Na Martinica, os envenenamentos por Bothrops lanceolatus apresentam um quadro clínico trombótico, acompanhado de inflamação local extensa, envolvendo edema, dor e hemorragia limitada. Neste estudo foi mostrado que vários componentes do veneno compartilham similaridades antigênicas com venenos de espécies da América do Sul. O veneno de B. lanceolatus é citotóxico para queratinócitos e células endoteliais, induzindo a produção de citocinas e quimiocinas pro-inflamatórias pelas células. O veneno de B. lanceolatus ativa a cascata do complemento, liberando anafilatoxinas, assim como o complexo terminal do complemento. Ele apresenta uma ação proteolítica sobre os componentes purificados C3, C4, C5, e o inibidor de C1, C1-INH. O veneno também desequilibra o balanço de expressão dos reguladores do complemento na membrana das células endoteliais. Estes dados demonstram que o veneno de B. lanceolatus exibe uma potente ação proinflamatória, pela ativação do sistema complemento e pela sua toxicidade em células endoteliais. / In Martinique envenomations by Bothrops lanceolatus are characterized by a systemic thrombotic syndrome and important local inflammation, involving oedema and pain, but limited haemorrhage. In this study, we show that several components of B. lanceolatus venom share antigenic similarities with South American Bothrops species. Still, B. lanceolatus venom proteases present substrate specificity. The venom is cytotoxic for keratinocytes and endothelial vascular cells, inducing the production of pro-inflammatory cytokines and chemokines. B. lanceolatus venom activates the complement cascade, releasing anaphylatoxins and the terminal complement complex. It also shows a direct proteolytic activity upon the purified complement proteins C3, C4, C5, and the inhibitor of C1, C1-INH. B. lanceolatus venom modified the balance of complement regulators on endothelial cells membrane. In conclusion, B. lanceolatus venom displays important pro-inflammatory properties, as it activates the complement cascade and impacts endothelial cells.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-08-07T14:37:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO MESTRADO_LARISSA BRITO-RG.pdf: 842393 bytes, checksum: 7e14b33afc3df50dad2cfe57c1a8a47b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T14:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO MESTRADO_LARISSA BRITO-RG.pdf: 842393 bytes, checksum: 7e14b33afc3df50dad2cfe57c1a8a47b (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / CNPQ / O soro do leite de cabra (SORO), subproduto geralmente descartado durante a fabricação do queijo, é uma boa fonte de ácido siálico (Sia), oligossacarídeo envolvido em processos como memória e excitabilidade cerebral. Neste estudo, investigamos em ratos os efeitos do SORO em pó sobre a memória e a depressão alastrante cortical (DAC), fenômeno relacionado à excitabilidade cerebral, fornecendo evidências para o envolvimento do Sia nesse efeito. Além disso, avaliamos se a deficiência nutricional modularia a ação do SORO. Ratos Wistar foram amamentados em ninhadas com 9 e 15 filhotes (grupos L9 e L15, respectivamente). Nos dias pós-natais (P) 7 a 14, os animais receberam por gavagem 17,45 g/kg/d de SORO, ou Sia (20 mg/kg/d, ou 100 mg/kg/d). No P28-30, testamos a memória dos animais (tarefa de reconhecimento de objetos, TRO). No P35-45 registramos a DAC e analisamos a sua velocidade de propagação, amplitude e duração. Na TRO, os ratos L15 tratados com o SORO obtiveram melhor desempenho do que os controles-L15. Os ratos L15 exibiram velocidades da DAC mais elevadas em comparação com os grupos L9. Os grupos SORO e Sia exibiram velocidade da DAC mais elevada que os grupos naïve e salina, independentemente do estado de lactação (p<0,05). Nossos resultados documentaram este efeito do SORO na memória e DAC. Sia facilitou a DAC de forma dose-dependente, sugerindo seu envolvimento nessa ação do SORO. Este é considerado um suplemento potencial para melhorar a função e desenvolvimento do cérebro em crianças desnutridas. Mais estudos são necessários para investigar tal potencial. / Goat Whey, a usually discarded byproduct from goat cheese manufacturing, is a good source of sialic acid (SA), an oligosaccharide that is involved in processes such as memory and brain excitability. Here, we investigated in rats the effect of dried goat whey (DGW) on memory and the brain excitability-dependent phenomenon known as cortical spreading depression (CSD). We also provide evidence for the involvement of SA in this effect. In addition, we tested animals under unfavorable suckling conditions to evaluate whether nutritional deficiency would modulate DGW action. Wistar rats were suckled in litters with 9 and 15 pups (groups L9 and L15, respectively). From postnatal (P) days 7 to 14, the animals received per gavage 17.45 g of DGW/kg/d, or SA (20 mg/kg/d, or 100 mg/kg/d). At P28-30, we tested the animals‟ memory in the object recognition paradigm. At P35-45 we recorded CSD and analyze its velocity of propagation, amplitude, and duration. In the object recognition test, the L15 DGW-treated rats performed better than the L15-controls. The L15 rats displayed higher CSD velocities compared with L9 groups. The DGW and SA groups exhibited higher CSD velocity than the naïve- and saline-treated controls, regardless the lactation status (p <0.05). Our results documented a novel effect of DGW on memory and CSD. SA dose-dependently facilitated CSD, suggesting its involvement on the DGW action. DGW is considered a potential supplement to improve brain development and function in malnourished children, and this shall be further translationally investigated.

