Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T10:12:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 288452.pdf: 18421548 bytes, checksum: 1fce1ff2624a6da0c4283042fc679586 (MD5) / AIDS é um dos principais problemas de saúde pública atuais e acredita-se que a epidemia somente será controlada com uma vacina capaz de impedir ou controlar a infecção causada pelo HIV. Inúmeras estratégias vacinais têm sido investigadas experimentalmente, dentre elas o uso de vírus recombinantes como vetores vacinais, para indução de resposta imune no trato genital, uma das mais importantes portas de entrada do HIV. Neste estudo avaliou-se a indução de células T no trato genital feminino de camundongos BALB/c mediante a administração de vetores adenovirais expressando a proteína Gag de HIV-1. Diferentes protocolos de imunização utilizando vetores adenovirais símios foram avaliados quanto à indução de resposta imune celular Gag-específica em tecidos sistêmicos e de mucosas. A imunização por via intranasal induziu baixa frequência de células T CD8+ Gag-específicas no trato genital e em tecidos sistêmicos. A imunização por via intramuscular foi capaz de induzir frequência de células T CD8+ Gag-específicas de maior magnitude do que a administração por vias de mucosa, sendo esta resposta detectada em diversos tecidos, inclusive no trato genital feminino, por ao menos um ano após a administração da vacina. As células T CD8+ Gag-específicas de origem genital apresentaram elevada expressão de diversos marcadores de ativação celular e secretaram IFN- . A administração intramuscular do vetor adenoviral alterou também a frequência e o fenótipo de células T CD4+ e CD8+ de origem genital. Foi observado que apesar de anticorpos neutralizantes representarem a principal forma de interferência da imunidade pré-existente ao vetor vacinal na indução de células transgene-específicas em tecidos sistêmicos e sangue, no tecido mucoso esta situação é provavelmente também mediada por mecanismos celulares. Em conjunto, estes resultados sugerem que a administração intramuscular de vetores adenovirais símios expressando a proteína Gag de HIV-1 induz resposta imune celular transgene-específica capaz de residir no trato genital feminino por longos períodos, sendo que esta resposta pode ser alterada pela presença de imunidade pré-existente contra o vetor vacinal.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Jurídicas. Programa de Pós-Graduação em Direito / Made available in DSpace on 2012-10-25T16:12:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302347.pdf: 871401 bytes, checksum: 23bae056a97f961d03c781829e07584c (MD5) / O Sistema Internacional de Patentes, tal como foi historicamente delineado para promover o desenvolvimento científico e tecnológico expõe, nos âmbitos jurídicos e políticos, as fragilidades de um sistema na garantia do direito à saúde e acesso, sobretudo nos países em desenvolvimento. A partir da análise do Acordo sobre Aspectos de Direitos de Propriedade Intelectual, acordo TRIPS, seus objetivos e princípios norteadores, chega-se à análise aos requisitos de patenteabilidade. O presente estudo objetiva analisar os fundamentos do Sistema Internacional de Patentes por meio da proteção jurídica da Biotecnologia, esta aplicada à saúde com foco nas doenças negligenciadas A partir do reconhecimento dos limites e possibilidades do Sistema Internacional de Patentes na seara Biotecnológica, identificam-se as falhas na saúde, na ciência e as falhas de mercado que obstaculizam o acesso e a promoção do direito à saúde, consubstanciado normativamente sob a égide da Declaração Universal dos Direitos Humanos. Diversos atores como organizações não-governamentais, universidades, Estados compõem a pluralidade de ações e desafios: integrar esforços científicos e tecnológicos na concretização e erradicação das doenças negligenciadas. O primeiro capítulo apresenta os conceitos referentes à saúde pública e propriedade intelectual bem como sua progressiva sistematização. Os Objetivos de Desenvolvimento do Milênio surgem como metas globais a serem alcançadas e, por terem relação estreita com a saúde, assinalam a prevalência de políticas na promoção da saúde humana. O segundo capítulo explicita os fundamentos de recompensa por meio das Patentes, com base no Acordo TRIPS e seus requisitos de patenteabilidade. O terceiro demonstra a viabilidade de um sistema global de inovação em saúde, por meio das