Objetivo: Contribuir para o desenvolvimento do candidato a antitumoral (LaSOM 65) através da avaliação farmacocinética pré-clínica em roedores de diferentes doses pelas vias i.v., p.o e i.p. e avaliação da toxicidade aguda do composto. Metodologia: LaSOM 65 foi administrado a ratos Wistar nas doses de 1 mg/kg i.v. bolus (n = 8), 10 e 30 mg/kg p.o. e 30 e 90 mg/kg i.p. (n = 6/grupo). As concentrações plasmáticas foram quantificadas por CL-UV em método desenvolvido e validado. A ligação às proteínas foi determinada por ultrafiltração e a distribuição tecidual foi avaliada por homogeneizado de tecido após administração i.v. de 1 mg/kg (n = 3 animais/ponto de coleta). Para o ensaio de toxicidade aguda, dose única de 1, 2,5 e 5 mg/kg i.v. e 50, 100 e 150 mg/kg p.o. de LaSOM 65 foi administrada aos animais. Ganho de peso, massa relativa dos tecidos, determinação de parâmetros bioquímicos e hematológicos e uma observação clínica detalhada foram realizados para a avaliação de possíveis efeitos tóxicos. Resultados e Discussão: LaSOM 65 apresentou farmacocinética linear na faixa de dose de 1 a 30 mg/kg (i.v., p.o. e i.p.). Após dose i.v. apresentou um CL = 0,85 ± 0,18 L/h/kg, t1/2 = 1,8 ± 0,7 h e Vd = 1,76 ± 0,24 L/kg. Para a dose de 90 mg/kg i.p. um aumento no Vd (3,2 ± 0,8L/Kg) e t1/2 (2,9 ± 0,9 h) foi observado. O composto apresentou boa biodisponibilidade para as administrações extravasculares (58 e 50% p.o. e 73 e 61% i.p.). A ligação às proteínas foi de 84,7 ± 1,6%. O composto distribuiu-se nos tecidos investigados tendo no pulmão a maior taxa de penetração (ASCtecido/plasma = 2,7) e o cérebro a menor (ASCtecido/plasma = 0,4). Piloereção, diarréia, letargia e dispneia foram os sinais clínicos observados imediatamente após administrações i.v., os quais regrediram após 3 h. Para a via oral nenhuma alteração foi observada. Nenhum outro parâmetro avaliado demonstrou efeitos tociológicos para o LaSOM 65. Conclusões: LaSOM 65 demonstrou uma rápida distribuição tecidual e uma rápida eliminação após administração i.v. Sua boa biodisponibilidade e uma possível ausência de toxicidade apresentada por esta via permitem seu uso oral. A baixa penetração cerebral sugere que desenvolvimento no âmbito farmacotécnico será necessário visando seu uso para o tratamento de gliomas. / Purpose: To contribute with the development of a new anticancer candidate (LaSOM 65) by investigating its pre-clinical pharmacokinetics in rodents after administration of different doses by three routes (i.v., p.o. and i.p.) and acute toxicological evaluation of the compound. Methodology: LaSOM 65 was administrated to Wistar rats in the 1 mg/kg i.v. bolus (n = 8), 10 and 30 mg/kg p.o. and 30 and 90 mg/kg i.p. dose (n = 6/group). Plasma concentrations were determined by a development and validated LC-UV method. Protein binding was determined by ultrafiltration and tissue penetration was investigated in tissue homogenates after i.v. administration of 1 mg/kg (n = 3 animals/time point). For the acute toxicological assay, single administration of LaSOM 65 at the doses of 1, 2.5 and 5 mg/kg i.v. and 50, 100 and 150 mg/kg p.o. were given to the rats. Weight gain, organ relative mass, biochemical and hematological parameters and a detailed clinical observation were evaluated to determine LaSOM 65 toxicity. Results and Discussion: LaSOM 65 showed linear pharmacokinetic between 1 and 30 mg/kg (i.v., p.o and i.p.) with CL = 0.85 ± 0.18 L/h/kg, t1/2 = 1,8 ± 0,7 h and Vd = 1.76 ± 0.24 L/kg after i.v. dosing. After 90 mg/kg i.p. dosing an increase in Vd (3.2 ± 0.8 L/kg) and t1/2 (2.9 ± 0.9 h) were observed. The compound showed good bioavailability after p.o. (58 and 50%) and i.p. (73 and 61%) dosing. The protein biding was 84.7 ± 1.6%. LaSOM 65 distributed into the tissues investigated with a higher penetration ratio into lung (AUCtissue/plasma = 2.7) than into brain (AUCtissue/plasma = 0.4). Piloerection, diarrhea, lethargy and dyspnea were the clinical signs observed immediately after the i.v. administrations and they regressed 3 h post-dosing. No alterations were observed after p.o. dosing. Conclusions: LaSOM 65 showed a rapid tissue distribution and elimination after i.v. administration. Its good bioavailability together with the probably absence of toxicity for the oral route allowed its use by this route. The low brain penetration suggests that a pharmaceutical development will be necessary if LaSOM 65 is intended for the treatment of glioma.