Orientador: Valdemiro Carlos Sgarbieri / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ziegler_FabianeLaFlor_D.pdf: 4176640 bytes, checksum: fccef651838684499cf4cf698073b39e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar o efeito de um concentrado de proteínas do soro do leite bovino (WPC) enriquecido com o fator de crescimento e transformação beta (TGF-?) e lactoferrina, em pacientes pediátricos com Leucemia Mieloide Aguda - LMA (Capítulo 2); desenvolver um modelo de mucosite gastrointestinal induzida por quimioterápicos, em ratos Wistar, para posterior avaliação da eficácia das proteínas lácteas na proteção da mucosa (Capítulo 3); avaliar os efeitos pelo WPC e por uma caseína comercial, in vivo e in vitro sobre células leucêmicas humanas transplantadas em camundongos imunodeficientes (NOD/SCID) e em cultura de células (Capítulo 4). Para todos os estudos foi utilizado WPC enriquecido com TGF-??e lactoferrina doado pela empresa Hilmar Cheese Company (Cal, USA). No capítulo 2 realizou-se estudo de intervenção nutricional, prospectivo, duplo cego com placebo controlado, onde foram avaliados 21 pacientes, entre 0 a 19 anos, virgens de terapia, admitidos no Centro Infantil Boldrini, Campinas - SP. Foram avaliados quanto à adequação da ingestão alimentar, estado nutricional (EN), dosagem de glutationa (GSH) eritrocitária, hemograma, produção de citocinas no plasma e em cultura de células, imunoglobulina A salivar e evolução da mucosite. Foram comparados os resultados bioquímicos dos pacientes com um grupo controle de indivíduos saudáveis da mesma faixa etária. Utilizou-se o software SPSS para as análises estatísticas (p<0,05). O protocolo de pesquisa foi aprovado pela Comissão Nacional de Ética em Pesquisa (CONEP) com registro 14097. Tomados em conjunto os resultados indicaram que o WPC apresentou efeito positivo sobre o EN dos pacientes, porém não influenciou na composição corporal. A distribuição % dos macronutrientes estava adequada em todos os tempos para os grupos WPC e maltodextrina (placebo), mas o % de adequação dos micronutrientes não atendia às recomendações em sua maioria. As análises bioquímicas não evidenciaram superioridade do WPC em relação ao placebo. Não houve diferença significativa entre os grupos sobre a avaliação clínica da mucosite oral. Na comparação dos pacientes com LMA e indivíduos saudáveis (controle) pode-se constatar níveis estatisticamente superiores do controle nos parâmetros bioquímicos de albumina, pré-albumina, eritrócitos, hematócrito, hemoglobina, plaquetas, produção de fator de necrose tumoral alfa (TNF-?), interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10) e interferon gama (IFN-?) quando estimuladas pela vacina BCG liofilizada e produção de IL-6 quando estimulada por fitohemaglutinina (PHA). No entanto, para a concentração de GSH eritrocitária e produção espontânea das citocinas TNF-??e IFN-??verificou-se que os pacientes com LMA apresentaram níveis estatisticamente superiores em relação ao controle saudável. No capítulo 3 foi elaborado um protocolo de indução de mucosite em ratos Wistar testando-se os quimioterápicos 5-Fluoruracila (5-FU) e sulfato de vincristina (SV), em administrações de diferentes concentrações e número de doses. Através desse experimento concluiu-se que o SV não foi um bom agente indutor de mucosite, ao contrário do 5-FU. A partir desses resultados foram realizados experimentos com 5-FU visando ajuste das condições dos experimentos inclusive do número, periodicidade e concentração das doses do quimioterápico. O melhor modelo de indução de mucosite gastrointestinal foi obtido através da administração de 3 doses de 5-FU com intervalo de 3 dias entre cada dose, nas concentrações entre 50 e 70 mg/Kg/dose. Os índices bioquímicos não foram influenciados pelo efeito da peletização da dieta e, de modo geral não houve diferença significativa entre os grupos tratados com WPC e com caseína. Independente da natureza da proteína (WPC ou caseína) observou-se maior proteção contra o 5-FU quando os animais receberam as dietas previamente à administração do quimioterápico. Ao contrário do esperado, o estímulo imunológico com hemáceas de carneiro não promoveu aumento nos níveis de GSH nos eritrócitos. As proteínas do soro do leite protegeram a mucosa, em termos de promover menor intensidade de mucosite, nos períodos mais críticos (72h após a 2ª e a 3ª dose de 5-FU) nas regiões de maior prevalência, duodeno e jejuno, quando se comparou com os resultados obtidos para os grupos tratados com caseína. Para os experimentos in vivo, do capítulo 4, utilizaram-se células de leucemia linfóide aguda (LLA) pediátrica humana, isoladas de pacientes do Centro Infantil Boldrini, as quais foram inoculadas em camundongos NOD/SCID. Nesses experimentos, utilizou-se dieta AIN-93G com WPC ou caseína e dieta comercial e o quimioterápico SV. Avaliou- se: peso corporal, consumo de dieta, razão entre peso dos órgãos (rim, baço e fígado) e peso corporal, evolução da leucemia, tempo de sobrevida, hemograma e níveis de glutationa em eritrócitos do sangue periférico. Nos experimentos in vitro foram usadas 6 linhagens celulares: K562 (Leucemia Mieloide Crônica), Nalm-6 (Leucemia Linfóide Aguda do tipo B), Jurkat (Leucemia Linfóide Aguda do tipo T), CEM (Leucemia Linfóide Aguda do tipo T), RAMOS (Linfoma Burkitt) e HL-60 (Leucemia Mieloide Aguda). Foram testadas a citotoxicidade (IC50) do WPC, a viabilidade celular e os níveis de glutationa total nas células leucêmicas estudadas em 4 tempos (0, 24, 48 e 72h) e 4 condições diferenciadas (células; células + WPC; células + WPC + ARAC-C; células + ARA-C). Todos os resultados, tanto do capítulo 3 como do 4, foram analisados através do software ¿Statística: Basic Statistics and Tables¿. Não houve diferença entre o WPC e a caseína em relação aos parâmetros avaliados nos experimentos in vivo, exceto na análise de Doença Residual Mínima (DRM), na qual a caseína se mostrou mais efetiva que o WPC. Constatou-se superioridade do WPC sobre os resultados de peso corporal, razão dos rins e baço pelo peso e evolução da leucemia em relação aos animais tratados com dieta comercial. Não foi possível verificar um efeito sinergístico entre o WPC e o quimioterápico sulfato de vincristina. No que se refere aos experimentos in vitro, o WPC apresentou IC50 para Nalm-6 de 6,72 mg/mL e para a linhagem CEM de 11,84 mg/mL. Verificou-se que as linhagens K562, Nalm-6 e HL-60 apresentaram perfis semelhantes em relação à viabilidade celular. No entanto, em relação à produção de glutationa total, cada linhagem comportou-se de maneira diferenciada, sendo que a maior produção em todas as condições e tempos estudados, foi para a linhagem HL-60 seguida pela K562 / Abstract: The objective of this research was to evaluate the effect of a bovine milk whey protein concentrate (WPC), enriched with transforming growth factor beta (TGF-ß) and lactoferrin in pediatric patients with Acute Myeloide Leukemia (AML) (Chapter 2); in a chemotherapic-induced gastrointestinal mucositis model in Wistar rats (Chapter 3); evaluate in human leukemic cells in culture or transplanted into immune-deficient mouse NOD/SCID (Chapter 4). WPC enriched with TGF-ß and lactoferrin was donated by Hilmar Cheese Company (Cal, USA). Chapter 2 describes a randomized, double-blind, placebo controlled, prospective clinical trial of nutritional intervention with participation of 21 therapy-naïve patients with AML aged 0-19 years from Centro Infantil Boldrini, Campinas, SP. Food intake, nutritional status, red blood cell glutathione (GSH) concentration, haemogram, cytokine concentration in plasma and cell cultures, salivary immunoglobulin A (IgA) and evolution of mucositis were studied. Health individuals at the same age range were used as a control group. The statistical analysis was done using SPSS software (p < 0.05). The research protocol was approved by the National Committee of Ethics in Research (CONEP), resgistered by the number 14097. WPC showed a positive effect in the nutritional status of the patients, but it did not influence their body