The aim of this research was to evaluate the hypothesis of Uberlândia presenting LVC in two areas that represent a potential risk of arrival and dissemination of LV in this city, as well as clarifying the role of the kennel APA (ANINAL PROTECTION AGENCY) and the homes localized at the Tenda dos Morenos and Buracão for the epidemiology of LV in the city. For that reason, a sectioned study was done in these places. At APA, a sampling activity was done with 85 dogs, which were photographed, identified, evaluated for visual inspection and submitted to blood drawings with filter paper at the tip of the ear for the making of RIFI ou ELISA at the LACEN of FUNED. In 25 of these animals it was also collected blood drawings samples, through puncture in the vessels of thoracic/pelvic members, for the realization of PCR of blood at the Molecular Biology Laboratory at UFU. The fifty five dogs in the homes of the Tenda dos Morenos and Buracão region were identified, evaluated by visual inspection and submitted to blood drawing sampling at the tip of the ear with filter paper and were sent to LACEN of FUNED from Belo Horizonte for the realization of the ELISA and RIFI tests. The animals reactive to some of these tests were re-tested with ELISA or RIFI and also with PCR of blood. In spite of the clinical findings which were very compatible to the LVC at the APA, no positive animals were found for the illness in the investigated regions. Thus, the moment regarding attention to health issues for LV in these regions is of primordial prevention and primary prevention, in order to avoid the formation of the bond parasite-reservatory-vetor. Therefore, the conjugation of this serum tests along with molecular tests has shown to be of great importance so the canine monitoring can be satisfactory. / Este estudo teve por objetivo testar a hipótese de Uberlândia apresentar LVC em duas áreas de risco potencial para chegada e disseminação da LV, bem como esclarecer o papel do canil da APA e das residências localizadas na Tenda dos Morenos e Buracão para a epidemiologia da LV na cidade. Para isso, foi realizado um estudo seccional nesses locais perfazendo um total de 140 cães. Na APA foi realizada uma amostragem de 85 cães, os quais foram fotografados, identificados, avaliados por inspeção visual e submetidos a coletas de sangue com papel filtro na ponta da orelha, para realização de RIFI ou ELISA no LACEN na FUNED de Belo Horizonte. Em 25 desses animais também foram coletadas amostras de sangue, por punção nas veias dos membros torácicos/pelvinos, para realização de PCR de sangue no Laboratório de Biologia Molecular da UFU. Os 55 cães domiciliados na região da Tenda dos Morenos e Buracão foram identificados, avaliados por inspeção visual, submetidos à coleta de amostras de sangue na ponta da orelha com papel filtro e também enviados a FUNED, para realização dos testes ELISA e RIFI. Os animais reativos a algum destes testes foram re-testados com ELISA ou RIFI na FUNED e também com PCR de sangue na UFU. Apesar dos achados clínicos bastante compatíveis com a LVC na APA, não foram encontrados animais positivos para essa enfermidade nas regiões investigadas. Então, o momento de atenção à saúde para LV nestas regiões é de prevenção primordial e prevenção primária, a fim de evitar a formação do elo parasita-reservatório-vetor. Diante disso, a conjugação de testes sorológicos com testes moleculares se mostrou de suma importância para que o monitoramento canino seja eficaz. / Mestre em Ciências Veterinárias

Leishmaniasis is a infect parasitic disease complex with a zoonotic character and vetorial trasmition caused by different morfologic species similar to flagellated protozoa of the Leishmania genus. They represent a serious problem of public health with cases registered on almost all the continents. Despite the existence of drugs with effective action on the parasitics, nearly two million new cases of distints clinic form happen every year and 350 million people are under risk of contracting the disease. As the interest of the pharmaceutical industry in this problem is small because of the reduced potential of lucrative return, once the reached population has a low income, the leishmaniasis is part of the group of the neglected diseases. In addition, it is believed that the environmental transformations and the man's intense migratory process to peripheries of the cities under inadequate conditions of habitation and improvement caused changes in the transmission way of the disease, causing the expansion of the endemic areas and the existence of new focus in urban areas of municipalities of medium and big load. In Uberlândia studies demonstrated that the construction of hydroelectric power station produced ecological modifications and they interfered in the biological communities, like the prevalence of the vectors in the peridomicile area. The general objective of this work was the research around the transmission of leishmaniasis in Uberlândia - MG and had as specific objectives the study of the sandfly fauna, the environmental conditions related to the presence of the Lutzomyia longipalpis, to describe the profile seroepidemiologic of the canine population and to relate the occurrence of the visceral leishmaniase in Uberlândia with the environmental alterations. In the period of february of 2005 to december of 2007 systematized monthly collections were accomplished, using luminous traps models CDC and, in the peridomicile areas of residences closed to the woods, the trap of the type hut of Shannon was used, in 17 places to Araguaia river s margins near of Miranda's hydroelectric power station and Amador Aguiar Naves I and II. They were collected 1.695 phlebotomine sand flies specimens belonging to 16 species. The species of importance epidemic more prevalent were Lutzomyia whitmani (31%) and L. longipalpis (13,3%), reaching up to 44,3% of the total collected specimens. Inquiries canine were accomplished in animals of both sexes and the same or superior age to three months, residents in places of the study area where specimens of L. longipalpis were captured. During the study period 747 dogs were tested and no one showed acting result for the disease. Of the ecological factors analyzed in the study area, the presence of animal shelters in the peridomicile areas of the analyzed residences showed strong influence in the domiciliation of the L. longipalpis and they point for the domiciliation of L. whitmani. Our studies demonstrated although the occurrence of the first case human of human visceral leishmaniase in Uberlândia didn't proceed to the cases of canine leishmaniase. Now the leishmaniase already constitutes a problem of public health in the municipality and the epidemic study is decisive factor for the effective planning of strategies for the control of the disease. / As leishmanioses são um complexo de doenças infecto-parasitárias, de caráter zoonótico e transmissão vetorial, causadas por diferentes espécies morfologicamente semelhantes de protozoários flagelados do gênero Leishmania. Constituem um importante problema de saúde pública, com registro de casos em quase todos os continentes. Embora existam drogas com ação eficaz sobre os parasitos, aproximadamente dois milhões de novos casos de diferentes formas clínicas ocorrem a cada ano e 350 milhões de pessoas se encontram sob risco de contrair a enfermidade. Como o interesse da indústria farmacêutica nesse tema é pequeno, pelo reduzido potencial de retorno lucrativo, uma vez que a população atingida é de baixa renda, as leishmanioses fazem parte do grupo das doenças negligenciadas. Em adição, acredita-se que as transformações ambientais e o intenso processo migratório do homem para as periferias das cidades sob condições inadequadas de habitação e saneamento provocaram mudanças no padrão de transmissão da doença, acarretando a expansão das áreas endêmicas e o aparecimento de