Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-25Bitstream added on 2014-11-10T11:58:34Z : No. of bitstreams: 1 000790824.pdf: 3106803 bytes, checksum: 7832b1c36cd66cb92019a6cba52eb98c (MD5) / Feridas de grandes extensões, com perda da viabilidade tecidual e retardo na cicatrização por segunda intenção são casos que se faz necessário o emprego de técnicas cirúrgicas reconstrutivas. O plasma rico em plaquetas (PRP) é um produto com maior concentração plaquetária, adjuvante no processo cicatricial de cirurgias reconstrutivas, auxiliando nos processos de hemostasia e estimulação da angiogênese. Dessa forma, delineou-se um estudo a fim de avaliar a eficácia do uso do gel produzido a partir do plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes de avanço de padrão axial toracodorsal em coelhos, para avaliar a possibilidade de favorecer a integração do retalho no leito receptor. Utilizaram-se 30 coelhos da raça Nova Zelândia branco, separados em dois grupos de 15 animais, compreendendo os grupos plasma rico em plaquetas (GPRP), na qual empregou-se o gel antes da síntese da ferida cirúrgica, e controle (GC), na qual utilizou-se apenas solução fisiológica. Para obtenção do PRP, coletou-se sangue dos animais, e determinou-se a contagem plaquetária antes da preparação do gel. No início e término do experimento os animais foram pesados para posterior análise de ganho peso médio. Após o procedimento cirúrgico iniciou-se as avaliações macroscópicas no 3º, 7º e 14º dia, e avaliou-se presença ou ausência de exsudato, integridade da pele, edema, rubor e necrose. Após esta etapa, coletou-se o material da ferida cirúrgica para confecção das lâminas histológicas e posterior avaliação microscópica. Avaliou-se a proliferação vascular, presença de células mononucleares e polimorfonucleares, proliferação fibroblástica, colagenização, reepitelização e hemorragia. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (Teste t Student, t emparalhado, e Kruskall Walis, sendo p<0,05). O ganho de peso médio não foi significativo entre os grupos ... / Wounds of large tracts with loss of tissue viability and delayed healing by secondary intention are cases where it is necessary the use of reconstructive surgical techniques. The platelet rich plasma (PRP) is a product with a higher platelet concentration, adjuvant in the healing process of reconstructive surgeries, assisting in the processes of hemostasis and stimulation of angiogenesis. Thus, a study was devised to assess the efficacy of the gel produced from the platelet rich plasma (PRP) in the forward axial flaps thoracodorsal pattern in rabbits to evaluate the ability to promote the integration of the flap the recipient bed. We used 30 white rabbits New Zealand, separated into two groups of 15 animals, comprising the platelet rich plasma groups (GPRP), in which we used the gel before the synthesis of the surgical wound , and control (CG), in which only saline was used. To obtain the PRP, the blood was collected from the animals, was determined and the platelet count before preparation of the gel. At the beginning and end of the experiment the animals were weighed for analysis of average weight gain. After surgery began macroscopic in the 3rd, 7th and 14th day reviews, and we assessed the presence or absence of exudate, skin integrity, edema, redness and necrosis. After this step, yielded the material for the manufacture of surgical wound, followed by microscopic histological slides. We evaluated vascular proliferation, presence of polymorphonuclear and mononuclear cells, fibroblast proliferation, collagen deposition, reepithelialization and hemorrhage. The data were subjected to statistical analysis (Student t test, t paired, and Kruskal Wallis test, and p<0.05). The average weight gain was not significant between the groups; platelet concentration in the final sample of PRP was significantly higher when compared with the original; exudate and necrosis were significantly higher in the ...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-26Bitstream added on 2014-11-10T11:57:54Z : No. of bitstreams: 1 000790294_20150101.pdf: 1339495 bytes, checksum: 9608cd234e360d7d9834c3e9a30bffc6 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:52Z: 000790294_20150101.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:49Z : No. of bitstreams: 1 000790294.pdf: 4234145 bytes, checksum: f0880c0e8a8108d6d7a6801648e5a50a (MD5) Bitstreams deleted on 2016-08-12T12:00:45Z: 000790294_sub.