Durante a ativação policlonal induzida pelo P. chabaudi a maior fonte de IL-2 são as células CD4+ ativadas, além disso, acorre a expansão de células Treg. No dia 7 após a infecção, a ausência de células Treg leva a uma exacerbação da ativação de células CD4+, além de altos níveis de anticorpos anti-P.chabaudi e auto-anticorpos. A neutralização da IL-2, com Mab anti-IL-2 JES6-1, na fase aguda da infecção leva a uma redução no número de células Treg. No dia 20 de infecção, a freqüência de células CD4+ ativadas esteve elevada e as células Treg voltaram aos níveis basais. Experimentos in vitro mostraram que a neutralização da IL-2 não altera a proliferação antígeno-específica de células CD4+ da fase aguda da infecção, porém, em tempos tardios da infecção houve um drástico aumento na freqüência de células CD4+ que proliferam em resposta a eritrócitos parasitados. Podemos concluir que a IL-2 e as células Treg são capazes de limitar a ativação policlonal induzida pelo P. chabaudi ainda que com cinéticas distintas. / Polyclonal activation during P. chabaudi infection results on a huge IL-2 production by activated CD4+ T cells, besides a considerable expansion of Treg cells. At day 7 after infection in the absence of Treg cells there is an enhanced response of activated CD4+ T cells, an increase of Abs anti-P.chabaudi and autoantibody production. Neutralization of IL-2 with Mab anti-IL2 JES6-1 during acute infection reveals a markedly reduction in Treg-cells number. At day 20 of infection we can observe an increase on activated CD4+ T cells frequency. Moreover, Treg cells return to values similar to controls. IL-2 in vitro assays during acute infection results on Ag-specific CD4+ T cells proliferation, on the other hand, at the late infection, we observed a huge increase of CD4+ T cells frequency that strongly response to PRBC. Our findings suggest that IL-2 and Treg cells are capable of restricting PLA during P.chabaudi infection, although with different kinetics.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-02T11:30:44Z No. of bitstreams: 1 robertareissoares.pdf: 1821120 bytes, checksum: 37f4636d8bd6ef3623072173760d6105 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:51:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 robertareissoares.pdf: 1821120 bytes, checksum: 37f4636d8bd6ef3623072173760d6105 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:51:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 robertareissoares.pdf: 1821120 bytes, checksum: 37f4636d8bd6ef3623072173760d6105 (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A malária permanece ao longo dos anos como emergência global em saúde pública. São aproximadamente 87 milhões de casos e 106.820 mortes ocorridas anualmente no mundo. As principais estratégias atuais no controle da doença se baseiam no diagnóstico precoce e tratamento oportuno dos casos, devendo ser considerada a resistência dos parasitos a praticamente todos os fármacos atualmente em uso, o que torna urgente a busca por novos antimaláricos. Neste contexto, análogos de 4-aminoquinolinas e 6-mercaptopurinas contendo 1,2,3-triazol ou esteroide foram sintetizados e tiveram sua atividade antimalárica investigada utilizando o teste supressivo de Peters em modelo murino de infecção por Plasmodium berghei NK65. Dentre os 11 análogos avaliados, 5 exibiram atividade antimalárica significativa, alcançando percentuais de supressão de até 81% em relação ao controle não tratado. Além da atividade antimalárica, um composto promissor não pode apresentar efeitos indesejáveis às células do hospedeiro, sendo assim foram avaliadas a citotoxicidade e atividade hemolítica dos análogos. A maioria dos compostos foram considerados seguros às células do hospedeiro mesmo nas maiores concentrações avaliadas. Portanto, estes análogos merecem ser objeto de futuras investigações visando compor novos antimaláricos. / Malaria remains over the years as a global public health emergency. There are approximately 87 million cases and 106.820 deaths worldwide each year. The main current strategies to control the disease are based on early diagnosis and appropriate treatment cases and should be considered the resistance of parasites to almost all drugs currently in use, which makes urgent the search for new antimalarials. In this context, analogs of 4-aminoquinolines and 6-mercaptopurines containing 1,2,3-triazole or steroid were synthesized