novos focos em áreas urbanas de municípios de médio e grande porte. Em Uberlândia, estudos demonstraram que a construção de usinas hidrelétricas produziram modificações ecológicas e interferiram nas comunidades biológicas, dentre estas, a prevalência dos vetores nos peridomicílios. O objetivo geral deste trabalho foi estudar a transmissão de Leishmanioses em Uberlândia MG e teve como objetivos específicos estudar a fauna flebotomínica, estudar as condições ambientais relacionadas à presença do Lutzomyia longipalpis, descrever o perfil soroepidemiológico da população canina e relacionar a ocorrência da leishmaniose visceral em Uberlândia com as alterações ambientais. No período de fevereiro de 2005 a dezembro de 2007 coletas mensais sistematizadas foram realizadas, utilizando armadilhas luminosas modelo CDC e, no peridomicílio de residências localizadas muito próximas da mata, foi utilizada a armadilha do tipo barraca de Shannon, em 17 localidades às margens do Rio Araguari, próximas às UHE de Miranda e Amador Aguiar Naves I e II. Foram coletados 1.695 espécimes de flebotomíneos pertencentes a 16 espécies. As espécies de importância epidemiológica mais prevalentes foram Lutzomyia whitmani (31%) e L. longipalpis (13,3%), perfazendo juntas 44,3% do total de espécimes coletados. Foram realizados inquéritos caninos censitários em animais de ambos os sexos e idade igual ou superior a três meses, residentes em localidades da área de estudo onde foram capturados exemplares de L. longipalpis. Durante o período de estudo foram testados 747 cães e nenhum animal apresentou resultado reagente para a doença. Dos fatores ecológicos analisados na área de estudo, a presença de abrigos de animais no peridomicílio das residências analisadas mostrou forte influência na domiciliação do L. longipalpis e apontam para a domiciliação de L. whitmani. Nossos estudos demonstraram ainda que a ocorrência do primeiro caso humano de leishmaniose visceral humana em Uberlândia não precedeu ao de casos de leishmaniose canina. Atualmente a leishmaniose já constitui um problema de saúde pública no município e, o estudo epidemiológico é fator decisivo para o planejamento efetivo de estratégias para o controle da doença. / Doutor em Geografia

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A biodiversidade brasileira abrange plantas de importância medicinal que podem ser utilizadas na formulação de novos fármacos. Contudo, tem sido reduzida em velocidade alarmante, em função de diferentes ações antrópicas. A cultura de tecidos vegetais propicia a conservação e uso do germoplasma permitindo a obtenção de substâncias de importância medicinal. As leishmanioses são consideradas um problema de saúde pública mundial sendo a espécie Leishmania braziliensis de maior importância epidemiológica no Brasil. Recentemente tem-se registrado aumento da resistência à linha de tratamento usual. Do mesmo modo, o uso indiscriminado de antibióticos levou ao aumento de bactérias multirresistentes, que representam sério risco de infecção. A espécie Annona mucosa (Jacq.) possui substâncias, como acetogeninas e alcaloides, que apresentam atividades antiparasitária e antimicrobiana. Nesse sentido, o objetivo do trabalho foi avaliar o potencial leishmanicida e antibacteriano de extratos de A. mucosa de material produzido in vitro e in vivo. Foi proposto um protocolo de germinação in vitro, ainda não reportada para a espécie, com vistas à obtenção de plântulas axênicas. Em meio WPM foram cultivados explantes hipocotiledonares e foliares em meio MS, suplementados com PIC e diferentes concentrações de KIN, BAP ou TDZ. Os calos obtidos foram cultivados em meio líquido de mesma composição para a produção de suspensões celulares. Os materiais foram submetidos à extração metanólica e posterior fracionamento em hexano e diclorometano. Para a avaliação da atividade dos extratos sobre L. braziliensis foi usado o modelo in vitro, com a forma promastigota, e in vivo na forma amastigota, a partir do tratamento de macrófagos peritoneais de camundongos infectados com o parasito. Ambas as formas foram tratadas com os extratos por 96 e 48h, respectivamente. A atividade antimicrobiana foi avaliada por macrodiluição do extrato em Mueller-Hinton, sendo avaliado o crescimento das cepas após 16h de incubação a 48C. A germinação in vitro da espécie foi alcançada em substrato vermiculita estéril umedecido com solução de sais do meio MS, com taxa média de 85%. A maior produção de calos friáveis foi obtida em meios contendo KIN, com potencial uso para cultivo em suspensões celulares. Os extratos do material in situ e in vitro apresentaram atividade leishmanicida, apesar da toxicidade para macrófagos. Culturas de células em suspensão apresentaram potencial leishmanicida in vitro e redução da infecção em macrófagos. Os extratos do material avaliado apresentaram atividade antimicrobiana seletiva, com inibição do crescimento de Streptococcus pyogenes e Bacillus thurigiensis em diferentes concentrações avaliadas. Os métodos biotecnológicos empregados permitiram a obtenção de materiais com propriedades medicinais para as atividades leishmanicida e antibacteriana, assim como o material in vivo, constituindo este estudo o primeiro relato para as atividades propostas em A. mucosa. / The Brazilian flora encompasses medicinal importance species that can be used to develop new drugs. However, plants have been reduced in alarming rate, due to various human activities. Plant tissue culture promotes the conservation and use of species allowing for the production of bioactive substances for medicinal products. Leishmaniasis is considered a worldwide health problem, where Leishmania braziliensis is the most epidemiological importance specie in Brazil. Recently it has been registered increased resistance to treatment line. Similarly, the widespread use of antibiotics has led to an increase in multidrug-resistant bacteria, which represent a serious risk of infection. Annona mucosa have substances, such as acetogenins and alkaloids that exhibit antiparasitic and antimicrobial activities. In view of the problem, the aim of this work was to evaluate the leishmanicidal and antibacterial potential of extracts of A. mucosa obtained in vitro and in vivo. We proposed a protocol of in vitro germination, not yet reported for the species, aiming to achieve axenic seedlings. Hypocotyls explants was cultivated in WPM and leaf explants on MS medium supplemented with PIC and different concentrations of KIN, BAP or TDZ. The formed callus was cultured in liquid medium of the same composition for the production of cell suspensions. The materials were subjected to methanolic extraction and subsequent fractionation in hexane and dichloromethane. The activity of extracts on L. braziliensis was evaluated in vitro in the form promastigote and in vivo in amastigote form, in infected mice macrophages. Both, were treated with the extract per 96h and 48h, respectively. The evaluation of antimicrobial activity was performed by macrodilution assay in Mueller-Hinton, analyzing the growth of the strains after 16h of incubation at 48C. The in vitro germination of A. mucosa was achieved in sterile vermiculite as substrate and has a 85% germination rate. The higher callus formation and friability was obtained in media containing KIN, that may be cultured in suspension. The extracts of the material in situ and in vitro showed leishmanicidal activity, despite the toxicity in macrophages. Cell suspension cultures showed antileishmanial potential in vitro and reduction of infection in macrophages. The evaluated extracts showed selective antimicrobial activity, with growth inhibition of Streptococcus pyogenes and Bacillus thuringiensis in different tested concentrations. It was concluded that the biotechnological techniques allowed to use plant materials regarding pharmacological properties for antileishmanial and antibacterial activities.

