Introdução. O Litoral Norte Paulista, até a década de 1980, era hipoendêmico para transmissão de leishmaniose tegumentar americana (LTA). A partir da década de 1990, esta parasitose adquiriu caráter epidêmico em todos os municípios: Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião e Ubatuba. Objetivo. Realizar análise descritiva da ocorrência dos casos de LTA autóctone no Litoral Norte Paulista, entre 1993 e 2005 e registrar as espécies de flebotomíneos na área de transmissão. Métodos. Foram analisados dados secundários obtidos das fichas de casos de LTA autóctones, notificados ao serviço de vigilância epidemiológica da Secretaria Estadual de Saúde, segundo distribuição espacial, temporal, atributos pessoais e dados das fichas de captura entomológica da Superintendência de Controle de Endemias. Resultados. A LTA apresentou distribuição espacial heterogênea, com casos isolados e agrupados. Houve sincronismo na manifestação do agravo, com ciclicidade, em intervalo de seis a oito anos. Todas as faixas etárias e sexo foram acometidos, sem evidência de risco com ocupação específica. A fauna flebotomínea foi composta por dezesseis espécies, com predomínio de Ny. intermedia (>80,4%), no peri e intra domicílio. Conclusões. A LTA apresenta estreita relação com a floresta e a transmissão ocorre no peri e no intradomicílio, tanto no ambiente periurbano como no interior da mata. Neste caso, a transmissão estaria mais relacionada com os focos enzoóticos. / Introduction. The northern coast of the State of São Paulo was, up to the decade of the 1980´s, hypoendemic for the transmission of American cutaneous leishmaniasis (ACL). However, as from the decade of the 1990´s this disease acquired epidemic characteristic in all the municipalities: Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião and Ubatuba. Objective. To undertake a descriptive study of the occurrences of the autochthonous cases of ACL in the four municipalities of the northern coast of the state of São Paulo, between 1993 and 2005, and to record the phlebotomine species in the area of transmission. Methods. Secondary data of spatial and temporal distribution and personal characteristics were analyzed from the records of autochthonous ACL cases notified to the epidemiological surveillance service of the State Health Secretariat. Information on phlebotomines were obtained from data of entomological captures undertaken by the Superintendência de Controle de Endemias. Results. The ACL presented heterogeneous spatial distribution with both isolated and clustered cases. There was synchronicity in the occurrence of the disease in all the municipalities, with cyclicality at intervals of from six to eight years. All age groups and both sexes were affected, without any particular profession. The phebotomine fauna consisted of sixteen species, with Ny. intermedia predominating (>80.4%) both in the peri and intra domicíle. Conclusions. ACL presented a close relation with the forest and its transmission occurs in the peri and intra-domicile, in the periurban environment and within the forest. In this latter case the transmission is more closely related to the enzootic foci.

Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-09-21T20:58:24Z No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:07:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:08:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T18:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) Previous issue date: 2015-11-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Poly(vinyl alcohol) - PVA is a high hydrophilic semicrystalline polymer which has excellent properties such as good chemical resistance and high biodegradability and biocompatibility. Due to its semi-crystalline nature, crystalline domains, under controlled conditions, may act as physical crosslinking points, while maintaining the integrity of the structure under swelling. This feature makes PVA hydrogels promising for the development of drug, or other bioactive substances, delivery systems. Another interesting feature of this kind of hydrogels is the ability to form high stable network from crystalline domains formed through freezing and thawing cycles. This method shows the formation of crystallites which act as physical crosslinks while maintaining the insolubility of the material in water. Recently many studies show the use of nanostructures to improve mechanics properties and diffusional behavior of small molecules. Paromomycin is an aminoglycoside antibiotic widely used for cutaneous leishmaniasis therapeutics in Brazil. In the last years some studies have revealed that the patience adhesion to the treatments of cutaneous leishmaniasis with ointments form is low. Therefore hydrogels are an interesting alternative to the ointment forms. As the main objective of this work was the preparation and characterization of poly(vinyl alcohol) hydrogels containing sepiolite nanoparticles for the preliminary feasibility of using as controlled release system for paromomycin, hydrogels were prepared by cryogelation process. This ensures the formation of the hydrogel, as long as the crystalline domains formed during the PVA cycles act as crosslinking points, allowing the membranes water transport measurements of the drug in the presence of sepiolite. In this investigation membranes were characterized by differential calorimetry, thermogravimetry and X-ray diffraction. Furthermore polymer retention, swelling in simulated body fluid, hemocompatibility and drug delivery were studied to establish structure-properties correlations. The results show that cryogelation cycles significantly alter the swelling of the membranes; interactions polymer-nanoparticle increases the rigidity of the amorphous phase. Comparing to pure PVA hydrogels, in nanocomposites hydrogels the hemolysis decreased. Increasing the percentage of nanoparticles the