Os patógenos de origem alimentar constituem um dos maiores problemas de saúde pública no mundo, responsáveis por prejuízos com custos médicos, morbidade e mortalidade. O surgimento de cepas microbianas resistentes a uma grande variedade de antibióticos tem agravado o problema, o que evidencia a necessidade de descoberta de novos compostos com atividade antimicrobiana. Diante disso, o objetivo deste estudo foi avaliar o perfil fitoquímico e potencial antimicrobiano in vitro de extratos vegetais de três plantas medicinais coletadas no Estado do Tocantins sobre micro-organismos frequentemente relacionados com toxinfecções alimentares. Foram coletadas amostras de folha e entrecasca de Parkia plathycephala Benth, Pouteria ramiflora (Mart.) Radlk e Lophantera lactescens Ducke e elaborados extratos brutos aquosos e hidroalcoólicos dos vegetais. Os extratos obtidos foram submetidos a avaliações fitoquímicas para identificação de seus compostos bioativos e solubilizados em solução de Dimetilsulfóxido (DMSO) a 1% na concentração de 25 mg/mL, solução estoque, para o teste de atividade antimicrobiana, na qual foram determinadas a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) pelas técnicas de microdiluição em caldo e de observação de crescimento da bactéria em placas de ágar Mueller Hinton, respectivamente, utilizando concentrações de extratos de 12,5; 6,25; 3,12; 1,56; 0,78; 0,39; 0,19 e 0,09 mg/mL frente as cepas de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Salmonella Typhimurium ATCC 14028. Os resultados da análise fitoquímica dos extratos revelaram que as folhas da espécie L. lactescens foram as que obtiveram menor presença de compostos bioativos em sua composição, ácidos orgânicos, saponinas e taninos, ao passo que a entrecasca dessa espécie e as demais plantas apresentaram também os compostos catequinas, sesquiterpenlactonas e antraquinonas, este último exceto na espécie P. plathycephala. Quanto à atividade antimicrobiana as três espécies de plantas apresentaram-se ativas, sendo o S. aureus o micro-organismo mais sensível aos extratos. E. coli e Salmonella foram inibidas somente com a aplicação de extratos da entrecasca da P. plathycephala. Dessa forma, foi possível concluir que as três espécies de plantas avaliadas demostraram ser promissoras para o desenvolvimento de novos produtos com atividade antimicrobiana, sendo que a espécie P. plathycephala apresentou um maior espectro de ação. / Pathogens foodborne are one of the most important problems in public health in the world, responsible for losses with medical costs, morbidity and mortality. The emergence of microbial strains resistant to a wide variety of antibiotics have exacerbated the problem, highlighting the need for discovery of new compounds with antimicrobial activity. Thus, the aim of this study was to evaluate the phytochemical profile and antimicrobial potential in vitro of plant extracts of three medicinal plants collected in Tocantins State on often microorganisms related to food poisoning. Leaf samples were collected and inner bark of Parkia platycephala Benth, Pouteria ramiflora (Mart.) Radlk and Lophantera lactescens Ducke and elaborate hydroalcoholic and aqueous extracts of vegetables. The extracts were subjected to phytochemical evaluation for the identification of their bioactive compounds, solubilized in dimethyl sulfoxide solution (DMSO) at 1% concentration 25 mg/mL, stock solution, for the antimicrobial activity test, which were determined minimum inhibitory concentration (MIC) and bactericidal concentration Minimum (CBM) by microdilution techniques in broth and bacterial growth observation on agar plates Mueller Hinton, respectively, using extracts concentrations of 12.5; 6.25; 3.12; 1.56; 0.78; 0.39; 0.19 and 0.09 mg / mL front strains of Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Salmonella Typhimurium ATCC 14028. The results of the phytochemical analysis revealed that extracts of the leaves of the species L. lactescens obtained were smaller the presence of bioactive compounds in its composition, organic acids, tannins and saponins, while the inner bark of the species and other plants also showed the compounds catechins, sesquiterpenlactonas and anthraquinones, the latter except in the species P. plathycephala. The antimicrobial activity of the three species of plants had become active, with S. aureus more susceptible microorganism to the extracts. E. coli and Salmonella were inhibited only with extracts application of the inner bark of P. plathycephala. Thus, it was concluded that the three species of plants evaluated have shown to be promising for the development of new products with antimicrobial activity, and the specie P. plathycephala presented a greater spectrum of action.

A incidência de ceratite infecciosa relacionada a lentes de contato ocasionada por espécies de Acanthamoeba e Fusarium tem aumentado nos últimos anos. Esses organimos compartilham vários ambientes e casos de coinfecção foram relatados. Interações entre amebas e outros micro-organismos podem resultar em mudanças significativas para ambos, como o aumento da virulência em hospedeiros mamíferos. Neste estudo, foi avaliada a interação das cepas Neff, T4 e T4 pulmão de Acanthamoeba castellanii com Fusarium solani, bem como as possíveis implicações no desenvolvimento de ceratite. A. castellanii foi capaz de fagocitar F. solani e os conídios foram capazes de germinar dentro da ameba. A cocultura com ameba viva, bem como o sobrenadante da cultura e o lisado amebiano aumentaram significativamente o crescimento do fungo. Além disso, F. solani vivo e o seu sobrenadante de cultura aumentaram a sobrevivência da ameba, mas de forma diferente em cada cepa amebiana. A presença do fungo resultou em aumento de encistamento das cepas amebianas T4 pulmão e T4, bem como aumentou a resistência da cepa Neff à clorexidina. Curiosamente, a passagem pela ameba aumentou o efeito citopático de F. solani em células de mamíferos. Esses resultados mostram que A. castellanii e F. solani têm uma relação de protocooperação, com benefícios para ambos, e especialmente, indicam um possível efeito sobre as características de virulência de ambos os organismos. Assim a interação entre A. castellanii e F. solani pode resultar em impactos graves nos casos de ceratite. / The incidence of Acanthamoeba and Fusarium species has increased in contact lens-related infectious keratitis. They share several environments and cases of co-infection have been reported. The interaction between the amoeba and other microorganisms may result in significant changes for both, like increased virulence in mammalian hosts. In this study, we evaluated the interaction of Neff, T4 and T4 lung strains of Acanthamoeba castellanii with Fusarium solani and the implications in keratitis. A. castellanii phagocyted the fungi, and conidia were able to germinate inside the amoeba. The co-culture with live amoeba as well as the amebic culture supernatant and lysate significantly increased fungal growth. Moreover, live F. solani and the its culture supernatant enhanced the survival of amoeba, but differently in each A. castellanii strain. The presence of fungi resulted in increased amoebal encystment of T4 and T4 lung strains, end increased the resistence of Neff strain to chlorhexidine. The encystment of T4 and T4 lung strains was increased by the fungi. Interestingly, the passage by Neff amoeba increased the cytophatic effect of F. solani on mammalian cells linage. These results show that A. castellanii and F. solani have a protocooperation relationship, with benefits for both, and especially indicate a possible effect on virulence characteristics of both organisms. These data suggest that the A. castellanii-F. solani interaction may cause severe impacts in keratitis.

A doença vassoura-de-bruxa do cacaueiro (Theobroma cacao L.), causada pelo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa consiste numa importante enfermidade e apenas o uso de variedades resistentes representa uma solução econômica e ambientalmente viável. Os hormônios vegetais são imprescindíveis na rede de sinalização envolvida na resposta contra uma grande variedade de estresses bióticos e abióticos, sendo bem reconhecido o papel crucial do ácido salicílico (AS), etileno (ET) e os jasmonatos (JA) na interação planta-patógeno. O mecanismo de resistência observado em T. cacao contra o fungo hemibiotrófico M. perniciosa parece não envolver resposta de hipersensibilidade mediada pela sinalização por AS, e caracteriza-se pela menor incidência de sintomas e atenuação do crescimento micelial no material resistente. A resposta regulada por JA e/ou ET é determinada pela contenção e redução da colonização de tecidos infectados pelo patógeno, com atenuação dos sintomas manifestados, e está associada com a indução e produção de inibidores de protease, enzimas líticas da parede de fungos e enzimas do metabolismo secundário e cujo os genes demonstraram indução diferencial em amostras inoculadas com M. perniciosa. Recentemente, foi demonstrada a produção de AS pelo fungo M. perniciosa, o que poderia estar associado a um desarranjo hormonal na planta, auxiliando o pátogeno no processo infectivo. A partir destas evidências este trabalho teve como hipótese que JA e/ou ET estaria regulando a interação T. cacao e M. perniciosa. Sabe-se que a transcrição de genes codificantes das enzimas da via de biossíntese de JA é induzida por aplicação exógena de metil-jasmonato (MJ) e por patógenos, assim para verificar a participação de JA na resposta de defesa de cacau, seqüências de genes que codificam para enzimas da via de biossíntese foram identificadas, classificadas e confirmados sua identidade por seqüenciamento. A indução e expressão quantitativa destes, além dos genes Samsi, Accox, Pal, Jaz e Della, foram avaliadas entre o acesso susceptível à M. perniciosa (\'P7\') e o resistente (\'CAB 214\') de T. cacao, em experimentos de aplicação de indutores (AS, ET e MJ) e inoculação com M. perniciosa. As análises de expressão gênica relativa por RT-qPCR foram conduzidas e a resposta dos genes de biossíntese de JA, quando tratado com MJ no \'P7\' pareceu ser mais intensa e mais específica, enquanto que o acesso \'CAB 214\' apresentou resposta com menor intensidade, porém com resposta mais precoce, demonstrando que o mecanismo de regulação positiva pela aplicação exógena de MJ também ocorre em T. cacao. Em relação à inoculação, os resultados de expressão gênica sugerem uma diferença na resposta transcricional dos genes analisados sob inoculação de M. perniciosa entre o \'P7\' e o \'CAB 214\' onde os transcritos de Aos, Kat, Samsi e Jaz apresentaram elevação significativa somente no \'CAB 214\' em comparação ao \'P7\'. Em acessos resistentes, como \'CAB 214\', o efeito de AS produzido pelo fungo poderia não estar surtindo efeitos antagônicos, como indicado pelo aumento transcricional de Aos, gene codificador da principal enzima envolvida na biossíntese de JA, e embora os demais genes da via estejam sendo reprimidos, muito possivelmente a sinalização da resposta de defesa do acesso resistente \'CAB 214\' seja desencadeada por JA, devido ao papel central de AOS na sua biossíntese, e de maneira sinérgica ET estaria participando do mecanismo de resposta, indicado pela alta indução de Samsi no acesso resistente / Witches broom disease of cacao (Theobroma cacao L.), caused by the basidiomycete Moniliophthora perniciosa is an important disease and the use of resistant varieties is the only economic and environmental long-term solution. Plant hormones are essential in the signaling network involved in the response against a variety of biotic and abiotic stresses. It is well recognized the crucial role of salicylic acid (SA), ethylene (ET) and jasmonate (JA) in plant-pathogen interactions. The mechanism of resistance observed in Theobroma cacao against M. perniciosa does not appear to involve hypersensitivity response mediated by AS signaling, and it is characterized by lower incidence of symptoms and reduction of mycelial growth in resistant material. The response regulated by JA and/or ET is determined by the growth inhibition and a reduction of the colonization of infected tissues by the pathogen, together with an attenuation of symptoms. It is also associated with an induction and production of the protease inhibitors, lytic enzymes and enzymes of secondary metabolism and the genes enconding these enzymes have shown differential expression patterns in samples inoculated with M. perniciosa. It has been recently demonstrated that the production of AS by the fungus M. perniciosa could be associated with a hormonal disorder in the plant, which could therefore help the pathogen in the infective process. Considering this, the hypothesis that JA and/or ET would regulate the interaction of T. cacao with M. perniciosa was formulated in order to be tested by this research work. It is known that the transcription of genes encoding the enzymes of the JA biosynthesis pathway is induced by exogenous application of methyl jasmonate (MJ) and by pathogen, thus, in order to verify the involvement of JA in defense response of cocoa, sequences of genes that encode the enzymes of the JA biosynthesis pathway were isolated, identified, classified and had their identity confirmed by sequencing, and relative quantitative gene expression were evaluated in susceptible \'P7\' and resistant \'CAB 214\' plants of T. cacao. In addition genes Sams, Accox, Pal , Jaz and Della, were evaluated in experiments with application of inducers (AS, ET and MJ) and inoculation with M. perniciosa. Analysis of relative gene expression by RT-qPCR were conducted and \'P7\' seems to have the expression of jasmonate biosynthesis genes in a more intense and more specific manner when treated with MJ, while \'CAB 214\' shows an earlier yet lower response suggesting that the mechanism of positive regulation by the exogenous application of MJ also occurs in T. cacao. For the inoculation, the gene expression results suggest a difference in the transcriptional response from inoculation with M. perniciosa between \'P7\' and \'CAB 214\' in T. cacao. The effect of AS produced by the fungus may not have antagonistic effects in resistant materials such as \'CAB 214\', as indicated by the increase of the transcription of Aos gene that encodes the main enzyme involved in JA biosynthesis, so the defense responses of \'CAB 214\' is possibly triggered by JA signaling, because the central role of AOS in its biosynthesis, and may be part of synergistic ET signaling, indicated by high Samsi expression in resistance material

Hemiptera, es el orden más grande y diverso de insectos no-holometábolos y se caracteriza por su aparto bucal sucto-picador. Auchenorrhyncha, representa un grupo diversificado de hemípteros exclusivamente fitófagos de reconocida importancia fitosanitaria. Dentro de los auquenorrincos, Cicadellidae constituye la familia más numerosa, con aproximadamente 22000 especies descriptas en el mundo. La subfamilia Cicadellinae incluye 3100 especies, es una de las más diversas en la región Neotropical y en Argentina, 90 especies se distribuyen en el norte y centro del país. Cicadellinae se divide en dos tribus, Cicadellini y Proconiini. La tribu Proconiini, de distribución americana, cuenta con aproximadamente 59 géneros y 429 especies. La identificación taxonómica de sus especies se basa principalmente en los caracteres de la genitalia masculina y las hembras son identificadas por comparación con el macho predeterminado. En Argentina, los aportes referidos a la tribu Proconiini son realmente escasos, por lo cual se propuso estudiar los géneros y especies de proconinos presentes en nuestro país, recopilar y brindar nuevos datos sobre distribución geográfica, biología, plantas huéspedes, enemigos naturales e importancia fitosanitaria para cada especie, y describir los caracteres de la genitalia femenina útiles en la identificación de especies de Proconiini. Como resultado, se cita por primera vez para la fauna argentina un género y cuatro especies de proconinos. Esto, sumado al conocimiento previo, indica que la tribu Proconiini está representada en Argentina por 18 géneros y 44 especies. Adicionalmente, se presenta una clave para la identificación de los géneros y la diagnosis de cada uno de ellos. Para cada especie estudiada, se proporciona una diagnosis y se reúne toda la información conocida. Además, se amplía el registro de distribución para 16 especies; se proporcionan nuevos datos biológicos para seis especies, nuevas asociaciones con plantas huéspedes para cuatro especies, nuevos registros de enemigos naturales para dos especies y de importancia fitosanitaria para tres especies de Proconiini. Con respecto a la identificación de los ejemplares hembra, se describen e ilustran los caracteres de la genitalia femenina de 20 especies de proconinos. Xylella fastidiosa es una bacteria fitopatógena, transmitida por auquenorrincos de las familias Cicadellidae, Cercopidae y Membracidae. En cultivos citrícolas, X. fastidiosa causa una enfermedad llamada Clorosis Variegada de los Cítricos (CVC), que afecta a todas las variedades comerciales de naranja dulce y otras especies cítricas. En Argentina, la industria citrícola se desarrolla en dos regiones: el noroeste y el noreste, siendo esta última intensamente afectada por CVC. Para realizar estrategias adecuadas de manejo y control de esta enfermedad, es necesario conocer diversos aspectos de los insectos potenciales vectores. Para ello, se propuso estudiar la diversidad y fluctuación estacional de los auquenorrincos presentes en agroecosistemas citrícolas afectados por CVC en la provincia de Entre Ríos y monitorear la presencia de sus enemigos naturales potenciales controladores biológicos. Asimismo, se propuso estudiar mediante metodología molecular la presencia de la bacteria X. fastidiosa en diferentes especies de auquenorrincos asociadas a cultivos cítricos afectados por CVC en Entre Ríos. Como resultado de los tres años de muestreo en la EEA INTA Concordia, se colectaron 6052 insectos pertenecientes a seis familias de auquenorrincos, de las cuales Cicadellidae y Membracidae fueron las más abundantes. De las 43 especies identificadas, se mencionan dos nuevas citas para Argentina, 25 nuevas citas para la provincia de Entre Ríos y 13 nuevas asociaciones con agroecosistemas citrícolas. La fluctuación estacional de las especies predominantes presentó dos aumentos poblacionales a lo largo del año, uno en los meses de verano y otro en invierno, coincidente éste último con la presencia de brotes en los cítricos. Los enemigos naturales presentes en el área estudiada fueron: el hongo Beauveria bassiana, nematodes (Mermithidae), parasitoides oófilos del género Gonatocerus (Hymenoptera: Mymaridae) y Halictophagus placula (Strepsiptera: Halictophagidae). Mediante las técnicas moleculares de PCR y qPCR, se analizaron 15 especies de auquenorrincos de las cuales 11 fueron positivas para X. fastidiosa: Bucephalogonia xanthophis (Berg), Hortensia similis (Walker), Plesiommata mollicella (Fowler), Dechacona missionum (Berg), Molomea lineiceps Young, Tapajosa rubromarginata (Signoret), Frequenamia spiniventris (Linnavuori), Scaphytopius bolivianus (Oman), Curtara samera DeLong & Freytag, Cyphonia clavigera (Fabricius) y Entylia carinata (Forster). El ensayo preliminar de transmisión, demostró que tres especies de auquenorrincos, D. missionum, C. clavigera y T. rubromarginata, fueron capaces de adquirir y transmitir la bacteria X. fastidiosa a plantas cítricas. Si bien el producto de amplificación visualizado en un gel de agarosa indicó un resultado positivo, la mala calidad de las secuencias obtenidas a partir de las plantas testeadas, obliga a repetir parte del ensayo. El conocimiento generado en este trabajo de tesis, constituye una herramienta útil para el control, prevención y/o manejo de una de las enfermedades más importantes que afectan a la producción citrícola en Argentina.

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:15:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DeyseADB_DISSERT.pdf: 841717 bytes, checksum: e28d1da845eaf73099d848e162b2fd82 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The fungus M. cannonballus is a thermophilic plant pathogen, associated with the decline of crude oil in cucurbits worldwide. Although frequently associated with this family, which causes the decline of crude oil, this fungus has been reported in other crops, including maize, beans and cotton, and is, however, little known pathogenicity in these species. The objective of this study was to evaluate the susceptibility of cultivars of different host crops cucurbits and not cucurbits, front inoculation of two isolates of M. cannonballus. The present study tested the behavior of two isolates of M. cannonballus, CMM 3646, isolated Boerhavia diffusa roots (Catch pinto) and CMM 2390, isolated from melon roots, compared to 10 crops (tomatoes, beans, sesame, pumpkin, cucumber, melon, watermelon, sorghum, corn and cotton) with two cultivars of each, totaling forty treatments. With the means of this evaluation we calculated the overall index of the disease (IGD). Pathogenicity was confirmed by isolation of the inoculated fungus. The production of the inoculum of strains was made from the PDA culture medium containing the fungus mycelium. The crops were grown in pots containing sterile soil mixture, sand and substrate. After 50 days of culture, the insulation made from the roots of plants. It was found varying degrees of resistance and susceptibility of cultivars evaluated on isolates used. Cultivars of cucurbits were grouped into categories which the highly susceptible front of the CMM-3646 and CMM-2390 isolated. The species belonging to this family were the ones that had higher IGD. The cultivars of tomato and corn had susceptibility behavior to fungal isolates of M. cannonballus. The sorghum cultivars for both isolates of M. cannonballus behaved as moderately resistant. The cultures do not cucurbits such as cotton, sesame and cowpea obtained degrees of resistance to the fungal isolates used / O fungo Monosporascus cannonballus é um fitopatógeno termófilo, associado ao declínio das ramas em cucurbitáceas em todo o mundo. Apesar de ser frequentemente associado a esta família, na qual provoca o declínio das ramas, este fungo tem sido relatado em outras culturas, entre elas o milho, o feijão e o algodão, sendo, no entanto, pouco conhecida a sua patogenicidade nessas espécies. O objetivo deste trabalho foi avaliar a susceptibilidade de cultivares de diferentes culturas hospedeiras cucurbitáceas e não cucurbitáceas, frente a inoculação de dois isolados de M. cannonballus. No presente trabalho foi testado o comportamento de dois isolados de M. cannonballus, CMM 3646, isolado de raízes de Boerhavia difusa (Pega-pinto) e CMM 2390, isolado de raízes de meloeiro, frente a 10 culturas (tomate, feijão, gergelim, abóbora, pepino, melão, melancia, sorgo, milho e algodão) com duas cultivares de cada, totalizando quarenta tratamentos. Com as médias desta avaliação foi calculado o índice geral da doença (IGD). A patogenicidade foi confirmada através do isolamento do fungo inoculado. A produção do inóculo dos isolados foi feita a partir do meio de cultura BDA, contendo micélios do fungo. Os cultivares, foram cultivados em vasos, contendo uma mistura estéril de solo, areia e substrato. Após 50 dias de cultivo, o ensaio foi desmontado e feito o isolamento das raízes das plantas. Foi constatado resistência e diferentes graus de susceptibilidade dos cultivares avaliados aos isolados utilizados. Os cultivares de cucurbitáceas foram agrupadas nas categorias de susceptíveis a muito susceptíveis frente aos isolados CMM-3646 e CMM-2390. As espécies pertencentes a essa família foram as que obtiveram maiores IGD. Os cultivares de tomate e milho tiveram comportamento de susceptibilidade aos isolados fúngicos de M. cannonballus. Os cultivares de sorgo para ambos os isolados de M. cannonballus se comportaram como medianamente resistentes. As culturas não cucurbitáceas como as de algodão, gergelim e feijão-caupi obtiveram graus de resistência aos isolados de fúngicos utilizados

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:18:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DeyseADB_DISSERT.pdf: 841717 bytes, checksum: e28d1da845eaf73099d848e162b2fd82 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The fungus M. cannonballus is a thermophilic plant pathogen, associated with the decline of crude oil in cucurbits worldwide. Although frequently associated with this family, which causes the decline of crude oil, this fungus has been reported in other crops, including maize, beans and cotton, and is, however, little known pathogenicity in these species. The objective of this study was to evaluate the susceptibility of cultivars of different host crops cucurbits and not cucurbits, front inoculation of two isolates of M. cannonballus. The present study tested the behavior of two isolates of M. cannonballus, CMM 3646, isolated Boerhavia diffusa roots (Catch pinto) and CMM 2390, isolated from melon roots, compared to 10 crops (tomatoes, beans, sesame, pumpkin, cucumber, melon, watermelon, sorghum, corn and cotton) with two cultivars of each, totaling forty treatments. With the means of this evaluation we calculated the overall index of the disease (IGD). Pathogenicity was confirmed by isolation of the inoculated fungus. The production of the inoculum of strains was made from the PDA culture medium containing the fungus mycelium. The crops were grown in pots containing sterile soil mixture, sand and substrate. After 50 days of culture, the insulation made from the roots of plants. It was found varying degrees of resistance and susceptibility of cultivars evaluated on isolates used. Cultivars of cucurbits were grouped into categories which the highly susceptible front of the CMM-3646 and CMM-2390 isolated. The species belonging to this family were the ones that had higher IGD. The cultivars of tomato and corn had susceptibility behavior to fungal isolates of M. cannonballus. The sorghum cultivars for both isolates of M. cannonballus behaved as moderately resistant. The cultures do not cucurbits such as cotton, sesame and cowpea obtained degrees of resistance to the fungal isolates used / O fungo Monosporascus cannonballus é um fitopatógeno termófilo, associado ao declínio das ramas em cucurbitáceas em todo o mundo. Apesar de ser frequentemente associado a esta família, na qual provoca o declínio das ramas, este fungo tem sido relatado em outras culturas, entre elas o milho, o feijão e o algodão, sendo, no entanto, pouco conhecida a sua patogenicidade nessas espécies. O objetivo deste trabalho foi avaliar a susceptibilidade de cultivares de diferentes culturas hospedeiras cucurbitáceas e não cucurbitáceas, frente a inoculação de dois isolados de M. cannonballus. No presente trabalho foi testado o comportamento de dois isolados de M. cannonballus, CMM 3646, isolado de raízes de Boerhavia difusa (Pega-pinto) e CMM 2390, isolado de raízes de meloeiro, frente a 10 culturas (tomate, feijão, gergelim, abóbora, pepino, melão, melancia, sorgo, milho e algodão) com duas cultivares de cada, totalizando quarenta tratamentos. Com as médias desta avaliação foi calculado o índice geral da doença (IGD). A patogenicidade foi confirmada através do isolamento do fungo inoculado. A produção do inóculo dos isolados foi feita a partir do meio de cultura BDA, contendo micélios do fungo. Os cultivares, foram cultivados em vasos, contendo uma mistura estéril de solo, areia e substrato. Após 50 dias de cultivo, o ensaio foi desmontado e feito o isolamento das raízes das plantas. Foi constatado resistência e diferentes graus de susceptibilidade dos cultivares avaliados aos isolados utilizados. Os cultivares de cucurbitáceas foram agrupadas nas categorias de susceptíveis a muito susceptíveis frente aos isolados CMM-3646 e CMM-2390. As espécies pertencentes a essa família foram as que obtiveram maiores IGD. Os cultivares de tomate e milho tiveram comportamento de susceptibilidade aos isolados fúngicos de M. cannonballus. Os cultivares de sorgo para ambos os isolados de M. cannonballus se comportaram como medianamente resistentes. As culturas não cucurbitáceas como as de algodão, gergelim e feijão-caupi obtiveram graus de resistência aos isolados de fúngicos utilizados

Submitted by Cleber Casali (clebercasali@ufv.br) on 2017-06-28T17:17:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 598650 bytes, checksum: 028a6d83725fd48a983ea2b8264aaa29 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T17:17:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 598650 bytes, checksum: 028a6d83725fd48a983ea2b8264aaa29 (MD5) Previous issue date: 2001-01-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho objetivou: 1) avaliar a resistência de acessos de Lycopersicon spp. a tospovírus; 2) estudar a herança da resistência em algumas dessas fontes e 3) clonar e caracterizar molecularmente alelos do loco Sw-5 provenientes de Lycopersicon spp. Plantas de 12 acessos de tomateiro, pertencentes às espécies L. peruvianum, L. chilense e L. hirsutum foram inoculadas com cinco isolados de tospovírus, pertencentes às espécies TSWV, TCSV, CSNV e GRSV. A reação das plantas foi avaliada periodicamente por 30 dias. Ao final desse período, as plantas assintomáticas foram confirmadas como resistentes, mediante DAS-ELISA. A resistência na maioria dos materiais foi de amplo espectro (efetiva contra todos isolados), porém em alguns casos a resistência foi do tipo isolado-es pecífica. Os materiais mais promissores foram os acessos PI 126928, LA 444/1, LA 371 e PI 126944 de L. peruvianum e LA 130 e LA 2753 de L. chilense. Esses materiais constituem fontes de resistência alternativas para o manejo das tospoviroses do tomateiro. O estudo de herança da resistência em L. hirsutum PI 134417 indicou que a resistência nessa fonte é condicionada por dois genes independentes, um dominante e um recessivo. Num teste de alelismo, o gene dominante segregou independentemente do gene Sw-5, indicando que são genes distintos. Em L. peruvianum PI 126928, a resistência segregou como uma característica condicionada por dois ou mais genes dominantes não ligados. Na terceira etapa do trabalho, comparou-se o nível de conservação de alelos do loco Sw-5 em Lycopersicon spp. Os alelos foram obtidos mediante PCR de longo alcance, utilizando-se o sistema ELONGASE TM (Gibco-BRL) para amplificação. Nas reações de amplificação foram utilizadas três combinações de oligonucleotídeos desenhados com base na seqüência do gene Sw-5. Como molde foi utilizado DNA extraído de plantas cuja reação a tospovírus já era conhecida. Foram obtidos 16 alelos do loco Sw-5, provenientes de quatro espécies do gênero Lycopersicon. Após uma pré-caracterização mediante clivagem com enzimas de restrição, 10 clones foram selecionados para seqüenciamento. A análise de seqüência dos alelos revelou identidade de nucleotídeos superior a 91% para a ORF completa. Quando a comparação foi realizada para os diferentes domínios que compõem o gene Sw-5, observou-se que as maiores divergências residem nas extremidades 5’ e 3’ do gene. A comparação entre as proteínas codificadas pelo alelo Sw-5 1 (confere resistência) e seu alelo sw-5 2 (confere suscetibilidade) revelou 53 substituições ao nível de aminoácidos. Destas substituições, 14 são não-sinônimas e se concentram na extremidade amino e nas LRR, indicando o provável envolvimento dessas regiões na especificidade da resistência. A análise funcional dos alelos do loco Sw-5 e a construção de quimeras entre os alelos Sw-5 e sw-5 2 estão em andamento e auxiliarão a estabelecer as bases moleculares da resistência do tomateiro a tospovírus. / Lycopersicon peruvianum, L. chilense and L. hirsutum germplasm was inoculated with five isolates from the tospovirus species Tomato spotted wilt virus , Tomato chlorotic spot virus , Chrysanthemum stem necrosis virus, and Groundnut ringspot virus. Several introductions showed resistance to all isolates. However, in some cases, resistance isolate-specific was also observed. PI 126928, LA 444/1, LA 371 and PI 126944 of L. peruvianum and LA 130 and LA 2753 of L. chilense were the most resistant materials. Inheritance studies showed that two independent genes, one dominant and one recessive, control the PI 134417 resistance. Allelism tests revealed that this dominant gene is not an allele of the Sw-5 locus. The resistance derived from PI 126928 segregated as a trait controlled by two or more non-linked dominant genes. Sixteen alleles of the Sw-5 locus were PCR-amplified from four Lycopersicon species, cloned and sequenced. The alleles possess more than 91% of identity at nucleotide level; the largest divergence was observed in the 5 ́and 3 ́ extremities. Sequence comparisons between the resistance allele Sw-5 1 and the susceptible allele Sw-5 2, revealed 53 amino acid substitutions; fourteen substitutions are non-synonymous and located at the amino and carboxi terminus of the protein. The functional analysis of the other alleles and the construction of chimeras between Sw-5 1 and Sw-5 2 will allow to identify the protein region involved in the resistance specificity.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-26T11:31:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828935 bytes, checksum: 1db7e181e01f2e3911c0020c68d4f833 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-26T11:31:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828935 bytes, checksum: 1db7e181e01f2e3911c0020c68d4f833 (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A Anthracnose, causada pelo fungo Colletotrichum truncatum, é uma das doenças de soja mais importantes no mundo, mas não há estudos avaliando as alterações fisiológicas neste patossistema. Portanto, uma abordagem para avaliar os eventos que ocorrem no local da infecção e perto da área infectada na folha, ao longo do tempo, contribuirá para uma melhor compreensão da interação planta-hospedeiro e atividade fotossintética. Assim, o presente estudo buscou investigar parâmetros de fluorescência da clorofila a (Chl a) na área da lesão e uma área adjacente, associando os ás trocas gasosas e avaliação de pigmentos fotossintéticos em plantas de soja inoculadas ou não inoculadas com C. truncatum. O parâmetros de trocas gasosas não foram alterados em plantas inoculadas. No entanto, ocorreu redução da concentração de Chl a, Ch b e da Chl total (a + b) nas plantas inoculadas as 72 e 144 horas após a inoculação (hai), com redução máxima à 144 hai de 24% para Chl a, que demonstrou ser mais sensível que a Chl b, ocasionando, portanto, a redução da razão Chl a/ Chl b. Também foi encontrado queda em valores de fluorescência da clorofila a como, Fluorescência inicial (Fo), Fluorescência máxima (Fm), Eficiencia quântica máxima do fotossistema II (Fv/Fm), Rendimento quântico de dissipação de energia regulada Y(NPQ) e coeficiente não- fotoquímico (qN), e um acréscimo no Rendimento quântico efetivo do PSII Y(II), Rendimento quântico de dissipação de energia não regulada (NO) e coeficiente fotoquímico (qP) nas área sintomática de plantas inoculadas. Entretanto esses parâmetros sofreram pequenas alterações nas áreas adjacentes das plantas inoculadas, diferindo apenas em alguns tempos. Demonstrando, dessa forma, um menor efeito do patógeno nas áreas adjacentes. / Anthracnose, caused by Colletotrichum truncatum, is one of the most important soybean diseases worldwide. However, there are no studies evaluating the physiological changes affecting this pathossystem. Therefore, one approach to evaluating events that occur at the site of infection and near the infected area on the leaf, over time, will contribute to a better understanding of the host-plant interaction and photosynthetic activity. The present study aimed to investigate chlorophyll a fluorescence parameters at injured and adjacent areas and the related changes in gas exchange and evaluation of photosynthetic pigments in soybean plants inoculated or non-inoculated with C. truncatum. There were no significant differences regarding gas exchange parameters for inoculated plants. However, there was a reduction in the concentration of Chl a, Chl b e Chl total (a + b) of inoculated plants in the 72 and 144 hours after inoculation (hai). Reduction in chlorophyll a fluorescence parameters to as initial fluorescence (Fo), maximal fluorescence (Fm), maximal photosystem II quantum yield (Fv/ Fm), quantum yield of regulated energy dissipation Y (NPQ) and coefficient non-photochemical (qN), and an increase in the Effective PSII quantum yield Y (II), quantum yield of non- regulated energy dissipation (NO) and photochemical coefficient (qP) in the symptomatic area plants inoculated. However, these parameters have undergone minor adjacent areas of inoculated plants, differing only in a few days. Demonstrating a smaller effect of the pathogen in adjacent.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-20T12:28:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650594 bytes, checksum: 9a12741fabc5f870b036b29e8f9a440a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T12:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650594 bytes, checksum: 9a12741fabc5f870b036b29e8f9a440a (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A ferrugem do cafeeiro é causada pelo fungo Hemileia vastatrix. Trata-se de um parasita biotrófico que infecta apenas o cafeeiro sendo responsável por grandes perdas na produção. Apesar da eficiência dos fungicidas, o emprego de cultivares resistentes é o melhor método de controle, sendo econômico, eficiente, além de não causar impactos ambientais. O grande desafio para os melhoristas é o surgimento de novas raças do patógeno capazes de suplantar a resistência das cultivares resistentes desenvolvidas. A raça XXXIII de H. vastatrix foi recentemente identificada no Brasil, infectando algumas cultivares resistentes à ferrugem do cafeeiro. Durante a interação com a planta hospedeira, os fungos causadores de ferrugem secretam um arsenal de proteínas efetoras que modificam a estrutura e a função da célula hospedeira, permitindo o estabelecimento (ou não) da colonização do parasita. Dessa forma, objetivou-se com esse trabalho, caracterizar genes que codificam proteínas secretadas pelo fungo, por meio de análises de bioinformática e de expressão temporal de genes, que podem funcionar como proteínas efetoras de H. vastatrix (raça XXXIII), a fim de auxiliar a compreensão do processo infeccioso do patógeno. Dentre os 615 genes candidatos a efetores, obtidos a partir de um genoma de referência do fungo, a grande maioria, 376 e 88, apresentaram similaridade com as proteínas de Puccinia sp e Melampsora larici-populina, respectivamente. Utilizando o software BLAST2GO, foi realizada a categorização funcional desses genes. A partir dos resultados do BLASTp, foram extraídos 310 termos GO, distribuídos em três categorias. A categoria mais representada foi “Função Molecular” com 137 termos, seguida por “Processos Biológicos”, 126 termos, e “Componente Celular”, 47 termos. De acordo com a anotação de Enzyme Codes (EC) obtida, as classes enzimáticas mais representadas foram as hidrolases, transferases e as oxidurredutases. Foram selecionados 13 genes para a análise de expressão temporal. A analise foi efetuada pela técnica de PCR em tempo real (RT-PCR), nos tempos 12, 24, 48 e 72 horas após a inoculação (hai) de urediniósporos frescos em plantas de cafeeiro resistente (CIFC 832-1) e suscetível (Caturra) à ferrugem. Foi possível obter quatro padrões diferentes de expressão. Tais padrões sugerem que os genes analisados possam estar envolvidos na tentativa de sobrevivência do fungo em resposta a resistência da planta, na fase biotrófica da infecção, além de genes relacionados com a supressão da resposta de defesa da planta durante a penetração, no reconhecimento do hospedeiro e/ou na fase inicial da colonização. Os resultados indicaram que pode ocorrer comunicação entre o fungo e o hospedeiro, logo no início da infecção, ainda na fase de germinação dos esporos. Estudos biológicos funcionais deverão ser realizados para determinar a verdadeira função desses efetores durante a interação de H. vastatrix com o cafeeiro. Essas informações são úteis para os estudos que visam o entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na suplantação da resistência por novas raças do fungo, fornecendo subsídios para o desenvolvimento de cultivares com resistência durável. / Coffee rust is caused by the fungus Hemileia vastatrix. It is a biotrophic parasite that infects coffee only, being responsible for major losses in production. Despite fungicides efficiency, the use of resistant cultivars is the best method of control, being economical, efficient, and does not cause adverse environmental impacts. The challenge for breeders is the emergence of new races of the pathogen able to overcome the resistance of developed resistant cultivars. The race XXXIII of H. vastatrix was recently identified in Brazil infecting some cultivars resistant to coffee rust. During the interaction with the host plant, coffee rust fungi secrete an arsenal of effector proteins which modify the structure and function of the host cell, allowing the establishment (or not) of parasite colonization. Therefore, this study aimed to characterize genes that encode proteins secreted by the fungus, by bioinformatics tools and temporal expression analysis of genes, which may function as an effector protein of H. vastatrix (race XXXIII), in order to understand the infection process of the pathogen. Amongst the 615 candidate effector genes, obtained from a fungal genome reference, the majority (376 and 88) has shown similarity to proteins of Puccinia sp and Melampsora larici- populina, respectively. Functional categorization of those genes was done using BLAST2GO software. Based on the results from BLASTp, 310 GO terms were found, distributed into 3 categories. The most representative category was “Molecular Function” with 137 terms, followed by “Biological Process”, 126 terms, and “Cellular Component”, 47 terms. According to the Enzyme Code (EC) annotation obtained, the most represented enzyme classes were hydrolases, transferases and oxidoreductases. 13 genes were selected for temporal gene expression analysis. The analysis was performed by Real-Time PCR technique, at 12, 24, 48 and 72 hours after inoculation (hai) of fresh urediniospores into resistant (CIFC 832-1) and susceptible (Caturra) coffee plants to rust. Four different expression patterns were found. Those patterns suggest that the genes analyzed may be involved in survival attempts ofthe fungus in response to the resistance of the plant, on biotrophic stage of infection, in addition to genes related to suppression of defense response of the plant during penetration, the host recognition and/or the early stages of colonization. The results indicate that communication may occur between the fungus and the host plant in early stage of infection, during the spore germination stage. Functional biological studies should be performed to determine the real function of these effectors during interaction between H. vastatrix and coffee plants. These information are useful for studies that aim at the understanding of molecular mechanisms involved in supplanting resistance by new races of the fungus, providing subsidies for the development of cultivars with durable resistance.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2014-10-22T18:26:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Daiane Mendes Carvalho.pdf: 2848139 bytes, checksum: 2996209ff7e3bed29850ce444ef4c0d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-22T18:26:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Daiane Mendes Carvalho.pdf: 2848139 bytes, checksum: 2996209ff7e3bed29850ce444ef4c0d3 (MD5) / FAPESB / A Corynebacterium pseudotuberculosis é um patógeno intracelular facultativo de elevada importância veterinária por ser capaz de infectar diferentes animais de produção, incluindo equinos, bovinos e pequenos ruminantes. A pesquisa recente por determinantes moleculares de virulência em diversos agentes patogênicos tem dedicado atenção às proteínas reguladoras da expressão gênica. Os fatores sigma alternativos da RNA polimerase bacteriana proporcionam um meio de regular rapidamente a expressão gênica em resposta a várias mudanças do ambiente extracelular. Nesse contexto, o presente estudo avaliou a expressão diferencial dos fatores sigma alternativos presentes no genoma da bactéria C. pseudotuberculosis durante contato com fatores do hospedeiro, utilizando duas estratégias experimentais, in vivo e in vitro. Ovinos foram infectados experimentalmente com uma linhagem virulenta desta bactéria, punções aspirativas foram realizadas nos linfonodos nos tempos 5, 15 e 30 dias após a infecção. Duas condições diferentes de crescimento: cultura controle, em meio Infusão Cérebro-Coração e cultura que mimetiza o crescimento no hospedeiro, Soro Fetal Bovino, foram estudadas. Curvas de crescimento bacteriano nos dois meios foram realizadas através de contagens bacterianas por monitoramento da DO595nm e citometria de fluxo. RNA total foi extraído das amostras de punção aspirativa e das culturas quando atingiram a densidade de 107 células/mL. Os cDNAs gerados por transcrição reversa in vitro foram submetidos a ensaios de PCR quantitativa em tempo real para a quantificação relativa dos transcritos de nove genes: sigA, sigB, sigC, sigD, sigE, sigH, sigK, sigM e 16S rDNA. Os genes sigA e 16S rDNA foram utilizados como normalizadores da reação de PCR quantitativo, mas foi observado que o 16S rDNA não se apresentou como um bom gene normalizador neste estudo. Assim, surgiu a necessidade de realizar um estudo com normalizadores. Foram analisados resultados de RNAseq da linhagem 1002 da C. pseudotuberculosis, em três condições; estresse osmótico, acidez e choque térmico. Desse modo, de 19 genes selecionados a partir estudos de normalizadores em outros gêneros, nessas condições, apenas os genes dnaG, rpoC, gyrA, gyrB, efp, rpoB, fusA e atpA cumpriram os critérios definidos para serem considerados como bons genes normalizadores. Foram analisados a expressão desses 8 genes em duas condições de cultivo, através da técnica de RT-qPCR. O NormFinder sugeriu o gyrA e fusA como os genes normalizadores mais adequados. Não foi possível analisar a expressão dos genes codificadores de fatores sigma das amostras da estratégia in vivo, devido à baixa concentração de RNA bacteriano das amostras de punção aspirativa. Foi possível detectar alterações nas expressões de vários genes codificadores de fatores sigma nas condições estudadas in vitro. O gene codificador do fator SigD foi o que apresentou maior ativação durante o crescimento bacteriano em Soro Fetal Bovino. Os resultados obtidos pelo presente trabalho sugerem o envolvimento do fator SigD na resposta adaptativa de C. pseudotuberculosis durante crescimento em meio que mimetiza o crescimento no hospedeiro. Após a predição de genes regulados pelo SigD foi possível observar que este fator regula a expressão de genes associados a resposta ao choque térmico, como as proteínas chaperonas, sugerindo assim a importância deste fator, sendo possivelmente importante durante o processo da infecção.