O gênero Leishmania apresenta espécies capazes de desenvolver doenças de grande importância para a saúde pública, as leishmanioses, que apresentam prevalência mundial de 12 milhões de pessoas. Quando os parasitos entram em contato com o hospedeiro humano passam por um processo de metaciclogênese adquirindo capacidade de interagir com os macrófagos. Inúmeras atividades biológicas são desencadeadas pela ativação de sistemas de transdução de sinais, onde as proteínas cinases e fosfatases desempenham papel fundamental. A proteína cinase CK2 parece estar presente em todas as células eucarióticas (núcleo, citoplasma e superfície). É caracterizada como enzima serina/treonina cinase, embora também seja capaz de fosforilar resíduos de tirosina em suas proteínas-alvo. No presente trabalho, demonstramos que o principal inibidor da CK2, TBB, foi capaz de inibir o crescimento de formas promastigotas de L. donovani e mostrou um mecanismo de ação irreversível, entretanto não foi capaz de induzir apoptose nas formas promastigotas de L. donovani. O pré-tratamento dos parasitos e macrófagos, assim como a adição do TBB durante o processo de infecção induziram uma redução significativa no número de amastigotas por macrófagos possivelmente pelo mecanismo de morte celular programada demosntrada pela técnica do TUNEL. O tratamento de macrófagos com TBB não induziram o aumento de óxido nítrico. Ensaios de imunofluorescência demonstraram a presença de CK2α em promastigotas. Macrófagos não infectados demonstraram pouca marcação para CK2α. Após a interação, a enzima mostrou-se distribuída preferencialmente na periferia dos macrófagos. Os dados do trabalho sugerem que a CK2 é uma importante enzima para a atividade biológica da Leishmania donovani, tendo seu estudo importante relevância para a descoberta de novos alvos terapêuticos. / The genus Leishmania contains multiple species that are responsible for a group of diseases, leishmaniasis. Current estimates suggest that 12 million people are infected. When parasites enter a human host, they undergo metacyclogenesis and acquire the ability to interact with macrophages. This interaction activites signal transduction pathways inducing numerous biological activities, including protein kinase CK2. CK2 has been observed in all eukaryotic cells residing in the nucleus, the cytoplasm and on the cell surface. It appears to have an essential function and recognizes serine/threonine or tyrosine residues in target proteins for phosphorylation. In the present study, we demonstrate that the treatment of L. donovani promastigotes with TBB resulted in inhibition of cell growth and showed an irreversible mechanism of action, however was not able to induce apoptosis in L. donovani promastigotes. The pre-treatment of promastigotes and macrophages, as well as the addition of TBB during infection induced a significant reduction in the number of amastigotes per macrophages, possibly via the mechanism of programmed cell death showed by TUNEL technique. Treatment of macrophages with TBB did not induce the increase of nitric oxide. Immunofluorescence assays demonstrated the presence of CK2α distributed throughout the surface the promastigotes. Uninfected macrophages showed little to no CK2α. After initiating the interaction of parasites with macrophages, CK2α was observed distributed preferentially in the nucleus of macrophages. Job data suggest that CK2 is an important enzyme for the biological activity of Leishmania donovani, and its study important relevance to the discovery of new therapeutic targets.