parcerias, explicitada no Patent Pool para AIDS e doenças extremamente negligenciadas. / The International Patent System, which has historically been designed to promote scientific and technological development, has also shown an impact on public health policies and juridical protection legislation, especially in developing countries. Patents are crucial instruments in technology transfer as shown by the objectives and guiding principles of the agreement on Trade-Related aspects of Intellectual Property rightS, (TRIPS). However, many patent licenses have been used to strength the legal protection in technology transfer from the licensees# countries. This study aims to analyze the International Patent System from a juridical perspective in order to examine how patent licenses have been used to hamper the biotechnology transfer in the health sector, mainly focusing on its potential impact on the policies for the eradication of neglected diseases in developing countries. Non-governmental organizations, universities, industry and states are some examples of the key actors in the health sector that have been identified as having interests, conflicts, and concerns in the integration of scientific and technological efforts for the eradication of neglected diseases. The first chapter introduces the concepts related to public health and intellectual property as well as its progressive systematization. The Millennium Development Goals emerge as global targets to be achieved, and have close relationship with health, indicate the prevalence of policy in promoting human health. Neglected diseases, poor investment in research and development, R & D can not be wrong and just being part of the touring historical occurrences in the past. Biotechnology applied to health, from this perspective can fill the vacuum existing investment. The second chapter explains the basics of rewards through patents and ends with the analysis of the requirements for patentability. The third demonstrates the feasibility of a global system of innovation in health, through partnerships, explained in the Patent Pool for increasing investment in neglected diseases.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T19:49:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289322.pdf: 1352290 bytes, checksum: 60582a492810471a9e9e523e508c5f7a (MD5) / A preocupação com a contaminação do ambiente aquático e, consequentemente, dos recursos hídricos, têm crescido devido a uma possível escassez da água potável no planeta. A contaminação das águas costeiras por vírus entéricos é causada pelo despejo de resíduos de origem fecal, afetando as águas utilizadas em atividades de recreação, pesca e no cultivo de moluscos bivalves, sendo responsável pela maioria dos surtos de gastroenterites que ocorrem no mundo. Indicadores bacterianos de contaminação fecal como os coliformes fecais, têm sido utilizados para o controle da qualidade das águas, porém já é estabelecido em todo o mundo que esta contaminação não está correlacionada com a presença de vírus entéricos. O desenvolvimento de novos métodos de concentração e detecção de vírus entéricos é uma alternativa para o controle da contaminação destas águas a fim de assegurar a qualidade de uso das mesmas. Os objetivos deste estudo foram: 1) Padronizar a metodologia de floculação utilizando leite desnatado acidificado na concentração de vírus em amostras de água do mar natural e artificial semeadas com quantidades conhecidas de adenovírus do sorotipo 2 (HAdV2). Comparar os resultados obtidos na recuperação viral com a metodologia já padronizada de filtração em membrana eletronegativa e reconcentração em Centriprep; 2) Aplicar metodologia padronizada na concentração e detecção de adenovírus humanos, poliomavírus cepa JC, vírus da hepatite A (HAV) e norovírus humano (HuNoV genogrupos GI e GII) em amostras de água do mar de 11 praias ao redor da Ilha de Santa Catarina, Florianópolis, Brasil durante um ano (Agosto de 2009 a Julho de 2010). 