A leptina é um mediador tanto de respostas neuroendócrinas como imunes, e tem sido associada a diversas autoimunidades. O nosso objetivo foi estudar a importância da leptina na modulação da resposta imunológica no transplante experimental, com ênfase em seu papel na plasticidade de linfócitos T e de células dendríticas (DC). Observamos que os animais deficientes em leptina têm uma sobrevida aumentada do enxerto de pele e uma menor frequência de células Th1 e maior T reguladoras (Treg), Th2 e Th17. Ademais, células T CD4+ naive diferenciam-se mais eficientemente em células Treg e Th17 tanto com DC como sem DC, na ausência de leptina. Nossos dados indicam que BMDC, imaturas e maduras, é comprometida na ausência de leptina, induzindo menor proliferação de linfócitos CD4+ e maior geração/expansão de células Treg, Th17 e Th2. Assim, a ausência de leptina resultou num predomínio de células Treg um padrão Th2 que, em conjunto com o perfil tolerogênico das DC, poderiam ser um dos mecanismos responsáveis pelo aumento da sobrevida do enxerto alogenêico de pele. / Leptin is a mediator of both neuroendocrine and immune responses, and has been associated with several autoimmune diseases. Our objective was to study the importance of leptin in modulating the immune response in experimental transplantation, with emphasis on its role in the plasticity of T lymphocytes and dendritic cells (DC). We observed that animals leptin deficient had an increased skin graft survival and lower frequency of Th1 and increased regulatory (Treg), Th2 and Th17 T cells. Furthermore, naive CD4+ T cells differentiate more efficiently in Treg and Th17 cells, with DC and without DC, in the absence of leptin. Our data indicate that BMDC, mature and immature, is compromised in the absence of leptin, leading to less proliferation of CD4+ and increased generation / expansion of Treg cells, Th2 and Th17. Thus, the lack of leptin resulted in a predominance of Th2 and Treg T cells, which together with the profile of tolerogenic DC could be one of the mechanisms responsible for increased survival of allograft skin.

A inflamação é um evento intrínseco ao transplante que é desencadeado após o dano causado pela cirurgia. No presente trabalho realizou-se a caracterização fenotípica e funcional das células inflamatórias presentes no enxerto, após o transplante alogênico ou singênico de pele em camundongos. Os resultados obtidos mostraram diferenças significativas na produção de citocinas pró e anti-inflamatórias entre o transplante alogênico e singênico, diferenças já detectáveis nas primeiras 24 horas pós-transplante. Mostrou-se que existe produção aumentada de IL-10 no transplante singênico em relação ao transplante alogênico indicando que a produção de IL-10 no enxerto possui um importante papel para o aceite de transplantes de pele. Além disso, na ausência de IL-10, a rejeição de enxertos alogênicos apresentou-se acelerada e surpreendentemente uma grande parcela dos enxertos singênicos não foi aceita e apresentava aspecto de fibrose com grande deposição de colágeno. O conjunto dos dados indica que a IL-10 possui um importante papel regulatório na inflamação local do enxerto. / Inflammation is an intrinsic event of transplantation that occurs due to to damage caused by surgery. In this study, phenotypic and functional characterization of inflammatory cells present in the graft was performed, after allogeneic or syngeneic skin transplantation in mice. Our results show significant differences in the production of pro and anti-inflammatory cytokines between the syngeneic and allogeneic grafts, detectable as early as 24 hours after transplantation. Higher production of IL-10 was shown in the syngeneic grafts in comparison to allogeneic grafts, indicating that production of IL-10 in the graft is important for acceptance. This is reinforced by data that shows that in the absence of IL-10, rejection of allografts is accelerated and that, surprisingly, a high percentage of the syngeneic grafts is not accepted as well, or shows fibrosis with high deposition of collagen. Taken together, this data indicates that IL-10 has an important regulatory function in the local inflammation of the graft.