O diagnóstico da leishmaniose tegumentar (LT) baseia-se em critérios clínicos e epidemiológicos podendo ser confirmado por exames laboratoriais de rotina como a pesquisa direta do parasito por microscopia e a intradermorreação de Montenegro. Atualmente, os métodos moleculares, principalmente a reação da cadeia da polimerase (PCR), têm sido considerados para aplicação em amostras clínicas, devido a sua alta sensibilidade e especificidade. Este trabalho teve como objetivo a padronização e validação das técnicas de PCR-RFLP com diferentes iniciadores (kDNA, its1, hsp70 e prp1), visando o diagnóstico e a identificação das espécies de Leishmania presentes em amostras de DNA provenientes de lesões de pele ou mucosa de 140 pacientes com suspeita de leishmaniose tegumentar. Para tal, realizamos ensaios de: 1) sensibilidade das PCRs com os diferentes iniciadores, 2) especificidade dos ensaios utilizando DNAs de diferentes espécies de referência de Leishmania, de tripanossomatídeos inferiores e de fungos, 3) validação das técnicas de PCR-RFLP com os iniciadores estudados em amostras de DNA de lesões de pele ou mucosas de pacientes com LT. Os resultados dos ensaios de limiar de detecção das PCR (sensibilidade) mostraram que os quatro iniciadores do estudo foram capazes de detectar o DNA do parasito, porém em quantidades distintas: até 500 fg com os iniciadores para kDNA e its1, até 400 fg com hsp70 e até 5 ng com prp1. Quanto à especificidade dos iniciadores, não houve amplificação dos DNAs fúngicos. Por outro lado, nos ensaios com os iniciadores para kDNA e hsp70, verificamos amplificação do fragmento esperado em amostras de DNA de tripanossomatídeos. Nos ensaios com its1 e prp1, o padrão de amplificação com os DNAs de tripanossomatídeos foi diferente do apresentado pelas espécies de Leishmania. Verificou-se nos ensaios de validação que o PCR-kDNA detectou o parasito em todas as 140 amostras de DNA de pacientes e, assim, foi utilizado como critério de inclusão das amostras. A PCR-its1 apresentou menor sensibilidade, mesmo após a reamplificação com o mesmo iniciador (85,7% ou 120/140 amostras). Para os ensaios da PCR-hsp70, as amostras de DNA foram amplificadas com Repli G, para obter uma sensibilidade de 68,4% (89/140 amostras). A PCR-prp1 não detectou o parasito em amostras de DNA dos pacientes. Quanto aos ensaios para a identificação da espécie presente na lesão, a PCR-kDNA-RFLP-HaeIII e a PCR-its1- RFLP-HaeIII permitem a distinção de L. (L.) amazonensis das outras espécies pertencentes ao subgênero Viannia. A PCR-hsp70-RFLP-HaeIII-BstUI, apesar de potencialmente ser capaz de identificar as seis espécies de Leishmania analisadas, quando utilizada na avaliação das amostras humanas permitiu apenas a identificação de L. (V.) braziliensis. No entanto, é uma técnica com várias etapas e de difícil execução, o que pode inviabilizar o seu uso rotineiro em centros de referência em diagnósticos. Assim, recomendamos o uso dessa metodologia apenas em locais onde várias espécies de Leishmania sejam endêmicas. Finalmente, os resultados indicam que o kDNA-PCR devido à alta sensibilidade apresentada e facilidade de execução pode ser empregada como exame de rotina nos centros de referência, permitindo a confirmação ou exclusão da LT. / The diagnosis of cutaneous leishmaniasis is based on clinical and epidemiological criteria and can be confirmed by routine laboratory tests such as direct detection of parasites by microscopy and by Montenegro skin test. Currently, the molecular methods, especially the polymerase chain reaction (PCR) have been considered for use in clinical samples due to its high sensitivity and specificity. This study aimed to standardize and validate the PCR-RFLP techniques with different primers (kDNA, its1, hsp70 and prp1) for the diagnosis and identification of Leishmania species present in DNA samples from skin or mucosal lesions of 140 patients with suspected cutaneous leishmaniasis. The following assays were performed to evaluate the 1) sensitivity of the PCRs with different pairs of primers, 2) specificity of the markers using DNAs of various species of Leishmania, lower trypanosomatids and fungi, 3) validate the PCR-RFLP techniques with DNA samples from skin or mucosal lesions of patients with LT. The results of the PCR detection threshold tests (sensitivity) showed that the four study pairs of primers were able to detect the DNA of the parasite, but in different quantities: up to 500 fg with kDNA and its1, 400 fg with hsp70 and up to 5 ng with prp1. Regarding the specificity of the primers, no amplification was observed with fungal DNA. On the other hand, the expected fragments for kDNA and hsp70 PCR were amplified with DNA of trypanosomatids. In its1 and prp1- PCR the pattern of amplification with the DNA of trypanosomatids was different of the one observed for species of Leishmania. In validation assays of PCR-kDNA protocol the parasite was detected in all 140 DNA samples from patients and it was used as inclusion criteria of the samples. The its1-PCR showed lower sensitivity even after reamplification (85.7% or 120/140 samples). The hsp70-PCR validation test was done with DNA samples amplified with Repli G, we obtained a sensitivity of 68.4% (89/140 samples). The PCR-prp1 did not detect the parasite in DNA samples from patients. Concern the tests for the identification of species present in the lesion, PCR-RFLP kDNA-HaeIII and PCR-RFLP ITS1-HaeIII enable distinction L. (L.) amazonensis from the other species belonging to the subgenus Viannia. The PCR-RFLP hsp70-BstUI, HaeIII, although potentially able to identify the six species of Leishmania studied, when it was used in the evaluation of only human samples, it identified only L. (V.) braziliensis. However, PCR-RFLP hsp70-BstUI, HaeIII is a technique with several stages and difficult to implement, which can derail your routine use in referral centers for diagnosis. Thus, we recommend using this method only in places where various Leishmania species are endemic. Finally, our results indicate that kDNA-PCR due to the high sensitivity and ease of execution could be used as a routine examination in reference centers, allowing the confirmation or exclusion of LT.

