis. To test this hypothesis, C57BL/6 or BALB/c mice were orally infected with 5 or 20 cysts of ME-49 strain of T. gondii and 40 days post infection, they were subjected to CLP. When mice were chronically infected with T. gondii, 100% of the animals died within 24 hours after CLP. The same phenomenons were not observed in animals previously infected with other parasites, such as Leishmania major and Trypanosoma cruzi or the fungus Paracoccidioides brasiliensis. Interestingly, when we evaluated the response against the CLP in animals that were infected with T. gondii, we found an improvement in the killing of bacteria released by CLP and an increase in recruitment of inflammatory cells to the site of infection. However, despite the fact that these animals have improved response against the bacterial infection, they presented intestinal damage and increased inflammatory infiltrate in this organ. The animals also had increased pro-inflammatory cytokines (IFN-, TNF-, IL-6 and IL-1), and nitric oxide (NO) detected within 24 hours after CLP. We also found that the TCD4+ and TCD8+ cells were responsible to produce IFN- and TNF-, and, using an in vitro model, we verified that macrophages are primarily responsible for the production of IL-1 in a pathway dependent on the activation of NLRP3/ASC/Caspase 1 inflamassoma. In this study, we found that early response against CLP happens due to the presence of mainly Th1 memory cells, induced by T. gondii infection. Finally, we found that chronic infection with T. gondii aggravates sublethal polymicrobial sepsis by increasing the cytokines IL-6, TNF- and IL-1, with induction of hypotension that predispose to septic shock.

Para avaliar se a dinâmica da infecção toxoplásmica em gatos infectados pelo VIF é diferente daquela que ocorre em gatos não infectados por esse retrovírus, gatos adultos infectados pelo Vírus da Imunodeficiência Felina (VIF) clade B assintomáticos (n=7) (Grupo I: VIF+TOXO+), e gatos sem a infecção viral (n=7) (Grupo III: VIF-TOXO+) foram inoculados pela via oral com cistos de Toxoplasma gondii cepa P. Os animais foram avaliados por meio do exame clínico, mensuração de anticorpos IgM e IgG anti-T. gondii pela Reação de Imunofluorescência Indireta, eliminação e quantificação de oocistos pela técnica de flutuação em solução de sacarose, leucograma, e as subpopulações de linfócitos T CD4+ e CD8+ foram mensuradas por meio da citometria de fluxo. Outros dois grupos de gatos, um apenas infectado com o VIF (n=7) (Grupo II: VIF+TOXO-) e outro não infectado com nenhum dos agentes (n=3) (Grupo IV: VIF-TOXO-), constituíram os grupos controle. O período de eliminação de oocistos e a quantidade de oocistos eliminados foram semelhantes entre os Grupos I e III, respectivamente p=1,00 e p=0,201. O período de soroconversão e a duração dos títulos de IgM e IgG também foram semelhantes, respectivamente p=0,535; p=0,789 e p=0,674; p=0,123. No entanto, os episódios febris e de apatia foram mais freqüentes entre os gatos co-infectados (Grupo I) do que entre os animais do grupo não infectado com o vírus (Grupo III), embora estes últimos tenham apresentado diarréia mais freqüente e intensa do que os primeiros. Apenas no grupo co-infectado (Grupo I) um animal desenvolveu uveíte anterior unilateral autolimitante. Exclusivamente no grupo de gatos co-infectados (Grupo I), durante todo o período experimental foi observado aumento do número de leucócitos (p=0,047), linfócitos (p=0,029) e linfócitos T CD8+ (p=0,047) em relação aos gatos do grupo infectado apenas com o T. gondii (Grupo III). O grupo de gatos infectados somente com o VIF (Grupo II) apresentou diminuição quantitativa de linfócitos T CD4+ (p=0,031) em comparação ao grupo controle não infectado com nenhum dos agentes (Grupo IV), evidenciando a ação do vírus em destruir progressivamente essa subpopulação de linfócitos. A relação de linfócitos CD4/CD8 entre os Grupos I e II, infectados pelo VIF, e os Grupos III e IV, não infectados pelo vírus, foi alterada (p<0,001 e p=0,002 respectivamente), observando-se que a infecção toxoplásmica não teve influência sobre esse parâmetro. O aumento dos linfócitos T CD8+ nos gatos co-infectados e a diminuição de linfócitos T CD4+ causada pela infecção pelo VIF podem contribuir para o desenvolvimento de manifestações clínicas mais graves nos gatos infectados por ambos os agentes infecciosos. / Asymptomatic adult cats (n=7) infected with Feline Immunodeficiency Virus (FIV) clade B (Group I: FIV+TOXO+) and normal non-infected cats (n=7) (Group III: FIV-TOXO+) were inoculated, orally with cysts of Toxoplasma gondii strain P, in order to evaluate if there is a difference in dynamics of toxoplasmic infection between cats infected with FIV and naive-FIV cats. The animals were assessed by means of physical exam, T. gondii IgM and IgG antibodies by indirect immunofluorescent reaction, shedding and quantification of oocysts using sugar centrifugation, leucogram and CD4+ and CD8+ T-lymphocytes subsets using cytometry. Others two groups of cats, one of them only infected with FIV (n=7) (Group II: FIV+TOXO-) and other non-infected (n=3) (Group IV: FIV-TOXO-) composed the control groups. The shedding and quantification of oocysts were not different between the Groups I and III, respectively p=1,00 and p=0,201. The serum convertion and the period that during of values of IgM and IgG antibodies were not different, respectively p=0,535; p=0,789 and