and investigated for their antimalarial activity using the 4-day suppressive test described by Peters in a murine model of infection by Plasmodium berghei NK65. Among the 11 analogues evaluated, 5 exhibited significant antimalarial activity, reaching percentages of suppression up to 81% compared to untreated control. Besides antimalarial activity, a promising compound cannot have undesirable effects on host cells, thus was evaluated the cytotoxicity and hemolytic activity of analogs. Most compounds were considered safe to host cells even at the highest concentrations evaluated. So, this analogs deserve to be object of future investigations aiming compose new antimalarials.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-10T14:43:51Z No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:08:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:08:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T15:08:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) Previous issue date: 2014-10-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hemosporídeos de aves silvestres são considerados importantes agentes etiológicos e podem causar danos às populações dos hospedeiros. O presente estudo teve como objetivos: determinar a prevalência e a parasitemia para Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. de Passeriformes da Mata Atlântica de Minas Gerais, por meio de dois métodos de diagnóstico, microscopia e nested PCR e caracterizar morfologicamente a espécie Plasmodium (Haemamoeba) lutzi Lucena, 1939. Amostras de sangue foram obtidas por punção da veia braquial para preparação de esfregaços que foram fixados em metanol e corados em Giemsa. Foram amostradas 237 aves pertencentes a 18 famílias e 56 espécies da ordem Passeriformes provenientes do IBAMA e capturadas no Jardim Botânico da Universidade Federal de Juiz de Fora (JB-UFJF). A prevalência para Plasmodium spp. foi 63,63% em aves do IBAMA e 26,25% em aves do JB-UFJF, apenas três indivíduos encontraram-se parasitados por Haemoproteus spp., sendo dois (2,5%) provenientes do IBAMA e um (0,62%) do JB-UFJF. A parasitemia média encontrada para Plasmodium spp./Haemoproteus spp. foi de 0,08 (± 0,08) no IBAMA e 0,05 (± 0,04) no JB-UFJF. O maior grau de parasitemia média foi registrado nas espécies Turdus albicollis, Zonotrichia capensis (0,22%), Turdus rufiventris (0,18% ± 0,29), Gnorimopsar chopi (0,1% ± 0,07) no IBAMA e Turdus rufiventris (0,17 % ± 0,13), Arremon semitorquatus (0,11% ± 0,13) no JB-UFJF. Foi identificada em uma das aves (A. semitorquatus), a presença da espécie Plasmodium (H.) lutzi, a qual foi morfologicamente caracterizada. A prevalência registrada é considerada alta, entretanto verificou-se uma baixa parasitemia, o que pode estar relacionado à evolução crônica da infecção. Infecções agudas por Plasmodium spp. levam ao aparecimento de sinais clínicos com expressão rápida dos sintomas, sendo que nos casos mais graves pode ocorrer a morte do hospedeiro. Visto a elevada prevalência, levantamentos acerca de infecções por hemoparasitos em aves silvestres podem ajudar na elaboração de estratégias de profilaxia e tratamento de doenças parasitárias para a conservação das espécies. / Hemosporidian wild birds are considered important etiological agents and can cause damage to populations of hosts. The present study aimed to: ¹determine prevalence and parasitemia for Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. Passeriformes of the Atlantic Forest of Minas Gerais, through two diagnostic methods, microscopy and nested PCR; and caracterize morphologically the species Plasmodium (Haemamoeba) lutzi Lucena, 1939. Blood samples were obtained by puncturing the brachial vein for preparation of smears, fixed in methanol and stained with Giemsa. 