Submitted by Emanoel Martins Filho (emanoelfilho@ufba.br) on 2016-07-11T13:41:05Z No. of bitstreams: 1 Tese final_Jairo Torres_.pdf: 2470015 bytes, checksum: b0fd537776a686c0b25469acbe65ef15 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2016-07-13T01:15:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese final_Jairo Torres_.pdf: 2470015 bytes, checksum: b0fd537776a686c0b25469acbe65ef15 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T01:15:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese final_Jairo Torres_.pdf: 2470015 bytes, checksum: b0fd537776a686c0b25469acbe65ef15 (MD5) / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) / Leishmaniose Visceral é uma zoonose causada pelo protozoário Leishmania infantum e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis. O controle da doença é bastante complexo, sendo que atualmente sugere-se a necessidade de redirecionamento nas medidas de controle, sobretudo no que se refere à identificação de cães verdadeiramente transmissores e à necessidade de um refinamento no controle vetorial. Neste trabalho foi avaliada a infectividade de cães naturalmente infectados com L. infantum para a L. longipalpis, bem como a capacidade atrativa de diferentes compostos orgânicos voláteis para o mesmo vetor. A partir de testes xenodiagnósticos, foi observado que cães com maior manifestação de sinais clínicos são mais infectivos ao vetor que cães com pouco ou nenhum sinal clínico, entretanto não houve diferença na taxa de transmissibilidade quando diferentes protocolos de xenodiagnóstico foram confrontados. Sendo que, para cães infectados com L. infantum e agrupados conforme a presença de anormalidades clínicas e patológicas, a taxa de infectividade nos flebotomíneos foi significativamente menor (p=0,0098) , quando estes se alimentaram de cães com doença moderada (0,01%), comparativamente aos cães com doença severa (38,2%).Demonstrou-se também que machos e fêmeas de L. longipalpis são atraídos por compostos aldeídos e alcanos (octanal, decanal e heptadecano) identificados no pelo canino e álcoois (heptanol, octanol, octenol e nonanol) encontrados em plantas. Esses compostos químicos podem ser utilizados como iscas em armadilhas para captura dos insetos ou ainda associados com inseticidas de efeito residual. Mais estudos são necessários sobre a biologia e comportamento da L. longipalpis e sua relação com cães infectados com L. infantum, buscando melhor entender essa interface e identificar novas alternativas de controle para a leishmaniose visceral. / Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by the protozoan Leishmania infantum and transmitted by the phlebotominae sand fly Lutzomyia longipalpis. The control of the disease is quite complex, being suggested presently the necessity to redirect the control measures, especially concerning the identification of dogs truly transmitters and the necessity of a refinement of the vector control. This work was evaluated the infectivity of dogs naturally infected with L. infantum to L. longipalpis as well as the attractive ability of different volatile organic compounds to same vector. It was observed, by xenodiagnosis, that dogs with higher manifestation of clinical signs are more infective to the vector that dogs with few or no clinical signs, however there was no difference in the transmission rate when different xenodiagnosis methodologies were compared. Therefore for dogs infected with L. infantum and grouped according to presence of clinical and pathological abnormalities in the infectivity rate sandflies was significantly lower (p = 0.0098), when these were fed dogs with moderate disease (0, 01%) compared to dogs with severe disease (38.2%). It was also demonstrated that males and females of L. longipalpis are attracted by aldehyde and alkane (octanal, decanal and heptadecane) compounds identified on the canine hair and alcohols found in plants (octenol, octanol, heptanol and nonanol). These chemical compounds can be used as bait in traps to capture insects and even be associated with insecticides with residual effect. More studies are necessary about the biology and behavior of L. longipalpis and its relationship to dogs infected with L. infantum, searching to better understand this interface and identify new alternatives to control visceral leishmaniasis.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-04-18T18:08:55Z No. of bitstreams: 1 Ana Paula Almeida de Souza Validação de proteinas...pdf: 2348379 bytes, checksum: 16135e91d8da506bd6d51b00312ae853 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-18T18:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Paula Almeida de Souza Validação de proteinas...pdf: 2348379 bytes, checksum: 16135e91d8da506bd6d51b00312ae853 (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz / O controle das populações de flebotomíneos, a contenção das epidemias nas fases iniciais e a facilitação do diagnóstico precoce dos indivíduos parasitados são estratégias traçadas pela OMS para a vigilância e controle da leishmaniose. Neste contexto, os testes sorológicos utilizando tanto o sonicado de glândula salivar (SGS) dos flebotomíneos quanto o antígeno solúvel de Leishmania (SLA) são importantes ferramentas para o controle/diagnóstico das Leishmanioses. No entanto, os testes realizados a partir da utilização de antígenos obtidos de frações brutas, apesar de apresentarem alta sensibilidade, alguns destes antígenos apresentam reação cruzada com epítopos compartilhados por outros patógenos/vetores. Além disso, o preparo dos antígenos não tem adequada reprodutibilidade devido a grande dificuldade de obtenção e/ou padronização destes. No presente trabalho, objetivamos identificar biomarcadores para a vigilância e o controle das Leishmanioses, utilizando proteínas recombinantes da saliva dos flebotomíneos como biomarcadores de exposição ao vetor e proteínas recombinantes da Leishmania para obtenção de um diagnóstico sorológico mais preciso para a Leishmaniose