p=0,674; p=0,123. However, fever and letargy were more frequent between cats co-infected (Group I) than the group not infected with FIV (Group III), although the latter one had presented more frequently intense diarrhea than formers. Just one cat dually infected (Group I) presented autolimitant unilateral anterior uveitis. Only cats co-infected (Group I), during all period of the experiment, presented increase in number of leukocytes (p=0,047), lymphocytes (p=0,029) and CD8+ T lymphocytes subset (p=0,047) comparing to the cats only infected with T. gondii (Group III). Only in the group FIV-infected (Group II) was observed decrease in numbers of CD4+ T lymphocytes subset (p=0,031) compared to the not infected any microrganism (Group IV), showing the virus action to destroy this lymphocyte subset slowly. The CD4/CD8 lymphocyte ratio was different between the Groups I and II, FIV-infected, from Groups III and IV, FIV-naive cats, (p<0,001 e p=0,002 respectively) showing that toxoplasmic infection did not alter this parameter. The increase number of CD8+ T lymphocyte, in dually infected cats, associated with loss of CD4+ T lymphocyte caused by FIV, can contribute for the development of more severe clinical signs in cats dually infected.

Neospora caninum é um parasito intracelular obrigatório, formador de cistos, que acomete vários animais domésticos e silvestres, tendo maior importância nas espécies canina e bovina, nas quais causa problemas nervosos e reprodutivos. Os canídeos do gênero Canis são os únicos reconhecidos como hospedeiros definitivos do N. caninum até o momento, nos quais ocorre a fase sexuada de multiplicação, resultando na eliminação de oocistos pelas fezes. Toxoplasma gondii também é um coccídio responsável por uma das zoonoses de maior importância e ocorrência em todo o mundo. A fase assexuada de desenvolvimento do T. gondii ocorre nos mamíferos e aves (hospedeiros intermediários) com formação de cistos teciduais e a fase sexuada de desenvolvimento ocorre no intestino delgado dos hospedeiros definitivos, que são os membros da família Felidae. Este estudo teve por objetivo determinar a soroprevalência de anticorpos contra Neospora spp. e T. gondii em equídeos de diferentes regiões do Brasil e o isolamento e caracterização genética destes coccídios em amostras de tecidos de equídeos. A sorologia para T. gondii e Neospora spp. foi realizada em 453 amostras de soros por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta com ponto de corte de 50 para Neospora spp e 64 para T. gondii. Deste total, oito (1,75%) amostras (sete de jumentos e um de cavalo) foram positivas para Neospora spp. e 129 (28,47%) amostras (82 jumentos, 32 cavalos e 15 mulas) para T. gondii. Para o isolamento do T. gondii foram realizados 29 bioensaios em camundongos, sendo 19 de animais soropositivos e 10 de pools de tecidos de cavalos soronegativos. Por meio dessa prova biológica, foi possível o isolamento em uma amostra de jumento (Equus asinus) de Mossoró, RN, ocorrendo a morte dos dois únicos camundongos infectados, no 16o e 17o dia pós-inoculação. A caracterização genotípica do isolado foi realizada pela PCR-RFLP utilizando 12 marcadores genotípicos. A genotipagem dessa amostra evidenciou o genótipo #60 TgCkBr220, já isolado em galinha do Arquipélago de Fernando de Noronha, PE, Brasil. O isolamento de Neospora spp em gerbilos não pode ser feito uma vez que não foi possível a obtenção de tecidos dos equídeos soropositivos. / Neospora caninum is an obligate intracellular parasite, forming cysts that affect many domestic and wild animals, having greater importance in canine and bovine species due neurological and reproductive problems. Canids of the genus Canis are recognized as the only definitive hosts of N. caninum until the moment in which sexual phase occurs multiplication, resulting in the elimination of oocysts in the feces. Toxoplasma gondii is also a coccidian parasite responsible for a zoonotic disease of great importance and occurrence around the world. The asexual developmental stage of T. gondii occurs in mammals and birds, the intermediate hosts, resulting in the formation of cysts and the sexual stage occurs in the small intestine of definitive hosts, which are the felids, occurring oocysts formation. This study aimed to determine the seroprevalence of antibodies against Neospora spp. and Toxoplasma gondii in equids from different regions of Brazil and the isolation and genetic characterization of these parasites from equids tissue. Serology for T. gondii and Neospora spp. was performed in 453 serum samples by Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Of this total, eight (1.75%) samples (seven of donkeys and one of horse) were positive to Neospora spp. antibodies and 129 (28.47%) samples (82 donkeys, 32 horses, 15 mules) were T. gondii seropositive. For the isolation of T. gondii, bioassay was performed in mice. A sample of one donkey (Equus asinus) from Mossoró, RN, was obtained with two of the 20 inoculated mouse infected. The mouse died at day 16th and 17th post inoculation. The genotypic characterization of the isolate was performed by PCR-RFLP using 12 genotypic markers. Genotyping showed the genotype #60 TgCkBr220, already described in chickens from Fernando de Noronha, PE, Brazil. Due the impossibility of acquisition of tissue from Neospora spp seropositive equids, isolation of this coccidian by gerbil bioassay was not possible to be done.

