Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-03-07T14:01:30Z No. of bitstreams: 1 TESE_Moreira, BO_completa.pdf: 7889959 bytes, checksum: 0eb32bd2a12e116b042f2279e225b777 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-05-09T19:15:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE_Moreira, BO_completa.pdf: 7889959 bytes, checksum: 0eb32bd2a12e116b042f2279e225b777 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-09T19:15:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_Moreira, BO_completa.pdf: 7889959 bytes, checksum: 0eb32bd2a12e116b042f2279e225b777 (MD5) / CNPq / O presente trabalho descreve o estudo fitoquímico e a avaliação da atividade antioxidante, anticolinesterásica, antinociceptiva, anti-inflamatória e da toxicidade, de Schinopsis brasiliensis Engl. (Anacardiaceae), planta utilizada na medicina popular para o tratamento de impotência sexual, inflamação na garganta, tosse e diarreia. Também descreve o desenvolvimento e validação de um método analítico utilizando CLAE-DAD para quantificação de substâncias bioativas na casca do caule e nas folhas de Cenostigma macrophyllum Tul. (Leguminosae) e avaliação da atividade antioxidante, anticolinesterásica, antionociceptiva e anti-inflamatória dos extratos padronizados. As fases orgânicas obtidas por partição do extrato metanólico bruto dos galhos, casca e cerne da raiz de S. brasiliensis apresentaram boa atividade antioxidante, pelo método do sequestro do radical livre DPPH e do sistema - caroteno/ácido linolênico. As fases CHCl3, AcOEt e BuOH do cerne e da casca da raiz de S. brasiliensis apresentaram atividade superior a 50% de inibição da acetilcolinesterase, ao passo que o extrato metanólico bruto da raiz apresentou atividade antinociceptiva e anti-inflamatória in vivo, avaliadas através dos ensaios de contorção abdominal induzida por ácido acético e determinação da migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal. As fases hexânica, CHCl3 e BuOH da casca e do cerne da raiz de S. brasiliensis apresentaram elevada toxicidade no teste da A. salina. Através da analise por CG-EM das fases hexânica e clorofórmica da raiz de S. brasiliensis foram identificados a presença principalmente de compostos fenólicos, ácidos graxos e seus ésteres metílicos, esteroides e carboidratos. Através de métodos cromatográficos usuais (CC, CCDP em sílica gel e permeação em gel de Sephadex LH-20) foi possível isolar das diferentes fases dos galhos e raízes de S. brasiliensis as substâncias β-sitosterol e seu derivado glicosilado, α e -amirina, galato de metila, ácido gálico, ácido elágico, quercetina-3-O-β-D-xilopiranosídeo e os novos dímeros de chalcona 2’,4,4’,5-tetrahidroxichalcona-(27’’,88’’)-4’’- hidroxietenilbenzeno (schinopsona A) e (7’’*R,8’’*S)-2’,4,4’,5-tetrahidroxichalcona- (27’’,88’’)-2’’’,4’’,4’’’-trihidroxi-7’’,8’’-dihidrochalcona (schinopsona B). As estruturas das substâncias isoladas foram elucidadas através da análise dos dados obtidos pelos espectros de massas de alta resolução, RMN de 1H e 13C (BB e DEPT), NOEdiff além de técnicas bidimensionais (HMBC, HMQC ou HSQC, NOESY). O método analítico de perfil cromatográfico desenvolvido e validado, utilizando CLAE-DAD, foi aplicado na quantificação de ácido gálico, galato de metila, ácido elágico, agathisflavona e amentoflavona no extrato metanólico das folhas e casca do caule de C. macrophyllum. Os extratos padronizados apresentaram boa atividade antioxidante, tanto pelo método do sequestro do radical livre DPPH quanto pelo sistema -caroteno/ácido linolênico. No teste de atividade anticolinesterásica os extratos das folhas e da casca do caule apresentaram 68,77 ± 1,20% e 86,91 ± 1,76%, respectivamente de inibição da acetilcolinesterase. A avaliação da atividade antinociceptiva e anti-inflamatória in vivo demonstraram que os dois extratos avaliados apresentaram boa atividade. / This work describes the phytochemical study and evaluation of antioxidant, anticholinesterase, antinociceptive, anti-inflammatory activities and toxicities of Schinopsis brasiliensis Engl. (Anacardiaceae), a plant which is used in folk medicine to treat impotence, sore throat, cough and diarrhea. It also describes the development and validation of an analytical method by HPLC/DAD for quantification of bioactives compounds present in the bark of stem and leaves of Cenostigma macrophyllum Tul. (Leguminosae) besides the evaluation of antioxidant, anticholinesterase, antinociceptive and anti-inflammatory activities of its standardized extracts. The organic phases obtained from the partition of the crude methanol extract of stems, bark and heartwood of the root of S. brasiliensis showed good antioxidant activity by the methods of the quenching of DPPH and -carotene /linolenic acid system. The CHCl3, EtOAc and BuOH phases of the heartwood and the bark of the roots of S. brasiliensis showed activity superior to 50% of inhibition of acetylcholinesterase, while crude methanolic extract from the root showed in vivo antinociceptive and anti-inflammatory activities, obtained by writhing in the acetic acid induced test and determination of neutrophil migration to the peritoneal cavities. The hexane, CHCl3 and BuOH phases of the barks and heartwood of the roots of S. brasiliensis showed high toxicity in the brine shrimp test. By GC-MS of the hexane and chloroform extracts from root of S. brasiliensis could be identified mainly the presence of phenolic, fatty acids and their methyl esters, steroids and carbohydrates. Ordinary chromatographic techniques such as CC, CCDP on silica gel and gel permeation in Sephadex LH-20 permitted to isolate from the different organic phases of the branches and the roots β-sitosterol and its glycosyl derivative, α-amyrin, - amyrin, methyl gallate, gallic acid, ellagic acid, quercetin-3-O-β-D-xylopyranoside and new chalcone dimmers, the 2',4,4', 5-tetrahydroxychalcone-(27', 88')-4'- hydroxyetenylbenzene (schinopsone A) and the (7’’*R,8’’*S)-2’,4,4’,5-tetra- hydroxychalcone-(27’’,88’’)-2’’’,4’’,4’’’-trihydroxy-7’’,8’’-dihydrochalcone (schinopsone B). The structures of the isolates were elucidated by the data obtained through, high-resolution mass spectra, 1H and 13C NMR (BB and DEPT), NOEdiff and two-dimensional NMR techniques (HMBC, HMQC or HSQC, NOESY). The chromatographic analytical method developed and validated using HPLC-DAD was applied to the quantification of gallic acid, methyl gallate, ellagic acid, agathisflavone and amentoflavone from the methanol extract of leaves and stems bark of C. macrophyllum. Standardized extracts showed good antioxidant activity, in both tests assayed (quenching of radical DPPH and -carotene/linolenic acid system). Anticholinesterase activity of extracts from the leaves and bark of stem showed 68.77 ± 1.20% and 86.91 ± 1.76%, respectively of acetylcholinesterase inhibition. The evaluation of the in vivo antinociceptive and anti-inflammatory activity demonstrated that both extracts evaluated show good activity.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Jatropha isabellei Müll Arg. belongs to the Euphorbiaceae family and is popularly known as yaguá-rova, turubiti and mamoneiro do campo. The decoction from the underground parts of this plant is popularly used to treat arthritis, gout, back pain and induce abortion. This work aims to determine the antioxidant capacity and antimicrobial activity of J. isabellei as well as to isolate the chemical constituents and to evaluate the popular use for gouty arthritis in an animal model. The underground parts of J. isabellei were collected in May 2008, in Cacequi, RS. The material is deposited in the herbarium of Department of Biology at Federal University of Santa Maria under register number SMDB 11.816. The plant material was dried, milled and macerated with the solvent ethanol:water (70:30, v/v). The fractions were obtained by fractionation of the crude extract with organic solvents of increase polarity (dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol). The ethyl acetate fraction showed the best antioxidant activity against the DPPH free radical with IC50 de 14.78 ± 1.10 Sg/mL and inhibition profile similar to ascorbic acid. This fraction also showed the best values in the determination of phenolic compounds, flavonoids and condensed tannins. The crude extract and butanolic fractions showed antioxidant activity proportional to the dosage of phenolics. The dichloromethane fraction did not showed good antioxidant capacity, but allowed the isolation of a mixture of triterpenes in first time reported for this species, sitosterol 3-O-β-D glucoside and stigmasterol. The lipid peroxidation induced by Fe (II) showed that all the fractions at concentrations of 50 and 100 Sg/mL were able to inhibit significantly the production of TBARS, reaching the baseline levels when compared to control. In the antimicrobial activity the dichloromethane fraction showed the best results against the fungi S. schenckii e F. proliferatum and against bacteria of the Micrococcus genus. The crude extract of J. isabellei and its alkaloid purified fraction showed antinociceptive and antiedematogenic effects in an animal gouty arthritis model, scientifically proving the popular use of this plant. / A espécie Jatropha isabellei Müll Arg pertence à família Euphorbiaceae e é conhecida popularmente como yaguá-rova, turubiti e mamoneiro do campo. A decocção das partes subterrâneas da planta é utilizada popularmente para tratar artrite, gota, dores nas costas e induzir o aborto. Este trabalho tem como objetivo determinar a capacidade antioxidante e a atividade antimicrobiana de J. isabellei, bem como, isolar consituintes químicos e avaliar o uso popular para atrite gotosa em modelo animal. As partes subterrâneas de J. isabellei foram coletadas em maio de 2008 em Cacequi, RS. O material testemunho está depositado no Herbário do Departamento de Biologia da UFSM catalogado sob número de registro 11.816. O material vegetal foi seco, moído e macerado com solvente etanol:água (70:30, v/v). As frações foram obtidas por fracionamento do extrato bruto com solventes orgânicos de polaridades crescentes (diclorometano, acetato de etila, n-butanol). A fração acetato de etila apresentou a melhor atividade antioxidante frente ao radical DPPH, com IC50 de 14,78 ± 1,10 Sg/mL e perfil de inibição semelhante ao ácido ascórbico. Esta fração também apresentou os melhores valores no doseamento de polifenóis, flavonóides e taninos condensados. O extrato bruto e a fração butanólica apresentaram atividade antioxidante proporcional ao doseamento dos ativos fenólicos. A fração diclorometano não apresentou boa capacidade antioxidante, mas proporcionou o isolamento de uma mistura de triterpenos relatados pela primeira vez na literatura para esta espécie, o sitosterol 3-O-β-D glicosídeo e estigmasterol. A indução da peroxidação lipídica por Fe(II) mostrou que todas as frações nas concentrações de 50 e 100 Sg/mL foram capazes de inibir significativamente a produção de TBARS alcançando os níveis basais, quando comparadas ao controle. Na atividade antimicrobiana, a fração diclorometano apresentou os melhores resultados frente aos fungos S. schenckii e F. proliferatum e frente a bactérias do gênero Micrococcus. O extrato bruto de J. isabellei e sua fração rica em alcalóides apresentaram efeitos antinociceptivos e antiedematogênicos em modelo animal de artrite gotosa, comprovando cientificamente o uso popular desta planta.