Tegumentar humana. Numa primeira etapa, foram realizados testes imunoenzimáticos contra as proteínas recombinante da saliva do vetor L. longipalpis (rLJM11 e rLJM17) para estimar a positividade anti-saliva num pequeno número de soros de crianças de uma área endêmica para Leishmaniose Visceral. Foi observado que os soros que reconhecem o SGS do L. longipalpis também reconhecem em diferentes proporções as proteínas rLJM17 e rLJM11. Ademais, as proteína recombinantes foram capazes de detectar a soroconversão anti-saliva de soros de uma segunda área endêmica para LV, havendo aumento no reconhecimento quando utilizadas as duas proteínas recombinantes de forma combinada. Além disso, a análise das curvas ROC evidenciou o desempenho superior da combinação das proteínas rLJM17 + rLJM11. Estes dados foram confirmados com a avaliação das proteínas frente um grande painel de 1.077 amostras de soro de indivíduos de uma outra área endêmica para LV. Nesta etapa, nossos resultados indicam que as proteínas rLJM11+rLJM17 representam uma ferramenta epidemiológica promissora que pode auxiliar na implementação de medidas de controle contra a Leishmaniose Visceral. Numa segunda etapa, testes imunoenzimáticos foram realizados contra uma série de proteínas recombinantes da Leishmania (HSP70, H2A, H2B, H3, H4 e KMP11) a fim de selecionarmos proteínas antigênicas contra soros de pacientes com Leishmaniose Cutânea (LC) e Leishmaniose Mucosa (LM) e que apresentassem elevada especificidade quando testadas contra soros de indivíduos com outras patologias (doença de Chagas, Lúpus Eritematoso Sistêmico, Hanseníase e Tuberculose). Para avaliar a eficácia das proteínas recombinantes foram utilizadas curvas ROC, possibilitando a seleção de antígenos possivelmente mais eficientes que o SLA no imunodiagnóstico da Leishmaniose. As proteínas recombinantes HSP70 e H2A foram selecionadas por apresentarem elevada sensibilidade, sendo reconhecida por anticorpos dos soros de pacientes com LM e LC respectivamente. Na última etapa dos experimentos, utilizando soros de indivíduos que apresentavam outras patologias, observou-se que a reação cruzada diminui frente aos antígenos recombinantes, especialmente para a rHSP70, quando comparamos à observada para o SLA. Nossos resultados mostram a elevada antigenicidade da rHSP70, sugerindo a possibilidade de utilização desta proteína recombinante para o sorodiagnóstico da Leishmaniose Tegumentar. Neste trabalho foi possível identificar e validar o uso de proteínas recombinantes do parasito e da saliva dos flebotomíneos como biomarcadores para o sorodiagnóstico e avaliação da exposição às leishmanioses. / The population control of sand flies, containment of epidemics in the early stages and facilitating early diagnosis of infected individuals are strategies outlined by WHO for surveillance and control of Leishmaniasis. In this context, serologic tests using both the salivary gland sonicate (SGS) of sandflies as soluble Leishmania antigen (SLA) are important tools for the control / diagnosis of Leishmaniasis. However, tests based on the use of antigens derived from crude fractions, despite showing high sensitivity, some of these antigens cross-react with epitopes shared by other pathogens / vectors. Moreover, the preparation of antigens has adequate reproducibility due to difficulty in obtaining and / or standardization of these. In this study, we aimed to identify biomarkers for the surveillance and control of Leishmaniasis, through use of recombinant proteins from the saliva of sandflies as biomarkers of exposure to vector and through the use of recombinant proteins of Leishmania to get a more accurate serodiagnosis for human leishmaniasis. On the first step, ELISAs were performed against the recombinant protein from the saliva of the vector L. longipalpis (rLJM11 and rLJM17) to estimate the positive anti-saliva on a small number of sera from children from an endemic area for VL. It was observed that the sera that recognize the SGS of L. longipalpis also recognize in different proportions of rLJM17 and rLJM11 proteins. Further, each recombinant protein was able to detect anti-saliva seroconversion in sera from a second endemic area for VL, with increase in recognizing when the two recombinant proteins were used in combination. Furthermore, the ROC analysis showed the superior performance of the combination of rLJM17 + rLJM11, these data confirmed using a large panel of 1077 serum samples from individuals from another endemic area for LV. At this stage, our results indicate that proteins rLJM11 + rLJM17 represent a promising epidemiological tool that can assist in the implementation of control measures against Visceral Leishmaniasis. In a second step, ELISAs were performed against a series of recombinant proteins of Leishmania (HSP70, H2A, H2B, H3, and H4 KMP11) so antigenic proteins were selected against serum from patients with cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL) and that presented high specificity when tested against sera from patients with other diseases (Chagas disease, Systemic Lupus Erythematosus, Leprosy and Tuberculosis). To identify the effectiveness of recombinant proteins, ROC curves were used to select antigens possibly more efficient than SLA. Recombinant proteins HSP70 and H2A were selected for having high sensitivity in recognizing sera from patients with LM and LC respectively. In the last experimental stage using sera from individuals with other pathologies, it was observed that the reduced cross-reactivity against the recombinant antigen, especially for rHSP70 when compared to that observed for the SLA. Our results show the high antigenicity of rHSP70, suggesting the possibility of using this recombinant protein for serodiagnosis of Leishmaniasis. In this work, it was possible to identify and validate the use of recombinant proteins of the parasite and of the saliva of sandflies as biomarkers for serodiagnosis and assessment of exposure to Leishmaniasis.