membrane crystallinity decreases. The samples degradation profile, the thermal stability and drug delivery profile are not modified by the amount of nanoparticles incorporated. / Poli(álcool vinílico) - PVA é um polímero semicristalino altamente hidrofílico que possui excelentes propriedades, como boa resistência química e elevada biodegradabilidade e biocompatibilidade. Devido à sua natureza semicristalina, os domínios cristalinos, sob condições controladas de crescimento, podem atuar como pontos de reticulação físicos, mantendo a integridade da estrutura sob inchamento. Esta característica torna hidrogéis de PVA bastante promissores em relação ao desenvolvimento de sistemas de carreamento de fármacos e outras substâncias bioativas. Soluções aquosas de PVA podem formar hidrogéis com boas propriedades mecânicas através de ciclos de resfriamento e aquecimento. Este método resulta na formação de cristalitos que atuam como reticulações físicas, mantendo a insolubilidade do material em água. Recentemente muitos estudos mostram o uso de nanoestruturas para melhorar as propriedades mecânicas e o comportamento difusional de pequenas moléculas. Paromomicina é um antibiótico aminoglicosídeo muito utilizado para o tratamento de Leishmaniose cutânea (LC) no Brasil. Nos últimos anos, estudos mostraram que a adesão de pacientes ao tratamento de LC com pomadas é baixa. Portanto hidrogéis são uma interessante alternativa para este tratamento. Como o principal objetivo deste trabalho foi o preparo e a caracterização de hidrogéis poliméricos nanocompósitos de PVA contendo nanopartículas de SEP para a viabilidade preliminar do uso como sistema de liberação controlada para paromomicina, os hidrogéis foram preparados através de um processo de criogelificação. Este procedimento garante a formação do hidrogel, pois os domínios cristalinos do PVA formados durante os ciclos atuam como pontos de reticulação da membrana, permitindo a avaliação das medidas de transporte de água e do fármaco das membranas na presença de SEP. Neste estudo as membranas foram caracterizadas através de calorimetria diferencial, termogravimetria e difração de raios-X. Ainda foram feitos estudos de retenção polimérica, inchamento em plasma simulado, hemocompatibilidade, carreamento e liberação de fármaco. Os resultados mostram que os ciclos de criogelificação alteram significativamente o inchamento das membranas; as interações polímero-nanopartícula aumentam a rigidez da fase amorfa. O grau de hemólise diminui nos hidrogéis nanocompósitos quando comparados com os hidrogéis puros. O aumento da porcentagem de nanopartícula diminui a cristalinidade da membrana. O perfil de degradação, a estabilidade térmica das amostras e a liberação do fármaco não são modificados pela quantidade de nanopartícula incorporada.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-08T13:15:26Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5193646 bytes, checksum: 62212dade111b2d7405b6107b2b692aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T13:15:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5193646 bytes, checksum: 62212dade111b2d7405b6107b2b692aa (MD5) Previous issue date: 2016-06-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania, transmitted by sand flies insects. As recommended treatments are toxic and not very satisfactory, it is necessary to find new drugs more effective against the parasite and that have low toxicity to the host. In this context, this study aimed to synthesize, structurally elucidate and evaluate the anti-Leishmania potential novel hybrids thiophenics-acridines front of promastigotes of Leishmania (L.) amazonensis. In this study, we evaluated 23 compounds, of which 14 were derived hybrids. The synthesis of compounds had a yield from 47.7% (ACT06) to 88% (ACT05) to ACT series, and ACS series from 44.8% (ACS05) to 94.9% (ACS02). All compounds of ACS series showed antipromastigote activity (IC50 values from 3.9 to 30.9 μg/mL). Differently, hybrids of ACT series no showed antiparasitic activity. None of the derivatives showed cytotoxicity to erythrocytes of human origin, as compared to reference drug. The compounds with improved activity, ACS01 and ACS02 (IC50 3.9 and 4.6 μg/mL; SI 205.1 and 173.9 respectively) were selected to proceed with the investigation. ACS01 and ACS02 were effective against strains resistant trivalent antimony in the same way as in sensitive strains. Furthermore, the activity of ACS01is not associated with parasite DNA fragmentation, but ACS01 and ACS02 showed a binding constant of 104 M-1, demonstrating their DNA intercalation capacity. Thus, these results suggest that the derivatives of the ACS series are possible drug candidates for the therapy of leishmaniasis. / As leishmanioses são um conjunto de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, transmitidas por insetos flebotomíneos. Como os tratamentos recomendados são tóxicos e pouco satisfatórios, faz-se necessário encontrar novas drogas, mais eficazes contra o parasito e que tenham baixa toxicidade para o hospedeiro. Neste contexto, este trabalho buscou sintetizar, elucidar estruturalmente, e avaliar o potencial anti-Leishmania de novos derivados híbridos tiofênicos-acridínicos frente às formas promastigotas de Leishmania (L.) amazonensis. Neste estudo, foram avaliados 23 compostos, dos quais 14 derivados são híbridos. A síntese dos compostos apresentou rendimento de 47,7% (ACT06) a 88% (ACT05) para série ACT, e na ACS de 44,8% (ACS05) a 94,9% (ACS02). Todos os compostos da série ACS apresentaram atividade antipromastigota (IC50 de 3,9 a 30,9 μg/mL). De modo diferente, os derivados da série ACT não apresentaram atividade antiparasitária. Nenhum dos derivados apresentou citotoxicidade para hemácias de origem humana, comparados às drogas de referência. Os compostos com melhor atividade, ACS01 e ACS02 (IC50 = 3,9 e 4,6 μg/mL; IS = 205,1 e 173,9 respectivamente) foram selecionados para prosseguir com a investigação. ACS01 e ACS02 foram eficazes contra cepas resistentes ao antimonial trivalente da mesma forma que nas culturas sensíveis. Além do mais, a atividade do ACS01 não está associada à fragmentação do DNA do parasito, porém ACS01 e ACS02 apresentaram uma constante de ligação de 104 M-1, demonstrando sua capacidade de intercalação ao DNA. Assim, estes resultados sugerem que os derivados da série ACS são possíveis candidatos a fármacos para a terapêutica das leishmanioses.