Las Aeromonas spp. están implicadas en diversos procesos infecciosos, que afectan desde animales poiquilotermos a humanos. El género cuenta con distintos determinantes patogénicos que interactúan a diferente nivel para producir la enfermedad, siendo uno de estos el flagelo.En este trabajo describimos cinco genes de A. caviae Sch3N, implicados en el proceso de adhesión a células eucariotas HEp-2 a través del ensamblaje del flagelo, así como de la biosíntesis del antígeno O del lipopolisacárido, y estudiamos su distribución en el género. Paralelamente constatamos la existencia de dos sistemas independientes de flagelación en las aeromonas, polar y lateral respectivamente. Así mismo caracterizamos genética y fenotípicamente los loci de las flagelinas laterales de A. hydrophila AH-3 (una flagelina) y A. caviae Sch3N (dos flagelinas), así como los genes acompañantes que constituyen el locus laf de la primera cepa mencionada. Estudiamos el papel del flagelo lateral en los procesos de adhesión celular y formación de biofilm in vitro, viéndose ambos potenciados por la expresión de la flagelación peritrica, al igual que la invasión de células HEp-2. Diseñamos un método mediante PCR para la detección de las flagelinas laterales en el género, que nos permite establecer que el 60% de la población de aeromonas mesófilas expresan la proteína.Por último, detectamos el locus laf completo en la especie inmóvil y psicrófila Aeromonas salmonicida, que no produce flagelación lateral por la inserción de una putativa transposasa en su único gen que codifica para la flagelina lateral, siendo un caso bien documentado genéticamente de la abolición de un carácter patogénico en un patógeno altamente especializado.

A hipogamaglobulinemia é uma alteração da imunidade humoral caracterizada por baixos níveis séricos de anticorpos podendo ter causas primárias e secundárias. Estes pacientes apresentam uma susceptibilidade a infecções bacterianas de repetição ou crônicas, principalmente do trato respiratório. Além disso, há alta prevalência de doenças gastrointestinais infecciosas e inflamatórias, hepatite C, doenças auto-imunes, doenças linfoproliferativas e granulomatosas. Ainda que a doença seja conhecida desde 1954 há poucos trabalhos na literatura sobre manifestações bucais nestes pacientes. Alguns estudos sugerem uma maior prevalência de lesões liquenóides, doença periodontal, candidíase pseudomembranosa, úlcera aftosa recorrente e hipoplasia de esmalte. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a prevalência das manifestações e alterações bucais, e caracterizar a saúde bucal de pacientes com hipogamaglobulinemias e correlacioná-las com o estado imunológico do paciente, comparativamente a um grupo de pacientes saudáveis. Para tanto avaliamos 100 pacientes com hipogamaglobulinemias atendidos no Ambulatório de Imunologia e Alergia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo e 93 pacientes normorreativos da Clínica Odontológica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo, sendo realizado exame clínico bucal, anamnese e compilação de exames laboratoriais recentes. Do total de pacientes com hipogamaglobulinemias, 59 pacientes apresentaram alguma alteração bucal, sendo as mais frequentes lesões de cárie (21), hipoplasia de esmalte (21), gengivite (18), periodontite (8), boca seca (6), língua geográfica (5) e úlcera aftosa recorrente (2). Vinte e sete pacientes apresentaram queixas de úlcera aftosa recorrente com frequência. Dos 93 pacientes do grupo controle, 84 (90,3%) apresentaram alguma alteração bucal, sendo as mais frequentes lesões de cárie (66), gengivite (31), periodontite (44) e candidíase (3). Dezoito pacientes apresentaram queixas de úlcera aftosa recorrente com freqüência. Concluímos que os pacientes com hipogamaglobulinemias, apesar de apresentarem diminuição das imunoglobulinas do sangue, e alguns pacientes apresentarem uma diminuição de células da imunidade celular, não se encontrou relação positiva entre a incidência de cárie e IgA, doença periodontal e IgA e doença periodontal e CD4. / The hypogammaglobulinemia is an alteration in humoral immunity characterized by low levels of antibodies may have primary and secondary causes. These patients have a susceptibility to recurrent bacterial infections or chronic diseases, mainly respiratory tract. Moreover, there is a high prevalence of infectious and inflammatory gastrointestinal diseases, hepatitis C, autoimmune diseases, lymphoproliferative diseases and granulomatous disease. Although the disease is known since 1954 there are few available studies on oral manifestations in these patients. Some studies suggest a higher prevalence of lichenoid lesions, periodontal disease, pseudomembranous candidiasis, recurrent aphthous ulcer and enamel hypoplasia. Thus, the objective was to assess the prevalence of manifestations diseases and to characterize the oral health of patients with hypogammaglobulinemia and correlate with the immune status, compared with healthy patients. For that evaluated 100 patients with hypogammaglobulinemia in the Outpatient Immunology and Allergy Hospital of the Faculty of Medicine, University of São Paulo and 93 healthy patients of School of Dentistry, University of São Paulo, and was conducted oral clinical examination, medical history and compilation of recent laboratory tests. Of all patients with hypogammaglobulinemia, 59 patients showed abnormalities of the mouth, with 21 patients exhibited caries, 21 enamel hypoplasia, 18 gingivitis, 8 periodontitis, 6 dry mouth, 5 geographic tongue and 2 recurrent aphthous ulcer. Twenty-seven patients complained of frequent recurrent aphthous ulcer. Of the 93 control group patients, 84 (90.3%) showed abnormalities, being the most frequent caries (66), gingivitis (31), periodontitis (44) and candidiasis (3). Eighteen patients complained of recurrent aphthous ulcers frequently. We conclude that patients with hypogammaglobulinemia, despite showing decreased blood immunoglobulins, and some patients had a decrease of cells in cellular immunity, we did not find a positive relationship between the incidence of caries and IgA, IgA and periodontal disease and periodontal disease and CD4.