237 birds belonging to 18 families and 56 species of the order Passeriformes from IBAMA were sampled and captured in the Botanical Garden of the Universidade Federal de Juiz de Fora (BG-UFJF). The prevalence of Plasmodium spp. in birds of IBAMA was 63.63% and 26.25% in birds of BG-FUJF, only three individuals were infected by Haemoproteus spp., two (2.5%) from IBAMA and one (0.62 %) of BG-FUJF. The average parasitemia found for Plasmodium spp./ Haemoproteus spp. was 0.08 (± 0.08) at IBAMA and 0.05 (± 0.04) in BG-UFJF. The highest degree of mean parasitaemia was recorded in the species Turdus albicollis, Zonotrichia capensis (0.22%), Turdus rufiventris (0.18% ± 0.29), Gnorimopsar chopi (0.1% ± 0.07) at IBAMA and Turdus rufiventris (0.17% ± 0.13), Arremon semitorquatus (0.11% ± 0.13) in BG-UFJF. Was identified in one of the birds (A. semitorquatus) by means of morphology, the presence of Plasmodium (H.) lutzi species, which was characterized morphologically. Registered prevalence is considered high, however a low parasitaemia was found, which may be related to chronic course of infection.. Acute infections with Plasmodium spp. lead to the onset of clinical signs with rapid symptom expression, and in severe cases death canoccurat the host. Since the high prevalence surveys about hemoparasites infections in wild birds can help in developing strategies for prophylaxis and treatment of parasitic diseases to species conservation.

Plasmodium falciparum est responsable de la forme la plus grave de paludisme avec plus de 600 000 décès par an. L'absence de vaccin efficace, combinée à l'émergence de résistances aux traitements récurrents, exige le développement de nouvelles molécules. Afin de limiter ces résistances, il est nécessaire de cibler de nouvelles voies métaboliques indispensables à la survie du parasite. Ce travail de thèse repose sur l'étude de deux voies métaboliques essentielles au parasite que sont la voie de recyclage des bases puriques et la voie de biosynthèse des ancres glycosylphosphatidylinositol (GPI).En ce qui concerne la voie de recyclage des bases puriques, la détermination des structures cristallines de l' « IMP specific 5‘-nucleotidase » (PfISN1) associée aux études biochimiques et biophysiques (SAXS, EM, MALS…), a permis de préciser le mécanisme d'action fournissant ainsi une base solide pour la mise au point d'inhibiteurs. Une banque de plus 3000 composés a été criblée par Fluorimétrie à Balayage Différentiel et les effets des molécules sélectionnées seront évalués sur l'enzyme et sur la croissance du parasite en culture.Quatre cibles thérapeutiques potentielles appartenant à la voie de biosynthèse des ancres GPI ont été sélectionnées. L'utilisation de plusieurs systèmes d'expression disponibles au laboratoire (bactérie, levure, acellulaire en germe de blé) ou via des plateformes européennes pour l‘expression en cellules de mammifères HEK293T (Oxford), de cellules BHK21 transfectées avec le virus de la vaccine modifié, T7-MVA, (Strasbourg) ou la plateforme ESPRIT (Grenoble) ont permis de passer outre les difficultés rencontrées pour exprimer les protéines d'intérêt. L'une des quatre cibles, la mannose-1-phosphate guanylyltransférase (PfMPG), a pu être exprimée de manière suffisante quantitativement et qualitativement pour une caractérisation biochimique et structurale. Une analyse par SAXS et cristallographie aux rayons X a été réalisée / Plasmodium falciparum is responsible for the most severe form of malaria with more than 600,000 deaths per year. The lack of an effective vaccine, combined with the emergence of drug resistant parasites, necessitates the development of new drugs. In order to limit these resistances, it is necessary to target new metabolic pathways essential for parasite survival. This thesis work is based on the study of two metabolic pathways essential to the parasite, the purine salvage pathways and the glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchor biosynthesis pathway.Concerning the purine salvage pathway, the determination of the crystal structures of the IMP -specific 5'-nucleotidase (PfISN1) associated with biochemical and biophysical studies (SAXS, EM, MALS, etc.) have allowed to propose a reaction mechanism, thereby providing a solid basis for the conception and development of inhibitors. A library of more than 3000 compounds was screened by Differential Scanning Fluorimetry and the selected molecules will be evaluated for their inhibitory effect on the enzyme and on the growth of parasites in culture.Four potential therapeutic targets belonging to the GPI anchor biosynthesis pathway were selected. The use of several in-house available expression systems (bacteria, yeast, and acellular wheat germ) as well as European platforms for the expression in HEK293T mammalian cells (Oxford), in BHK21 cells transfected with the modified vaccinia virus, T7-MVA, (Strasbourg) or the ESPRIT platform (Grenoble) has allowed us to overcome the difficulties encountered on obtaining the selected protein targets. One of the four targets has been expressed in sufficient amount and quality for biochemical- and structural characterization, namely the mannose-1-phosphate guanylyltransferase (PfMPG). SAXS and X-ray crystallography analyses have been carried out

