Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:39:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BarbizanPetinari_Roberta_D.pdf: 7051900 bytes, checksum: b3567758721f93532b336cb79e8aa570 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A avulsão de raízes motoras (ARV) tem se mostrado um modelo experimental reprodutível de degeneração de neurônios motores em ratos adultos. O emprego da ARV permite investigar degeneração/neuroproteção e plasticidade sináptica em motoneurônios, bem como testar a eficiência de diferentes tratamentos, devido à atual impossibilidade de reparo eficiente de lesões no sistema nervoso central (SNC). Os motoneurônios lesados têm potencial regenerativo após o reimplante de raízes nervosas, podendo servir como um modelo de regeneração no SNC. Contudo, na maioria das vezes, o reimplante das raízes não é suficiente para se obter retorno funcional, uma vez que a lesão causa grande perda neuronal. Há, portanto, necessidade do desenvolvimento de estratégias para diminuição da morte neuronal pós-lesão e direcionamento dos neuritos para seu alvo correto. O emprego de selante de fibrina pode auxiliar nesse processo e sua aplicação abre ainda a possibilidade de associação com células mononucleares de medula óssea (CMMO), as quais secretam fatores tróficos. Assim, o presente trabalho visa contribuir para o futuro emprego clínico desta abordagem terapêutica, preenchendo uma importante lacuna nos procedimentos reparativos após a avulsão. No presente trabalho, investigamos a eficácia do selante de fibrina, juntamente com o efeito neuroprotetor de CMMO de ratos Lewis-GFP, após avulsão e reimplante das raízes motoras. As intumescências lombares desses animais foram dissecadas e analisadas até 12 semanas após a AVR. Microscopia de luz foi empregada para a investigação da sobrevivência neuronal, quantificação das fibras nervosas e sua morfometria. Imunoistoquímica foi realizada para análise da estabilidade sináptica e da gliose reativa e RT-PCR foi utilizada para quantificação de transcritos gênicos para neurotrofinas, Iba-1 e GFAP. Microscopia eletrônica de transmissão foi usada para detectar possíveis alterações no equilíbrio de inputs excitatórios/inibitórios e avaliação motora foi realizada pelo walking track test. Os resultados do presente estudo indicam que ocorreu neuroproteção pelo reimplante com o selante de fibrina, com preservação parcial da cobertura sináptica dos motoneurônios resgatados. Não foram observadas diferenças na reatividade microglial na fase crônica pós-lesão, entre os grupos estudados por imunuistoquimica. No entanto, mais transcritos gênicos de Iba-1 foram obtidos 1 semana pós-cirúrgica no grupo com CMMO. Já em relação à astrogliose reativa, foi vista maior reatividade no grupo somente avulsão, 12 semanas após a lesão. Foi observada, também, produção de BDNF e GDNF após 1 semana pelas CMMO. Há maior número de fibras nervosas nos grupos com reimplante e essas fibras apresentaram diâmetros e espessura da bainha de mielina mais próximas ao controle, em relação ao grupo somente avulsão. Ainda foi observado que os grupos com reimplante, utilizando selante de fibrina, apresentaram melhor recuperação motora, analisada pelo cálculo do índice funcional do nervo fibular e da pressão exercida pela pata traseira. Em conjunto, podemos afirmar que o reimplante das raízes ventrais com selante de fibrina, associado ou não às CMMO, resultou em melhora da capacidade regenerativa dos neurônios após lesão e, consequentemente, recuperação da capacidade motora / Abstract: Ventral root avulsion (VRA) is an experimental model of proximal axonal injury at the central/peripheral nervous system interface that results in expressive neuronal death. In order to decrease neuronal degeneration, bone marrow stem cell (BMSC) has been proposed to treat such injuries. However, BMSC therapy is not effective without concurrent root replantation. In this sense, the use of a brasilian fibrin sealant, may be useful to facilitate the reconnection of avulsed roots at the spinal cord surface. The aim of the present work was to study the neuronal survival, synaptic plasticity, glial reaction and neurotrophic factor (BDNF and GDNF) production in the spinal motoneuron microenviroment and nerve regeneration after VRA and replantation with fibrin glue associated with BMSC therapy. Female Lewis rats (7 weeks old) were subjected to VRA and roots replantation. The animals were divided into the following groups (n=5 for each group): Group 1 ¿ avulsion only; Group 2 ¿ avulsion and DMEM injected; Group 3- the roots were replanted with fibrin sealant; Group 4 - the avulsed roots were repaired with fibrin sealant associated with BMSC; Group 5 ¿ the avulsed roots were repaired with sealant and BMSC injected at the respective spinal cord segments. EGFP-Lewis rats were used as BMSC donors. Flow cytometry was used to characterize the BMSC. The rats were sacrificed (1, 4, 8 and 12 weeks after surgery) and their lumbar intumescences processed for motoneuron counting, immunohistochemistry (used antisera: GFAP- glial fibrillary acidic protein, an astroglial marker; Iba-1- ionized calcium binding adaptor molecule, a microglial marker; synaptophysin - a synaptic marker and BDNF - brain derived neurotrophic factor) and PCR (Iba-1, GFAP, BDNF, GDNF). Nerve regeneration was assessed by morphological analysis of the sciatic nerve (nerve size, number and morphology of myelinated fibers) and motor function recovery (walking track test). The results indicated preservation of synaptic covering of the lesioned motoneurons and neuronal survival in the groups repaired with sealant alone and SCT treated. The