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2233780 bytes, checksum: 36fd18af67f2bd8e2c76af844131f20c (MD5) Previous issue date: 2012-08-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Heterocyclic compounds are the biggest sources of synthetic drugs and have grown exponentially with important applications in the pharmaceutical industry. Amongst the heterocyclic compounds, it has been highlighted the thiophenes category and its derivatives, which call attention for presenting important pharmacological actions, especially analgesic and the anti-inflammatory ones. The present study aims to investigate the Antinociceptive, anti-inflammatory activity and acute pre-clinical from tiophenic derivative 6CN10. The behavioral pharmacological screening of treated animals (250, 500 and 1000 mg/kg) showed changes, such as analgesia and ambulation reduction. There was no death of animals or the presence of toxic signs. From the pharmacological screening was determined the use of three doses (25, 50 and 100 mg/kg) for other studies. In the Rota rod and open field tests, there were no changes in the motor coordination of animals, discarding the possibility of a myorelaxant effect. Through models of nociception inducers, such as the abdominal constriction induced by acetic acid, formalin and hot plate, it was noticed a dose-dependent Antinociceptive activity of 6CN10. Such effect did not show itself to be associated to the opioid via of central analgesia, once this derivative did not produce any significant effect in the hot plate test, and because it has not been blocked by naloxone, an pattern antagonist opioid. The 6CN10 inhibited significantly the time of paw licking in both phases of the formalin test, especially at the inflammatory phase, being needed an analysis of the anti-inflammatory activity of the derivative. For this purpose, it was used the model of induced peritonitis by carrageenan, where there was inhibition of neutrophil migration to the intra-peritoneal cavity of treated animals, demonstrating the anti-inflammatory activity of 6CN10. In the acute toxicological study after treatment with the dosage of 1000 mg/kg 6CN10, it was observed a reduction in the food intake and in the body weight in females. The examined hematological parameters remained unaffected. The treatment was able to raise levels of ALT and AST, in both sexes, corroborating with histopathological findings that showed evidence of Hepatotoxicity. The kidneys, heart and lungs showed no histological particularities. Therefore, the results presented in this study showed a promising effect of 6CN10 as an analgesic and anti-inflammatory substance, however its security should be better investigated. / Os compostos heterocíclicos são as maiores fontes de fármacos sintéticos e têm crescido exponencialmente apresentando importantes aplicações na indústria farmacêutica. Entre os compostos heterocíclicos destacamos a classes dos tiofenos e seus derivados, que despertam grande interesse por apresentarem ações farmacológicas importantes, sobretudo, analgésica e antiinflamatória. O presente estudo se propôs a investigar a atividade antinociceptiva, antiinflamatória e a toxicidade pré-clínica aguda do derivado tiofênico 6CN10. A triagem farmacológica comportamental dos animais tratados (250, 500 e 1000 mg/kg) demonstrou alterações, tais como, analgesia e redução da ambulação. Não houve morte dos animais, nem presença de sinais tóxicos. A partir da triagem farmacológica determinou-se a utilização de três doses (25, 50 e 100 mg/kg) para os demais estudos. Nos testes de rota rod e campo aberto, não foram observadas alterações na coordenação motora dos animais, descartando a possibilidade de um efeito miorelaxante. Por meio de modelos indutores de nocicepção, como os testes das contorções abdominais induzidas por ácido acético, da formalina e da placa quente, foi observado uma atividade antinociceptiva dose-dependente de 6CN10. Tal efeito não demonstrou associar-se à via opióide de analgesia central, uma vez que este derivado não produziu efeito significativo no teste da placa quente, e por não ter sido bloqueado pela naloxona, um antagonista opióide padrão. 6CN10 inibiu significativamente o tempo de lambedura da pata em ambas as fases do teste formalina, sobretudo na fase inflamatória, se fazendo necessário uma análise da atividade antiinflamatória do derivado. Para este fim, utilizou-se o modelo de peritonite induzida pela carragenina, onde houve inibição da migração de neutrófilos para a cavidade intraperitoneal dos animais tratados, demonstrando a atividade antiinflamatória do 6CN10. No estudo toxicológico agudo após tratamento com a dose de 1000 mg/kg de 6CN10, foi observado redução da ingestão de alimentos e peso corpóreo nas fêmeas tratadas. Os parâmetros hematológicos analisados permaneceram inalterados. O tratamento foi capaz de elevar os níveis de ALT e AST, em ambos os sexos, corroborando com os achados histopatológicos que mostraram indícios de hepatotoxicidade. Os rins, coração e pulmões não apresentaram particularidades histológicas. Portanto, os resultados apresentados neste estudo evidenciaram um efeito promissor de 6CN10 como substância analgésica e antiinflamatória, contudo a sua segurança deve ser melhor investigada.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ArquivoTotal.pdf: 14314411 bytes, checksum: 28743a0226eb51126ce933c575333208 (MD5) Previous issue date: 2013-08-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work is described the synthesis of ten new tetrahydropyran derivatives (compounds 42-51) designed from (±)-Naproxen structure utilizing the Prins reaction of cyclization as the key step to building shaped diastereoselective 2,4- cis and 2,4,6-cis rings tetrahydropyran, with overall yields between 62 - 65%. These new tetrahydropyran derivatives were in vivo bioevaluated on antinociceptive effect in the acetic acid-induced abdominal writhing test, the tail flick test, the rota-rod performance and open field tests, and all these new compounds showed greater antinociceptive activity compared to compound (±)- 1a, highlighting high activity tetraidropirânico derivative (±)-49, which showed 87.5% of inhibition, whereas compound (±)-1a gave only 14% inhibition in in the acetic acid-induced