Les interventions de lutte contre le paludisme, comme la distribution massive de moustiquaires imprégnées et les polythérapies à base d’artémisinine, ont permis depuis les années 2000 de réduire le nombre de décès d’environ 60% au plan mondial, avec de grandes disparités d’un pays à l’autre. Si certains pays sont entrés en phase d’élimination, d’autres, et particulièrement en Afrique sub-Saharienne, doivent encore contrôler la maladie. La mise au point d’un vaccin contre le paludisme reste l’une des voies prioritaires pour la lutte contre la maladie. Parmi les différents candidats vaccins, les vaccins visant à bloquer la transmission chez le moustique vecteur connaissent un intérêt croissant. Dans ce travail de thèse, j’ai évalué l’efficacité d’anticorps anti-AnAPN1 à bloquer la transmission d’isolats naturels de Plasmodium falciparum chez An. coluzzii. L’aminopeptidase 1 est une protéine qui tapisse l’épithélium intestinal du moustique et qui servirait de récepteur aux ookinètes. Nous avons réalisé des essais d’infections expérimentales sur la plateforme d’entomologie de l’OCEAC à Yaoundé. Les anticorps anti-AnAPN1, 4H5B7, ont montré une activité bloquante dose-dépendante et l’inhibition de la transmission varie selon le donneur de gamétocytes. Nous avons alors modélisé les différents paramètres qui pouvaient moduler l’efficacité de l’anticorps et nous avons montré que la multiplicité de l’infection du donneur avait un effet significatif. Nous avons ensuite étudié la dynamique de transmission des génotypes de P. falciparum sous pression d’anticorps à des doses non bloquantes afin d’identifier les génotypes qui ne sont pas sensibles à l’anticorps. Le traitement réduit la diversité génétique de la population de parasites mais nous n’avons pas observé de sélection de génotypes particuliers de P. falciparum suite à l’exposition des moustiques aux anticorps anti-AnAPN1. Les analyses de génétique des populations ont révélé une corrélation positive entre le FIS et la multiplicité d’infection, les gamètes de P. falciparum tendent à s’apparier entre génotypes apparentés dans les populations de forte complexité génétique. Les résultats de ce travail soulignent l’importance de la diversité génétique de la population de gamétocytes pour la transmission chez le moustique vecteur. / Malaria control interventions over the last 15 years have lead to reduce malaria mortality by about 60% worldwide. This large reduction in malaria burden results mostly from effective mass distribution of insecticide-treated mosquito nets and artemisinin-based combination therapies. Some countries have already entered into elimination stage but others, particularly in sub-Saharan Africa, have yet to control the disease. The development of a vaccine against malaria remains a major priority for the fight against the disease. Among the different candidate vaccines, transmission-blocking vaccines have gained interest in the recent years. These vaccines would interrupt transmission from humans to mosquitoes. The anopheline alanyl aminopeptidase N (AnAPN1) is a mosquito-based malaria transmission-blocking vaccine candidate. In this PhD work, we evaluated the efficacy of anti-AnAPN1 antibodies against field isolates of Plasmodium falciparum in Anopheles coluzzii. Anti-AnAPN1 antibodies delivered to mosquitoes through artificial feedings showed a dose-dependent blocking activity and the transmission inhibition varied according to gametocytes donors. We modeled the different parameters that could modulate the antibody efficiency and we showed that the multiplicity of infection in the blood donor has a significant effect. We further explored the transmission dynamics of the co-infecting P. falciparum genotypes at non-blocking doses of antibodies. The mAb treatment reduced the genetic diversity of the parasite population but we did not detect any trace of selection on parasite genotypes. Genetic analyses revealed a positive correlation between FIS and multiplicity of infection, thus P. falciparum gametes mate with close relatives in infections with high genetic complexity. The results of this work highlight the importance of the genetic diversity of gametocyte population for transmission in the mosquito vector