Submitted by MARIA LUANA ALVES null (marialuana.alves@yahoo.com) on 2016-05-03T01:22:40Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao prontissima.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-04T20:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alves_ml_me_ilha.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T20:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alves_ml_me_ilha.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) Previous issue date: 2016-03-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral (LV), doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, é considerada um problema de saúde pública no Brasil. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo epidemiológico sobre a ocorrência da LV em cães e gatos e de flebotomíneos em dois abrigos de animais, durante o período de um ano, no município de Ilha Solteira, SP. Amostras de material biológico foram coletadas de 192 cães e de 197 gatos, para realização de exames sorológicos por meio do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para ambas espécies animais e da reação intradérmica de Montenegro para cães. Dos cães examinados, 17,2% (33/192) estavam sorologicamente positivos para LV pelo método ELISA, 19,8% (38/192) pela RIFI e 45,4% (15/33) pela reação intradérmica. Para cães, a concordância entre as técnicas sorológicas foi classificada de razoável a boa, mas quando comparadas à reação de Montenegro foi considerada ruim. No inquérito felino das 197 amostras, a soroprevalência foi de 32,4% (64/197) e 31,9% (63/197) no ELISA e RIFI, respectivamente. Embora a maioria dos cães e dos gatos entregue nos abrigos já estivesse infectada, seis cães e cinco gatos infectaram-se no interior desses abrigos, após algum tempo de permanência nesses recintos. Um total de 131 flebotomíneos foram capturados por meio das armadilhas luminosas, colocadas no interior dos dois abrigos durante o período de dois anos. Os fatores de riscos associados à LV foram determinados estatisticamente pela análise univariada, com valor significativo (p ≤ 0,05), onde o porte pequeno dos cães, o uso de coleira de deltametrina e o diagnóstico precoce foram variáveis determinantes que influenciaram a positividade dos animais, ou seja, as duas últimas variáveis determinaram significativamente na diminuição de casos positivos da doença nos abrigos. Concluiu-se que os animais desses abrigos estavam vulneráveis a essa parasitose por se tratarem de locais com a presença de flebotomíneos vetores e de animais positivos para LV, oferecendo risco para a disseminação da doença no município. / Visceral leishmaniasis (VL), a disease caused by Leishmania infantum and transmitted by the sand fly Lutzomyia longipalpis, is considered a public health problem in Brazil. The study aimed to carry out an epidemiological study on the occurrence of VL in dogs and cats, and sand flies during the period of one year in two animal shelters from Ilha Solteira, SP. A total of 197 and 192 biological material samples were collected, respectively from cats and dogs for serological survey by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and an indirect fluorescent antibody test (IFAT) for both species of animals, and the intradermal reaction of Montenegro (only for dogs). During the study with dogs, 17,2% (33/192) were serologically positive for LV by ELISA, 19,8% (38/192) by IFAT and 45,4% (15/33) by the intradermal method. The correlation analysis between the serological techniques was ranged from reasonable to good for dogs, but was bad when compared to the Montenegro reaction. The feline seroprevalence was 32,4% (64/197) and 31,9% (63/197) for ELISA and IFAT, respectively. Although the most of dogs and cats in shelters were infected, six dogs and five cats infected inside the shelters. A total of 131 sand flies were captured by the light traps in both shelters, during two years. The risk factors, statistically determined by univariate analysis (p ≤ 0.05), demonstrated that the small size of the dogs, the use of deltamethrin collar and the precocious diagnosis, significantly influenced the animals positivity for VL. It was concluded that these animal shelters were vulnerable to this parasitic infection because of the presence of sand flies and positive animals for LV. / FAPESP: 2014/12609-2

Tem-se atribuído ao flebotomíneo o papel de transmissor das leishmanioses. Com relação a leishmaniose tegumentar americana, 23 espécies parecem estar incriminadas na transmissão. Contudo, somente em Psychodopygus trapidoi, Ps.ylephiletor, Ps. intermedius, Ps. welcomei, Ps. flaviscutellatus, Ps. panamensis, Ps. olmecus, Lutzomyia gomezi e Pinzomyia pessoai, foi possível o isolamento da Leishmania. O caráter zoonótico desta doença denota uma situação ainda complexa devido aos escassos conhecimentos sobre os hospedeiros, vetores e epidemiologia das diversas Leishmania. A presente revisão confirma que esta função é desempenhada por dípteros da subfamília Phlebotominae. / The function of transmitting Leishmaniasis is generally attributed to phlebotomine sandfly. In relation to American Cutaneous Leishmaniasis, 23 species appears to be involved in the transmission process. However, Leishmania organisms could be isolated from only Psychodopygus trapidoi, Ps. ylephiletor, Ps. intermedius, Ps. welcomei, Ps. flaviscutellatus, Ps. panamensis, Ps. olmecus, Lutzomyia gomezi and Pintomyia pessoai. The zoonotic charater of this disease is yet a complex situation due to lack of adequate knowledge about host, vector and epidemiology of various Leishmania. The present revision confirms that the function is perfomed by diptera of sub-family, Phlebotominae.