replanted groups did not show significant changes in microglial response as compared to VRA by immunohistochemistry although these changes were observed at lumbar by PCR. Replanted groups show changes in astrogliosis reaction at motoneuron vicinity 12 weeks after surgery. Additionally, the cell transplanted group showed increased neurotrophins expression by PCR analysis. Nerve regeneration results indicated that the replantation alone or associated with BMSC promoted improvement in motor recovery and the intensity of the pressure exerted by the paws. Moreover, the average number of myelinated axons was higher in treated group when compared to avulsion only. In addition to counting of axons, the morphometric analysis of different parameters namely the diameter of nerve fibers, diameter of axons, thickness of myelin sheath and ratio "g" were significantly improved after reimplantation of ventral roots. The present data suggest that the repair of avulsed roots with the fibrin sealant alone or associated with BMSC is neuroprotective and contributes to the maintenance of spinal cord circuits leading to regeneration and recovery of motor function / Doutorado / Anatomia / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maria Elvira Pizzigatti Corrêa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T13:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Feio_PatriciadoSocorroQueiroz_D.pdf: 2959247 bytes, checksum: a2ac8e141dbed328b3bf56ecc39c6db1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Apesar dos avanços, a doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) ainda é principal complicação pós-transplante alogênico de células-tronco hematopoéticas (alo TCTH), que limita sobrevida e induz maior morbidade nos pacientes. A descoberta de proteínas diferentemente presentes na DECH pode ser capaz de tornar o diagnóstico mais precoce e preciso, além de permitir melhor tratamento. Neste contexto, o estudo dos proteomas busca encontrar proteínas que funcionem como biomarcadores e a utilização da saliva para este fim apresenta vantagens por apresentar coleta não invasiva, indolor e de baixo custo. O objetivo deste estudo foi o de avaliar prospectivamente o proteoma salivar em pacientes submetidos ao alo TCTH e comparar a perfil das proteínas em pacientes que desenvolveram a DECH (DECH+) e os que não desenvolveram (DECH-), elaborando um painel de potenciais biomarcadores para esta doença. Foram incluídos neste trabalho 20 pacientes submetidos ao transplante alogênico de células-tronco hematopoéticas na Unidade de Transplante de Medula Óssea do Hospital de Clínicas da Unicamp. Todos os pacientes foram submetidos à avaliação odontológica e adequação do meio bucal quando necessário, além de serem avaliados para grau de mucosite, parâmetros clínicos de hipossalivação e avaliação das lesões orais de DECH. Foram coletadas amostras de saliva não estimulada em 3 períodos: pré-TCTH, no d+8-10 e d+ 80-100. Adicionalmente, foi avaliado o fluxo salivar dos pacientes em todas as coletas. Todas as amostras foram acondicionadas com inibidores de proteases para avaliação proteômica. A análise das amostras foi realizada por espectrometria de massas após digestão com tripsina e separação dos peptídeos por uma coluna reversa de nanocromatografia líquida. Os dados obtidos foram confrontados com o banco International Protein Index (IPI) human utilizando o software Mascot v.2.3.2.0 ® e os arquivos resultantes da busca foram carregados no software Scaffold ®. As proteínas que mostraram variação em razão de 100% (? 0,5 e >2) entre os grupos DECH+ e DECH- no período d+8-10 para d+80-100 foram consideradas significativas. Não houve correlação estatisticamente significativa dos parâmetros clínicos de hipossalivação com o grupo DECH+. Entretanto na avaliação longitudinal dos pacientes, a presença de saliva espessa e viscosa mostrou-se significativa (p = 0,003). Foram identificadas 69 proteínas nos pacientes avaliados, sendo as mais frequentes relacionadas à defesa e imunidade. No presente estudo, dez proteínas mostraram alteração no grupo DECH+, porém 4 estavam presentes em apenas uma amostra com a doença. Portanto, as proteínas Lactoferroxin-B, IGL@ protein, Submaxillary gland androgen-regulated protein 3B, Cystatin-SA, Cystatin-S e Prolactin-inducible protein foram consideradas como potencias biomarcadores para a doença do enxerto contra hospedeiro / Abstract: The graft-versus-host disease (GVHD) remains the major clinical complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT), limiting survival and inducing major morbity. Differently expressed proteins in GVHD have the potential of improving early and accurate diagnosis, also allow a better treatment. Proteome analysis is emerging for the discovery of proteins which function as biomarkers and saliva can be useful for this purpose because offers an easy, inexpensive, safe, and non-invasive approach. The aims of this study were to evaluate salivary proteome in patients underwent allo-HSCT and compare the proteins expressions between patients with and without GVHD and elaborate a panel of possible biomarkers for this condition. Twenty patients underwent allo- HSCT at the Bone Marrow Transplantation Unit - UNICAMP were enrolled in this study. Patients underwent dental evaluation before HSCT and oral environment stabilization were performed when necessary. Also, an evaluation of grade of mucositis, clinical signs of hyposalivation and oral GVHD lesions. Unstimulated saliva samples were collected on 3 different times: pre-HSCT, d+8-10 e d+ 80-100. Additionally, the unstimulated salivary flow rate was measured. Thus, these samples were stored with protease inhibitors for proteomic evaluation. The samples were analyzed by mass spectrometry after protein digestion with trypsin and peptides separated by a Reverse Phase-nanoUltra Perfomance Liquid Chromatography. Protein search was performed using the Mascot v.2.3.2.0 ® engine against International Protein Index (IPI) human Database and the output files of the searches were loaded onto Scaffold software ®. The proteins which showed 100% fold change (? 