As leishmanioses e particularmente a leishmaniose visceral (LV) são doenças transmitidas por vetores artrópodes candidatas a experimentar uma grande expansão territorial em virtude de problemas relacionados ao aquecimento global. Este evento climático deverá causar grande impacto sobre a distribuição geográfica do artrópode transmissor no Brasil e no mundo. Com efeito, nos últimos 20 anos a situação epidemiológica da LV no Brasil vem se modificando de um padrão esporádico prevalente eminentemente em áreas rurais para uma condição de epidemias peri-urbanas que pode afetar todos os estratos sociais da população, tornando-se uma séria ameaça à saúde pública. As leishmanioses são consideradas até o momento doenças não preveníveis e seu padrão epidemiológico vêm se alterando de forma flagrante, o que demanda urgência para o desenvolvimento de novas ferramentas de controle e tratamento. Dentre as diversas questões levantadas sobre as demandas em pesquisa relacionadas ao controle desta enfermidade, destaca-se a importância de avanços em estudos de epidemiologia quantitativa e modelagem matemática que permitam prever efeitos de vacinações de populações empregando-se imunógenos com eficácia e/ou cobertura vacinal menor que 100%, o que parece ser uma realidade com as vacinas contra leishmanioses desenvolvidas até então pelos laboratórios no mundo todo. O sucesso de estratégias eficazes para o controle da LV depende do conhecimento de diversos parâmetros da dinâmica de infecção nas diferentes populações e espécies que atuam na cadeia epidemiológica da doença. Esse estudo teve objetivo de avaliar a efetividade de vacinas contra leishmaniose em cães bem como da utilização de coleira impregnada com inseticida através de um estudo de coorte realizado em uma região de transmissão moderada de leishmaniose visceral canina. Foram construídas seis coortes compostas por animais não reagentes ao teste rápido TR-DPP® e ao teste EIE-ELISA®. Todos os animais apresentaram estado clínico normal, conforme avaliação semiológica. As coortes compreendem grupos de animais sem qualquer medida de controle (grupo N), grupos de animais com aplicação de coleira (grupo C), grupos de animais vacinados com vacina de subunidade (grupo V1) e grupos de animais vacinados com vacina recombinante (grupo V2) e grupos de animais vacinados e com coleira (grupos V1C e V2C). Foram colhidas amostras de todas as coortes em três tempos com intervalo de seis meses cada, para sorodiagnóstico. A efetividade encontrada ao final de 12 meses de observação para os grupos C, V1, V2, V1C e V2C foram 38,2%, 58,1%, 35%, 68,6% e -36,5% respectivamente com base nos cálculos estatísticos feitos por regressão de Cox para riscos proporcionais. Todas as coortes, mesmo tendo desempenhando alguma efetividade exceto V2C, os resultados dos intervalos de confiança do risco relativo não foram significativos quando comparados ao grupo controle (N). / Leishmaniasis and particularly the LV are diseases transmitted by arthropod vectors candidates to experience a wide territorial expansion because of problems related to global warming. This weather event should cause great impact on the geographical distribution of the arthropod transmitter in Brazil and worldwide. Indeed, the past 20 years the epidemiological situation of LV in Brazil has been changing a prevalent sporadic pattern predominantly in rural areas to a condition of peri-urban epidemics that can affect all social strata of the population, making it a serious threat public health. Leishmaniasis are considered so far not preventable disease and its epidemiological pattern have been changing blatantly, which requires urgency to the development of new tools for control and treatment. Among the many questions raised about the demands on research related to the control of this disease, it highlights the importance of advances in quantitative epidemiological studies and mathematical modeling to anticipate vaccinations effects of employing immunogens effectively and / or lower vaccination coverage to 100%, which appears to be a reality with vaccines against leishmaniasis developed so far by laboratories worldwide. The success of effective strategies to control the LV depends on the knowledge of many aspects of the dynamics of infection in different populations and species that act in the epidemiological chain of the disease. This study aims to evaluate the effectiveness of vaccines against leishmaniasis in dogs as well as the use of insecticide impregnated collar with through a cohort study in a high transmission of canine visceral leishmaniasis region. It was built six cohorts composed of non-reactive animals to the rapid test DPP® and EIE-ELISA® test. All the animals had normal clinical status, as symptomatic evaluation. The cohorts include groups of animals without any measure of control (group N), group of animals with collar application (group C), groups of vaccinated animals with subunit vaccine (group V1), group of animals vaccinated with recombinant vaccine (group V2) and groups of animals vaccinated and collar application (V1C and V2C). Samples were collected from all cohorts in three times at intervals of six months each for serodiagnosis. The effectiveness found after 12 months of observation for groups C, V1, V2, V1C and V2C were 38.2%, 58.1%, 35%, 68.6% and -36.5% respectively based on the statistical calculations done by Cox proportional hazards regression to. All cohorts, even though playing some effectiveness except V2C, the results of risk relative confidence intervals were not significant when compared to the control group (N).

No estado do Paraná a leishmaniose tegumentar americana (LTA) é endêmica, ocorrendo em 276 dos seus 399 municípios. Dos 12.304 casos da doença registrados no Sul do Brasil de 1980 a 2003, 12.220 (99,3 por cento) ocorreram no Estado do Paraná, sendo notificados 123 casos autóctones no município de Bandeirantes de 2000 a 2009. Objetivos. 