La survie des Primates Non Humains (PNHs) est menacée par les activités humaines et les maladies infectieuses. Pour contribuer à leur conservation au Gabon, plusieurs structures dont les sanctuaires et centres de primatologie ont été mises en place. Cependant, si la gestion des risques sanitaires n’est pas prise en compte et les conditions d’accompagnement réglementées, ces structures qui visent la sauvegarde des PNHs pourraient constituer de véritables carrefours d’échanges de parasites entre espèces de PNH, Homme et/ou microfaune. Ainsi, pour mieux comprendre la nature et l’ampleur du problème, notre travail de thèse avait pour but d’évaluer les risques sanitaires et zoonotiques chez des groupes d’hôtes de deux (2) sanctuaires et d’un (1) centre de primatologie au Sud-est du Gabon. En combinant les études épidémiologiques sur le terrain à la fois chez l’Homme et l’animal, le séquençage, les analyses phylogénétiques ainsi que la modélisation statistique, nos travaux se sont attelés à comprendre (i) la circulation d’agents infectieux entre espèces et (ii) les stratégies parasitaires dans ces nouveaux contextes de communautés créés par les activités humaines. Nous nous sommes intéressés à trois (3) modèles parasitaires, à savoir ; un (1) procaryote (Staphylococcus aureus) et deux (2) eucaryotes dont un agent pathogène à transmission vectorielle (Plasmodium spp) et un groupe viral à transmission directe ou indirecte (paramyxovirus). Nos résultats révèlent une grande diversité plasmodiale circulant chez les PNHs (9 espèces) et montrent que la spécificité d’hôtes observée jusqu’à présent en milieu naturel est rompue. Si aucun plasmodium simien n’a été trouvé chez l’Homme, le spectre d’hôtes de P. falciparum s’agrandit avec sa mise en évidence pour la première fois chez le Mandrill (Mandrillus sphinx). Nos résultats révèlent également une large diversité génétique de Stahylococcus aureus composée de souches généralistes et spécialistes, la circulation de souches SARM (S. aureus résistant à la méticilline) principalement via les souches généralistes, entre groupes d’hôtes traités et non traités aux antibiotiques et décrivent quinze (15) nouvelles souches. Pour les paramyxovirus, aucune infection n’a été identifiée mais la question du patron de circulation épidémique ou endémique est posée. En conclusion, cette étude montre que dans ces structures (i) les conditions écologiques de franchissement inter-espèces des parasites sont réunies et (ii) que ces dernières permettent le développement d’infections encore jamais observées en milieu naturel. Ces conditions de promiscuité entre espèces favorisent la sélection d’espèces parasitaires à large spectre d’hôtes (i.e., généralistes) mais aussi l’occurrence de souches bactériennes résistantes à la méticilline qui se propagent via la communautarisation des parasites, notamment dans la microfaune interagissant avec les PNHs traités aux antibiotiques ou à partir de l’Homme / The survival of Non-human Primates (NHPs) is threatened by human activities and infectious diseases. To participate in their conservation in Gabon, several facilities among which sanctuaries and the Centre De Primatologie (CDP) of the Centre International de Recherches Médicales de Franceville (CIRMF) have been created. However, if the management of health risks is not taken into account and the supportive conditions are not regulated, these facilities which aim to preserve NHPs could become real crossroads for the transmission of parasites between NHP species, humans and/or microfauna. Therefore, to better understand the nature and the extent of the problem, our thesis work aimed to evaluate the health and zoonotic risks in groups of hosts from two (2) sanctuaries and one (1) primatology center in the south-east of Gabon. By combining epidemiological studies on the field both in humans and animals, sequencing and phylogenetic analyses as well as statistical modelling, our work aimed to understand (i) the circulation of infectious agents between species and (ii) the parasitic strategies in the new context of these communities created by human activities. We focused on three (3) parasitic models, namely: one (1) prokaryote (Staphylococcus aureus) and two (2) eukaryotes among which one pathogenic agent with vectorial transmission (Plasmodium spp) and a viral group with direct or indirect transmission (paramyxovirus). Our results highlight