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-08T13:35:45Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1367389 bytes, checksum: 70492033540e8808b1cc0349fd4d1a1a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T13:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1367389 bytes, checksum: 70492033540e8808b1cc0349fd4d1a1a (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a group of diseases caused by protozoa of the genus Leishmania, transmitted by insects phlebotomines. The recommended treatments for leishmaniasis are very toxic and unsatisfactory. Therefore, it is urgent to find new anti-Leishmania drugs that are more effective against the parasite and exhibit low toxicity to the host. Thus, this study sought to synthesize, characterize and evaluate the anti-Leishmania potential novel 2- amino-thiophenes. Thirty-two 2-amino thiophenes indole derivatives were studied by our research group. The synthesis of compounds showed a yield ranging from 31.7% (TN7-6) to 96.4% (TN6-4). In addition, the fusion ranged between of 150 ° C (TN5) and 295ºC (TN6-4). All compounds showed antipromastigota activity obtained with different IC50 values, ranging from the 2.07 - 1067 μg/ml. None of tiofenicos indole derivatives showed cytotoxicity to erythrocytes of human origin, compared to the referenced drugs. Among compounds with anti-Leishmania activity, TN8-7 substance was selected to proceed with the studies due to its high selectivity index (SI> 193.2). It was observed that L. amazonensis strains resistant to trivalent antimony continued with the same levels of sensitivity to TN8-7 presented by crops sensitive to antimony. Additionally, it was observed that the anti-Leishmania TN8-7 activity is associated with DNA fragmentation of promastigotes of the parasite. Therefore, the results of this study suggest that indole 2-amino thiophenes derivatives are promising molecules and possible drug candidates for the therapy of leishmaniasis. / As leishmanioses são um conjunto de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, transmitida por insetos flebotomíneos. Os tratamentos recomendados para as leishmanioses são muito tóxicos e pouco satisfatórios, portanto se faz urgente a necessidade de encontrar novas drogas anti-Leishmania que sejam mais eficazes contra o parasito e que apresentem baixa toxicidade para o hospedeiro. Logo, este trabalho buscou sintetizar e caracterizar e avaliar o potencial anti-Leishmania de novos derivados 2-amino-tiofenos. Foram estudados 32 derivados 2-amino tiofenos indólicos por nosso grupo de pesquisa. A síntese dos compostos apresentou um rendimento variando de 31,7% (TN7-6) a 96,4% (TN6-4). Além disso, a faixa de fusão variou entre 150ºC (TN5) e 295ºC (TN6-4). Todos os compostos apresentaram atividade antipromastigota, sendo obtido diferentes valores de IC50, variando de 2,07 a 1067 μg/ml. Nenhum dos derivados tiofênicos indólicos apresentou citotoxicidade para hemácias de origem humana, comparados as drogas de referência. Dentre os compostos com atividade anti-Leishmania, a substância TN8-7 foi selecionada para prosseguir com os estudos, devido ao seu alto índice de seletividade (IS > 193,2). Foi observado que cepas de L. amazonensis resistentes ao antimônio trivalente continuaram com os mesmos níveis de sensibilidade ao TN8-7 apresentado pelas culturas sensíveis ao antimônio. Adicionalmente foi observado que atividade anti-Leishmania do TN8-7 está associada à fragmentação do DNA das formas promastigotas do parasito. Portanto, os resultados do presente estudo sugerem que os derivados 2-amino tiofenos indólicos são moléculas promissoras e possíveis candidatos a fármacos para a terapêutica das leishmanioses.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 584551 bytes, checksum: e1d595c9a9fc8674d1102eca696ef69b (MD5) Previous issue date: 2007-07-31 / In Brazil, the American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is highly endemic, and has been a serious public health problem. The country currently confronts the spreading and urbanization, in big and middle-sized cities, of the ACL, which is primally zoonotic and related to forest environments. The present work valued the epidemiologic aspects of ACL in Ilhéus, and the possible risk factors associated to its appearance in the urban area of this city, with previous case reports notified as autochthones of this area. A revision of all investigation cards of ACL cases in Ilhéus, registered by the SVE/SMS/Ilhéus from January 2000 to December 2006 was performed, analyzing the follows information about the referred cases: age, sex, clinical forms, diagnostic date and illness evolution. A study on phlebotomine sand fly occurrence in the urban area of Ilhéus was carried out from March to August 2006, using CDC light traps. The canine infection was investigated through indirect fluorescent antibody test (IFAT) and BIOGENE enzyme- linked immunosorbent antibody test (ELISA) for calazar canine. Additionally, with the purpose of identifying risk factors for cutaneous leishmaniasis transmission in the urban area of Ilhéus, a matched case-control study was carried out involving the human population. The information about the human cases, sand fly fauna and dogs was analyzed with frequency tables. The human cases were also analyzed, with correlation studies between the probable infection date and