A toxoplasmose afeta 1/3 da população humana e só existe uma vacina para uso veterinária. A radiação gama altera as proteínas tornando-as mais imunogênicas, por oxidação e melhor apresentação de antígenos na ausência de adjuvantes. Irradiamos extrato solúvel de taquizoítos da cepa RH de T. gondii (AgTg), e avaliamos seu uso como vacina em camundongos BALB/c. Doses abaixo de 500Gy não afetavam e doses acima de 2000Gy destruíam o extrato, sendo que animais imunizados com extrato irradiado a 1000, 1500 e 2000Gy tinham mais IgG especifica de maior avidez, comparado ao AgTg nativo (p<0.05). Animais imunizados pelo AgTg 1500Gy tiveram aumento da proliferação de esplenócitos, fenotipados como CD3+CD4+, CD3+CD8+ e de linfócitos B, comparados com animais imunizados pelo AgTg nativo. Animais imunizados pelo AgTg 1500Gy após desafio com cepa ME-49 cistogênica apresentaram menor numero de cistos cerebrais e maior sobrevida pós-desafio com cepa virulenta RH. A radiação ionizante em extratos de T.gondii aumenta a resposta imune e a memória imunológica na ausência de adjuvantes. / Toxoplasmosis affects 1/3 of the human population and only a vaccine for veterinary use. Gamma radiation alters the proteins making them more immunogenic by oxidation and better antigen presentation in the absence of adjuvants. Radiate soluble extract of RH strain tachyzoites of T. gondii (AgTg ) , and evaluate its use as a vaccine in BALB/c . Doses below 500Gy not affected and destroyed 2000Gy doses above extract, whereas animals immunized with irradiated extract at 1000, 1500 and 2000Gy had more of specific IgG avidity, compared to native AgTg (p < 0, 05). AgTg 1500GY the immunized animals had increased proliferation of splenocytes, phenotyped as CD3+CD4+,CD3+CD8+ and B-lymphocytes immunized animals compared to the native AgTg . Animals immunized by AgTg 1500GY after challenge with strain ME- 49 cystogenic showed lower number of brain cysts and greater survival after challenge with virulent RH. Ionizing radiation in extracts of T. gondii increases the immune response and immune memory in the absence of adjuvants.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_beatris_cademartori.pdf: 636391 bytes, checksum: 43565196211ab5284ee321f2b82e0430 (MD5) Previous issue date: 2007-06-28 / The toxoplasmosis acquired during pregnancy of benign course in imunocompetentes patients and asymptomatic in 85% of the cases may infect the fetus and result in congenital infection. Although most of the newborns do not present symptoms or clinical signs, there may be sequelae during the childhood and adult life, being the corioretinitis the most frequent one. Among the strategies to prevent congenital toxoplasmosis we can find the education for health and the preconception trial, which aim is to reduce the exposition to the risk factors that may lead to an infection by T. gondii, to detect and to treat acute infection in pregnant woman. The aims of this study were to evaluate the prevalence and risk of congenital transmission by Toxoplasma gondii, through serological analysis of the pregnant women and also through their knowledge about the zoonose transmission routes, to check the possible association between the soropositivity of the pregnant women and their exposition to the infection risk factors, and also to compare the Chemiluminescence and Indirect Immunofluorescence techniques in the diagnosis of the toxoplasmosis in the studied sample. A transversal study was conducted, with 425 pregnant women who were attending prenatal care in public health centres of Pelotas (RS-Brazil), during the period of May to November 2006. It was verified a T. gondii soroprevalence of (IgG) 54,8% and it was not detected the presence of IgM antibodies. The analysis of the risk factors showed a significant association (p<0.05) between the soropositivity of the pregnant women and their age, the handle of raw meat, the intake of raw vegetables, raw or undercooked meat and raw or nonpasteurized milk and direct contact with the soil. The Logistic Regression Model confirmed the above associations to the intake of raw or undercooked meat (OR=1.85) and to the direct contact with the soil (OR=2.67). The interaction with cats did not present a significant association with the T. gondii soropositivity patients. It was observed that the pregnant women who were interviewed did not know much about the disease and its main sources of infection. The Chemiluminescence technique proved to be an adequate one in the routine diagnosis of the T. gondii infection as, besides being a practical technique, it showed results comparable to the ones of the Indirect Immunofluoresence, sensibility, specificity and accuracy. The results indicate the necessity of implementing T. gondii primary prevention programmes for the pregnant women who as a way of reducing the risks of congenital toxoplasmosis. / A toxoplasmose adquirida durante a gestação, de curso benigno em