a great plasmodial diversity circulating in NHPs (9 species) and show that the specificity of hosts observed up until now in their natural habitat is broken. No simian plasmodium was found in humans, however the specter of hosts of P. falciparum grows with the new addition of mandrills (Mandrillus sphinx). Our results also reveal a large genetic diversity of Staphylococcus aureus composed of general and specialized strains, the circulation of SARM strains (S. aureus resistant to methicillin) mainly via the general strains, between groups of treated and non-treated hosts to antibiotics. Fifteen (15) new strains are described. Regarding paramyxoviruses, no infection was identified but we raise the question of epidemic or endemic circulation models. To conclude, this study shows that in these facilities (i) the ecological conditions required for inter-species crossing of parasites are gathered and (ii) these conditions allow the development of infections previously never observed in the natural environment. These conditions of promiscuity between species favor the selection of parasitic species with a large specter of hosts (i.e., generalists) but also the occurrence of bacterial strains resistant to methicillin which spread via the communitarisation of parasites, especially in microfauna interacting with NHPs treated with antibiotics or humans

Les moustiques anophèles sont les vecteurs du parasite Plasmodium l’agent du paludisme. Le parasite subit des pertes massives pendant son cycle de développement chez l’anophèle, ce qui suggère que les moustiques sont capables de développer une réaction immunitaire efficace contre le parasite. La connaissance de l’immunité et de la résistance des moustiques au genre Plasmodium provient principalement de systèmes de laboratoire qui utilisent des espèces de parasites de rongeurs ou d’oiseaux comme modèles du paludisme humain. Les observations présentées dans cette thèse suggèrent que certains gènes comme Tep1 et LRIM1 sont des médiateurs de réponses antiparsitiques contre différents Plasmodiums dans différents vecteurs. Cependant, le degré d'efficacité avec laquelle un moustique est capable de réduire le nombre de parasites peut être variable surtout entre combinaison de souche de moustique et de souche de parasite différentes, selon que la paire soit hautement compatible ou non.<p><p><p> / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished

L’étude de plantes utilisées en médecine traditionnelle camerounaise contre le paludisme a révélé des activités antiprotozoaires pour des espèces du genre Psorospermum conduisant à l’isolement d’anthranoïdes prénylés. De nouveaux fractionnements basés sur des techniques chromatographiques en polarité de phase inverse et de partage centrifuge ont permis d’isoler 9 vismiones de l’écorce de P. glaberrimum qui ont montré de fortes activités antileishmaniennes (30 nM < CI50 < 827 nM). Un protocole d’isolement à l’échelle du gramme de ces molécules, sensibles aux conditions classiques de purification, a été développé pour fournir les quantités nécessaires à une démarche d’hémisynthèse et pour comprendre leur mécanisme d’action. La répartition de ces molécules dans les organes de 10 espèces de Psorospermum a été étudiée. Une approche de synthèse organique a également été développée afin d’obtenir des analogues, déterminer leurs activités antiprotozoaires et leurs relations de structure-activité. / The screening of plants used in Cameroonian traditional medicine against malaria revealed significant antiprotozoal activities for species belonging to the Psorospermum genus and led to the isolation of prenylated anthranoids. Further fractionations based on reversed-phase and centrifugal partition chromatography allowed us to isolate 9 vismiones from the bark of P. glaberrimum. All these compounds exhibited strong antileishmanial activities (30 nM<IC50<827 nM).A gram-scale isolation protocol of these highly unstable compounds, when traditional ill-suited purification processes are used, has been developed to provide enough starting material for further hemisynthesis steps and to investigate their mechanism of action. The repartition of these metabolites in different parts of 10 Psorospermum species has been studied. A synthetic approach has also been developed to obtain anthranoid analogues to investigate their antiprotozoal activities and explore structure-activity relationships.