0,5 e >2) between d+8-10 and d+80-100 were significant. There was no statistically significant correlation of clinical parameters of hyposalivation with GVHD+ group. However in the longitudinal assessment of patients, the presence of thick and viscous saliva was significant (p = 0,003). Sixty nine proteins were identified and the majority was involved in defense and immunity. The results indicated ten proteins differentially expressed in GVHD+ group, but 4 were presented only in one sample with disease. Therefore, Lactoferroxin-B, IGL @ protein, Submaxillary gland androgen-regulated protein 3B, Cystatin SA, Cystatin-S and Prolactin-inducible protein were identified as potential biomarkers for graft-versus-host disease / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientador: José Andrés Yunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T10:04:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Laranjeira_AngeloBrunelliAlbertoni_D.pdf: 13248620 bytes, checksum: 729ec8e23331934ddd1e5803361b6fe6 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A Leucemia Linfóide Aguda (LLA) é o tipo de câncer mais comum que acomete crianças. Sabe-se que a interação do tumor com o contexto celular do hospedeiro (microambiente tumoral) é recíproca, ou seja, na medida em que o tumor estimula o seu microambiente, este potencializa a sobrevivência, proliferação e invasividade tumoral. A interação da LLA com as células estromais da medula óssea tem um impacto positivo na resistência das células leucêmicas à quimioterapia. No presente estudo foi investigado a modulação de uma série genes de sensibilidade e resistência à asparaginase em células de LLA-B precursoras após co-cultura com as células estromais. Mostramos o aumento da expressão e secreção da IGFBP7 pelas células leucêmicas após co-cultivo com células do estroma da medula óssea. Em ensaios com o silenciamento do IGFBP7 em células leucêmicas e células estromais, mostramos que a IGFBP7 atua regulando positivamente o crescimento celular e aumenta a resistência a asparaginase. A IGFBP7 'leucêmica' junto com IGF/insulina atua sobre as células estromais, induzindo nestas células o aumento da produção de asparagina, e diminuindo a ação da asparaginase. Além deste mecanismo de resistência dependente das células estromais, mostramos que a IGFBP7 em conjunto com IGF/insulina promove a resistência das células leucêmicas à ação de outros compostos quimioterápicos (dexametasona e metotrexato) de forma independente da interação leucemia-estroma. Ainda pode ser observado que o plasma de crianças com LLA ao diagnóstico, apresenta maiores níveis de IGFBP7 do que em amostras controles. É importante ressaltar que níveis mais altos de mRNA IGFBP7 foram associados com menor sobrevida livre de leucemia (Modelo de regressão de Cox, P = 0,003), em células de LLAB Ph(-) presursoras / Abstract: Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) is the most common type of cancer that affects children. It is known that the interaction between tumor and the cellular context of the host (tumor microenvironment) is reciprocal, ie, to the extent that the tumor stimulates their microenvironment, this enhances the survival, proliferation and tumor invasiveness. The interaction of ALL with bone marrow stromal cells has a positive impact on leukemia resistance to chemotherapy. In the present study, we investigated the modulation of a series of putative asparaginase-resistance/sensitivity genes in B-precursor ALL upon co-culture with stromal cells. We showed an increase expression and secretion of IGFBP7 in leukemic cells after co-culture with BMSCs. Assays with IGFBP7 knockdown in leukemic cells and stromal cells, showed that IGFBP7 acts as a positive regulator of cell growth and increases resistance to asparaginase. 'Leukemic' IGFBP7 together with IGF/insulin acts on stromal cells, increasing asparagine production, thus reducing the asparaginase effect. Besides this mechanism of resistance dependent of stromal cells, we showed that IGFBP7 in conjunction with IGF/insulin promotes the resistance of leukemia cells to the action of other chemotherapeutic compounds (dexamethasone and methotrexate) independently of the interaction leukemia-stroma. We still observed that diagnostic BM plasma from children with ALL at diagnosis, have higher levels of IGFBP7 than control samples. Importantly, higher levels of IGFBP7 mRNA were associated with lower leukemia-free survival (Cox regression model, P = 0.003) in precursor B-ALL Ph (-) patients / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Renata Rodrigues Daher Paulo (renata@fagen.ufu.br) on 2013-09-10T15:53:54Z No. of bitstreams: 1 Tese_O USO DO FACEBOOK PARA PROMOVER A DOAÇÃO DE MEDULA NO BRASIL.pdf: 2519844 bytes, checksum: 0a5c11dad2740dc03ce4832c52a3a9d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Suzinei Teles Garcia Garcia (suzinei.garcia@fgv.br) on 2013-09-10T18:43:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_O USO DO FACEBOOK PARA PROMOVER A DOAÇÃO DE MEDULA NO BRASIL.pdf: 2519844 bytes, checksum: 0a5c11dad2740dc03ce4832c52a3a9d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-10T18:54:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_O USO DO FACEBOOK