pacientes imunocompetentes e assintomática em 85% dos casos, pode ser transmitida para o feto e resultar em infecção congênita. Embora maioria dos recém- nascidos não apresente sintomas ou sinais clínicos, pode evoluir para seqüelas na infância e vida adulta, sendo que a coriorretinite é a lesão mais freqüente. Entre as estratégias de prevenção da toxoplasmose congênita incluem-se a educação em saúde e a triagem pré-natal, com o objetivo de reduzir a exposição aos fatores de risco para a infecção por Toxoplasma gondii, detectar e tratar a infecção aguda na gestante. Os objetivos foram avaliar a prevalência e o risco de transmissão congênita por T. gondii, através da análise do perfil sorológico das mesmas e do conhecimento sobre as formas de transmissão da zoonose, verificar possíveis associações entre soropositividade das gestantes e a exposição aos fatores de risco da infecção, além de comparar as técnicas de Quimioluminescência e Imunofluorescência Indireta para o diagnóstico sorológico da toxoplasmose na amostra estudada. Foi realizado um estudo transversal, com 425 gestantes que realizaram o pré-natal nos Postos de Saúde de Pelotas-RS, no período de maio a novembro de 2006. Constatou-se uma soroprevalência (IgG) de 54,8% para T. gondii e não foi detectado a presença de anticorpos IgM. Na análise dos fatores de risco foi verificada associação significativa (p<0,05) entre a soropositividade das gestantes e a idade, manuseio de carne crua, consumo de vegetais crus, de carnes cruas ou mal cozidas, de leite cru não pasteurizado e contato direto com o solo. Através do modelo de regressão logística, essa associação foi confirmada para o consumo de carnes cruas ou mal cozidas (OR=1,85) e o contato direto com o solo (OR=2,67). O convívio com gatos, não apresentou associação significativa com a soropositividade para T. gondii nas pacientes estudadas. Constatou-se elevado desconhecimento da doença e das principais fontes da infecção pelas gestantes entrevistadas. A técnica de Quimioluminescência mostrou-se adequada ao diagnóstico de rotina da infecção por T. gondii, pois, além da praticidade, apresentou de sensibilidade, especificidade e acurácia comparáveis aos da Imunofluorescência Indireta. Os resultados obtidos indicam a necessidade da implantação de programas de prevenção primária da infecção por T. gondii para gestantes, a fim de reduzir o risco da toxoplasmose congênita.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_jacqueline_radin.pdf: 589146 bytes, checksum: 57a338810c6c34920d4047b74e163eaf (MD5) Previous issue date: 2011-03-11 / The Toxoplasma gondii is a protozoan which causes opportunistic infections in individuals with a compromised immune system. There exist a lot of studies correlating toxoplasmosis with immunosuppressed patients, however, in neoplasia carriers, who may suffer a process of immunosuppression during the chemotherapy, few studies were conducted. The aim of the present study was to evaluate, through serological profile, the risk of acute infection (or reactivation) of T.gondii in cancer patients who had chemotherapy treatment in the School Hospital of Pelotas Federal University and in the Radiotherapy and Cancer Center of Pelotas Santa Casa de Misericórdia , as well as to correlate such cancer with toxoplasmosis, through clinical and epidemiological data. A longitudinal cohort prospective study was carried out with a total of 95 patients, who were followed during the antineoplastic treatment by approximately two cycles, from March to November of 2010. The serological search was performed through Indirect Immunofluorescence Techniques (IFI) and Enzyme Linked Immunosorbent Assays (ELISA), and positive results to antibodies IgM anti-T. gondii were confirmed through Electrochemiluminescence Immunoassay (ECLIA). The epidemiological data were obtained through a questionnaire and the clinical, from the analysis of previously authorized patient dossiers. It was verified that the seropositive rate for IgG anti-T.gondii antibodies was of 84.21% at the pre-treatment chemotherapy sample, and of 83.33% at the post-treatment sample through the IFI technique, observing the low titration of antibodies, while through ELISA, 100% of the samples in both analysis were reagents. Class M antibodies were detected in six of the patients (6.3%) through IFI or ELISA and confirmed by ECLIA in one of them. In the risk factor analysis, it was noted a significant association (p<0.05) among seropositive patients for IgM in relation to the variables death (OR= 4.78) and race (OR= 10.88), respectfully. The results obtained point towards the necessity to perform the monitoring toxoplasmosis in cancer patients who are undergoing chemotherapy treatment, in order to avoid grave or even fatal consequences. / Toxoplasma gondii é um protozoário oportunista causador de infecções em indivíduos com o sistema imunológico comprometido. Existem vários estudos correlacionando a toxoplasmose