INTRODUÇÃO: As proteínas de choque térmico (HSPs) são proteínas presentes em todos os seres vivos. Elas possuem dupla atividade imunológica, induzindo tanto respostas proinflamatórias quanto imunorreguladoras. Em nosso grupo, estudamos os efeitos imunológicos dos peptídeos da HSP60 nos sistemas humano e murino. OBJETIVOS: Identificar peptídeos da HSP60 potencialmente imunorreguladores no sistema murino, visando a indução de tolerância no contexto do alotransplante. MÉTODOS: Analisamos a capacidade dos diferentes peptídeos de modificar, in vitro a expressão de genes predominantemente imunorreguladores (Foxp3, Gata-3, IDO, IL-4, IL-10, TGF?) ou inflamatórios (T-bet, IL-12p35, IL-12p40, IL-17) por PCR de tempo real, em esplenócitos murinos de animais naive. Consideramos as modificações induzidas pelos peptídeos como REGULA (?expressão de genes imunorreguladores ou ?expressão de genes inflamatórios) ou INFLAMA (?expressão de genes imunorreguladores ou ? expressão de genes inflamatórios). Selecionamos peptídeos que induziram predomínio de modificação da expressão gênica do tipo REGULA, mais promissores como imunorreguladores para ensaios in vivo de indução de tolerância ao aloenxerto de pele murino. RESULTADOS: Os peptídeos mais promissores foram N7, C4, N6, I8, N2 e N3. O peptídeo N7(n=9) induziu uma razão REGULA/INFLAMA=2,71 e induziu a redução da expressão gênica relativa de IL-17 e IL-12p40. O peptídeo C4 (n=6) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,63 e induziu redução da expressão gênica relativa de IL-17 e IL-12p40. O peptídeo N6 (n=8) induziu uma razão REGULA/INFLAMA=1,60, induziu a redução da expressão gênica relativa de T-bet e IL-12p40 e aumentou a expressão de IL-10. O peptídeo I8 (n=5) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,57 e induziu aumento da expressão gênica relativa de IL-17. O peptídeo N2 (n=8) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,32 e induziu redução da expressão gênica relativa de IL-17 e aumento da expressão de IL-10, IL-4 e T-bet. O peptídeo N3 (n=7) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,25 e não teve destaques na modificação gênica induzida. O peptídeo N7 foi testado em protocolos para indução de tolerância do alotransplante de pele murino. Não houve diferença estatística entre os diferentes grupos, a despeito do aumento de sobrevida do aloenxerto de 7 dias no protocolo em combinação com o anticorpo ?CD3 (p=0,38, n=5). DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: O forte impacto imunorregulador de alguns peptídeos da HSP60 na expressão gênica de moléculas imunológicas indica que eles podem ser explorados em imunoterapias. Apesar da existência de variabilidade individual, o peptídeo N7 da HSP60 parece ser um promissor peptídeo imunorregulador. O discreto aumento da sobrevida do aloenxerto de pele induzida pelo peptídeo N7 sugere que a sua combinação com imunossupressores em outros protocolos de indução de tolerância, pode ser uma estratégia útil para aumentar a sobrevida do aloenxerto / INTRODUCTION: Heat shock proteins (HSPs) are proteins present in all living beings. They have dual immunologic functional activity inducing both proinflammatory and regulatory responses. In our group, we study the immunological effects of HSP60 peptides in human and mice. OBJECTIVES: To identify potentially immunoregulatory HSP60 peptides in mice, aiming at tolerance induction in the context of alotransplantation. METHOD: We analyzed the capacity of different HSP60 peptides to modify in vitro the expression of predominantly immunoregulatory genes (Foxp3, Gata-3, IDO, IL-4, IL-10, TGF?) or inflammatory (T-bet, IL-12p35, IL-12p40, IL-17) by Real Time PCR, in naive mice splenocytes. We considered gene modifications induced by the peptides as REG (?expression of immunoregulatory genes or ?expression of inflammatory genes) or INFLAMMA (?expression of immunoregulatory genes or ? expression of inflammatory genes). We selected some promising peptides that induced predominantly REG gene expression modifications as immunoregulatory peptides, to perform in vivo assays of tolerance induction to murine skin allograft. RESULTS: More promising peptides were N7, C4, N6, I8, N2 and N3. The N7 peptide (n=9) induced a REG/INFLAMMA ratio=2,71 and induced gene expression reduction of IL-17 and IL-12p40. The C4 peptide (n=6) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,63 and induced gene expression reduction of IL-17 and IL-12p40. The N6 peptide (n=8) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,60, induced gene expression reduction of T-bet and IL-12p40, and increased expression of IL-10. The I8 peptide (n=5) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,57 and induced increased gene expression of IL-17. The N2 peptide (n=8) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,32 and induced gene expression reduction of IL-17 and increase expression of IL-10, IL-4 and T-bet. The N3 peptide (n=7) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,25 and induced no gene expression modification highlights. The N7 peptide was tested in tolerance mice allograft induction protocols. There was no statistical difference between different groups, despite the 7-day increase in allograft survival with the protocol in combination with the ?CD3 antibody (p=0,38, n=5). DISCUSSION AND CONCLUSION: The strong immunoregulatory impact of some HSP60 peptides in the gene expression of immune molecules indicate that they may be explored for immune therapy. Despite the existence of some interindividual variability, the N7 HSP60 peptide seems to be a promising imunorregulatory peptide. The slight increase in graft survival with the N7 peptide suggests that the combination of HSP60 peptides with other immunosupressors and different tolerance induction protocols may be a way to improve graft survival.