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T12:01:20Z : No. of bitstreams: 1 000790294.pdf: 2780767 bytes, checksum: 07f6082eb9b1ea8f07a04e4c107bdeac (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer de mama apresenta altas taxas de incidência e mortalidade, sendo a neoplasia mais comum entre as mulheres. O rápido crescimento do tumor resulta em hipóxia no microambiente tumoral, levando a uma cascata de eventos que induzem a angiogênese e conseqüente progressão do câncer. Assim, a identificação de agentes terapêuticos que possam inibir a angiogênese é essencial para o controle da progressão tumoral. Nesse sentido, tem sido demonstrado que a administração exógena da melatonina, um hormônio naturalmente secretado pela glândula pineal, apresenta diversos efeitos oncostáticos em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a efetividade do tratamento com melatonina sobre a angiogênese do câncer de mama, em estudos in vitro e in vivo. No estudo in vitro, as linhagens de câncer de mama MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas com melatonina sob condições de hipóxia mimetizadas pelo Cloreto de Cobalto (CoCl2). A viabilidade celular foi verificada pelo ensaio MTT, a expressão do fator de transcrição induzido por hipóxia (HIF-1α) e do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF-A) foi avaliada por PCR em tempo real e imunocitoquímica. Além disso, demais proteínas envolvidas na angiogênese foram avaliadas por Protein Array. No estudo in vivo, as células MDA-MB-231 foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram tratados com melatonina (40 mg/kg) por 21 dias. O tumor foi medido semanalmente e a avaliação da angiogênese foi realizada pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc- 99m-HYNIC-VEGF-c, agente específico para os receptores de VEGF (VEGFR2/VEGF3). Além disso, as proteínas VEGFR2, VEGFR3, fator de fator de von Willebrand (vWF) e marcador de proliferação celular (Ki-67) foram avaliados no tecido tumoral por imuno-histoquímica, e demais proteínas angiogênicas por Protein Array. O estudo in ... / Breast cancer has high rates of incidence and mortality, and it is the most common cancer among women. The rapid tumor growth results in hypoxia on tumor microenvironment, leading to a cascade of events that induce angiogenesis and subsequent cancer progression. Thus, the identification of therapeutic agents that can inhibit angiogenesis is essential for the control of tumor progression. Exogenous administration of melatonin, a hormone secreted by the pineal gland, has been shown several oncostatics effects on different types of cancers. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of melatonin treatment on angiogenesis in breast cancer, in the in vitro and in vivo studies. In the in vitro study, breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231) were treated with melatonin under cobalt chloride (CoCl2)-induced hypoxic conditions. Cell viability was measured by MTT assay, the expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF-A) was assessed by real-time PCR and immunocytochemistry. Additionally, other proteins involved in angiogenesis were evaluated by the Protein Array. In the in vivo study, the MDA-MB-231 cells were implanted in athymic nude mice, which were treated with melatonin (40 mg/kg) for 21 days. The tumor was measured weekly and evaluation of angiogenesis was performed by single-photon emission computed tomography (SPECT) with Tc-99m-HYNIC-VEGF-c, which is specific for VEGF receptors (VEGFR2/VEGF3). Moreover, VEGFR2, VEGFR3, von Willebrand factor (vWF) and cell proliferation marker (Ki-67) were evaluated in tumor tissue by immunohistochemistry, and other angiogenic proteins by Protein Array. Results from the in vitro study showed that 1 mM of melatonin under hypoxic conditions (200 μM CoCl2) led to decreased cell viability, protein levels of HIF- 1α and gene and protein expression of VEGF-A in both cell lines (p < 0.05). Among other proteins evaluated, melatonin ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-20Bitstream added on 2014-12-02T11:21:28Z : No. of bitstreams: 1 000799149.pdf: 16911809 bytes, checksum: 5ae0f4f9ce082f48f090a3e32c1d47fb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O câncer de mama representa a neoplasia mais comum entre as mulheres, sendo classificado como o segundo mais frequente no mundo. O crescimento do tumor requer a formação de novos vasos que são estimulados por fatores angiogênicos e seus receptores. As células neoplásicas são capazes de modificar seu fenótipo para promover alterações funcionais e estimular a produção de proteínas envolvidas na angiogênese. A curcumina, componente do extrato de Curcuma longa L, é utilizada como alimento e na medicina tradicional, no entanto algumas evidências indicam que esse extrato possui ação oncostática em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com curcumina na progressão tumoral e angiogênese em modelo experimental de câncer de mama. Células da linhagem de câncer de mama receptor triplo negativo (MDA-MB-231) foram cultivadas e a taxa de viabilidade celular verificada pelo ensaio MTT após tratamento com diferentes doses de curcumina. Para o estudo in vivo, as células foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram aleatoriamente divididos em animais tratados (n = 5) e controles (n = 8). Os animais receberam diariamente 300 mg/kg de curcumina ou veículo administrados intraperitonealmente durante 21 dias, cinco vezes por semana. O tamanho do tumor foi avaliado semanalmente com paquímetro digital. Ao final do tratamento, a angiogênese foi verificada in vivo pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc-99m acoplado a proteína recombinante VEGF-c, que possui afinidade pelos receptores VEGFR2/3. Além disso, a expressão de VEGF-A, VEGF-C, VEGFR2/3, marcador de proliferação celular (Ki-67) e o fator de Von