3) Analisar a presença de coliformes fecais (E. coli) e avaliar parâmetros físico-químicos, temperatura, pH, salinidade e oxigênio dissolvido. Para as detecções virais, o material genético das amostras foi extraído e diluído 1:10 para a redução de inibidores das reações enzimáticas. Nested-PCR qualitativo foi usado na detecção de HAdV e para a realização do sequenciamento. A detecção e quantificação de todos os vírus pesquisados foi realizada por PCR em tempo real. Os resultados da recuperação viral quando a metodologia de floculação foi empregada foram de 14% e 13,6% e no método de filtração, foram de 2,8% e 21% para as amostras de água do mar natural e artificial respectivamente. Das 132 amostras de campo analisadas, 16% foram positivas nas reações de nested-PCR para HAdV. Nas análises de PCR em tempo real, o vírus mais prevalente foi o HAdV, com 55% das amostras positivas, com intervalos de detecção de 8,40 x 103 a 1,9 x 107 CG/ L, seguido pelo HAV, com 51,5% de positividade, variando de 1,60 x 101 a 2,30 x 103 CG/ L. Para o JCPyV, 3% das amostras foram positivas, com intervalos de 1,90 x 104 a 1,70 x 105 CG/ L e para o NoV 7,5% e 4,5% das amostras foram positivas, com intervalos entre 2,41 x 103 a 5,14 x 106 e 3,73 x 104 a 2,10 x 106 CG/ L respectivamente para o GI e GII. As médias obtidas para os valores de coliformes fecais detectados foram de 8,0 a 1,325 UFC/100 mL em todos os pontos analisados. Somente dois dos pontos analisados não ultrapassaram o tolerável (Joaquina e Mole). Os demais pontos tiveram valores acima do permitido em algum mês do período analisado, destacando-se a Beira-Mar Norte com os valores mais elevados. As análises físico-químicas demonstraram valores concordantes com os previstos na legislação. O sequenciamento das amostras positivas para o HAdV demonstraram prevalência do adenovírus humano respiratório sorotipo 2. Os resultados obtidos evidenciam o destaque da contaminação viral nas amostras de água do mar e confirmam a não correlação da presença destes em relação à contaminação bacteriana. Este é o primeiro trabalho que avalia as condições das praias a redor da Ilha de Santa Catarina de forma mais abrangente, destacando diferentes tipos de contaminação. / The concern about aquatic environment contamination and consequently water resources is increasing mainly due to the warning about potable water scarcity in our planet. The contamination of coastal waters by enteric viruses is caused by discharge of residues of fecal origin, affecting waters used for recreational activities, fishing and shellfish growing, being responsible for most outbreaks of gastroenteritis occurring in the world. Bacterial indicators such as fecal coliforms have been used as parameters of water quality, however it has been clearly established worldwide that bacterial contamination show no relationship with the presence of human enteric viruses. The development of new methods of water concentration for enteric viruses detection is an alternative to monitor the contamination of these waters in order to ensure its quality.The objectives of this study were: 1) Standardize the methodology of flocculation using acidified skimmed milk for viral concentration in natural and artificial seawater samples previously spiked with known amounts of human adenoviruses serotype 2 (HAdV2). Results obtained with viral recovery were compared with the standardized methodology of water filtration in electronegative membrane and reconcentration by Centriprep#; 2) Apply standardized methodology in the concentration and detection of HAdV, poliomavirus (JCPyV), hepatitis A vírus (HAV) and noroviruses (HuNoV GI and GII) in seawater samples harvested in 11 different beaches in Santa Catarina Island, Florianópolis, Brazil in a period of one year (August 2009 to July 2010). Were also measured the presence of fecal coliform (E. coli) and physical-chemical parameters such as temperature, pH, salinity and dissolved oxygen. To reduce the presence of inhibitors of PCR reactions, a tenfold dilution of DNA/RNA of each sample was used. Nested-PCR was used for qualitative detection of HAdV and for conducting sequencing analysis. The detection and quantification of all the viruses evaluated was performed by real time PCR. The results of viral recovery by the standardized method of flocculation were 14% and 13.6% and for the filtration method, were 2.8% and 21% for samples of natural and artificial seawater respectively. From 132 field samples analyzed, 16% of these were positive for HAdV in the nested-PCR assay. In the analysis of real-time PCR, the most prevalent virus was HAdV, with 55% of positive samples with intervals of detection of 8.40 x 103 to 1.90 x 107 GC/ L, followed by HAV, with 51,5% of positivity, ranging from 2.30 x 101 to 1.60 x 103 GC/ L. For JCPyV, 3% of samples were positive, with ranges between 1.90 x 104 to 1.70 x 