O objetivo do presente estudo, prospectivo e randomizado, é avaliar comparativamente as respostas hemodinâmicas, laboratoriais, imunomoleculares e clínicas, em dois grupos de pacientes submetidos a cirurgia de revascularização miocárdica com extracorpórea utilizando-se, em um deles infusão de azul de metileno durante o período intraoperatório. As variáveis hemodinâmicas estudadas foram: FC, PAE, PVC, DC, RVS, RVP, PAPM, PASS, PASD e PASM. Os dados laboratoriais avaliados foram: gasometria arterial, creatinina, leucócitos, bastões, neutrófilos, eosinífilos, basófilos, linfócitos, Ht, Hb, paquetas, Na+ e K+. Os marcadores imunomoleculares estudados foram: IL - 1ß, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 p40, TNF alfa e NO. Os dados clínicos avaliados foram: idade, sexo, raça, tabagismo, hipertensão, diabetes, angina estável, angina instável, infarto prévio, tempo de CEC, tempo de pinçamento aórtico, número de pontes realizadas, urina azulada, fezes azuladas, diarréia, náuseas, cefaléia, tontura, disúria, astenia e dispnéia. As variáveis citadas foram obtidas em todos ou em parte dos períodos seguintes: antes da indução, terceira hora, sexta hora, 24ª hora e 48ª hora após o término da CEC. Ocorreram diferenças estatisticamente significativas na resistência vascular sistêmica, na pressão arterial sistêmica diastólica, em parte das citocinas estudadas e no óxido nítrico. A análise dos resultados mostra que no grupo que utilizou azul de metileno houve resistência vascular sistêmica mais alta no período da sexta hora de pós-operátório, menor concentração de TNF alfa no período da terceira e 48ª hora e menores níveis de óxido nítrico no período da sexta hora. As medidas laboratoriais foram semelhantes em ambos os grupos exceto maior número de leucócitos e neutrófilos na 48ª hora após CEC no grupo contrôle. Verifica-se que o azul de metileno levou a melhores condições hemodinâmicas e menores valores e alguns marcadores de reposta inflamatória sistêmica após cirurgia de revascularização miocárdica com circulação extra-corpórea e não apresentou efeitos adversos importantes. / The objective of the present study, prospective and randomized, is to evaluate the hemodynamic, gasometric, immunomolecular and clinical response in two groups of patients submited to coronary artery surgery under cardiopulmonary bypass with the use, in one of them, of methylene blue infusion during the intraoperative period. The hemodynamic variable data evaluated were: heart rate, left atrial pressure, central venous pressure, cardiac output, systemic vascular resistance, pulmonary vascular resistance, mean pulmonary artery pressure, systolic systemic arterial pressure, dyastolic systemic arterial pressure and mean systemic arterial pressure. Laboratoryal data were: arterial gasimetry, urea, creatinine, leucocytes, neutrophils, eosinophils, basophils, lymphocytes, hematocrit, hemoglobin, platelets, sodium and potassium. The immunomolecular data were: IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p40, TNF alfa and NO. The clinical data evaluated were: age, gender, race, smoking, hypertension, diabetes, stable angina, unstable angina, previous infarction, cardiopulmonary bypass duration, aortic cross-clamp time, graft number, bluish urine, bluish feces, diarrhea, nausea, headache, dizziness, dysuria, tiredness and dyspnea. All the data were obtained, in all or part of the following periods: before the anesthesia and at the third, sixth, 24th and 48th hour after the end of the cardiopulmonary bypass. Statistically significant differences occurred in the systemic vascular resistance, diastolic systemic arterial pressure and in part of the evaluated cytokines, as well as with the nitric oxide. The analysis of the results show that, in the methylene blue patients group, the systemic vascular resistance was higher at the sixth hour, lower concentrations of TNF alfa at the third and at the 48th hour and lower levels of NO at the 6th hour. The laboratorial data were similar in the two groups, except for the number of leucocytes and neutrophils were higher in the control group at the 48th hour after the end of the cardiopulmonary bypass. The gasometric data showed no difference between the groups. It was verified that the methylene blue has induced better hemodynamic conditions and lower levels of part of markers of SIRS after coronary artery surgery under cardiopulmonary bypass and no siginifcant deleterious side effects.