Willebrand (vWF) foram verificados pelo procedimento imuno-histoquímico. No estudo in vitro, houve diminuição da taxa de viabilidade das células tratadas com curcumina, quando comparadas ... / Breast cancer is the most common cancer in women being rated as the second most common in the world. Tumor growth requires the formation of new vessels that are stimulated by angiogenic factors and their receptors. The neoplastic cells are able to modify their phenotype to promote functional changes and stimulate the production of proteins involved in angiogenesis. Curcumin, a component of the extract of Curcuma longa L, is used both as food and in traditional medicine, however some evidence indicates that this extract has oncostatic effects in different types of cancer. The aim of this study was to evaluate the effects of treatment with curcumin in tumor progression and angiogenesis in an experimental model of breast cancer. The cell line of human breast cancer (MDA-MB-231) was cultured and the rate of cell viability was measured by MTT assay after treatment with different doses of curcumin. For in vivo study, the cells were implanted in female athymic nude mice, which were randomly divided into treated (n = 5) and control animals (n = 8). The animals received daily 300 mg/kg of curcumin or vehicle daily, starting in the same day as tumor implantation and continued for 21 days five times per week. Tumor size was measured weekly with a digital caliper. The end of treatment, angiogenesis was assessed in vivo by the technique of computed tomography single photon emission tomography (SPECT) with the radiotracer Tc-99m-HYNIC-VEGF-c protein coupled recombining, which has affinity for VEGFR2/3. Furthermore, the expression of VEGF-A, VEGF-C e VEGFR2/3 marker of cell proliferation (Ki-67) and von Willebrand factor (vWF) receptors were verified by immunohistochemical. Curcumin treatment in vitro was able to significantly decrease cell viability (p < 0.05) Animals treated with curcumin showed less tumor volume (232.5 ± 53.2 mm 3) compared to control animals (282.0 ± 88.5 mm3), however, no significant difference (p > 0,05). The radioactivity of ...

As mutações no gene de supressão tumoral p53 estão entre as anormalidades genéticas mais comuns encontradas numa ampla variedade de tumores. Embora a função do gene p53 ainda não esteja completamente esclarecida, ele parece ser um fator de transcrição nuclear que controla a proliferação celular, a apoptose e a manutenção da estabilidade genética. A angiogênese é essencial para o crescimento e a metastatização de tumores sólidos. O Fator de Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF, Vascular Endothelial Growth Factor), um fator de crescimento identificado recentemente com propriedades angiogênicas significativas, pode ser um importante regulador da angiogênese tumoral. A associação entre as expressões da proteína p53 e do VEGF e o prognóstico tem sido pouco estudada. Foram estudadas peças cirúrgicas de 47 pacientes com carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) submetidos à esofagectomia em estágios II e III, utilizando-se coloração imuno-histoquímica. As expressões da proteína p53 e do VEGF foram observadas em 53% e 40% dos tumores, respectivamente. As expressões da proteína p53 e do VEGF coincidiram em somente 21% dos casos, e não foi encontrada correlação entre elas. Nenhum dos fatores clinicopatológicos se correlacionaram significativamente com as expressões da proteína p53 ou do VEGF. Em relação ao prognóstico, não havia associação significativa entre as expressões da proteína p53 e do VEGF e pior prognóstico. Os autores concluem que tanto a expressão da proteína p53 como a expressão do VEGF não se correlacionaram com o prognóstico em pacientes com CEE em estágios II e III. / p53 tumor suppressor gene mutations are the most common genetic alterations found in a wide variety of cancers. Although the function of the p53 gene has not been definitely established, p53 appears to be a nuclear transcription factor that plays a role in the control of cell proliferation, apoptosis, and the maintenance of genetic stability. Angiogenesis is a critical process in solid tumor growth and metastasis. Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF), a recently identified growth factor with significant angiogenic properties, may be a major tumor angiogenesis regulator. Few studies have investigated the association between p53 and VEGF expressions and prognosis in esophageal carcinoma. Forty-seven specimens resected from patients with stage II and III squamous cell carcinoma (SCC) of the esophagus were studied by means of immunohistochemical staining. p53 and VEGF expressions were observed in 53% and 40% of the tumors, respectively. p53 and VEGF staining statuses were coincident in only 21% of the tumors, and no significant correlation was found between p53 and VEGF statuses. No clinicopathologic factors were significantly correlated with p53 or VEGF expression. No significant association between p53 and VEGF expressions and poor prognosis was found. In conclusion, p53 and VEGF were not correlated with prognosis in patients with stage II and III SCC of the esophagus.