com pacientes imunocomprometidos, porém, em portadores de neoplasias, que podem vir a sofrer um processo de imunodepressão durante o tratamento quimioterápico, poucos estudos foram realizados. O objetivo deste trabalho foi avaliar, através do perfil sorológico, o risco de infecção aguda ou reativação de T. gondii em pacientes oncológicos, que realizaram tratamento quimioterápico no Hospital Escola da Universidade Federal de Pelotas e no Centro de Radioterapia e Oncologia da Santa Casa de Misericórdia de Pelotas, além de correlacionar o câncer com a toxoplasmose, através de dados clínicos e epidemiológicos. Foi realizado um estudo de coorte longitudinal prospectivo, com um total de 95 pacientes, os quais foram acompanhados por pelo menos duas sessões de quimioterapia, no período de março a novembro de 2010. A pesquisa sorológica foi realizada através das técnicas de Imunofluorescência Indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA), e os resultados positivos para IgM anti-T.gondii foram confirmados pela eletroquimioluminescência (ECLIA). Os dados epidemiológicos foram obtidos pela aplicação de um questionário e os clínicos através da análise dos prontuários dos pacientes, previamente autorizados. Constatou-se que a taxa de soropositivos para IgG anti-T.gondii foi de 84,21% na amostra pré-tratamento quimioterápico e 83,33% na amostra pós-tratamento pela técnica de IFI, observando-se baixas titulações de anticorpos, enquanto que por ELISA, 100% das amostras, nas duas análises, foram reagentes. Anticorpos da classe M foram detectados em seis pacientes (6,3%) através da técnica de IFI ou ELISA e confirmado por ECLIA em um dos pacientes. Na análise dos fatores de risco, foi verificada associação significativa entre os pacientes soropositivos para IgM em relação às variáveis óbito (OR=4,78) e raça (OR=10,88), respectivamente. Os resultados obtidos indicam a necessidade de se realizar o monitoramento da toxoplasmose em pacientes oncológicos, que estão realizando tratamento quimioterápico, para evitar consequências graves e até mesmo fatais.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-13 / Serum samples from 1840 sheep from Rio Grande do Sul south (area region), Brazil, were tested to verify the prevalence of IgG antibodies against Toxoplasma gondii by Immunofluorescent Antibody Test (IFAT), using sera dilution 1:64 as cut-off value. Four age groups were studied: one year old, two years old, three years old and > four years old sheep. The prevalence rate for T. gondii infection was 20,2% (450/1840) (15,2% < IC < 26,2%) in sheep, with titers ranging from 1:64 to 1:4096. The prevalence rate of sheep farms, that had at least one positive sheep, was 87,4% (83/95) (78,9% < IC < 92,8%). There was association between antibodies seroprevalence to T. gondii and sheep age, once the one year old group s prevalence was 9,7% (95/687) (6,2%<IC95%<15,0%) and > four years old group s was 35,3% (255/681) (27,5%<IC95%<43,8%). Multivariate logistic regression did not reveal any significant seroprevalence association between sex and other risk factors. The univariate analysis showed presence of housed cats (p=0,17) and not carcasses remotion (p=0,20) as variables with some epidemiological importance. Toxoplasma gondii infection occurs in almost every sheep farms and thus, can be responsable for ovine reproductive losses and human health problems in this region. / As amostras de soro sanguíneo de 1840 ovinos do sul do Rio Grande do Sul, foram testadas para determinar a prevalência de anticorpos da classe IgG para Toxoplasma gondii através do uso da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), com ponto de corte de 1:64. Os animais experimentais foram divididos em quatro grupos de acordo com a idade: um ano, dois anos, três anos e quatro anos ou mais. A soroprevalência para T. gondii foi 20,2% (450/1840) (15,2% < IC < 26,2%) nos ovinos, com variação de títulos de 1:64 até 1:4096. A prevalência das propriedades foco (com pelo menos um animal positivo) foi 87,4% (83/95) (78,9% < IC < 92,8%). Foi observada associação entre soroprevalência para T. gondii e idade dos ovinos, já que a prevalência no grupo de um ano de idade foi 9,7% (95/687) (6,2%<IC95%<15,0%) e no grupo dos animais com quatro anos ou mais foi 35,3% (255/681) (27,5%<IC95%<43,8%). Não foi observada associação significativa entre soroprevalência e sexo, assim como com nenhum dos fatores de risco avaliados na análise multivariada (regressão logística). Entretanto, na análise univariada, duas variáveis se mostraram com maior intensidade de associação com a soroprevalência que as outras: presença de gatos domésticos (p=0,17) e o não recolhimento de carcaças nas propriedades (p=0,20). Os resultados indicam que a infecção por T. gondii está amplamente distribuída entre os rebanhos ovinos da região sul do Rio Grande do Sul, podendo causar perdas reprodutivas nesses animais e representar riscos à saúde humana.