Resumo não disponível.

Evidências clínicas sugerem que pacientes sob tratamento quimioterápico apresentam alguma forma de dano cognitivo. Isso tem sido observado principalmente em estudos com mulheres submetidas ao tratamento adjuvante do câncer de mama. Devido ao potencial impacto clínico dessa complicação, torna-se necessário um maior número de estudos a respeito dos mecanismos envolvidos na disfunção cognitiva ocasionada por agentes quimioterápicos. Nesse sentido, é fundamental o desenvolvimento de modelos animais que aprimorem o conhecimento dessa possível disfunção. Em nosso estudo, foi avaliado o efeito da ciclofosfamida, agente quimioterápico largamente utilizado em oncologia, em especial na terapia adjuvante do câncer de mama. Foi utilizado um modelo animal com camundongos machos adultos que receberam injeção sistêmica da ciclofosfamida nas doses de 8, 40 ou 200 mg/kg ou controle com solução salina. Os animais foram treinados em tarefa de esquiva inibitória e comportamento em campo aberto, sendo avaliados após um dia ou sete dias do tratamento. Os camundongos tratados com ciclofosfamida nas doses de 40 ou 200 mg/kg um dia antes do teste mostraram significativo dano de retenção de memória. Esses resultados sugerem dano cognitivo agudo. O experimento controle não afetou o comportamento em campo aberto, o que enfraquece a possibilidade de dano por ação na locomoção, na motivação ou na ansiedade. Com base em nosso estudo e ampla revisão bibliográfica, é possível considerar um dano cognitivo agudo após injeção única de ciclofosfamida em modelo de camundongos de memória aversiva. Futuros estudos são necessários para caracterizar os déficits cognitivos induzidos pela quimioterapia em modelos animais e investigar os mecanismos responsáveis pelos diferentes efeitos da ciclofosfamida na memória em diferentes modelos experimentais. / Cognitive dysfunction has been reported following cytotoxic therapy, especially in patients receiving adjuvant treatment for breast cancer. Data on experimental models for the study of the mechanisms involved in cognitive dysfunction are scanty. Therefore, new animal models are needed to better understand the causes of cognitive dysfunction following cytotoxic therapy. We examined the effects of cyclophosphamide, a chemotherapeutic agent widely used in oncology, and important in adjuvant treatment of breast cancer, in an in vivo rodent model. In our experiments, male mice were given a systemic injection of cyclophosphamide (8, 40, 200 mg/kg) or saline solution as control. The animals were trained and tested 1 day and 7 days after the injection, in step-down inhibitory avoidance and open-field behavior. Mice treated with cyclophosphamide at 40 or 200 mg/kg 1 day before test showed significant impairment of 24-hour memory retention. Thus, such results suggest acute cognitive dysfunction. The control experiment did not show impairment in the open field behavior, indicating that drug effects on inhibitory avoidance could not be attributed to drug-induced alterations in locomotion, motivation, or anxiety. Based on our results and literature review, we were able to confirm the occurrence of an acute impairment of cognitive function with a single dose of cyclophosphamide in a mice model of aversive conditioning. Further studies are required to further characterize cognitive deficits induced by cancer chemotherapy in animal models.