A hipogamaglobulinemia é uma alteração da imunidade humoral caracterizada por baixos níveis séricos de anticorpos podendo ter causas primárias e secundárias. Estes pacientes apresentam uma susceptibilidade a infecções bacterianas de repetição ou crônicas, principalmente do trato respiratório. Além disso, há alta prevalência de doenças gastrointestinais infecciosas e inflamatórias, hepatite C, doenças auto-imunes, doenças linfoproliferativas e granulomatosas. Ainda que a doença seja conhecida desde 1954 há poucos trabalhos na literatura sobre manifestações bucais nestes pacientes. Alguns estudos sugerem uma maior prevalência de lesões liquenóides, doença periodontal, candidíase pseudomembranosa, úlcera aftosa recorrente e hipoplasia de esmalte. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a prevalência das manifestações e alterações bucais, e caracterizar a saúde bucal de pacientes com hipogamaglobulinemias e correlacioná-las com o estado imunológico do paciente, comparativamente a um grupo de pacientes saudáveis. Para tanto avaliamos 100 pacientes com hipogamaglobulinemias atendidos no Ambulatório de Imunologia e Alergia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo e 93 pacientes normorreativos da Clínica Odontológica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo, sendo realizado exame clínico bucal, anamnese e compilação de exames laboratoriais recentes. Do total de pacientes com hipogamaglobulinemias, 59 pacientes apresentaram alguma alteração bucal, sendo as mais frequentes lesões de cárie (21), hipoplasia de esmalte (21), gengivite (18), periodontite (8), boca seca (6), língua geográfica (5) e úlcera aftosa recorrente (2). Vinte e sete pacientes apresentaram queixas de úlcera aftosa recorrente com frequência. Dos 93 pacientes do grupo controle, 84 (90,3%) apresentaram alguma alteração bucal, sendo as mais frequentes lesões de cárie (66), gengivite (31), periodontite (44) e candidíase (3). Dezoito pacientes apresentaram queixas de úlcera aftosa recorrente com freqüência. Concluímos que os pacientes com hipogamaglobulinemias, apesar de apresentarem diminuição das imunoglobulinas do sangue, e alguns pacientes apresentarem uma diminuição de células da imunidade celular, não se encontrou relação positiva entre a incidência de cárie e IgA, doença periodontal e IgA e doença periodontal e CD4. / The hypogammaglobulinemia is an alteration in humoral immunity characterized by low levels of antibodies may have primary and secondary causes. These patients have a susceptibility to recurrent bacterial infections or chronic diseases, mainly respiratory tract. Moreover, there is a high prevalence of infectious and inflammatory gastrointestinal diseases, hepatitis C, autoimmune diseases, lymphoproliferative diseases and granulomatous disease. Although the disease is known since 1954 there are few available studies on oral manifestations in these patients. Some studies suggest a higher prevalence of lichenoid lesions, periodontal disease, pseudomembranous candidiasis, recurrent aphthous ulcer and enamel hypoplasia. Thus, the objective was to assess the prevalence of manifestations diseases and to characterize the oral health of patients with hypogammaglobulinemia and correlate with the immune status, compared with healthy patients. For that evaluated 100 patients with hypogammaglobulinemia in the Outpatient Immunology and Allergy Hospital of the Faculty of Medicine, University of São Paulo and 93 healthy patients of School of Dentistry, University of São Paulo, and was conducted oral clinical examination, medical history and compilation of recent laboratory tests. Of all patients with hypogammaglobulinemia, 59 patients showed abnormalities of the mouth, with 21 patients exhibited caries, 21 enamel hypoplasia, 18 gingivitis, 8 periodontitis, 6 dry mouth, 5 geographic tongue and 2 recurrent aphthous ulcer. Twenty-seven patients complained of frequent recurrent aphthous ulcer. Of the 93 control group patients, 84 (90.3%) showed abnormalities, being the most frequent caries (66), gingivitis (31), periodontitis (44) and candidiasis (3). Eighteen patients complained of recurrent aphthous ulcers frequently. We conclude that patients with hypogammaglobulinemia, despite showing decreased blood immunoglobulins, and some patients had a decrease of cells in cellular immunity, we did not find a positive relationship between the incidence of caries and IgA, IgA and periodontal disease and periodontal disease and CD4.