105 GC/ L and for NoV 7.5% and 4.5% of samples were positive, with intervals between 2.41 x 103 to 5.14 x 106 and 3.73 x 104 to 2.10 x 106 GC/ L respectively for GI and GII. The mean values of fecal coliforms detected were from 8.0 to 1.325 CFU/100 mL at all sites analyzed. Only two sites analyzed did not exceed the allowed by current legislation (Joaquina and Mole). The other sites showed, sometimes, values above the allowed during the period analyzed, with emphasis for Beira-Mar Norte site presenting the highest values. The physical-chemical analysis demonstrated values consistent with those recommended by legislation. The sequencing analysis of the samples positive for HAdV in qualitative PCR showed prevalence of human adenovirus respiratory serotype 2. The results show the highlight of viral contamination in the seawater samples and confirm the lack of correlation of their presence in relation to the bacterial contamination. This is the first study evaluating the conditions of the beaches around the Santa Catarina Island, highlighting different types of contamination.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T00:21:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289632.pdf: 1916144 bytes, checksum: 67af3bb6cca1c4c3c30dc049f92d0a4b (MD5) / O vírus da mionecrose infecciosa (IMNV) causa uma doença progressiva em camarões de cultivo com substanciais perdas econômicas no Brasil e na Indonésia. Métodos imunológicos simples e rápidos para a detecção do IMNV ainda não são disponíveis devido à falta de anticorpos monoclonais (AcMo) contra o vírus. Neste trabalho, dois fragmentos do gene da proteína do capsídeo do IMNV, abrangendo os aminoácidos 105-297 (IMNV105-297) e 300-527 (IMNV300-527), foram clonados e expressos em Escherichia coli. Ambas sequências nucleotídicas e aminoacídicas deduzidas de IMNV105-297 e IMNV300-527 apresentaram elevada identidade com sequências de IMNV isolados no Brasil (99%) e na Indonésia (98%). Dentre os hibridomas que foram obtidos, seis AcMo anti-rIMNV105-297 (1.1D, 1.3H, 3.3G, 3.9G, 4.6C, 5.4H) e dez AcMo anti-rIMNV300-527 (1.3G, 1.3H, 1.8C, 2.9C, 2.9E, 3.3A, 9.7F, 9.8D, 9.8H, 11.2D) foram selecionados para se avaliar suas reatividades contra a proteína do capsídeo viral presente em lisado de camarões infectados por IMNV. Nos ensaios de imunodot-blot, cinco AcMo anti-rIMNV105-297 e oito AcMo anti-rIMNV300-527 apresentaram distintas sensibilidades contra lisados de tecido muscular infectado por IMNV, bem como contra rMNV105-297 ou rIMNV300-527. Dentre esses, três AcMo anti-rIMNV105-297 (1.3H, 4.6C, 5.4H) e cinco AcMo anti-rIMNV300-527 (1.3H, 1.8C, 2.9E, 3.3A, 11.2D) demonstraram alta especificidade contra a proteína nativa do IMNV nos ensaios de Western-blot, visto que reconheceram somente uma proteína de 100 kDa - massa esperada para a proteína do capsídeo do IMNV. Nas imunohistoquímicas, dois AcMo anti-rIMNV105-297 (1.3H, 4.6C) e quatro AcMo anti-rIMNV300-527 (1.8C, 2.9E, 3.3A, 11.2D) ligaram-se a inclusões virais presentes em fibrose muscular e em áreas de necrose coagulativa. Concluindo, esses seis AcMo foram sensíveis e específicos em todos os imunoensaios realizados e poderão ser utilizados em testes de imunodiagnóstico de rotina para prevenção e controle da disseminação do IMNV. / Infectious myonecrosis virus (IMNV) has been causing a progressive disease in farm-reared shrimp with substantial economical loses in northeastern Brazil and Indonesia. Simple and rapid immunological methods for IMNV detection are not yet available due to the lack of monoclonal antibodies (MAbs) against the virus. In this report, two fragments of the IMNV major capsid protein gene, comprising amino acids 105-297 (IMNV105-297) and 300-527 (IMNV300-527), were cloned and expressed in Escherichia coli. Both nucleotide and deduced amino acid sequences of IMNV105-297 and IMNV300-527 displayed high identity to IMNV isolated from Brazil (99%) and Indonesia (98%). Among several clones secreting antibodies against the IMNV recombinant proteins, six MAbs anti-rIMNV105-297 (1.1D, 1.3H, 3.3G, 3.9G, 4.6C, 5.4H) and ten MAbs anti-rIMNV300-527 (1.3G, 1.3H, 1.8C, 2.9C, 2.9E, 3.3A, 9.7F, 9.8D, 9.8H, 11.2D) were selected to evaluate their reactivity against the native IMNV capsid protein from IMNV-infected shrimp. In immunodot-blot, five MAbs anti-rIMNV105-297 and eight MAbs anti-rIMNV300-527 presented distinct levels of sensitivities against IMNV-infected muscle