Toxoplasma gondii, l'agent causal de la toxoplasmose appartient au phylum des Apicomplexes. Comme son nom l'indique, le parasite possède un complexe unique d'organites sécrétoires apicaux, les micronèmes, rhoptries et le conoïde, qui jouent un rôle essentiel dans l’invasion de la cellule hôte et la survie du parasite. T. gondii est devenu un modèle populaire de biologie cellulaire et aussi un outil de référence pour l'étude de l’organisation ultra-structurale et des différentes fonctions des autres parasites du phylum Apicomplexa tel que Plasmodium, l’agent causal de la malaria. Cette thèse porte sur deux facteurs essentiels à la survie du parasite : le complexe adapteur de la clathrine AP1 et la petite GTPase Rab11A qui jouent un rôle crucial dans la régulation de certaines voies du trafic intracellulaire de T. gondii. Ainsi, nos travaux ont permis de démontrer un rôle pour AP1 dans le triage différentiel et le transport vésiculaire des protéines MIC et ROP depuis le Trans-Golgi-Network (TGN) et les compartiments endosomaux, respectivement. D’autre part, nos résultats ont révélé un rôle original de AP1 dans la division parasitaire aux stages tardifs de la cytokinèse. Nous avons également identifié un partenaire de AP1, la protéine unique de T. gondii possédant un domaine ENTH : EpsL (pour Espin-Like Protein). Dans les autres Eucaryotes, les protéines epsines sont connues pour activer la formation des vésicules à clathrine en co-opération avec les complexes AP1 et AP2. Nos résultats ont effectivement démontré un rôle de EpsL, similaire à AP1, pour la biogénèse des rhoptries et micronèmes. Nous avons, dans un deuxième temps, examiné les différentes fonctions de la petite GTPase Rab11A. Notre étude par vidéo-microscopie, semble indiquer que Rab11A régule le transport de vésicules depuis le TGN vers la périphérie cellulaire et en particulier, les pôles basal et apical du parasite. Après sur-production de la forme mutée inactive de Rab11A, nous avons démontré un nouveau rôle de la protéine dans la sécrétion des protéines membranaires de surface et dans l'exocytose des granules denses, lors de l'invasion de la cellule hôte mais aussi durant la réplication parasitaire. Finalement, des expériences de pull-down ont permis d’identifier un partenaire intéressant liant Rab11A seulement sous sa forme activée, la protéine unique de T. gondii contenant un domaine HOOK (TgHOOK), que nous avons caractérisée au niveau fonctionnel. Nos résultats suggèrent que TgHOOK régule le transport des vésicules positives pour Rab11A d’une manière dépendante des microtubules. Par conséquent, cette dernière étude a permis de révéler de nouveaux aspects encore inexplorés, bien qu’essentiels, des mécanismes régulant la sécrétion de molécules à la surface parasitaire. / Toxoplasma gondii, the causative agent for the disease Toxoplasmosis belongs to the phylum Apicomplexa. As the name implies, the parasite possesses a unique complex of apical secretory organelles namely the micronemes, rhoptries and conoid, which favor host cell invasion and intracellular survival. T.gondii has become a popular cell biology model and also a reference tool for studying the structure and functions of other important parasites that belong to the same phylum, such as plasmodium, but also higher eukaryotes. The recent advances in dissecting protein trafficking pathways have led to a better understanding of the biogenesis of apical organelles and also to the identification of crucial protein molecules that could determine the fate of the parasite. This thesis focuses on two different molecules, the Clathrin Adaptor complex AP1 and the small GTPase Rab11A that play a crucial role in distinct trafficking pathways of the parasite contributing to a wide range of functions. First, we reveal a role of AP1 in the differential sorting of microneme and rhoptry proteins at the Tran-Golgi-Network and endosomal level, respectively. Accordingly, depletion of AP1 leads to a defect in apical organelle biogenesis. In addition, we reveal an original role of AP1 in parasite division by regulating late stages of cytokinesis. We also identified and studied a partner of AP1, the unique ENTH domain containing protein of the parasite, EpsL (for Espin-like protein). In other Eukaryotes, epsin proteins are well known regulators of clathrin-mediated vesicular budding in co-operation with AP1 and AP2. We demonstrated that EpsL shares similar functions to AP1 in regulating rhoptry and microneme formation. We next worked on the small GTPase Rab11A and defined the dynamics of the protein within the parasite by live imaging. In addition to its known role in cytokinesis, we unravelled a novel function for the molecule in the secretion of surface membrane proteins and the exocytosis of dense granules during both, parasite invasion and replication. Further, pull down experiments on active Rab11A helped us fish an interesting partner molecule, the unique HOOK-domain containing protein that we functionally characterized for the first time in T.gondii. Our data suggest a role of Rab11A in microtubule-dependent transport of vesicules in a HOOK-regulated manner. Therefore, our study provides novel molecular insights into a yet unexplored but essential aspect of constitutive secretion in the parasite.