A quantificação da angiogênese e das metaloproteinases pode ser útil na avaliação do comportamento dos colesteatomas, como marcadores de sua agressividade. Objetivo: Comparar os marcadores CD31, MMP2 e MMP9 entre pacientes pediátricos e adultos. Método: transversal. Grupos pediátricos(até 18 anos) e adultos(a partir de 19 anos). Coletados 120 colesteatomas, fixados em formol a 10%, preparadas cinco lâminas, de cada amostra, por técnicas histológicas habituais, observados: número de vasos sangüíneos(CD 31), marcação com MMP2 e MMP9, número de células na matriz e espessura na perimatriz. Dados analisados no SPSS através coeficiente Spearman, exato de Fisher e Mann-Whitney. Resultados: Colesteatomas distribuídos igualmente: 60 pediátricos(11,77±3,57anos); 60 adultos(38,29±14,51anos). CD31pediátrico 7(4 a 11), CD31adulto 4(0 a 10) (P=0,044). MMP2citoplasmática pediátrico 1(0 a 3), MMP2citoplasmática adulto 0(0 a 1) (P=0,006). MMP2nuclear pediátrico 0(0 a 1), MMP2nuclear adulto 0(0 a 1) (P=0,056). MMP9 pediátrico 2(0 a 4), MMP9 adulto 0(0 a 4) (P=0,049). O número de vasos sangüíneos e a quantificação das metaloproteinases estavam fortemente correlacionados com a espessura da perimatriz. Conclusões: Os colesteatomas pediátricos apresentam um grau inflamatório mais exacerbado, produzem mais metaloproteinases, fatores estes, que conjugados, poderiam caracterizar os colesteatomas pediátricos como mais agressivos que os colesteatomas adultos. / Cholesteatoma is an epidermal cyst with three distinct components: matrix, perimatrix and cystic content. The clinical significance of cholesteatoma lies in its association with potential intracranial complications due to bone destruction. Objective: To compare histological and immunohistochemistry analysis between pediatric and adult acquired. Methods: Cross-sectional study. The patients were divided in two groups, according to their age: 60 adults(>18 years old) and 60 children(until 18 years old). The cholesteatomas were fixed in formalin 10%. Five slides from each sample were prepared using standard histology techniques. Slides were analyzed according to average number of blood vessels (CD31), MMP2 and MMP9 positivity and thickness of the perimatrix. Data were analyzed using Mann-Whitney and Fisher's exact tests and Spearmann coeficient, with P values<0.05 considered significant. Results: Perimatrix thickness was 78(34-217); CD31 was 6(0-11), cytoplasmic MMP2 positivity was 0(0-2), nuclear MMP2 positivity was 0(0-1); MMP9 positivity was 2(0-4). Statistical difference, between children and adults, was found in perimatrix thickness(P=0.014); blood vessels(P=0.044); cytoplasmic MMP2(P=0.006), nuclear MMP2(P=0.056); MMP9(P=0.049). Conclusions: Pediatric cholesteatomas have a thicker perimatrix, a greater degree of inflammation, and produce more metalloproteinases than those of adult patients, we can suggest, with the combination of these factors, that cholesteatoma is more aggressive in children than in adults.