climate data. The possible risk factors were determinated with X² MacNemar calculation, Odds Ration (OR) and 95% Confidence Intervals (CI). Analysis of investigation records showed that ACL affects mainly adult subjects, with cutaneous lesions as the principal clinical form. The seasonality analysis showed the probable infection period to be quarter September-November (Spring). No statistically significant correlation was observed (p< 0.05) between case number and climate data (rain fall, humidity and temperature). On the other hands, periods with high rainfall and humidity showed a smaller number of cases. Lu. Cortelezzii was the one species collected in urban area. Three seropositive dogs were identified by the immunofluorescence assay. The case-control study showed that the age group 13 to 44 years (p= 0.0061; OR=0.13; 95% CI= 0.076-0.22), living close to woodlands, was associated with decreased risk; the habit of going to the rural area of Ilhéus showed to be a risk factor to ACL (p= 0.003; OR= 5.5; 95%; CI= 1.75- 17.29). With these results, we can conclude that ACL in Ilhéus is not urban, since no typical vector species were found, and the human cases were associated to the habit of going to the rural area. Additionally, the case profiles, adult males, showed that the subjects exposed demonstrate non- compatible characteristics with a wider-ranging exposure, as should be expected to happen if the illness transmission cycle took place in Ilhéus urban area. We also note the importance of maintaining a strict registry of human cases, with maximum rigidity, to guarantee specific diagnostic for ACL, making possible epidemiological analysis more rustworthy. / No Brasil, a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é altamente endêmica e constitui sério problema de saúde pública. Primariamente zoonótica, relacionada a ambientes silvestres, atualmente o país enfrenta a expansão e urbanização da LTA em cidades de médio e grande porte. O presente trabalho avaliou os aspectos epidemiológicos da LTA no município de Ilhéus-BA e os possíveis fatores de risco associados ao seu aparecimento na área urbana da cidade, com registros recentes de casos notificados como autóctones dessa área. Foi realizada revisão de todas as fichas de investigação dos casos de LTA procedentes do município de Ilhéus, notificados pelo SVE/SMS/Ilhéus durante o período de janeiro de 2000 a dezembro de 2006, obtendo-se as seguintes informações referentes aos casos: idade, sexo, forma clínica, data de diagnóstico e evolução da doença. Também foi realizado estudo sobre a fauna flebotomínea na área urbana, durante os meses de março a agosto de 2006, utilizando armadilhas luminosas tipo CDC (Center of Disease Control), além da coleta transversal de amostras de soro sangüíneo, para pesquisa de anticorpos (RIFI e ELISA) e dados referentes a cães domiciliados na área urbana e rural. Adicionalmente, foi realizado estudo caso-controle pareado envolvendo a população humana residente na área urbana para identificação de fatores de risco associados. Os dados relativos aos casos humanos, fauna flebotomínea e os cães foram analisados a partir da construção de tabelas de freqüência; os casos huamnos também foram analisados a partir de estudos de correlação entre a provável data de infecção e dados climatológicos (pluviosidade, umidade e temperatura). Os possíveis fatores de risco foram determinados a partir do cálculo do &#967;2 de MacNemar, da razão de chances e respectivo intervalo com 95% de confiança. De acordo com a análise das fichas de investigação, a LTA acomete, principalmente, indivíduos adultos, em idade economicamente ativa, com a forma clínica cutânea como predominante. A análise da sazonalidade demonstrou ser o trimestre setembro-novembro (primavera) o provável período de infecção. Não foram identificadas correlações significativas (p < 0,05) entre o número de casos e dados climatológicos, entretanto, os períodos de pluviosidade e umidade relativa altas, concentraram o menor número de casos. As coletas entomológicas indicam ser a espécie Lu. cortelezzii o único componente da fauna flebotomínea na área urbana. Dos 381 cães pesquisados, apresentaram títulos positivos para Leishmania spp., através da RIFI, apenas três animais. O estudo caso-controle revelou que a faixa etária 13 a 44 anos (p = 0,0061; RC = 0,13; IC 95% = 0,076- 0,22) e morar próximo à mata (p = 0,005; RC = 0,09; IC 95% = 0,05- 0,16) constituíram fatores de proteção para a doença e o hábito de freqüentar a área rural do município, fator de risco para LTA (p = 0,003; RC = 5,5; IC 95% = 1,75- 17,29). A partir dos resultados encontrados podemos concluir que, aparentemente, a LTA no município de Ilhéus, não tenha passado por processo de urbanização, uma vez que não foram identificados vetores típicos do agente e os casos humanos terem estado associados ao fato do paciente freqüentar a área rural. Adicionalmente, o perfil dos casos, homens em idade economicamente ativa, revela que os indivíduos expostos apresentam características não compatíveis com uma exposição mais abrangente, como se esperaria acontecer se a doença tivesse seu ciclo de transmissão instalado na área urbana. Assinalamos também a importância de que a notificação dos casos humanos seja realizada com o máximo rigor, de forma a garantir o diagnóstico específico para a LTA, possibilitando análises epidemiológicas mais fidedignas.