PARA PROMOVER A DOAÇÃO DE MEDULA NO BRASIL.pdf: 2519844 bytes, checksum: 0a5c11dad2740dc03ce4832c52a3a9d0 (MD5) Previous issue date: 2013-08-20 / The area of public health because of its specific characteristics, presents major communication challenges. Communication strategies based on social networks have been widely used due to numerous benefits they present, as low-cost production and publication, flexibility and reach, among others. Social networks, blogs, chats, forums and other electronic relationship tools reach 86% of Brazilian population with access to the internet (more than 83 million people). Therefore, they are an important alternative to contemporary communication strategies, including those directed to encouraging organ donation. Even with more than three million donors registered in the Brazilian Registration of Volunteer Bone Marrow Donors (REDOME), the probability of finding a compatible donor outside the family is one in a hundred thousand. So, the gap between the need and the number of donors continues to increase. In this context, the general objective of this thesis is to analyze wether there is a relationship between the use of social networks (Facebook and Twitter), as a tool for marketing and communication, and the intention to register as bone marrow donors and how it occurs. To this end, the Organ Donation Model (MORGAN, MILLER, ARASARATNAM, 2002) was adapted and empirically tested. Thus, it was performed a descriptive and quantitative research. A survey, divulged by Facebook and Twitter, has been applied to a snow ball sample of users of these networks. The collected data were analyzed by Structural Equation Modeling method. Twitter was dropped because it returned only 4 answered questionnaires. It was found that the use of Facebook, as a tool for marketing communication, indirectly interferes with peoples intention to register as bone marrow donors (information exposure by Facebook explains 13% of knowledge variation and; knowledge, attitude and social norms explains 29,4% of intention variation). The results pointed to the empirical adequacy of the adapted model (AGFI=0,943; CFI=0,985; TLI=0,980; RMSEA=0,035; PNFI=0,704). Other relationships between the factors studied were proposed and tested. The main contribution of this thesis was MDO’s adaptation and empirical test. This contribution shall be considered relevant because it is the first model of willingness to donate bone marrow in the country and also the first to use communication through Facebook. As a suggestion for future studies, we propose the use of qualitative approaches in order to elucidate aspects that cannot be mesured through quantitative techniques. We also suggest the analysis of aspects that were not covered in the tested model, such as: religious issues, fear of death, fear of surgery, among others. / A área da saúde pública, pelas suas especificidades, apresenta grandes desafios em termos de comunicação. As estratégias de comunicação baseadas nas redes sociais têm sido amplamente utilizadas pelos inúmeros benefícios que apresentam, como relativo baixo custo de produção e veiculação, flexibilidade e abrangência, entre outros. As redes sociais, blogs, bate-papos, fóruns e outras ferramentas eletrônicas de relacionamento alcançam 86% da população com acesso à internet (mais de 83 milhões de brasileiros) e, por isso, apresentam-se como alternativa importante para as estratégias de comunicação contemporâneas, inclusive aquelas direcionadas ao incentivo à doação de órgãos. Mesmo com mais de três milhões de doadores cadastrados no Registro Brasileiro de Doadores Voluntários de Medula Óssea, a probabilidade de encontrar um doador compatível fora da família é de uma em cem mil e a lacuna entre a necessidade e o número de doações continua a aumentar. Tendo tal contexto em vista, o objetivo geral desta tese foi analisar se há e como ocorre a relação entre o uso das redes sociais (Facebook e Twitter) como ferramenta de comunicação de marketing e a intenção das pessoas de se cadastrarem como doadoras de medula óssea. Para tanto, o Modelo de Doação de Órgãos - MDO (MORGAN, MILLER, ARASARATNAM, 2002) foi adaptado e testado empiricamente. Assim, foi realizada uma pesquisa descritiva e quantitativa. Uma survey, veiculada pelo Facebook e Twitter, foi aplicada a uma amostra autogerada de usuários destas redes. Os dados coletados foram analisados pelo método da Modelagem de Equações Estruturais. Quanto aos resultados, o Twitter foi excluído da pesquisa por ter retornado apenas 4 questionários respondidos. Verificou-se que o uso do Facebook como ferramenta de comunicação de marketing interfere indiretamente na intenção das pessoas para se cadastrarem como doadoras de medula óssea (a exposição à informação pelo Facebook explica 13% da variação do conhecimento e; conhecimento, atitudes e normas sociais explicam 29,4% da variação desta intenção). Constatou-se a adequação empírica do modelo adaptado (AGFI=0,943; CFI=0,985; TLI=0,980; RMSEA=0,035; PNFI=0,704) e foram propostas e testadas outras relações entre os fatores estudados. A principal contribuição desta tese foi a adaptação do MDO e seu teste empírico. Considera-se esta contribuição relevante por se tratar do primeiro modelo de disposição de doar medula do país e também o primeiro a utilizar a comunicação por meio do Facebook. Como sugestão para estudos futuros propõe-se o uso de abordagens qualitativas para elucidar aspectos que não podem ser apreendidos nas técnicas quanti. Sugere-se, ainda, a análise de aspectos que não foram contemplados no modelo testado, como: questões religiosas, medo da morte, medo do procedimento cirúrgico, entre outros.