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Sônia Maria Oliani / Banca: Angelo Gustavo Zucca Matthes / Resumo: O câncer de mama representa a neoplasia mais comum entre as mulheres, sendo classificado como o segundo mais frequente no mundo. O crescimento do tumor requer a formação de novos vasos que são estimulados por fatores angiogênicos e seus receptores. As células neoplásicas são capazes de modificar seu fenótipo para promover alterações funcionais e estimular a produção de proteínas envolvidas na angiogênese. A curcumina, componente do extrato de Curcuma longa L, é utilizada como alimento e na medicina tradicional, no entanto algumas evidências indicam que esse extrato possui ação oncostática em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com curcumina na progressão tumoral e angiogênese em modelo experimental de câncer de mama. Células da linhagem de câncer de mama receptor triplo negativo (MDA-MB-231) foram cultivadas e a taxa de viabilidade celular verificada pelo ensaio MTT após tratamento com diferentes doses de curcumina. Para o estudo in vivo, as células foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram aleatoriamente divididos em animais tratados (n = 5) e controles (n = 8). Os animais receberam diariamente 300 mg/kg de curcumina ou veículo administrados intraperitonealmente durante 21 dias, cinco vezes por semana. O tamanho do tumor foi avaliado semanalmente com paquímetro digital. Ao final do tratamento, a angiogênese foi verificada in vivo pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc-99m acoplado a proteína recombinante VEGF-c, que possui afinidade pelos receptores VEGFR2/3. Além disso, a expressão de VEGF-A, VEGF-C, VEGFR2/3, marcador de proliferação celular (Ki-67) e o fator de Von Willebrand (vWF) foram verificados pelo procedimento imuno-histoquímico. No estudo in vitro, houve diminuição da taxa de viabilidade das células tratadas com curcumina, quando comparadas ... / Abstract: Breast cancer is the most common cancer in women being rated as the second most common in the world. Tumor growth requires the formation of new vessels that are stimulated by angiogenic factors and their receptors. The neoplastic cells are able to modify their phenotype to promote functional changes and stimulate the production of proteins involved in angiogenesis. Curcumin, a component of the extract of Curcuma longa L, is used both as food and in traditional medicine, however some evidence indicates that this extract has oncostatic effects in different types of cancer. The aim of this study was to evaluate the effects of treatment with curcumin in tumor progression and angiogenesis in an experimental model of breast cancer. The cell line of human breast cancer (MDA-MB-231) was cultured and the rate of cell viability was measured by MTT assay after treatment with different doses of curcumin. For in vivo study, the cells were implanted in female athymic nude mice, which were randomly divided into treated (n = 5) and control animals (n = 8). The animals received daily 300 mg/kg of curcumin or vehicle daily, starting in the same day as tumor implantation and continued for 21 days five times per week. Tumor size was measured weekly with a digital caliper. The end of treatment, angiogenesis was assessed in vivo by the technique of computed tomography single photon emission tomography (SPECT) with the radiotracer Tc-99m-HYNIC-VEGF-c protein coupled recombining, which has affinity for VEGFR2/3. Furthermore, the expression of VEGF-A, VEGF-C e VEGFR2/3 marker of cell proliferation (Ki-67) and von Willebrand factor (vWF) receptors were verified by immunohistochemical. Curcumin treatment in vitro was able to significantly decrease cell viability (p < 0.05) Animals treated with curcumin showed less tumor volume (232.5 ± 53.2 mm 3) compared to control animals (282.0 ± 88.5 mm3), however, no significant difference (p > 0,05). The radioactivity of ... / Mestre

Orientador : Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Fernanda de Freitas Aníbal / Banca: Luis Vitor da Silva Sacramento / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: \denise Fecchio / Resumo: O câncer de mama é uma das maiores causas de morte dentre as mulheres, seguido pelo câncer de colo de útero. Os tratamentos geralmente utilizados são extremamente agressivos e na maioria das vezes causando efeitos deletérios as células do hospedeiro. Os macrófagos são as primeiras células a serem ativadas para participar de uma resposta imunológica propriamente dita, são células capazes de secretar mais de cem produtos biologicamente ativos, entre esses, espécies reativas de nitrogênio e citocinas que atuam no contexto da resposta imunológica e/ou inflamatória. Qualea grandiflora Mart (Q. grandiflora) da família Vochysiaceae é uma planta do cerrado brasileiro, utilizada na medicina popular no tratamento de úlceras, gastrites, amebíase, diarréia com sangue, cólicas intestinais e inflamações. Estudos realizados anteriormente em nosso laboratório demonstraram que espécies de Qualea sp. apresentou atividade antitumoral in vitro extremamente seletiva para tumor de mama murino (linhagem LM3) e ainda apresenta características anti-inflamatórias através da inibição expressiva da produção dos mediadores imunológicos NO, IL-1 e IL-12 pelos macrófagos