Toxoplasma gondii est un parasite intracellulaire obligatoire potentiellement capable d’infecter tous les animaux homéothermes. L’Amérique du Sud, et plus particulièrement le Brésil occupe une place particulière dans l’épidémiologie de ce parasite cosmopolite en raison d’une part de formes cliniques sévères observées chez l’Homme et d’autre part d’une diversité génétique du parasite, sans équivalent jusqu’à présent sur d’autres continents. L’Etat de Rio de Janeiro présente des environnements très contrastés allant d’une ville capitale comportant différents degrés d’urbanisation à des zones isolées de haute altitude, habitat d’une faune très riche.Nous avons cherché à étudier l’influence de facteurs anthropiques et physiques sur l’épidémiologie du parasite dans différents environnements de l’Etat de Rio de Janeiro. Pour cela, nous avons d’une part étudié la séroprévalence chez les chats dans deux environnements avec différents degrés d’urbanisation de la ville de Rio, d’autre part mené des études d’épidémiologie moléculaire à l’aide de prélèvements sur des animaux de la ville de Rio, d’un parc national situé dans les zones de hautes altitudes et des zones rurales avoisinantes.L’étude de séroprévalence chez les chats dans la ville de Rio a permis de montrer l’intérêt de l’utilisation des prélèvements sur papier-filtre pour la réalisation de la technique de Modified-Agglutination-Test (MAT). Elle a révélé une différence significative de prévalence entre les chats errants du quartier résidentiel privé (4/107- 3,74%) et ceux du refuge municipal (32/265-12,08%). La densité des animaux et d’autres facteurs écologiques peuvent expliquer cette différence.La détection d’ADN toxoplasmique a été positive chez 8/16 chats de la ville de Rio, 14/18 animaux domestiques et 23/33 animaux sauvages de la zone d’amortissement du parc, 31/38 petits rongeurs ou marsupiaux piégés dans les zones de haute altitude. La détection a été positive sur les tissus de 3 félidés sauvages de la zone d’amortissement et sur les fèces d’un Puma yagouaroundi retrouvées dans le parc témoignant du rôle de ces félidés sauvages dans la contamination du sol aussi bien en zone préservée que dans les zones rurales proches du parc.Le génotypage par 15 marqueurs microsatellites a été possible pour 6 échantillons (dont une souche viable). Il a révélé une grande diversité génétique, mais aussi la présence aussi bien dans le parc qu’au centre-ville de Rio de souches appartenant aux lignées brésiliennes majeures BRII et BRIII. / Toxoplasma gondii is a protozoan parasite, potentially infecting all warm-blooded animals. In South America, and especially in Brazil, this cosmopolitan parasite presents some peculiarities due to an exceptional genetic diversity and the existence of severe clinical forms in Human, probably linked to the genetic background of some strains. In Brazil, the state of Rio de Janeiro presents highly contrasted environments from the city of Rio de Janeiro with different degrees of urbanizaton to isolated “sky islands”, hosting a rich and endemic fauna.We looked for physical and anthropic factors that may have an impact on the epidemiology of T. gondii in different environments of the state of Rio de Janeiro. We performed a seroprevalence study in cat populations living in 2 districts of Rio de Janeiro city with different degrees of urbanization, and molecular epidemiology studies on tissues of animals collected in Rio city, in a National Park characterized by “sky islands” and in intermediate and rural areas surrounding this park..The seroprevalence study on cats in Rio de Janeiro city allowed to show the value of blood sampling on filter-paper for performing the Modified-Agglutination-Test (MAT) for antibody detection in cats. There was a significant difference between seroprevalence observed in stray-cats from a residential district area with a relatively well-preserved natural environment (4/107- 3.74%) and in cats from a downtown public shelter (32/265-12.08%). Cat population density and other ecological factors may be involved in these differences.T. gondii DNA was detected in tissues of 8/16 cats from Rio city, 14/18 domestic and 23/33 wild animals in the area surrounding the park, and 31/38 small rodents or marsupials captured inside the National Park. DNA detection was positive in 3 tissues from wild felids found in the intermediate area surrounding the park and in feces from a Puma yagouaroundi found inside the park. This showed the role of wild felids in soil contamination in both environments.Genetic characterization using 15 microsatellite markers was successful for 6 samples, including one live strain (full genotyping for 5, and incomplete genotyping for one sample). This small sampling of strains was characterized by a large genetic diversity and revealed the presence of the main brazilian lineages, BRII and BRIII in isolated sky islands as well as in the city center of Rio de Janeiro.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Toxoplasma gondii is a protozoan of great clinical importance can cause functional and biochemical changes in the host cells mainly in the central nervous system. These changes are usually associated with the inflammatory response to tissue damage and cell oxidation in immunocompetent hosts. T. gondii infection stimulate the production of high levels of cytokines such as IL-12 and IFN-γ by cells of the immune system, consisting of a main point in parasite control and disease resistance. As a potent antioxidant, resveratrol has become an important research subject due to its antioxidant and anti-inflammatory properties. However, the mechanism by which resveratrol exerts its effects are hampered by the low solubility and bioavailability. Accordingly, one way to improve the bioavailability of resveratrol is to associate with inclusion complexes. Thus, this study aimed to investigate the benefits of resveratrol associated with sulfamethoxazole-trimethoprim (ST) in the treatment of