Este trabajo estudia el efecto bactericida del láser de Er, Cr:YSGG cuando se aplica en el interior del conducto radicular que previamente se ha infectado con Enterococcus faecalis. Para ello se han inoculado con Enterococcus faecalis dientes humanos unirradiculares. Para valorar el grado de desinfección de este tipo de láser se ha comparado los resultados obtenidos con la desinfección que se produce con el hipoclorito sódcio al 0.5% y al 5%, ya que estos son los métodos más comunmente utilizados en odontología para la desinfección del conducto radicular. También se ha valorado el incremento de temperatura que se produce en el interior del conducto radicular cuando este es irradiado con el láser de Er,Cr:YSGG. Los resultados de este trabajo muestran que : El láser de Er,Cr:YSGG tiene un importante efecto bactericida sobre Enterococcus faecalis cuando se irradia el interior del conducto radicular. Esta capacidad desinfectante es superior a la del hipoclorito sódico al 0.5% pero inferior a la del hipoclorito sódico al 5%. También se ha podido concluir que utilizando el tip de 200 micras y en las condiciones de este estudio, los mejores resultados, en cuanto a desinfección, se obtienen con los parámetros de 2W (reales 0.6W) durante 60 segundos en 2 sesiones de 30 segundos cada una de ellas y espaciadas entre sí por 15 segundos. Sin embargo, la importante destrucción y desgaste que se produce en la fibra, hace aconsejable utilizar el láser de Er,Cr:YSGG a 1W (real 0.3W) durante una aplicación de 120 segundos, en 4 sesiones de 30 segundos cada una de ellas y espaciadas entre sí por 15 segundos. Además se ha comprobado que, con los parámetros utilizados, con un mayor tiempo de irradiación se produce un efecto bactericida superior. Respecto al incremento de temperatura se concluyó que con los parámetros y condiciones de trabajo del láser de Er,Cr:YSGG empleados en este estudio nunca se ha producido un aumento térmico superior a los 10ºC, incremento éste que se considera como crítico respecto a la inducción de lesiones a los tejidos periapicales

En situaciones patológicas, como en el caso de la autoinmunidad, las células epiteliales de tejidos expresan ectopicamente moléculas de MHC de clase II. El estudio de los mecanismos que dan lugar a la formación de los complejos MHC-péptido, su presentación en la superficie de la APC y el reconocimiento de los mismos por parte de las células T es fundamental para poder entender, no sólo la respuesta inmune a infecciones, sino también patologías tan relevantes como el cáncer, la autoinmunidad o el rechazo de y/o mantenimiento de la enfermedad. En esta tesis se ha abordado el estudio de la presentación de péptidos por moléculas de MHC de clase II utilizando diversas estrategias proteómicas. En primer lugar, el trabajo se centró en la caracterización de los repertorios peptídicos asociados a una APC y a células epiteliales que expresaban moléculas de MHC de clase II, secuenciándose más de 300 ligandos peptídicos, incluyendo diversos péptidos presentados ex vivo en tiroides afectados por una patología autoinmune. Mediente este estudio se mostró que existen diferencias en los repertorios asociados a las células epiteliales frente a los presentados por las APC, tanto en las características de los péptidos como en las de las proteínas de las cuales derivan. Asimismo, se muestra como la expresión de las chaperonas HLA-DM y Ii afecta a las características del repertorio. Finalmente, se identificaron péptidos de clase II presentados en tiroides humanos afectados por la enfermedad de Graves-Basedow, entrre ellos un péptido derivado de la tiroglobulina, una proteína descrita como autoantígeno de esta enfermedad. En una segunda parte del trabajo se ha estudiado el efecto de la transfección de las moléculas HLA-DR, HLA-DM y Ii sobre el proteoma de las células epiteliales y se han identificado diversas proteínas implicadas en este proceso, mostrando que a pesar de no existir cambios drásticos en el proteoma global, algunas proteínas implicadas en el metabolismo celular varían su expresión. Asimismo, se han identificado 30 proteínas que se encuentran asociadas directamente o a través de otras moléculas con las moléculas de HLA-DR4 en la célula , entre ellas diversas chaperonas y enzimas de oxidoreducción, y proteínas implicadas en el transporte asociado a membranas. La expresión de estas proteínas dependía además de la expresión de la chaperonas Ii y DM por lo que se sugiere que algunas podrían estar implicadas en la generación, procesamiento o presentación de péptidos por las moléculas de MHC de clase II.