peritoneais murinos ativados com LPS. A partir destes resultados, propusemos avaliar neste trabalho uma forma alternativa de tratamento contra o câncer de mama experimental empregando-se um extrato bruto (EH), uma fração terpênica (FT) derivada do extrato hexânico de Q. grandiflora e a substância isolada β-sitosterol (BS), em modelo experimental de Ehrlich concomitante à avaliação dos efeitos imunológicos das substâncias testadas, no animal. Como droga padrão dos experimentos realizados, utilizou-se o Taxol® (Paclitaxel- TX). Foi determinado in vitro a citotoxicidade celular de células do exsudado peritoneal de camundongos e células tumorais de Ehrlich, após incubação com os diferentes tratamentos pela técnica de MTT, analise da angiogênese pela dosagem... / Abstract: Breast cancer is a leading cause of death among women, followed by cervix cancer. The treatments normally used are highly aggressive, and most often causing deleterious effects on host cells. Macrophages are the first cells to be activated to participate in an immune response itself, cells are able to secrete more than hundred biologically active products, among these, reactive nitrogen species and cytokines that act in the context of immune and / or inflammatory. Qualea grandiflora Mart (Q. grandiflora) family Vochysiaceae is a plant of the Brazilian Cerrado, used in folk medicine in the treatment of ulcers, gastritis, amebiasis, bloody diarrhea, intestinal cramps and inflammation. Previous studies in our laboratory have shown that species Qualea sp. showed in vitro antitumor activity extremely selective murine breast tumor (line LM3) and also has anti-inflammatory characteristics by the significant inhibition of the production of immune mediators NO, IL-1 and IL-12 by murine peritoneal macrophages activated with LPS. From these results, we propose to evaluate this work an alternative form of treatment for breast cancer by employing a crude extract (EH), a fraction terpene (FT) derived from the hexane extract of Q. grandiflora and substance isolated β-sitosterol (BS) in an experimental model of Ehrlich concomitant evaluation of the immunological effects of the tested substances in the animal. As standard drug of experiments, we used Taxol ® (Paclitaxel-TX). It has been determined in vitro cytotoxicity of peritoneal exudate cells of mice and Ehrlich tumor cells after incubation with the different treatments using the technique of MTT analysis of VEGF angiogenesis by measuring the ocorência apoptosis in tumor cells by techniques Tunel and annexin V as well as the inhibition of nitric oxide (NO) and TNF-α, IL-1, IL-12 and IL-6. In addition, it was determined the rate of in vivo tumor inhibition and histological analysis by light ... / Doutor

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2038.pdf: 5348158 bytes, checksum: 8a697074e2ede1b8364027f59658d726 (MD5) Previous issue date: 2008-05-07 / Universidade Federal de Sao Carlos / Angiogenesis and wound repair are mediated by several growth factors that are strictly released. Alternagin-C (ALT-C), a disintegrin-like protein from the venom of Bothrops alternatus induces in vivo angiogenesis as well as the cyclic peptide derived from its primary structure, with the ECD motif (ALT-C PEP). This study investigated the effects of ALT-C and ALT-C PEP on angiogenesis and expression of growth factors in a model of wounded rat skin. The rats were anaesthetized; one cutaneous excision (4 mm diameter) was made on the back of each animal, close to the cervical area. Animals were then divided into 7 groups (five rats/group): control (treated with vehicle); locally treated with 10, 60 and 100 ng ALT-C or 10, 20 and 100 ng ALT-C PEP ALT-C PEP for 1, 3, 5 or 7 consecutive days. At the end of experiments animals were killed, the skin was removed; the cranial portion was used for histological analysis and from the caudal portion; protein were extracted, separated by SDS-PAGE and VEGF, FGF-1, TGF&#946;1, PDGF, IGF1 e TGF&#945; expression was analyze a by Western blotting. The results show that both, ALT-C and ALT-C PEP induced the formation of new vessels, stimulate collagen synthesis and modulated the expression of growth factors, mainly VEGF and FGF1. The increase in VEGF expression could be detected up to 7 days after injury. FGF1 was also significantly increased, but at a lesser extension than VEGF. In conclusion, we present a protein belonging to the disintegrin group of snake venom toxins stimulates angiogenesis and collagen synthesis in an injured tissue. ALT-C may exert its effects via integrin binding and growth factor modulation. As angiogenesis is an important event for wound healing, ALT-C and ALT-C PEP could be candidates to the development of a new drug for wounded skin repair or regeneration. / A angiogênese e o reparo tecidual são mediados por vários fatores de crescimento estritamente liberados. A Alternagina-C (ALT-C), uma proteína tipo-desintegrina derivada do veneno de Bothrops alternatus induz angiogênese in vivo, bem como, o peptídeo cíclico derivado de sua estrutura primária contendo o motivo ECD (ALT-C PEP). O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da ALT-C e do ALT-C PEP sobre a angiogênese e a expressão de fatores de crescimento em um modelo de lesão em pele de rato. Os animais foram