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 3485858 bytes, checksum: bf6831f74d42e04741add88b4781e3d1 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a complex of infectious and parasitic diseases endemic in 88 countries, that constitute a serious public health problem. Several species of the genus Leishmania are the causative agents of disease, among them the species L. (V.) braziliensis associated with different clinical manifestations of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). In the present study were obtained nine isolates of Leishmania sp. from cases of ACL. Seven isolates (87%) from patients residing in the municipalities of Pilões, and one (13%) resident in João Pessoa city, both Paraiba state regions. All nine strains were identified as L. (V.) braziliensis by specific PCR. Analyses of molecular characterization by RAPD-PCR showed that these isolates shared 62.63% revealing genotypic differences among them. However, the isolated AF and JSL, both from disseminated lesions had the highest percentage of shared bands among the isolates. Another molecular technique used was a SSR-PCR using the K7 primer, and it was also able to show polymorphism between isolates. In PCR-RLFP analysis of ITS1, different profiles were found among isolates, MRSS, JMTS, AF, JCTS, JRL showed the same band profile and the isolates JSL, JCNS, MFTS and JAS have each had, profiles different band. The analysis of hsp70 gene region by PCR-RLFP reveled that the isolates JSL, AF, JCTS, JRL, MFTS showed the same band profile and the isolates, MRSS, JMTS, JCNS and JAS had each one, different profiles band. In addition were also observed phenotypic differences between these isolates, since at an given time of cultivation, all showed different behavior, and demonstrate differences in sensitivity to drugs used in the treatment of leishmaniasis. Therefore, these studies show that the isolates of L. (V.) braziliensis obtained in the state of Paraiba demosntraram a significant genetic polymorphism, revealing a high level of intraspecific variation. / As leishmanioses são um complexo de doenças infecto-parasitárias endêmicas em 88 países que constituem um grave problema de saúde pública. Diversas espécies do gênero Leishmania são os agentes causadores da doença, dentre elas a espécie L. (V.) braziliensis associada a diferentes quadros clínicos da Leishmaniose Tegumentar Americana. No presente trabalho foram obtidos nove isolados de Leishmania sp. oriundos de LTA, sendo sete isolados (87%) oriundos de pacientes residentes no município de Pilões, um (13%) da cidade de João Pessoa, ambas regiões, do estado da Paraíba. Todos os nove isolados foram identificados como sendo da espécie L. (V.) braziliensis através de PCR específica. As análises de caracterização molecular pela técnica de RAPD-PCR mostraram que esses isolados compartilharam 62,63% revelando diferenças genotípicas entre elas. Contudo, os isolados AF e JSL, ambos provenientes de lesões disseminadas, tiveram o maior percentual de bandas compartilhadas dentre os isolados. Outra técnica molecular utilizada foi o SSR-PCR com o iniciador K7 que também foi capaz de demontrar polimorfismo entre os isolados. Nas análises de PCR-RLFP das regiões ITS1, foram encontradas perfis diferentes entre os isolados, onde MRSS, JMTS, AF, JCTS, JRL apresentaram o mesmo perfil de bandas e os isolados JSL, JCNS, MFTS e JAS tiveram, cada um, perfis de bandas distintos. Na análise de PCR-RLFP da região do gene hsp70, JSL, AF, JCTS, JRL, MFTS apresentaram o mesmo perfil de bandas e os isolados, MRSS, JMTS, JCNS e JAS perfis de bandas distintos. Adicionalmente foram também observadas diferenças fenotípicas entre estes isolados, visto que em dado momento de cultivo, todos apresentaram comportamento diferenciado, além de demonstrarem diferenças quanto à sensibilidade às drogas utilizadas na terapêutica das leishmanioses. Portanto estes estudos revelam que os isolados de L. (V.) braziliensis obtidos no estado da Paraíba demonstraram um significativo polimorfismo genético, revelando um alto nível de variação intraespecífica.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoaoFRN_DISSERT.pdf: 3516278 bytes, checksum: 9fe0338a2547517c2f45d91b7860116c (MD5) Previous issue date: 2010-12-03 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is a disease caused by Leishmania infantum chagasi (L.i.chagasi). The clinical evolution post-infection depends on the vertebrate host immune response, which is genetically mediated. This study aimed to evaluate the immune response of individuals living in endemic area for VL in the state of the Rio Grande do Norte, considering individuals with VL under treatment (n = 9), recovered VL <1 year post treatment (n = 10), > 10 years posttreatment (n = 9), uninfected individuals living in endemic areas (n = 7), individuals that lost DTH response (n=6) and asymptomatic individuals for VL (n=9). Peripheral blood cells were evaluated in the presence and absence of soluble Leishmania antigens (SLA) and ex vivo, to determine activation, presence of regulatory cells and memory cells. The Leishmania parasitemia and anti-Leishmania antibodies were determined respectively by qPCR and ELISA. Cells from individuals with VL under treatment showed less cell activation after stimulation with SLA for the markers CD4/CD69, CD8/CD69 and CD8/CD25 compared with VL post treatment treatment (p <0.001). Apparently uninfected individuals have a higher cell activation than symptomatic VL (p <0.001), with the exception of CD8/CD25 marker (p = 0.6662). On the other hand, in the ex-vivo group, significant differences were observed for CD4/CD69, CD8/CD69 and CD8/CD25 between the 4 groups due to increased cell activation present in cells of individuals symptomatic LV (p <0.001). VL cells under treatment, ex vivo, have a lower percentage of memory cells (CD4/CD45RO and CD8/CD45RO) than individuals VL post-treatment or control group (p = <0.01). Likewise, individuals with symptomatic VL have fewer regulatory cells when stimulated by SLA [CD4/CD25 (p = 0.0022) and CD4/FOXP3 (p = 0.0016)] and in the ex-vivo group (p = 0.0017). Finally, DNA isolated from recovered VL contained Leishmania DNA, supporting the hypothesis of non-sterile clinical cure for Leishmania infection. Recovered VL, even 10 years after treatment have high levels of memory cells, which may be due to the presence