Le paludisme constitue un problème majeur de santé publique en zone tropicale et subtropicale. La morbidité ainsi que la mortalité sont principalement dues au parasite Plasmodium falciparum transmis à l'homme par la piqûre de moustiques femelles du genre Anopheles. Dans le but d'orienter au mieux les stratégies d'élimination du paludisme et d'une meilleure évaluation de l'efficacité des méthodes de lutte, les indicateurs mesurant le risque de transmission doivent être plus sensibles. Il a été montré que la réponse anticorps humaine contre des protéines/peptides salivaires d'Anopheles représente un bio-marqueur d'exposition aux piqûres de moustiques et pouvait être un indicateur de la transmission du paludisme. Toutefois cet outil doit être optimisé. Ce travail a ainsi un double objectif : i) valider la protéine salivaire CE5 comme bio-marqueur d'exposition aux piqûres d'Anopheles et comme indicateur évaluant l'efficacité de stratégie de lutte anti-vectorielle, et 2) identifier de nouvelles protéines salivaires comme candidat bio-marqueur spécifique à l'exposition de l'homme aux seules piqûres infectantes d'Anopheles. Tout d'abord, nous avons démontré que la réponse anticorps IgG contre la protéine CE5 pourrait être un indicateur du contact homme-vecteur, complémentaire et très sensible, en mesurant l'exposition de l'homme aux piqûres d'Anopheles et un outil évaluant l'efficacité, à court terme, des moustiquaires imprégnées d'insecticide. Par la suite, les méthodes de protéomique 2D-DIGE et de spectrométrie de masse ont permis d'identifier cinq protéines salivaires (gSG6 , gSG1b , TRIO , SG5 et la forme longue D7) qui sont surexprimées dans les glandes salivaires d'An. gambiae infectées par P. falciparum. Des peptides de chaque protéine, définis in silico, apparaissent antigéniques chez des individus exposés aux piqûres d'Anopheles, après évaluation par la technique d'épitope mapping. L'ensemble de ces travaux est non seulement une première étape pour optimiser cet outil immuno-épidémiologique évaluant le contact homme-vecteur mais démontre également la possibilité de définir un nouveau bio-marqueur qui serait spécifique des piqûres infectantes d'Anopheles. / Malaria is a major public health problem in tropical and subtropical areas. Morbidity and mortality are mainly due to Plasmodium falciparum transmitted to human individuals by the bite of female Anopheles mosquitoes. In order to orientate appropriate strategies for malaria elimination and for a better evaluation of the efficacy of control methods, the indicators measuring the risk of transmission should be more sensitive. It has been shown that the human antibody response against Anopheles salivary proteins/peptides represents a biomarker of exposure to mosquito bites and could be an indicator of malaria transmission. However, this tool must be optimized. This work has thus two objectives: i) to validate the salivary protein cE5 as biomarker of exposure to Anopheles bites and as an indicator for evaluating the efficacy of vector control strategy, and 2) to identify new salivary proteins as a candidate biomarker only specific to human exposure to infective bites of Anopheles.First, we demonstrated that the IgG antibody response to cE5 protein could be an indicator of human-vector contact, complementary and very sensitive, measuring the human exposure to Anopheles bites and a tool evaluating the short-term efficacy of insecticide treated nets. Subsequently, the proteomic methods, 2D - DIGE and mass spectrometry, allowed to identify five salivary proteins (gSG6, gSG1b, TRIO, SG5 and the long form D7) which are overexpressed in the salivary glands of An . gambiae infected by wild P. falciparum. Peptides for each protein, identified in silico, appear antigenic in individuals exposed to Anopheles bites, after the evaluation by the epitope mapping technique.Altogether, this work is not only the first step to optimize this immuno-epidemiological tool assessing the human-vector contact, but also demonstrates the possibility to define a new biomarker specific to the infective bites of Anopheles.