anestesiados e foi induzida uma lesão esférica, com punch de 4 mm, na região interescapular. Os animais foram divididos em 7 grupos (5 ratos/grupo): controle (tratado com veículo); tratados com ALT-C (10, 60 ou 100 ng) e ou de ALT-C PEP (10, 20 ou 100 ng) por 1, 3, 5 e 7 dias consecutivos. Ao final do experimento, os animais foram submetidos à eutanásia, a pele lesada foi removida e dividida ao meio. A porção cranial foi usada para análise histológica e da porção caudal, as proteínas foram extraídas, separadas por SDS-PAGE e a expressão de VEGF, FGF-1, TGF&#946;1, PDGF, IGF1 e TGF&#945; foi analisada por Western blotting. Os resultados demonstram que ambos, ALT-C e ALT-C PEP induzem a formação de novos vasos, estimulam a síntese de colágeno e modulam a expressão de fatores de crescimento, principalmente VEGF e FGF1. O aumento da expressão de VEGF pôde ser detectado até 7 dias após a lesão. O FGF1 também aumentou significativamente, mas em menor extensão do que o VEGF. Em conclusão, apresentamos uma proteína pertencente ao grupo das desintegrinas de veneno de serpentes que estimula a angiogênese e induz a síntese de colágeno em tecido lesado. A ALT-C pode exercer os seus efeitos via ligação com integrina vinculada à modulação de fatores de crescimento. Como a angiogênese é um acontecimento importante para a cicatrização, ambos, ALT-C e ALT-C PEP parecem ser bons candidatos para o desenvolvimento de um novo fármaco auxiliar da regeneração de pele lesada.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-17Bitstream added on 2014-06-13T19:50:48Z : No. of bitstreams: 1 rodigheri_sm_me_jabo.pdf: 609216 bytes, checksum: ff21325464104d3c0ab1346398c145ee (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A angiogênese tem importante participação na patogênese das neoplasias malignas em seres humanos e animais de companhia. Estudos envolvendo a influência dos fatores pró-angiogênicos no crescimento e disseminação dos tumores sólidos têm sido amplamente realizados, porém os relacionados às neoplasias hematopoiéticas são extremamente limitados. O presente estudo objetivou investigar o fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) nos linfomas caninos e sua relação com indicadores prognósticos da neoplasia. Foram avaliados 25 cães, sendo 10 sadios e 15 com linfoma. Os pacientes foram submetidos à coleta de sangue para mensuração da concentração sérica do VEGF, mediante ensaio imunoenzimático (ELISA), e biopsia de linfonodo ou de tecido neoplásico para avaliação da expressão do VEGF, pela técnica de imunoistoquímica. Embora a média das concentrações séricas do VEGF nos cães com linfoma (88,51±121,71) tenha sido superior à média dos cães sadios (17,93±23,34), estes valores não foram considerados significativos (p=0,10). A imunomarcação para VEGF foi maior (p<0,0001) em cães com linfoma (9,07±2,34) em comparação com os cães sadios (2,70±2,35). Não houve correlação significativa entre a concentração sérica e a marcação imunoistoquímica do VEGF com a localização anatômica, estádio e sub-estádio clínico, grau histológico, imunofenótipo e a sobrevida dos cães com linfoma. O sub-estádio clínico influenciou negativamente na sobrevida dos cães com linfoma. Os resultados obtidos permitem concluir que o VEGF possui grande importância no comportamento biológico dos linfomas caninos, seja mediante estímulo da angiogênese ou da linfangiogênese tumoral. São necessários estudos com maior número de animais para determinar o valor prognóstico do estímulo à angiogênese ou linfangiogênese nos linfomas caninos. / Angiogenesis has a major role in the pathogenesis of malignancies in human beings and companion animals. Studies involving the role of pro-angiogenic factors in growing and dissemination of solid tumors are commonly performed, but studies involving hematological malignancies are relatively limited. The present report aims to investigate the role of the vascular endothelial growth factor (VEGF) in canine lymphomas and its relation with prognostic factors. Twenty five dogs were evaluated: ten healthy dogs and fifteen dogs with lymphoma. Patients were submitted to blood sample collection to VEGF serum concentration measure, by means of sandwich enzyme immunoassay. Lymph node or neoplastic tissue biopsy was accomplished in order to evaluate VEGF expression, through immunohistochemical technique. Although VEGF serum concentrations mean in dogs with lymphoma (88,51±121,71) was found to be greater than VEGF serum concentrations in healthy dogs (17,93±23,34), this values were not statistically significant (p=0,10). VEGF expression was significantly higher (p=0,0001) in dogs with lymphoma (9,07±2,34) than VEGF expression in healthy dogs (2,70±2,35). No significant relationship was found between VEGF serum concentration or expression and anatomical localization, clinical stage, histological grade, immunophenotype or overall survival of lymphoma affected dogs. The clinical sub-stage was the only negative prognostic factor in overall survival of dogs with lymphoma. We conclude that VEGF has an important role in biological behavior of canine lymphomas, once is involved in tumoral angiogenesis or lymphangiogenesis stimuli. Larger series of animals are needed to determine the prognostic value of angiogenesis and lymphangiogenesis in canine lymphomas.