Anemia in Leptospira interrogans infected individuals is one of the most common complications found in the severe form of the disease. Iron plays an important role in the hematopoietic processes; however, its precise metabolism on individuals with leptospirosis is still unknown. Therefore, the aim of this study was to analyze the classic iron markers associated to the storage process in hamsters experimentally infected by L. interrogans serovar Pomona (virulent strain LPF). Four groups with six hamsters each were used; two groups were controls (C7 and C14) and two were experimental groups with infected animals (T7 and T14). Blood samples were collected on the seventh (C7 and T7) and fourteenth days (C14 and T14) post-inoculation (PI). Iron availability was determined in sera samples by the assessment of iron, ferritin, transferrin, and iron binding capacity, whereas the bone marrow was also evaluated for the deposition of this metal by Pearl s reaction. Additionally, the total antioxidant capacity (TAC) and total oxidant status (TOS) were assessed, along with hepcidin and IL-6 levels to be involved in iron metabolism. Based on the results, it was possible to observe the onset of an acute condition with crisis hemolytic and regenerative response. The other parameters showed an increase in seric iron, ferritin, as well as a positive Pearl s reaction in animals from the groups T7 and T14 compared with the control groups. Transferrin levels decreased in animals from the group T14 with saturation index, but without statistical difference among all tested groups. TAC was increased in both periods, while TOS was increased only on day 14 PI. Hepcidin and IL-6 were statistically increased on days 7 and 14 PI. Therefore, it was observed that the serum profile from infected animals showed a strong hemolytic pattern, with some demonstration of ferric tissue sequestration. The results show that iron metabolism is activated in hamsters infected by L. interrogans sorovar Pomona, and therefore has participation in the pathogenesis of the disease. / A ocorrência de anemia em indivíduos infectados por Leptospira interrogans é uma das complicações decorrentes à doença em sua forma mais severa. O ferro tem um papel importante nos processos hematopoiéticos, no entanto, o seu metabolismo preciso em indivíduos com leptospirose ainda é desconhecido. Portanto, o objetivo deste trabalho foi analisar os marcadores clássicos relativos à reserva de ferro no organismo de hamsters experimentalmente infectados com L. interrogans sorovar Pomona, estirpe virulenta LPF. Para isto, foram utilizados 24 hamsters machos, distribuídos em quatro grupos, sendo dois grupos Controles (C7 e C14) e dois Testes (T7 e T14), com 6 animais em cada grupo. Amostras de sangue foram coletadas no sétimo (Grupos C7 e T7) e no décimo quarto dias pós-inoculação (Grupos C14 e T14). A disponibilidade de ferro foi determinada no soro, pela dosagem de ferro sérico, ferritina, transferrina e capacidade de ligação do ferro, ao passo que a medula óssea também foi quantificada quanto à deposição de ferro, através da reação de Pearls. Além disso, a capacidade antioxidante total (CAT) e status total de oxidantes (TOS) foram avaliados, em conjunto com hepcidina e os níveis de IL-6, por serem variáveis envolvidas no metabolismo do ferro. Com os resultados, foi possível observar a instalação de um quadro agudo com crise hemolítico-regenerativa. Nos demais parâmetros, encontrou-se uma elevação do ferro sérico, ferritina, e da positividade na Reação de Pearls, nos dois grupos teste em relação aos controles. A transferrina apresentou uma redução no grupo T14, com índices de saturação, no entanto, sem diferença estatística entre os grupos. Capacidade antioxidante total foi aumentada em ambos os períodos , enquanto TOS foi aumentada apenas no dia 14 PI . Hepcidina e IL-6 foram significativamente elevados nos dias 7 e 14 de PI . Portanto , observou-se que o perfil sérico de animais infectados apresentam um forte padrão hemolítico, com alguma demonstração de sequestro tecidual férrico. Os resultados mostram que o metabolismo do ferro é alterado em hamsters infectados por L. interrogans sorovar Pomona, e que, portanto, tem participação na patogenia da doença.

A esclerose múltipla (EM) é uma doença autoimune desmielinizante progressiva imunomediada por linfócitos T auto-reativos, que provocam uma cascata imunológica, amplificando a inflamação local. No Diabetes mellitus tipo 1 (DM1), existem linfócitos T auto reativos destroem as células beta do pâncreas, causando deficiência na produção de insulina. O desenvolvimento de terapêuticas específicas fica limitado pela etiologia indefinida destas doenças, apesar de avanços na terapêutica antiinflamatória e imunossupressora. Uma alternativa de tratamento atual para tais doenças é o transplante autólogo de células tronco hematopoéticas (TACTH). O presente estudo, observacional do tipo transversal, com a coleta de dados de caráter retrospectivo, tem como objetivo identificar as reações adversas manifestadas pelos pacientes diabéticos ou de esclerose múltipla, submetidos ao TACTH no período de 2004 a dezembro de 2010. Para a coleta de dados elaborou-se dois instrumentos que foram submetidos à validação aparente e de conteúdo por três juízes. A amostra final do estudo foi constituída pela obtenção dos dados de 72 prontuários, sendo 23 de pacientes diabéticos e 49 de pacientes com EM. Em relação aos pacientes diabéticos 16 pertenciam ao sexo masculino e a idade média foi 18,26 anos. Todos possuíam positividade para o anticorpo anti-carboxilase do ácido glutâmico (antiGAD65). Quanto aos pacientes com EM, trinta e três pertenciam ao sexo feminino e idade média foi de 37,2 anos. O subtipo da doença mais frequente foi o surto-remissivo em 21 (42,9%) pacientes. A