Los reservorios del VIH-1 se establecen en fases muy iniciales de la infección. Un estudio reciente documenta la presencia de gran cantidad de ARN vírico en ganglios linfáticos de individuos expuestos dos días después de la aparición de síntomas asociados con la infección aguda, incluso antes de la detección de anticuerpos.También se ha demostrado la existencia de un pequeño pool de células de vida media larga, linfocitos T CD4+ infectados, a partir del cual se puede recuperar el virus mediante técnicas de cultivo ultrasensible, teniendo la mayoría de los linfocitos T CD4+ fenotipo memoria. La vida media de este reservorio es contradictoria, estimándose entre 6 y 43 meses aunque datos recientes sugieren que podría durar más de 60 meses. De todas maneras los linfocitos T CD4+ infectados que permanecen latentes son sólo uno de los reservorios en la infección por el VIH-1 existiendo otros como pueden ser el sistema nervioso central, el semen, el tejido renal y el tejido linfático que es el motivo principal de nuestros estudios.Los principales marcadores para el seguimiento y pronóstico de los pacientes infectados con el VIH-1 son la carga viral plasmática y las subpoblaciones de linfocitos T en sangre periférica. Su eficacia para el estudio de la replicación viral y la inmunodeficiencia o como predictores de la evolución de pacientes con o sin tratamiento ha sido ampliamente demostrada. Sin embargo, en ocasiones, pueden no ser suficiente para el estudio de los cambios acaecidos después de la terapia antirretroviral administrada ya que diversos trabajos han evidenciado discrepancias entre los hallazgos en sangre periférica y en tejido linfático, tanto al valorar la replicación viral como los cambios en los niveles de las subpoblaciones de linfocitos. Incluso se ha descrito la existencia de pacientes con carga viral plasmática indetectable pero con presencia de carga viral en varios compartimentos, entre ellos el tejido linfático. Esto podría explicar casos clínicos de respuesta discordante de pacientes con caída de linfocitos T CD4+ a pesar de tener un buen control de la replicación viralEl manejo de la infección por el VIH-1 se basa actualmente en el uso de tratamientos antirretrovirales altamente efectivos combinados con la monitorización del efecto virológico del tratamiento en plasma. El objetivo de estos tratamientos es suprimir la replicación viral con tal de prevenir el desarrollo de resistencias y la progresión clínica, y permitir así la restauración de la función inmune.En diversos estudios de investigación se produce la discusión de cómo se produce la restauración inmunológica, de cual es la replicación viral residual después de la supresión de la viremia o porque existen discrepancias entre la carga viral y la respuesta de las células CD4+ en algunos pacientes infectados por el VIH-1 que reciben terapia antirretroviral. Este conocimiento de la dinámica de la replicación viral y de las poblaciones linfocitarias es esencial para poder combatir esta infección. Se cree que la CVTL influye sobre la CVP y los parámetros del sistema inmunológico del tejido linfático y de la sangre periférica tanto antes como después de TARGA, además de correlacionarse con los cambios anatomopatológicos en tejido linfático.Está demostrado que los pacientes con CVP < 200 copias/ml y CVTL detectable tienen más posibilidad de fracaso que aquellos con CVTL indetectable. Por lo tanto, el conocimiento de las relaciones entre el tejido linfático y la sangre periférica permitiría identificar marcadores en periferia, más accesibles y repetibles, que nos indicasen qué pacientes están realmente inhibidos en tejido linfático y por tanto tienen menor riesgo de fracaso. Esto permitiría modificar las pautas de TARGA para evitar dicho fracaso. Estos últimos interrogantes y el comportamiento diferente entre la sangre periférica y el tejido linfático ha promovido que las investigaciones actuales profundicen en el estudio de este tejido para poder dilucidar su papel como reservorio de la replicación viral y poder valorar con mayor exactitud el efecto de la medicación antirretroviral y la recuperación inmunológica con inmunoterapia o para pronosticar el tiempo con viremia suprimida después del tratamiento.Siguiendo esta línea, en nuestros estudios, hemos investigado las relaciones entre los cambios producidos en la carga viral y las subpoblaciones de linfocitos en el tejido linfático amigdalar y en sangre periférica con el objetivo de buscar marcadores más exactos para el seguimiento y pronóstico de los pacientes infectados con el VIH-1, así como la influencia de esta carga viral, antes o después de la instauración del tratamiento, en la persistencia de las alteraciones en el sistema inmunológico del tejido linfático1º ARTÍCULO: PREDICTORS OF TONSILLAR TISSUE HIV-1 VIRAL BURDEN AT BASELINE AND AFTER 1 YEAR OF ANTIRETROVIRAL THERAPY. Antiviral Therapyt 8:635-637. ABSTRACT En pacientes naive infectados de forma crónica por el VIH, se observa una correlación entre la carga viral de tejido amigdalar y diferentes parámetros inmunológicos y virológicos de sangre periférica, que no se observan después de 1 año de tratamiento antirretroviral de alta actividad (TARGA). Los regímenes que contienen un inhibidor de