abdominal writhing test. Moreover, the (tail-flick test) indicated compounds (±)-46 and (±)-49 as the most actives, and all compounds showed antinociceptive activity (except compound (±) -51) without harming the motor impairment and without showing toxicity in mice. In continuation to this work, there was the synthesis of new hybrid molecules based on the structure of six non-steroidal anti-inflammatory drugs with a portion tetrahydropyran using molecular hybridization strategy. These new hybrid tetrahydropyran (74 - 79) were obtained in yields between (70 - 93%). Preliminary studies antinociceptive effect in the acetic acid-induced abdominal writhing test in the compounds (74 - 79) showed that all tetrahydropyran derivatives were more efficacious (lower ED50) and their precursors drugs and no sign of intoxication were observed in the animals. / Neste trabalho, é descrito a síntese de 10 novos derivados tetraidropirânicos compostos (42 51) planejados a partir da estrutura do (±)-Naproxeno, utilizando a reação de ciclização de Prins como etapa chave para a construção em forma diastereosseletiva 2,4-cis e 2,4,6-cis de anéis tetraidropirânicos, com rendimentos globais entre 62 65%. Estes novos derivados tetraidropirânicos foram bioavaliados in vivo em testes de contorções abdominais, retirada de cauda, desempenho no rota-rod e campo aberto, sendo que todos estes compostos apresentaram uma maior atividade antinociceptiva em relação ao composto (±)-1a, com destaque para a alta atividade do derivado tetraidropirânico (±)-49, que apresentou 87,5% de inibição, enquanto que o composto (±)-1a apresentou apenas 14% de inibição no teste de contorções abdominais induzida por ácido acético. Além disso, os testes de retirada de cauda indicaram os compostos (±)-46 e (±)-49 como os mais ativos, sendo que todos os compostos apresentaram atividade antinociceptiva (exceto composto (±)-51) sem prejudicar o comprometimento motor e sem demonstrar toxicidades em camundongos. Em continuação ao nosso trabalho, realizou-se a síntese de moléculas híbridas inéditas baseadas na estrutura de seis fármacos antiinflamatórios não esteroidais com uma porção tetraidropirânica utilizando a estratégia de hibridização molecular. Estes novos derivados tetraidropirânicos híbridos (74 79) foram obtidos em rendimentos entre 70 93%. Estudos preliminares realizados em teste contorções abdominais induzidas por ácido acético realizados nos compostos (74 79) revelaram que todos os derivados tetraidropirânicos foram mais eficazes (DE50 menor) que os seus fármacos percusores e nenhum sintoma de intoxicação foi observado nos animais.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:21:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 9887169 bytes, checksum: df02b626a4888063d509afbbb46317e8 (MD5) Previous issue date: 2014-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This work was presented using the technique of molecular hybridization which is a classic strategy in medicinal chemistry and useful in the design of new drugs, consisting of the covalent joining of two or more fragments known pharmacophoric or already present recognized therapeutic activities. Described the technique of extraction, isolation and purification of piperine 6 with 2% yield, with the same natural molecule mostly present in black pepper, where studies have shown a variety of biological activities as analgesic, anti-inflammatory, anti-thermal, antitumor, antifungal, antichagasic, insecticide, leishmanicidal, among others. Next, was performed the synthesis of the respective piperic acid 12 obtained via basic hydrolysis with 87% yield. A series of alcohols tetrahydropyran derivatives replaced (33, 34, 37, 38, 79 and 80) were synthesized in good yields (76% -100%), with synthetic route and potent antinociceptive already described by our group research. The Prins cyclization reaction was used as key step to build diastereoselective 2,4-cis and 2,4,6-cis tetrahydropyranyl rings. Subsequently, we performed the synthesis of 6 novel hybrid molecules (64, 65, 66, 67, 68 and 69), based on the structure of an analog of piperine (piperic acid) with 6 alcohols substituted tetrahydropyran derivatives, using the classical approach molecular hybridization by Steglich esterification reaction to join the two portions with relatively good yields (42% - 78%), which was the intention enhance the analgesic activity by these two chemical entities. All molecular hybrids were characterized by spectroscopic (1H and 13C) and IR / Neste trabalho foi apresentado o uso da técnica de hibridização molecular que é uma estratégia clássica em química medicinal e bastante útil na concepção de novos fármacos, consistindo na junção covalente de dois ou mais fragmentos reconhecidamente farmacofóricos ou que já apresentem atividades terapêuticas reconhecidas. Descreveu-se a técnica de extração, isolamento e purificação da piperina 6 com 2% de rendimento, sendo a mesma uma molécula natural presente principalmente na pimenta preta, onde estudos mostraram uma série de atividades biológicas como, analgésico, antiinflamatório, antitérmico, antitumoral, antifúngico, antichagásico, inseticida, leishmanicida, dentre outras. Em seguida, foi realizado a síntese do seu respectivo ácido pipérico 12 obtido via hidrólise básica com 87% de rendimento. Uma série de derivados álcoois tetraidropiranos substituídos (33, 34, 37, 38, 79 e 80) foram sintetizados em bons rendimentos (76%-100%), com rota sintética e potente atividade antinociceptiva já descritas pelo nosso grupo de pesquisa. A reação de ciclização de Prins foi usada como etapa chave para a construção, em forma diastereosseletiva 2,4-cis e 2,4,6-cis, dos anéis tetraidropiranos. Posteriormente, realizou-se a síntese de 6 moléculas híbridas inéditas (64, 65, 66, 67, 68 e 69), baseadas na estrutura de uma análogo da piperina (ácido pipérico) com os 6 derivados álcoois tetraidropiranos substituídos, utilizando a estratégia clássica de hibridização molecular através da reação de esterificação de Steglich para unir as duas porções, com rendimentos relativamente bons (42%-78%), onde o intuito foi potencializar a atividade analgésica apresentada por estas duas entidades químicas. Todos os híbridos moleculares foram caracterizados pelas técnicas de espectroscopia (1H e 13C) e infravermelho