escala expandida do estado de incapacidade (EDSS) variou entre 3,0 e 6,5. Em relação às reações adversas manifestadas pelos pacientes diabéticos foram mais frequentes os calafrios, febre, cefaléia, náusea e vômito e nos pacientes com esclerose múltipla foram retenção hídrica e cefaléia. As principais intervenções de enfermagem identificadas para os pacientes diabéticos e com EM foram monitorização dos sinais vitais, coleta de hemocultura, otimização da administração de medicamentos antieméticos, controle da infusão da globulina antitimocitária, orientações sobre alimentação e para reduzir o risco de queda. Os pacientes com DM1 apresentam reações mais agudas e necessitam de monitorização contínua. Já os pacientes com EM são mais dependentes dos cuidados de enfermagem, exigindo maior tempo de cuidados prestados pelo profissional. Embora o DM1 e a EM sejam doenças distintas, percebe-se que na prática clínica, exigem do enfermeiro uma excelência no cuidado, quer pelas particularidades do tratamento realizado ou pelas singularidades de cada uma delas. / Multiple sclerosis (MS) is a progressive demyelinating autoimmune disease, immune- mediated by auto-reactive T lymphocytes, which provoke an immunological cascade, enhancing the local inflammation. In type 1 diabetes mellitus (DM1), self-reactive T lymphocytes exist that destroy ? cells in the pancreas, causing insulin production deficiency. The development of specific therapeutics is limited by these diseases\' undefined etiology, despite advances in anti-inflammatory and immunosuppressive therapy. A current treatment alternative for these diseases is autologous hematopoietic stem cell transplantations (AHSCT). The aim of this observational and cross-sectional study with retrospective data collection is to identify the adverse reactions manifested by diabetic or MS patients who were submitted to AHSCT between 2004 and December 2010. For data collection, two instruments were elaborated, submitted to face and content validation with the help of three experts. The final study sample comprised data from 72 patient files, 23 from diabetic and 49 from MS patients. As for the diabetic patients, 16 were male and the mean age was 18.26 years. All were positive for the anti-glutamic acid decarboxylase (antiGAD65) antibody. Concerning MS patients, 33 were female and the mean age was 37.2 years. The most frequent disease subtype was relapsing-remitting in 21 (42.9%) patients. The expanded disability status scale (EDSS) score ranged between 3.0 and 6.5. As for the adverse reactions the diabetic patients manifested, shivers, fever, migraine, nausea and vomiting were the most frequent, while fluid retention and migraine were the most frequent among multiple sclerosis patients. The main nursing interventions identified for the diabetic and MS patients were vital sign monitoring, blood culture collection, optimization of anti-emetic drug administration, control of anti- thymocyte globulin infusion, dietary orientations and advice to reduce the risk of falls. DM1 patients present more acute reactions and need continuous monitoring. MS patients are more dependent on nursing care, demanding lower professional care time. Although DM1 and MS are distinct conditions, in clinical practice, they demand excellent care from nurses, whether due to the particularities of the treatment or the singularities of each disease.

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) destaca-se como uma das doenças de maior prevalência, mortalidade e incapacitação. O principal fator de risco para a DPOC vincula-se à exposição a partículas e gases nocivos, sendo o tabagismo responsável pela maioria dos casos da doença. Apesar dos avanços terapêuticos, não há até o presente uma forma de tratamento eficaz. Neste contexto, as células-tronco representam uma prática terapêutica potencialmente promissora. Foi proposto, neste estudo, o uso de um modelo animal de enfisema pulmonar que busca mimetizar as condições patológicas de pacientes tabagistas, permitindo testar, in vivo, os efeitos terapêuticos das células-tronco. Os resultados obtidos demonstraram que os animais expostos à fumaça de cigarro desenvolveram os aspectos histomorfológicos da doença. A fluorescência direta revelou que as células infundidas migraram para os pulmões, esse achado, em concomitância com a recuperação pulmonar permitem sugerir que as células-tronco atuaram na regeneração do órgão. Consolidou-se, neste estudo, um novo aparato e uma metodologia que permitem avaliar novas terapias experimentais. Além disso, demonstrou-se a potencialidade terapêutica das células-tronco no tratamento do enfisema pulmonar. / Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) stands out as one of the most prevalent diseases, mortality and disability. The main risk factor for COPD is linked to exposure to noxious particles and gases, tobacco use is responsible for most cases of the disease. Despite therapeutic advances, there is no effective treatment. In this context, stem cells represent a potentially promising therapeutic practice. It was proposed in this study, using an animal model of emphysema that seeks to mimic the pathological conditions of smokers, allowing you to test, in vivo, the therapeutic effects of stem cells. The results showed that animals exposed to cigarette smoke developed the histopathological aspects of the disease. The direct fluorescence revealed that the infused cells migrated to the lungs, this finding, in tandem with the recovering lung may suggest that the stem cells worked in organ regeneration. Consolidated, in this study, a new apparatus and methodology for assessing new experimental therapies. Furthermore, it was demonstrated that the therapeutic potential of stem cells in the treatment of pulmonary emphysema.