composition. Percentual distribution of macronutrients was adequate in all times of analyses for both WPC and maltodextrin (placebo) groups, but the percentage of adequacy of the majority of micronutrients did not reach recommendation. Other laboratorial analyses and evolution of mucositis did not show any difference between WPC and placebo groups. Comparison of AML patients with a group of healthy control showed higher concentrations of albumin, prealbumin, haematocrit, hemoglobin, platelets, Bacillus Calmette-Guérin (BCG) vaccine-stimulated tumor necrosis factor alpha (TNF-a), interleukin 6 (IL-6), interleukin 10 (IL-10) and interferon gamma (IFN-?) and phytohemaglutinin (PHA)- stimulated IL-6 in controls. On the other hand, patients with AML had higher red blood cell glutathione concentration and spontaneous TNF-a and IFN-??production in comparison to controls. Chapter 3 describes the experiments envolved in the development of a chemotherapic-induced model of mucosites, in Wistar rats, in which 5-Fluoruracila (5-FU) and Vincristine Sulfate (VS) were used, in various concentrations and number of doses. Through this experiment it was concluded that the VS was not a good promoter of mucositis in rats, unlike 5-FU. From these results, experiments were performed with 5-FU considering conditions of the experiments including the number, frequency and concentration of the doses of chemotherapic. The best model was obtained by the administration of 3 doses of 5-FU, each with a 3-days interval and concentrations in the range of 50 to 70 mg/Kg/dose. Haematological parameters and erythrocyte glutathione (GSH) were not influenced by pelletization of the diet and no difference was found between WPC and casein groups. Independent of the protein type (casein or WPC) the effect of 5-Fluoruracila was less deleterious when the diets were offered prior to the chemotherapic treatment. Contrary to expected, sheep red blood cells did not stimulate higher production of erythrocyte GSH by the WPC. WPC decreased mucosites intensity better than casein protecting the mucosa during the most critical periods (72h after 2nd and 3rd doses of 5-FU) in the intestinal regions of major prevalence of mucositis (duodenum and jejunum). More studies are required to support the WPC benefit in the protection and recovery of the mucosa GIT in experimental animal models, and possibly in humans. In chapter 4, cells originated from patients with Acute Lymphoid Leukemia (ALL) from Centro Infantil Boldrini were inoculated in NOD/SCID mice. The animals were fed with commercial diet or AIN-93G diet with WPC or casein as the only protein source and used the chemotherapic vincristine sulfate. Body weight, diet ingestion, ratio between organs (kidney, spleen and liver) and body weight, leukemia evolution, survival time, haemogram and glutathione levels were evaluated. The cell lineages K562 (Chronic Myeloid Leukemia), Nalm-6 (B cell, ALL), Jurkat (T cell, ALL), CEM (T cell, ALL), RAMOS (Burkitt¿s Lymphoma) and HL-60 (AML) were used for the in vitro assays, in which WPC cytotoxicity (IC50), cell viability and glutathione levels were accessed in four different times (0, 24, 48 and 72h) and conditions (cells; cells + WPC; cells + WPC + ARA-C; cells + ARA-C). Data were submitted to statistic analysis by using the: Basic Statistics and Tables software. There was no differences between WPC and casein in relation to the parameters evaluated in vivo, with the exception of the analysis of Minimal Residual Disease (MRD), in which casein seemed to be more effective than WPC. Results on body weight, ratio between organs and body weight and evalution of leukemia were better for the WPC group when compared with animals fed commercial diet. No synergistic effect between the WPC and vincristine sulfate could be observed. In the in vitro experiments, WPC IC50 was 6,72 mg/mL for Nalm-6 and 11,84 mg/mL for CEM cells. K562, Nalm-6 and HL-60 cell lineages showed similar viability profiles. However, each lineage produced different total glutathione concentration in the culture medium, with a higher production achieved by HL-60 cells, followed by K562 cells / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição

Orientadores: Valdemiro Carlos Sgarbieri, Antônio Fernando Ribeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-16T14:45:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bernardi_DanielaMiotto_M.pdf: 2175104 bytes, checksum: cb8cf27a5c2ba0db8cf94fbc2965beec (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A fibrose cística (FC) é caracterizada por intenso processo inflamatório, doença pulmonar obstrutiva, infecção das vias aéreas e má digestão/ má absorção de nutrientes e micronutrientes, sendo a nutrição determinante no prognóstico do paciente. Objetivo: Avaliar os efeitos imunológicos e nutricionais da suplementação de um concentrado protéico do soro do leite bovino (whey protein concentrate - WPC), enriquecido com TGF-ß e lactoferrina, em pacientes pediátricos com fibrose cística, bem como realizar perfil imunológico e nutricional destes pacientes. Métodos: O ensaio clínico de intervenção nutricional foi prospectivo, randomizado, duplo cego com placebo e teve duração de 4 meses. As crianças que participaram eram atendidas no Ambulatório Pediátrico de FC, do Hospital de Clínicas da UNICAMP, na faixa etária entre 3 e 12 anos e escore de Shwachman entre moderado e bom. Quarenta e cinco crianças iniciaram a suplementação e apenas 28 finalizaram, sendo 15 no grupo WPC-TGFß e 13 no grupo caseína (placebo). Foram incluídas 17 crianças saudáveis como grupo controle para as análises bioquímicas e imunológicas. Os suplementos (placebo e teste) foram submetidos às análises centesimais e microbiológicas. A avaliação dos pacientes ao longo da suplementação foi realizada em três tempos (T0=antes da suplementação, T1=depois de 2 meses e T2= no final do quarto mês). Determinaram-se os níveis de glutationa nos eritrócitos, a produção de radicais reativos de oxigênio (ROS) e de citocinas em sobrenadante de cultura de sangue periférico (TNF-a, IFN-?, IL-8, IL-6, IL-10), concentração de TGF-ß2 no soro, imunoglobulinas séricas (IgA, IgG, IgM e IgE) e IgA na saliva, cultura do escarro, níveis de albumina e pré-albumina, avaliação antropométrica e de ingestão alimentar. Em relação à análise estatística, os dados paramétricos foram analisados com o teste-T e ANOVA para amostras pareadas e os dados não paramétricos foram testados por Mann-Whitney e Friedman. O nível de significância adotado foi de 5%. Resultados: Em relação aos sistemas antioxidante e oxidante em sangue periférico, verificou-se que não houve diferença significativa entre fibrocísticos e indivíduos saudáveis. A produção espontânea de TNF-a, IL-6, IL-10 estava aumentada na FC assim como a produção de IL-6 em resposta à PHA, a concentração de TGF-ß2, IgA e IgM no soro e a concentração sanguínea de leucócitos. Por outro lado, os indivíduos saudáveis tiveram maior produção de TNF-a em resposta ao estímulo pela BCG. Houve baixo índice de desnutrição nos participantes. A suplementação com WPCTGFß não influenciou de forma significativa na concentração de GSH, imunoglobulinas, na infecção das vias aéreas e no estado nutricional. Em relação à GSH embora a mudança não tenha sido significativa, observou-se uma tendência de aumento gradual ao longo da suplementação. A suplementação também provocou um aumento significativo na produção basal de ROS pelos granulócitos, uma redução na produção de TNF-a em sobrenadante de cultura em resposta à PHA, além de reduzir momentaneamente (T1) a produção de IL-10 na presença de PHA. Observou-se atenuação da diferença estatística existente para TGF-ß2, antes da suplementação, nos dois grupos. Houve um aumento do número de eritrócitos e de hemoglobina, provavelmente pela ação da lactoferrina. Conclusão: O presente trabalho mostrou que a criança clinicamente estável com FC consegue manter um balanço oxidante e antioxidante normal. As altas concentrações de TNF-a e de IL-6 demandaram uma maior produção de IL-10, que também pode ter