tissue homogenate and against rIMNV105-297 or rIMNV300-527. From those, three MAbs anti-IMNV105-297 (1.3H, 4.6C, 5.4H) and five MAbs anti-IMNV300-527 (1.3H, 1.8C, 2.9E, 3.3A, 11.2D) demonstrated high specificity against the native IMNV protein in Western-blot, since they only recognized a 100 kDa protein - the predicted mass of IMNV capsid protein. In immunohistochemistry, two MAbs anti-rIMNV105-297 (1.3H, 4.6C) and four MAbs anti-rIMNV300-527 (1.8C, 2.9E, 3.3A, 11.2D) bound to viral inclusions present in muscle fibrosis and coagulative necrosis areas. In conclusion, these six MAbs were sensitive and specific in all immunoassays performed herein, and can be used in routine immunodiagnostic tests to prevent and control IMNV dissemination.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Bioctecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T15:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 225674.pdf: 4665363 bytes, checksum: 517c43e0ef4586cc312a096fad5b4ebd (MD5) / A escassez de madeira é uma ameaça ao setor de base florestal, gerando a busca por alternativas que aumentem a produção. Pode-se aumentar a produção aumentando-se a área plantada ou a produtividade. No segundo caso, pela aplicação de doses crescentes de fertilizantes solúveis, principalmente fósforo e potássio. Esses fertilizantes, além de causar danos aos ecossistemas, são, em grande parte, importados, onerando a produção. No entanto, o Brasil possui uma variedade de rochas com potencial de uso como fertilizantes, sendo sua utilização limitada pela baixa solubilidade dos nutrientes ali presentes. A melhoria na solubilidade dessas fontes pode ser conseguida pelo uso de microrganismos solubilizadores, dentre eles os fungos ectomicorrízicos (fECM). Com esse propósito, 25 isolados de fECM foram avaliados quanto ao potencial de solubilizarem fósforo e potássio a partir de rochas, sob condições de meio de cultura e de casa de vegetação. No primeiro estudo, os fungos foram cultivados em meio de cultura GEL líquido, suplementado com pó das rochas: granitos (pó da pedreira saibrita, PCA, PCB e SB), flogopita olivina melilitito, fonolito, brecha alcalina, arenito, carbonatito e rocha calcárea (CI). Após 30 dias, determinou-se o peso do micélio seco e o conteúdo de fósforo e potássio no micélio e no meio de cultura. As rochas brecha alcalina e pó da pedreira saibrita foram as que permitiram maior mobilização desses elementos. Dentre os fungos, destacaram-se os isolados UFSC-Pt22, CSIRO-H1234, UFSC-Pt145 e UFSC-Pt186, na mobilização de potássio, e os isolados UFSC-Pt26, UFSC-Ch163, UFSC-Pt186 e UFSC-Pt188, na mobilização de fósforo. As rochas e os isolados mais eficientes foram selecionadas para um experimento em casa de vegetação, visando avaliar o seu potencial em substituição à adubação potássica e fosfática convencional. O inoculante fúngico foi produzido numa mistura turfa-vermiculita e meio de cultura MNM. Após 60 dias, o inoculante foi lavado e adicionado ao substrato de plantio (turfa-vermiculita), na proporção de 10%, e distribuído em recipientes de 60 mL. A esse susbstrato foi adicionado pó das rochas, brecha alcalina ou pó da pedreira saibrita, como fonte de fósforo (0,5 mg pl-1) e potássio (16 mg pl-1), suplementando-se com solução nutritiva para fornecimento dos demais nutrientes. As plantas testemunhas receberam igual quantidade desses elementos na forma solúvel: Ca(H2PO4)2.2H2O e KCl. Após 90 dias, determinaram-se a altura, o comprimento radicular, a porcentagem de colonização radicular, o peso da matéria seca e o conteúdo de fósforo e potássio da parte aérea. A brecha alcalina mostrou eficiência superior ao pó da pedreira saibrita no suprimento de fósforo e potássio às plantas, mas inferior em relação à adubação solúvel. Entretanto, essa rocha mostrou-se superior aos demais tratamentos de adubação nos parâmetros de crescimento, apresentando-se como uma alternativa à adubação convencional na promoção do crescimento e no suprimento desses elementos às plantas. Os isolados UFSC-Pt22 (Pisolithus sp.) e UFSC-Pt186 (P. microcarpus), destacaram-se na mobilização de potássio e fósforo e na promoção do crescimento de plantas de Eucalyptus dunnii, principalmente em combinação com a brecha alcalina.