la proteasa son los mejores predictores de una buena respuesta virológica en el tejido amigdalar después de un año de TARGA.Palabras clave: carga viral en tejido amigdalar, carga viral plasmática, marcadores, activación inmune.2º ARTÍCULO: IMMUNOARCHITECTURE OF LYMPHOID TISSUE IN HIV-INFECTION DURING ANTIRETROVIRAL THERAPY CORRELATES WITH VIRAL PERSISTENCE. Modern Pathology (2005) 18, 127-136La carga viral plasmática y las determinaciones de las subpoblaciones linfocitarias en sangre periférica son los marcadores usados para monitorizar la infección por VIH. Sin embargo, la replicación viral y la mayoría de los cambios inmunológicos suceden en los tejidos linfoides (TL) Hemos estudiado las biopsias amigdalares de 30 pacientes en estadíos tempranos de la enfermedad, antes del inicio de cualquier tratamiento y después de 12 y 36 meses de tratamiento antirretroviral de alta actividad (TARGA). Se ha investigado el ARN del VIH mediante técnicas de PCR (carga viral en TL), la inmunoexpresión de la proteína p24 viral y la arquitectura del tejido linfoide y subpoblaciones celulares por medio de un morfómetro. La carga viral en TL y la inmunoexpresión de p24, la cual fue encontrada asociada principalmente a células foliculares dendríticas, desciende significativamente después del tratamiento, pero no desaparece en todos los casos, incluso después de 36 meses de tratamiento. Fue observada una mejoría significativa de la arquitectura del TL después del tratamiento, con recuperación de las estructuras foliculares. Estos cambios histológicos se correlacionan con la carga viral en TL. Además, el número de células CD4+ se incrementa, mientras los linfocitos CD8+ y citotóxicos (CD8+granzymeB+) descienden significativamente, la última tanto en el área folicular como interfolicular. Sin embargo estos niveles celulares después del tratamiento no alcanzan los de los pacientes control sanos. Las células naive (CD45RA+) y memoria (CD45RO+) aumentan significativamente después del tratamiento. En conclusión, en la infección por VIH el impacto del tratamiento sólo puede ser establecido completamente en los reservorios de TL, donde la mayoría de los virus se almacenan y se asocian a celulas foliculares dendríticas. TARGA produce una recuperación significativa de la arquitectura del TL y de las subpoblaciones linfocitarias, las cuales estan asociadas a un descenso en la carga viral en TL. Sin embargo estos parámetros estudiados en TL no se restablecen completamente, incluso después de 36 meses de TARGA.Palabras clave: TARGA, VIH, Inmunohistoquímica, tejido linfoide, morfometro, p24.

Klebsiella spp., particularmente Klebsiella pneumoniae, es un importante agente causal de infecciones nosocomiales. Las principales infecciones producidas por K. pneumoniae son las neumonías y las infecciones del tracto urinario.En las bacterias gram-negativas el lipopolisacárido (LPS) constituye el antígeno superficial más importante y consta de tres regiones principales: el lípido A, el núcleo del lipopolisacárido, y el antígeno O. Los determinantes genéticos de la biosíntesis del antígeno O y del núcleo del LPS han sido ampliamente estudiados en las Enterobacteriaceae y en otras bacterias gram-negativas.Un total de ocho pautas abiertas de lectura completas (ORFs) eran necesarias para la producción del antígeno O5 del LPS de K. pneumoniae cepa KT769. Mediante el uso de mutantes O5- y la correspondiente cepa salvaje y los mutantes complementados con la agrupación génica wb[O5], hallamos que la presencia del antígeno O5 de K. pneumoniae es esencial para algunas de las características patogénicas de esta bacteria.En un segundo trabajo fue descrita la agrupación génica wb responsable de la biosíntesis del antígeno O12 de K. pneumoniae. Un total de ocho ORFs eran necesarias para la producción del antígeno O12 del LPS de K. pneumoniae cepa KT776. El análisis de la agrupación génica wb[O12] de K. pneumoniae mostró interesantes coincidencias con la agrupación génica wb[O4] de Serratia marcescens. Este hecho nos llevó a estudiar las complementaciones entre las agrupaciones génicas de ambas enterobacterias utilizando mutantes de S. marcescens N28b (O4) y K. pneumoniae KT776 (O12). Los genes wzm-wzt y los genes wbbA o wbbB no eran intercambiables entre ambas agrupaciones génicas, independientemente de los elevados niveles de similitud existentes. Sin embargo, la introducción de los tres genes de una misma agrupación (wzm-wzt-wbbA o wzm-wzt-wbbB) en mutantes incapaces de producir el antígeno O permitió la producción del antígeno O específico de esa agrupación. La proteína WbbL de K. pneumoniae O12 realiza la misma función que la WbbL de S. marcescens O4 tanto en S. marcescens O4 como E. coli K-12.En nuestro último trabajo caracterizamos completamente la agrupación génica waa, implicada en la biosíntesis del núcleo del LPS de la cepa 52145 de K. pneumoniae. Esta agrupación génica presenta tres ORFs diferentes en K. pneumoniae 52145 en comparación con la agrupación waa de K. pneumoniae C3, que había sido descrita previamente. La caracterización genética de la agrupación mostró que las diferencias genéticas en la cepa 52145 implican la existencia de diferencias a nivel de la estructura química del núcleo del LPS de esta cepa.