sido a responsável pela resposta TH1 eficiente para BCG, expresso pela produção normal de IFN-?. A maior produção de IgA e IgM confirmam um sistema imune adaptativo normal frente ao estimulo freqüente da colonização bacteriana nesses indivíduos. Existem indícios nos resultados de que a suplementação à longo prazo em crianças ainda não colonizadas poderia ser mais eficiente, o que somente poderia ser elucidado por meio de novos estudos / Abstract: Cystic fibrosis (CF) is characterized by an intense inflammatory process, pulmonary obstruction, airway infection and gastrointestinal symptoms resulting maldigestion/ malabsorption of nutrients, and as a consequence nutrition is a determinant on the patient's prognostic. The aims were to evaluate the effect of supplementation with a WPC enriched with TGF-ß and lactoferrin, in pediatric patients with cystic fibrosis. Methods: The study was a randomized, double-blind, placebo controlled, prospective clinical trial of nutritional intervention with four months of duration. Children were recruited from the Pediatric Outpatient Unit, at UNICAMP Clinical Hospital, aged between 3 and 12 years and Shwachman score between moderate and good. The study group started with 45 children, nevertheless, it ended with 28 subjects: 15 of WPC-TGF ß group and 13 of casein group (placebo). Seventeen healthy children were also used as a control group. The supplements (placebo and test) were submitted to centesimal and microbiological analysis. The supplementation was done during four months with three assessments (T0= before starting the supplementation, T1= with two months of supplementation and T2= at the end the 4th months of supplementation) with appraisal of: erythrocyte glutathione concentration, production of reactive oxygen species (ROS) by granulocytes, cytokines (TNF-a, IFN-?, IL-8, IL-6, IL-10) concentration in supernatants from cultures under spontaneous condition, PHA and Bacillus Calmette-Guérin (BCG)-stimulated peripheral blood mononuclear cells, levels of serum TGF-ß2, immunoglobulins (IgA, IgG, IgM and IgE), albumin and prealbumin, salivary IgA, sputum culture, anthropometric measurements and food intake. For statistical analysis, the parametric data were analyzed with T-test and ANOVA and nonparametric data, with Mann-Whitney and Friedman tests. The level of significance was 5%. Results: There was no statistical difference between CF patients and healthy subjects in relation to oxidant and antioxidant system in peripheral blood. The spontaneous production of TNF-a, IL-6, and IL-10, production of IL-6 in response to PHA, TGF-ß2, IgA and IgM in serum and counting white blood cells was increased in CF patients. Furthermore, healthy individuals responded better to secretion of TNF-a in response to BCG stimulation. A low incidence of malnutrition was observed. Supplementation with WPC-TGF ß did not have an influence on concentration of glutathione, immunoglobulins, infection of airways and nutritional status. Regarding GSH although the change was not significant, there was a trend of gradual increase during the supplementation. Furthermore, increased basal stimulation of granulocytes for the production of ROS reduced the production of TNF-a in culture supernatants in response to PHA, slightly reduced the production of IL-10 (T1) in response to PHA and also attenuated the statistical difference existing for TGF-ß2, prior to supplementation, in both groups. The ability to increase the total number of erythrocytes and hemoglobin was attributed to lactoferrin present in the supplement. Conclusion: This study showed that clinically stable CF children could maintain a normal oxidant and antioxidant balance. The high concentrations of TNF-a and IL-6 require a higher production of IL-10, which may have also been responsible for the efficient TH1 response to BCG, expressed by IFN-?. The higher production of IgA and IgM confirm a normal adaptive immune system against bacterial colonization in these patients. It is suggested that supplementation for longer period of children not yet colonized lead to better results than the ours obtained, however, only further study could elucidate such an hypothesis / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Orientadores: Rosiane Lopes da Cunha, Angelo Luiz Fazani Cavallieri / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-12T20:41:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kuhn_KatiaRegina_M.pdf: 7905383 bytes, checksum: d2611d08a267478c25b7976ba7ea4940 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Biopolímeros, como as proteínas e os polissacarídeos, são utilizados pela indústria de alimentos por desempenharem um papel essencial na estrutura, textura e estabilidade dos produtos. O entendimento das interações biopoliméricas é importante para melhorar suas propriedades funcionais, como por exemplo, a capacidade de gelificação, e para o desenvolvimento de novos produtos. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo estudar as interações macromoleculares de sistemas contendo proteínas do soro de leite (WPI) e/ou polissacarídeo da linhaça (FG) em sistemas gelificados a frio pela adição de sais de cálcio ou sódio, buscando correlacionar estas interações com as propriedades mecânicas e de estrutura dos géis formados. Inicialmente realizou-se a caracterização reológica do polissacarídeo da linhaça e foi observado um comportamento de fluido pseudoplástico e propriedades de gel fraco. Com a adição de sais, verificou-se uma redução na viscosidade intrínseca e nos módulos elástico e viscoso das soluções. Em uma segunda etapa, foram estudados géis puros de WPI (5, 6, 7, 8 e 9% m/m) formados pela difusão de sais de cálcio ou sódio através de membranas de diálise e observou-se a formação de estruturas opaca e translúcida, sendo que o aumento na concentração de WPI levou a uma diminuição na claridade e porosidade dos géis e a um aumento na rigidez, elasticidade e capacidade de retenção de água, em ambos os sistemas (CaCl2 e NaCl). Os géis de WPI formados pela difusão de sais de cálcio apresentaram-se mais rígidos e elásticos, menos deformáveis e com menor capacidade de retenção de água em relação aos géis de sódio. Por último, foram estudados sistemas mistos WPI (8% m/m) ¿ FG (0,1; 0,3 e 0,5% m/m) utilizando dois procedimentos para incorporação de sais, a difusão através de membranas de diálise e a adição direta, e observou-se que o método de preparo dos géis levou a sistemas com propriedades mecânicas bastante distintas. No método de difusão lenta de sais, visualizou-se a formação de géis heterogêneos (separação de fases macroscópica). Nestes sistemas, o aumento na concentração de FG levou a diminuição da rigidez, deformabilidade e da capacidade de retenção de água dos géis como conseqüência da incompatibilidade termodinâmica entre os biopolímeros e descontinuidade da estrutura da rede do gel. No entanto, foi no método de adição direta de sais de sódio que obteve-se os géis bipoliméricos mais fortes, sendo este método o mais indicado visando melhor estrutura e propriedades mecânicas dos géis formados com maior viabilidade de uso em escala industrial / Abstract: Biopolymers, such as proteins and polysaccharides, are used by the food industry for playing an essential role in the structure, texture and stability of the products. An understanding of the biopolymers interactions is important for improvement of their functional properties, such as gelation, and for the new products development. Thus, the aim of this work it was to study macromolecular interactions between whey protein isolate (WPI) and/or flaxseed gum (FG) at cold-set gels formed by calcium or sodium salts addition, by correlation of these interactions with the mechanical properties and structure of the formed gels. Initially, flaxseed gum rheological characterization was realized and it was observed a shear thinning behavior and ¿weak gel¿ properties. Salts addition led to a decrease in intrinsic viscosity and in the storage and loss modulus of solutions. In a second step of this work, pure WPI gels (5, 