A própolis vermelha brasileira tem atraído interesses científicos e econômicos devido às suas variadas atividades biológicas. Este produto natural possui composição química variada de acordo com a região na qual é encontrado, sendo necessária uma completa caracterização química para cada tipo de própolis, a fim de se elucidar os compostos presentes e responsáveis pela atividade biológica observada. Neste trabalho, buscou-se caracterizar quimicamente os extratos da própolis vermelha brasileira, avaliar sua atividade antitumoral, bem como alguns mecanismos de morte celular, além de investigar o padrão proteico de células tumorais de laringe (Hep-2) e não tumorais de rim (Hek-293) tratadas e não tratadas com extratos da própolis vermelha através da análise proteômica comparativa. A caracterização química mostrou que a própolis apresenta moléculas complexas, principalmente isoflavonoides, que possuem importantes atividades biológicas, dentre elas a atividade antitumoral. A atividade citotóxica de duas frações e do extrato hidroalcoólico da própolis foi avaliada na linhagem tumoral Hep-2, a qual se revelou mais citotóxica nos tratamentos com as frações investigadas. Os ensaios de citometria mostraram que as células que receberam tratamento apresentaram menor potencial de membrana mitocondrial, maior quantidade de células em apoptose tardia (TUNEL e Anexina-V/PI), menor geração de espécies reativas do oxigênio e o aumento de fragmentação do DNA. Além disto, as colorações revelaram a presença de corpos apoptóticos e condensação de cromatina. A análise proteômica permitiu a comparação dos mapas proteicos da linhagem Hep-2, na ausência ou presença de extratos da própolis vermelha, com a linhagem não tumoral Hek-293. Estas proteínas foram classificadas de acordo com os processos biológicos as quais estão envolvidas. Além disto, doze proteínas identificadas na linhagem Hep-2 apresentaram expressão reduzida comparada ao grupo controle, dentre as quais muitas estão presentes em grande quantidade em outros tumores e são consideradas biomarcadores tumorais. Os resultados, de forma geral, mostram que a própolis interfere em um conjunto de eventos intracelulares e, assim, passa a ser uma candidata promissora para inibir o crescimento celular e contribuir para os diferentes passos relacionados com o processo de carcinogênese. Embora os mecanismos moleculares pelos quais a própolis vermelha interaja com o metabolismo das células permaneçam ainda desconhecidos, estudos adicionais servirão para melhor elucidar a atividade antitumoral da própolis vermelha brasileira e de suas frações. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / The Brazilian red propolis has attracted scientific and economic interests due to its varied biological activities. This natural product has diversify chemical composition according to the region in which it is found, then it is necessary a complete chemical characterization for each type of propolis, in order to elucidate the present compounds and responsible for the biological activity observed. In this work, we attempted to chemically characterize the extracts of Brazilian propolis, evaluate their antitumor activity as well as some cell death mechanisms, and to investigate the protein profile of larynx tumor cells treated and not treated with propolis extracts through comparative proteomic analysis. The chemical characterization showed that propolis has complex molecules, particularly isoflavones, which present significant biological activities, such as antitumor activity. The cytotoxic activity of two fractions and of the hydroalcoholic extract of propolis was assessed in Hep-2 tumor cell line, which proved to be more cytotoxic treatments in the investigated fractions. Flow cytometric assays showed that treated cells had lower mitochondrial membrane potential, increased amount of cells in late apoptosis (TUNEL and Annexin-V / PI), less generation of reactive oxygen species and increase in DNA fragmentation. Furthermore, the staining revealed the presence of apoptotic bodies and chromatin condensation. The proteomic analysis has allowed comparison of the maps of the protein Hep-2 cell line, in the absence or presence of propolis extracts, with non-tumor cell line Hek-293. These proteins were classified according to the biological processes which they are related. Besides, twelve identified proteins in Hep-2 showed reduced expression from the control group. Between them, many are presented in large quantities in other tumors and are considered tumor biomarkers. The results in general show that propolis interferes with a series of intracellular events and hence becomes a promising candidate to inhibit cell growth and contribute to the different steps relating to the process of carcinogenesis. Although the molecular mechanisms by which propolis interact with the metabolism of the cells remain unknown, further study will serve to better elucidate the antitumor activity of Brazilian propolis and its fractions.

Orientadores: Gustavo Antonio de Souza, José Vassallo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:53:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baptista_MauricioZuccolotto_M.pdf: 8709827 bytes, checksum: 83a90faa4c0b3ee087444229cb9deee0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Introdução: Evidências pré-clínicas implicam GRP78 como um possível marcador de resistência em quimioterapia baseada em antracíclicos em câncer de mama. Objetivos: O presente estudo avalia a relação entre a expressão de GRP78 no retículo endoplasmático (RE) e na membrana celular (MC) e a sobrevida global (SG) e a sobrevida livre de progressão (SLP) em pacientes tratadas com antracíclicos na adjuvância. Sujeitos e Métodos: Foram selecionadas 106 pacientes com estádios II e III de câncer de mama. Os dados clínicos foram obtidos de prontuários médicos. O microarranjo de tecidos (TMA) foi construído com blocos de parafina de tumores de mama. A expressão de GRP78 foi avaliada por imuno-histoquímica utilizando quatro cenários distintos: os cenários de alto e baixo limiar para o RE e os cenários de alto e baixo limiar para a MC. Resultados: O follow-up médio foi de 7.54 anos. Nos cenários de alto-limiar, 16% dos casos resultaram em GRP78-positiva para o RE e 40% em GRP78- positiva para a MC. Nos cenários de baixo-limiar, 74% dos casos resultaram em GRP78-positiva para o RE e 87% em GRP78-positiva para a MC. 10% dos casos mostraram nível forte (3+) de intensidade de coloração para GRP78 na MC. Ao término do seguimento não foi encontrada nenhuma relação entre a expressão de GRP78, a progressão de doença e o risco relativo de morte. O mesmo ocorreu com as probabilidades de sobrevida livre de progressão, exceto para mulheres acima de 50 anos de idade e pós-menopausadas, que tiveram um risco reduzido (RR=0.03; IC95% 0.01 a 0.40) de progressão de doença se positivas para GRP78. Não houve diferença estatisticamente significante entre as probabilidades de sobrevida em nenhum dos cenários examinados. Conclusões: Em nossa coorte, a superexpressão de GRP78 não foi significativamente associada à SG e à SLP das mulheres que receberam quimioterapia adjuvante baseada em antracíclicos. Este estudo fornece evidência que sustenta a forte atividade de GRP78 na membrana celular de células de câncer de mama. / Abstract: Introduction: Preclinical evidence implicates GRP78 as one possible marker of resistance to anthracycline-based adjuvant chemotherapy in breast cancer patients. Objectives: The present study assessed the relation between GRP78 expression in the endoplasmic reticulum (ER) and cell membrane (CM) of breast malignancies and overall (OS) and progression-free survival (PFS) of patients treated with anthracyclines in the adjuvant setting. Subjects and Methods: 106 stage II/III breast cancer patients were selected. Clinical data were retrieved from medical reports. Tissue Microarray was constructed from paraffin blocks of breast tumors. GRP78 expression was assessed by immunohistochemistry using four distinct scenarios: low and high GRP78 expression thresholds for ER and CM. Results: The median follow-up was 7.54 years. In the high-threshold scenarios, 16% of our cases were GRP78-positive for ER, and 40% were GRP78-positive for CM. In the low-threshold scenarios, 74% of our cases were GRP78-positive for ER, and 87% were GRP78-positive for CM. 10% of all cases showed strong (3+) CM staining of GRP78. By the end of the follow-up, no relation was found between GRP78 expression and disease progression and the relative risk of death. The same was true for the PFS probabilities, except for women above fifty years and postmenopausal, who had a reduced risk (RR=0.03; 95%CI 0.01 to 0.40) of disease progression if positive for GRP78. There was no statistically significant difference between the survival probabilities in any scenarios examined. Conclusions: In our cohort, GRP78 overexpression was not a predictor of OS or PFS of patients receiving anthracycline adjuvant chemotherapy. This study provides evidence supporting strong GRP78 activity in the CM of breast cancer cells. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Tocoginecologia

Orientador: João Ernesto de Carvalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T17:11:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Madjarof_Cristiana_D.pdf: 1735987 bytes, checksum: 696cbfdb2d89fba67710fa58c64078fa (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A própolis é uma resina coletada por abelhas da espécie Apis mellifera e atualmente esse produto vem se destacando por apresentar propriedades biológicas interessantes, como atividade antimicrobiana, antiinflamatória, antiulcerogênica, antiviral, antioxidante e anticâncer. A própolis brasileira apresenta uma constituição química diferenciada principalmente pela diversidade de espécies vegetais para a retirada de resina; variação esta que aponta para a necessidade de novas investigações tanto da composição química quanto das propriedades biológicas das própolis encontradas em diferentes regiões do país. Neste trabalho, duas novas variedades de própolis, a vermelha (Alagoas) e a pertencente ao grupo 6 (Bahia), foram avaliadas quanto às atividades antitumoral, antiinflamatória e antiulcerogênica revelando resultados diferenciados e promissores com relação a essas atividades. Ambos os extratos brutos das própolis demonstraram atividade antiproliferativa nos ensaios in vitro em cultura de células tumorais, bem como suas frações e compostos isolados; mas quando avaliadas in vivo, observou-se que a própolis vermelha demonstrou maior potência e baixa toxicidade. O mesmo foi observado nos ensaios in vivo para atividade antiinflamatória, podendo essa atividade, estar relacionada à atividade antitumoral. Já para a atividade antiulcerogênica ambas as própolis reduziram o volume de secreção gástrica, sendo esse o provável mecanismo de ação para essa atividade. / Abstract: Propolis is a resinous product collected by Apis mellifera bees and has been used as a pharmaceutical because of its antimicrobial, antiinflammatory, antiulcer, antiviral, antioxidant and anticancer activities. Depending on the region, Brazilian propolis has presented a different chemical composition has a composition reflecting the rich biodiversity of vegetal species to collect the resins. This suggests that further studies are needed to investigate biological properties and chemical composition of each regional propolis. The aim of this study was to investigate antitumoral, antiinflamatory and antiulcerogenic activities of two new types of propolis, collected in Alagoas (called Red Propolis) and in Bahia (a propolis from Group 6). Both propolis etanolic crude extracts had demonstrated an antiproliferative activity in vitro in human tumoral cells, as well their fractions and isolated compounds, although in vivo evaluation pointed out that red propolis was more efficient and less toxic. The same result was observed to antiinflamatory activity and probably there is a relationship with antitumoral activity. Antiulcerogenic activity of both própolis was significative and probably due to gastric secretion reduction as the pharmacological mechanism of action. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: João Ernesto de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T04:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_VanessaHelenadaSilva_M.pdf: 2374598 bytes, checksum: e4b1046468b0d7343de5f3a6147c3f2c (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A utilização de plantas medicinais simboliza muitas vezes o único recurso terapêutico para muitas comunidades e grupos étnicos. A espécie Imperata brasiliensis Trin. (Poaceae), com ampla distribuição no Brasil, é utilizada na medicina popular como analgésico e diurético, porém pouco se conhece sobre seu potencial farmacológico. Este trabalho propôs trabalhar com o Extrato Bruto Hidroetanólico e Frações originadas por procedimentos fitoquímicos de partição e fracionamentos, a fim de identificar possíveis classes de compostos responsáveis pela ação antiproliferativa em cultura de células tumorais humanas e murinas, bem como avaliar sua atividade anticâncer e antiedematogênica em modelos in vivo. Nos ensaios de atividade antiproliferativa in vitro a Fração FAE demonstrou atividade e portanto foi fracionada originando as principais Frações I e J que após análises cromatográficas e de refracionamento demonstraram ser mais ativas que a Fração de origem (FAE) com maior seletividade para linhagens de melanoma e a atividade citotoxica in vitro foi atribuída a presença de compostos fenólicos e terpênicos atuando sinergicamente. Em modelo anticâncer de tumor de Ehrlich em camundongos a Fração FAE se mostrou ineficiente. Foi avaliado também a atividade antiedematogênica in vivo para das Frações FAE, I e J que demonstraram potencial atividade, especialmente para a FAE 100mg/Kg e Fração J 100mg/Kg. Posteriormente a Fração FAE foi submetida a avaliação antinociceptiva em três protocolos distintos para avaliação de dor inespecífica, dor neurogênica de origem periférica e central onde observou-se um comportamento analgésico inespecífico da Fração FAE sem nenhuma atividade sobre dor de origem neurogênica, resultado que sustentou a possível ação antinflamatória de substâncias presentes nas frações de I. brasiliensis / Abstract: The use of medicinal plants often simbolizes the only therapeutic source for many comunities and ethnic groups. The plant species Imperata brasiliensis Trin. (Poaceae), broad distributed in Brazil, is used in popular medicine as analgesic and diuretic, although little is known about its pharmacological potential. This project proposed to work with the hidroethanolic crude extract and the active fractions originated from pthytochemical procedures of biomonitored fractioning and partioning, in order to identify possible classes of compounds responsible for the antiproliferative activity in human and murine cancer cell lines, and also its anticancer and antiedematogenic activity in vivo models. In vitro antiproliferative assays demonstrated that the fraction FAE is active, which was further fractionated yielding fractions I and J, which after chromatographic analysis proved to be more active than the origin fraction (FAE), presenting selectivity for melanoma cell lines. The in vitro citotoxic activity was attributed to the presence of fenolic and terpenic compounds acting sinergically. In the murine model Solid Ehrlich Tumor, fraction FAE demonstrated to be inefficient. The antiedematogenic activity was also evaluated in vivo for fractions FAE, I and J, which showed potential interesting results, especially for FAE 100mg/kg and fraction J 100mg/kg. Posteriorly, fraction FAE was submitted to an antinociceptive evaluation, in three distinct protocols of inespecific, periferic and central neurogenic pain, in which an inespecific analgesic behavior was observed with the fraction FAE. No other neurogenic pain was observed, suggesting the possible antiinflamatory acitivity of the substances present in the active fractions of I. brasiliensis / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: João Ernesto de Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T10:12:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jankowsky_Luciana_M.pdf: 15004319 bytes, checksum: b642a2ac8b5c75f4b7f3bfba253b8688 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: o conhecimento sobre plantas medicinais constitui, inúmeras vezes, o único recurso terapêutico de diversas comunidades e a busca de novos compostos bioativos a partir da rica biodiversidade brasileira é uma estratégia com reflexos econômicos e sociais reconhecidamente positivos. Adicionalmente, parte da floresta tropical é explorada para a produção de madeira, gerando anualmente cerca de 10 milhões de toneladas de resíduos, nos diversos processos industriais de manufatura. Unindo a busca de princípios ativos com a possibilidade de uso dos rejeitos da indústria madeireira, a presente pesquisa teve por principal objetivo avaliar a potencial aplicação farmacológica do extrato bruto diclorometânico (EDB) e do extrato bruto etanólico (EBE), obtidos a partir dos resíduos de quatro espécies tropicais (Tabebuia sp, Bowdichia nitida, Dipteryx odorata e Myroxy/on balsamum). Inicialmente todos os extratos foram testados para averiguar possível atividade anticâncer, em cultura de células tumorais humanas. O EBD de Tabebuia sp, na concentração de 2,5 ug/mL, apresentou ação citocida para as linhagens tumorais representativas de adenocarcinoma ovariano, melanoma e leucemia. O EBE da B. nitida demonstrou atividade citocida, na concentração de 25 ug/mL para as linhagens tumorais representativas de adenocarcinoma prostático, leucemia e melanoma. O EBD de D. odorata, na concentração de 25 ug/ml,apresentou atividade citocida seletiva para leucemia e carcinoma ovariano. O EBD de M. balsamum demonstrou ação citocida, na concentração de 25 ug/mL, para as linhagens tumorais representativas de melanoma, adenocarcinoma colorretal, prostático e renal, carcinoma mamário e mamário-resistente, leucemia. Entre os extratos ativos o EBD de M. balsamum foi selecionado para estudos em outros modelos experimentais. No teste geral de atividade em camundongos esse extrato apresentou atividade depressora do sistema nervoso central (SNC), chegando a produzir hipnose profunda, e atividade antinociceptiva. Em modelos de úlcera gástrica reduziu as ulcerações produzidas por antiinflamatório e etanol e, em ligadura de piloro reduziu a secreção ácida. A atividade farmacológica do EBD de M. balsamum observada em diversos modelos experimentais pode ser conseqüência da variedade de compostos químicos presente no extrato, indicando a necessidade de estudos para determinação do mecanismo de ação e identificação dos princípios ativos / Abstract: The knowledge about the use of medicinal plants is, innumerable times, the only therapeutic resource for several communities; and to search new bioactive compounds from Brazilian biodiversity is one strategy with positive economic and social consequences. Additionally, part of the tropical forest is explored for lumber and wood based products, generating annually about 10 million tons of residues, in the industrial manufacture processes. Joining the search of active principies with the possibility to use of lumber industry reject, the present research had as main objective to evaluate the potential for pharmacologic application of dichloromethane gross extract (EDB) and ethanol gross extract (EBE), extracted from residues of four tropical species (Tabebuia sp, Bowdichia Nitida, Dipteryx odorata e Myroxy/on ba/samum). Initially all the extracts had been tested to anticancer activity, in cultured human tumor cells. The EBD of Tabebuia sp, at concentration of 2,5 ug/mL, presented cytocide activity to ovarium carcinoma, melanoma and leukemia. The EBE of B. nitida at 25 ug/mL concentration showed cytocide activity to prostate adenocarcinoma, leukemia and melanoma. The EBD of D. odorata, at concentration of 25 ug/ml, presented selective cytocide activity for leukemia and ovarium carcinoma. EBD of M. balsamum demonstrated cytocide action, at concentration of 25 ug/mL,to melanoma, leukimia, breast and breas tresistant carcinoma, prostate, colon and kidney adenocarcinoma. The EBD of Myroxylon balsamum was experimented in other models, resulting depressing activity on central nervous system (CNS), such as hypnosis; antinoceptive action and untiulcer action. The wide range of M. balsamum EDB could be attributed to its particular chemical composition. Those results stimulate the continuity of studies with lumber residues, in the search of new therapeutic drugs / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: João Ernesto de Carvalho, Mary Ann Foglio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:39:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sacoman_JulianaLessa_M.pdf: 21702719 bytes, checksum: 1522ff705d917fd77eec5e23216a58ea (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os primeiros registros históricos da humanidade já relatavam o uso.de plantas para tratamento de diversos males e, com o aprimoramento dos estudos e técnicas de purificação, isolamento e identificação dos princípios ativos, foi possível o desenvolvimento de medicamentos para utilização em diversas patologias, inclusive na quimioterapia do câncer. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade anticâncer de duas espécies da flora brasileira, Anacardium humile St. Hil. e Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, de uso medicinal popular. Os extratos brutos diclorometânico (EBD) e etanólico (EBE) das folhas dessas espécies foram avaliados em ensaio de citotoxicidade in vitro em cultura de células tumorais humanas. Como o EBD de P. umbellata apresentou o melhor perfil de atividade in vitro, foi selecionado para avaliação em modelo de câncer murino, o tumor ascítico de Ehrlich. Nesse modelo, esse extrato apresentou atividade anti-tumoral dose dependente e, com isso, a identificação dos princípios responsáveis por essa atividade tomou-se fundamental. Desse modo, o EBD foi submetido a diversos procedimentos cromatográficos, sendo as frações obtidas biomonitoradas pelo teste de citotoxicidade. Esse procedimento permitiu a identificação de duas frações com elevada potência e seletividade anticâncer, sendo que na primeira fração (A) foram identificados derivados do ácido oxálico e na segunda (C), esteróides e triterpenos. A indução de morte celular por apoptose, avaliada por imunocitoquímica, foi significativa nas células UACC-62, OVCAR-3 e NCIADR/ RES quando tratadas pela fração A e nas células UACC-62, OVCAR-3 e 786-0, quando tratadas pela fração C. Uma outra fração (B), constituída principalmente do composto 4-nerolidilcatecol, não apresentou atividade anticâncer significativa. Esses resultados estimulam a continuidade dos estudos com a P. umbellata, com o objetivo de identificar os princípios ativos, determinar o mecanismo de ação anticâncer e comprovar sua atividade em modelos experimentais de câncer in vivo / Abstract: Plants are used in folk medicine since old times of human history, and improvements in techonology, research, purification techniques, isolation and identification of active principIes have allowed the discovery and development of new molecules as drugs for terapheutics of many diseases, such as cancer. This work aimed the evaluation of the anticancer activity of two Brazilian species, Anacardium humile St. Hil. and Pothomorphe umbellata (L.) Miquel, used in folk medicine. Dichlorometanic (DCE) and ethanolic (ECE) crude extracts obtained from leaves of both species were tested in an in vitro citotoxicity assay against human cancer celllines. As long as P. umbellata's DCE showed the best anticancer activity profile, it was also evaluated in a murine cancer model, the Ehrlich Ascite Tumor (EAT). In this experiment, DCE also demonstrated a dose response relationship anticancer activity; therefore the isolation and identification of the active principIe responsible for that activity became the major focus of this work. As a result, DCE was submitted to many cromatographic procedures which were bioguided by the anticancer assay in vitro. This chromatographic purifications permitted identification of two main fractions with high potency and selectivity: fraction A consitituted by oxalic acid derivatives, and fraction C by steroids and triterpenes. The quantification of apoptosis induction by immuncytochemical analysis were significant for UACC-62, OVCAR-3 and NCI-ADR/ RES celllines treated with fraction A, whereas UACC-62, OVCAR-3 and 786- o cells lines went to apoptosis when exposed to fraction C. A third fraction, denominated fraction B, was rich in 4-nerolidylcathecol, widely knowm for this plant specie, and did not show any significative anticancer activity. These results encouraged following up on studies with P. umbellata, priorizing the identification of active principIes, the determination of anticancer mechanism of action and to prove the anticancer activity in experimental cancer models in vivo / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Introdução. Embora muitas crianças com câncer possam ser curadas, um número significativo têm resposta insatisfatória por ineficácia da terapêutica tornando necessário identificar agentes anticâncer mais efetivos contra tumores refratários ou recaídos. Estudos com Etoposide revelaram uma clara relação entre o tempo de exposição e os seus efeitos citotóxicos, mostrando resultados superiores com o uso de doses fracionadas quando comparado ao uso de uma dose única. Estudos de farmacocinética sugerem que as concentrações plasmáticas ativas de Etoposide se situa entre 1 e 5 μg/ml e que níveis acima de 5 μg/ml determinam uma mielotoxicidade importante. O