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Mo-CBP4 à uma proteÃna ligante à quitina, com atividade anti-inflamatÃria e antinociceptiva, isolada de sementes de Moringa oleifera Lamarck, uma Ãrvore conhecida pelo seu valor medicinal. Este trabalho teve como objetivo a caracterizaÃÃo estrutural, farmacolÃgica e toxicolÃgica de Mo-CBP4, com foco na sua utilizaÃÃo como agente terapÃutico. Mo-CBP4 à um heterodÃmero de 11,8 kDa, composto por cadeias de 3,9 kDa e 8,4 kDa. O sequenciamento de Mo-CBP4 por degradaÃÃo de Edman e espectrometria de massas mostrou a presenÃa de muitos resÃduos de aminoÃcidos bÃsicos e alta similaridade com proteÃnas isoladas de sementes de M. oleifera. AnÃlises espectroscÃpicas utilizando dicroÃsmo circular demonstraram que Mo-CBP4 à composta por α-hÃlices (36%), folhas-β (15%), voltas (19%) e estruturas ao acaso (30%), com alta estabilidade estrutural frente a variaÃÃes de temperatura e pH. Mo-CBP4 (0,1, 1,0 e 10 mg/kg), por via endovenosa, mostrou atividade anti-inflamatÃria no modelo de peritonite induzida por carragenina em ratos, com inibiÃÃo (79%) da migraÃÃo de neutrÃfilos jà na menor dose. Atividade anti-inflamatÃria de Mo-CBP4 (40 mg/kg) tambÃm ocorreu por via oral em camundongos, usando o mesmo modelo citado, com significativa inibiÃÃo (48%) da migraÃÃo de neutrÃfilos. Tal atividade permaneceu mesmo apÃs aquecimento da proteÃna a 100 ÂC por 1 hora, porÃm, a prÃ-incubaÃÃo com N-acetil-D-glucosamina 0,1 M foi capaz de reverter sua aÃÃo. Os nÃveis sÃricos de IL-1β e IL-10, apÃs induÃÃo de peritonite, sofreram alteraÃÃo com o prÃ-tratamento da proteÃna. Adicionalmente, Mo-CBP4 (10 mg/kg) mostrou atividade antinociceptiva, verificada atravÃs do teste da formalina (2,5%), quando administrada via intraperitoneal, inibindo apenas a dor perifÃrica. No modelo de hipernocicepÃÃo mecÃnica induzida por carragenina, animais tratados via oral com a proteÃna (20, 40 e 80 mg/kg), 1 hora antes do agente inflamatÃrio, mostraram-se mais resistentes à sensibilizaÃÃo apÃs 1, 3 e 5 horas, apresentando inibiÃÃo mÃxima na dose de 40 mg/kg, estando essa atividade relacionada com a reduÃÃo da migraÃÃo de neutrÃfilos. A hipernocicepÃÃo direta causada por PGE2 ou epinefrina nÃo sofreu alteraÃÃo com o prÃ-tratamento de Mo-CBP4. A proteÃna tambÃm nÃo causou comprometimento na atividade locomotora dos animais, quando submetidos ao teste do campo aberto. A administraÃÃo oral de Mo-CBP4 em dose Ãnica (2000 mg/kg) ou em doses repetidas (10, 40 e 100 mg/kg) nÃo resultou em efeitos tÃxicos ou adversos. Similarmente, avaliaÃÃo da citotoxicidade e genotoxicidade de Mo-CBP4, utilizando cÃlulas tumorais ou normais, mostrou ausÃncia de toxicidade. Os resultados obtidos sugerem que devido Ãs propriedades anti-inflamatÃria e antinociceptiva, alta estabilidade e aparente ausÃncia de toxicidade, Mo-CBP4 possui grande potencial como um futuro biofÃrmaco. / Mo-CBP4 is a chitin-binding protein that is associated with the antinociceptive and anti-inflammatory effects of Moringa oleifera seeds, a tree known for its medicinal value. The aim of this study was the structural, pharmacological and toxicological characterization of Mo-CBP4, focusing on its use as a therapeutic agent. Mo-CBP4 is a 11.8 kDa heterodimer, composed by 3.9 kDa and 8.4 kDa chains. Mo-CBP4 sequencing by Edman degradation and mass spectrometry showed the presence of many basic amino acid residues and high similarity with other proteins from M. oleifera seeds. Circular dichroism spectroscopy showed that the Mo-CBP4 contains 36% α-helix, 15% β-sheet, 19% turn and 30% unordered and high structural stability to temperature and pH variations. Mo-CBP4 (0.1, 1.0 and 10 mg/kg) by intravenous administration showed anti-inflammatory activity on the model of carrageenan-induced peritonitis in rats, with inhibition (79%) of neutrophil migration already at the lowest dose. Mo-CBP4 (40 mg/kg), when administered by oral route on mice, using the same mentioned model, also presented anti-inflammatory activity, causing a significant inhibition (48%) of neutrophil migration. Mo-CBP4 retained this activity even after heating at 100 ÂC or pre-incubation with 0.1 M N-acetyl-D-glucosamine, both for 1 hour. Serum levels of IL-1β and IL-10 after peritonitis induction changed in Mo-CBP4-pretreated mice. In addition, Mo-CBP4 (10 mg/kg), administered intraperitoneally, also showed antinociceptive activity by using the formalin (2.5%) test in mice model, inhibiting just the peripheral pain. In the carrageenan-induced mechanical hypernociception model, animals pretreated with oral Mo-CBP4 (20, 40 and 80 mg/kg), 1 hour prior to inflammatory agent use, proved to be more resistant to sensitization after 1, 3 and 5 hours, with maximal inhibition at a dose of 40 mg/kg, being this activity correlated with the reduction of neutrophil migration. Direct hypernociception caused by epinephrine or PGE2 was not affected with Mo-CBP4 pretreatment. Mo-CBP4 did not impair the locomotor activity of animals in the open field test. In general, no toxic signs or adverse effects were seen after oral administration of Mo-CBP4 at a single dose (2000 mg/kg) or after repeated doses (10, 40 and 100 mg/kg). Similarly, cytotoxicity and genotoxicity tests with Mo-CBP4, using tumour or normal cells, showed no toxicity. The results suggest that due to anti-inflammatory and antinociceptive properties, high stability and apparent lack of toxicity, Mo-CBP4 has great potential as a future biopharmaceutical drug.