6, 7, 8 and 9% w/w) formed by calcium or sodium salts diffusion through dialysis membranes were studied and it was observed the formation of structures opaque and translucent, where the increase WPI concentration led to a decrease in the clarity and porosity of the gels and to an increase in hardness, elasticity and water-holding capacity, in both systems (CaCl2 and NaCl). WPI gels formed by calcium salts diffusion were harder and more elastic, less deformable and with lesser ability to hold water in relation to sodium gels. Finally, mixed WPI (8% w/w) ¿ FG (0.1, 0.3 and 0.5% w/w) systems using two procedures for incorporation of salts were studied, the diffusion through dialysis membranes and the direct addition, and it was observed that the gels preparation method led to systems with quite different mechanical properties. By slow salts diffusion, it was observed the heterogeneous gels formation (macroscopic phase separation). In these systems, the increase FG concentration led to a decrease of the hardness, deformability and water-holding capacity of the gels as a consequence of the thermodynamic incompatibility between biopolymers and gel network discontinuity. However, it was by sodium salts direct addition that it were obtained stronger bi-polymeric gels, being this the most appropriate method to better structure and mechanical properties of the formed gels with higher viability for use in industrial scale / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Jaime Amaya-Farfan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-09T15:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_IaraRibeiro_M.pdf: 1875369 bytes, checksum: 01034f576b4ca76425fe296fed74054e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Estudos recentes sugerem que o consumo das proteínas do soro de leite, quando parcialmente hidrolisadas, resulta em efeitos fisiológicos diferentes daqueles produzidos pelas proteínas intactas. Desse modo, o objetivo do presente trabalho foi verificar as alterações metabólicas causadas nos tecidos do estômago e coração, e na resistência à exaustão, utilizando ratos Wistar alimentados com isolado do soro de leite, ou seu proteolisado enzimático, e submetidos a exercício físico. Foram investigadas possíveis alterações na atividade enzimática da pepsina, glicogênio sintase, glicogênio fosforilase, creatina quinase e glicogênio do miocárdio e a perfusão de peptídeos através do estômago. O ensaio biológico teve duração de 42 dias, com 120 ratos divididos em 12 grupos (n=10), sendo três fontes protéicas: caseína (C), proteína hidrolisada (H), proteína intacta do soro de leite (I) e quatro tipos de atividade física: treinado (T), treinado-exausto (TX), sedentário (S), sedentário-exausto (SX), em esteira rolante, por quatro semanas. Foram observados valores mais altos na atividade da enzima creatina quinase (sem diferença significativa) nos grupos T e TX, quando esses consumiram dieta H. Em relação ao treinamento, foram encontradas maiores quantidades de glicogênio miocárdico nos animais submetidos a menor atividade física. Em relação à dieta, as concentrações de glicogênio variaram aleatoriamente. Entretanto, os animais que consumiram a dieta H exibiram menor atividade da glicogênio sintase do que aqueles que receberam dieta I, e esses também menores que a dieta C. Na enzima glicogênio fosforilase, notou-se valores maiores de atividade enzimática nos grupos de animais do grupo T em relação aos outros grupos, sendo que a dieta H mostrou resultados menores em comparação com as outras dietas. Quanto à exaustão, foram comparados os grupos H e I, sendo que os grupos que foram submetidos a treinamento prévio (TX) mostraram-se mais resistentes à exaustão do que aqueles que foram mantidos sedentários (SX). Na atividade enzimática da pepsina, os resultados entre grupos foram semelhantes, notando-se aumento no grupo sedentário que consumiu o hidrolisado, mas desaparecendo com a exaustão. Estudo da possibilidade de perfusão de peptídeos através da parede estomacal encontrou evidências de que, ao menos, um peptídeo rico em valina é detectado no perfusado externo ao cabo de duas horas. Foi observada maior quantidade de picos eletroforéticos no conteúdo do estômago dos animais dos grupos SX e TX que receberam infusão do hidrolisado e teores de aminoácidos livres mais elevados no grupo S do que nos demais. Associando os valores encontrados para aminoácidos livres com os valores de aminoácidos totais, no interior e exterior do estômago, pode se afirmar que o conteúdo de peptídeos formados no estômago, no grupo que recebeu a infusão de hidrolisado, foi superior à que recebeu o isolado. Conclui-se que ambos o tipo de atividade física e a fonte protéica da dieta podem influenciar aspectos fisiológicos, tais como a atividade da pepsina, a facilidade com que peptídeos são gerados e acumulados no órgão, sendo que alguns peptídeos podem atravessar a parede estomacal. As implicações decorrentes destes fenômenos ainda aguardam maior investigação / Abstract: Recent studies suggest that the consumption of milk whey proteins, if partially hydrolyzed, result in different physiological effect from those produced by the ingestion of the unbroken proteins. Therefore, the objective of the present work was to verify eventual metabolic alterations caused in the stomach and heart tissues of exercising Wistar rats fed an enzymatic milk whey hydrolyzate, as compared to cohorts receiving the unhydrolyzed proteins. The enzymatic activity of pepsin and those of glycogen synthase, glycogen phosphorylase, creatine kinase, as well as glycogen stores of the myocardium were thus investigated. Additionally, the perfusion of peptides through the stomach wall using capillary electrophoresis and liquid chromatography was also verified. The biological assay was conducted with 120 rats, during 42 days. The animals were divided into 12 groups (n=10), as follows: three protein sources: casein (C), protein hydrolyzate (H) and the unbroken whey protein (I), in addition to four types of physical activity: trained (T), trained-exhausted (TX), sedentary (S), sedentary-exhausted (SX) for four weeks. For creatine kinase, higher activities were observed (without significant difference) in groups T and TX, when these consumed diet H. With regard to myocardial glycogen, higher stores were found in the animals with lesser physical activity, while glycogen concentrations varied randomly in response to the diet. However, the animals that consumed diet H exhibited lower glycogen synthase activity in comparison to those that received diet I, which in turn were lower than those that received diet C. As for glycogen phosphorylase, higher values were noticed in the groups subjected to training (T) in relation to the other groups. Similarly, the animals on diet H also responded with lower activities. With regard to exhaustion time, only those groups that underwent training (TX) appeared to be more resistant to exhaustion than those that remained sedentary (SX). The enzymatic activity of pepsin did not show significant differences among groups, except for the increase of the sedentary that consumed diet H. The increase, however, disappeared when the animals were brought to exhaustion. Study of the possibility of perfusion of whey protein peptides through the stomach wall suggested that at least one peptide rich in valine promptly perfused to the external fluid. A higher number of capillary electrophoretic peaks were also observed in the stomach contents of the animals of groups SX and TX that received the hydrolyzate infusion and, by liquid chromatography, it was possible to notice that the group S stomachs had greater levels of free amino acids than the other groups. Comparing the values found for free amino acids with the total amino acids, in both the inside and outside of the stomach, it could be stated that the content of peptides formed in the stomach was considerably greater in the group infused with the hydrolyzate than with the isolate. It is concluded that chronic consumption of the whey protein hydrolyzate as the only source of protein results in enzymatic changes consistent with a more efficient physiologic state, favorable to higher physical performance, such as higher myocardial creatine kinase and lower glycogen kinase and phosphorylase activities. No significant changes in pepsin activity in the rat stomach were observed, but the readiness with which the hydrolyzate peptides accumulate and traverse the organ wall was evident. Further data to provide a better understanding of the implications of consuming prehydrolyzed proteins await investigation / Mestrado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Mestre em Alimentos e Nutrição