1) Descreve a ocorrência da LTA no município de Bandeirantes entre 2000 e 2009, segundo a distribuição espacial, temporal e atributos pessoais; 2) relatar aspectos das formas clínicas e terapêuticos da LTA; identificar: 3) as espécies de Leishmania circulante na população humana e 4) as espécies de flebotomíneos capturadas em ambiente de transmissão da doença no município, de modo a 5) apontar para as espécies vetoras. Métodos. Desenvolveu-se estudo epidemiológico retrospectivo e descritivo de base de dados secundária da LTA e ecológico do grupo dos insetos vetores de Leishmania. Foram utilizados dados das fichas de investigação epidemiológica de LTA notificados à Secretaria Municipal de Saúde de Bandeirantes. Para a identificação da Leishmania sp, foram utilizadas amostras de tecidos das feridas de pacientes com suspeita de LTA e submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR). Para a análise entomológica foram realizadas capturas com armadilhas automáticas luminosas tipo CDC, durante um ano, com periodicidade quinzenal em 11 pontos peridomiciliares da zona urbana, e mensal, em 12 pontos da zona rural, a maioria deles selecionados tendo como referência a presença de casos de LTA. Além destes, foram feitas coletas com armadilha Shannon modificada nas cores branca e preta em um ponto da zona rural, nas três estações do ano (primavera, verão e outono). Resultados. No período de estudo a evolução da doença evidenciou um momento epidêmico em 2007, quando o coeficiente de incidência representou 1,038 casos/1.000 habitantes/ano. A distribuição dos casos no espaço ocorreu de forma heterogênea, com maior concentração na zona urbana. Das 123 notificações de LTA, 76 (61,79 por cento) foram do sexo feminino e 47 (38,21 por cento) do masculino. A faixa etária predominante foi a de 60 anos, em ambos os sexos. Houve predomínio da atividade doméstica (40,65 por cento), da forma clínica cutânea (95,94 por cento) e o Antimonial Pentavalente foi a droga mais utilizada a (98,37 por cento). Leishmania (Viannia) braziliensis foi identificada por meio da PCR em três pacientes de LTA. Na pesquisa do grupo de vetores, nos 24 pontos amostrados com as armadilhas CDC e Shannon, capturou-se um total de 5.652 flebotomíneos (51,66 por cento machos e 48,33 por cento fêmeas) pertencentes a 17 espécies. Nyssomyia neivai predominou (47,36 por cento), seguida de Nyssomyia whitmani (35,77 por cento), Pintomyia pessoai (6,51 por cento), Brumptomyia brumpti (5,54 por cento) e Expapillata firmatoi (2,30 por cento). Na zona urbana foram capturados apenas 22 flebotomíneos pertencentes a seis espécies: Br. brumpti, Evandromyia cortelezzii, Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai e Sciopemyia sordellii. Na zona rural capturou-se com as CDC, 3.843 flebotomíneos pertencentes a 15 espécies: Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Pi. fischeri, Br. brumpti, Br. cunhai, Br. nitzulescui, Br. sp., Ev. correalimai, Ev. cortelezzii, Ex. firmatoi, Mg. migonei, Mi. ferreirana, Mi. longipennis e Sc. sordellii. A espécie mais abundante foi Ny. neivai, cujo valor do índice de abundância padronizado foi de 0,89, seguida por Ny. whitmani (0,85) e Pi. pessoai (0,69). Os maiores índices de diversidade (H) ocorreram em uma margem de mata (1,45) e chiqueiro (1,42) de um bairro rural, e num outro, a maior equitabilidade entre o número de exemplares coletados em domicílio (0,96) e galinheiro (0,92). No total de espécimes capturados, as médias mensais mais elevadas ocorreram nos meses de março (6,92) e dezembro (6,45), Ny. neivai apresentou a maior média nos meses de dezembro (4,28 insetos/ armadilha) e Ny. whitmani em março (4,34). Na armadilha Shannon modificada foram capturados 1.787 espécimes, destacando-se Ny. neivai (56,86 por cento) e Ny. whitmani (32,79 por cento). A média horária mais elevada para Ny. neivai ocorreu das 23:0024:00 horas e Ny. whitmani entre 20:00 e 21:00 horas. Conclusão. Os dados sócio-econômicos apresentados mostram a LTA afetando predominantemente mulheres, porém crianças também foram atingidas, sugerindo que a transmissão da Leishmania pelos principais prováveis vetores, Ny. neivai e Ny. whitmani, esteja ocorrendo em área domiciliar e peridomiciliar. Áreas estas, cuja atração aos flebotomíneos pode aumentar o risco de aquisição da doença pelos moradores / In the state of Paraná, American cutaneous leishmaniasis (ACL) is endemic, occurring in 276 of its 399 municipalities. Of the 12,304 cases of ACL registered in the Southern Region of Brazil between 1980 and 2003, 12,220 (99.3 per cent) of them occurred in the State of Paraná. In this state, 123 autochthonous cases were registered in the Bandeirantes municipality between 2000 and 2009. Objectives. To describe: 1) the occurrence of ACL in the municipality of Bandeirantes between 2000 and 2009, in terms of its spatial and temporal distribution and the personal characteristics of the population affected and 2) the clinical and therapeutic aspects of ACL; to identify: 3) the Leishmania species infecting the human population and 4) the phlebotomine species captured in the environments where the disease may be transmitted, so as 5) to indicate the possible vectors. Methods. A retrospective and descriptive epidemiological study was undertaken based on a secondary database together with an identification of the Leishmania sp. and ecological study of the vectors. The secondary data used were derived from the ACL epidemiological investigation cards of the Municipal Health Service of Bandeirantes. For the identification of the Leishmania spp., samples of tissue taken from the wounds of suspected ACL patients were submitted to the polymerase chain reaction (PCR). For the entomological analysis, captures with automatic light traps (CDC type) were carried out during one year: fortnightly at 11 urban peridomiciliary sites and monthly at three sites, including domestic animal shelters, peridomiciles and forest edge, in each of four rural localities. Cases of ACL had occurred at the majority of the urban sites and rural localities. Captures were also undertaken (one in each season, spring, summer and fall) with modified black and white Shannon traps at one of the rural sites. Results. The progression of the disease reached an epidemic peak in 2007, when the incidence coefficient attained 1.038 cases/1,000 inhabitants per year. The spatial distribution of the cases presented its highest concentration in the urban zone. Of the 123 notifications of ACL, 76 (61.79 per cent) occurred in females and 47 (38.21 per cent) in males. The age group 60 years predominated in both sexes as also did domestic activity (40.65 per cent). The cutaneous form accounted for 95.94 per cent of the cases, the drug most utilized being Antimony Pentavalent (98.37 per cent). Leishmania (Viannia) braziliensis was identified by PCR in three patients. At the 24 sites sampled with CDC and Shannon traps, 5,652 sand flies (51.66 per cent males and 48.33 per cent females) belonging to 17 species were captured, with the predominance of Nyssomyia neivai (47.36 per cent), Nyssomyia whitmani (35.77 per cent), Pintomyia pessoai (6.51 per cent), Brumptomyia brumpti (5.54 per cent) and Expapillata firmatoi (2.30 per cent). Only 22 specimens belonging to 6 species (Br. brumpti, Ev. cortelezzii, Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Sciopemyia sordellii) were