O vetor retroviral é uma ferramenta de transferência gênica largamente utilizada em ensaios de laboratório e em protocolos clínicos. Nosso laboratório desenvolveu um novo vetor, chamado pCLPG, com expressão viral sob comando de p53, um supressor de tumor e um ativador indutível de transcrição, com alvo de estabelecer um vetor com alta expressão. O sistema pCLPG demonstrou um nível de expressão superior ao vetor não modificado em ensaios em cultura de células. Neste projeto, nosso objetivo foi caracterizar a expressão do vetor pCLPG in vivo, utilizando um modelo animal de transdução de células da medula óssea (CMO) do camundongo C57BL/6 seguido por transplante em animais recipientes previamente irradiados para abolir o sistema hematopoiético. Visando observar a expressão sustentada do transgene in vivo, padronizamos o transplante de CMO seriado, transdução do vetor retroviral, realizamos análise do gene repórter eGFP por citometria de fluxo e análise por real time PCR, além da observação de outros tecidos como baço, timo, sangue periférico. Realizamos também analises hematológicas nos animais transplantados para observação de possíveis efeitos adversos relacioanados com a presença do retrovírus. Com estes ensaios não foi observado uma diferença significante entre o desempenho do vetor parental pCLeGFP e o pCLPGeGFP. Tanto o número de células eGFP positivas quanto a expressão do gene repórter diminuíram ao longo do processo de transplante seriado. Expressão foi observada em 3-4%, 2-3% ou 2-3% das celulas recuperadas da medula ossea dos recipientes primários, secundários ou terciários de CMO transduzida com o vetor pCLeGFP, mas não no sangue periférico, timo ou baço. Semelhantemente, células eGFP-positivas (6-7%, 4-4,5% ou 3-3,5%) foram observadas após transplante seriado somente na medula óssea de animais recipientes de CMO transduzida com o vetor pCLPGeGFP. Entretanto, sangue periférico foi recuperado dos recipientes e tratado com 5-asacitidina, proporcionando a indução de expressão de eGFP a partir de ambos os vetores em aproximadamente 4% das células, implicando que o silenciamento viral poderia estar relacionado com processos de metilação. Este estudo demonstrou que as modificações no promotor do vetor pCLPG não foram suficientes para evitar silenciamento de expressão viral no modelo utilizado. / The retroviral vector is a widely used gene transfer tool in both laboratory assays and clinical trials. Our laboratory developed a new vector, called pCLPG, with viral expression under the command of p53, a tumor suppressor and inducible activator of transcription, with the aim of establishing a vector with high level expression. The level of expression offered by the pCLPG system was superior to the non-modified vector in cell culture assays. In this project, our objective was to characterize the expression of the pCLPG vector in vivo utilizing an animal model where bone marrow cells (BMC) from C57BL/6 mice are transduced and then transplanted in recipient animals that have been previously irradiated in order to abolish the hematopoietic system. With the aim of observing sustained transgene expression in vivo, we standardized serial BMC transplantation, transduction with retroviral vectors and analyzed the eGFP reporter gene by flow cytometry and real time PCR, and also studied other tissues, such as spleen, thymus and peripheral blood. We also performed hematologic analyses in the transplanted animals in to observe possible adverse events related to the presence of the retrovirus.These assays did not reveal a significant difference between the performances of the parental pCLeGFP vector and pCLPGeGFP. Both the number of eGFP-positive cells and the intensity of reporter gene expression diminished during the serial transplant process. Expression was observed in 3-4%, 2-3% or 2-3% of cells recovered from bone marrow of the primary, secondary or terciary recipients of BMC transduced with the pCLeGFP vector, but not in peripheral blood, thymus or spleen. Similarly, eGFP-positive cells (6-7%, 4-4.5% or 3-3.5%) were observed after serial transplantation only in the bone marrow of animals that received BMC transduced with the pCLPGeGFP vector. However, peripheral blood was recovered from recipients and treated with 5-azacytidine, inducing the expression of eGFP from both vectors in approximately 4% of these cells, implying that viral silencing may have been related with methylation. This study demonstrated that the modifications in the promoter of the pCLPG vector were not sufficient to avoid silencing of viral expression in this model.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Silva Souza-dissertacao.pdf: 3490471 bytes, checksum: c67d9a32f1552af2738fbcd53645873e (MD5) Previous issue date: 2012-07-10 / In addition to being an important source of nutrients, the potential therapeutic effectiveness of H. annuus L. seeds has been previously demonstrated; the beneficial properties of H. annuus L. seeds include an ability to relieve asthmatic symptoms, protective effects on the stomach, benefits to healing, and anti-inflammatory and anti-microbial properties. This research evaluated the mutagenicity and anti-mutagenicity of oil and tincture of H. annuus L. seeds using the micronucleus assay in bone marrow of mice. The interaction between these preparations and the genotoxic effects of doxorubicin (DOX) was also analyzed. Experimental groups were evaluated after 24-48 h of treatment with N-Nitroso-N-ethylurea (NEU) and DOX (positive controls), NaCl (a negative control), a sunflower tincture (250-2,000 mg.Kg-1 of THALS) and two sources of sunflower oils (250-2,000 mg.Kg-1 of POHALS and FOHALS). Anti-mutagenic assays were carried out using the sunflower tincture and oils separately and in combination with these controls. The frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) was significantly different (p &#61500; 0.05) between (i) the positive and negative control treatments, (ii) the positive controls and animals treated with THALS and (iii) animals treated with THALS and and THALS combined with the positive controls. However, a slight genotoxicity was observed in the animals treated with the combination of THALS+DOX. Both sources of oils (FOHALS and POHALS) revealed similar results; in these groups, the frequencies of MNPCEs were similar to those observed in negative controls. Statistically significant differences were also observed between the sunflower oil treatments and their associated positive controls. There was no genotoxicity (clastogenicity/aneugenicity) observed in THALS, POHALS and FOHALS regardless of the dose, time (except FOHALS) and gender of mouse (except POHALS and FOHALS). The moderate anti-genotoxic effects of THALS suggest a potential slight protective mechanism against DOX-induced genotoxic effects. / A efetividade terapêutica potencial das sementes de H. annuus L. tem sido demonstrada (alívio dos sintomas da asma, efeitos da proteção gástrica, cicatrização, propriedades anti-inflamatórias e antimicrobianas), em adição à sua importante fonte de nutrientes. Esta pesquisa avaliou a mutagenicidade e anti-mutagenicidade do óleo e da tintura de sementes de H. annuus L. usando o ensaio do micronúcleo em medula óssea de camundongos. A associação sobre os efeitos genotóxicos induzidos pela doxorrubicina (DOX) também foi analisada. Grupos experimentais foram avaliados após 24-48h de tratamento com N-Nitroso-N-ethylurea (NUE) e DOX (controles positivos), NaCl (controle negativo), tintura (250-2.000 mg.Kg-1 de THALS) e duas fontes de óleo de girassol (250-2.000 mg.Kg-1 de POHALS e FOHALS). Ensaios anti-mutagênicos foram realizados usando os controles positives associados com a tintura e óleos de girassol, separadamente. A frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados (MNPCEs) foi estatisticamente diferente (p < 0,05) entre (i) os tratamentos controles positives e negativo, (ii) controles positivos e tratamento com THALS e (iii) tratamento com THALS e sua associação aos controles positivos. Contudo, uma leve genotoxicidade foi observada na associação THALS+DOX. Ambas as fontes de óleos (FOHALS e POHALS) revelaram resultados similares, cujas frequências de MNPCEs foram consistentes com aqueles observados no controle negativo. Diferenças significativas também ocorreram entre os tratamentos de óleos e suas associações com os controles positivos. A ausência de genotoxicidade (clastogenia/aneugenia) da THALS, POHALS e FOHALS pode ser inferida independentemente da dose, tempo (exceto para FOHALS) e gênero de camundongo (exceto para POHALS e FOHALS). Efeitos anti-genotóxicos moderados de THALS sugerem um potencial mecanismo ligeiramente protetor sobre os efeitos genotóxicos induzidos pela DOX.