Orientador: Debora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Samuel Cos Corral / Banca: Bruno Cogliati / Resumo: O câncer de mama apresenta altas taxas de incidência e mortalidade, sendo a neoplasia mais comum entre as mulheres. O rápido crescimento do tumor resulta em hipóxia no microambiente tumoral, levando a uma cascata de eventos que induzem a angiogênese e conseqüente progressão do câncer. Assim, a identificação de agentes terapêuticos que possam inibir a angiogênese é essencial para o controle da progressão tumoral. Nesse sentido, tem sido demonstrado que a administração exógena da melatonina, um hormônio naturalmente secretado pela glândula pineal, apresenta diversos efeitos oncostáticos em diferentes tipos de câncer. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a efetividade do tratamento com melatonina sobre a angiogênese do câncer de mama, em estudos in vitro e in vivo. No estudo in vitro, as linhagens de câncer de mama MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas com melatonina sob condições de hipóxia mimetizadas pelo Cloreto de Cobalto (CoCl2). A viabilidade celular foi verificada pelo ensaio MTT, a expressão do fator de transcrição induzido por hipóxia (HIF-1α) e do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF-A) foi avaliada por PCR em tempo real e imunocitoquímica. Além disso, demais proteínas envolvidas na angiogênese foram avaliadas por Protein Array. No estudo in vivo, as células MDA-MB-231 foram implantadas em camundongos nude atímicos, os quais foram tratados com melatonina (40 mg/kg) por 21 dias. O tumor foi medido semanalmente e a avaliação da angiogênese foi realizada pela técnica de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), com o radiotraçador Tc- 99m-HYNIC-VEGF-c, agente específico para os receptores de VEGF (VEGFR2/VEGF3). Além disso, as proteínas VEGFR2, VEGFR3, fator de fator de von Willebrand (vWF) e marcador de proliferação celular (Ki-67) foram avaliados no tecido tumoral por imuno-histoquímica, e demais proteínas angiogênicas por Protein Array. O estudo in ... / Abstract: Breast cancer has high rates of incidence and mortality, and it is the most common cancer among women. The rapid tumor growth results in hypoxia on tumor microenvironment, leading to a cascade of events that induce angiogenesis and subsequent cancer progression. Thus, the identification of therapeutic agents that can inhibit angiogenesis is essential for the control of tumor progression. Exogenous administration of melatonin, a hormone secreted by the pineal gland, has been shown several oncostatics effects on different types of cancers. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of melatonin treatment on angiogenesis in breast cancer, in the in vitro and in vivo studies. In the in vitro study, breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231) were treated with melatonin under cobalt chloride (CoCl2)-induced hypoxic conditions. Cell viability was measured by MTT assay, the expression of hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF-A) was assessed by real-time PCR and immunocytochemistry. Additionally, other proteins involved in angiogenesis were evaluated by the Protein Array. In the in vivo study, the MDA-MB-231 cells were implanted in athymic nude mice, which were treated with melatonin (40 mg/kg) for 21 days. The tumor was measured weekly and evaluation of angiogenesis was performed by single-photon emission computed tomography (SPECT) with Tc-99m-HYNIC-VEGF-c, which is specific for VEGF receptors (VEGFR2/VEGF3). Moreover, VEGFR2, VEGFR3, von Willebrand factor (vWF) and cell proliferation marker (Ki-67) were evaluated in tumor tissue by immunohistochemistry, and other angiogenic proteins by Protein Array. Results from the in vitro study showed that 1 mM of melatonin under hypoxic conditions (200 μM CoCl2) led to decreased cell viability, protein levels of HIF- 1α and gene and protein expression of VEGF-A in both cell lines (p < 0.05). Among other proteins evaluated, melatonin ... / Doutor