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-05T15:35:03Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fabiane V. Soares.pdf: 2842986 bytes, checksum: f65acb16091242753d91f534b2d8d8f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-05T15:35:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fabiane V. Soares.pdf: 2842986 bytes, checksum: f65acb16091242753d91f534b2d8d8f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-05T15:36:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fabiane V. Soares.pdf: 2842986 bytes, checksum: f65acb16091242753d91f534b2d8d8f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-05T15:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Fabiane V. Soares.pdf: 2842986 bytes, checksum: f65acb16091242753d91f534b2d8d8f4 (MD5) Previous issue date: 2012-04-24 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is a public health problem worldwide. It is widely distributed in Brazil and the Amazonas population is among the states most affected by the disease in the country. This study aimed to investigate the epidemiological and entomological leishmaniasis in the municipality of Tabatinga, Amazonas state. The city is situated on the left margin of the Solimões River, the border region to Colombia and Peru. We conducted a retrospective study (seven years), human cases of cutaneous leishmaniasis reported in the city, from data supplied by the Municipal Health Tabatinga and fauna survey of sand flies in August 2010 and 2011. Sandfly collections were carried out on the road from the National Institute of Colonization and Agrarian Reform - INCRA, Geodesy II, between km 4 and 8, using light traps (CDC) and aspiration in base tree with modified CDC. For statistical analysis we used the abundance index of species (ISA), standardized index of abundance of species (SISA), Index of Shannon-Wiener diversity (H ') and evenness index (J'). Have been reported 41 autochthonous cases of ACL in Tabatinga, where 61.7% were male, aged 30-39 years (24.4%) and farmers (21.9%). The predominant clinical form was cutaneous. We collected 5741 specimens representing 35 species of the genus Lutzomyia, both captured in the sylvatic and peridomiliciar environment. The most abundant species was L. umbratilis (SISA = 1.000). Of this total, 13 species are considered vectors or potential vectors of Leishmania and/or other trypanosomatids. Of the 44 positive samples, 10 were isolated / maintained in culture, eight from L. umbratilis and two L. dendrophyla. Isozyme analysis of these isolates showed similar profiles to Leishmania colombiensis and Endotrypanum sp., however, the profile of MDH locus showed greater similarity to the genus Endotrypanum. It made the report of the occurrence of two new species of sand flies in the Amazonas State (Lutzomyia howardi) and Brazil (Lutzomyia witoto). These are the first information on the phlebotomine fauna in the municipality of Tabatinga and expanding knowledge of the distribution, diversity and natural infection of trypanosomatids in the state of Amazonas / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é um problema de Saúde Pública mundial. É amplamente distribuída no Brasil e a população amazonense encontra-se entre os estados mais acometidos pela doença no país. Este estudo teve como objetivo averiguar os aspectos epidemiológicos e entomológicos da LTA no município de Tabatinga, Estado do Amazonas. O município está situado à margem esquerda do rio Solimões, região fronteiriça à Colômbia e ao Peru. Foi realizado um estudo retrospectivo (últimos sete anos) dos casos humanos de leishmaniose cutânea notificados no município, a partir dos dados fornecidos pela Secretaria Municipal de Saúde de Tabatinga e o levantamento da fauna de flebotomíneos em agosto de 2010 e 2011. As coletas de flebotomíneos foram realizadas na Estrada do Instituto Nacional de Colonização e Reforma Agrária - INCRA, Geodésica II, entre os km 4 e 8, utilizando-se armadilhas luminosas (CDC) e aspiração em base de árvore com CDC modificada. Para análise estatística foram utilizados o Índíce de Abundância de Espécies (IAE), Índíce Padronizado de Abundância de Espécies (IPAE), Índice de Diversidade Shannon-Wiener (H’) e Índice de eqüitabilidade (J’). Foram notificados 41 casos autóctones de LTA em Tabatinga, onde 61,7% eram do sexo masculino, com faixa etária de 30 a 39 anos (24,4%) e agricultores (21,9%). A forma clínica predominantemente foi cutânea. Foram coletados 5.741 espécimens, correspondente a 35 espécies do gênero Lutzomyia, capturados tanto em ambiente silvestre quanto peridomiliciar. A espécie mais abundante foi L. umbratilis (IPAE= 1.000). Deste total, 13 espécies são consideradas transmissoras ou vetores potenciais de Leishmania e/ou outros tripanosomatídeos. Das 44 amostras positivas, 10 foram isoladas/mantidas em cultivo, sendo oito de L. umbratilis e duas de L. dendrophyla. Análise isoenzimática desses isolados, demonstrou perfis similares a Leishmania colombiensis e Endotrypanum sp., no entanto, o perfil do locus MDH demonstrou maior similaridade para o gênero Endotrypanum. Foi feito o relato da ocorrência de duas novas espécies de flebótomos no Amazonas (Lutzomyia howardi) e no Brasil (Lutzomyia witoto). Os resultados deste trabalho referem-se à primeira informação sobre a fauna de flebotomíneos no município de Tabatinga, ampliando o conhecimento da distribuição, diversidade e infecção natural por tripanosomatídeos no Estado do Amazonas.