Além de modular o metabolismo energético, o tecido adiposo constitui um regulador endócrino, produzindo fatores como a adiponectina (APN), adipocina pouco expressa na obesidade, com propriedades imunoreguladoras. Neste trabalho investigamos o papel da obesidade e APN em modelos murinho de transplante de pele e doença do enxerto-versus-hospedeiro (GvHD), na obesidade induzida por dieta hiperlipídica (Ob) e animais knockout (KO) para APN. Em suma, receptores Ob e APN KO apresentaram rejeição acelerada de enxerto de pele, associado inflamação do tipo Th1 e Th17. A obesidade também levou a pior GvHD, associado a maior inflamação no fígado, pulmão, intestino junto a dano hepático e intestinal, enquanto a manutenção de dieta HF após o transplante preveniu parciamente este dano. Estudos in vitro corroboraram estes resultados, mostrando maior ativação dendrítica e linfocitária em meio mimetizando a obesidade. Desta forma, este estudo sugere que a obesidade e redução de APN levam a maior rejeição de transplantes sugerindo adiante um papel importante à dieta neste processo. / In addition to modulating energy metabolism, the adipose tissue is an endocrine regulator, producing factors such as adiponectin (APN), an adipokine little in obesity, with immunoregulatory properties. In this work we investigated the role of obesity and APN in skin transplant and graft-versus-host disease (GvHD) in high-fat diet induced obesity (Ob) and knockout (KO) mice for APN. In summary, Ob and APN KO receptors showed accelerated skin graft rejection, associated with Th1 and Th17 type inflammation. Obesity also led to worse GvHD, associated with increased inflammation in liver, lung, intestines along with liver and gut damage, while maintenance of the HF diet after transplantation partially prevented this damage. In vitro studies corroborated these results, showing greater dendritic and lymphocytic activation in conditions mimicking obesity. Thus, this study suggests that obesity and reduced APN lead to greater rejection of transplants further suggesting an important role of diet in this process.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A inflamação é um evento intrínseco ao transplante que é desencadeado após o dano causado pela cirurgia. No presente trabalho realizou-se a caracterização fenotípica e funcional das células inflamatórias presentes no enxerto, após o transplante alogênico ou singênico de pele em camundongos. Os resultados obtidos mostraram diferenças significativas na produção de citocinas pró e anti-inflamatórias entre o transplante alogênico e singênico, diferenças já detectáveis nas primeiras 24 horas pós-transplante. Mostrou-se que existe produção aumentada de IL-10 no transplante singênico em relação ao transplante alogênico indicando que a produção de IL-10 no enxerto possui um importante papel para o aceite de transplantes de pele. Além disso, na ausência de IL-10, a rejeição de enxertos alogênicos apresentou-se acelerada e surpreendentemente uma grande parcela dos enxertos singênicos não foi aceita e apresentava aspecto de fibrose com grande deposição de colágeno. O conjunto dos dados indica que a IL-10 possui um importante papel regulatório na inflamação local do enxerto. / Inflammation is an intrinsic event of transplantation that occurs due to to damage caused by surgery. In this study, phenotypic and functional characterization of inflammatory cells present in the graft was performed, after allogeneic or syngeneic skin transplantation in mice. Our results show significant differences in the production of pro and anti-inflammatory cytokines between the syngeneic and allogeneic grafts, detectable as early as 24 hours after transplantation. Higher production of IL-10 was shown in the syngeneic grafts in comparison to allogeneic grafts, indicating that production of IL-10 in the graft is important for acceptance. This is reinforced by data that shows that in the absence of IL-10, rejection of allografts is accelerated and that, surprisingly, a high percentage of the syngeneic grafts is not accepted as well, or shows fibrosis with high deposition of collagen. Taken together, this data indicates that IL-10 has an important regulatory function in the local inflammation of the graft.