Cladonia clathrata (Cladoniaceae) is a lichen specie and several Cladonia species extracts have been used in folk medicine. In order to evaluate the actions of this lichen extract, studies were performed on antinociceptive, anti-inflammatory, and antioxidant activities. The hydroalcoholic extract of C. clathrata (HECc) was used in the following experiments and elicited inhibitory activity (p < 0.001) on acetic acid effect at 100 (47.2%), 200 (47.2%), and 400 mg/Kg (86.4%), and reduced the formalin effect on both the first- (400 mg/Kg, p < 0.01) and second-phases (200 and 400 mg/Kg, p < 0.01). Carrageenan-induced neutrophil migration into the peritoneal cavity was inhibited with the HECc (p < 0.001) at the dose of 400 mg/Kg. The HECc react with the DPPH radical and reduce the same by 25.76%, and exhibited IC50 value of 77.39 ± 5.03 mg/mL DPPH. The HECc shows antinociceptive and anti-inflammatory activities, with antioxidant potential. / Cladonia clathrata (Cladoniaceae) é uma espécie liquenica e vários extratos de espécies de Cladonia são utilizados como remédios na medicina popular. Para avaliar as ações do extrato desse líquen, estudos foram realizados sobre as atividades antinociceptiva, anti-inflamatória e antioxidante. O extrato hidroalcoólico da C. clathrata (EHCc) foi utilizado nos experimentos e produziu atividade inibitória (p < 0,001) sobre o efeito do ácido acético no modelo de contorções abdominais nas doses de 100 (47,2%), 200 (47,2%) e 400 mg/Kg (86,4%), além de reduzir o efeito da formalina na primeira (400 mg/Kg, p < 0,01) e segunda (200 e 400 mg/Kg, p < 0,01) fases da nocicepção. A migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal induzida pela carragenina foi inibida pelo pré-tratamento dos animais com o EHCc na dose de 400 mg/Kg (p < 0,001). O EHCc reagiu com o radical DPPH e reduziu o mesmo em 25,76%, com um valor de CI50 de 77,39 ± 5,03 mg/mL de DPPH. O EHCc mostrou atividades antinociceptiva e anti-inflamatória, com potencial antioxidante.

Combretum duarteanum Cambess is a medicinal plant from north and northeast of Brazil, know popularly as Vaqueta or Caatinga-branca . Infusions prepared with the aerial parts (stems and leaves) of C. duarteanum are used in folk medicine for the treatment of pain and as sedative. The objective of this study was to evaluate the antinociceptive, anti-inflammatory and antioxidant potentials of ethanolic extract of Combretum duarteanum (EEC). The antioxidant activity was investigated in vitro using lipid peroxidation, hydroxyl radical-scavenging, and scavenging activity of nitric oxide (NO) assays. EEC possesses a strong antioxidant potential according in these tests, and also presented scavenger activity of NO and hydroxyl. The antinociceptive activity was investigated using acetic acid-induced writhing, formalin, and hot plate tests in mice. EEC (100, 200, and 400 mg/kg; i.p.) significantly reduced the number of writhes (38.1, 90.6, and 97.8%, respectively), This extract also decrease the number of paw licks during phase 1 (30.5 and 69.5%, higher doses) and phase 2 (38.1, 90.6, and 97.8%, all doses) of a formalin test. EEC increased the latency of animals in the hot plate, effect that was reversed by naloxone, suggesting the involvement of opioid system in its mechanism of action. Administration of the EEC (200 and 400 mg/kg; i.p.) exhibited an anti-inflammatory activity in the carrageenin and arachidonic acid-induced rat paw edema test. These results indicate that the EEC has antinociceptive activity mediated by central pathways, with possible participation of the opioid system. Besides, antincociceptiva and anti-inflammatory effects associated with peripherals mechanisms, with inhibitory action of prostaglandin synthesis and the contribution of its antioxidant potential. / A família Combretaceae compreende 20 gêneros com cerca de 600 espécies, o maior dos quais é o gênero Combretum, com cerca de 370 espécies. Combretum duarteanum Cambess é uma planta medicinal do norte e nordeste do Brasil, conhecida popularmente como "Vaqueta" ou "Caatinga-branca". As infusões preparadas com a parte aérea do C. duarteanum são usadas na medicina popular para o tratamento da dor e como sedativo. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial antioxidante, antinociceptivo e anti-inflamatório do extrato etanólico das folhas de C. duarteanum (EEC). A atividade antioxidante foi investigada in vitro usando o ensaio da lipoperoxidação e teste para investigação da atividade sequestradora de radicais hidroxila (●OH) e óxido nítrico (NO). Nestes protocolos, o EEC apresentou efeito sobre a lipoperoxidação, com ação sequestradora dos radivais NO e ●OH. A atividade antinociceptiva foi investigada utilizando os testes das contorções abdominais induzidas pelo ácido acético, formalina e placa quente em camundongos. O EEC (100, 200 e 400 mg/kg, i.p.) reduziu significativamente o comportamento nociceptivo dos animais (38,1, 90,6 e 97,8%, respectivamente). Este extrato também reduziu o tempo em que o animal lambeu a pata na 1ª fase (30,5 e 69,5%, 200 e 400 mg/kg) e 2ª fase (38,1, 90,6 e 97,8%, todas as doses) do teste da formalina. O EEC aumentou o tempo de permanência dos animais na placa quente, efeito este que foi revertido pela naloxona, sugerindo a participação do sistema opióide no mecanismo de ação do EEC. A administração do EEC (200 e 400 mg/kg; i.p.) exibiu atividade anti-inflamatória frente ao edema de pata induzido pela carragenina e ácido araquidônico em ratos. Esses resultados indicam que o EEC possui atividade antinociceptiva mediada por vias centrais, com possível participação do sistema opióide. Além de ação antinociceptiva e anti-inflamatória associadas a mecanismos periféricos, com provável ação inibitória da síntese de prostaglandinas e pela contribuição do seu potencial antioxidante.