experimentally infected mice with T. gondii. For the study, 60 mice were divided into two groups: non-infected (n = 24) and infected with T. gondii (n = 36). The two groups were divided into subgroups and treated with resveratrol (free and inclusion complex 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin) isolated and associated with ST. The groups A to D composed by healthy mice and groups E to J consisting of animals infected by T. gondii (VEG strain). The treatment started 20 days post-infection for 10 consecutive days with oral doses of 0.5 mg kg-1 of ST (groups B and F), 100 mg kg-1 of free resveratrol (groups C and G) and inclusion complex of resveratrol (inclusion complex containing resveratrol) (groups D and H), as well as with an association of both drugs (groups I and J). Groups A and E were used as control, untreated. Behavioral tests (memory, anxiety and locomotion) were performed after treatment. Blood samples, liver and brain fragments were collected to evaluate the cytokine profile, pathological changes, brain cysts counts, as well as oxidant/antioxidant profile. Infected animals showed behavioral changes such as anxiety and memory loss. The combination ST and resveratrol was able to restore time latência in passive avoidance task. A reduction of the number of brain cyst was observed on animals treated with the combination of drugs. Infected animals show an increase in pro-inflammatory cytokines and reduction of anti-inflammatory cytokine (IL-10), as well as increased protein oxidation in liver and brain tissue. The combination of resveratrol and ST with free inclusion complex in increased the total antioxidant capacity (TAC) and ferric reducing antioxidant power (FRAP) levels in liver and brain that can be interpreted by the protective effect of resveratrol. In addition, resveratrol in inclusion complex form when combined with ST improved therapeutic effect of ST reducing oxidative damage in liver and brain, reducing the number of cysts in the treatment of mice infected with T. gondii. Therefore, it is possible to suggest that the ST with resveratrol on treatment of infected mice can exerts a protective effect on host cells. The resveratrol in inclusion complex form was the best treatment option, for controlled tissue and serum immune responses, as well as oxidative stress in mice infected with T. gondii. / O Toxoplasma gondii é um protozoário de grande importância clínica capaz de ocasionar alterações bioquímicas e funcionais nas células do hospedeiro, principalmente no sistema nervoso central. Essas alterações, geralmente estão associadas à resposta inflamatória com danos teciduais e oxidação celular em hospedeiros imunocompetentes. A infecção por T. gondii estimula a produção de altos níveis de citocinas, tais como IL-12 e IFN-γ, pelas células do sistema imunológico, consistindo em um ponto principal no controle do parasito e resistência à doença. Como um potente antioxidante, o resveratrol tem se tornado um importante alvo de pesquisas graças a suas propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias. No entanto, os mecanismos pelo qual o resveratrol exerce seu efeito são prejudicados pela baixa solubilidade e biodisponibilidade. Nesse sentido, uma forma de melhorar a biodisponibilidade do resveratrol é associá-lo a um complexo de inclusão. Desta maneira, os objetivos deste estudo foram investigar os benefícios do resveratrol associado a sulfamethoxazol-trimetropin (ST) no tratamento de camundongos infectados experimentalmente com T. gondii. Para o estudo, 60 camundongos foram divididos em dois grupos: não-infectados (n=24) e infectados com T.gondii (n=36). Os dois grupos foram subdivididos em subgrupos (n= 10) e tratados com resveratrol (livre e em complexo de inclusão 2- hidroxipropil-β-ciclodextrina) isolado e associado com ST. Os grupos A-D foram compostos por animais saudáveis; grupos E-J consistiram de animais infectados por T. gondii (cepa VEG). O tratamento foi iniciado 20 dias após a infecção e manteve-se por 10 dias consecutivos nas doses orais de 0.5 mg kg-1 de ST (grupos B e F), 100 mg kg-1 de resveratrol livre (grupos C e G) e na forma de complexo de inclusão (grupos D e H), bem como na associação de ambas drogas (grupos I e J). Grupos A e E foram usados como controles, não tratados. Testes comportamentais (memória, ansiedade e locomoção) foram avaliados após o tratamento. Amostras de sangue, fragmentos de fígado e cérebro foram coletados a fim de avaliar os níveis de citocinas, alterações histopatológicas, contagem de cistos cerebrais, como também perfil oxidativo/antioxidante. Animais infectados com T. gondii apresentaram alterações comportamentais como ansiedade e perda de memória. A combinação com ST e resveratrol foi capaz de restaurar o tempo de latência no teste de esquiva inibitória. Uma redução na contagem de cistos foi observada nos animais tratados com a associação de drogas assim como redução das lesões teciduais. Animais infectados apresentam aumento de citocinas pró-inflamatórias e redução da citocina anti-inflamatória (IL-10), assim como maior oxidação proteica em tecido hepático e cerebral. A combinação de ST com resveratrol livre e em complexo de inclusão aumentou os a capacidade antioxidante total (TAC) e os produtos de redução férrica (FRAP) em fígado e cérebro que pode ser interpretado pelo efeito protetor do resveratrol. Além disso, o resveratrol na forma de complexo de inclusão quando combinado à ST melhorou o efeito terapêutico da ST reduzindo os danos oxidativos, lesões hepáticas e número de cistos cerebrais no tratamento de camundongos infectados com T. gondii. Portanto, é possível sugerir que a combinação de ST com resveratrol em camundongos infectados parece exercer um efeito protetor nas células hospedeiras. O resveratrol na forma de complexo de inclusão foi a melhor opção terapêutica, pois controlou as respostas imunológicas séricas e teciduais, assim como o estresse oxidativo em camundongos infectados com T. gondii.