INTRODUÇÃO: As proteínas de choque térmico (HSPs) são proteínas presentes em todos os seres vivos. Elas possuem dupla atividade imunológica, induzindo tanto respostas proinflamatórias quanto imunorreguladoras. Em nosso grupo, estudamos os efeitos imunológicos dos peptídeos da HSP60 nos sistemas humano e murino. OBJETIVOS: Identificar peptídeos da HSP60 potencialmente imunorreguladores no sistema murino, visando a indução de tolerância no contexto do alotransplante. MÉTODOS: Analisamos a capacidade dos diferentes peptídeos de modificar, in vitro a expressão de genes predominantemente imunorreguladores (Foxp3, Gata-3, IDO, IL-4, IL-10, TGF?) ou inflamatórios (T-bet, IL-12p35, IL-12p40, IL-17) por PCR de tempo real, em esplenócitos murinos de animais naive. Consideramos as modificações induzidas pelos peptídeos como REGULA (?expressão de genes imunorreguladores ou ?expressão de genes inflamatórios) ou INFLAMA (?expressão de genes imunorreguladores ou ? expressão de genes inflamatórios). Selecionamos peptídeos que induziram predomínio de modificação da expressão gênica do tipo REGULA, mais promissores como imunorreguladores para ensaios in vivo de indução de tolerância ao aloenxerto de pele murino. RESULTADOS: Os peptídeos mais promissores foram N7, C4, N6, I8, N2 e N3. O peptídeo N7(n=9) induziu uma razão REGULA/INFLAMA=2,71 e induziu a redução da expressão gênica relativa de IL-17 e IL-12p40. O peptídeo C4 (n=6) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,63 e induziu redução da expressão gênica relativa de IL-17 e IL-12p40. O peptídeo N6 (n=8) induziu uma razão REGULA/INFLAMA=1,60, induziu a redução da expressão gênica relativa de T-bet e IL-12p40 e aumentou a expressão de IL-10. O peptídeo I8 (n=5) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,57 e induziu aumento da expressão gênica relativa de IL-17. O peptídeo N2 (n=8) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,32 e induziu redução da expressão gênica relativa de IL-17 e aumento da expressão de IL-10, IL-4 e T-bet. O peptídeo N3 (n=7) induziu razão REGULA/INFLAMA=1,25 e não teve destaques na modificação gênica induzida. O peptídeo N7 foi testado em protocolos para indução de tolerância do alotransplante de pele murino. Não houve diferença estatística entre os diferentes grupos, a despeito do aumento de sobrevida do aloenxerto de 7 dias no protocolo em combinação com o anticorpo ?CD3 (p=0,38, n=5). DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: O forte impacto imunorregulador de alguns peptídeos da HSP60 na expressão gênica de moléculas imunológicas indica que eles podem ser explorados em imunoterapias. Apesar da existência de variabilidade individual, o peptídeo N7 da HSP60 parece ser um promissor peptídeo imunorregulador. O discreto aumento da sobrevida do aloenxerto de pele induzida pelo peptídeo N7 sugere que a sua combinação com imunossupressores em outros protocolos de indução de tolerância, pode ser uma estratégia útil para aumentar a sobrevida do aloenxerto / INTRODUCTION: Heat shock proteins (HSPs) are proteins present in all living beings. They have dual immunologic functional activity inducing both proinflammatory and regulatory responses. In our group, we study the immunological effects of HSP60 peptides in human and mice. OBJECTIVES: To identify potentially immunoregulatory HSP60 peptides in mice, aiming at tolerance induction in the context of alotransplantation. METHOD: We analyzed the capacity of different HSP60 peptides to modify in vitro the expression of predominantly immunoregulatory genes (Foxp3, Gata-3, IDO, IL-4, IL-10, TGF?) or inflammatory (T-bet, IL-12p35, IL-12p40, IL-17) by Real Time PCR, in naive mice splenocytes. We considered gene modifications induced by the peptides as REG (?expression of immunoregulatory genes or ?expression of inflammatory genes) or INFLAMMA (?expression of immunoregulatory genes or ? expression of inflammatory genes). We selected some promising peptides that induced predominantly REG gene expression modifications as immunoregulatory peptides, to perform in vivo assays of tolerance induction to murine skin allograft. RESULTS: More promising peptides were N7, C4, N6, I8, N2 and N3. The N7 peptide (n=9) induced a REG/INFLAMMA ratio=2,71 and induced gene expression reduction of IL-17 and IL-12p40. The C4 peptide (n=6) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,63 and induced gene expression reduction of IL-17 and IL-12p40. The N6 peptide (n=8) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,60, induced gene expression reduction of T-bet and IL-12p40, and increased expression of IL-10. The I8 peptide (n=5) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,57 and induced increased gene expression of IL-17. The N2 peptide (n=8) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,32 and induced gene expression reduction of IL-17 and increase expression of IL-10, IL-4 and T-bet. The N3 peptide (n=7) induced a REG/INFLAMMA ratio =1,25 and induced no gene expression modification highlights. The N7 peptide was tested in tolerance mice allograft induction protocols. There was no statistical difference between different groups, despite the 7-day increase in allograft survival with the protocol in combination with the ?CD3 antibody (p=0,38, n=5). DISCUSSION AND CONCLUSION: The strong immunoregulatory impact of some HSP60 peptides in the gene expression of immune molecules indicate that they may be explored for immune therapy. Despite the existence of some interindividual variability, the N7 HSP60 peptide seems to be a promising imunorregulatory peptide. The slight increase in graft survival with the N7 peptide suggests that the combination of HSP60 peptides with other immunosupressors and different tolerance induction protocols may be a way to improve graft survival.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-27 / Introdução: A úlcera de perna causa sofrimento aos pacientes, afetando seu quotidiano devido a(o): dor, isolamento social, autoimagem e autoestima prejudicadas. Objetivo: Avaliar a qualidade de vida, autoestima, capacidade funcional e dor em pacientes com úlcera venosa pósenxerto de pele. Métodos: Estudo multicêntrico, comparativo e controlado, realizado nos ambulatórios: de Cirurgia Plástica do Hospital São Paulo e de Feridas do Conjunto Hospitalar de Sorocaba. Casuística: 50 pacientes - Grupo Controle; 50 - Grupo Estudo. Aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de São Paulo. Coleta de dados: julho- 2008 a dezembro-2010. Grupo Controle: coleta de dados no momento da inclusão no estudo, aos 30, 90 e 180 dias subsequentes. Grupo Estudo: primeira coleta no pré-operatório - 30, 90 e 180 dias após o enxerto. Instrumentos: Short Form-36, Escala de autoestima Rosenberg/UNIFESP–EPM, Health Assessment Questinnaire-20 (HAQ-20), Escala Numérica de dor, questionário de Dor de Mc Gill. Análises estatísticas: Teste t Student, o TesteKruskal- Wallis, Teste Qui-Quadrado de Independência, considerando-se os níveis de significância p ≤ 0,05. Resultados: avaliação inicial do paciente com úlcera venosa: escores do SF-36 baixos: média 18,10 - Grupo Controle e 32,34 - Grupo Estudo. Um mês após enxerto, pacientes Grupo Estudo apresentaram escores mais elevados no SF-36 (71,38) comparados ao GC (18,42). Após 90 e 180 dias, aumento dos escores no GE comparados ao Grupo Controle(p=0,0001). Escore médio no HAQ-20: 2,42 - Grupo Controle e 2,65 - Grupo Estudo. Grupo Estudo: melhora nos escores após 90 dias e 180 dias do enxerto (p=0,0001). Pela Escala de Autoestima Rosenberg/UNIFESP–EPM, na inclusão dos pacientes no estudo, escore médio no Grupo Controle: 25,50, Grupo Estudo: 25,86. Após 90 dias e 180 dias, Grupo Estudo: melhor escore comparado ao Grupo Controle (p=0,0001). Pela Escala Numérica e pelo Questionário de Dor de Mc Gill, os dois grupos apresentaram dor durante a primeira coleta de dados. Grupo Estudo: após 90 dias e 180 dias de pós-operatório, houve declínio da dor (p=0,0001). Conclusão: Pacientes com úlcera venosa após enxerto de pele melhoraram qualidade de vida, autoestima, capacidade funcional e dor. / Objective: To assess quality of life, self-esteem, functional capacity and pain in patients with venous ulcer after skin graft. Methods: Clinical, multicenter, analytical, prospective, comparative, controlled and non-randomized study. This study was carried out in the plastic surgery outpatient clinic of Hospital São Paulo and in the Wound Outpatient clinic at Conjunto Hospitalar de Sorocaba. The case series was formed by 50 patients in the Control Group (CG) and 50 patients in the Study Group (SG) both with diagnosis of venous ulcer and indication for skin graft. The study was approved by the Research Ethics Committee at the Universidade Federal de São Paulo, under authorization #: 0945/08. Data collection was carried out from July 2008 and December 2010. In the CG, data collection was carried out at the time patients were included in the study, and then 30, 90 and 180 days after the first collection. In the SG, the first collection was carried out in the preoperative period and then 30, 90 and 180 days after skin graft. All patients of the CG were operated on after 180 days. Inclusion criteria were: being over 18 years old and having a diagnosis of venous ulcer with referral for skin coverage with skin graft. Exclusion criteria were: Skin lesions that were not completely characterized as venous ulcer, patients with clinical conditions that contraindicated surgery, and patients that had already undergone skin graft. The instruments used for data collection were: Short Form- 36, the Rosenberg self-esteem scale/UNIFESP–EPM, the Health Assessment Questionnaire-20 (HAQ-20), the Numeric Pain Scale, and the Mc Gill pain questionnaire. For statistical analysis, we have used Students’ t test, Kruskal-Wallis test and the Chi-square test of independence. It was fixed in 0.05 or 5% (p ≤ 0.05). Outcomes: In the initial assessment of patients with venous ulcer, the SF-36 scores were low, with a mean score of 18.10 in the CG, and 32.34 in the SG. One month after skin graft was carried out, patients in the SG presented higher scores in the SF-36 (71.38) compared to the CG (18.42). After 90 and 180 days there was also an increase in the scores of the SG compared to the CG (p=0.0001). Mean scores in the HAQ-20 was 2.42 in the CG and 2.65 in the SG, and in the SG there was an improvement in the scores 90 and 180 days after skin graft was carried out (p=0.0001).As for the Rosenberg self-esteem scale/UNIFESP–EPM, in the inclusion of patients in the study, the mean score was 25.50 in the CG, and 25.86 in the SG, and after 90 days and 180 days the SG presented better score compared to the CG (p=0.0001). As for pain assessment using the Numeric Scale and the McGill pain questionnaire, both groups of patients presented pain during the first data collection, however, in the SG 90 and 180 days after surgery, patients presented less pain (p=0.0001). Conclusion: Patients with venous ulcers, that underwent skin graft presented improvement in the quality of life, self-esteem, functional capacity and less pain. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Introdução: O tratamento de feridas cutâneas é difícil e está em contínua mudança. Entre as múltiplas terapias empregadas uma bastante usada é a enxertia de pele autógena. Sabe-se que o sucesso desta técnica depende, em parte, de haver condições adequadas no leito receptor e da qualidade do enxerto de pele retirado. Ainda, tão importante quanto a técnica cirúrgica, é o método para fixação do enxerto de pele ao leito e respectivo cuidado pós-operatório. Tem sido frequente o uso da terapia de feridas por pressão subatmosférica para fixação e integração de enxertos de pele no tratamento de feridas e habitualmente se coloca uma tela entre a esponja e o enxerto. Não há padronização na literatura médica sobre o que utilizar na tela. Objetivo: Comparar duas telas utilizadas e aferir o quanto cada uma interferia na pressão subatmosférica gerada pela unidade de aspiração contínua da terapia de feridas por pressão subatmosférica, por sua vez configurada para gerar um gradiente de pressão de 125 mmHg em relação à pressão atmosférica ambiente. Métodos: Foram realizados inicialmente dois estudos em voluntários normais para aferir a pressão subatmosférica sob a tela de rayon e sob a tela de poliamida, sobre a pele íntegra. Em um grupo de 30 indivíduos, as medidas foram feitas em tempos diferentes, montando-se e desmontando-se todo conjunto da esponja e de determinada tela sucessivas vezes. Em outro grupo de 15 indivíduos, as medidas foram feitas sequencialmente e com as sondas colocadas em conjunto, sendo metade da esponja sobre a tela de rayon e a outra metade sobre a tela de poliamida. A seguir, foi realizado estudo prospectivo com 30 pacientes portadores de feridas complexas, nos quais a terapia de feridas por pressão subatmosférica foi aplicada. Foram utilizadas tela de rayon e tela de poliamida em cada metade da área enxertada sobre a ferida. A pressão subatmosférica foi aferida sob cada tela e sob a esponja. Resultados: Os resultados mostraram diferença estatisticamente significativa entre as pressões sob as duas telas estudadas e em relação à pressão sob a esponja. Houve apenas uma perda completa de enxerto de pele. Conclusão: Concluiu-se que as diferentes telas estudadas reduziram a pressão subatmosférica gerada pelo dispositivo de aspiração contínua da Terapia de Feridas por Pressão Subatmosférica (TFPS) em comparação com a pressão medida como controle. / Introduction: Wound care is a difficult and ever changing field. Among many therapies employed, autogenous skin grafting is often used. The quality of the skin graft and appropriate conditions of the recipient bed are paramount for the success of this surgical procedure. Moreover, the method of skin graft fixation and postoperative care are as important as the surgical technique itself. Hence, subatmospheric pressure wound therapy has been used in the process of fixation and integration of skin grafts in the treatment of wounds when there is frequently a layer between the sponge and the graft. Thus far there has been no standardization in the medical literature as to which layer to use. Objective: Compare two layers and measure how much each one alone interfered in the subatmospheric pressure generated by the pump used in subatmospheric pressure wound therapy, when set to generate a pressure gradient of 125 mmHg in relation to the atmospheric pressure of the surroundings. Methods: Two pilot studies were, therefore, undertaken of normal volunteers to ascertain the subatmospheric pressure under the rayon layer, under the polyamide layer and under the sponge. In one pilot study, of a total of 30 individuals, their measurements were taken in different moments and the setting was mounted and unmounted three times. In another, of 15 individuals, the measurements were collected within just one setting, as half of the sponge had rayon underlying it and the other half had polyamide beneath it. Therefore another prospective study was undertaken of 30 patients bearers of complex wounds in which both the rayon and the polyamide layer was used for each half of the skin grafted area The subatmospheric pressure measured under each layer and directly under the sponge (control measure) was assessed. Results: The results showed statistically significant differences between the pressure measured on the two layers studied and the pressure measured under the sponge. There was only one total skin graft loss. Conclusion: In conclusion, it was found that the different layers studied did reduce the subatmospheric pressure generated by the pump used in subatmospheric pressure wound therapy as compared with the respective control measure.

INTRODUÇÃO: Os desenluvamentos cutâneos são lesões graves e frequentemente há dificuldade para o cirurgião decidir qual o tratamento mais adequado a ser instituído, o reposicionamento e sutura do retalho ou o desengorduramento do retalho e enxertia da pele avulsionada. A conduta cirúrgica de reposicionamento e sutura do retalho é mais rápida e simples de ser realizada, mantém as características anatômicas e fisiológicas locais, mas frequentemente evolui com perda parcial ou total do retalho avulsionado. O tratamento cirúrgico de adelgaçamento do retalho desenluvado e enxertia da pele obtida tem a desvantagem de resultar em aspecto estético e protetivo inferiores, mas é o tratamento mais utilizado devido à maior taxa de integração do enxerto. Medicações com propriedades de aumentar a perfusão do retalho desenluvado podem permitir a conduta cirúrgica de reposicionamento e sutura do retalho ao seu leito original, mantendo as vantagens da cobertura cutânea original e preservando total ou parcialmente a viabilidade do retalho. Este estudo avaliou o efeito dos fármacos enoxaparina, pentoxifilina e alopurinol na diminuição da área de necrose de retalhos cutâneos avulsionados através da utilização de um modelo experimental de desenluvamento cutâneo em membros inferiores de ratos. MÉTODOS: Os animais foram divididos em 4 grupos com 25 ratos em cada um deles. Os quatro grupos foram submetidos ao modelo proposto de desenluvamento de todo membro inferior, resultando em um retalho de fluxo distal que foi reposicionado ao leito e suturado. O grupo 1 (avulsão / controle) recebeu 1ml de solução salina via intraperitoneal. O grupo 2 (avulsão / enoxaparina) recebeu 1 ml de enoxaparina (320 UI/kg) via subcutânea. O grupo 3 (avulsão / pentoxifilina) recebeu 1 ml de pentoxifilina (25 mg/kg) via intraperitoneal. O grupo 4 (avulsão / alopurinol) recebeu 1 ml de alopurinol (45 mg/kg) via intraperitoneal. As medicações foram infundidas em dose única imediatamente após o reposicionamento e sutura do retalho avulsionado. Os animais foram observados até o 7° dia pós-operatório, quando foram sacrificados e o retalho desenluvado foi retirado e analisado. A área total do retalho e a área de necrose do retalho foram quantificadas para todos os animais e análise estatística foi realizada entre os grupos. RESULTADOS: a mediana da área total do retalho desenluvado (cm2) foi de 5,633 para G1, 5,353 para G2, 5,505 para G3 e de 5,870 para G4 (p = 0,7460). A mediana da área de necrose do retalho desenluvado (cm2) foi de 3,368 para G1, 1,663 para G2, 2,297 para G3 e de 1,888 para G4 (p < 0,0001). Houve diferença estatística entre os pares G1 e G2, G1 e G3, G1 e G4 (p < 0,05). A relação entre a área de necrose e área total do retalho desenluvado para os quatro grupos foi de 63,34% (G1), 32,71% (G2), 41,7% (G3) e 34,85% (G4) (p < 0,0001). Houve diferença estatística entre os pares G1 e G2, G1 e G3, G1 e G4 (p < 0,05). CONCLUSÕES: Houve diminuição da área de necrose em retalhos cutâneos avulsionados em membros inferiores de ratos com a utilização das medicações enoxaparina (G2), pentoxifilina (G3) e alopurinol (G4) quando comparados ao grupo controle (G1). Não houve diferença estatística significativa entre os grupos terapêuticos com relação à área de necrose nos retalhos cutâneos avulsionados (G2 x G3; G2 x G4; G3 x G4) / INTRODUCTION: Degloving injuries may be a challenge when it comes to deciding the surgical approach to be used. Repositioning of the flap and suturing is faster and more straightforward, but often leads to total or partial loss of the avulsed flap. Skin flap deffating and grafting of the detached flap have the disadvantages of resulting in poor aesthetic appearance and being less protective, but they have been the most widely used due to the higher rate of graft take. Pharmacological agents with vascular properties that enhance the viability of the reattached flap could be beneficial to patients with degloving injuries. This study evaluated the effects of enoxaparin, pentoxifylline and allopurinol in reducing necrosis area of avulsed skin flaps through a degloving experimental model in the hind limb of rats. METHODS: Rats were grouped in four groups with 25 rats each. The four groups were subjected to the proposed degloving model of hind limb, resulting in a reverse flow flap. The flap was then repositioned and sutured. Group 1 (avulsion / control) received 1 ml saline solution intraperitoneally. Group 2 (avulsion / enoxaparin) received 1 ml of enoxaparin (320 IU/kg) subcutaneously. Group 3 (avulsion / pentoxifylline) received 1 ml of pentoxifylline (25 mg/kg) intraperitoneally. Group 4 (avulsion / allopurinol) received 1 ml of allopurinol (45 mg/kg) intraperitoneally. Saline solution and medications were infused in single dose after wound closure. The animals were observed until 7 days postoperatively, when they were sacrificed and the degloved flap was removed and analyzed by image processing software. The total area of the avulsed flap and the necrotic area were measured for all animals and statistical analysis was performed between groups. RESULTS: The median total flap area (cm2) was 5.633 for G1, 5.353 for G2, 5.505 for G3 and 5.870 for G4 (p = 0.7460). The median necrotic flap area (cm2) was 3.368 for G1, 1.663 for G2, 2.297 for G3 and 1.888 for G4 (p < 0.0001). There was statistical difference between pairs G1 and G2, G1 and G3, G1 and G4 (p < 0.05). The ratio between the necrotic flap area and total flap area was 63.34% (G1), 32.71% (G2), 41.7% (G3) and 34.85% (G4) (p < 0.0001). There was statistical difference between pairs G1 and G2, G1 and G3, G1 and G4 (p < 0.05). CONCLUSIONS: There was a decrease in necrosis of the avulsed skin flap in the hind limbs of rats with the use of medications enoxaparin (G2), pentoxifylline (G3) and allopurinol (G4) compared to the control group (G1). There was no statistically significant difference in the necrosis area of avulsed skin flaps between treatment groups (G2 x G3; G2 x G4; G3 x G4)