Dans cette thèse, nous avons étudié l'influence de plusieurs variants génétiques situés dans les régions chromosomiques 5q31-q33, 6p21, et 17p12, pour lesquelles une liaison génétique avec des phénotypes de paludisme a été montrée.Les gènes NCR3 et TNF, qui sont situés dans la région chromosomique 6p21, ont été associés au paludisme dans une population vivant au Burkina Faso. Nous avons répliqué ces études dans une population congolaise afin deconfirmer les associations des polymorphismes avec les accès palustres simples et la parasitémie symptomatique. Nos résultats montrent que le polymorphismeNCR3-412 est associé avec les accès palustres simples au Congo, et que les polymorphismes TNF-308, TNF-244, et TNF-238 sont associés avec les accès palustres simples ou la parasitémie symptomatique. En outre, nos analyses bioinformatiques suggèrent que les polymorphismes TNF-244 et TNF-238 agissent en synergie pour modifier le site de fixation pour au moins un facteur de transcription.Les deux gènes HS3ST3A1 et HS3ST3B1, qui sont situés dans la région chromosomique 17p12, sont impliqués dans la biosynthèse des heparanes sulfates. Dans cette étude, nous avons étudié l'association d’un polymorphisme situé dans le promoteur de HS3ST3A1 avec les accès palustres simples et la parasitémie symptomatique, et n’avons détecté aucune association. Nous avons étudié en outre le gène NDST1, situé dans la région chromosomique 5q31-q33, et qui code également pour une enzyme impliquée dans la voie héparane sulfate. Des résultats préliminaires encourageants soutiennent l'hypothèse que la variation génétique de NDST1 influence la parasitémie asymptomatique. / In this thesis, we investigated the influence of some genetic variants located within chromosomes 5q31-q33, 6p21, and 17p12, which have been shown to be linked to malaria phenotypes. The genes NCR3 and TNF, which are located in the chromosomal region 6p21, have been reported to be associated with malaria in Burkina Faso population. We have replicated those studies in Congolese population to evaluate the associations of the SNPs in those genes with mild malaria attack and Plasmodium parasitemia. The results showed that the variant NCR3-412 is associated with mild malaria in Congo, and TNF-308, TNF-244, and TNF-238 are associated with mild malaria attack, maximum parasitemia, or both. In addition, bioinformatic studies suggest that TNF-244 and TNF-238 synergise to alter the binding of transcription factors.The two genes HS3ST3A1 and HS3ST3B1, which are located in chromosomal regions 17p12, are involved in the heparan sulfate proteoglycan biosynthesis. In this study, we further investigated the association of the polymorphisms in these genes with mild malaria attack and maximum parasitemia. However no association was found. We further studied the NDST1 gene, which is located within chromosome 5q31-q33, and which encodes the bifunctional enzyme N-deacetylase/ N-sulfotransferase 1, and also participates in the heparan sulfate synthesis . Encouraging results support the hypothesis that NDST1 variation influence controlling parasitemia. Further association and functional studies are needed to validate the role of NDST1 in malaria infection. More generally, the enzymes involved in the heparan sulfate pathway might play a key role in controlling malaria infection.