Els virus JC i BK pertanyen a la família Polyomaviridae i fan infeccions al ronyó d'un 60-80% d'individus adults arreu del món sense causar en principi cap simptomatologia. En condicions d'immunosupressió JC pot ocasionar una malaltia letal del cervell anomenada leucoencefalopatia multifocal progressiva (PML) que afecta un 4% de pacients de SIDA, BK pot ocasionar nefropatia en pacients trasplantats de ronyó. Ambdós virus s'han relacionat recentment amb tumors de cervell i JC amb tumors colorectals. La ruta de transmissió d'aquests virus roman desconeguda.Entre els anys 1955-1961, SV40, un poliomavirus que infecta micos rhesus, va ser administrat a la població en ser un contaminant de les cèl·lules utilitzades per produir les vacunes de la polio. Recentment, SV40 ha estat detectat en tumors humans i la possibilitat de que infecti la població està sent considerada.L'objectiu d'aquesta tesi doctoral va ser el d'estudiar l'excreció d'aquest virus per part de la població de diverses zones geogràfiques. En la primera part de l'estudi es va dissenyar un mètode per detectar els poliomavirus BK, JC i SV40 en mostres d'aigua residual urbana i altres mostres ambientals. La detecció de virus en aquestes mostres permet estudiar els virus excretats per comunitats senceres en un moment i en un indret determinat. El mètode desenvolupat va permetre concentrar i detectar per PCR niada les partícules víriques (PV) de JC, BK i SV40 presents en un total de 52 mostres d'aigua residual urbana de Barcelona, Umeå (Suècia), Nancy (França), Pretoria (Sudàfrica), Cairo (Egipte), Patras (Grècia) i Washington DC (EUA). També es va estudiar la presència de poliomavirus humans i SV40 en 10 mostres de mol·luscs bivalves (Tarragona) i en 23 mostres ambientals del Nord de la Índia.Es van detectar elevades concentracions de JC i BK (10 elevat a 3 i 10 elevat a 2 PV/ml respectivament) i absència de resultats positius per SV40. Es va estudiar l'estabilitat a 20ºC dels JC i BK presents en aquest tipus de mostres. En una segona part de l'estudi, els virus detectats van ser tipificats, analitzats filogenèticament i l'estructura de la seva regió reguladora (RR) va ser caracteritzada. L'estudi de la regió intergènica (RI) de JC va permetre construir un arbre filogenetic que relacionava les soques detectades amb l'origen ètnic de les poblacions estudiades. L'estudi de la RR de JC va permetre concloure que la majoria dels JC presents en aigües residuals presenten una configuració arquetípica d'aquesta regió (al igual que passa amb BK) tot i que es va detectar un petit percentatge de soques amb RR reorganitzades en l'aigua residual de Washington DC. En la tercera part d'aquest estudi, es descriu per primera vegada com PV dels JC i BK arquetípics presents en una mostra d'orina d'una dona embarassada van infectar cèl·lules SVG. JC Mad-4 (soca control) tractat amb tripsina va infectar cèl·lules SVG al igual que Mad-4 sense tractar. Mad-4 tractat amb pH 3 durant 1 hora va infectar les cèl·lules produint però un descens en el títol de la progènie.Aquests resultats ens van fer suggerir una ruta de transmissió de JC a partir d'aigües o aliments contaminats a través del tracte gastrointestinal.Es va estudiar l'excreció de les PV de SV40 excretades per una població de micos Cynomolgus naturalment infectats amb el virus. Es van detectar soques arquetípiques de SV40 en la meitat de les gàbies analitzades confirmant que el mètode desenvolupat permet detectar SV40 en mostres ambientals. L'absència de SV40 en les mostres estudiades indica que el virus no està sent excretat per la població estudiada que està present en molt baixes concentracions (<5PV/ml d'aigua residual).

Introdução: Em pacientes críticos, como os grandes queimados, todos os parâmetros farmacocinéticos (absorção, distribuição, metabolismo e excreção) de muitas classes de drogas, incluindo antimicrobianos, estão alterados. Devido à forte associação entre a terapia antimicrobiana adequada em pacientes com queimaduras e mortalidade, intervenções como o monitoramento terapêutico de drogas podem ser uteis para otimizar a concentração sérica desses agentes em diferentes estágios do estado hiperdinâmico. Portanto, é possível melhorar desfecho clínico e sobrevivência além de reduzir o desenvolvimento de resistência. O objetivo deste estudo foi analisar o impacto em mortalidade de uma estratégia de ajuste de dose de acordo com o monitoramento terapêutico e modelagem farmacocinética/farmacodinâmica em pacientes de uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) para Queimados. Métodos: Um estudo comparativo, retrospectivo, foi conduzido entre pacientes admitidos com pneumonia, infecção em queimadura, infecção de corrente sanguínea e/ou infecção do trato urinário associados à assistência à saúde em uma UTI para Queimados do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). Estes pacientes foram divididos em dois grupos: aqueles admitidos de maio de 2005 a outubro de 2008 que receberam antibioticoterapia em regime de dose convencional proposto pelo Grupo de Controle de Infecção Hospitalar do HC-FMUSP e aqueles admitidos de novembro de 2008 a junho de 2011 que receberam terapia antimicrobiana com dose ajustada de acordo com o monitoramento plasmático e modelagem farmacocinética. Características gerais dos dois grupos foram analisadas e desfechos clínicos (melhora dos sinais e sintomas da infecção), mortalidade em 14 dias e mortalidade hospitalar foram comparados. Resultados: 63 pacientes