captured in the urban zone. In the rural zone 3,843 sand flies belonging to 15 species (Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Pi. fischeri, Br. brumpti, Br. cunhai, Br. nitzulescui, Br, sp., Ev. correalimai, Ev. cortelezzii, Ex. firmatoi, Migonemyia migonei, Micropygomyia ferreirana, Mi. longipennis and Sc. sordellii) were captured, with CDC. Ny. neivai presented the highest standardized abundance index (0.89), followed by Ny. whitmani (0.85) and Pi. pessoai (0.69). The highest diversity indices (H) observed were on the forest edge (1.45), and in a pigsty (1.42). As regards evenness, there was a greater balance between the number collected in a house (0.96) and poultry coop (0.92). Considering all the specimens captured, the highest monthly average occurred in March (6.92) and December (6.45), Ny. neivai showed the highest average in December (4.28 specimens/trap) and Ny. whitmani in March (4.34). With the modified Shannon traps, 1,787 specimens were captured, Ny. neivai (56.86 per cent) and Ny. whitmani (32.79 per cent) predominating. The highest hourly average of Ny. neivai occurred between 23.00 and 24.00 hours and that of Ny. whitmani between 20.00 and 21.00 hours. Conclusions. The socio-economic data presented show that ACL affects women predominantly; however, infants were also affected, suggesting that the transmission of Leishmania by the principal probable vectors (Ny. neivai and Ny. whitmani) is occurring in domiciliary and peridomiciliary environments, whose attractiveness to sand flies may increase the risk of the transmission of the disease to the residents

Atualmente, um dos grandes problemas relacionados à leishmaniose é a falta de um diagnóstico específico capaz de indentificar e diferenciar espécies de Leishmania com rapidez e precisão. O desenvolvimento de métodos moleculares como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), possibilita que o diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) possa se tornar mais preciso e, eventualmente, de fácil execução, uma vez que limitações importantes relacionadas à sensibilidade e especificidade desta técnica ainda são descritas, principalmente quando se utiliza amostras clínicas. Com o intuito de melhor avaliar a eficiência da PCR para o diagnóstico da LVC, foram selecionadas diferentes amostras clínicas (baço, aspirado de linfonodo, pele sem lesão, pele com lesão e amostras de sangue) de 26 cães com sorologia positiva para leishmaniose submetidos à eutanásia pelo Serviço de Vigilância Epidemiológica do município de Embu das Artes - SP. Realizamos uma análise comparativa entre a PCR-RFLP kDNA-HaeIII e PCR-RFLP hsp70-BsaJI/EcoRII com dois métodos diagnósticos tradicionais (parasitológico direto, e cultura in vitro). Amostras clínicas de 28 cães com sorologia negativa para LVC da mesma região foram utilizadas como controle negativo das reações. Notamos que a PCR aprensentou maior sensibilidade em todas as amostras clínicas testadas quando comparadas aos métodos tradicionais. Os resultados apontam que a PCR-RFLP kDNA-HaeIII é a mais eficiente para o diagnóstico da LVC, com um índice de 96,15% de positividade nas amostras de pele com lesão. Quanto à discriminação da espécie de Leishmania envolvida na infecção, nossos resultados de PCR-RFLP kDNA-HaeIII indicam Leishmania chagasi-infantum como o agente etiológico envolvido na infecção e transmissão canina na cidade de Embu das Artes. Por outro lado, a análise da PCR em Tempo Real (qPCR), mostrou que algumas amostras de sangue não apresentavam o padrão associado à Leishmania chagasi-infantum, podendo indicar uma co-infecção com outras parasitoses caninas. Nosso grupo também acompanhou 184 crianças de 4 a 10 anos de idade (população de risco) residentes da mesma região de transmissão autóctone da doença canina, como também foi realizado um levantamento das espécies de flebotomíneos da região (pela SUCEN). Até o momento, não foi encontrado nenhum caso da doença humana, nem a principal espécie transmissora do parasito (Lutzomiya longipalpis). Acreditamos que esses resultados possam contribuir significativamente para aprimorar o diagnóstico e a identificação das espécies Leishmania na LVC. / Currently, one of the major problems related to leishmaniasis is the lack of a specific diagnosis capable of identifying and differentiating Leishmania species quickly and accurately. The development of molecular methods such as Polymerase Chain Reaction ( PCR ) allows the diagnosis of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) to become more accurate and eventually, easy to perform, since that important limitations in terms of sensitivity and specificity of this technique are being described especially when using clinical samples. In order to better evaluate the efficiency of PCR for the diagnosis of CVL, we selected different clinical samples (spleen, lymph node aspirate, skin with and without lesions and blood samples) from 26 dogs with positive serology for leishmaniasis submitted to euthanasia by the Agency of Epidemiological Surveillance of Embu das Artes - SP. Therefore, we performed a comparative analysis between the kDNAPCR-RFLP HaeIII and hsp70PCR-RFLP BsaJI/EcoRII with two traditional diagnostic methods (direct parasitological test, and in vitro culture). Additionally, clinical samples from 28 dogs with negative serology for CVL in the same region were used as negative reactions control. We noted that the PCR showed greater sensitivity in all clinical samples tested when compared with traditional methods. The results indicate that the kDNAPCR-RFLP HaeIII is the most efficient test for the diagnosis of CVL, with a positivity index of 96.15 % in skin lesions samples. Related to the discrimination of the Leishmania species involved in the infection, our results of kDNAPCR-RFLP HaeIII indicate Leishmania infantum chagasi as the agent involved in canine infection in Embu das Artes city. Moreover, the analysis of real-time PCR (qPCR) showed that some blood samples has not showed the same pattern associated with Leishmania infantum chagasi suggesting a possible co-infection with other canine parasite. Our group also followed 184 children between 4 to 10 years old (risk population) living in the same region of autochthonous transmission of canine disease, as well a survey was conducted on the sandfly species in the region (by SUCEN). So far, we found no human infection, nor the main species involved in the transmission of the parasite (Lutzomyia longipalpis). We believe that these results can significantly contribute to the improvement of the diagnosis and identification of Leishmania species involved in the CVL worldwide.