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francimeire Gomes.pdf: 3198532 bytes, checksum: 51d8088daaeb9e42ea2339b8f0578ac7 (MD5) Previous issue date: 2013-06-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Apesar do conhecimento produzido sobre os diversos elementos que compõem a cadeia de transmissão da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) no Amazonas, os estudos relacionados a tríade epidemiológica (hospedeiro, vetor e agente etiológico) desta doença nos municípios da região conhecida como Alto Rio Negro (São Gabriel da Cachoeira - Santa Izabel do Rio Negro Barcelos) ainda são escassos, em particular em São Gabriel da Cachoeira (SGC), onde a região limita-se com os paises da Venezuela e Colômbia. Em decorrência disso e considerando a ausência de trabalhos relacionados ao agente etiológico e vetores da LTA que se encontram circulando no município de SGC, foi realizado levantamento da entomofauna de flebotomíneos e com isto verificou-se os potenciais transmissores de tripanossomatídeos e/ou leishmânias; além disso, avaliou-se a infecção natural nestes insetos pela técnica de dissecção e Nested-PCR, e finalmente realizou-se a caracterização bioquímica e molecular para identificação das espécies de Leishmania, isoladas de flebotomíneos e humanos. Do total de 6832 flebotomíneos coletados e distribuídos em 50 espécies foi observado um índice de diversidade considerável (H = 1,19). Destes 66% (4526/6832) correspondem a 19 espécies envolvidas na transmissão de leishmânias e/ou tripanossomatídeos de importância para a saúde pública. Foi notificado o primeiro registro de Lutzomyia conviti para o Brasil e para o Amazonas. A taxa de infecção natural por tripanossomatídeos foi em torno de 4,26%, sendo L. dendrophyla a espécie que apresentou a maior taxa de infecção, com cerca de 3,6%. Dos isolados, apenas 24 cresceram em cultivo, sendo 23 de flebotomíneo e um humano. Um total de 470 fêmeas de 13 espécies diferentes entre elas: L. ayrozai, L. dendrophyla e L. davisi foram testadas com os iniciadores descrito por Cruz et al. (2002). Os isolados não apresentaram perfis bioquímicos similares as cepas de referência de Leishmania e Endotrypanum. Dos fragmentos de DNA da região ITS sequenciados, verificou-se a formação de três grupos/espécies, sendo nove com características biológicas similares ao subgênero Viannia e dois para o subgênero Leishmania. Sugere-se a participação de L. dendrophyla na transmissão de flagelados do gênero Leishmania circulando em SGC, podendo ser a região considerada como área de risco em LTA.

As alterações ambientais antrópicas são os principais fatores de emergência ou reemergência de doenças infecciosas. A leishmaniose cutânea é uma doença que está relacionada, em caráter epidêmico, com episódios de desmatamento. No entanto, o caráter endêmico da doença ocorre quando o homem se encontra próximo de áreas florestais já colonizadas. O Pontal do Paranapanema é uma área onde ocorreu intenso desmatamento e a mata nativa remanescente está representada pelo Parque Estadual Morro do Diabo e alguns fragmentos florestais. Casos de leishmaniose cutânea em humanos são comuns na região, principalmente em áreas marginais de floresta. O objetivo deste trabalho foi realizar um levantamento da fauna flebotomínica e de mamíferos silvestres potencialmente reservatórios no Parque Estadual Morro do Diabo e alguns fragmentos da região, buscando avaliar se o tamanho do fragmento tem influência na ocorrência das espécies e na freqüência de Leishmania sp, através da técnica da PCR. Foram capturadas 26 espécies de flebótomos e sete espécies de mamíferos silvestres. O gênero Brumptomyia foi predominante em quase todas as áreas florestais, com exceção da borda do Parque, que apresentou dominância de Nyssomyia neivai. Os resultados das análises da PCR demonstraram quatro espécies de mamíferos portadores de Leishmania sp, Akodon cursor, Dasyprocta azarae, Didelphis albiventris e Oligoryzomys sp. As amostras de pools de flebotomíneos apresentaram resultados negativos. Não foi observada diferença significativa na freqüência de mamíferos infectados em relação ao tamanho da área florestal. / Anthropogenic environmental changes are the main factors of emergence or reemergence of infectious diseases. Cutaneous leishmaniasis is a disease that is related, in an epidemic form, with episodes of deforestation. However, the endemicity of the disease occurs when the man is close to forest areas already colonized. The Pontal of Paranapanema is an area where massive deforestation has occurred and the remaining native forest is represented by the Morro do Diabo State Park and a few forest fragments. Cases of cutaneous leishmaniasis in humans are common in the region, especially in marginal areas of forest. The aim of this study was a survey of sand flies and mammals potentially reservoirs, in Morro do Diabo State Park and some fragments of the region, seeking to assess whether the fragment size has an influence on species occurrence and frequency of Leishmania, through the PCR technique. We captured 26 species of sandflies and seven species of wild mammals. The genus Brumptomyia was prevalent in almost all forest areas, except the edge of the park, which showed dominance of Nyssomyia neivai. The results of PCR analysis revealed four species of mammals suffering from Leishmania, Akodon cursor, Dasyprocta azarae, Didelphis albiventris and Oligoryzomys sp. Samples of sandfly pools tested negative. There was no significant difference in the frequency of infected mammals in relation to the size of the forest.