of stimulation, either by reexposure to Leishmania or non-sterile cure / A Leishmaniose visceral (LV) nas Am?ricas ? uma doen?a causada pela esp?cie Leishmania infantum chagasi (L.i.chagasi). A forma cl?nica evolutiva p?s-infec??o depende da resposta imune do hospedeiro vertebrado, que ? geneticamente mediada. Este estudo teve como objetivo avaliar a resposta imune de indiv?duos residentes em ?rea end?mica para LV no estado do Rio Grande do Norte, considerando indiv?duos com LV em tratamento (n=9), indiv?duos curados de LV < 1 ano (n=10) e > 10 anos p?s-tratamento (n=9), indiv?duos residentes em ?reas end?micas (n=7) aparentemente n?o infectados, indiv?duos que perderam a resposta DTH (n=6) e indiv?duos assintom?ticos para LV (n=9). C?lulas de sangue perif?rico foram avaliadas em presen?a e na aus?ncia de ant?genos sol?veis de Leishmania (SLA) e ex-vivo, para determina??o da ativa??o, da presen?a de c?lulas regulat?rias e de c?lulas de mem?ria. A parasitemia e anticorpo anti-Leishmania foram determinadas, respectivamente, por qPCR e ELISA. C?lulas oriundas de indiv?duos com LV em tratamento apresentaram menor ativa??o celular p?s-est?mulo com SLA para os marcadores CD4/CD69, CD8/CD69 e para CD8/CD25 quando comparado com LV p?s-tratamento (p<0,001). Indiv?duos aparentemente n?o infectados apresentam maior ativa??o celular que LV sintom?tico (p<0.001), com exce??o do marcador CD8/CD25 (p=0,6662). Por outro lado, na condi??o ex-vivo, diferen?as significativas foram observadas para CD4/CD69, CD8/CD69 e CD8/CD25 devido a uma maior ativa??o celular presente em c?lulas de indiv?duos LV sintom?ticos (p<0,001). Indiv?duos LV sintom?ticos, ex vivo, apresentam um menor percentual de c?lulas de mem?ria (CD4/CD45RO CD8/CD45RO) do que indiv?duos com LV p?stratamento ou controles (p=<0.01). Da mesma forma, indiv?duos com LV sintom?ticos apresentam uma menor quantidade de c?lulas regulat?rias quando estimuladas por SLA [CD4/CD25 (p= 0,0022) e CD4/FOXP3 (p= 0,0016)] e na condi??o ex-vivo (p=0.0017). Finalmente, pacientes com LV clinicamente recuperados permaneceram com parasitemia, determinado por qPCR, dando suporte ? hip?tese de cura cl?nica n?o est?ril para infec??o por Leishmania. Pacientes com LV recuperado, mesmo 10 anos p?s-tratamento mant?m n?veis elevados de c?lulas de mem?ria, que pode ser devido ? presen?a de ant?genos de Leishmania, seja devido ? re-exposi??o ? Leishmania ou por uma prov?vel cura n?o est?ril

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BrunaLLM_TESE.pdf: 3672151 bytes, checksum: 3a91fdec3101fa0f0ebdb652c2960bda (MD5) Previous issue date: 2013-12-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Nutritional status is an important determinant to the response against Leishmania infection, although few studies have characterized the molecular basis for the association found between malnutrition and the disease. Vitamin A supplementation has long been used in developing countries to prevent mortality by diarrheal and respiratory diseases, but there are no studies on the role of vitamin A in Leishmania infection, although we and others have found vitamin A deficiency in visceral Leishmaniasis (VL). Regulatory T cells are induced in vitro by vitamin A metabolites and are considered important cells implicated T CD4+ cell suppression in human VL. This work aimed to examine the correlation of nutritional status and the effect of vitamin A in the response against Leishmania infantum infection. A total of 179 children were studied: 31 had active VL, 33 VL history, 44 were DTH+ and 71 were DTH- and had negative antibody to Leishmania (DTH-/Ac-). Peripheral blood monuclear cells were isolated in a subgroup of 10 active VL and 16 DTH-/Ac- children and cultivated for 20h under 5 different conditions: 1) Medium, 2) Soluble promastigote L. infantum antigens (SLA), 3) All-trans retinoic acid (ATRA), 4) SLA + ATRA and 5) Concanavalin A. T CD4+CD25highFoxp3+, T CD4+CD25-Foxp3- and CD14+ monocytes were stained and studied by flow cytometry for IL-10, TGF-&#946; and IL-17 production. Nutritional status was compromised in VL children, which presented lower BMI/Age and retinol concentrations when compared to healthy controls. We found a negative correlation between nutritional status (measured by BMI/Age and serum retinol) and anti-Leishmania antibodies and acute phase proteins. There was no correlation between nutritional status and parasite load. ATRA presented a dual effect in Treg cells and monocytes: In healthy children (DTH-/Ac-), it induced a regulatory response, increasing IL-10 and TGF-&#946; production; in VL children it modulated the immune response, preventing increased IL-10 production after SLA stimulation. Furthermore, we found a positive correlation between BMI/Age and IL-17 production and negative correlation between serum retinol and IL-10 and TGF-&#946; production in T CD4+CD25highFoxp3+ cells after SLA stimulus. Our results show a potential dual role of vitamin A in the immune system: improvement of regulatory profile during homeostasis and down modulation of IL-10 in Treg cells and monocytes during symptomatic VL. Therefore, the use of vitamin A concomitant to VL therapy might improve recovery from disease status in Leishmania infantum infection / O estado nutricional ? importante determinante da resposta ? infec??o por Leishmania. No entanto, s?o poucos os trabalhos que caracterizem as bases moleculares das associa??es encontradas entre a desnutri??o e a doen?a. A suplementa??o de vitamina A ? utilizada em pa?ses em desenvolvimento para reduzir a mortalidade por diarreia e doen?as respirat?rias. Apesar disso, n?o existem estudos sobre o papel da vitamina A na infec??o por Leishmania apesar de nosso grupo e outros terem demonstrando a defici?ncia de vitamina A durante a leishmaniose visceral (LV). As c?lulas T regulat?rias s?o consideradas c?lulas supressoras durante a LV e s?o induzidas por