Sideroxylon obtusifolium belongs to the family Sapotaceae. This study aimed to contribute to the scientific knowledge of the antinociceptive, anti-inflammatory and antioxidant properties of the steam bark of Sideroxylon obtusifolium (Roem. & Schult.) T.D. Penn, popularly known as quixabeira and used to treat pain and inflammation. The ethanol crude extract of the dried and triturated stem bark (EE, 459,60 g) was submitted to liquidliquid extraction (400 g) with hexane, chloroform and ethyl acetate to give fractions hexane (11,90 g), chloroform (6,08 g), ethyl acetate (43,72 g) and hydromethanol (181,35 g). The EE and its fractions were submitted to phytochemical analysis, which detected groups of secondary metabolites such as phenols, flavanoids, xanthones, steroids, triterpens, saponins, tannins and cathechins. The effects of the extract and its fractions in nociception (using the models of abdominal writhing induced by acetic acid, hot plate and formalin in mice), inflammation (using the models of paw edema and peritonitis induced by carrageenan in mice) and antioxidant (using the scavenging of DPPH method) were evaluated. In the model of abdominal writhing induced by acetic acid, the oral treatment with of EE at 400 mg/kg had similar inhibition to that of AAS. The model of hot plate showed that the EE did not cause an increase in the latency time by the thermal stimulus at 55 ± 0.5°C, suggesting does not have central antinociceptive action. The EE only inhibited the second phase in the formalin test, which suggested that had inflammatory antinociception, which showed possibly acts by inhibiting the enzyme ciclo-oxygenase (COX). When evaluating the anti-inflammatory action by the carrageenan-induced paw edema model, the oral feeding of the EE was effective in reducing the edema-forming response between second and fourth hour after injecting carrageenan. Peritonitis model showed that the oral administration of EE was effective in reducing the leukocyte migration after 4 h of the i.p. injection of carrageenan, which was similar to dexamethasone. The DPPH assay showed the EE and its fractions ethyl acetate and hydromethanol present a antioxidant activity in vitro, which can be related to the presence of polyphenols. Therefore, the extract of S. obtusifolium has relevant phytochemical, which can be influencing the anti-inflammatory, analgesic, and antioxidant activities, suggesting it can be submitted to new pharmacological studies and clinical trial. / A planta escolhida pertence à família Sapotaceae. Este estudo teve como objetivo contribuir para o conhecimento científico das ações antinociceptiva, anti-inflamatória e antioxidante da entrecasca da Sideroxylon obtusifolium (Roem. & Schult.) T.D. Penn, popularmente conhecida como quixabeira e usada no tratamento da dor e inflamação. Para tanto, o extrato etanólico bruto (EE, 459,60 g) da entrecasca da planta seca e triturada foi submetido à extração líquido-líquido (400 g) com hexano, clorofórmio e acetato de etila, obtendo assim as frações hexânica (11,90 g), clorofórmica (6,08 g), acetato de etila (43,72 g) e hidrometanólica (181,35 g). Este extrato e suas frações foram submetidos à prospecção fitoquímica detectando assim grupos de metabólitos secundários relevantes, como fenóis, flavonóides, xantonas, esteróides, triterpenóides, saponinas, taninos e catequinas. Em seguida, foram avaliados os efeitos desse extrato na nocicepção (nos modelos de contorções abdominais induzida por ácido acético, placa quente e formalina em camundongos), inflamação (nos modelos de edema de pata e de peritonite induzidos por carragenina em ratos) e oxidação (método do seqüestro do DPPH). No modelo de contorções abdominais induzida por ácido acético, o EE quando administrado por via oral na concentração de 400 mg/kg apresentou inibição similar ao AAS. Já no modelo da placa quente o EE não influenciou no aumento do tempo de latência pelo estímulo térmico de 55 ± 0,5°C, sugerindo não tem ação antinociceptiva central. Observando o modelo da formalina o efeito do EE apresentou inibição apenas na segunda fase mostrando antinocicepção do tipo inflamatória, sugerindo ação através da inibição da ciclo-oxigenase (COX). Na avaliação da ação anti-inflamatória pelo modelo de edema de pata induzido por carragenina em ratos, demonstrou que a administração oral do EE foi efetivo em reduzir a resposta edematogênica entre a segunda e quarta hora após a injeção de carragenina. No modelo de peritonite demonstrou que o EE por via oral foi efetivo em reduzir a migração leucocitária após 4 h a injeção i.p. de carragenina de forma similar à dexametasona. O método do seqüestro do DPPH permitiu estabelecer a ação antioxidante in vitro do EE e das frações acetato de etila e hidrometanólica, que pode estar relacionada aos compostos polifenólicos presentes. Assim, identificamos que o extrato da S. obtusifolium possui compostos fitoquímicos que influenciaram nas atividades anti-inflamatória, analgésica e antioxidante.