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-12-16T15:29:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2828448 bytes, checksum: 513da0881e21261964c7b5d328b7b603 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-16T15:29:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2828448 bytes, checksum: 513da0881e21261964c7b5d328b7b603 (MD5) Previous issue date: 2016-07-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) são importantes vetores das leishmanioses, doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, distribuídos em dois grandes gêneros de importância médica: Phlebotomus no Velho Mundo e Lutzomyia no Novo Mundo. Após a ingestão de sangue o bolo alimentar é envolto por uma matriz quitino-proteica, chamada matriz peritrófica (MP). Em uma infecção por Leishmania, o intestino do vetor tem papel crucial, pois, para se estabelecer, o protozoário deve escapar do espaço endoperitrófico e se fixar na parede do intestino para evitar sua eliminação durante a excreção. Nesse sentido, a MP funciona como barreira ao desenvolvimento do parasito, sendo um componente importante na competência vetorial de flebotomíneos. Neste trabalho foi estudado o efeito da alimentação com células sanguíneas reconstituídas com anti-soros específicos para duas proteínas associadas à MP, a quitinase PpChit1 e a peritrofina PpPer2, na morfologia da MP de fêmeas de Phebotomus papatasi. A MP foi avaliada por microscopia de luz (ML) e microscopia eletrônica de transmissão (MET) (24, 42–46, 48 e 72 h após a alimentação), microscopia de força atômica (MFA) (30 h após a alimentação) e microscopia confocal (WGA-FITC) (72 horas após a alimentação). Nesta mesma espécie, também foi estudado a inibição da expressão de PpChit1 pela técnica de RNA de interferência (RNAi) após a injeção de dsPpChit1 (24, 48, 72 e 96 h após a alimentação sanguínea). Adicionalmente, o desenvolvimento pós embrionário do intestino médio foi investigado nas seguintes fases/estágios: larvas de 4o instar com três dias (L4-3) e com cinco dias (L4-5) após a ecdise, pré-pupa, pupa 24 horas e 72 horas após início da metamorfose e adulto recém-emergido, nos flebotomíneos Lutzomyia longipalpis e P. papatasi. Amostras de intestinos médios dissecados de cada fase foram avaliados por microscopias de luz (ML), eletrônica de transmissão (MET) e fluorescência. Verificamos que a alimentação de fêmeas de P. papatasi com antisoros específicos para PpChit1 e PpPer1, levou a um aumento na espessura da MP 72 h após a alimentação, bem como um aumento na amplitude da rugosidade na superfície da MP 30 h após a alimentação. A detecção de quitina com WGA-FITC, identificou que 72 h após a alimentação com anti-PpChit1, o conteúdo de quitina associada a MP no intestino médio do inseto era maior que nos insetos alimentados com soro naïve. A alimentação com antisoros específicos contra as proteínas associadas a MP (PpChit1 e PpPer2) afetam a cinética de maturação e degradação da MP, evidenciando o papel dessas proteínas na estruturação da MP de P. papatasi. A injeção de dsPpChit1 levou a uma reducão nos níveis de transcritos em todos os horários analisados, sendo esses resultados o primeiro passo para contribuir futuramente para o entendimento do papel de PpChit1 na MP P. papatasi. As mudanças morfológicas no intestino médio das duas espécies tiveram início no quarto instar larval, no entanto, em P. papatasi o processo degenerativo das células epiteliais iniciou um pouco antes em L4-3 enquanto que em L. longipalpis em L4-5. Durante a metamorfose, células regerativas foram vistas na base do epitélio, nas duas espécies. Além disso, as marcações positivas para a histona fosforilada H3, em ambas, sugerem que as células regenerativas se dividem durante o processo de remodelamento do intestino médio em flebotomíneos. A histólise do epitélio intestinal larval se dá possivelmente por autofagia, pela presença de numerosos vacúolos autofágicos, bem como por marcações positivas para a proteína LC3, entretanto, a detecção de caspase-3 sugere que a apoptose possa acontecer durante o processo de troca do epitélio larval pelo do adulto. Finalmente, o estudo do remodelamento do intestino médio em P. papatasi e L. longipalpis mostrou de forma inédita que o processo é conservado nas duas espécies, se diferenciando apenas no tempo do início do processo degenerativo entre as duas espécies. Os conhecimentos relacionados as proteínas da MP, bem como ao desenvolvimento pós-embrionário do intestino médio em flebotomíneos, o qual tem papel fundamental na transmissão de Leishmania, são importantes para uma melhor compreensão do inseto vetor. / Sand flies (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae) are vectors of Leishmaniasis, a disease caused by parasitic protozoa of the genus Leishmania. They are distributed in two large medical importance genus: Phlebotomus from the Old World, and Lutzomyia from the New World. Leishmania suprapilarian life cycle in the vector midgut begins when insect females intake infected blood with amastigotes forms from the vertebrate host. After the blood meal, the food bolus is surrounded by a chitin-protein layer, called peritrophic matrix (PM). Sand fly midgut plays a crucial role during a Leishmania infection. In order to survive and develop, Leishmania parasites must escape from endoperitrophic space and attach themselves in the intestinal