A leishmaniose visceral, causada no Brasil por protozoários da espécie Leishmania (L.) infantum, apresenta-se nos canídeos com manifestações similares à doença humana. Diversos trabalhos tem investigado a relação entre raças caninas e suscetibilidade/resistência à doença sendo as alterações lipídicas consideradas também nessa avaliação. Para avaliar o grau de comprometimento conforme a raça e as alternações lipídicas nos cães portadores de leishmaniose visceral, analisamos alterações hematológicas e bioquímicas frente à manifestação da doença em diferentes raças ou grupos raciais. Para tanto, incluímos 162 cães de área endêmica, sem histórico de outras patologias ou de vacinação contra leishmaniose, organizados em grupos de cães naturalmente infectados segundo a raça, quais sejam, Boxer, Labrador, Pit Bull, Sem Raça Definida (SRD) e Outras Raças, e grupo controle não infectados. Na avaliação das manifestações clínicas, dividimos os animais, dentro de cada grupo de cães infectados em assintomáticos (sem nenhum sinal clínico), oligossintomáticos (de 1 a 3 sinais clínicos) e polissintomáticos (acima de 3 sinais clínicos). As raças/grupos formadas pelo total de cães infectados (assintomáticos + oligossintomáticos + polissintomáticos) também foram avaliados segundo o escore de gravidade da infecção. Para analisar as possíveis alterações laboratoriais decorrentes da infecção de cães por Leishmania (L.) infantum foram realizados hemograma, leucograma, dosagens de albumina, globulinas, proteínas plasmáticas totais, creatinina, ureia, alanino aminotransferase (ALT), Fosfatase Alcalina (FA), colesterol total, lipoproteínas de alta densidade (high density lipoproteins, HDL), lipoproteínas de baixa densidade (low density lipoproteins, LDL), lipoproteínas de densidade muito baixa (very low density lipoproteins, VLDL) e triglicérides. Analisados em conjunto, observamos que os animais assintomáticos, independentemente de raça/grupo, apresentaram parâmetros bioquímicos e hematológicos similares aos valores descritos para o grupo controle não infectado. Não observamos diferença na gravidade das manifestações da doença entre as raças ou grupos raciais para o desenvolvimento da Leishmaniose Visceral Canina. As diversas raças e grupos raciais apresentaram alterações nos parâmetros pesquisados, porém os quadros de hipoalbuminemia, hiperglobulinemia e anemia foram identificados com maior frequência, sendo correlacionados à gravidade na raça Labrador e nos grupos SRD e Outras Raças. O quadro de anemia foi mais importante na raça Pit Bull. O grupo Outras Raças apresentou o maior número de alterações correlacionadas à gravidade. A raça Labrador apresentou concentração de HDL diminuída em relação às demais raças. As alterações lipídicas, principalmente em HDL, VLDL e triglicérides foram correlacionadas à gravidade no grupo Outras Raças. / Visceral leishmaniasis caused in Brazil by protozoa Leishmania (L.) infantum, presents in dogs similar manifestations as human disease. Some work has investigated the relationship between dog breeds and susceptibility/resistance to disease and lipid changes has been also considered in this evaluation. To assess the degree of commitment according breed and lipid changes in dogs with visceral leishmaniasis, we analyzed hematological and biochemical parameters and the manifestation of the disease in different breeds or groups. Therefore, we included 162 dogs from an endemic area of Brazil with no history of other diseases or vaccination against leishmaniasis, organized in groups of dogs naturally infected by breed, namely Boxer, Labrador, Pit Bull, Mogrel dogs, Other Breeds and uninfected control group. In the evaluation of the clinical manifestations, we divided the animals in infected asymptomatic (no clinical signs), oligosymptomatic (1-3 clinical signs) and polisymptomatic dogs (above 3 clinical signs). Breeds/groups formed by the total of infected dogs (asymptomatic+oligosymptomatic+polisymptomatic) were also assessed according to the severity of the infection. To analyze the possible laboratory changes resulting from infection of dogs by Leishmania (L.) infantum were performed red blood cell count, white blood cell count, evaluation of albumin, globulin, total plasma protein (TPP), creatinine, urea, alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), total cholesterol, high density lipoproteins (HDL), low density lipoproteins (LDL), very low density lipoprotein (VLDL) and triglycerides. Taken together, we observed that asymptomatic animals, regardless of breeds/group, showed biochemical and hematological parameters similar to values reported for the uninfected control group. There were no differences in severity of disease manifestations among breed or racial groups for the development of Canine Visceral Leishmaniasis. The different breeds and racial groups showed changes in the parameters studied, but hypoalbuminemia, hypergammaglobulinemia and anemia were identified more frequently being correlated to the severity in Labrador, mongrel and Other Breeds groups. The anemia was most important in Pit Bull. The group Other Breeds had the largest number of changes correlated to the severity. The Labrador showed decreased HDL levels compared to other breeds. Lipid changes, especially in HDL, VLDL and triglycerides were correlated to the severity in the Other Breeds group.

Orientador: Mariangela Ribeiro Resende / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T21:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barao_SandraCristina_D.pdf: 3775784 bytes, checksum: ffb11ed337f2da69883370a4bf0d4b32 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: As informações que existem acerca da leishmaniose visceral humana, provêm em sua maioria das notificações realizadas nas áreas de alta endemicidade. Por isso, ainda há muitos aspectos a respeito da transmissão urbana e dos quadros de infecção assintomática que precisam ser elucidados. O dimensionamento real da prevalência da infecção por Leishmania chagasi pode contribuir para a definição e avaliação do impacto das medidas de controle. Com o objetivo de determinar a prevalência da infecção por L. chagasi em área de autoctonia recente, município de Araçatuba e, avaliar os fatores associados em relação aos casos humanos de leishmaniose visceral notificados, foi realizado um estudo transversal, com amostra estratificada de fase única, realizada em duas áreas urbanas de níveis sócio-econômicos distintos, designadas A1 (periférica, menor nível sócio-econômico) e A2 (central, melhor nível sócio-econômico). A soroprevalência foi avaliada com a utilização do teste imunocromatográfico com antígeno recombinante K39 (Ag-RK39). A prevalência observada foi de 18,4% (23/125) em A1 e 4,8% (6/125) em A2. A proporção entre indivíduos assintomáticos e casos de doença ativa nas áreas 1 e 2 foram respectivamente 1,35:1 e 2:1. Não houve diferença significativa da soropositividade na distribuição por idade, nem por sexo, entre as áreas. Contudo, foi observada diferença na proporção de casos assintomáticos entre as áreas, possivelmente associada aos níveis sócio-econômicos e intensidade de transmissão. Também houve relação com a presença canina nos últimos dois anos e a soropositividade para o Ag-rK39. As informações obtidas sugerem a associação da soroprevalência à presença canina nos dois últimos anos e reforça a estratégia de controle adotada / Abstract: Many information exist about human visceral leishmaniasis are origin to thepontificated cases, moreover, almost all data substantiating derive high levels transmission. So, there are many aspects about the urban transmission and asymptomatic infection to need to elucidated. The real comprehensive measurements about the Leishmania chagasi infection to be able to contribute to improve the assessment impact about the measures control. The objective to this study was determining the prevalence of asymptomatic visceral leishmaniasis infection in Araçatuba city, a recent autoctone area. This was a cross-sectional survey on a random sample of the population in two urban different areas, called A1 (outskirts, low social-economic condition) and A2 (central, good social-economic condition). The seroprevalence was assessing by the Immunochromatographic test with recombinant antibody K39 dipstick. The prevalence was 18.4% (23/125) in A1 and 4.8% (6/125) in A2. And the proportion between the asymptomatic and active disease in areas 1 and 2 was 1.35:1 and 2:1, respectively. There was no significant difference in age, nor gender, distribution of seropositivity between the areas. But we observed a difference in asymptomatic infection rates between the two areas, possibly associated with socioeconomic levels and transmission intensity. The data from this study suggest an associate between the human symptomatic seroprevalence and the presence of dogs in last two years old / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica