A via de administração vaginal pode ser considerada uma alternativa para diversos tratamentos, tanto de ação farmacológica local como sistêmica. No entanto, o tempo de permanência do fármaco no local da aplicação e a eficácia esperada representam um desafio para o desenvolvimento de formulações. O objetivo deste trabalho foi desenvolver nanocápsulas de superfície catiônica (EUDRAGIT® RS 100) ou aniônica (EUDRAGIT® S 100), contendo ou não o marcador de fluorescência Vermelho do Nilo como um modelo de fármaco lipofílico, e incorporar essas partículas em hidrogéis de quitosana, a fim de aumentar o tempo de residência da formulação na mucosa vaginal, devido às propriedades mucoadesivas desse polímero. Diversas formulações foram preparadas com concentrações crescentes de quitosana e analisadas em termos de pH e comportamento reológico, a fim de selecionar a mais adequada para aplicação vaginal. Os hidrogéis foram produzidos com quitosana 2,5% p/p, com ou sem nanocápsulas. Foi avaliada a aderência (mucoadesividade e perfil lavabilidade) e a capacidade de penetração (microscopia confocal e extração seguido de quantificação do vermelho do nilo) das formulações quando aplicadas em mucosa vaginal de porcas. As suspensões de nanocápsulas apresentaram diâmetro em torno de 200 nm e potencial zeta entre +13 mV (NC-RS) e -13 mV( NC-S) e valores de pH entre 5,1 e 6,2. A formulação de quitosana apresentou viscosidade característica e pH ácido (em torno de 4,5), ideal para aplicação vaginal. Os testes de mucoadesão mostraram que as formulações propostas contendo nanocápsulas poliméricas apresentaram maior adesividade em mucosa vaginal em comparação com a formulação composta somente de quitosana. Através do experimento de lavabilidade não foram encontradas diferenças significativas entre as formulações. No entanto, as técnicas de microscopia confocal e a quantificação após a extração de fluorescência a partir da mucosa demonstraram uma maior penetração de vermelho do nilo quando nanoencapsulado, especialmente em nanocápsulas catiônicas. As formulações desenvolvidas com base no veículo do hidrogel de quitosana e nanocápsulas poliméricas, especialmente as nanocápsulas catiônicas, demonstraram aplicabilidade para a entrega de substâncias hidrofóbicas pela via vaginal. Palavras-chave: quitosana, nanocápsuas, via vaginal, EUDRAGIT® RS100, EUDRAGIT® S100. / The vaginal route of administration might be an alternative for several treatments, either for local or systemic pharmacological effect. However, the permanence of the drug at the site of application and its expected effectiveness represent a challenge in the development of formulations. Thus, the objective of this work was to develop nanocapsules with cationic or anionic surface charge, containing or not nile red as a model of lipophilic substance, and to incorporate such particles into chitosan vehicle in order to increase the residence time of the formulation due to chitosan mucoadhesive properties. Several formulations prepared with increasing chitosan concentrations were analyzed in terms of pH and rheological behaviour in order to select the most suitable one for vaginal application. Gel formulations were produced with chitosan at 2.5% w/w, with or without nanocapsules. The adhesion (tensile stress test and washability profile) and penetration enhancement properties (confocal microscopy- CLSM and extraction followed by quantification) of the formuations, when applied on porcine vaginal mucosa, were evaluated. The nanocapsule suspensions presented adequate properties and pH values around 5.1 and 6.2. The chitosan formulation presented a characteristic viscosity and an acid pH (around 4.5), which is suitable for vaginal application. Mucoadhesion tests showed that the proposed formulations containing polymeric nanocapsules had higher adhesion to the vaginal mucosa in comparison with the formulation containing only chitosan. The washability evaluation showed no significant differences between the formulations. However, the confocal microscopy and the fluorescence quantification after extraction from the mucosa showed higher penetration of nile red when nanoencapsulated, especially into cationic-charged nanocapsules. The formulations developed, based on chitosan gel vehicle and polymeric nanocapsules, especially the cationic nanocapsules, demonstrated applicability for the vaginal delivery of hydrophobic substances.

As ações da atividade física na neuroquímica dos neurônios, com enfoque às proteínas ligantes de cálcio (Ca2+), e o estado de ativação de células gliais da medula espinal do rato foram investigadas em preparados imuno-histoquímicos através da análise morfométrica e microdensitométrica com auxílio do computador. Ratos machos adultos foram divididos em dois grupos: treinado, cujos animais foram expostos à roda de corrida onde realizava atividade física espontânea, por um período de 4 e 14 noites; e sedentário, onde os animais foram mantidos em caixas individualizadas, sem a roda de corrida. Após os períodos determinados, os animais sofreram eutanásia e suas medulas espinais foram processadas para imunohistoquímica. Os ligantes de Ca2+ neuronal e glial foram avaliados pela imunorreatividade das proteínas calbindina e parvalbumina e, ainda, pela imunorreatividade da proteína S100 astrocitária. A atividade física voluntária promoveu uma diminuição na imunorreatividade da proteína calbindina em nível torácico no corno posterior (lâminas I e II de Rexed), assim como no núcleo espinal lateral após 14 dias. No nível lombar, também se observou uma diminuição da imunorreatividade no corno posterior (lâminas I e II de Rexed). Contudo os animais submetidos à atividade física voluntária por 4 dias apresentaram um aumento na área imunorreativa da proteína parvalbumina em relação ao seu controle. Efeito semelhante ocorreu no núcleo dorsal nos grupos que treinaram por 4 e 14 dias. Entretanto, no fascículo cuneiforme ocorreu uma diminuição da imunorreatividade à parvalbumina. Já em relação à proteína S100, os animais treinados apresentaram um aumento na imunorreatividade (spMGV) no corno anterior. Assim, conclui-se que a atividade física voluntária modificou a imunorreatividade das proteínas ligantes de Ca2+ na medula espinal, o que pode estar associado aos mecanismos de ativação intracelular realizados pelo cálcio, bem como a liberação de neurotransmissores na fenda sináptica. / Actions of the physical activity in the neurochemistry focuzing calcium-bindin proteins and the activation of the glial cells in the spinal cord of the rat were investigated with imunohistochemistry over. Male wistar adult rats were divided in two groups: trained, which animals exercised in the wheel running for 4 and 14 nigths; and sedentary, which animals were maintained in private box without wheel running. After that period rats were sacrificed and their spinal cords were processed to imunohistochemistry. Calcium-bindin proteins neuronal (parvalbumin and calbindin) and glial (S100) were evaluted. The activity promoted a decrese in the imunoreativite of the calbindin protein in the torácic level of the posterior horn (lamina I and II of Rexed), and lateral spine nucle after 14 days. In the lombar level, decrese in the posterior horn was also found. Animals submited to physic activity for 4 days showed an increased in the imunoreatived area of parvalbumin. Similar effect was observed all of groups that were treineds for 4 e 14 days. However, in the cuneiforne fascicule, parvalbumin decreased. The S100 protein showed decresed in the anterior horn. In conclusion volunteer phisical activity changed the pattern of the calcium-bindin protein immunoreactivity in the spinal cord, effect than can be associated to neuroplasticity.

A disfunção cognitiva é definida como alterações dos processos mentais e sua detecção é feita com auxílio de testes neuropsicológicos. Pesquisas vem sendo realizadas na tentativa de estabelecer prováveis marcadores neurobioquímicos precoces para estimar morte neuronal. O presente estudo avaliou 24 cães distribuídos em dois grupos: GC grupo controle (até 8 anos) (n=10) e GI grupo idoso (acima de 8 anos) (n=14). Todos os animais foram submetidos ao tratamento periodontal sob anestesia geral e avaliados previamente quanto à presença de outras doenças sistêmicas. Para tal foram submetidos a teste neurológico completo, exame cardiológico e à colheita de sangue venoso periférico para realização de hemograma completo, perfil renal e hepático. Os animais foram avaliados quanto a cognição com auxílio de duas escalas neuropsicológicas (ARCAD e CCDR) e à avaliação dos valores séricos das proteínas marcadoras de danos neuronais (NSE e S100β), nos períodos pré e pós-operatórios. Constatou-se aumento significativo da proteína S100β no GI em relação ao GC (p=0,014) no momento pré-operatório, e também entre os momentos pós-extubação nos animais do GC (p=0,04). Por meio das escalas comportamentais empregadas, não foi possível detectar a disfunção cognitiva no pós-cirúrgico de cães idosos submetidos a procedimento cirúrgico-anestésico. Os valores obtidos da proteína S100β sugerem que os animais idosos possuem possível neuroinflamação pré-operatória, ocasionada por inflamação sistêmica ou mesmo central; entretanto não foi possível correlacionar com as escalas comportamentais empregadas / Cognitive dysfunction is defined as changes in mental processes and it detection is performed with the aid of neuropsychological tests. Recently research has been conducted in attempt to establish early neuro biochemicals markers to estimate neuronal death. This study evaluated 24 dogs that were distributed into two groups: CG - control group (up to 8 years old) (n = 10) and EG - elderly group (over 8 years) (n = 14). All animals underwent periodontal treatment under general anesthesia and were previously evaluated to detect the presence of systemic diseases. A complete neurological and cardiac examination were performed in all animals and also a peripheral venous blood samples were collected for blood count, kidney and liver profile. The animals were assessed for cognition by using two neuropsychological scales (ARCAD and CCDR) and the assessment of serum levels of protein markers of neuronal damage (NSE and S100β) pre and postoperatively. A significant increase in S100β protein in EG compared to the CG (p = 0.014) in the preoperative period was observerd and also between the post-extubation times in the animals of CG (p = 0.04). Through behavioral scales used it was not possible to detect cognitive dysfunction in the postoperative elderly dogs underwent surgical - anesthetic procedure. The values of S100β protein suggest that elderly animals may have preoperative neuroinflammation caused by systemic or central inflammation; however we could not correlate with the behavioral scales

1. Hintergrund Das Schädel-Hirn-Trauma (SHT) stellt eine der häufigsten Todesursachen und Begleitverletzungen bei nichtnatürlichen Todesfällen dar und ist damit Gegenstand der Routine-Untersuchungen in der Rechtsmedizin. Eine Abschätzung der Überlebenszeit (ÜLZ, d.h. der Zeitraum zwischen der Verletzungsentstehung und dem Todeseintritt) ist für die Chronologie eines Tatablaufs und Überprüfung von Zeugenaussagen / Alibiangaben von großer Bedeutung. Primär werden hierfür postmortal pathomorphologische und klassische histologische Befunde herangezogen. Immunhistochemische Untersuchungen haben bisher kaum Eingang in die Überlebenszeitdiagnostik gefunden, könnten aber zur Konkretisierung der bisher gängigen Methoden beitragen. Häufig untersuchte Proteine im Gehirn sind das S100-Protein (S100) und die Neuronenspezifische Enolase (NSE). Die Spiegel beider Marker werden im klinischen Alltag vielfach zur Abschätzung der Schwere und der Prognose eines SHT im Blut und Liquor gemessen. Immunhistochemisch wurden beide Proteine bisher vor allem auf deren allgemeines Vorhandensein und Verteilung im Zusammenhang mit SHT untersucht. Nur eine Studie beschäftigte sich bisher mit einer möglichen zeitlichen Dynamik. 2. Fragestellungen Folgende Fragen sollten durch vorliegende Arbeit beantwortet werden:  Existiert eine Korrelation zwischen dem Anteil positiv auf S100 gefärbter Gliazellen (Astroglia und Oligodendroglia) und der Überlebenszeit?  Ist eine Korrelation zwischen dem Anteil positiv auf NSE gefärbter Neuronen und der Überlebenszeit möglich?  Welche lokalisationsspezifische Veränderungen in den untersuchten Hirnregionen (Umgebung der Kontusion, Hippocampus, Kleinhirn) in Bezug auf die Überlebenszeit existieren?  Gibt es signifikante Unterschiede zwischen Fall- und Kontrollgruppe? 3. Material und Methoden Für diese Untersuchung wurden Hirngewebeproben aus 57 gerichtlich angeordneten Sektionen verwendet. Davon wiesen 47 ein tödliches SHT und ÜLZ zwischen wenigen Sekunden und 34 Tagen auf. Zehn Fälle mit kardiovaskulären Todesursachen wurden als Kontrolle herangezogen. Die Überlebenszeiten der Fälle mit tödlichem SHT wurden in Übereinstimmung mit bisherigen Studien in folgende Kategorien eingeteilt: Akuter Todeseintritt nach SHT (ÜLZ bis 2 Stunden), subakuter Todeseintritt nach SHT (ÜLZ 2 Stunden bis 4 Tage) und verzögerter Todeseintritt nach SHT (ÜLZ über 4 Tage). Die zur Untersuchung gelangten Proben wurden spätestens 6 Tage nach dem Versterben der Personen entnommen (Mittelwert 2,7 Tage). In allen Fällen wurde die Umgebung der Kontusion, bei 35 dieser Fälle der Hippocampus und bei 31 der Fälle auch das Kleinhirn untersucht. Die verschiedenen Regionen wurden jeweils gesondert für Rinde und Mark bzw. im Hippocampus für Stratum pyramidale und radiatum beurteilt. Die immunhistochemische Färbung auf S100 und NSE wurde mit der indirekten Dextran-Polymer-Methode (DakoCytomation), die Gegenfärbung mit Hämatoxylin nach Mayer durchgeführt. Verwendet wurden ein polyklonaler S100-Kaninchen-Antikörper sowie ein monoklonaler NSE-Maus-Antikörper (beide DakoCytomation). Für die semiquantitative Evaluation wurden gefärbte und ungefärbte Neuronen, Oligodendrozyten sowie Astrozyten in jeweils 20 High Power Fields gezählt. So konnte für jede Region und Zellart ein Prozentsatz positiver Zellen ermittelt werden. Für die statistische Auswertung wurde SPSS Statistics (Version 21, 2012 IBM) und OpenOffice Calc (Version 3.4.1, 2012 Apache Software Foundation) verwendet, es kamen der Mann-Whitney-Wilcoxon-Test (nicht-parametrisch), die Spearman-Korrelation und die Benjamini-Hochberg-Prozedur zum Einsatz. Eine Zustimmung zu dem der Promotionsschrift zugrunde liegendem Forschungsvorhaben wurde durch die Ethik-Kommission der Medizinischen Fakultät der Universität Leipzig erteilt (Nr. 117-12-23012012). 4. Ergebnisse Äußere Einflüsse. Es konnte keine Korrelation zwischen dem Anteil positiver Zellen und der Leichenliegezeit (rs= -0.27 bis 0.15, p = 0.1 bis 0.96) oder dem Geschlecht (p = 0.07 bis 0.98) festgestellt werden. Aufgrund des häufigeren Auftretens verzögerter Todeseintritte bei älteren Personen (rs = 0,33, p < 0.05) konnte keine sinnvolle Korrelation zwischen Alter und Zellpositivität durchgeführt werden. Zellzahlen insgesamt. Zur Qualitätssicherung und zur Vergleichbarkeit mit anderen Studien, wurden die Zellzahlen insgesamt erfasst. Hierbei wurden keine signifikanten Unterschiede in den unterschiedlichen ÜLZ-Kategorien festgestellt. Die Zellzahlen in den SHT-Fällen waren hingegen signifikant niedriger als in den Kontrollfällen. Unterschiede in den Kategorien der Überlebenszeit. Die Anteile S100-positiver Oligodendrozyten waren in Kontusionsumgebung signifikant niedriger in der Gruppe mit subakutem Todeseintritt als in der Gruppe mit akutem Todeseintritt (p < 0,05) sowie der Kontrollgruppe (p < 0,05). Im Hippocampus waren die Anteile S100-positiv gefärbter Oligodendrozyten in der Gruppe der akuten sowie subakuten Todeseintritte niedriger als in der Kontrollgruppe (jeweils p < 0,05). Im Vergleich mit der Kontrollgruppe waren die Anteile NSE-positiver Neuronen sowohl im Hippocampus als auch in der Kontusionsumgebung in der Gruppe der akuten Todeseintritte (jeweils p < 0,05) höher. Die Anteile NSE-positiver Neuronen im Hippocampus sanken in der Gruppe der subakuten im Vergleich zur Gruppe der akuten Todeseintritte ab (p < 0,05). Astrozyten zeigten bei dieser Studie keine signifikanten Unterschiede in ihrem Färbeverhalten in Bezug auf die ÜLZ. Überraschenderweise zeigten sich in den Gruppen mit subakutem und verzögertem Todeseintritt auch S100-positive Neuronen im Hippocampus und der Kontusionsumgebung. Diese Beobachtung konnte in der Akutphase nach Traumatisierung und in der Kontrollgruppe nicht gemacht werden. Im Hippocampus war eher eine diffuse neuroplasmatische, in der Kontusionsumgebung eine eher juxtanukleäre Färbung zu finden. In beiden Regionen war die Verteilung der S100-positiven Neuronen unsystematisch oft in räumlicher Nähe zu S100-positiven Gliazellen zu finden.

O tratamento da afecção de disco intervertebral tóraco-lombar com eletroacupuntura tem o objetivo de analgesia e reabilitação motora e sensorial. As melhoras funcionais observadas após lesão medular decorrem de fenômenos de plasticidade sináptica, correspondendo a um mecanismo compensatório e não de reparo estrutural. S100&beta; é considerado um fator neurotrófico glial que pode estar relacionado a estas alterações. Durante o período de fevereiro de 2007 a junho de 2008 foi realizado um estudo clínico prospectivo em cães com extrusão de disco intervertebral (n=10) submetidos à eletroacupuntura (grupo EA) sem o uso de corticosteróides. Foram coletadas amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) destes animais em dois momentos: durante o exame de mielografia e/ou tomografia computadorizada (M1) e após 35.5±21.33 dias de tratamento (M2). Níveis de S100&beta foram investigados no LCR de cães do grupo EA através da técnica de Western blot. LCR de cães sem sinais neurológicos (grupo normal, n=7) foram utilizados para comparação. Para a análise estatística, com nível de significância de 5%, foram utilizadas ANOVA para medidas repetidas e medidas independentes e comparação múltipla de Bonferroni, teste t-Student para a comparação entre duas médias e correlação linear de Pearson para as variáveis quantitativas. Todos os animais do grupo EA, graus de lesão 3 a 5, obtiveram melhora neurológica crescente e significativa (P-valor <0.001) através da Escala Funcional Numérica (EFN) nos M1 e M2 e M3 (momento da última avaliação). O grupo EA foi dividido em grupo A - cães com retorno à locomoção em até 30 dias (6.7±7.89; n=7) e grupo B - após 30 dias (76±17.06; n=3) do tratamento. Níveis de S100&beta; (Média±DP) em cães do grupo A foram superiores no M1 (P-valor=0.0107) em relação ao M2 e grupo normal, mas entre M2 e grupo normal não houve diferença significativa (P-valor=0.423). No entanto, níveis de S100&beta; em cães do grupo B foram superiores no M2 (P-valor=0.039) em relação ao M1 e normal, e não houve diferença significativa entre M1 e grupo normal (P-valor=0.756). Níveis de S100&beta; no M1 não diferiram (P-valor=0.069) entre os grupos A e B. Entretanto, níveis de S100&beta; no M2 em cães do grupo B foram superiores (P-valor=0.032) ao M2 em cães do grupo A. Não houve correlação dos níveis de S100&beta; no M1 com idade (r2=0.2042, P-valor=0.189); peso (r2=0.02634, P-valor=0.654), evolução clínica (r2=0.0062; P-valor=0.828), tempo de retorno à locomoção (r2=0.2522; P-valor=0.139) e extensão da extrusão (r2=0.0345; P-valor=0.607). Níveis de S100&beta; no M1 não apresentaram diferenças significativas entre os graus de lesão 3, 4 e 5 (P- valor=0.931); entre o grupo com escores de compressão extradural 1 e 2 comparado com grupo com escore de compressão 3 (P-valor=0.771); entre grupo de cães com EFN10 (P-valor=0.520) e entre grupo de cães com escores de nº de lesões 1, 2, 3 e 4 (P- valor=0.526). Níveis de S100&beta; no M2 não apresentaram diferenças significativas com a evolução clínica (r2=0.0304; Pvalor=0.629), extensão da extrusão (r2=0.0158; Pvalor=0.729), entretanto houve uma tendência a correlação com o tempo de retorno à locomoção (r2=0.3852; P-valor=0.055). A eletroacupuntura promoveu uma modulação dos níveis de S100&beta; detectados no LCR de cães com extrusão de disco intervertebral tóraco-lombar. A eletroacupuntura induziu aumento de S100&beta; no LCR de cães com recuperação motora tardia sugerindo sua contribuição na plasticidade neural após injúria da medula espinhal devido à extrusão de disco intervertebral. / Electroacupuncture treatment in dogs with thoracolumbar disk disease has the purpose of analgesia, motor and sensorial rehabilitation. The functional improvements observed after spinal cord lesion are resulting of synaptic plasticity. This fact is a result of compensatory mechanisms and not structural repair. S100&beta; is considered a glial neurotrophic factor. It can be involved with these improvements. A prospective clinical study during February 2007 to June 2008 evaluated electroacupuncture (EA) treatment (group EA) in dogs with thoracolumbar disk extrusion (n=10) without corticosteroids. Cerebrospinal fluids (CSF) were collected from these animals in two time points: during the mielography and/or computed tomography (M1) and after 35.5±21.33 (Mean±SD) days after EA treatment (M2). S100&beta; levels in CSF were investigated in dogs of group EA by Western blot. CSF of dogs without neurological signs (group normal; n=7) were used for comparisons. For the statistical analysis, significant level of 5%, ANOVA for repeated and not repeated variables (post-test Bonferroni´s), Student-t test for two variables comparisons and Pearsons linear correlation for quantitative variables, were used. All dogs (group EA) with lesion levels of dysfunction 3 to 5, reached neurological improvements with significant higher scores (P-value<0.001) from a functional numerical score (FNS) at each successive time points (M1; M2; M3 last evaluation). Group EA dogs were divided in group A - dogs with return of ambulation before 30 days (6.7±7.89; n=7) and group B - after 30 days (76±17.06; n=3). S100&beta; levels (Mean±SD) in group A dogs were higher in M1 (P-value=0.0107) than M2 and group normal, and there was not significant difference between M2 and group normal (P-value=0.423). Although, S100&beta; levels in group B dogs were higher in M2 (P-value=0.039) than M1 and group normal, and there was not significant difference between groups B M1 and normal (P-value=0.756). S100&beta; levels in M1 were not different (P-value=0.069) between dogs of group A and B. However, S100&beta; levels at M2 in group B dogs were significantly higher (P-value=0.032) than group A. The S100&beta; levels in M1 have no correlation with age (r2=0.2042; P-value=0.189); weight (r2=0.0263; P-value=0.654), duration of clinical signs (r2=0.0062; P-value=0.828), time of ambulation return (r2=0.2522; P-value=0.139) and extrusion length (r2=0.0345; P-value=0.607). There were no associations between S100&beta; levels at M1 and lesion levels of dysfunction 3, 4 e 5 (Pvalue=0.931); between extradural compression scores 1 and 2 compared with score 3 (Pvalue=0.771); between dogs with FNS10 (Pvalue=0.520) and between group of dogs with number of lesions scores 1, 2, 3 and 4 (Pvalue=0.5262). S100&beta; levels at M2 have no correlation with duration of clinical signs (r2=0.0304; Pvalue=0.629), extrusion length (r2=0.0158; P-value=0.729), however there was a tendency of correlation with time of ambulation return (r2=0.3852; Pvalue=0.055). Electroacupuncture can modulate the S100&beta; levels in CSF of dogs with thoracolumbar disk extrusion. Electroacupuncture up-regulated S100&beta; in CSF of dogs with late motor rehabilitation. This fact suggests its contribution in the neural plasticity after spinal cord lesion due to intervertebral disk extrusion.

O tratamento da afecção de disco intervertebral tóraco-lombar com eletroacupuntura tem o objetivo de analgesia e reabilitação motora e sensorial. As melhoras funcionais observadas após lesão medular decorrem de fenômenos de plasticidade sináptica, correspondendo a um mecanismo compensatório e não de reparo estrutural. S100&beta; é considerado um fator neurotrófico glial que pode estar relacionado a estas alterações. Durante o período de fevereiro de 2007 a junho de 2008 foi realizado um estudo clínico prospectivo em cães com extrusão de disco intervertebral (n=10) submetidos à eletroacupuntura (grupo EA) sem o uso de corticosteróides. Foram coletadas amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) destes animais em dois momentos: durante o exame de mielografia e/ou tomografia computadorizada (M1) e após 35.5±21.33 dias de tratamento (M2). Níveis de S100&beta foram investigados no LCR de cães do grupo EA através da técnica de Western blot. LCR de cães sem sinais neurológicos (grupo normal, n=7) foram utilizados para comparação. Para a análise estatística, com nível de significância de 5%, foram utilizadas ANOVA para medidas repetidas e medidas independentes e comparação múltipla de Bonferroni, teste t-Student para a comparação entre duas médias e correlação linear de Pearson para as variáveis quantitativas. Todos os animais do grupo EA, graus de lesão 3 a 5, obtiveram melhora neurológica crescente e significativa (P-valor <0.001) através da Escala Funcional Numérica (EFN) nos M1 e M2 e M3 (momento da última avaliação). O grupo EA foi dividido em grupo A - cães com retorno à locomoção em até 30 dias (6.7±7.89; n=7) e grupo B - após 30 dias (76±17.06; n=3) do tratamento. Níveis de S100&beta; (Média±DP) em cães do grupo A foram superiores no M1 (P-valor=0.0107) em relação ao M2 e grupo normal, mas entre M2 e grupo normal não houve diferença significativa (P-valor=0.423). No entanto, níveis de S100&beta; em cães do grupo B foram superiores no M2 (P-valor=0.039) em relação ao M1 e normal, e não houve diferença significativa entre M1 e grupo normal (P-valor=0.756). Níveis de S100&beta; no M1 não diferiram (P-valor=0.069) entre os grupos A e B. Entretanto, níveis de S100&beta; no M2 em cães do grupo B foram superiores (P-valor=0.032) ao M2 em cães do grupo A. Não houve correlação dos níveis de S100&beta; no M1 com idade (r2=0.2042, P-valor=0.189); peso (r2=0.02634, P-valor=0.654), evolução clínica (r2=0.0062; P-valor=0.828), tempo de retorno à locomoção (r2=0.2522; P-valor=0.139) e extensão da extrusão (r2=0.0345; P-valor=0.607). Níveis de S100&beta; no M1 não apresentaram diferenças significativas entre os graus de lesão 3, 4 e 5 (P- valor=0.931); entre o grupo com escores de compressão extradural 1 e 2 comparado com grupo com escore de compressão 3 (P-valor=0.771); entre grupo de cães com EFN10 (P-valor=0.520) e entre grupo de cães com escores de nº de lesões 1, 2, 3 e 4 (P- valor=0.526). Níveis de S100&beta; no M2 não apresentaram diferenças significativas com a evolução clínica (r2=0.0304; Pvalor=0.629), extensão da extrusão (r2=0.0158; Pvalor=0.729), entretanto houve uma tendência a correlação com o tempo de retorno à locomoção (r2=0.3852; P-valor=0.055). A eletroacupuntura promoveu uma modulação dos níveis de S100&beta; detectados no LCR de cães com extrusão de disco intervertebral tóraco-lombar. A eletroacupuntura induziu aumento de S100&beta; no LCR de cães com recuperação motora tardia sugerindo sua contribuição na plasticidade neural após injúria da medula espinhal devido à extrusão de disco intervertebral. / Electroacupuncture treatment in dogs with thoracolumbar disk disease has the purpose of analgesia, motor and sensorial rehabilitation. The functional improvements observed after spinal cord lesion are resulting of synaptic plasticity. This fact is a result of compensatory mechanisms and not structural repair. S100&beta; is considered a glial neurotrophic factor. It can be involved with these improvements. A prospective clinical study during February 2007 to June 2008 evaluated electroacupuncture (EA) treatment (group EA) in dogs with thoracolumbar disk extrusion (n=10) without corticosteroids. Cerebrospinal fluids (CSF) were collected from these animals in two time points: during the mielography and/or computed tomography (M1) and after 35.5±21.33 (Mean±SD) days after EA treatment (M2). S100&beta; levels in CSF were investigated in dogs of group EA by Western blot. CSF of dogs without neurological signs (group normal; n=7) were used for comparisons. For the statistical analysis, significant level of 5%, ANOVA for repeated and not repeated variables (post-test Bonferroni´s), Student-t test for two variables comparisons and Pearsons linear correlation for quantitative variables, were used. All dogs (group EA) with lesion levels of dysfunction 3 to 5, reached neurological improvements with significant higher scores (P-value<0.001) from a functional numerical score (FNS) at each successive time points (M1; M2; M3 last evaluation). Group EA dogs were divided in group A - dogs with return of ambulation before 30 days (6.7±7.89; n=7) and group B - after 30 days (76±17.06; n=3). S100&beta; levels (Mean±SD) in group A dogs were higher in M1 (P-value=0.0107) than M2 and group normal, and there was not significant difference between M2 and group normal (P-value=0.423). Although, S100&beta; levels in group B dogs were higher in M2 (P-value=0.039) than M1 and group normal, and there was not significant difference between groups B M1 and normal (P-value=0.756). S100&beta; levels in M1 were not different (P-value=0.069) between dogs of group A and B. However, S100&beta; levels at M2 in group B dogs were significantly higher (P-value=0.032) than group A. The S100&beta; levels in M1 have no correlation with age (r2=0.2042; P-value=0.189); weight (r2=0.0263; P-value=0.654), duration of clinical signs (r2=0.0062; P-value=0.828), time of ambulation return (r2=0.2522; P-value=0.139) and extrusion length (r2=0.0345; P-value=0.607). There were no associations between S100&beta; levels at M1 and lesion levels of dysfunction 3, 4 e 5 (Pvalue=0.931); between extradural compression scores 1 and 2 compared with score 3 (Pvalue=0.771); between dogs with FNS10 (Pvalue=0.520) and between group of dogs with number of lesions scores 1, 2, 3 and 4 (Pvalue=0.5262). S100&beta; levels at M2 have no correlation with duration of clinical signs (r2=0.0304; Pvalue=0.629), extrusion length (r2=0.0158; P-value=0.729), however there was a tendency of correlation with time of ambulation return (r2=0.3852; Pvalue=0.055). Electroacupuncture can modulate the S100&beta; levels in CSF of dogs with thoracolumbar disk extrusion. Electroacupuncture up-regulated S100&beta; in CSF of dogs with late motor rehabilitation. This fact suggests its contribution in the neural plasticity after spinal cord lesion due to intervertebral disk extrusion.

The aim of this work was to prepare, characterize and evaluate the in vitro cytotoxicity of Eudragit S100® nanocapsules (NC) containing ketoprofen. The nanostructured suspensions were prepared in triplicate by the method of interfacial deposition of preformed polymer. Caprilic/capric triglyceride or rosehip oil were used as the oil core in the preparation of such formulations. Previously, tests of swelling/dissolution of the films of Eudragit S100® were performed and showed the feasibility of using both oils as the core of the NC. The results of the physico-chemical characterization of the systems (pH, size, zeta potential, content, encapsulation efficiency) showed no significant differences between the various types of formulations. The concentration of ketoprofen in the formulations was very close to the theoretical concentration, indicating no loss or degradation of the drug during the preparation process. The encapsulation efficiency of ketoprofen in NC was higher than 90%. The particle size of the formulations was found in the range of 173-197 nm, which is in accordance to the method of preparation employed. Regarding the in vitro release, the mathematical analysis of the profiles showed a first order kinetics with drug diffusion as release mechanism. In order to evaluate the influence of the oil component in the ketoprofen photodegradation, samples were exposed to UVC radiation. The photodegradation was less evident in the rosehip oil NC, probably due to the greatest antioxidant potential of this oil. The in vitro cytotoxicity assay evaluated the viability of 3T3 cell line against four concentrations of ketoprofen (1, 10, 50 and 100 μM) for 24 and 48 hours. After 48 hours of exposure, there was a reduction in cell viability in all tested groups. However, this decrease was not significantly different from the control group. Thus, the prepared formulations can be considered promising alternatives for the delivery of ketoprofen in inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. / O objetivo deste trabalho foi preparar, caracterizar e avaliar in vitro a citotoxicidade de nanocápsulas (NC) de Eudragit S100® contendo cetoprofeno. As suspensões nanoestruturadas foram preparadas em triplicata pelo método de deposição interfacial do polímero pré-formado. Triglicerídeos de cadeia média (TCM) ou óleo de rosa mosqueta (ORM) foram utilizados como núcleo oleoso na preparação de tais formulações. Previamente, foram realizados testes de inchamento/dissolução dos filmes de Eudragit S100®, os quais revelaram a viabilidade do emprego de ambos os óleos como núcleo das NC. Os resultados da caraterização físico-química dos sistemas (pH, tamanho, potencial zeta, teor, eficiência de encapsulamento) não demonstraram diferenças consideráveis entre os diferentes tipos de formulações. O teor de cetoprofeno nas suspensões nanoestruturadas foi muito próximo à concentração teórica, indicando ausência de perda ou degradação do fármaco durante o processo de preparação. Obteve-se uma taxa de associação do cetoprofeno às NC superior a 90%. O tamanho de partícula nas formulações encontrou-se na faixa de 173 a 197 nm, resultados compatíveis com o método de preparação empregado. Quanto à liberação in vitro, a análise matemática dos perfis demonstrou uma cinética de primeira ordem com difusão do fármaco como mecanismo de liberação. A fim de avaliar a influência do componente oleoso frente à fotodegradação do cetoprofeno, amostras foram expostas à radiação UVC. A fotodegradação foi menos evidente nas NC contendo ORM como núcleo, possivelmente pelo maior potencial antioxidante deste óleo. O teste de citotoxicidade in vitro avaliou a sobrevivência de fibroblastos da linhagem 3T3 frente a quatro concentrações de cetoprofeno (1, 10, 50 e 100 μM) em 24 e 48 horas. Após 48h de exposição, observou-se uma redução da viabilidade celular para todos os grupos testados. Contudo, esta diminuição não foi diferente significativamente do grupo controle. Desta forma, as formulações preparadas podem ser consideradas promissoras para veiculação do cetoprofeno em doenças como a artrite reumatoide.

Durch Analyse der Subtraktion-cDNA Bibliothek einer humanen Lungentumor Zelllinie haben wir ein neues Mitglied der S100 Genfamilie identifiziert und charakterisiert, welches S100A14 benannt wurde. Die vollständige cDNA hat eine Länge von 1067 bp und kodiert für ein Protein von 104 Aminosäuren, welches die S100-spezifische Kalzium-bindende Domäne enthält. Das Gen wird in normalen humanen Epithelien ubiquitär exprimiert, zeigt jedoch Expressionsverluste in vielen Tumorzelllinien. Im Gegensatz zu Tumorzelllinien ist S100A14 auf mRNA- und Proteinebene in vielen humanen Primärtumoren stärker exprimiert, unter anderem in Lungen- und Brustkarzinomen. Um den Mechanismus der erhöhten S100A14 Expression in Lungen- und Brustkarzinomen zu verstehen, haben wir die Effekte des EGF (epidermal growth factor) und des TGF-alpha (transforming growth factor-alpha) untersucht. Beide Faktoren sind Liganden des ERBB Rezeptors und induzieren in der immortalisierten bronchialen Epithelzelllinie S100A14 Expression. Unter Verwendung spezifischer Inhibitoren konnte gezeigt werden, dass für die EGF-vermittelte transkriptionelle Induktion der ERK1/2 Signalweg (extracellular signal-regulated kinase) verantwortlich ist und eine de novo Proteinsynthese erfordert. Diese Ergebnisse unterstützend konnte immunhistologisch eine signifikante Korrelation zwischen der Überexpression von ERBB2 und S100A14 in primären Brustkarzinomen nachgewiesen werden. Phorbolester-12-Myristat-13-Acetat (PMA) verstärkte gleichfalls die S100A14 mRNA Expression in 9442 Zellen, was eine Regulation durch die Protein Kinase C (PKC) vermuten lässt. Die PMA-induzierte Expression von S100A14 wird ebenso wie die TGF-alpha/EGF-Induktion durch die Aktivierung des ERK1/2 Signalweges vermittelt. In Anbetracht der großen Bedeutung der ERK1/2 und PKC Signalwege in der Tumorentstehung und Tumorprogression ist zu vermuten, dass S100A14 über die aberrante Regulation dieser Signalwege an die maligne Transformation gekoppelt ist. / By analysing a human lung tumour cell line subtraction cDNA library, we have identified and characterized a novel member of the human S100 gene family that we designated S100A14. The full-length cDNA is 1067 bp and encodes a putative protein of 104 amino acids. The predicted protein contains the S100-specific EF-hand calcium-binding domain. The gene is ubiquitously expressed in normal human tissues of epithelial origin. S100A14 transcript was found to be down-regulated in many immortalized and tumour cell lines from diverse tissues. In contrast to the tumour cell lines, S100A14 shows up-regulation at the mRNA and protein level in many human primary tumours, including lung and breast carcinomas. To elucidate mechanisms whereby S100A14 expression is enhanced in lung and breast tumours, we studied the effects of epidermal growth factor (EGF) and transforming growth factor-alpha (TGF-alpha) on its expression. Both are ligands of ERBB receptor and induced S100A14 expression in the immortalized bronchial epithelial cells. By use of specific inhibitors, we found that EGF-mediated transcriptional induction of S100A14 involves extracellular signal-regulated kinase (ERK1/2) signalling and requires de novo protein synthesis. In support of these findings, we demonstrated by immunohistochemistry a significant correlation between ERBB2 and S100A14 protein overexpression in primary breast carcinomas. Our studies showed that the phorbol ester 12-myristate 13-acetate (PMA) increases S100A14 mRNA expression in immortalized bronchial epithelial cells suggesting regulation by protein kinase C (PKC). Similar to TGF-alpha/EGF induction, the PMA-induced S100A14 expression was also mediated by activation of the ERK1/2 signalling cascade. Considering the importance of the ERK1/2 and PKC signalling pathways in tumour development and progression we suggest that it is the aberrant regulation of these signalling cascades that couples S100A14 to malignant transformation.

För att diagnostisera malignt melanom och dess undergrupper används immunhistokemi för att färga in celler som uttrycker specifika protein. Särskilt desmoplastiska melanom kan initialt felbedömas baserat på utseendet som ärr, och det är därför viktigt att ha sensitiva antikroppar för att diagnostisera dem. Elva arkiverade patientprover (varav tre epiteloida melanom, fyra spolcelliga, tre desmoplastiska och ett akralt lentiginöst) färgades in med antikroppar mot CK18, HMB-45, Melan-A, S100, SOX10 och synaptophysin. Alla prover var negativa för CK18, nio var positiva för HMB-45 och Melan-A (de negativa var båda desmoplastiska melanom) och alla var positiva för S100 och SOX10. Synaptophysin var positiv i alla epiteloida melanom och det akralt lentiginösa melanomet, två av de fyra spolcelliga melanomen och negativ i alla desmoplastiska melanom. Fördelarna med SOX10, som tidigare studier i ämnet har påvisat, observerades inte i denna studie, troligen på grund av begränsningen i patientmaterial. Trots det verkar SOX10 vara ett användbart tillägg i melanompanelen, eller kanske till och med kan ersätta S100, baserat på tidigare studier.

O diabetes mellitus tipo I é uma enfermidade autoimune relacionada com anormalidades genéticas, influenciada por fatores ambientais, que resultam na destruição de células β-pancreáticas, mediadas por células T. O diabetes durante a gravidez aumenta o risco a alterações no sistema nervoso central. O processo de gliogênese é importante para o desenvolvimento e funcionamento do SNC e começa na segunda semana de gestação, em ratos. A glia é composta por astrócitos, oligodendrócitos, células ependimais e microglia. Os astrócitos são as células mais abundantes e responsáveis pela integração do cérebro com o sistema vascular e imunológico, estando relacionados com as funções cognitivas, além de uma importância física e estrutural na barreira hemato-encefálica. Duas proteínas astrocíticas foram estudadas aqui: a proteína glial fibrilar acida e a S100B, uma proteína ligante de cálcio, produzida e secretada por astrócitos. A S100B está envolvida na comunicação neurônio-glia, possuindo propriedades neurotróficas ou neurotóxicas de acordo com a concentração extracelular. A expressão da proteína glial fibrilar ácida é essencial para a estrutura encefálica e para a integridade da barreira hemato-encefálica. Assim avaliamos essas proteínas gliais na prole oriunda de mães diabéticas (PoD) no desenvolvimento corporal e do sistema nervoso central. Foram utilizadas ratas Wistar-Kyoto diabéticas induzidas por estreptozotocina para obtenção da prole. As fêmeas diabéticas induzidas apresentaram ninhadas menores do que o controle, e os filhotes apresentam menor peso ao nascer A hiperglicemia materna induz aumento da produção insulínica no feto, que leva a um quadro de hipoglicemia pós-natal. Os níveis glicêmicos do PoD foram superiores ao controle (PoC) com 1 dia, e inferiores com 21 dias. A mensuração da proteína S100B no soro de animais PoD14 apresentou diminuição em relação ao controle. A S100B no líquor mostrou valores foram maiores no PoD7. Já a S100B no hipocampo mostrou um crescimento progressivo, com diminuição no PoD14 e um aumento no PoD28. Na quantificação da proteína glial fibrilar acida os animais do grupo PoD7 e PoD14 apresentaram valores menores, em seguida os níveis começaram a subir. No teste de campo aberto os animais PoD apresentaram comportamento ansioso. Já no reconhecimento de objetos os ratos PoD exploraram menos o objeto novo, tanto na memória de curta como de longa duração. As mudanças astrogliais observadas nos animais do grupo PoD estão muito provavelmente relacionadas a alterações da plasticidade neuroglial e ao déficit cognitivo observado. / The type I diabetes mellitus is an autoimmune disease associated with genetic abnormalities, influenced by environmental factors which result in the destruction of pancreatic β-cells, mediated by T cells. Diabetes during pregnancy increases the risk of changes in the central nervous system. The gliogenesis process is important to the development and functioning of the central nervous system and starts the second week of rat gestation. The glia is composed of astrocytes, oligodendrocytes, ependymal cells and microglia. The astrocytes are more abundant cells and responsible for the integration of the brain with vascular and immune systems, being connected with the cognitive functions, as well as a physical and structural importance of the blood-brain barrier. Two astrocity proteins were studied: glial acidic fribrilar protein and S100B, a binding protein of calcium produced and secreted by astrocytes. S100B is involved in neuron-glia communication, having neurotoxic or neurotrophic properties according to the extracellular concentration. Expression of glial acidic fribrilar protein is essential for brain structure and integrity of the blood-brain barrier. So we evaluated this glial proteins the offspring derived from diabetic mothers (PoD) on body development and central nervous system. Wistar-Kyoto rats with diabetes induced by streptozotocin to obtain offspring. Induced diabetic females had smaller litters then the control, and the offsprig have a lower birth weigth Maternal hyperglycemia induces increased insulin production in the fetus. Blood glucose levels were higher in PoD than the control (PoC) with 1 day and less than 21 days. The measurement of S100B protein in PoD14 animal serum showed a decrease compared to the control. The S100B in cerebrospinal fluid showed values were higher in PoD7. Since S100B in the hippocampus showed a progressive increase with decrease in PoD14 and increase in PoD28. Glial acidic fribrilar protein quantification in animals of PoD7 and PoD14 group showed lower values, and then levels began to rise. In the open field test the PoD animals showed anxious behavior. Since the object recognition (RO) least rats explored the new object in both short and long term memory. Induced diabetic females had smaller litters than the control, and the chicks have a lower birth weight. Maternal hyperglycaemia induces increased insulin production in the fetus, which leads to a postnatal hypoglycemia. The variations observed in the animals of group PoD caused biochemical changes related to astroglial plasticity, which caused cognitive impairment.