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-11T05:24:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mariusso_AnaCarolinaBossi_M.pdf: 451123 bytes, checksum: 21c6b468642fe226f7319a3edcd7cd1a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Há na atualidade uma grande preocupação em atender às necessidades nutricionais da população brasileira como melhoria do ¿status¿ de saúde. A Indústria de Alimentos Brasileira tem uma grande importância no contexto socioeconômico do país e produz uma variedade de subprodutos tais como: soro de leite, extrato de levedura e farinha de soja, sem qualquer utilização mais nobre que não seja produção de rações ou queima para gerar energia. Este trabalho teve como objetivo propor um alimento de baixo custo, de grande aceitação e com um valor nutritivo alto, usando subprodutos das indústrias de alimentos para um melhora nas condições de saúde da população, especialmente da população carente, principalmente das crianças que se alimentam na escola. As massas alimentícias, sendo uma das formas mais antigas de alimentação, são também muito versáteis, tanto do ponto de vista nutricional quanto do ponto de vista gastronômico, podendo ser preparadas e servidas de formas diversas. É por este motivo que se propõe a utilização da massa para a produção de um alimento de alto valor protéico. Foram analisadas as características físicas, físico-químicas e sensoriais do macarrão tradicional e nos macarrões enriquecidos com soro de leite em pó, extrato de levedura e farinha de soja desengordurada. Foi verificado, através dos resultados obtidos, que as misturas acrescidas com 9% de farinha de soja desengordurada apresentaram melhor comportamento, sendo, portanto um produto de boa qualidade nutricional, boa aceitabilidade geral (sabor, odor, textura, cor e consistência) e baixo custo. Neste contexto, conclui-se que o enriquecimento do produto desenvolvido com farinha de soja desengordurada é viável tecnicamente oferecendo uma excelente alternativa para a fabricação do macarrão fresco. O acréscimo de proteínas apresentou vantagens quantitativas e qualitativas ao produto desenvolvido quando comparado ao produto tradicional, o qual tem alta concentração de carboidratos e baixo teor de proteínas / Abstract: There is currently a major concern to meet the nutritional needs of the Brazilian population as improving the "status" of health. The Brazilian Food Industry has a very important socio-economic context in the country and produces a variety of products such as serum of milk, extract, yeast and flour, soybeans, without any use more noble than production of feed or burning to generate energy. This work aims to propose a low cost food with high acceptance and high nutritional value, for an improvement in the health conditions of poor population, mainly children who have meals at school. For this reason it was chosen the pasta, as it is one of the oldest recipes in history, it is also very versatile, regarding nutritional and gastronomic aspect and, can be prepared and served in a many ways. For this reason it¿s proposed the use of pasta for the production of a high value food protein. There has been analyzed the physical, physical-chemical and sensory of traditional pasta and also pasta fortified with whey milk powder, yeast extract, and defatted soybean. Flour. It has been verified through obtained results, that the mixes with 9% of defatted soy flour, had the proportion which presented the best effects, being therefore a product of good nutrition, good general acceptance (taste, appearance, color, smell, consistency) and low cost. In this context, it was concluded that the enrichment of the product developed with, defatted soy flour is technically feasible offering an excellent alternative for the manufacture of fresh pasta. The addition of protein presented quantitative and qualitative advantages of the product developed compared to the traditional product, which has mainly carbohydrates, and low content of protein / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-11T18:57:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lorena Lopes Ferreira - 2013.pdf: 653277 bytes, checksum: 4c9aa7d38ca40c4e856a2bcb3c40a6f2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-11T20:01:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lorena Lopes Ferreira - 2013.pdf: 653277 bytes, checksum: 4c9aa7d38ca40c4e856a2bcb3c40a6f2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T20:01:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lorena Lopes Ferreira - 2013.pdf: 653277 bytes, checksum: 4c9aa7d38ca40c4e856a2bcb3c40a6f2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-09-20 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Ticks are external parasites distributed in the world. Its parasitism causes direct and indirect damage to their hosts. Rhipicephalus microplus is the principal ectoparasite of the livestock causing economic and sanitary implications in the tropics regions. Control strategies are still a challenge and new alternatives are being sought to avoid the use of chemical methods that are reprehensible in relation to animal and human health, and also the environment. It is known that Bos indicus are more resistant to ticks than Bos taurus, while their crosses have a moderate resistance. The olfactory and gustatory senses allow these parasites to seek hosts, mating partners and distinguish between food and harmful substances. The receptors of these sensory organs are present throughout the body and appendages of arthropods, being pore sensilla in the chelicerae important when it comes to ticks taste receptors. Electrophysiology assists in the discovery of active principles that attract or repel these parasites and this will be proven after a behavioral test. This work was performed in order to characterize R. microplus electrophysiological responses to phagostimulants in different concentrations like salts (NaCl and KCl, 10-3 a 10-1M), glucose (10-4 a 10-1M), adenosine triphosphate (ATP, 10-6 a 10-2M), reduced glutathione (GSH, 10-6 a 10-2M), a mixture of substances (MIX, glucose1M+ATP10- 2M+GSH10-3M) and sera of susceptible and resistant cattle to ticks. A single cell electrophysiology technique was used in the taste sensila of R. microplus. Engorged nymphs of R. microplus were collected from naturally infested bovines. Females ticks were fed on rabbits for a period of three to five days. The females were removed and taken directly to the electrophysiology room in order to be prepared for the test. At least 10 females were tested per substance. The shape, frequency and amplitude of spikes were analyzed with the program Autospike. The statistical analysis was performed with the software R applying ANOVA followed by Tukey HSD post-hoc (5%). In relation to the phagostimulants it was observed that the taste receptors of the chelicerae were responsive for all substances tested, having a more intense responses at higher concentrations. The frequency of responses to salts ranged from 11.09 ± 0.98 to 28.50 ± 3.49 spikes/s; to glucose from 25.40 ± 2.33 to 37.15 ± 4.47 spikes/s, to ATP from 17.91 ± 1.28 to 37.30 ± 4.77 spikes/s; to GSH from 19.10 ± 2.84 to 56.6 ± 5.08 spikes/s and the MIX 50.60 ± 4.42 spikes/s. The responses were uni or multicellular depending on the concentration. Sera from resistant cattle xiii triggered a higher frequency of spikes/s (average of 53.48 ± 1.89 