metab?litos de vitamina A. Este trabalho teve como objetivo verificar a correla??o do estado nutricional e o efeito da vitamina A na resposta frente ? infec??o por Leishmania infantum. Foram estudadas 179 crian?as, sendo 31 casos de LV ativa, 33 com hist?ria pregressa de LV, 44 DTH+ e 71 DTH- e Anticorpo anti-Leishmania negativo (DTH-/Ac-). C?lulas mononucleadas de sangue perif?rico foram isoladas em um subgrupo de 10 crian?as com LV e 16 DTH-/Ac-, sendo cultivadas por 20h sob as seguintes condi??es: 1) Meio, 2) Ant?genos sol?veis de promastigotas de L. infantum (SLA), 3) ?cido all-trans retin?ico (ATRA), 4) SLA + ATRA e 5) Concanavalina A. As c?lulas T CD4+CD25highFoxp3+, T CD4+CD25-Foxp3- e mon?citos CD14+ foram marcadas e estudadas por citometria de fluxo quanto ? produ??o de IL-10, TGF-&#946; e IL-17. O estado nutricional apresentou-se comprometido nas crian?as com LV, que apresentaram menor IMC/idade e baixas concentra??es de retinol s?rico quando comparadas aos controles sadios. Observou-se correla??o negativa entre o estado nutricional (medido por ?ndice de Massa Corporal/Idade e retinol s?rico) e anticorpos anti-Leishmania e prote?nas de fase aguda. N?o foi encontrada correla??o entre o estado nutricional e a carga parasit?ria. O ATRA apresentou efeito distinto nas c?lulas Treg e mon?citos: Em crian?as saud?veis (DTH-/Ac-), induziu resposta regulat?ria, com aumento na produ??o de IL-10 e TGF-&#946;; e, em crian?as com LV, modulou a resposta imune, diminuindo a produ??o de IL-10 ap?s o est?mulo com SLA. Foi encontrada correla??o positiva entre o IMC/Idade e a produ??o de IL-17 e correla??o negativa entre o retinol s?rico e a produ??o de IL-10 e TGF-&#946; nas c?luas T CD4+CD25highFoxp3+ ap?s est?mulo com SLA. Os dados deste estudo permitem concluir que o estado nutricional comprometido durante a LV ? correlacionado com a resposta imune e inflamat?ria frente ? Leishmania. Al?m disso, possivelmente, a vitamina A apresenta duplo efeito na resposta imune: em crian?as sadias, promove resposta regulat?ria; durante a LV, reduz a produ??o de IL-10 em c?lulas Treg e mon?citos. Dessa forma, o uso de vitamina A durante a LV pode promover a recupera??o de pacientes em tratamento para a doen?a

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DaniellaRAM.pdf: 825529 bytes, checksum: f26b539b2cb49d4dbd7f0f77cd978d11 (MD5) Previous issue date: 2006-12-05 / Control of human visceral leishmaniasis in endemic regions is hampered in part by the lack of knowledge with respect of the role reservoirs and vector. In addition, there is not yet an understanding of how non-symptomatic subclinical infection might influence the maintenance of infection in a particular locality. Of worrisome is the limited accessibility to medical care in places with emerging drug resistance. There is still no available protective vaccine either for humans or other reservoirs. Leishmania species are protozoa that express multiple antigens which are recognized by the vertebrate immune system. Since there is not one immunodominant epitope recognized by most hosts, strategies must be developed to optimize selection of antigens for prevention and immunodiagnosis. For this reason, we generated a cDNA library from the intracellular amastigote form of Leishmania chagasi, the causative agent of South American visceral leishmaniasis. We employed a two-step expression screen of the library to systematically identify T and T-dependent B cell antigens. The first step was aimed at identifying the largest possible number of clones producing an epitope-containing polypeptide with a pool of sera from Brazilians with documented visceral leishmaniasis. After removal of clones encoding heat shock proteins, positive clones underwent a second step screen for their ability to cause proliferation and IFN-&#947; responses of T cells from immune mice. Six unique clones were selected from the second screen for further analysis. The clones encoded part of the coding sequence of glutamine synthetase, transitional endoplasmic reticulum ATPase, elongation factor 1&#947;, kinesin K-39, repetitive protein A2, and a hypothetical conserved protein. Humans naturally infected with L. chagasi mounted both cellular and antibody responses to these protein Preparations containing multiple antigens may be optimal for immunodiagnosis and protective vaccines against Leishmania / O controle da Leishmaniose Visceral em regi?es end?micas ? em parte dificultado pela falta de conhecimento em rela??o ao papel dos reservat?rios e vetores, n?o havendo ainda vacina dispon?vel. Leishmania s.p s?o protozo?rios que expressam m?ltiplos ant?genos reconhecidos pelo sistema imune dos hospedeiros. Devido ? aus?ncia de um ep?topo imunodominante reconhecido pela maioria dos hospedeiros, estrat?gias para a identifica??o e sele??o de novos ant?genos para a preven??o e imunodiagn?stico. Nossa estrat?gia foi construir uma biblioteca de cDNA da forma amastigota da L. chagasi, com subseq?ente realizad??o de dupla varredura da biblioteca para sistematicamente identificar ant?genos espec?ficos de c?lulas T e B. A primeira etapa teve como objetivo a identifica??o do maior n?mero de clones produtores de pept?deos atrav?s da utiliza??o de um pool de soro de indiv?duos com Leishmaniose Visceral. Os clones codificadores de prote?nas de choque t?rmico foram removidos e os clones restantes foram submetidos ? segunda etapa da varredura, que consistiu na avali??o capacidade destes ant?genos em induzir estimula??o e prolifera??a de linf?citos T de camundongos resistentes ? infec??o por L. chagasi. Seis clones foram selecionados ap?s a segunda varredura. Os clones codificaram parte da seq??ncia da glutamina sintetase, ATPase do ret?culo endoplasm?tico, Fator de alongamento 1 &#947;, Kinesina K-39 prote?na repetitiva A2, e prote?na hipot?tica conservada. Indiv?duos naturalmente infectados com L. chagasi desenvolveram respostas imunes celular e humoral frente a essas prote?nas. Formula??es contendo m?ltiplos ant?genos podem servir como excelentes m?todos para imunodiagn?stico e vacina??o

