Visceral leishmaniasis or kala-azar is a zoonotic disease of domestic and wild canids, caused by the protozoan Leishmania chagasi and transmitted between dogs and man by the vector Lutzomyia longipalpis. The purpose of this research was to analize the spatial distribution of human and canine cases of visceral leishmaniasis in Aracaju, Sergipe from 2005 to 2012; characterize a nitric oxide resistant and susceptible isolates of L. chagasi from dogs in Aracaju, performing proteomic analysis of it by bidimensional electrophoresis and checking their interaction between dog and fox macrophages. In the analysis of the spatial distribution of the disease during the study period, there were 2060 canine and 110 human cases. It was found that the neighborhoods, Zona de Expansão and Mosqueiro, peripheral areas with lower population densities, recent occupation, poor urban infrastructure, had a number of significant human and canine cases. In Dezoito do Forte, Santos Dumont and America neighborhoods, were isolated nitric oxide resistant Leishmania in dogs and in humans, which could confirm the dog as a source of infection for humans and maybe could confirmation that disease in dogs precedes the occurrence of the disease in humans. Infection of fox macrophages by strains of L. chagasi, revealed that the macrophages control the infection rapidly regardless of whether the strain is resistant or not to nitric oxide. This result corroborates the fact that wild canids such as foxes, have an important role in the sylvatic cycle of visceral leishmaniasis, serving as a reservoir for the disease and rarely displaying clinical forms of the disease, unlike the domestic dog. Proteomic analysis was performed in promastigotes in logarithmic and stationary phase showing a difference in the expression of many proteins in both the promastigote growth phases. As an interesting fact we observed an over-expression of a cytosolic malate dehydrogenase and that it may probably be related to an intrinsic resistance of this isolate to nitric oxide. Related to resistance to nitric oxide, overexpression of trypanothione peroxidase was constant at all stages of the growth curve. Also observed was the overexpression of a calpain that may be responsible for inducing greater susceptibility to antimonials and lower susceptibility to miltefosine. / A leishmaniose visceral (LV) ou calazar é uma zoonose de canídeos silvestres e domésticos, causada pelo protozoário Leishmania chagasi e transmitida entre os canídeos e destes ao homem pelo vetor Lutzomyia longipalpis. Os objetivos deste estudo são analisar a distribuição temporo-espacial de casos de leishmaniose visceral canina e humana em Aracaju, Sergipe de 2005 a 2012; avaliar e comparar a regulação de macrófagos de cão e de raposas na infecção por isolados de L. chagasi através do índice de infecção de macrófagos, e realizar análise proteômica das fases de crescimento logarítmica e estacionária de promastigotas de isolados de L. chagasi resistentes e susceptíveis ao óxido nítrico, através da técnica de eletroforese bidimensional. Na análise da distribuição espacial da doença aconteceram 2060 casos caninos e 110 casos humanos. Foi verificado que os bairros da Zona de Expansão e Mosqueiro, áreas periféricas, com mais baixas densidades populacionais, ocupação recente, baixa renda e infraestrutura urbana pouco presente, tiveram um número de casos caninos e humanos expressivos. Nos bairros Dezoito do Forte, Santos Dumont e América, foram isoladas Leishmania resistentes ao óxido nítrico de cães e humanos, o que poderia confirmar o cão como fonte de infecção para o homem e, talvez, uma confirmação que a doença em cães pode preceder a ocorrência da doença em humanos. A infecção de macrófagos de raposa por cepas de L. chagasi resistentes e susceptíveis ao óxido nítrico, revelou que esses controlam rapidamente a infecção independentemente se a cepa é resistente ou não ao óxido nítrico. Este resultado corrobora o fato de que os canídeos silvestres, como as raposas, têm um papel importante no ciclo silvestre da leishmaniose visceral, servindo de reservatório para a doença e raramente apresentando a forma clínica da doença, diferente do cão doméstico. Foi realizada a análise proteômica de promastigotas em fase logarítmica e em fase estacionária revelando uma diferença na expressão de várias proteínas em ambas as fases de crescimento do promastigota. Como fato mais interessante observou-se um aumento acentuado na expressão de uma malato desidrogenase citosólica e que provavelmente apresenta relação com a resistência intrínseca deste isolado ao óxido nítrico. Relacionada com a resistência ao óxido nítrico, um aumento na expressão da tripanotiona peroxidase foi constante em todas as fases de curva de crescimento. Também foi observado um aumenta na expressão de uma calpaína que poderia ser responsável por induzir susceptibilidade maior aos antimoniais e menor susceptibilidade à miltefosina.

Orientador: Silmara Marques Allegretti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barichello_FabianaFarinelloGrecco_M.pdf: 2472984 bytes, checksum: 2d89f144c96b66ee33bfdbb3f77ce1ee (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A Leishmaniose Visceral Canina, doença grave e fatal, tem o cão como o principal reservatório do seu agente etiológico no meio urbano. Devido ao alto parasitismo cutâneo nestes animais, da quantidade de cães infectados, e do próximo convívio com o homem, as ações desenvolvidas pelo Programa Brasileiro de Controle da Leishmaniose Visceral são centradas no reservatório canino, através da identificação e eutanásia dos animais soropositivos. Sendo assim, a adoção de ações profiláticas, com a utilização de vacinas nos cães, constituiria uma importante ferramenta para a diminuição da doença nestes animais, e consequentemente, da infecção do vetor e da transmissão do agente. Além disso, a adoção de medidas profiláticas, como o uso de coleiras impregnadas com deltametrina, repelentes de uso tópico e vacinas, são as únicas alternativas disponíveis atualmente para os cães, pois no Brasil, o tratamento de cães está proibido desde a publicação da Portaria Interministerial nº 1.426, de 11 de julho de 2008. Apesar de disponível desde 2004, a vacina Leishmune® ainda não é amplamente utilizada no Brasil, principalmente devido à possibilidade dos cães vacinados apresentarem sorologia positiva em inquéritos epidemiológicos, não sendo possível diferenciá-los dos infectados. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o perfil sorológico de cães vacinados e saudáveis que residem em áreas endêmicas, e de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum/ chagasi, e avaliar a possibilidade de diferenciação sorológica a partir dos métodos utilizados atualmente nos inquéritos epidemiológicos oficiais e nos laboratórios de diagnóstico particulares: ELISA e RIFI com antígenos L. major-like, produzidos pelo Laboratório Bio-Manguinhos e ELISA S7, produzido pelo Laboratório Biogene. Todos os soros de cães foram testados nos três métodos, e os resultados demonstraram que nenhum cão vacinado apresentou resultado positivo em mais de um teste. Apenas um cão vacinado (1/39) apresentou resultado de 1:40 na RIFI, e quatro cães (4/39) apresentaram resultado positivo no ELISA L. major-like. Nenhum soro de cão vacinado apresentou resultado positivo no ELISA S7. O único resultado positivo na RIFI foi negativo nos outros dois métodos, e os quatro soros positivos no ELISA L. major-like foram negativos tanto na RIFI quanto no ELISA S7. Estes resultados sugerem reações falso-positivas, e demonstram que, de acordo com o Manual de Vigilância Epidemiológica, se os soros de cães vacinados forem testados em dois métodos (ELISA e RIFI), a possibilidade de um cão vacinado apresentar resultado positivo será remota. Desta maneira, a vacinação da população canina não dificultaria as ações atualmente empregadas para o controle da Leishmaniose Visceral, mas poderia, no futuro, ser somada as medidas já adotadas, evitando assim a eutanásia de cães / Abstract: Canine Visceral Leishmaniasis, serious and fatal disease, has the dog as main reservoir of the agent Leishmania infantum in urban environment. The control actions developed by the Brazilian Program of Visceral Leishmaniasis Control are focused on the canine reservoir through identification and euthanasia of seropositive animals, due to high cutaneous parasitism in these animals, the amount of infected dogs and the closeness to the human being. Therefore, the adoption of prophylactic measures like dog vaccination would be an important tool to reduce the number of infected dogs and consequently the vector infection and the disease transmission. Besides that, the adoption of prophylactic measures in these animals, like the usage of deltametrin embedded collars, topic usage repellent and vaccines are the only available alternatives for these animals, since dogs treatment has been forbidden by law in Brazil since 2008. Although it has been available since 2004, the Leishmune® vaccine is not widely used in Brazil yet, especially due to the possibility of vaccinated dogs showing positive serology, being impossible to differentiate them from infected dogs. The objective of this work was to evaluate the serologic profile of healthy and vaccinated dogs who live in endemic areas and of naturally infected dogs with Leishmania Infantum/ chagasi, and also evaluate the possibility of serologic differentiation using the same methods nowadays adopted by official epidemiological surveys and in private diagnosis laboratories: ELISA and IFA with L. major-like antigens, produced by Bio-Manguinhos Laboratory and ELISA S7, produced by Biogene Laboratory. All the dogs sera were tested in the three methods, and the results showed that no vaccinated dog presented a positive result in more than one test. Only a vaccinated dog (1/39), presented 1:40 in IFA, and 4 dogs (4/39) presented a ELISA L. major-like positive result. No vaccinated dog sera presented positive result in ELISA S7. The only IFA positive result was negative in the other two methods and the four positive sera in ELISA L. major-like were negative either in IFA, as in ELISA S7. These results suggest false positive reactions and demonstrate that according to the Epidemiological Surveillance Manual, if the vaccinated dogs sera are tested in two methods (ELISA and IFA), the possibility of a vaccinated dog to present a positive result is remote. Thus, the vaccination of a big quantity of dogs would not disturb the presently adopted actions for Visceral Leishmaniasis control, but could in the future be added to the already adopted measures, therefore avoiding the dog's euthanasia / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientadores: Angelo Pires do Prado, Claudio Casanova / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:39:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CollaJacques_FernandaElisa_M.pdf: 1220366 bytes, checksum: 236fda152f5e60fc1f34a2bb1295ad2f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Desde 2004, a transmissão canina de leishmaniose visceral americana (LVA) tem sido registrada na área urbana de Espírito Santo do Pinhal, e no decorrer da última década, casos humanos esporádicos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) ocorreram na sua área rural. Este estudo visou ampliar o conhecimento a respeito dos flebotomíneos e a sua ecologia populacional nos ambientes rural, periurbano e urbano desse município. As coletas foram feitas semanalmente, durante um período de 15 meses, com armadilhas luminosas automáticas tipo CDC no peridomicílio de 18 imóveis. Um total de 5.562 flebotomíneos foi coletado, divididos em 17 espécies. As espécies mais freqüentes foram Nyssomyia whitmani (43,5%) e Pintomyia pessoai (28,7%) na área rural, Lutzomyia. longipalpis (52,2%) e NY.whitmani (36,2%) na área periurbana, e Lu. longipalpis (73,0%) na área urbana. As espécies mais abundante, segundo o índice de abundância de espécie padronizado foram, em ordem decrescente, NY.whitmani, Lu. Longipalpis e Evandromyia lenti. A maior riqueza de espécies foi encontrada na área rural, bem como o maior índice de diversidade. O índice de dimilaridade de Sorensen mostrou que as áreas rural e periurbana são as mais similares. Lu. longipaldis foi encontrado em todas as áreas do município durante o período de coleta, e a alta abundância foi encontrada nos períodos posteriores às chuvas. Este fato, somado a presença de cães infectados com Leishmania infantum chagasi na área urbana, representa um risco para o estabelecimento dessa doença na região. A elevada abundância de NY. Whitmani e de PI. Pessoai na área rural e periurbana indicam a possibilidade de ocorrência de novos casos de leishmaniose tegumentar americana e a sua expansão para a área de Espírito Santo do Pinhal / Abstract: Since 2004 there hás been canine transmission of American visceral leishmaniasis (AVL) in the urban area of Espírito Santo do Pinhal and, over the last decade, sporadic human cases of American cutaneous leishmaniasis (ACL) have been recorded in the rural area. This study aime to increase the knowledge of the sand fly communityand its populational ecology in the rural, urban and periurban areas of this municipality. The captures were carried out weekly, over a period of 15 months, with automatic light traps in the surrondingd of 18 proprieties. A total of 5.562 sandflies were colleted, comprised of 17 species. The most abundance species were Nyssomyia whitmani (43,5%) and Pintomyia pessoai (28,7%) in the rural area, Lutzomyia. longipalpis (52,2%) and NY.whitmani (36,2%) in the periurban area, and Lu. longipalpis (73,0%) in the urban area. The highest species richness was found in the rural area, along with the greatest index species diversity. The similarity index, used to compare the different areas, showed that rural and periurban areas were most alike. Lu. Longipaldis was found in all areas of the district during the collection period, and high abundance was usually found after a heavy rain period. This, plus the presence of dogs infected with Leishmania infantum chagasi in the urban area, presents a risk of the establishment of the AVL in the region. The high abundance of Ny. Whitmani and Pi. Pessoai in the rural and periurban areas indicate the possibility of new cases of ACL occurring, and spreading to the periurban area of Espírito Santo do Pinhal / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-07-29T14:11:11Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jorge Yuichi Takata Silva.pdf: 1595788 bytes, checksum: e2f14ba0ab1571dc7b28b9930cb48569 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-30T19:23:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jorge Yuichi Takata Silva.pdf: 1595788 bytes, checksum: e2f14ba0ab1571dc7b28b9930cb48569 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-30T19:28:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jorge Yuichi Takata Silva.pdf: 1595788 bytes, checksum: e2f14ba0ab1571dc7b28b9930cb48569 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-30T19:28:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Jorge Yuichi Takata Silva.pdf: 1595788 bytes, checksum: e2f14ba0ab1571dc7b28b9930cb48569 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Retrospective descriptive and analytical, systematic analysis of the records of patients admitted to the hospital of infectious and parasitic diseases with the diagnosis of visceral leishmaniasis between the years 2004 to 2009, analyzing the clinical, therapeutic and laboratory features of 348 patients with objective to determine the occurrence and frequency of adverse drug reactions (ADR) used in the specific therapy. The indication of meglumine antimoniate (GNM) was the predominant drug of first choice in 318 patients (91.38%), and the mean treatment of 18.6 days (SD ± 1.95) and the average concentration of 611mg/dose ( SD ± 294.4) while the second choice of therapy with amphotericin B deoxycholate (ABDC), we identified a mean of 22.67 days (SD ± 8.14) and average concentration of 24.33 mg / dose (± 13 , 79). We identified the occurrence of ADR 342 in 184 patients (52%), and Type A reactions (N = 337/98, 54%) were predominant and algorithms Karch & Lasagna, provided better sensitivity for determination of causality of ADR. Patients using GMN had 291 responses (85.09%), and the frequent occurrence of hyperthermia (N = 109) in patients aged 5 years or less. Pancreatitis drug was identified on two occasions and classified as serious and identified six cases of elevated transaminase levels after instituting the use of GML and one after therapy with ABDC, as drug-induced hepatitis. Approximately 9.28% of ADR associated with the use of GML, were related to cardiovascular changes. The occurrence of hypokalemia in twelve patients was associated with the ADR frequent use of ABDC. There is need to establish routine monitoring of hospital performance ADR to anti-leishmanial and prospective studies from the results shown in order to evaluate the dose-response relationship for the occurrence of preventable ADR. / Realizado estudo retrospectivo analítico e descritivo, de análise sistemática em prontuários de pacientes admitidos em hospital de referência em doenças infecto-parasitárias com diagnóstico de Leishmaniose Visceral entre os anos de 2004 a 2009, analisando os aspectos clínicos, terapêuticos e laboratoriais de 348 pacientes com objetivo de verificar a ocorrência e frequência de reações adversas a medicamentos (RAM) utilizados na terapêutica específica. A indicação de antimoniato de meglumina (NMG) predominou como medicamento de primeira escolha em 318 pacientes (91,38%), sendo a média de tratamento de 18,6 dias (DP±1,95) e a concentração média de 611mg/dose (DP±294,4) enquanto na terapêutica de segunda escolha, com anfotericina B desoxicolato (ABDC), identificou-se tempo médio de 22,67dias (DP±8,14) e concentração média de 24,33mg/dose (DP±13,79). Foi identificada a ocorrência de 342 RAM em 184 pacientes (52%), sendo reações Tipo A (N=337/98,54%) predominantes e o algoritmos de Karch & Lasagna, apresentou melhor perfil de sensibilidade para determinação de causalidade de RAM. Pacientes em uso de NMG apresentaram 291 reações (85,09%), sendo freqüente a ocorrência de hipertermia (N=109), em pacientes de idade igual ou inferior a 5 anos. A pancreatite medicamentosa foi identificada em duas ocasiões e classificadas como graves e identificados seis casos de elevação de transaminases após instituição do uso de NMG e um após terapia com ABDC, como hepatite medicamentosa. Cerca de 9,28% de RAM associadas ao uso de NMG, foram relacionados a alterações cardiovasculares. A ocorrência de hipocalemia em doze pacientes foi a RAM freqüente associada ao uso de ABDC. Há necessidade de estabelecimento de rotina de monitoramento hospitalar de RAM a leishmanicidas e execução de estudos prospectivos a partir dos resultados demonstrados a fim de avaliar a relação dose-dependente para a ocorrência de RAM preveníveis.

A famÃlia de receptores de potencial transitÃrio (TRP) incluindo o receptor de potencial transitÃrio anquirina, subtipo 1 (TRPA1) tem mostrado ser um alvo terapÃutico potencial para o tratamento da dor aguda e crÃnica. Alguns estudos tÃm demonstrado que a resposta nociceptiva somÃtica se deve à ativaÃÃo dos receptores TRPA1 e sÃo efetivamente modulados atravÃs da ferramenta experimental, HC-030031, um antagonista seletivo. Contudo, existem poucos estudos que avaliam o papel dos receptores TRPA1 na dor visceral. Portanto, investigamos o papel do TRPA1 em modelos animais de nocicepÃÃo visceral induzido por diferentes substÃncias e tambÃm exploramos os possÃveis mecanismos envolvidos. Camundongos Swiss, machos (N=6) receberam carboximetilcelulose 0,5% (veÃculo CMC 0,5%, 1 mL/Kg, v.o.), HC-030031 (75, 150 ou 300 mg/Kg, v.o.), ou L-NAME (10 e 40 mg/Kg, s.c.) ou somente L-Arginina (600 mg/Kg, i.p.), 1 h apÃs foi administrado uma Ãnica injeÃÃo de IFO (400 mg/Kg, i.p.). A nocicepÃÃo visceral foi avaliada atravÃs do teste de Von Frey eletrÃnico previamente (T0) e 12 h (T1) apÃs a injeÃÃo de IFO com estimulaÃÃo abdominal atravÃs de um analgesÃmetro digital. Os resultados foram obtidos em gramas (T0-T1) pela variaÃÃo da hiperalgesia. Em seguida as bexigas dos animais foram removidas para pesagem, anÃlise e foram atribuÃdos escores macro e microscopicamente. Investigou-se, tambÃm, o efeito antinociceptivo visceral do HC-030031 atravÃs do modelo de nocicepÃÃo visceral induzido por Ãleo de mostarda (OM). Os animais foram tratados com CMC 0,5%, HC-030031 (18,75; 37,5 ou 75 mg/kg, v.o.) ou Morfina (5 mg/Kg, s.c.) isoladamente ou receberam Naloxona (2 mg/Kg, i.p.) previamente a estas drogas. Em seguida, OM 0,75% (50 &#956;L/colon) foi instilado localmente no cÃlon. A nocicepÃÃo visceral foi verificada atravÃs do teste de Von Frey previamente (T0) e 10 min. (T1) apÃs a injeÃÃo do OM. Em outro protocolo experimental, os animais foram tratados com CMC 0,5% (10 mL/kg, v.o.) ou HC-030031 (18,75; 37,5 ou 75 mg/Kg, v.o.) previamente a uma injeÃÃo intraperitoneal com Ãcido acÃtico 0,6% (AA, 10 mL/Kg,), zymosan (Zym, 1 mg/cavidade) ou misoprostol (MPT, 1 Âg/cavidade, um anÃlogo estÃvel de prostaglandinas). Imediatamente apÃs a injeÃÃo desses algogÃnicos, contabilizaram-se as contorÃÃes abdominais por 30 min. Adicionalmente, para investigar o papel de cÃlulas peritoneais residentes sobre o efeito do HC-030031, a cavidade peritoneal dos camundongos foi lavada com uma soluÃÃo de 30 mL (PBS + heparina) e os estÃmulos AA, Zym e MPT foram injetados i.p. Um grupo Sham foi incluÃdo tambÃm neste protocolo. Ao final do experimento, as contorÃÃes abominais foram registradas por 30 mim. Utilizou-se para a anÃlise estatÃstica, ANOVA/Student e Newman/Keul, foi considerado significativo um p < 0,05 (CEPA: Protocolo: 92/10). A IFO induziu significativa (p<0,05) nocicepÃÃo visceral (6,25Â1,08) e resposta inflamatÃria [escores edema 2(1-3); hemorragia 3(1-3) e peso bexiga (42,78 3,10)] comparado com o grupo salina (1,97Â0,89),[ 0(0-0); 0(0-0) e 20,01 0,7749] respectivamente. AlÃm disso, HC-030031(75 mg/Kg) e L-NAME (10 e 40 mg/Kg) preveniram de maneira significativa (p<0,05) da resposta nociceptiva (2,30Â1,07; 1,58Â0,86 e 0,2500  0,73) respectivamente quando comparado com o grupo IFO. O prÃ-tratamento com L-Arginina (6,844Â1,235) reverteu o efeito antinociceptivo do L-NAME 10 mg/Kg, (6,84Â1,23), mas foi ineficaz sobre o efeito do L-NAME 40 mg/Kg (1,500Â0,7361) e HC-030031 75 mg/Kg (0,7200Â0,6953). Contudo, o prÃ-tratamento com HC-030031 nÃo apresentou efeito antiinflamatÃrio. Adicionalmente, verificou-se que o OM induziu significativo (p<0,05) comportamento nociceptivo (6,333Â0,9458) quando comparado ao grupo salina (1,250Â0,9204). AlÃm disso, o HC-030031 preveniu de maneira significativa da resposta nociceptiva provocada pelo OM (1,536 Â0,7653). Avaliou-se tambÃm o envolvimento do sistema opiÃide no efeito antinociceptivo do HC-030031. Verificou-se que a morfina apresentou uma importante atividade antinociceptiva (0,07143Â0,07143) contra a nocicepÃÃo induzida por OM a qual foi significativamente revertida pelo prÃ-tratamento com naloxona (3,125 1,302). Por outro lado, o efeito antinociceptivo do HC-030031 nÃo foi afetado pela naloxona (2,240Â1,263). Adicionalmente, AA, Zym e MPT induziram respostas de contorÃÃes abdominais significativas (43,71Â4,43; 11,00Â2,11 e 9,00Â2.30, respectivamente) as quais foram significativamente inibidas com HC-030031 (18,75, 37,5 ou 75 mg/kg, v.o.) em todas as doses utilizadas no teste com AA (29,07%; 53,35% e 41,59%), no teste com Zym (55,85%; 61,03% e 71,20%) e no teste com MPT (63,88%; 83,33% e 88,88%). Uma vez que a prostaglandina ativa o nociceptor diretamente, demonstrou-se que o HC-030031 possivelmente inibe a nocicepÃÃo visceral atravÃs da estabilizaÃÃo direta de nociceptores. O efeito antinociceptivo do HC-030031 parece ser independente da inibiÃÃo de cÃlulas residentes inflamatÃrias, do Ãxido nÃtrico ou do sistema opiÃide. Este estudo fornece perspectivas para o manuseio da dor visceral atravÃs da modulaÃÃo dos canais TRPA1. / The description of the TRP family of receptors including TRPA1 has provided potential therapeutic targets for treating acute and chronic pain. Some studies have shown a somatic nociceptive response due to the TRPA1 receptors activation which is effectively modulated with the experimental tool, HC-030031, a TRPA1 antagonist. However, there are a few studies evaluating the role of TRPA1 receptors in visceral pain. Then aimed to investigate the role of TRPA1 in the animal models of visceral nociception induced by different substances and to explore the possible mechanisms involved. Swiss male mice (n=6) were given only Carboxymethyl cellulose (vehicle CMC 0.5%, 1 mL/kg, p.o.), the compound HC-030031 (75, 150 or 300 mg/Kg, p.o.) or L-NAME (10 or 40 mg/Kg, s.c.) alone or with L-arginine (600mg/Kg, i.p.) 1h previously a alone injection of IFO (400 mg/kg, i.p.). Visceral nociception was assessed through the von Frey test previously (T0) and 12h (T1) later IFO injection by the abdominal stimulation with a pressure meter. The results were obtained in grams (T0-T1). The bladder of these animals were also removed to weighted (BWW), analyzed and after given scores macro and microscopically. We also investigated the antinociceptive effect of HC-030031 in the model of mustard oil-induced visceral nociception. The animals were treated with CMC 0.5% or HC-030031 (18.75, 37,5 or 75 mg/kg) or Morphine (5 mg/Kg, s.c.) alone or with Naloxone (2 mg/Kg, i.p.) 1h previously the injection of Mustard oil (MO) 0,75% (MO, 50 ul/colon). Visceral nociception was assessed through the von Frey test previously (T0) and 10 min (T1) after MO injection by the abdominal stimulation with a pressure meter. The results were obtained in grams (T0-T1). In another experimental setting, the animals were treated with CMC 0.5% (1 mL/kg, p.o) or HC-030031 (18.75; 37.5 or 75mg/Kg, p.o.) previously an intraperitoneal injection with acetic acid 0.6% (AA, 10 mL/kg), zymosan (Zym, 1 mg/cavity) or misoprostol (MPT, a stable prostaglandin analogous, 1&#956;g/cavity) and immediately had the writhing responses counted for 30 min. In order to investigate the role of resident peritoneal cells on the effect of HC-030031, we washed the peritoneal cavity of mice with heparin added PBS (30 mL) and then AA, Zym or MPT were injected i.p. A Sham group was included. Eventually, the writhing responses were recorded. Statistical analysis was performed with ANOVA/Student Newman Keul as appropriate. p<0.05 was accepted. (CEPA: Protocol 92/10). IFO induced significant (p<0.05) visceral nociception (6.25Â1.08) and inflammatory response [scores to edema 2(1-3); hemorrhage 3(1-3); and bladder wet weight (42.78  3.1)] in comparison with saline treated group (1.97Â0.89), [0(0-0); 0(0-0); 20.01 0.7749] respectively. Moreover, HC-030031(75) and L-NAME (10 or 40 mg/Kg) prevented in a significant manner (p<0.05) the nociceptive response (2.30Â1.07; 1.58Â0.860 and 2500Â0.7361) respectively when compared with IFO-treated group. Although the pretreatment with L-arginine (6.844Â1.235) was able to reverse the antinoceceptive effect of L-NAME 10 mg/Kg, (6.84Â1.23), it failed to do the same (p>0.05) with L-NAME 40 mg/Kg (1.500Â0.7361) and HC-0300031 75 mg/Kg (0.72Â0.69). The same reversible effect of L-Arginine was observed for the anti-inflammatory activity of L-NAME (p<0.05). However, HC-030031 presented no anti-inflammatory effect. The antinociceptive activity of HC-030031 was also assessed in the MO nociception model. We verified that MO induced a significant (p<0.05) nociceptive behavior (6.333Â0.9458) when compared to saline injected mice (1.250Â0.9204). Moreover, HC-030031 prevented in a significant manner the nociceptive response elicited by MO (1.536Â0.7653). Furthermore, the involvement of opioid system in the antinociceptive effect of HC-030031 as tested. We observed that morphine presented an important antinociceptive activity (0.07143Â0.07143) against MO-induced nociception which was significantly reverted by naloxone pre-treatment (3.125 1.302). On the other hand, the antinociceptive effect of HC-030031 remained in spite the injection of naloxone (2.240Â1.263). In addition to that, AA, Zym and MPT induced significant writhing responses (43.71Â4.43; 11.00Â2.11; 9.00Â2.30; respectively) which was significantly inhibited with HC-030031(18.75, 37.5 e 75 mg/kg, p.o.) treated mice in all the doses tested (29.07%, 53.35% and 41.59%, in the AA test, 55.85%, 61.03% and 71.20%, in the Zym test, 63.88%, 83.33% and 88.88%, in the MPT induced nociception, respectively to 18.75, 37.5 and 75 mg/kg doses. Eventually, the reduction of cell population in the peritoneal cavity prevented the development of writhing responses in both AA and Zym injected mice, with no effect was visualized on MPT treated mice. We the conclude that, since prostaglandin activates the nociceptor directly, it was shown that HC-030031 inhibits visceral nociception possibly through the stabilization of the neuronal ends. The antinociceptive effect of HC-030031 seems to be independent of the inhibition of inflammatory resident cells, opioid and nitric oxide pathways. This study provides perspective for the effective management of visceral pain through the modulation of TRPA1 channels.

Made available in DSpace on 2016-08-16T18:18:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Andressa Almeida Santana.pdf: 1466363 bytes, checksum: ae0eefc75fb09cd9f96594f4e5656ed5 (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / Canine babesiosis and canine visceral leishmaniasis (CVL) are vector borne diseases, where dogs exert a play as reservoir or source for arthropods responsible by the transmission of these protozoosis. Babesia canis vogeli, is transmited by tick Rhipicephalus sanguineus while Leishmania infantum (sin. Leishmania chagasi) is transmited by sand fly (Lutzomyia longipalpis). The results showed that CVL remains endemic in São Luís Municipality. Despite that the coinfection between Leishmania and Babesia was low considering that both diseases are endemic in this tropical area. Beside that was observed that Yorkshire terrier presented higher predisposition to acquire the infection by B. canis vogeli. A remarkable result was the occurrence of ocular lesions associated to L. infantum infection. / A babesiose canina e a leishmaniose visceral canina são doenças transmitidas por vetores, sendo os cães competentes reservatórios e fonte alimentar dos artrópodes envolvidos. Babesia canis vogeli, é um parasita intraeritrocitário transmitido pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus. Leishmania infantum (sin. Leishmania chagasi) transmitidos a mamíferos pela picada dos flebotomíneos (Lutzomyia longipalpis), infectando macrófagos do Sistema Fagocítico Mononuclear do hospedeiro. O presente trabalho é divido em capítulos e os resultados encontrados mostraram que a leishmaniose visceral canina ainda é endêmica no município de São Luís, e que apesar disso a taxa de coinfecção com Babesia foi baixa. Também foi observado que a raça Yorkshire terrier, dentre as raças estudadas, apresentou maior predisposição para contrair a infecção por B. canis vogeli. Outro resultado significativo foi a ocorrência de lesões oculares associadas à infecção por L. infantum.

Made available in DSpace on 2016-08-19T17:47:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane Costa de Carvalho.pdf: 1454881 bytes, checksum: 831238c6d9864b9fca7efc9ba6164541 (MD5) Previous issue date: 2007-09-25 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / The municipal district of Raposa located in the State of Maranhão, Brazil, is an endemic area of human and canine visceral leishmaniasis. Dogs are considered to be the principal Leishmania chagasi reservoir in this location. The objective of this study was to examine the relative levels of parasitic DNA in different tissues of infected dogs and their association with clinical signs of Leishmaniasis. We initiated this study by collecting blood samples from 233 distinct dogs that were analyzed by means of serological diagnosis. Of all examined dogs, 69 were positive in the anti-Leishmania ELISA. According to technical reasons only 27 of the Leishmania infected dogs could be recaptured and studied. The animals were classified according to their clinical signs in asymptomatics (10 animals), oligosymptomatics (8 animals) and polysymptomatics (9 animals) groups. A quantitative PCR method was developed and established in order to examine the parasitic load in blood, bone marrow, lymph node, spleen and skin. The parasite could be detected in lymph nodes of all animals analyzed (100%). The tissue with the highest parasitic load was lymph nodes followed by spleen, blood, bone marrow and skin. Comparing all analyzed tissues, the lymph nodes presented the highest levels of parasitic DNA, without exception, regardless their symptoms classification. Contrary to various other studies, we have detected the lowest parasitic DNA concentration in skin tissues. The quantitative PCR assay established in this study was sensitive, fast and inexpensive for qualitative and quantitative analyses of the Leishmania chagasi DNA. The canine lymph node is the most frequently infected tissue, with greater levels of parasitic DNA, and may be considered a target tissue for leishmaniasis monitoring in dogs. / O município de Raposa (Maranhão, Brasil) é uma área endêmica de leishmaniose visceral humana e canina. Neste município, cães são considerados o principal reservatório de Leishmania chagasi. O objetivo deste estudo foi investigar a concentração do DNA parasitário em diferentes tecidos de cães infectados e sua associação com sinais clínicos de leishmaniose. Iniciamos este estudo com a coleta de sangue de 233 cães para diagnóstico sorológico da infecção. Dentre todos os cães examinados, 69 apresentaram anticorpos anti-Leishmania no teste ELISA. Destes, apenas 27 puderam ser recapturados e estudados. Os animais foram classificados de acordo com avaliação clínica em assintomáticos (n=10); oligossintomáticos (n=8) e polissintomáticos (n=9). A técnica de PCR quantitativa foi desenvolvida e padronizada para avaliar a concentração de DNA parasitário em sangue, medula, linfonodo, baço e pele. O parasito foi detectado em todas as amostras de linfonodo analisadas (100%). O tecido com os maiores níveis de DNA parasitário foi o linfonodo, seguido pelo baço, sangue, medula e pele. Comparando-se os tecidos analisados, o linfonodo foi o tecido com as maiores cargas parasitárias, sem exceção, entre animais assintomáticos, oligossintomáticos e polissintomáticos. Contrariamente a outros estudos, detectamos baixos níveis de DNA parasitário em amostras de pele. A PCR quantitativa padronizada neste estudo foi um método sensível, rápido e econômico para detectar e determinar os níveis de DNA parasitário de Leishmania chagasi. Em cães, o linfonodo é o tecido mais acometido pelo parasito e com maiores níveis de DNA, podendo ser considerado o sítio ideal para o monitoramento da leishmaniose canina.

Devido ao largo espectro de manifestações na leishmaniose visceral canina (LVC), o exame clínico não é capaz de confirmar o diagnóstico, já que muitos dos sinais clínicos não são exclusivos da LVC, tornando-se imprescindível o diagnóstico laboratorial para confirmação da infecção por L. (L.) infantum chagasi. A sorologia tem sido a primeira escolha para o diagnóstico da leishmaniose canina; porém, a diversidade de técnicas empregadas e de antígenos tem levado a resultados conflitantes. O emprego de formas promastigotas e amastigotas do parasito tem boa concordância no sorodiagnóstico de LVC pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), porém o teste com amastigotas mostrou-se mais sensível sem perda da especificidade. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho do ELISA no sorodiagnóstico da LVC empregando antígeno total bruto de formas amastigotas provenientes de cultura axênica (ELISA-AXE) e amastigotas purificadas de tecido de animal experimental cronicamente infectado (ELISA-AMA) comparando com o desempenho do ELISA feito com antígeno total bruto de formas promastigotas (ELISA-PRO) de L. (L.) infantum chagasi. Foram avaliados 115 soros de cães parasitologicamente positivos para a pesquisa de DNA de Leishmania por PCR, domiciliados a pelo menos 2 anos em municípios com alta transmissão de leishmaniose visceral, classificados em sintomáticos (n=67) e assintomáticos (n=48) de acordo com sinais clínicos e exames laboratoriais. Como controle, foram utilizados 81 soros de cães parasitologicamente negativos oriundos do município sem transmissão comprovada de leishmaniose visceral e 13 soros de cães com outras enfermidades. Os resultados não mostraram diferença significante em sensibilidade, especificidade, valores preditivos e acurácia entre os testes ELISA-AXE, ELISA-AMA e ELISA-PRO, com forte correlação e concordância entre os três antígenos testados. O ensaio de Western Blot mostrou reatividade para proteínas de diferentes pesos moleculares, entre 14 a 178kDa dependendo da fonte de antígeno. Os resultados mostraram desempenho semelhantes nos testes de ELISA com amastigotas axênicas, amastigotas purificadas e promastigotas como fonte de antígeno para sorologia da leishmaniose canina. A ampla e diversificada reatividade no Western Blot com poucas bandas altamente especificas sugere o emprego de quimeras de antígenos de diferentes pesos moleculares oriundos tanto de formas amastigotas como de formas promastigotas do parasito no diagnóstico da LVC / Due to the wide spectrum of manifestations in canine visceral leishmaniasis (CVL), clinical exam is not able to confirm the diagnosis, since many of the signs and symptoms are not exclusive of CVL, making it imperative that the laboratory diagnosis for infection confirmation by L. (L.) infantum chagasi. Since the direct search involves invasive material collection, time-consuming and expensive; the serology has been the first choice for diagnosis of canine leishmaniasis. However, the diversity of techniques employed and antigens have led to conflicting results in both diagnostic routine and applied research. Since the use of promastigotes and amastigotes of L. (L.) infantum chagasi have good agreement on serum diagnosis of CVL by reaction of Indirect Immunofluorescence (RIFI), despite the amastigote test proved more sensitive without loss of specificity. The main objective of this study was to evaluate and compare the performance of ELISA in the CVL using crude total antigen of axenic amastigote and promastigote culture, and purified amastigote from experimental chronically infected animal tissue of L. (L.) infantum chagasi. One hundred and fifty-five sera from dogs residing on areas with high disease incidence were evaluated by PCR and diagnosed positive for Leishmania, these were used as positive control on the present study. The animals were examined clinically and in accordance with the characteristic clinical signs of visceral leishmaniasis and laboratory tests, then were classified into 2 groups: symptomatic (n=67) and asymptomatic (n=48) animals. As negative control, eighty-one sera were used from dogs parasitologically negative by PCR in real time from the municipality without proven transmission of visceral leishmaniasis. The results showed no significant difference in sensitivity, specificity, predictive values and accuracy between ELISA-AXE, ELISA-AMA and ELISA-PRO, with strong correlation and concordance between the three antigens tested. The Western Blot assay showed reactivity for proteins of different molecular weights ranging from 14 to 178kDa depending on the antigen source. The results showed similar performance in the ELISA tests with axenic amastigotes, purified amastigotes and promastigotes as source of antigen for serology of canine leishmaniasis. The broad and diverse reactivity in Western Blot with few highly specific bands suggests the use of antigen chimeras of different molecular weights derived from both amastigote and promastigote forms of the parasite in the diagnosis of LVC

O cão (Canis familiaris) é o principal reservatório de Leishmania (Leishmania) infantum. Sua alta competência em transmitir o parasito para o inseto vetor contribui para a manutenção do ciclo e aumento do risco para os humanos em áreas endêmicas. O amplo espectro de manifestações clínicas da leishmaniose visceral canina (LVC) torna seu diagnóstico bastante complexo, já que essas manifestações podem se sobrepor àquelas causadas por outros agentes infecciosos. Fator agravante é que a infecção, na maior parte das vezes, tem caráter subclínico, podendo passar despercebida. Diante disto, um diagnóstico confiável se faz necessário para confirmar uma suspeita clínica ou infecção inaparente. A reação em cadeia da polimerase (PCR) tem contribuído em muito para o aumento da sensibilidade do diagnóstico, e seu uso mostra que a prevalência da infecção canina por L. (L.) infantum em áreas endêmicas pode ser bem maior do que a apontada pela sorologia. É sabido que um dos fatores limitantes do emprego de uma técnica diagnóstica em larga escala refere-se à coleta do material clínico que, idealmente, deve ser simples, rápida e indolor. Assim, entende-se que a associação da PCR com amostras não invasivas, de fácil coleta, poderia representar uma contribuição importante para o diagnóstico da LVC. Dessa forma, a proposta do presente projeto foi investigar o valor do swab oral (SO) na detecção de L. (L.) infantum em cães oriundos de áreas onde ocorre transmissão do parasito, através do uso da PCR em tempo real, considerada a mais sensível dentre as técnicas moleculares. Para tanto, comparamos sua positividade com a encontrada em outra amostra não invasiva (swab conjuntival= SC), pouco invasiva (sangue periférico= SG) e invasiva (aspirado de linfonodo=LN) e com a sorologia, considerando grupos clínicos, carga parasitária, índice de concordância entre os resultados, e a combinação dos resultados das diferentes amostras e a sorologia com aqueles obtidos no SO. Noventa e dois cães com comprovada infecção participaram do estudo. Os animais foram classificados em sintomáticos (n=63) e assintomáticos (n=29), de acordo com o exame físico e provas laboratoriais. No presente estudo a positividade do SO (67,4%) foi equivalente a do SC (68,5 %), maior do que a encontrada no SG (52,2%), e menor quando comparada ao LN (84,8%). Considerando os grupos clínicos, o SO foi positivo em 81 % dos cães sintomáticos e em 37,9 % dos assintomáticos. A positividade encontrada no SC também foi maior no grupo sintomático em relação ao assintomático (82,5 % x 37,9 %), assim como no LN (93,7 % x 65,5 %), mas não no SG (62,1 % x 47,6 %) e na sorologia (77,8 % x 79,3 %). Salienta-se que o SO foi positivo em 35 % dos cães com sorologia negativa (n=20), o SC em 35%, o SG em 40 %, o LN em 70 %, e OS+CS em 60% deles. A concordância dos resultados do SO foi moderada em relação à conjuntiva (k= 0,3) e fraca em relação às demais amostras e a sorologia (0.2 < k < 0.3). A carga parasitária do SO, por sua vez, não se diferiu da conjuntival, ambas foram maiores do que a encontrada no SG, e o LN apresentou a maior carga, mostrando uma clara correlação da intensidade do parasitismo com os índices de positividade obtidos. O LN mostrou o maior parasitismo entre as amostras analisadas. A combinação dos resultados do SO e SC atingiram 84 % de positividade nos 92 cães estudados, 92,1 % no grupo sintomático e 65,5 % no assintomático. Em suma, o presente estudo mostrou a presença do DNA de L. (L.) infantum no swab oral de cães infectados através da PCR em tempo real, revelando seu potencial uso no diagnóstico da LVC em cães com suspeita clínica dada a sua alta positividade nos animais com sintomatologia, equivalente à encontrada na amostra invasiva, o aspirado de linfonodo. Em oposição, encontrou-se baixa positividade nos cães assintomáticos, mas seu uso combinado com outra amostra não invasiva, a conjuntiva, atingiu patamares satisfatórios. O fato do SO ter sido positivo em parte dos animais soronegativos aponta vantagem adicional do seu uso na investigação de infecção por L. (L.) infantum em inquéritos epidemiológicos ou mesmo na rotina clínica. Por fim, os nossos resultados mostraram que a combinação de testes e amostras é necessária para a identificação de cães infectados por L. (L.) infantum, e que a PCR com o swab oral, especialmente associado ao swab conjuntival, pode contribuir de forma significativa para o diagnóstico da infecção canina, seja ela sintomática ou assintomática / Dog (Canis familiaris) is the major reservoir of Leishmania (L.) infantum. Its high competence for transmitting the parasite to the vector contributes to the maintenance of the cycle and for increasing risk to humans in endemic areas. The wide spectrum of clinical manifestations of canine visceral leishmaniasis (CVL) makes the diagnosis quite complex, since the symptoms can overlap those caused by other infectious agents. Of note, the infection is mostly subclinical, making the diagnosis even more difficult. Therefore, an accurate diagnosis is necessary to confirm a clinical suspicion or the silent infection. The polymerase chain reaction (PCR) has greatly contributed for increasing the diagnostic sensitivity, and its use shows that L. (L.) infantum canine infection in endemic areas may be much higher than that pointed by serology. It is known that one limiting factor of using a diagnostic method in large scale refers to the collection of clinical samples which should be ideally simple, quick, and painless. Thus, it is understood that the association of PCR with non-invasive samples could represent an important contribution to the diagnosis of CVL. Therefore, the purpose of this study was to investigate the value of the oral swab (OS) in detecting L. (L.) infantum in dogs from areas of parasite transmission through the use of real-time PCR that is considered the most sensitive among the molecular techniques. To this end, we compared the OS positivity with that found in other non-invasive (conjunctival swab = CS), minimally invasive (blood = BL) and invasive (lymph node aspirate = LN) samples and serology, considering clinical groups, parasite load, agreement among results, and the combination of results from different samples and serology with those obtained with OS. Ninety-two dogs with proven infection were selected for this present study. The animals were divided into symptomatic (n = 63) and asymptomatic (n = 29) dogs, according to the physical examination and laboratory tests. Here, the positivity in OS (67.4%) was equivalent to the CS (68.5%), higher than that found in BL (52.2%), and lower when compared to LN (84.8%). Regarding clinical groups, OS was positive in 81% of the symptomatic dogs and in 37.9% of asymptomatic ones. The positivity in CS was also higher in the symptomatic compared to the asymptomatic group (82.5% x 37.9%) and in LN (93.7% x 65.5%), but not in BL (62.1% x 47.6%) and serology (77.8% x 79.3%). Noteworthy, the OS was positive in 35% of dogs with negative serology (n = 20), CS in 35%, BL in 40% and LN in 70%. Moderate agreement was found between OS results and CS results (k = 0.3) and weak in comparison to other samples and serology (0.2 < k < 0.3). The parasite load was equivalent between OS and CS, both were higher than that found in BL, and LN presented the highest burden, showing that parasitism intensity and the positivity rates are correlated. The combination of OS and CS results reached 84% positivity in 92 dogs studied, 92.1% for symptomatic dogs and 65.5% for asymptomatic ones. In summary, the present study showed the presence of L. (L.) infantum DNA in oral swab of infected dogs by real-time PCR, revealing its potential use for diagnosing CVL in animals with clinical suspicion due to its high positivity in dogs with symptoms, equivalent to that found in invasive sample, the lymph node aspirate. In contrast, low positivity was found in asymptomatic dogs, but the combined use with other non-invasive sample, the conjunctiva, reached satisfactory levels. OS positivity found in part of the seronegative animals points additional advantage of using OS in the investigation of L. (L.) infantum infection in epidemiological surveys or in clinical practice. Finally, our findings pointed that combination of tests and samples is required for identifying dogs infected with L. (L.) infantum, and that the PCR with oral swab, especially associated with the conjunctival swab, can contribute for diagnosing both asymptomatic and symptomatic dogs

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-10T11:15:29Z No. of bitstreams: 1 lilypaolamartinezabad.pdf: 2623487 bytes, checksum: bd4d6d3010f0286720ab5bcfb393b5ea (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:20:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lilypaolamartinezabad.pdf: 2623487 bytes, checksum: bd4d6d3010f0286720ab5bcfb393b5ea (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T11:20:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lilypaolamartinezabad.pdf: 2623487 bytes, checksum: bd4d6d3010f0286720ab5bcfb393b5ea (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / A leishmaniose visceral canina (LVC) representa um grave problema de saúde pública. No Brasil, a prevalência da infecção nos cães é bastante variável, podendo atingir níveis superiores a 60% em alguns surtos. O teste rápido Dual Path Platform (TRDPP®-Bio-Manguinhos), como teste de triagem, seguido por ELISA (EIE-BioManguinhos), como teste confirmatório, tornaram-se parte do protocolo de diagnóstico da LVC, credenciado no Brasil desde 2011. No entanto, o diagnóstico da LVC ainda precisa ser melhorado para alcançar uma taxa de detecção mais precisa. Recentemente, rKLO8, uma nova proteína antigênica de L. donovani do Sudão foi clonada e purificada, e mostrou alta reatividade para diagnosticar leishmaniose visceral em humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a reatividade de soros de cães frente ao antígeno rKL08 e o antígeno de referência rK26, comparando ambas as proteínas, utilizadas como antígenos em testes de ELISA, com os testes DPP® e EIE, usados como testes de diagnóstico da LVC. Amostras de soros de cães de Governador Valadares, uma área endêmica para leishmaniose em Minas Gerais, Brasil, foram agrupadas da seguinte forma: (I) DPP®/EIE negativo (n = 100), (II) DPP® positivo / EIE negativo e (III) DPP® / EIE positivo (n = 100). Níveis séricos elevados de IgM e IgG para ambos os antígenos, rKLO8 e rK26, foram encontrados no grupo III (p <0,0001). Interessantemente, foram detectados níveis elevados de IgG2 e baixos níveis de IgG1 contra ambos os antígenos no grupo de cães DPP®/EIE positivo, sugerindo a ocorrência de um fenótipo predominantemente do tipo Th1 associado com infecção subclínica. O ELISA-rKLO8 (IgG) e o ELISA-rK26 (IgG) mostraram uma sensibilidade de 68% e 77%, e especificidade de 92% e 91%, respectivamente, determinado através da análise da curva ROC. Além disso, o coeficiente Kappa indicou boa concordância (0,739) entre o ELISA-rKLO8 versus o ELISA-rK26. Ainda, a combinação de antígenos rKLO8 e rK26 (rKLO8+rK26) em um mesmo teste exibiu maior sensibilidade (85%) e especificidade (93%). A análise kappa mostrou que o ELISA-rKLO8 + rK26 (IgG) teve melhor concordância com ambos os testes, DPP® e EIE, com valores de kappa igual a 0,700. Estes dados indicaram que a combinação dos antígenos rKLO8 e rK26 gera uma melhor acurácia no diagnóstico da LVC que os antígenos rKLO8 e rK26 usados em separado na detecção de IgG. Estes resultados demonstraram, pela primeira vez, a utilidade do antígeno rKLO8 no diagnóstico da LVC, e que ELISA-rKLO8, pode representar uma potencial ferramenta adicional para o diagnóstico de LVC. / Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) represents a serious public health issue. In Brazil, the prevalence of infection in dogs is quite variable and may reach levels above 60% in some outbreaks. The dual Path Platform (DPP®-Bio-Manguinhos) as quick screening test followed by ELISA (EIE-Bio-Manguinhos) as a confirmatory test became part of the diagnostic protocol of CVL, nationally accreditated in Brazil since 2011. However, CVL diagnosis still needs to be improved to achieve a more accurate detection rate. Recently, rKLO8, a new antigenic protein of Sudanese L. donovani, was cloned and purified and had high reactivity to diagnose human VL. The present study aimed to evaluate serum reactivity to rKL08 and to the reference antigen rK26, and to compare both diagnostic proteins used in ELISA with the combined DPP® and EIE as diagnostic tests of CVL. Dog sera samples from Governador Valadares, an area endemic for leishmaniasis in Minas Gerais, Brazil, were grouped in the following way: (I) DPP®/EIE negative (n = 100), (II) DPP® positive/EIE negative and (III) DPP®/EIE positive dog sera (n = 100). Enhanced serum levels of IgM and IgG to both rKLO8 and rK26 were found in group III (p<0.0001). Interestingly, high IgG2 and low IgG1 levels against both antigens were detected in DPP®/EIE positive dogs, suggesting the occurrence of a predominant Th1 phenotype associated with subclinical infection. The rKLO8-ELISA (IgG) and the rK26-ELISA (IgG) showed a sensitivity of 68% and 77% and specificity of 92% and 91%, respectively, determined by ROC curve analysis. In addition, Kappa coefficient indicated good agreement (0.739) between rKLO8-ELISA and rK26-ELISA. Moreover, the combination of rKLO8 and rK26 antigens (rKLO8+rK26) exhibited higher sensitivity (85%) and specificity (93%). Kappa analysis established that rKLO8+rK26-ELISA (IgG) had better agreement with both DPP® and EIE, with kappa values of 0.700. These data indicate that the combination of rKLO8 and rK26 antigens has better accuracy in the diagnosis of CVL than rKLO8 and rK26 used separately at detecting IgG. These results showed for the first time the usefulness of rKLO8 antigen in the diagnosis of CVL, and that rKLO8-ELISA may represent a potential additional tool for the diagnosis of CVL.