Etoposide apresenta um bom espectro antitumoral mesmo em pacientes que já foram tratados por via parenteral e uma adequada biodisponibilidade pela via oral, podendo ser administrado com segurança em regime ambulatorial. Portanto, torna-se atraente a busca de esquemas de administração deste agente, os quais produzem níveis de concentração plasmática seguras pelo maior tempo possível. Objetivos. Os objetivos deste estudo de fase I é avaliar o perfil de toxicidade, a toxicidade dose-limitante, a dose máxima tolerada, a farmacocinética plasmática e a dose segura do Etoposide oral recomendada para estudos de fase II em pacientes pediátricos portadores de tumor sólido refratário. Materiais e Métodos. Todos os pacientes eram portadores de tumor sólido não responsivo aos tratamentos estabelecidos. A dose inicial do Etoposide foi de 20mg/m2/dose, a cada 8 horas durante 14 dias seguido de um intervalo de 7 dias antes de iniciar o próximo ciclo. A farmacocinética plasmática do Etoposide foi estudada durante o primeiro dia de tratamento e os níveis de Etoposide determinados pelo método de HPLC. Resultados. Dezessete pacientes foram incluídos no estudo, sendo que em 13 foram realizados o estudo de farmacocinética. O número total de cursos de quimioterapia foi de 64. Nove pacientes foram incluídos no Nível de dose I, sendo que leucopenia grau 2-3 foi observada em 5. A dose foi então escalonada para 25 mg/m2 (Nível de dose II) e fornecida a 8 pacientes subsequentes o que determinou leucopenia grau 3-4 em 4 deles. Este Nível de dose foi então considerado como DMT (Dose Máxima Tolerada). A TDL foi neutropenia. As concentrações plasmáticas máximas de Etoposide nos pacientes incluídos no Nível de dose I e II foram de 2,97 e 8,59 μg/ml, respectivamente, e os níveis da droga >1 μg/ml foi mantido durante cerca de 6,3 horas após a administração da droga em ambos os níveis de dose. Resposta parcial foi observada em 1 paciente e 4 apresentaram doença estável. Conclusões. A administração prolongada de Etoposide oral nas doses de 20 mg/m2 a cada 8 horas durante 14 dias consecutivos, seguidos de 7 dias de repouso, foi bem tolerada e determinou uma toxicidade manejável em crianças e adolescentes portadores de doenças malignas refratárias. A dose de 20 mg/m2 aparentemente preencheu os requisitos farmacocinéticos que objetivam melhorar o índice terapêutico do Etoposide, ou seja, a obtenção de níveis plasmáticos citotóxicos sustentados e abaixo do limite de toxicidade clínica da droga. / Background. Although the majority of children with cancer can be cured, there is still a need for new agents to treat patients with relapsed or refractory tumors. Etoposide is highly schedule-dependent for its antitumor activity, showing superior results when a multiple drug administrations is compared with single high dose administration. Pharmacokinetic analysis suggested that this could be related to the greater anti-tumor effect obtained when etoposide plasma concentrations between 1 and 5 μg/ml are sustained, avoiding the myelotoxicity observed with high plasma levels (> 5 μg/ml). Considering that the therapeutic plasma levels can be achieved with oral route, the patients can be treated in the outpatient clinic which minimizes the inconvenience and the costs associated with hospitalization. Therefore, it is essential identify an appropriate dose that produce safe therapeutic plasma levels for a longer period of time than that obtained using a high concentration over short period of time and may enhance Etoposide antineoplastic efficacy. Objectives. The objectives of this phase I study were to evaluate the toxicity profile, dose-limiting toxicities (DLT), maximum tolerated dose (MTD), plasma pharmacokinetics and to recommend a safe fractionated dose of oral etoposide for phase II trials in pediatric patients with refractory solid tumors. Procedure. All patients had refractory solid tumor no longer amenable to established forms of treatment. The initial dose of etoposide was 20mg/m2 three-times daily for 14 days every 21 days (dose-level I). Etoposide plasma pharmacokinetics were studied on day 1 of treatment and determined by HPLC. Results. Seventeen children were enrolled, 13 of whom were included in the pharmacokinetic study. The total number of courses was 64. Nine patients were included at dose-level I and grade 2-3 leucopenia was observed in 5. The dose was escalated to 25mg/m2 (dose-level II) thereafter in another 8 patients and grade 3-4 leucopenia was observed in 4. This dose-level was therefore considered the MTD. The DLT was neutropenia. In patients at dose-level I and II the maximum plasma etoposide concentrations was 2.97 and 8.59μg/ml, respectively; and drug levels >1μg/ml were maintained for about 6.3 hours following drug administration at both dose-levels. Partial response was observed in 1 patient and 4 patients showed a stable disease. Conclusions. Prolonged oral Etoposide at dose of 20mg/m2 three-times daily for 14 days every 21 days was well tolerated in children and adolescents with refractory solid tumor. The pharmacokinetic study showed that patients included at this dose-level achieved an adequate (1 - 5 μg/ml) plasma concentration of Etoposide for a prolonged time.