Submitted by BALTAZAR CASAGRANDE (flebalta2012@gmail.com) on 2018-05-15T16:52:24Z No. of bitstreams: 1 Tese_CASAGRANDE.pdf: 22435121 bytes, checksum: 3cd539a9c94901965801f673dffefd8a (MD5) / Approved for entry into archive by ALESSANDRA KUBA OSHIRO ASSUNÇÃO (alessandra@fct.unesp.br) on 2018-05-15T17:43:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casagrande_b_dr_prud.pdf: 22435121 bytes, checksum: 3cd539a9c94901965801f673dffefd8a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-15T17:43:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casagrande_b_dr_prud.pdf: 22435121 bytes, checksum: 3cd539a9c94901965801f673dffefd8a (MD5) Previous issue date: 2018-03-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Esta tese apresenta uma contribuição para o entendimento da produção social da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Particularmente, a tese aborda questões concernentes à trajetória das doenças vetoriais, como as leishmanioses, que possam estar sendo transformadas com a supressão de áreas florestadas pela expansão da monocultura da cana-de-açúcar, neste caso com destaque para o problema da LTA, que tem como vetor os flebótomos. Objetivo: O objetivo geral foi estabelecer relações entre a diversidade, a distribuição espacial de flebotomíneos, a produção do Espaço Geográfico e a saúde da população, caracterizando o Complexo Patogênico da Leishmaniose Tegumentar Americana. Metodologia: Sendo assim, utilizamos os conhecimentos geográficos de Biogeografia, revisão de literatura, tanto sistemática quanto narrativa, levantamentos de campo e trabalhos laboratoriais e análises estatísticas. Resultados: Foram realizados no total 30 levantamentos de campo e capturados 2171 exemplares de flebotomíneos distribuídos entre os Fragmentos da Estação Ecológica do Mico-Leão-Preto, Água Sumida, 72 exemplares com sete espécies diferentes e Ponte Branca, 52 exemplares com 11 espécies diferentes e no estreito de baixo do Parque Estadual do Morro do Diabo, 2044 exemplares com 13 espécies diferentes. Em todos dos casos apresenta maior diversidade em áreas preservadas e menor diversidade em áreas colonizadas. Foram mapeados diferentes meios geográficos coexistindo a área em questão, sendo eles áreas florestais (meio natural), passando por área rural com assentamentos de reforma agrária e fazendas de pecuária extensiva (meio técnico), além de fazendas de agricultura canavieira (meio técnico científico-informacional). Discussões: É evidente que a atividade do cultivo da lavoura canavieira modificou o perfil epidemiológico da LTA na região do Pontal do Paranapanema entendido a partir de um Complexo Patogênico. Isso porque a implantação da atividade canavieira dá novos rumos ao modelo de cultivo no campo e isso interfere na dinâmica ecológica desta doença afetando a população local. Assim, esse estudo resultou em uma nova caracterização da área de estudo, espacialização dos vetores na região, no estabelecimento do Complexo Patogênico da LTA e na delimitação de um campo de pesquisa denominado de “Biogeografia da Saúde”. Conclusão: Esses resultados contribuem para a evolução dos conhecimentos geográficos, formação dos alunos de geografia e também para o fortalecimento da vigilância em saúde. / Introduction: This thesis presents a contribution to the understanding of the social production of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). Particularly, the thesis deals with questions concerning the trajectory of vector diseases, such as leishmaniasis, that may be being transformed by the suppression of forested areas by the expansion of sugarcane monoculture, in this case highlighting the ACL problem, which has as vector the sandflies. Objective: The general objective was to establish relationships between diversity, spatial distribution of sandflies, production of Geographic Space and population health, characterizing the Pathogenic Complex of American Cutaneous Leishmaniasis. Methodology: Thus, we use the geographical knowledge of Biogeography, literature review, both systematic and narrative, field surveys and laboratory work and statistical analysis. Results: A total of 30 field surveys were carried out and 2171 specimens of sandflies were distributed among the fragments of the Mico-Leão-Preto Ecological Station, Água Sumida, 72 specimens with seven different species and Ponte Branca, 52 specimens with 11 different species and in the lower strait of Morro do Diabo State Park, 2044 specimens with 13 different species. In all cases it presents greater diversity in preserved areas and less diversity in colonized areas. Different geographic environments were coexisting with the area in question, being forest areas (natural environment), passing through rural areas with agrarian reform settlements and extensive cattle ranches (technical environment), as well as sugar cane agriculture farms (scientific-informational). Discussion: It is evident that the sugarcane cultivation activity modified the epidemiological profile of ACL in the region of Pontal do Paranapanema, understood from a Pathogenic Complex. This is because the implantation of the sugar cane activity gives new directions to the model of cultivation in the field and this interferes in the ecological dynamics of this disease affecting the local population. Thus, this study resulted in a new characterization of the study area, spatialization of the vectors in the region, in the establishment of the ACL Pathogenic Complex and in the delimitation of a research field called "Biogeography of Health". Conclusion: These results contribute to the evolution of geographic knowledge, the training of geography students and also to the strengthening of health surveillance. / FAPESP: 2013/25920-5