admitidos na UTI de Queimados apresentaram os critérios de inclusão para o grupo de tratamento convencional e 77 para o grupo de tratamento monitorado. Comparando dois grupos homogêneos em suas características gerais, houve diferenças quanto ao número de desbridamentos realizados e história de alcoolismo e uso de drogas ilícitas, mais frequentes no grupo de tratamento monitorado. Melhora clínica ocorreu em 56% dos pacientes sob regime monitorado e a mortalidade hospitalar foi similar entre os grupos. Pertencer a um dos grupos de tratamento não afetou o prognóstico. Na análise multivariada final, variáveis significativamente associadas com mortalidade hospitalar foram superfície corporal queimada maior que 30%, idade mais avançada e sexo masculino. Conclusão: Nosso estudo demonstrou que a estratégia de monitoramento terapêutico de antimicrobianos não alterou prognóstico de pacientes queimados. Acreditamos que são necessários mais estudos para embasar esta estratégia / Introduction: In critical patients, such as burn patients, pharmacokinetic parameters (absorption, distribution, metabolism and excretion) of many classes of drugs, including antibiotics, are altered. The aim of this study was to compare two groups of burned patients under treatment for healthcare associated infections with and without therapeutic drug monitoring (TDM) based on PK/PD modeling. Methods: A comparative study was conducted with patients with healthcare-associated pneumonia, burn infection, bloodstream infection and urinary tract infection in the Burn Intensive Care Unit (ICU) of a tertiary-care hospital. These patients were divided into two groups: 1) those admitted from May 2005 to October 2008 who received conventional antimicrobial dose regimen; and 2) those admitted from November 2008 to June, 2011 who received antibiotics with doses adjusted according to plasma monitoring and pharmacokinetics modeling. General characteristics of the groups were analyzed and clinical outcomes, 14-day and in-hospital mortality. Results: 63 patients formed the conventional treatment group and 77 the monitored treatment group. The groups were very homogeneous. Improvement occurred in 56% of the patients under monitored treatment and the in-hospital mortality was similar between groups. In the final multivariate models, variables significantly associated with in-hospital mortality were total burn surface area (TBSA) > 30%, older age and male sex. Treatment group did not affect the prognosis. Conclusions: TDM for antimicrobial treatment did not alter the prognosis of burn patients. More trials are needed to support the use of TDM to optimize treatment in burn patients

Introducció. Una tercera part de les consultes en atenció primària obeeixen a una malaltia infecciosa i en més de la meitat d'aquestes es deu a una infecció del tracte respiratori. Malgrat l'efecte marginal dels antibiòtics en la majoria de les infeccions respiratòries, la prescripció antibiòtica en aquestes infeccions és molt elevada. Material i mètodes. L’objectiu d’aquesta tesi va ser avaluar l’efectivitat d’un programa d’intervenció en la reducció de la prescripció antibiòtica en les infeccions del tracte respiratori. Es tracta d’un estudi multicèntric de garantia de qualitat abans-després fet en atenció primària amb metges de família de diverses Comunitats Autònomes d’Espanya. Tots els metges van enregistrar durant 15 dies en els mesos de gener i febrer de 2008 (fase preintervenció) tots els contactes amb infeccions del tracte respiratori, recollint en una plantilla les següents variables: edat, sexe, dies amb símptomes, signes i símptomes acompanyants, sospita etiològica, diagnòstic, antibiòtic prescrit, al•lèrgia a la penicil•lina, demanda d’antibiòtic i derivació a un altre nivell assistencial o no. Amb els resultats globals i de cada investigador es van realitzar les activitats d’intervenció que incloïen una reunió presencial amb presentació i discussió de resultats i diverses reunions de formació en guies d'infeccions del tracte respiratori, fullets d'informació per als pacients, taller en tests diagnòstics ràpids – tècniques antigèniques per a la detecció de l’estreptococ β-hemolític del grup A (StrepA) i test ràpid de proteïna C reactiva en sang capil•lar (PCR) – i provisió d’aquests tests diagnòstics ràpids a la consulta. Tots els metges participants en l'estudi a excepció de Catalunya van dur a terme tota aquesta intervenció (grup d’intervenció completa); en canvi, els metges catalans van realitzar la mateixa intervenció menys el taller en mètodes diagnòstics ni tampoc es van oferir els tests ràpids (grup d’intervenció parcial). En una segona fase es va repetir el mateix registre a començaments de l'any 2009 (fase postintervenció). A més, en aquest segon any es van incloure nous metges que van emplenar el mateix registre (grup control) sense fer cap intervenció. Es va efectuar una anàlisi de regressió logística multinivell considerant la prescripció antibiòtica com a variable dependent. Resultats. D’un total de 309 metges d’atenció primària que van fer el primer registre en el 2008, 281 van realitzar tota la intervenció i el segon registre (90,9%), dels quals 210 van fer la intervenció completa i 71 la intervenció parcial. El grup control el conformaren 59 metges. La infecció més freqüent va ser el refredat (40,2% de tots els casos) i el símptoma més freqüent fou la tos (75,4% dels casos). Es donaren antibiòtics en més del 85% dels casos en pneumònia, amigdalitis