epithelium, preventing excretion with the fecal pellets. The PM can act as a barrier to parasite development, working as a relevant component in the vector competence. This study investigated the effects of reconstituted blood cells feeding with specific antisera targeting two PM associated proteins, chitinase PpChit1 and peritrophin PpPer2 in the PM formation. The PM was studied under light (LM) and transmission electron (TEM) microscopies (24, 42-46 , 48 and 72 h after blood meal), under atomic force microscopy (AFM) (30 h after blood meal) and under confocal microscopy (WGA–FITC) (72 hours after blood meal) in Phlebotomus papatasi. PpChit1 knockdown was performed in P. papatasi by means RNA interference technique (RNAi) after dsPpChit1 injection (24, 48, 72 and 96 h after blood meal). Additionally, the post-embryonic development of the midgut was investigated in the following life-stages: 4th instar larvae three days (L4-3) and five days (L4-5) after molting, pré-pupae, pupae 24 hours and 72 hours, and newly emerged adult in Lutzomyia longipalpis and P. papatasi. Midgut samples from each stage were dissected and assessed by LM, TEM and immunofluorescence. P. papatasi females feeding with anti-PpChit1 and anti-PpPer1 had the PM thickness increased at 72 h after blood meal, as well as a PM roughnes’s amplitude increase at 30 hr after feeding. WGA-FITC staining indicates that PM chitin content on insect midgut was higher in treated individuals than those treated with naïve serum. The feeding of P. papatasi females with red blood cells reconstituted with antisera targeting PM associated proteins (PpChit1 and PpPer2) affected the PM maturation and degradation, indicating the role of these proteins on PM structure. Injection of dsPpChit1 led to significant decrease in corresponding mRNA levels. These results are the first step on contribution to understand PpChit1 role in P. papatasi PM. The midgut metamorphosis in of the two species begins in the 4th instar, however, in P. papatasi, epithelial cells degeneration started shortly, in L4-3, while in L. longipalpis it began in L4-5. Larval gut epithelium degeneration was intensified in pré-pupa in both species by the presence of numerous autophagic vacuoles. During metamorphosis, midgut remodeling occurs by differentiation of stem or regenerative cells to replace larval digestive cells. Regenerative cells were seen at the epithelium basal region in both species. Furthermore, the detection of phosphohistone H3- positive cells suggested that the stem cells can divide during the remodeling process of the midgut. Stem cells in proliferation and differentiation were seen forming the new digestive epithelium in the pupae. Larval midgut replacement possibly occurs by autophagy by the presence of numerous autophagic vacuoles, as well as by the detection of LC3-positive cells. Additionally, cells positive for caspase-3 suggested that the apoptosis may occur during the elimination of larval epithelium. Finally, the study of midgut remodeling in P. papatasi and L. longipalpis was showed for the first time, and this process is conserved in these species, differing only in the time of th beginning of the degenerative processof the midgut epithelium. The study of MP formation as well as the post-embryonic development of the midgut of sandflies represent important steps for a better vector biology understanding.

Tripanossomas de répteis há muito são descritos em lagartos, tartarugas, crocodilos e cobras de todos os continentes. A classificação destes tripanossomas tem sido feita de acordo com a morfologia de formas sanguíneas e hospedeiro de origem. No entanto, estes critérios tradicionais não são suficientes para descrição de espécies, gerando varias sinonímias. Vinte e sete isolados foram mantidos em culturas contínuas. Estas são as primeiras culturas de tripanossomas de lagartos da América do Sul, e as unicas culturas de tripanossomas de jacarés e cobras disponíveis no mundo. As analises filogenéticas de tripanossomas de répteis realizadas usando seqüências dos genes SSUrRNA e gGAPDH corroboram a polifília de tripanossomas de répteis. O clado que inclui isolados provenientes de cobras e lagartos sugere uma associação com hospedeiros Squamata, sugerindo que flebotomíneos tenham um papel importante na transmissão destes tripanossomas. Os dados morfológicos e moleculares resultantes deste estudo permitiram a descrição de 7 novas espécies de tripanossomas. / Reptile trypanosomes have been described in lizards, tortoises, crocodiles and snakes of all continents. Reliable classification of reptile trypanosomes requires analysis based on traditional parameters and molecular phylogeny. However, these criteria are not enough for species description, generating synonymies Twenty-seven isolates were established in continuous cultures: 9 from lizards, 8 from snakes and 10 from caimans. Cultures of these isolates displayed distinct morphology and growth behavior, representing the first cultures of lizard trypanosomes from S. America and the only available cultures from caimans and snakes. The phylogenetic analysis of the reptile trypanosome using SSU rRNA and gGAPDH gene sequences corroborated the polyphyly of reptile trypanosomes. The clade harboring snake and lizard trypanosomes suggested an association with Squamata hosts, with evidence that sand flies play an important role in the transmission of these trypanosomes. Morphological and molecular data from this study permitted the description of 7 new trypanosome species.