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T15:33:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 224660.pdf: 451595 bytes, checksum: 3e0c71af98b488467aeb316ddc597ae0 (MD5) / Vacinas contra HIV que estimulem resposta imune de mucosas, especialmente no trato genital feminino, podem ser mais eficazes na prevenção ou contenção da infecção pelo HIV. Adenovírus humano (Ad) do sorotipo 5, que têm sido utilizados como vetores de vacinas contra HIV, apresentam como limitação a pré-existência de anticorpos neutralizantes na população. Para superar este problema foi desenvolvido um Ad recombinante a partir de um vírus de origem símia - AdC6gag. Este estudo avaliou a resposta imune celular específica contra HIV em sítios sistêmicos e de mucosa após a imunização intravaginal de camundongos BALB/c com AdC6gag. Demonstrou-se que imunização intravaginal foi capaz de induzir células T CD8+ Gag-específicas no trato genital, linfonodos ilíacos e baço. A resposta imune avaliada através da marcação intracelular de IFN- produzido por células T CD8+ estimuladas por 5 horas com peptídeo contendo Gag foi demonstrada utilizando-se diferentes doses do vetor, mas a dose de 105 PFU de AdC6gag foi capaz de induzir a melhor resposta no trato genital e linfonodos ilíacos 14 dias após a imunização intravaginal. 105 e 104 PFU de AdC6gag induziram a melhor resposta no baço 7 dias após a imunização. A imunização intravaginal com AdC6gag induziu melhor resposta de células T CD8+ no trato genital e linfonodos ilíacos que as imunizações intranasal e intramuscular. As freqüências de células T CD8+ Gag-específicas estimuladas no trato genital pela imunização intravaginal IV (3,8%) e intranasal IN (0,94%) aumentaram com uma estratégia de dose-reforço IN-IV (27,46%) quando se utilizou 105 PFU de AdC6gag. A resposta de células T CD8+ Gag-específicas induzidas com AdC6gag no trato genital e baço é de longa duração, podendo ser detectada 90 dias após a imunização. AdC6gag aumentou a população de células T no trato genital após imunização intravaginal com diferentes doses. As mulheres constituem hoje 50% dos indivíduos infectados e 70 a 80 % dos novos casos de HIV ocorrem através de transmissão heterossexual. A indução de células T CD8+ específicas na mucosa pode ser importante, uma vez que estas células estão implicadas no controle da replicação viral. Este estudo sugere que AdC6gag pode induzir eficientemente células T CD8+ no trato genital, e que estas freqüências podem pode ser aumentadas com uma estratégia de dose reforço com vias de mucosa distintas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Prtograma de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T03:17:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 240183.pdf: 698488 bytes, checksum: 20b2234d82bd9de7fb818bafbded8a81 (MD5) / Peptídeos ou proteínas antimicrobianas (PAM) são componentes do sistema imune inato, presentes na maioria dos seres vivos, que vêm despertando um crescente interesse, uma vez que podem apresentar uma atividade antimicrobiana potente contra um amplo espectro de microrganismos, sendo usualmente atóxicos para células de mamíferos. No presente trabalho, foi investigada a atividade antibacteriana, antifúngica, antiparasitária e hemolítica, assim como a estabilidade em diferentes salinidades, de diferentes peptídeos isolados de animais aquáticos: taquiplesina (Taq), do limulídeo Tachypleus tridentatus, magainina (Mag), do anfíbio Xenopus laevis, clavanina (Clav), do tunicado Styela clava, peneidina (Pen), do camarão Litopenaeus vannamei, mitilina (Mit) do mexilhão Mytilus edulis e o fator anti-lipopolissacarídeo (ALF) do camarão Penaeus monodon. Os diferentes PAM foram testados contra bactérias marinhas do gênero Vibrio, leveduras e fungos filamentosos, de interesse médico e para aqüicultura. Para tanto, estes microrganismos foram incubados em microplacas (96 poços) com diluições seriadas dos diferentes PAM e o crescimento microbiano foi monitorado através de densidade óptica (630nm) e/ou ensaio colorimétrico (INT) no caso de bactérias, determinando-se a concentração mínima inibitória (MIC) e bactericida (MBC) para cada peptídeo. A Mag, Mit, e principalmente a Taq e o ALF (MIC < 1.5 M) apresentaram uma evidente atividade anti-víbrio. Quanto à atividade antifúngica, a Mag e a Taq foram ativas contra a maioria dos fungos testados (com exceção do dermatófito Microsporum canis), enquanto a Clav e Pen não tiveram efeito contra nenhuma espécie avaliada. A Mit e o ALF foram ativos contra fungos do gênero Fusarium de importância para aqüicultura. De modo geral, os PAM investigados neste estudo mostraram uma tendência de diminuir ou perder sua atividade em altas salinidades (> 250mM NaCl), sendo a Taq e a Mit os peptídeos mais estáveis nas diferentes concentrações de NaCl testadas. Curiosamente, todos os PAM utilizados neste estudo perderam sua atividade em presença de água do mar. A atividade antiparasitária dos diferentes PAM foi avaliada contra formas promastigota de Leishmania braziliensis e epi e tripomastigota (infectiva para mamíferos) de Trypanosoma cruzi. Os parasitos foram incubados com diluições seriadas dos diferentes PAM por períodos de 5 a 7h (atividade parasiticida) e de 24 e 72h (atividade antiproliferativa), utilizando um ensaio colorimétrico de viabilidade celular (MTT). A Taq mostrou-se o peptídeo mais potente, inibindo em 100% o crescimento de L. braziliensis e de formas tripomastigota de T. cruzi a partir de 12,5 M. A Pen e a Clav foram ativas somente contra formas tripomastigota de T. cruzi, e a Mit contra L. braziliensis, porém apenas em altas concentrações (100 M). Dos PAM investigados, a Taq e a Mag apresentaram a maior atividade hemolítica em altas concentrações (>12,5 M), sendo que os demais causaram baixas taxas de hemólise (<10%) até 50 M. Os resultados obtidos neste estudo apontam para a Taq como um peptídeo promissor para uso terapêutico em aqüicultura e saúde humana, uma vez que mostrou uma acentuada atividade antimicrobiana e antiparasitária, sendo relativamente pouco hemolítico nas concentrações em que foi ativo e sendo ainda muito estável em diferentes salinidades. Já ALF e a Mit mostraram-se moléculas potencialmente interessantes mais especificamente para aqüicultura.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T12:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 241092.pdf: 1958015 bytes, checksum: b91f202b7b928f97c8d6dbdd6ae98013 (MD5) / Os organismos necessitam de tetrapirróis, primariamente na forma de grupo heme e/ou clorofila. O heme está presente como grupo prostético em um grande número de proteínas, entre elas a hemoglobina, mioglobina e citocromos, enquanto a clorofila é o principal pigmento utilizado nos processos fotossintéticos. A formação de tetrapirróis nos organismos tem início na síntese do ácido aminolevulínico (ALA). A enzima 5-aminolevulinato sintase (ALAS), EC 2.3.1.37, catalisa a condensação de succinil-CoA e glicina para a formação do ALA na mitocôndria. No presente trabalho, ostras Crassostrea gigas foram expostas à esgoto doméstico bruto diluído a 33% por 48 horas, sob condições controladas de laboratório. Após a exposição, a expressão o gene da ALAS foi analisada nas brânquias e na glândula digestiva, através de RT-PCR (Reverse Transcriptase- Polymerase Chain Reaction) semiquantitativo, utilizando-se iniciadores específicos. A exposição ao esgoto doméstico não promoveu um aumento significativo na expressão do gene ALAS na glândula digestiva. Por outro lado, as brânquias apresentaram um aumento significativo na expressão deste gene. Nossos resultados mostram um aumento de 68% na expressão do gene ALAS nas brânquias dos indivíduos do grupo tratado em relação ao grupo controle (não-tratado). Esses dados sugerem que o gene ALAS pode ser considerado como um potencial candidato a biomarcador molecular de exposição à esgoto doméstico na ostra C. gigas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:09:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 249108.pdf: 575556 bytes, checksum: 26e2feb5ae04b2412b819f24890bbf44 (MD5) / A atividade antibacteriana de 31 chalconas foi avaliada contra linhagens bacterianas de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus cereus ATCC 11778 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Para cada uma dessas chalconas foram determinadas as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) e as Concentrações Bactericidas Mínimas (CBM) pelo método de microdiluição em caldo. As CIMs e CBMs foram consideradas as menores concentrações das substâncias-teste necessárias para inibir o crescimento ou provocar a morte bacteriana e foram expressas em µg/mL. Nenhuma das chalconas testadas apresentou atividade contra bactérias Gram-negativas, porém, contra bactérias Gram-positivas, algumas chalconas foram ativas, em particular, aquelas hidroxiladas em carbonos C-4' e C-4 dos anéis aromáticos A e B, respectivamente e que apresentam substituinte (hidroxila ou metoxila) em carbono C-2' do anel aromático A. Estes resultados sugerem que o efeito inibitório desses compostos está relacionado com determinados padrões de substituição entre os anéis aromáticos. The antibacterial activity of thirty-one chalcones were tested against bacterial strains Bacillus cereus ATCC 11778, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and Staphylococcus aureus ATCC 25923. The Minimum Inhibitory Concetration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined by the microdilution method for each of the chalcone. Some of the chalcones tested showed good activity against Gram-positive bacterial, mainly for the chalcones hidroxilated in carbons C-4' and C-4 of aromatics A and B rings, respectively, and with substitution (hidroxil or metoxil) in carbon C-2' of aromatic A-ring. These findings suggest that the inhibitory effect of chalcones might be related to the substitution patterns betwen aromatics rings.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T18:18:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 252707.pdf: 1073581 bytes, checksum: e1508c3cf6bd5a73d71d34e9d6ce4bdb (MD5) / A produção de álcool combustível no Brasil é realizada, na maioria das usinas, através do sistema de batelada alimentada onde, as células de levedura, principalmente Saccharomyces cerevisiae, são constantemente centrifugadas e reutilizadas nos vários ciclos fermentativos ao longo da safra. Por ser um ambiente com altas concentrações de açúcares, baixo pH, altas pressões osmóticas e temperaturas elevadas, linhagens de S. cerevisiae que atuam no processo de fermentação devem estar adaptadas ao estresse encontrado e apresentar características ideais para o processo industrial. Entretanto, por se tratar de um processo fermentativo não-estéril, o mesmo está sujeito a constantes contaminações por bactérias e leveduras selvagens que trazem enormes prejuízos à industria. Muitas vezes estas leveduras selvagens apresentam fenótipos como floculação, formação de espuma, pseudohifas, biofilme, e crescimento invasivo, características indesejáveis para a indústria de produção de álcool combustível. Estas propriedades apresentadas por algumas linhagens dificultam a centrifugação e reciclo das células, diminuem o volume útil das dornas, determinam menor contato entre as leveduras e mosto a ser fermentado, afetando portanto a produtividade alem de aumentarem os custos de produção. Desta forma, a pronta identificação destas características nas linhagens de leveduras utilizadas nos processos industriais faz-se necessária para minimizar as perdas de rendimento. O presente trabalho tem como objetivo analisar fenotipicamente 17 linhagens isoladas diretamente das dornas de fermentação industrial quanto às várias propriedades descritas acima, e verificar a possível correlação entre as mesmas com a hidrofobicidade celular e polimorfismos em genes possivelmente envolvidos com estes fenômenos de superfície (genes de adesinas). Os resultados obtidos no presente trabalho revelaram significativa variabilidade entre as linhagens quanto às características fenotípicas analisadas. As melhores correlações observadas foram entre a hidrofobicidade celular, floculação (com e sem Ca2+) e formação de biofilme, sendo que este último parâmetro foi inversamente correlacionado com o crescimento invasivo no agar em 70% das linhagens analisadas. A análise por PCR das regiões variáveis das adesinas AWA1, DAN4, FLO1 e FLO11 revelou que provavelmente nenhuma das linhagens possui o gene AWA1, enquanto que o gene DAN4, presente em mais de dois terços das cepas, não apresentou grandes polimorfismos. O gene FLO1 foi detectado em um terço das linhagens analisadas, apresentando polimorfismos que foram correlacionados com a hidrofobicidade celular e floculação destas linhagens. Já no caso do gene FLO11, o polimorfismo em tamanho da região variável rica em serina e treonina desta adesina foi correlacionado com a floculação, formação de biofilme e produção de espuma de mais da metade das leveduras industriais analisadas. Os resultados obtidos sugerem que a hidrofibicidade celular, que utiliza metodologia simples e rápida na sua determinação, pode ser um parâmetro interessante a ser implementado nas usinas para avaliar o potencial floculante e de produção de biofilme das linhagens presentes no processo industrial, enquanto que o polimorfismo da adesina FLO11, determinado através de PCR, pode revelar importante informação sobre o seu potencial floculante e de produção de biofilme e espuma.