aguda, otitis mitjana aguda i sinusitis aguda. L’antibiòtic que més freqüentment es prescrigué va ser l’associació d’amoxicil•lina i àcid clavulànic, seguit d’amoxicil•lina. Els signes que més prediren prescripció antibiòtica abans de la intervenció foren exsudat amigdalar, otorrea i purulència de l’esput, observant-se més de divuit vegades més prescripció antibiòtica quan aquests es presentaren que quan no. La intervenció parcial no va modificar el percentatge de prescripció antibiòtica mentre que els metges que van realitzar la intervenció completa sí la van modificar, passant d’un 27,4% global a l’inici a un 16,9%, principalment en grip (passant del 3% el 2008 al 0,3% el 2009), refredat comú (2,9% a 0,7%), bronquitis aguda (62,3% a 30,2%) i faringitis aguda (18,8% a 5,1%). Aquests metges van donar menys pes a l’exsudat faringoamigdalar i a l’esput purulent com a predictors d’antibioteràpia. Els metges que empraren l’StrepA prescrigueren menys antibiòtics que aquells que no l’utilitzaren en la faringoamigdalitis i el resultat negatiu del test va ser el factor protector més important d’antibioteràpia (OR:0,008; IC95%: 0,004-0,014). Semblantment, la prescripció antibiòtica va ser menor en les infeccions del tracte respiratori inferior quan es va utilitzar la PCR (43,9% vs. 61,8%; p<0,001). Quan els valors de PCR foren inferiors a 10 mg/L es donaren antibiòtics en menys del 15% dels casos tant en la sinusitis com en les infeccions respiratòries baixes. A més, només els metges que van rebre la intervenció completa, però no els que van rebre la parcial, van modificar qualitativament la prescripció antibiòtica. Conclusions. Els resultats obtinguts en l’estudi Happy Audit confirmen que la participació activa dels metges d’atenció primària amb la realització de tests diagnòstics ràpids a la consulta s’acompanya d’una reducció dràstica d’antibiòtics en les infeccions del tracte respiratori, principalment en aquelles infeccions considerades majoritàriament virals. / Introduction. A third of primary care consultations are due to an infectious disease and more than half are caused by a respiratory tract infection. Despite the marginal effect of antibiotics in most respiratory infections, antibiotic prescriptions in these infections is very high. Material and methods. The objective of this thesis was to evaluate the effectiveness of an intervention program in reducing antibiotic prescribing in respiratory tract infections. This is a before-after quality assurance multicenter study carried out in primary care with family physicians in various regions of Spain. All doctors registered for 15 days in January and February 2008 (pre-intervention) all contacts with respiratory tract infections byfilling out a template containing the following variables: age, sex, days with symptoms, signs and symptoms accompanying, suspected etiology, diagnosis, prescribed antibiotic, penicillin allergy, antibiotic prescribed, demand of antibiotic, and referral to another setting of care or not.All physicians participating in the study with the exception of Catalonia carried out the whole intervention (full intervention group: guidelines, information brochures for patients CRP and strepA );conversely, Catalan doctors performed the same intervention excepted for the workshop on rapid tests andpoint-of-care tests were not provided (partial intervention group) without intervention. The same registry was repeated in early 2009 (postintervention). Moreover, in this second year new physicians were included who completed the same record (control group). We performed a multilevel logistic regression analysis considering antibiotic prescription as the dependent variable. Results. Out of a total of 309 primary care physicians who performed the first registry in 2008 and 281 completed the intervention and the second registry (90.9%).The most common infection was common cold (40.2% of all cases) and the most frequent symptom was cough (75.4% of cases). Antibiotics were given more than 85% of cases in pneumonia, acute tonsillitis, otitis media and acute sinusitis. The most frequently antibiotic prescribed was amoxicillin and clavulanate followed by amoxicillin. The signs that predicted more frequently the prescription of antibiotics before the intervention were tonsillar exudate, otorrhea, and sputum purulence (more than eighteen-fold more frequently if they were observed). The partial intervention did not alter the rate of antibiotic prescription while doctors assigned to the complete intervention reduced the prescription of antibiotics from an overall 27.4% before to 16.9% after the intervention. These physicians gave less weight to pharyngeal exudate and purulent sputum as predictors of antibiotic prescribing. Doctors who used StrepA prescribed fewer antibiotics than those who did not use it and negative test result was the most important protective factor for antibiotic prescription for pharyngotonsillitis (OR: 0.008, 95%CI: 0.004 to 0.014). Similarly, antibiotic prescribing was lower in the lower respiratory tract infections among ohysicians who used the CRP rapid test (43.9% vs. 61.8%, p <0.001). Conclusions.On the basis of the results of Happy Audit study we can assure that active participation of primary care physicians with the performance of point-of-care tests in the consultation is accompanied by a drastic reduction of antibiotics in respiratory tract infections, primarily in those considered as mainly viral infections.