Submitted by biblioteca unifenas (biblioteca@unifenas.br) on 2017-09-18T20:18:02Z No. of bitstreams: 1 Roberta Soares Terra Dissertação.pdf: 5586714 bytes, checksum: b90d918d9ac7cb880dcc55847cd8c5fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-18T20:18:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberta Soares Terra Dissertação.pdf: 5586714 bytes, checksum: b90d918d9ac7cb880dcc55847cd8c5fd (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG / Salvia officinalis has been widely used in culinary and traditional medicine, and studies have identified numerous chemical compounds and potential therapeutic actions. This study evaluated the genotoxicity of lyophilized hydroalcoholic extract of S. officinalis L. (SO) leaves using the micronucleus assay in mouse bone marrow. The interaction between SO and the genotoxic effects induced by doxorubicin (DXR) was also analyzed – antigenotoxicity assay. Experimental groups consisting of male and female Swiss albinus mice (Unib: SW) were evaluated after 24-48h treatment with cyclophosphamide (CP; 50 mg/kg), DXR (5 mg/kg), NaCl 0.5-2 g/kg) and SO (0.5 g/kg) + DXR (5 mg/kg). The PCEMN analyzes showed differences (p0.05) between SO (1-2 g/kg) and NaCl treatments, regardless of gender and time. DXR induced EPCMNs significantly in both genders and treatment times. Groups of mice treated with DXR showed lower frequencies (p0.05) of PCEMNs when compared to CP control groups (50 mg/kg). Associative treatment (500 mg/kg SO + 5 mg/kg DXR) did not reduce the frequency of DXR-induced PCEMNs (p0.05). The PCE/NCE ratio between control (NaCl, CP and DXR) and experimental genotoxic and antigenotoxic (SO; SO + DXR) treatments were insignificant (p0.05). The results suggest moderately genotoxic effects (clastogeny and/or aneugeny) of S. officinalis L. leaves, dose-dependent (i.e., from 1 g/kg) and gender- and time-independent. However, S. officinalis has no systemic toxicity and antigenotoxic effects (SO + DXR) under the conditions established in the present micronucleus test in mouse bone marrow. / Salvia officinalis tem sido amplamente utilizada na culinária e na medicina tradicional, e estudos têm identificado inúmeros compostos químicos e potenciais ações terapêuticas. Esta pesquisa avaliou a genotoxicidade do extrato hidroalcoólico liofilizado de folhas de S. officinalis L. (SO) usando o ensaio do micronúcleo em medula óssea de camundongos. A interação entre SO e os efeitos genotóxicos induzidos pela doxorrubicina (DXR) também foi analisada – ensaio de antigenotoxicidade. Grupos experimentais constituídos de camundongos machos e fêmeas Swiss albinus (Unib: SW) foram avaliados após 24-48h de tratamento com ciclofosfamida (CP; 50 mg/Kg), DXR (5 mg/Kg), NaCl (150 mM), SO (0,5–2 g/Kg) e SO (0,5 g/Kg) + DXR (5 mg/Kg). As análises de EPCMNs mostraram diferenças (p0,05) entre os tratamentos de SO (1–2 g/Kg) e NaCl, independentemente do gênero e do tempo. DXR induziu EPCMNs significativamente em ambos os gêneros e tempos de tratamento. Grupos de camundongos tratados com DXR mostraram frequências menores (p<0,05) de EPCMNs quando comparados com os grupos controles CP (50 mg/Kg). O tratamento associativo (500 mg/Kg de SO + 5 mg/Kg de DXR) não reduziu a frequência de EPCMNs (p<0,05) induzida por DXR. As proporções de EPC/ENC entre tratamentos controles (NaCl, CP e DXR) e experimentais genotóxicos e antigenotóxicos (SO; SO + DXR) foram insignificantes (p0,05). Os resultados sugerem efeitos moderadamente genotóxicos (clastogenia e/ou aneugenia) de folhas de S. officinalis L., dose-dependente (i.e., a partir de 1 g/Kg) e gênero- e tempo-independentes. Contudo, S. officinalis não apresenta toxicidade sistêmica e efeitos antigenotóxicos (SO + DXR) nas condições estabelecidas no presente teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos.