As fosfolipases A2 secretadas, particularmente do grupo II são abundantes nos venenos de serpentes, incluindo o gênero Bothrops e estão envolvidas em diversos processos fisiológicos e fisiopatológicos, como inflamação e dor, incluindo artrite. Contudo, não está totalmente caracterizado o papel da FLA2 para a gênese e manutenção dos quadros de inflamação articular. Nosso objetivo foi padronizar um novo modelo de artrite, utilizando sFLA2 do grupo IIA (miotoxina II) isolada do veneno da serpente Bothrops asper e avaliar a mediação química envolvida no processo nociceptivo deste quadro. Os resultados indicaram aumento de permeabilidade vascular, infiltrado celular e hiperalgesia. A hiperalgesia é um processo multimediado com a participação de prostanóides, sendo sua produção decorrente da ativação de FLA2 endógenas. Estes dados sugerem que esta FLA2 pode se tornar uma ferramenta científica importante para o entendimento dos mecanismos fisiopatológicos envolvidos nos processos de inflamação articular. / Secretory phospholipases A2 are abundant in different animal tissues and particularly group II are found in venom snakes and are proteins involved in many physiological and pathophysiological processes, like inflammation and pain, components of arthritis. However, the involvement of PLA2 in the genesis and maintenance of articular inflammation is not well characterized. Our aim is to characterize the articular inflammatory response induced by Lys 49-PLA2 (IIA group) isolated from B. asper snake venom. It was analyzed the nociceptive process involved, developing a new experimental model of articular inflammation. Our results indicated that sPLA2 induces increase in the vascular permeability, cell migration and hyperalgesia. Hyperalgesia is a multimediated process and prostanoids are involved in the nociceptive process, being its production dependent of the endogenous PLA2 activation. These data indicate that this PLA2 could be an important scientific tool for the understanding of the pathophysiological mechanisms involved in articular inflammation processes.

A Artrite Reumatóide (AR) é uma doença autoimune associada a poliartropatia inflamatória que acomete principalmente as articulações periféricas. Cerca de 1% da população mundial é afetada, sendo duas a três vezes mais prevalente em mulheres. Apresenta uma patogênese complexa e multifatorial. A sinóvia das articulações afetadas é infiltrada por linfócitos T e B, macrófagos e granulócitos. A sinóvia reumatóide adquire características proliferativas, formando o pannus, e invade a cartilagem articular e o osso, levando à destruição da arquitetura normal da articulação e perda de função. Em vários modelos de doenças autoimunes, a ausência ou diminuição da expressão de proteínas reguladoras do complemento tem sido observada, associada com o agravamento dos sintomas clínicos, sendo que, muitos destes casos, a superativação do sistema complemento pode ser a causa da exacerbação da doença. O presente artigo tem por objetivo revisar os principais aspectos relacionados à regulação do sistema complemento na artrite reumatóide, a fim de propiciar uma melhor compreensão do potencial papel desse sistema na fisiopatologia da doença. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease associated with polyarticular inflammatory synovitis that affects mainly the peripheral joints. About 1% of the world population is affected, and it is two to three times more prevalent in women. RA has a complex and multifactorial pathogenesis. The rheumatoid synovium acquires proliferative characteristics, forming the pannus, and invades cartilage and bone, leading to the destruction of normal architecture and loss of function. In several models of autoimmune diseases, the absence or decreased expression of complement regulatory proteins has been observed, associated with worsening of the clinical symptoms, and many of these cases the over-activation of the complement system is the cause of disease exacerbation. This article aims to review the main aspects related to regulation of the complement system in rheumatoid arthritis in order to provide a better understanding of the potential role of this system in the pathophysiology of the disease.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hyptis pectinata L. Poit. (Lamiaceae), widely known as Sambacaitá, is an example of a plant commonly used in folk Medicine; various biological effects are associated with its extracts, such as: analgesic, anti-inflammatory, and anti-microbial. Many studies in vivo and in vitro has assessed the effects promoted by the aqueous extract and essential oil of the leaves of the plant, whose chemical composition constitute their water soluble compounds and their volatile compounds, respectively. This study aimed at keeping on these studies, determining the chemical constituents and the acute toxicity of the sample of the aqueous extract and essential oil used to study the analgesic effect of these extracts in an acute articular inflammatory condition, similar to an episode of acute arthritis as in Gout. The phyto-chemical studies of aqueous extract identified the presence of alkaloid, tannin and flavonoid. The analysis of the constituents of the essential oil was made by gas chromatography and mass spectrometer, showing as main constituents: β- cariofilene and Germacrene-D. The evaluation of acute toxicity was represented by the establishment of DL50 in Swiss mice, obtained by the probits method, it was not possible to measure the DL50 of the aqueous extract due to its low toxicity, as for the essential oil, it was obtained a 1.1 g/kg DL50. The analgesic effect was studied using the sodium urate crystals induced arthritis model, in Wistar mice, as proposed by Coderre and Wall; the aqueous extract presented expressive analgesic effect with the 50 mg/kg doses, which was reverted by the opioid antagonist, naloxone (5 mg/kg). The essential oil did not present analgesic effect with the tested doses. The results showed that the aqueous extract has low toxicity and it presents analgesic effect in a rheumatic condition, similar to Gout arthritis, while the essential oil presents medium toxicity and it does not show analgesic effect in the proposed rheumatic condition. / A Hyptis pectinata L. Poit. (Lamiaceae), vulgarmente conhecida como sambacaitá, é um exemplo de planta comumente utilizada na medicina popular; diversos efeitos biológicos estão associados aos seus extratos, tais como analgésico, antiinflamatório e antimicrobiano. Vários estudos in vivo e in vitro têm avaliado estes efeitos promovidos pelo extrato aquoso e óleo essencial das folhas da planta, cujas composições químicas, constituem os seus compostos solúveis em água e os seus compostos voláteis respectivamente. Este trabalho objetivou dar continuidade a esses estudos, determinando os constituintes químicos e a toxicidade aguda da amostra de extrato aquoso e óleo essencial utilizados, para estudar o efeito antinociceptivo (analgésico) dos extratos citados, em uma condição inflamatória articular aguda, similar a um ataque de artrite aguda como o ocorrido na gota. Os estudos fitoquímicos do extrato aquoso identificaram a presença de alcalóides, taninos e flavonóides. A análise dos constituintes do óleo essencial se deu por cromatografia gasosa e espectrômetro de massa, revelando como principais constituintes: β-cariofileno e germacreno-D. A avaliação da toxicidade aguda foi representada pela determinação da DL50, em camundongos swiss, obtida pelo método dos probitos; não foi possível mensurar a DL50 do extrato aquoso, devido a sua baixa toxicidade, já o óleo essencial, obteve uma DL50 de 1,1 g/kg. O efeito antinociceptivo foi estudado usando o modelo de artrite induzida por cristais de urato de sódio, em ratos wistar, proposto por Coderre e Wall. O extrato aquoso apresentou efeito antinociceptivo significativo na dose de 50 mg/Kg, o qual foi revertido pelo antagonista opióide, naloxona (5mg/kg). O óleo essencial não apresentou efeito antinociceptivo nas doses testadas. Os resultados mostraram que o extrato aquoso possui baixa toxicidade e apresenta atividade antinociceptiva numa condição reumática, semelhante à artrite gotosa; enquanto o óleo essencial apresenta toxicidade média e não apresenta atividade antinociceptiva na condição reumática proposta.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2014-10-21T11:09:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Mestrado Final Wanessa Vieira Marques - 2014.pdf: 2424315 bytes, checksum: 43cfe85410f8246c32e9c3194794b2d6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-23T11:19:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao Mestrado Final Wanessa Vieira Marques - 2014.pdf: 2424315 bytes, checksum: 43cfe85410f8246c32e9c3194794b2d6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-23T11:19:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Mestrado Final Wanessa Vieira Marques - 2014.pdf: 2424315 bytes, checksum: 43cfe85410f8246c32e9c3194794b2d6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-04-03 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Patients with rheumatoid arthritis (RA) present higher prevalence of comorbidities. Such comorbidities are associated with different outcomes in RA patients, such as mortality risk, increase in disability, impact on RA specific treatment and higher medical costs. The purpose of this study was to assess the influence of comorbidities on the functional capacity and mobility of the affected individuals, and to identify, among the comorbidity indicators, the most appropriate to determine association between comorbidities and physical function on these patients. In a cross-sectional study we included 60 patients with RA fulfilling the American College of Rheumatology criteria (ACR, 1987) over a period of 11 months, both male and female between 43 and 80 years old. Comorbidities were assessed by means of three indicators: (i) total number of comorbidities (NCom) reported by the patients and listed on their medical records; (ii) the Charlson comorbidity index (CCI); and (iii) the functional comorbidity index (FCI). The activity of disease was evaluated by the Disease Activity Score, based on 28 joints and erythrocyte sedimentation rate value (DAS28/ESR). The participants’ functional capacity was measured using the Health Assessment Questionnaire (HAQ), and their mobility was measured using the chairrising test (CRT) and timed get up and go (TUG) test. Statistical analysis was performed using Log-Linear Stepwise multiple regression at 5% significance level. The prevalence of comorbidities in the investigated sample of patients with RA was 90% when the total number of comorbidities (NCom) was taken into consideration. In the final multiple regression model, the independent factors that influenced functional capacity (HAQ) were activity of disease (DAS28/ESR) and comorbidities, as assessed by FCI, which explained together 32.9% of the HAQ score variability (adjusted coefficient of determination [R2] = 0.329). With respect to the participants’ mobility (CRT and TUG), in the final model, only the independent factor comorbidities (FCI) exerted a significant influence on the results. The FCI scores explained 19.1% of the CRT variability (R2= 0.191) and 19.5% of the TUG variability (R2= 0.195). Among the comorbidity indicators used, the FCI was the main responsible for explain the physical function (HAQ) and mobility (CRT and TUG) variability at the final model in our sample. Comorbidities were highly prevalent in individuals with RA and exerted a negative influence on their functional capacity and mobility. FCI proved to be appropriate to determine the association between comorbidities and physical function in individuals with RA. / Pacientes com artrite reumatoide (AR) apresentam prevalência aumentada de comorbidades. A presença de comorbidades está associada a um pior desfecho clínico nesses indivíduos, tais como risco de mortalidade, comprometimento na funcionalidade, interferência no tratamento específico da AR e aumento nos custos médicos. O objetivo deste estudo foi investigar a influência das comorbidades na capacidade funcional e na mobilidade em pacientes com AR, e identificar, dentre os indicadores de comorbidade, aquele mais apropriado para determinar a associação entre comorbidades e desfecho funcional nesses indivíduos. Trata-se de um estudo transversal com a participação de 60 pacientes classificados com AR pelos critérios da American College of Rheumatology (ACR) de 1987 em um período de 11 meses, de ambos os gêneros e faixa etária entre 43 e 80 anos. As comorbidades foram avaliadas por meio de três indicadores: (i) número total de comorbidades (NCom) relatadas pelos pacientes e anotadas em prontuário médico; (ii) escore obtido no índice de comorbidade de Charlson (ICC); e escore obtido no índice de comorbidade funcional (ICF). A atividade da doença foi mensurada pelo Índice de Atividade da Doença baseado em 28 articulações e no valor do VHS (Disease Activity Score 28 – DAS28/VHS). A capacidade funcional e a mobilidade foram avaliadas por meio do escore obtido no Questionário de Avaliação da Saúde (Health Assessment Questionnaire – HAQ), no teste senta-levanta da cadeira cinco vezes (TSL) e no teste timed get up and go (TUG). A análise estatística dos dados foi realizada através de regressão múltipla Log-Linear Stepwise com nível de significância de 5%. Observou-se que a prevalência das comorbidades, analisada pelo indicador número total de comorbidades (NCom), foi de 90% em nossa amostra. No modelo final da análise múltipla os fatores determinantes da capacidade funcional (HAQ) foram a atividade da doença (DAS28/VHS) e as comorbidades, avaliadas pelo ICF, que em conjunto explicaram 32,9% da variabilidade do escore do HAQ (coeficiente de determinação [R2] ajustado = 0,329). Com relação à mobilidade (TSL e TUG), no modelo final, apenas as comorbidades (ICF) influenciaram significativamente o seu desempenho. O escore no ICF explicou 19,1% da variabilidade do TSL (R2 = 0,191)e 19,5% da variabilidade do TUG (R2 = 0,195). Dentre os indicadores de comorbidade utilizados, o indicador ICF foi o principal responsável por explicar no modelo final a variabilidade da capacidade funcional (HAQ) e da mobilidade (TSL e TUG) em nossa amostra. Conclui-se que as comorbidades são frequentes em pacientes com AR e influenciam negativamente a capacidade funcional e a mobilidade desses indivíduos. O ICF demonstrou ser um indicador de comorbidade apropriado para determinar a associação entre comorbidades e funcionalidade em pacientes com AR.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-07-09T13:12:56Z No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T14:12:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T14:16:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-09T14:16:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) Previous issue date: 2010-12-15 / Não Informada / Rheumatoid Arthritis (RA) is a autoimmune disease that affects 1% of worldwide population and promotes polyarthritis and joint destruction with work disability. About 60% of the risk factors of RA are related to genetic characteristics of individuals. The functional polymorphisms of the TNF gene -308 G/A andPTPN22 1858 C/T were associated with RA in several studies.The aim of this study was to investigate the influence of the TNF 308 G/A polymorphism in the promoter region of the tumor necrosis factor- gene and PTPN22 1858 C/T on rheumatoid arthritisand tuberculosis patients from the Brazilian Amazon. A total of 545 individuals 205 healthy controls without arthritis and 132 individuals suffering from rheumatoid arthritis and 208 tuberculosis patients  were genotyped for these polymorphisms using a methodology based on PCR-RFLP. Rheumatoid factor, age more than 60 years old and more than 10 disease years, was found to be risk factors for systemic disease (p=0,0001). The frequency of the A allele (TNF2) in rheumatoid arthritis sufferers was not found to be significantly higher than in the controls (p=0.671; OR=1.16; confidence interval=0.59 – 2.25). However, using a logistic regression model when the patients were stratified according to whether the manifestations were preponderantly articular or systemic, there was a strong association between the TNF2 allele and the systemic disease (p=0.001; OR=4.75; confidence interval=1.82 – 12.40) as well as the use of anti-TNF immunotherapy (p=0.021; OR 2.93; confidence interval=1.15 –7.46). On the other hand, PTPN22 1858T allele was not associated with systemicdisease (p=0,071; OR=3,17; confidence interval=0.83 – 11.73), but we found association between this allele and biologic anti-TNF immunotherapy (p=0,021; OR=4.39; confidence interval=1.08 – 17.86). Moreover, there was found no association between PTPN22 15858 C/T and rheumatoid arthritis nor tuberculosis. These results suggest that the TNF2 allele is associated with the more serious forms of the disease in individuals from the Brazilian Amazon but not with a risk for developing RA. / A Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune que afeta 1% da população geral, promovendo poliartrite e destruição articular com variados graus de incapacidade. Cerca de 60% dos fatores de risco da AR são relacionados a caracteres genéticos do indivíduo. Os polimorfismos funcionais dos genes TNF -308 G/A e PTPN22 1858 C/T foram associados à AR e à Tuberculose em diversos estudos. O objetivo deste estudo foi analisar a influência do polimorfismo da região promotora do gene do Fator de Necrose Tumoral-α, TNF -308 G/A e do gene PTPN22 1858 C/T na Artrite Reumatoide (AR) e na Tuberculose pulmonar em indivíduos procedentes do Amazonas. Para isso, foram genotipados, pela técnica baseada em PCR-RFLP para o polimorfismo TNF 308 G/A (TNF2) e PTPN22 1858T, 545 indivíduos sendo 205 controles sem Artrite, 208 pacientes com Tuberculose e 132 portadores de AR. Não foi observado aumento da frequência dos alelosTNF2ouPTPN22 1858T em portadores de Artrite Reumatoide e Tuberculose em comparação aos controles (p=0,218; p=0,376, respectivamente). Foram identificados como fatores preditivos para manifestações sistêmicas da Artrite Reumatoide: o Fator Reumatoide positivo, a idade maior que 60 anos e o tempo de doença (p=0001).Quando os dados foram estratificados segundo as formas predominantemente articulares ou sistêmicas, o alelo TNF2 esteve fortemente associado às formas sistêmicas (p=0,001; OR=4,75; Intervalo de confiança = 1,82 – 12,40), além de estar associado ao uso de imunobiológicos Anti-TNF (p=0,021; OR=2,93; Intervalo de confiança=1,15 – 7,49). O alelo PTPN22 1858T também está associado ao uso de imunobiológicos (p=0,021; OR= 4,39; Intervalo de Confiança=1,08 – 17,86), mas não está relacionado às formas sistêmicas (p=0,071; OR = 3,17; Intervalo de Confiança = 0,83 – 11,73). Entretanto, o polimorfismo de PTPN22 1858 C/T não foi associado à Artrite Reumatoide ou à Tuberculose Pulmonar. Estes resultados sugerem que o alelo TNF2 está associado às formas mais graves da AR em indivíduos do Amazonas, mas não ao risco de desenvolver Artrite Reumatoide.

A artrite reumatoide (AR) é a artropatia inflamatória mais prevalente no mundo, de etiologia multifatorial e fenótipos heterogêneos. Busca-se, além de definir fatores etiológicos, compreender as interações entre mecanismos envolvidos na fisiopatologia da AR. Entre estes, fatores genéticos, tanto genes do antígeno leucocitário humano (HLA), especialmente a presença do epítopo compartilhado (Shared epitope - SE) do HLA-DRB1, como genes não-HLA, e fatores ambientais e epigenéticos têm sido associados à doença. Assim, a identificação de novos fatores relacionados à etiopatogenia da AR e suas possíveis associações com características clínicas motivaram esse estudo. Um estudo caso-controle foi desenhado e dividido em duas etapas. Para a primeira etapa, foi obtido plasma de 18 indivíduos de AR e 18 voluntários saudáveis de Ribeirão Preto, no qual foram identificados quinurenina (Kyn), Trp, serotonina (5-HT) e taxa Kyn/Trp (KTR) por cromatografia líquida de ultra-eficiência (CLUE) acoplada a espectrômetro de massas sequencial (CLUE-DAD-EM/EM). Na segunda etapa, de estudo genético, uma coorte formada por 328 indivíduos com AR e por 234 voluntários saudáveis de Ribeirão Preto e de Porto Alegre foi avaliada quanto ao polimorfismo do gene da enzima indoleamine 2,3-dioxigenase 1 (IDO1). Foram obtidos dados clínicos e epidemiológicos e coletadas amostras de sangue periférico para extração de DNA pelo método de salting-out. Em seguida, tipificação HLA e reação em cadeia de polimerase (RCP) das variantes da IDO1, rs7820268, rs3739319, rs61753677, rs35059413, rs35099072 e rs9298586, foram realizadas. A positividade para fator reumatoide (FR) em indivíduos com AR foi associada ao tabagismo (p= 0.0002) e ao SE (p < 0.0001), e para anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (anti-CCP), associado ao SE (p < 0.0001). Quando combinadas a presença de SE e a de tabagismo, houve associação estatisticamente significante para FR (p < 0.001) e para anti-CCP (p = 0.03). Foram observadas menores concentrações plasmáticas de 5-HT em indivíduos com AR quando comparados a voluntários saudáveis (p =0.006), mas sem diferença para níveis de Trp, Kyn e KTR. Para estes, diferenças apareceram quando avaliados subgrupos. Em indivíduos com AR sem tratamento com drogas modificadoras do curso da doença (DMCDs), os valores plasmáticos de Trp foram menores quando comparados aos em terapia (p = 0.0016), enquanto em pacientes com AR tabagistas os valores de Kyn e KTR foram menores que em pacientes não tabagistas (p = 0.039 e p = 0.032, respectivamente). Não foram identificadas associações estatisticamente significantes entre as variantes genéticas estudadas e o risco de desenvolver AR, nem entre os polimorfismos da IDO1 estudados e a concentração plasmática de Trp, Kyn e 5-HT e KTR. Este estudo não identificou relação das variantes do gene da IDO1 com suscetibilidade para AR. Assim, novos estudos são necessários para que possam ser explicadas as associações encontradas na via das Kyns e na 5-HT em etiopatogenia da AR. / Rheumatoid arthritis (RA) is the most prevalent inflammatory arthropathy in the world, with multifactorial etiology and heterogeneous phenotypes. Besides defining etiological factors, it is sought to understand the interactions between mechanisms in RA pathophysiology. About these, genetic factors, both human leucocity antigen (HLA) genes, especially the HLA-DRB1 Shared epitope (SE) presence, and not-HLA genes, and environmental and epigenetics factors have been associated with the disease. Therefore, the aim of this study was to identify new possible associations between RA clinical features and its etiopathogenesis. A case-control study was designed and it was divides in two phases. The first phase, it was obtained plasma of 18 RA patients and 18 healthy controls from Ribeirão Preto to identify the kynurenine (Kyn), Trp and serotonin (5-HT) concentrations and Kyn/Trp ratio (KTR) by ultra-high performance liquid chromatography coupled to sequential mass spectrometer. The second phase was a genetic study that evaluated a cohort of 328 RA patients and 234 healthy volunteers from Ribeirão Preto and Porto Alegre about the indoleamine 2,3-dioxygenase 1 (IDO1) gene polymorphism. Clinical and epidemiological data were obtained and peripheral blood samples were collected to DNA extraction by salting-out method. Then, HLA typification and polymerase chain reaction to identify IDO1 genetic variants rs7820268, rs3739319, rs61753677, rs35059413, rs35099072 and rs9298586 were performed. Rheumatoid factor (RF) positivity was associated to smoking (p = 0.0002) and SE (p < 0.0001), and cyclic citrullinated peptide autoantibodies (anti-CCP) positivity was associated to SE (p < 0.0001). When SE presence and smoking were combined, there was statistically significant association to RF (p < 0.001) and anti-CCP (p = 0.03). We observed lower plasma 5-HT concentrations in RA patients than in healthy volunteers (p = 0.006), but no significant difference to Trp, Kyn and KTR levels. For these, differences were observed when subgroups were evaluated. In RA patients not using disease modifying antirheumatic drugs (DMARDs) the plasma Trp levels were lower than RApatients using DMARDs, while the plasma Kyn concentrations and KTR in smokers RA patients were lower than nonsmokers RA patients (p = 0.039 and p = 0.032 respectively). We did not indetify statistically significant associations neither between studied genetic variants and risk to develop RA nor between IDO1 polymorphisms and plasma Trp, Kyn, 5HT concentrations and KTR. This study did not identify relation between IDO1 genetic variants with susceptibility to RA. Therefore, new studies are necessary to explain the searched associations between Kyns pathway and 5-HT in RA etiopathogenenesis.

Para avaliar a fagocitose de células da série monócitos-macrófagos de cabras naturalmente infectadas pelo vírus da artrite encefalite caprina a vírus (VAEC), 30 cabras da raça Saanen foram utilizadas e alocadas em dois grupos distintos, sendo um grupo formado por 15 animais soropositivos à imunodifusão em gel de ágar para detecção de anticorpos séricos antivírus da AEC e o outro formado por 15 animais soronegativos ao teste. Células mononucleares de sangue periférico foram isoladas por gradiente de concentração e plaqueadas em placas de poliestireno para isolamento de células da série monócito-macrófago. Após adesão das mesmas, adicionou-se a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis como desafio antigênico. Dois tipos de fagocitose foram observados em relação ao número de bactérias internalizadas nos vacúolos citoplasmáticos dos macrófagos, isto é, verificou-se a presença de células fagocitando em média 12 bactérias e outro grupo fagocitando um número incontável de bactérias. Dessa forma, classificou-se a fagocitose em fagocitose + (até 12 bactérias) e fagocitose ++ (mais de 12 bactérias). Em relação à fagocitose total (fagocitose + e fagocitose ++) não foram verificadas diferenças estatística significativas entre os grupos experimentais (p < 0,41). Todavia, ao discriminar a fagocitose conforme a quantificação de bactérias fagocitadas, encontrou-se diferença estatística entre os grupos, sendo que o grupo positivo apresentou maior porcentagem de fagocitose ++ (p < 0,001). O grupo negativo apresentou maior porcentagem de fagocitose + (p < 0,012). Correlação positiva entre monócitos fagocitando e fagocitose ++ foi observada no grupo de animais soropositivos (p < 0,006), porém, não foi observada nenhuma correlação no grupo negativo (p < 0,49). Esses resultados demonstram uma possível alteração na intensidade da fagocitose de macrófagos de animais infectados com o VAEC, sugerindo que os animais com artrite encefalite caprina estejam mais susceptíveis à linfadenite caseosa. / To evaluate the phagocytosis from monocyte-macrophage line cells 30 naturally infected Saanen goats with caprine arthritis-encephalitis vírus (VCAE) were used, and divided uniformly in different groups according to agar gel immunodiffusion test (AGID). Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) was isolated by density gradient centrifugation. The monocyte-macrophage cells were separated from PBMC by their adherence properties. Afterwards, the phagocytosis function was assessed by phagocytosis assay using Corynebacterium psudotuberculosis as a source of antigen. Therefore, two distinct types of phagocytosis were observed and were set according to the number of bacteria within the cytoplasmatic vacuoles. Thus, the phagocytosis rates were also divided in two groups, on the first was observed up to 12 bacteria in the vacuoles; on the other hand in the second group an uncountable number of bacteria were usually seen. Consequently, the phagocytosis rates were also divided in phagocytosis + (up to 12 bacteria) and phagocytosis ++ (more than 12 bacteria). The results from the phagocytosis rates show any difference, however when the phagocytosis rates were separated in the order of the number of Corynebacterium pseudotuberculosis phagocyted, the phagocytosis ++ from positive animals in the sera test were higher than the negative one (p < 0.001). Nevertheless, the negative group presents higher pahgocytosis + (p < 0.012). Furthermore a positive and significant correlation between phagocytosis ++ and monocyte phagocytosis (p < 0.006) were also encountered in the positive animals, however the same were not observed in the negative group (p < 0.49). In face of, the results from the present trial point out to higher susceptibility to caseous linphadenitis in goats infected with VCAE due to the alteration on the phagocytosis strength in these animals.

O objetivo do presente estudo foi estabelecer os valores de referência do proteinograma de soro lácteo por meio da técnica de eletroforese SDS-PAGE para a lactação plena e avaliar os efeitos do processo de secagem da glândula mamária, fase colostral e primeiro mês de lactação, fase de lactação, número de lactações, isolamento bacteriano e infecção pelo VCAE nas proteínas da secreção láctea de cabras da raça Saanen. Foram analisadas, entre 2007 e 2010, 545 amostras de leite provenientes de 185 cabras em diversas fases da lactação. Durante a lactação plena, baseado nos resultados dos intervalos de confiança, foram determinados os seguintes valores de referência: proteína total entre 2.940,0 e 3.050 mg/dL; proteína do soro lácteo entre 903,0 e 973,0 mg/dL; lactoferrina entre 68,0 e 77,0 mg/dL; albumina entre 88,0 e 97,0 mg/dL; imunoglobulina cadeia pesada entre 93,3 e 103,0 mg/dL; imunoglobulina cadeia leve entre 132,7 e 146,0 mg/dL; &beta;-lactoglobulina entre 299,0 e 329,0 mg/dL e &alpha;-lactoalbumina entre 213,0 e 229,5 mg/dL. Os valores absolutos de proteína total, proteína do soro e frações protéicas aumentam durante a secagem da glândula. Antes da secagem predominavam as frações de &beta;-Lg e &alpha;-La, a partir do 3&ordm; dia, ocorre o surgimento das novas frações e a alteração do perfil protéico sem que haja o predomínio de nenhuma fração. A fase colostral, primeiras 24 horas de lactação, determinam as maiores concentrações de proteína total, proteína do soro e frações protéicas que diminuem após as primeiras 12 horas de lactação estabilizando após o 5&ordm; dia. No colostro as imunoglobulinas são predominantes, e após o período de transição do colostro para o leite as frações &beta;-Lg e &alpha;-La são predominantes. Nos primeiros 15 dias de lactação, devido à influência da fase colostral, observa-se que as concentrações de proteína total e proteína do soro lácteo são maiores. A partir desse momento permanecem estáveis voltando a aumentar no final da lactação. As frações protéicas do soro de leite (lactoferrina, albumina sérica, imunoglobulina de cadeia pesada, imunoglobulina de cadeia leve, &beta;-Lg e &alpha;-La) também são máximas nos primeiros 15 dias de lactação e diminuem ao longo do período. A concentração de proteína do soro e suas frações em cabras primíparas foi menor quando comparadas com cabras pluríparas. O isolamento bacteriano não influencia as concentrações de proteína total do leite e proteína do soro lácteo de cabras, contudo a concentração de lactoferrina é maior e as concentrações de &beta;-Lg e &alpha;-La são menores em amostras com isolamento bacteriano. O CAEV não influencia as concentrações de proteína total do leite e proteína do soro lácteo de cabras, contudo a concentração de lactoferrina é maior e a concentração de e &alpha;-La é menor em cabras sororeagentes positivas ao VCAE. / The aim of this study was to establish reference values of the whey protein through the technique of SDS-PAGE for the full lactation and to evaluate the effects of the dry period of the mammary gland, colostral phase and first month of lactation, lactation, lactation number, bacterial isolation and VCAE infection in proteins of milk secretion in Saanen goats. Were analyzed between 2007 and 2010, 545 milk samples from 185 goats at different stages of lactation. During full lactation, based on the results of the confidence intervals were determined the following reference values: total protein between 2,940.0 and 3,050 mg / dL; whey protein between 903.0 and 973.0 mg / dL; lactoferrin between 68.0 and 77.0 mg / dL, serum albumin between 88.0 and 97.0 mg /dL, immunoglobulin heavy chain between 93.3 and 103.0 mg / dL, immunoglobulin light chain between 132.7 and 146, 0 mg / dL, &beta;-lactoglobulin between 299.0 and 329.0 mg / dL and &alpha;-lactalbumin between 213.0 and 229.5 mg / dL. The absolute values of total protein, whey protein and protein fractions increase during the dry period. Prevailed prior to dry period the fractions of &beta;-Lg and &alpha;-La from the 3rd day, occurs the emergence of new fractions and protein profile changes without the predominance of any fraction The colostral phase, the first 24 hours of lactation, determine the highest concentrations of total protein, whey protein and protein fractions that decrease after the first 12 hours of lactation stabilized after the 5th day. Immunoglobulin in colostrum is prevalent, and after the period of transition from colostrum to milk fractions &beta;-Lg and &alpha;-La are predominant. In the first 15 days of lactation, due to the influence of colostral phase, it is observed that the concentrations of total protein and whey protein are higher. From then remain stable before rising again in late lactation. The protein fractions of whey (lactoferrin, serum albumin, immunoglobulin heavy chain, immunoglobulin light chain, &beta;-Lg and &alpha;-La) are also maximal in the first 15 days of lactation and decrease during the period. The concentration of whey protein and protein fractions in heifers are smaller when compared with multiparous goats. Bacteria isolation does not influence the concentrations of total protein from milk and whey protein of goats, but the concentration of lactoferrin is increased and the concentrations of &beta;-Lg and &alpha;-La is smaller in samples with bacterial isolation. The CAEV does not influence the concentrations of total protein and whey protein in goat, but the concentration of lactoferrin is higher and concentration of &alpha;-La is less in goat positive by the CAEV.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Temproromandibular disfunction (TMD) is related to a masticatory system disfunction which can include the temporomandibular joint (TMJ), the masticatory muscles and/or other related structures. TMJ inflammatory disorders are one of the major pathology of TMD afecting a great number of patients. Although TMJÂs inflammation and pain are important cinical entities, their mechanisms are poorly understood. The purpose of the study is to propose an experimetnal model of TMJÂs arthritis to study its patophysiological mechanisms and inflammatory mediators such as nitric oxide (NO). Female Wistar rats (160-220 g) were used to the study. To induct TMJÂs arthritis, zymosan 40 microL (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) was injected into left TMJ. The animals were sacrified in times 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 days. Nitric oxide syntase inhibitors L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) or 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) were administered 30 min before TMJÂs arthritis induction. Leucocyte influx count in the sinovial fluid, vascular permability study using Evans blue dye extravasation, myeloperoxidase assay (MPO), NO production determination using Griess reaction, histopatological analyisis and imunohystochemical for induced NO synthase (iNOS) were utilized as parameters of this sutudy. It was observed that Zy (2 mg) induced significantly increase in leucocyte influx count (p<0,05), Evans blue dyeÂs extravasation (p<0,05), myeloperoxidase activity (p<0,05) and NO dosage (p<0,05) compared with control group 6 h after TMJ arthritis induction. Histopatological analysis of TMJ of Zy injected animals showed inflammatory cell infiltration in synovial membrane (SM), in conective periarticular tissue, in squeletic muscle tissue and thickness of SM in 6 h after TMJ arthritis. On the 10th day after TMJ arthritis, the TMJ remain showing leucocyte infiltration to synovial membrane (SM), to conective periarticular tissue, to squeletic muscle tissue and thickness of SM, as well as fibrosis of SM and articular disc. On the 21st d after TMJ arthritis, it was observed cell influx only to SM, showing, however, thickness of SM and the major fibrosis of SM, articular cartilage, conective periarticular tissue and articular disc. TMJÂs imunohistochemistry reaction for iNOS showed increase iNOSÂs expression in animals with TMJÂs arthritis compared to the control group. L-NAME 100 mg/kg and 1400W 1 mg/kg reduced the increase in leucocyte count in the synovial fluid, the Evans blue dye extravasation, the histopatological alterations, and reduced the iNOS expression after imunohistochemistry reaction for iNOS 6 h after TMJ arthritis. These results sugest that this experimental model can be used to study TMJ arthritis, and that NO can participate in the physiopathological mechanisms of TMD. / DisfunÃÃo temporomandibular (DTM) à um distÃrbio relacionado à funÃÃo do sistema mastigatÃrio que acomete as articulaÃÃes temporomandibulares (ATM), os mÃsculos mastigatÃrios e/ou estruturas associadas. As desordens inflamatÃrias na ATM classificam-se como uma das quatro classes de DTM, estando presente em um grande nÃmero de pacientes. Embora a inflamaÃÃo e a dor nas estruturas articulares sejam entidades clÃnicas importantes, seus mecanismos sÃo pouco compreendidos. Objetivamos montar modelo experimental de artrite na ATM para estudar a fisiopatologia da doenÃa e a participaÃÃo de mediadores inflamatÃrios como Ãxido nÃtrico (NO). Foram utilizados ratos Wistar fÃmeas (160-220 g) nos quais se injetou 40 microlitros de zymosan (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) na ATM esquerda dos animais para induÃÃo de artrite. Esses animais foram sacrificados nos tempos de 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 dias. Utilizaram-se inibidores da sÃntese de Ãxido nÃtrico L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) ou 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) os quais foram injetados 30 min antes da induÃÃo da artrite. ParÃmetros de contagem do influxo celular no lÃquido sinovial, estudo da permeabilidade vascular pelo extravasamento de azul de Evans, estudo do ensaio de mieloperoxidase (MPO), determinaÃÃo da produÃÃo de Ãxido nÃtrico atravÃs da dosagem de nitrito pelo mÃtodo de Griess, anÃlise histopatolÃgica e imunohistoquÃmica para NO sintase induzida (NOSi) foram avaliados. Observamos que Zy (2 mg) induziu aumento significativo do influxo celular no lÃquido sinovial (p<0,05), do extravasamento de azul de Evans (p<0,05), da atividade de mieloperoxidase (p<0,05) e da dosagem de nitrito/nitrato (p<0,05) na 6 h apÃs induÃÃo da artrite em relaÃÃo ao grupo controle. A anÃlise histopatolÃgica mostrou que Zy (2 mg) induziu, de forma significativa, infiltrado celular na membrana sinovial, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelÃtico e espessamento da MS na 6 h apÃs induÃÃo da artrite. No 10 d apÃs induÃÃo da artrite, continua a apresentar infiltrado celular na MS, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelÃtico e espessamento da MS, assim como passa a apresentar fibrose da MS e do disco articular. No 21 dia apÃs induÃÃo da artrite, foram observados infiltrado celular apenas na MS, com espessamento da mesma, e aumento da fibrose da membrana sinovial, da cartilagem articular, do tecido periarticular e do disco articular, significativamente diferentes em relaÃÃo ao grupo controle. à anÃlise da reaÃÃo de imunohistoquÃmica para NOSi, observou-se aumento da expressÃo de NOSi no animais com Zy (2 mg). Tanto L-NAME 100 mg/kg quanto 1400W 1 mg/kg (p<0,05) foram capazes de reverter o aumento do influxo celular no lÃquido sinovial da ATM (p<0,05), o extravasamento plasmÃtico (p<0,05), as alteraÃÃes histopatolÃgicas e a expressÃo de NOSi pelo estudo da reaÃÃo de imunohistoquÃmica para NOSi observadas na 6 h apÃs induÃÃo da artrite. Esses resultados sugerem que o modelo experimental proposto se presta ao estudo da artrite na ATM, e que NO participa na fisiopatologia do processo inflamatÃrio da DTM.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Daniela Graner Schuwartz Tannus Silva.pdf: 2699876 bytes, checksum: 9f1addca3b98dc8f124ef4cc53bfe67a (MD5) Previous issue date: 2010-12-09 / The diagnosis of latent tuberculosis (TBIL) in patients with rheumatoid arthritis (RA) has got special importance with the advent of anti tumor necrosis factor (anti-TNF-&#945;) and the arise of cases of active tuberculosis in these patients. The tuberculin skin test (TST) is a test used for more than a century on the diagnosis of TBIL but has limited value in patients with RA. New tests that are based on the production and release of interferon-gamma (IFN-&#947;) have been studied but its role has not yet been well established in this group of patients. This paper shows a review about the use of anti-TNF-&#945; and its role on the development of tuberculosis, the use of the TST for the diagnosis of TBIL in patients with RA and new tests for diagnosis of TBIL. The review is illustrated with a case of a patient who developed tuberculosis after starting the use of anti-TNF-&#945;. In the sequence, a study comparing the diagnostic TBIL in a group of RA patients by cellular immune response, compared to TST, T.SPOT-TB and measurement of IFN-&#947; by flow cytometry after stimulation with Hspx and through computed tomography changes consistent with TBIL. It was observed that the response to TST was lower in RA patients (13.5%) than the expected response to the general population. We also observed that the T.SPOT-TB identified a greater number of patients with TBIL compared to PT (36.8%). The IFN-&#947; in response to Hspx was not statistically different among the groups considered TBIL (TST and / or T.SPOT-TB positives) or NO TBIL (TST and T.SPOT-TB negatives). Finally, HRCT showed changes consistent with TBIL in 52.9% of patients, including eight of the eleven patients with TST and T.SPOT TB negatives. Conclusion: The TST alone is not appropriate for the diagnosis of TBIL. The T SPOT TB showed a higher number of positives results compared to TST but was negative in a large percentage of patients with CT changes highly suggestive of TBIL. HRCT is accessible in most major centers and should be incorporated in the diagnostic strategy of TBIL in patients with RA. / O diagnóstico de tuberculose latente (TBIL) em pacientes com artrite reumatoide (AR) ganhou especial importância com o advento do uso dos agentes anti necrose tumoral (anti-TNF-&#945;) e o surgimento de casos de tuberculose ativa nesses pacientes. A prova tuberculínica (PT), teste utilizado há mais de um século no diagnóstico de TBIL, apresenta valor limitado entre os pacientes com AR. Novos exames que se baseiam na produção e liberação de interferon-gamma (IFN-&#947;) vêm sendo estudados, mas ainda não têm seu papel bem estabelecido neste grupo de pacientes. No presente trabalho é realizada uma revisão sobre o uso dos anti-NF-&#945; e seu papel no desenvolvimento da tuberculose, a utilização da PT para o diagnóstico de TBIL nos pacientes com AR e os novos testes para o diagnóstico de TBIL ilustrado com um caso de uma paciente que desenvolveu tuberculose após o início do uso do anti-TNF-&#945;. Segue-se um estudo de comparação do diagnóstico de TBIL em um grupo de pacientes com AR através da resposta imune celular, frente à prova tuberculínica, T.SPOT-TB e medida da produção de IFN-&#947; pela citometria de fluxo após estímulo com Hspx e através de alterações tomográficas compatíveis com TBIL. Observou-se que a resposta à PT foi menor nos pacientes com AR (13,5%) do que a resposta esperada para população geral. Observou-se ainda que o T.SPOT-TB identificou um maior número de pacientes com TBIL em relação à PT (36,8%). A produção de IFN-&#947; em resposta ao Hspx não foi estatisticamente diferente entre os grupos considerados como TBIL (PT e/ou T.SPOT-TB positivos) ou NÃO TBIL (PT e T.SPOT-TB negativos). E, finalmente, a tomografia computadorizada de alta resolução apresentou alterações compatíveis com TBIL em 52,9% dos pacientes estudados, inclusive entre oito dos onze pacientes com PT e T.SPOT-TB negativos. Conclusão: A PT isoladamente é insuficiente para o diagnóstico de TBIL. O T.SPOT TB apresentou maior número de resultados positivos em relação à PT mas foi negativo em grande porcentagem de pacientes com alterações tomográficas bastante sugestivas de TBIL. A TCAR é um exame acessível na maior parte dos grandes centros e deve ser incorporada na estratégia diagnóstica de TBIL em pacientes com AR.