In this study, we identified the antinociceptive and anti-inflammatory effects of the flavonoids PMT1 and PMT2 from Piper montealegreanum, geopropolis and pollen from stingless bee Melipona subnitida and the phenolic fractions extraction, such as the ethanolic extract, fractions and a catechin (XACC-1) isolated from Ximenia americana. The antinociceptive effects of PMT1 and PMT2 (0.1, 1, 30 and 100 μmol/kg, i.p.) were evaluated using the classical tests acetic acid-induced writhing, reduced the writhings with an ID50 of 0.58 and 0.44 μmol/kg, respectively. Moreover, these flavonoids (100 μmol/kg, i.p.) inhibited paw-licking time in the first phase of the formalin test, but only PMT2 was active in the second phase. However, PMT1 and PMT2 (100μmol/kg, i.p.) did not increase the latency time of the animals in the hot plate. In order to evaluate the anti-inflammatory effect of these flavonoids, capsaicin-induced ear oedema assay was carried out. Both flavonoids (100μmol/kg, i.p.) were active in this model. The ethanolic extract of pollen colleted by M. subnitida, the fractions ethyl acetate and hydromethanol and the flavonoid tricetin, when tested in mice, induced antinociceptive effects. The anti-inflammatory activity of the flavonoid tricetin was also confimed. Moreover, acetic acid-induced writhing test was initially used to evaluate the antinociceptive activity of the ethanolic extracts (100 mg/kg) of geopropolis and their phenolics fractions (100 mg/kg). The results demonstrate that the ethanolic extract (100 mg/kg), produced inhibition of abdominal constrictions induced by acetic acid in mice (p<0.05), with inhibitions of 96.9% to 100%. Phenolic fractions at the same concentration also inhibited the number of writhes (p<0.05) from 71.4% to 93.5%. The fact that the ethanolic extracts showed slightly greater antinociceptive activities than the phenolic fractions suggests that geopropolis contains other compounds responsible for this activity and should be chemically investigated, however the phenolic fraction is probably principally responsible for this activity. The antinociceptive and anti-inflammatory action of the ethanolic extract, fractions and XACC-1 isolated from X. americana were also determined utilizing in vivo models such as acetic acid-induced writhing, the formalin test, hot plate test, Zymosan A-induced peritonitis and an in vitro cyclooxygenase inhibition assay. The writhing test revealed antinociceptive effects of all samples from X. americana. In the formalin test verified an antinociceptive effect in both the early and late phases by XACC-1, while the chloroform fraction showed a lower antinociceptive effect in the first phase; and the aqueous fraction and ethanolic extract of stem bark caused significant inhibition in the second phase. XACC-1 and the ethyl acetate fraction had no central antinociceptive effect in the hot plate test. Anti-inflammatory effects were determined for Zymosan A-induced peritoneal inflammation and the data indicated that XACC-1, the hydromethanol fraction, the ethanolic extract and the ethyl acetate fraction reduced the number of recruited cells. Moreover, it observed that XACC-1 also inhibited in vitro COX-1 and COX-2. The biological actions showed in the present study demonstrate that PMT1 and PMT2 from P.montealegreanum, tricetin, extract and factions from pollen and extract and fractions geopropolis both from M. subnitida, such as the extract, fractions and XACC-1 from X. americana produce antinociceptive and anti-inflammatory responses. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neste estudo identificamos o efeito antinociceptivo e anti-inflamatório dos flavonoides PMT1 e PMT2 obtidos das partes aéreas de Piper montealegreanum, o extrato etanólico e frações fenólicas de geoprópolis , bem como o extrato, frações (acetato de etila e hidrometanólica) e o flavonoide tricetina, sendo ambos (geoprópolis e pólen) coletados pela abelha Melipona subnitida, também foi estudado o extrato etanólico, frações e o flavonoide epicatequina XACC-1 obtidos da casca do caule de Ximenia americana. O efeito antinociceptivo de PMT1 e PMT2 (0,1; 1; 30 e 100 μmol/kg, i.p.) foi avaliado usando o ensaio de contorção abdominal induzida por ácido acético, os flavonoides foram capazes de inibir o número de contorções com uma DI50 de 0,58 e 0,44 μmol/kg, respectivamente. Além disso, estes flavonoides (100 μmol/kg, i.p.) inibiram o tempo de lambida na 1ª fase do teste de formalina, mas apenas PMT2 permaneceu ativo na 2ª fase. No entanto, PMT1 e PMT2 (100 μmol/kg, i.p.) não aumentaram o tempo de latência dos animais na placa quente. A fim de avaliar o efeito anti-inflamatório destes flavonoides, o ensaio de edema da orelha induzido por capsaicina foi realizado. Ambos os flavonoides (100 μmol/kg, i.p.) foram ativos neste modelo. O extrato etanólico do pólen coletado por M. subnitida, a fração acetato de etila, hidrometanólica e o flavonoide tricetina, quando testados em camundongos, induziram efeito antinociceptivo no ensaio de contorções abdominais. A atividade anti-inflamatória do flavonoide tricetina também foi confirmada no ensaio de edema de pata induzido por carragenina. Além disso, o teste de contorção induzida por ácido acético foi utilizado para avaliar a atividade antinociceptiva dos extratos etanólicos (100 mg/kg) de geoprópolis e respectivas frações fenólicas (100 mg/kg). Os resultados demonstram que os extratos etanólicos produziram uma inibição significativa (p <0,05), com inibições de 96,9% a 100%. As frações fenólicas, na mesma dose, inibiram também o número de contorções (p <0,05) na proporção de 71,4% a 93,5%. O fato dos extratos etanólicos mostrarem ligeiramente maior atividade antinociceptiva que as frações fenólicas, sugere que geoprópolis contém outros compostos responsáveis por esta atividade, os quais devem ser investigados quimicamente. A ação antinociceptiva e anti-inflamatória do extrato etanólico, frações e a XACC-1 isolada de X. americana foram também determinadas utilizando modelos in vivo, tais como contorções abdominais induzidas por ácido acético, o teste de formalina, teste de placa quente, peritonite induzida por Zymosan A e um ensaio de inibição de ciclooxigenase in vitro. Verificou-se o efeito antinociceptivo de XACC-1 em ambas as fases do teste da formalina, enquanto que a fração clorofórmio induziu inibição apenas na 1ª fase; já a fração aquosa e o extrato etanólico causaram inibição significativa na 2ª fase. A XACC-1 e fração acetato de etila não apresentaram nenhum efeito antinociceptivo central observado no teste da placa quente. O efeito anti-inflamatório foi determinado pela inflamação peritoneal induzida por Zymosan A e os dados indicam que XACC-1, o extrato etanólico a fração hidrometanólica, e acetato de etila reduziram o número de células recrutadas. Além disso, observou-se também que XACC-1 inibe in vitro COX-1 e COX-2. As ações biológicas mostradas no presente estudo sugerem que PMT1 e PMT2 de P. montealegreanum, tricetina, extrato e frações do pólen e extrato e frações de geoprópolis obtidos pela M. subnitida, bem como o extrato, frações e XACC-1 de X. americana produzem resposta antinociceptiva e anti-inflamatória.