spikes/s, ranging from 48.45 ± 4.28 to 61.05 ± 5.14 spikes/s) when compared with the susceptible cattle (average of 40.33 ± 1.63 spikes/s, ranging from 33.30 ± 3.02 to 49.05 ± 5.20 spikes/s). The records analyzed showed that R. microplus was more stimulated by sera from resistant cattle than those from susceptible animals. It is known that in the serum has phagostimulants which probably triggered spikes in both groups. On the other hand, the greater number of spikes to resistant bovine serum might be due to the presence of deterrents compounds. Both sera showed a multicellular response. It was also observed that there were variations in the spikes frequency between animals of the same group according to the characteristic of spikes recorded. It was concluded that R. microplus respond in a dose dependent pattern to the phagostimulants tested. And also that, this tick was able differentiated the sera of susceptible to sera of resistant bovines. / Carrapatos são ectoparasitas obrigatoriamente hematófagos de diversas espécies e estão distribuídos mundialmente. Seu parasitismo acarreta danos diretos e indiretos a seus hospedeiros. Rhipicephalus microplus é o principal ectoparasita da pecuária causando problemas econômicos e sanitários nas regiões tropicais e subtropicais. O seu controle ainda é um desafio e novas alternativas estão sendo buscadas para evitar o uso de métodos químicos que são condenáveis em relação à saúde animal, humana e também ao meio ambiente. Sabe-se que os bovinos Bos indicus são mais resistentes que os Bos taurus, enquanto que seus cruzamentos possuem uma resistência moderada. A olfação e gustação permitem que esses parasitas busquem por hospedeiros, parceiros para cópula e distingam entre alimentos e substâncias nocivas a eles. Há receptores desses sentidos distribuídos por todo o corpo e apêndices dos artrópodes, sendo as porossensilas das quelíceras dos carrapatos importantes quando se refere a receptores gustativos. A eletrofisiologia auxilia na descoberta de compostos químicos que atraem ou repelem esses parasitos. Este trabalho foi feito com intuito de caracterizar as respostas eletrofisiológicas das porossensilas de R. microplus frente a alguns fagoestimulantes em diferentes concentrações como sais (NaCl e KCl, 10-3 a 10-1M), glicose (10-4 a 10-1M), adenosina trifosfato (ATP, 10-6 a 10-2M), glutationa reduzida (GSH, 10-6 a 10-2M) e uma mistura de substâncias (MIX, Glicose1M + ATP10-2M + GSH10-3M). Objetivou ainda avaliar as respostas eletrofisiológicas para soros de bovinos sensíveis (Girolando) e resistentes (Nelore) ao carrapato. Para isso foi utilizada a técnica de registro em sensila única nas porossensilas de fêmeas de R. microplus. Fêmeas alimentadas em coelhos por três a cinco dias foram usadas. Foram testadas no mínimo dez fêmeas por concentração e substância. Após o registro, analisou-se a forma, frequência e amplitude de spikes com o auxílio do programa Autospike. A análise estatística foi feita com o software R aplicando ANOVA seguido de Teste de Tukey com nível mínimo de significância de 5%. As porossensilas foram responsivas a todos os fagoestimulantes testados, mostrando resposta mais intensa nas maiores concentrações. A frequência de spikes/s para os sais variou de 11,09 ± 0,98 a 28,50 ± 3,49; para glicose 25,40 ± 2,33 a 37,15 ± 4,47; para o ATP de 17,91 ± 1,28 a 37,30 ± 4,77; para o GSH de 19,10 ± 2,84 a 56,6 ± 5,08 e o MIX de 50,60 ± 4,42. As respostas foram uni ou multicelulares. Os soros dos bovinos resistentes xi desencadearam uma maior frequência de spikes/s (média de 53,48 ± 1,89 spikes/s, variando 48,45 ± 4,28 a 61,05 ± 5,14 spikes/s) quando comparado com o grupo dos soros dos bovinos sensíveis (média de 40,33 ± 1,63 spikes /s, variando de 33,30 ± 3,02 a 49,05 ± 5,20 spikes/s). Os registros analisados mostraram que as porossensilas de R. microplus foram mais estimuladas pelo soro de animais resistentes do que aqueles de animais sensíveis. A maior frequência de spikes desencadeada pelos soros de bovinos resistentes pode ter ocorrido pela presença de compostos deterrentes além dos fagoestimulantes existentes no soro. Para ambos os soros foi observada uma resposta multicelular. Observou-se também que dentro de um mesmo grupo houve variações em relação à frequência dos spikes, que foi atribuído à resistência dos animais. Concluiu-se que as porossensilas de R. microplus responderam de forma dose dependente aos fagoestimulantes testados e também apresentaram uma maior atividade para soros de bovinos resistentes do que soros de bovinos sensíveis.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-22T19:57:28Z No. of bitstreams: 2 Tese - Mauro Roberto Biá da Silva - 2014.pdf: 1034991 bytes, checksum: 33b9d1a7520d55b9ed3fc8220c32caae (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-22T19:58:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Mauro Roberto Biá da Silva - 2014.pdf: 1034991 bytes, checksum: 33b9d1a7520d55b9ed3fc8220c32caae (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-22T19:58:56Z (GMT). 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The LV diagnosis is dificult, mainly for patients co infected with HIV, because LV paients present atipical clinic forms and the sorology is not trustfull Objectives: The aim of this thesis is to evaluate the accuracy of Immunochromatographic rK39 tests in the diagnosis of Visceral Leishmaniasis in serum and saliva of HIV-co-infected patients Methods: VL suspected patients were treated at the Institute of Tropical Diseases Natan Portela - IDTNP, Teresina, Piauí, Brazil, from March 2011 to October 2012. In addition to the clinical examination, it was performed the IC rK39 test in saliva and blood and also the bone marrow aspiration for parasitological and the PCR-RFLP tests. As routine in the institution, VL suggestive patients were also investigated for HIV. Bone marrow samples were collected for Leishmania research in smear, culture and PCR. For the research of Leishmania spp. in bone marrow aspirate, the Panoptic stain was used (RANYLAB Pharmaceutical Chemistry). The analyses of the stained slides were done in an optical microscope with immersion objective, magnification of 1000x. To perform the bone marrow aspirate culture, the aspirate was cultivated in 3 mL of NNN medium (McNeal, Novy & Nicolle) and 500 μL Schneider medium at 26°C. The search for promastigotes. was performed every seven days in blade - cover slip in an optical microscope. 5 mL were collected from peripheral blood in Vaccutainer® tubes without any anticoagulant in order to obtain the serum. Sera were then aliquoted in cryoassay tubes and kept in a freezer at -70°C. Saliva was collected in 50 mL polypropylene tubes and, in order to increase the amount of saliva, the patients received a piece of Parafilm® for chewing. Saliva was aliquoted in cryoessay tubes and kept in a freezer at -70°C. Results: VL patients who possessed the IC rK39 test with positive serum showed 58.6% of positivity (n = 17) in saliva (SalPos), while all of the healthy donors (CT) (n = 20) were negative in serum and saliva. The amount of total and specific IgG in the serum of patients with VL was significantly higher than that in the CT group. The specific IgG of the SalPos group was greater than in VL patients with negative saliva (SalNeg), but it was not statistically xv significant. The amount of total or specific IgA was similar in all groups. The amount of specific IgG for Leishmania found in saliva of both the SalPos and SalNeg groups was higher than in the control group, but the group with SalPos saliva presented more specific IgG to Leishmania than the SalNeg group. Among the 86 VL patients, 33 had positive serology for HIV and five tested negative serology, however, they were carriers of the virus and were being treated, totalizing 37 infected individuals. The sensitivity of VL in PCR was of 100%, since this test was considered gold standard in this study. The other tests had sensitivity of 57.14% (n = 49) (bone marrow aspiration culture), 48.71% (n = 78) (marrow aspirate smear analysis), 55.81% (n = 86) and 56 25% (n = 85) for the IC rK39 tests in Orangelife or Kalazar Detect serum, respectively. In the case of using the parasitological test as the gold standard, the sensitivity of serological tests was greater than 82%. It is not clear if HIV infection is able to interfere in the serological tests yet. Conclusions: The rK39 IC tests, with the utilization of serum, have a low sensitivity when applied to patients co-infected with HIV and VL, and the use of saliva for VL diagnosis is limited. / Introdução: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma antropozoonose causada por protozoários do gênero Leishmania, especialmente Leishmania (Leishmania) infantum ou Leishmania (Leishmania) donovani. Está presente em regiões tropicais e subtropicais e é considerada uma doença negligenciada. O diagnóstico preciso da LV é geralmente difícil, principalmente em pacientes coinfectados pelo HIV, porque a LV apresenta formas clínicas atípicas e porque o diagnóstico sorológico se torna pouco confiável. Objetivo: Avaliar a acurácia de Testes Imunocromatográficos rK39 no diagnóstico da LV em soro e saliva de pacientes coinfectados com HIV. Métodos: Pacientes suspeitos de LV foram atendidos no Instituto de Doenças Tropicais Natan Portela - IDTNP, Teresina, Piauí, Brasil, no período de março de 2011 a outubro de 2012. Além do exame clínico, foi realizado o teste IC rK39 em saliva e sangue, aspiração de medula óssea para exames parasitológicos e PCR- RFLP. Como rotina na instituição, pacientes sugestivos de LV também foram investigados para HIV. Foram coletadas amostras de medula óssea para pesquisa de Leishmania em esfregaço, cultura e PCR. Para pesquisa de Leishmania spp. em aspirado de medula óssea, utilizou-se a coloração pelo Panótico (RANYLAB Química Farmacêutica). A leitura das lâminas coradas foi realizada em microscópio óptico com objetiva de imersão, aumento de 1000x. Para realização da cultura de aspirado de medula óssea, o aspirado foi cultivado em 3 mL de meio NNN (McNeal, Novy & Nicolle) e 500 μL de meio Schneider a 26ºC. A pesquisa de formas promastigotas de Leishmania spp. foi realizada a cada sete dias em lâmina – lamínula em microscópio óptico. Foram coletados 5 mL de sangue periférico em tubos Vaccutainer® sem anticoagulante para obtenção do soro. Em seguida, os soros foram aliquotados em tubos de crioensaio e mantidos em freezer a -70ºC. A saliva foi recolhida em tubos de polipropileno de 50 mL e para aumentar a quantidade de saliva, os pacientes receberam um pedaço de Parafilm® para mastigar. A saliva foi aliquotada em tubos de crioensaio e mantidas em freezer a -70ºC. Resultados: Pacientes com LV que possuiam o teste IC rK39 positivo no soro, apresentaram uma positividade de 58,6% (n = 17) na saliva (SalPos), enquanto todos os doadores saudáveis (CT) (n = 20) foram negativos no soro e na saliva. A quantidade de IgG total e específica no soro do paciente com LV foi significativamente mais elevada do que no grupo CT. A IgG xiii específica do grupo SalPos foi maior do que no grupo de pacientes com LV com saliva negativa (SalNeg), mas não foi estatisticamente significativa. A quantidade de IgA total ou específica foi semelhante em todos os grupos. A quantidade de IgG específica para Leishmania observada na saliva de ambos os grupos SalPos e SalNeg foi maior do que no grupo controle, mas o grupo com saliva SalPos apresentou mais IgG específico para Leishmania do que o grupo SalNeg. Dos 86 pacientes com LV, 33 possuíam sorologia positiva para HIV, cinco apresentaram sorologia negativa, porém, eram portadores do vírus e estavam em tratamento, totalizando 37 indivíduos infectados. A sensibilidade para LV na PCR foi de 100%, já que este foi o teste considerado ouro neste estudo. Os demais testes tiveram sensibilidade de 57,14% (n= 49) (cultura de aspirado medular), 48,71% (n = 78) (análise de esfregaço de aspirado medular), 55,81% (n = 86) e 56,25% (n = 85) para os testes IC rK39 no soro Orangelife ou Kalazar Detect respectivamente. No caso do uso do teste parasitológico como padrão ouro, a sensibilidade dos testes sorológicos foi superior a 82%. Ainda não está bem esclarecido se a infecção pelo HIV é capaz de interferir nos testes sorológicos. Conclusões: Os testes IC rK39, com utilização de soro, tem uma baixa sensibilidade quando aplicados a pacientes coinfectados com LV-HIV, e o uso da saliva para o diagnóstico da LV é limitado.

Neste trabalho são apresentados resultados experimentais do processo de filtração tangencial de uma suspensão in natura (soro de leite) aplicada na retenção de bactérias do grupo coliforme. No estudo do processo de separação utilizaram-se tubos microporosos de -alumina (Al2O3) e membranas comerciais de tamanho médio de poros no valor de 0,8 e 1,2m. Os tubos microporosos cerâmicos foram sinterizados à temperatura entre 1400 e 1450ºC, os quais foram caracterizados pela técnica de porosimetria por intrusão de mercúrio, constatando o tamanho médio de poros de 0,3 a 0,5µm. Após a sinterização, os tubos cerâmicos foram sujeitos à impregnação com citrato de prata (material bactericida). As membranas comerciais também passaram pelo mesmo processo de impregnação. Com o uso da técnica de microscopia eletrônica de varredura (MEV) foi realizada uma caracterização da morfologia e da composição dos meios microporosos. Ensaios experimentais do processo de microfiltração foram realizados com soro de leite, com o objetivo de estudar a influência de parâmetros fluidodinâmicos tais como: número de Reynolds e pressão transmembrana, além de analisar a retenção da bactéria, Escherichia coli, em regime de escoamento para Reynolds entre 2700 e 32000 e pressões transmembrana entre 1 e 4 bar. O permeado foi analisado seguindo normas da 20ª. Edição dos Métodos Padrões para Análise de Água e Esgoto, e todos os experimentos seguiram padrões de segurança para minimizar a possibilidade de contaminação do meio junto à análise do material filtrado. A manutenção fisiológica das bactérias foi controlada com os parâmetros de pH e temperatura, respectivamente mantidos entre 6 e 7,0 e de 25 - 30ºC ± 1 ºC. Nestas condições de escoamento, da solução e do meio filtrante, o processo foi considerado satisfatório com vazões transmembrana entre 10 L/(h.m2) e 120 L/(h.m2). / This work reports experimental results of the crossflow microfiltration of emulsion (whey of milk) applied in the microrganism retention of the coliform group. In the study of the separation process were used micro-porous tubes of -alumina (Al2O3) and commercial membranes of average size pores of 0,8 and 1,2m. The micro-porous tubes were sinterised with temperature between 1400 and 1450 ºC and after, were characterized by technique of porosimetry for mercury intrusion, verifing average size of pores between 0,3 and 0,5µm. After the sintering, the ceramic tubes were treated with a citrate of silver solution (bactericidal substance), and submitted to synthesis for removed the organic matters. The commercial membranes were also impregnated by this process. With the scanning eletronic microscopy made the characterization of the morfology and micro-porous structures composition. Experimental tests of the crossflow microfiltration process were performed with whey of milk, with objective to study the influence of fluid dynamics parameters (Reynolds number and flux transmembrane) and to analyse the bacteria retention in turbulent regime, having Re between 2700 and 32000, transmembrane pressure (enters 1 to 4bar) and transmembrane flux between 0,5 and 300 L/h.m2. The permeate was analysed by the 20ª. Edition of the Standard Methods for Examination of Water, and all the experiments followed standards of security to restrict the possibility of contamination of the permeated and the atmosphere. The physiology of the bacteria was controlled by parameters of pH and temperature, respectively keeped between 6 and 7,0 and of 25 - 30ºC ± 1 ºC. In the conditions of flow, of the solution and system flow, the retention was considerated satisfactory with transmembrane flux between 10 L/(h.m2) and 120L/(h.m2).