Em algumas regiões, como nos municípios de Corumbá e Ladário, no Estado de Mato Grosso do Sul, existem evidências ecológicas e epidemiológicas de que Lutzomyia (Lutzomyia) cruzi (Mangabeira, 1938) seja a principal responsável pela transmissão do protozoário Leishmania (Leishmania) infantum Nicolle, 1908 (ou subespécie de L. (L.) infantum chagasi Cunha & Chagas, 1937 segundo alguns autores), agente etiológico da leishmaniose visceral (LV). A ausência de Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva, 1912), principal vetor do parasito, reforçam esta hipótese. Este estudo teve por objetivo avaliar os parâmetros e estimar a capacidade vetorial de Lu. cruzi para L. (L.) infantum e Leishmania (Leishmania) amazonensis Lainson & Shaw, 1972. Para este último, apenas foram avaliados os parâmetros, sem a estimativa numérica da capacidade vetorial. A avaliação da capacidade vetorial foi realizada a partir de experimentos laboratoriais (infecção experimental) e de campo (atratividade aos flebotomíneos). Por intermédio da infecção experimental de Lu. cruzi pelo parasito, foi possível estimar a expectativa de sobrevida diária de fêmeas infectadas (estimativa vertical e laboratorial), avaliar o período de incubação extrínseco do parasita e obter duração do ciclo gonotrófico. Para a avaliação da competência vetorial do inseto, foram realizadas tentativas de transmissão experimental e natural de Leishmania, a partir de fêmeas provenientes de colônia cujos indivíduos foram alimentados durante o xenodiagnóstico e de fêmeas selvagens capturadas em campo, respectivamente. A distribuição sazonal de Lu. cruzi foi avaliada por meio da instalação semanal de armadilhas luminosas no peridomicílio de cinco residências na área urbana do Município de Corumbá. Variáveis meteorológicas obtidas junto ao Centro de Monitoramento do Tempo, do Clima e dos Recursos Hídricos de Mato Grosso do Sul, índices radiométricos calculado a partir de imagens de resolução espacial (GeoEye) e o percentual de cobertural vegetal foram utilizados neste estudo. Os resultados obtidos permitiram estimar a capacidade vetorial de Lu. cruzi para L. (L.) infantum, que foi de 0,24, ou seja, espera-se que a população de fêmeas da área produzam 0,24 novas infecções viii por dia de exposição de uma infecção. A competência vetorial de Lu. cruzi para L. (L.) infantum e L. (L.) amazonensis, via picada, foi demonstrada por meio de transmissão natural e experimental dos parasitos, respectivamente. Também foi identificada a infecção natural de Lu. cruzi por L. (L.) amazonensis. Com relação à distribuição mensal, embora não tenha sido observada a presença de associação entre essas espécies e as variáveis ambientais de vegetação e clima, foi possível observar picos elevados populacionais na estação chuvosa e picos menores na estação seca. O padrão da distribuição sazonal das espécies de flebotomíneos demonstrado neste estudo foi determinado basicamente pelos espécimes de Lu. cruzi capturados, uma vez que eles representam 93,94 por cento . A variação mensal demonstrou que a espécie Lu. cruzi tem grande plasticidade, tendo sido observada em todos os meses de coleta. / In some regions such as in the municipalities of Corumbá and Ladário in Mato Grosso do Sul state, there are ecological and epidemiological evidence that Lutzomyia (Lutzomyia) cruzi (Mangabeira, 1938) is the vector of Leishmania (Leishmania) infantum Nicolle, 1908 (or subspecies of L. (L.) infantum chagasi Cunha & Chagas, 1937 according to some authors), the etiologic agent of visceral leishmaniasis (VL). The absence of Lutzomyia (Lutzomyia) longipalpis (Lutz & Neiva, 1912), the main vector of the parasite, supports this hypothesis. This study aimed to evaluate the parameters and estimate the vectorial capacity of Lu. cruzi for L. (L.) infantum and Leishmania (Leishmania) amazonensis Lainson & Shaw, 1972. For the latter, only parameters was evaluated without numerical estimation of the vectorial capacity. The evaluation of the vectorial capacity was carried out from laboratory experiments (experimental infection) and field (attractiveness to sandflies). Through experimental infection by the parasite, it was possible to estimate the expected daily survival of infected females (vertical and laboratory estimate), evaluate the extrinsic incubation period of the parasite and get the length of gonotrophic cycle. To evaluate the insect vector competence, attempts have been made of experimental and natural transmission of Leishmania from females from colony whose subjects were fed for xenodiagnosis and wild females captured in the field, respectively. Monthly and seasonal distribution of Lu. cruzi was evaluated by weekly installation of light traps in the peridomicile of five residences in the urban area of the Municipality of Corumbá. Meteorological variables obtained from the Weather Monitoring Center, Climate and Water of Mato Grosso do Sul Resources, radiometric indices calculated from spatial resolution images (GeoEye) and the percentage of plant cobertural were used in this study. Results allowed estimating the vectorial capacity of Lu. cruzi for L. (L.) infantum, which was 0.24, i.e., it is expected that the female population in the region produce 0.24 new infections per day of exposure to an infection. Vector competence of Lu. cruzi for L. (L.) infantum and L. (L.) amazonensis by biting, was demonstrated by natural and experimental transmission of both parasites, respectively. Natural infection of Lu. cruzi by L. (L.) amazonensis was identified. Regarding the monthly x distribution, there was no significant association between of sandflies and the environmental and climate variables. It was observed high peaks population in the rainy season and lower peaks in the dry season. The pattern of seasonal distribution of species of sand flies demonstrated in this study was determined primarily by Lu. cruzi specimens, since this species represent 93.94 per cent of the total captured. The monthly change showed that Lu. cruzi species has great plasticity and has been observed in all months of collection.