Orientador: Juliana Regina Peiró / Coorientador:Sérgio Moraes Aoki / Banca:José Paes de Oliveira Filho / Banca:Flávia de Almeida Lucas / Resumo: Endotoxemia é distúrbio sistêmico que se origina da resposta do hospedeiro a um componente da membrana celular das bactérias Gram- negativas. Esta resposta se dá através da exposição dos receptores celulares TLR-4 e TLR-2 ao LPS. Os objetivos deste estudo foram investigar as alterações na expressão gênica da exposição ao LPS em leucócitos de equinos utilizando a técnica de microarray, avaliar a eficiência do modelo ex vivo para os estudos envolvendo a endotoxemia pela mesma técnica, avaliar a expressão global de genes em vias envolvidas, identificar componentes da cascata metabólica com potenciais para novas terapias, e fornecer subsídio para futuros estudos. Amostras de sangue total (15mL) de cavalos saudáveis (n=6) foram incubadas durante 4 horas a 37°C com 5% de CO2 na presença (1 ou 10 ng/mL) ou ausência de LPS (0 ng/mL). Alíquotas de 500µL de sangue foram coletadas nos momentos 0, 2 e 4 horas após o estímulo do LPS. O RNA, extraído das mostras, foi utilizado para a transcrição do cDNA. A hibridização do cDNA marcado com Cy-3 foi realizada em lâminas 4x44K v2 de humanos contendo sequências homólogas com a espécie equina para os genes de interesse. Após a leitura das lâminas, com filtro para genes 30x mais ou menos expressos, verificou-se um aumento da expressão do TLR-2 na concentração de 10 ng LPS/mL no momento 4 em relação ao momento 2. Este resultado sugere que, embora o receptor TLR-4 seja o principal receptor no reconhecimento do LPS, o receptor TLR-2 também tem um papel no reconhecimento destas moléculas / Abstract: Endotoxemia is systemic disturbance that origins from the host response to a component of the cellular membrane of Gram-negative bacterias. This response occurs through exposure of cellular receptors TLR-4 and TLR-2 to LPS. The objectives of this study were to investigate changes in gene expression of exposure to LPS in horses leukocytes using the microarray technique, to evaluate the efficiency of the ex vivo model for studies of endotoxemia by the same technique, to evaluate the global expression of genes in the metabolic pathways involved, identify components of the metabolic cascade with potential for new therapies, and provide allowance for future studies. Whole blood samples (15mL) of healthy horses (n=6) were incubated for 4 hours at 37°C with 5% of CO2 in the presence (1 or 10 ng/ml) or absence of LPS (0 ng/ml). Aliquots of 500μL of blood were collected at 0,2 and 4 hours after LPS stimulation. The RNAs, extracted from the samples, were used for the transcription of the cDNAs. Hybridization of labeled cDNAs with Cy-3 were performed in 4x44K v2 slides containing human sequences homologous to the equine species for the genes of interest. After the reading of the slides with filter for genes 30x up regulation or down regulation expression, it was observed an increased expression of the TLR-2 concentration of 10 ng LPS/mL at time 4 compared to time 2. This result suggests that, although the TLR-4 receptor is the main LPS recognition receptor, the receptor TLR-2 also plays a role in recognition of these molecules / Mestre

As células TREGULADORAS tem como função central o controle da resposta imune ao próprio. Além disso, é descrito que essas células exercerem um papel moderador da resposta imune frente a micro-organismos patogênicos. No presente projeto, utilizamos o tratamento com toxina diftérica nos dias 1 e 2 pós-infecção (p.i.) em animais C57BL/6 FoxP3+DTReGFP+(DEREG) como abordagem alternativa para eliminar esta população de células reguladoras. Este tratamento mostrou-se altamente eficaz, embora temporário, uma vez que as TREG retornam aos valores normais no baço por volta do dia 8 p.i. Contudo, a ausência de TREG nesta janela temporal determina uma breve, mas significativa, redução na parasitemia e um aumento de IFN-γ, assim como uma redução da carga parasitária no coração em uma data posterior. Nosso estudo indica que as células TREGULADORAS desempenham um papel no controle da resposta imune frente aos parasitas no início da infecção pelo Trypanosoma cruzi, papel esse que podemos ver refletido na carga parasitária no coração na fase crônica da infecção. / The central function of TREGULATORY cells is the control of the immune response to their own. In addition, it is described that these cells exert a moderating role of the immune response against pathogenic microorganisms. In the present project, treatment with diphtheria toxin on days 1 and 2 post-infection (p.i.) in C57BL/6FoxP3+DTReGFP+ (DEREG) animals was used as an alternative approach to eliminate this population of regulatory cells. This treatment proved to be highly effective, although temporary, since the TREG return to normal values in the spleen by about 8 p.i. However, the absence of TREG in this time window results in a brief but significant reduction in parasitemia and an increase in IFN-γ as well as a reduction in parasitic load on the heart at a later date. Our study indicates that TREGULATORY cells play a role in controlling the immune response to parasites at the beginning of Trypanosoma cruzi infection, a role that can be seen reflected in parasite load in the heart in the chronic phase of infection.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-03-29T19:06:42Z No. of bitstreams: 1 rodrigo_nr_silva_ioc_mt_0018_2011.pdf: 2690965 bytes, checksum: 4ca3fb90882b72a2a1f27faf92a26bbd (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-29T19:06:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigo_nr_silva_ioc_mt_0018_2011.pdf: 2690965 bytes, checksum: 4ca3fb90882b72a2a1f27faf92a26bbd (MD5) Previous issue date: 2011-09-16 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A malária permanece como um dos principais problemas de saúde pública do mundo, ocasionando mais de 200 milhões de casos anualmente, que resultam em cerca de um milhão de óbitos. Apesar de sua evidente importância epidemiológica, os mecanismos envolvidos na fisiopatologia da doença ainda são pouco compreendidos. Acredita-se que citocinas e outros mediadores da resposta imune sejam crucias no processo de cura e na determinação do curso da infecção. Desse modo, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os níveis séricos de citocinas, quimiocinas, proteína C-reativa (CRP) e as alterações hematológicas em pacientes com malária, de área endêmica do Estado de Rondônia. Os pacientes foram avaliados na fase aguda (no momento do diagnóstico, antes do início do tratamento) e na fase de convalescença (15 dias após o início do tratamento quando o paciente já se encontrava curado). Na fase aguda da doença, os pacientes com malária apresentaram plaquetopenia, eosinopenia, leucopenia e linfopenia, além de um número aumentado de células bastão. Adicionalmente, foram observadas alterações nos níveis das citocinas IL-1β, IL-2, IL-6, TNF-α, IFN-γ, IL-10, IL-17, IL-8, MIP- 1β e no nível de CRP, que se encontravam elevados. Na fase de convalescença, as alterações hematológicas retornam aos valores normais. Entretanto, os níveis séricos de IL-1β, IL-2, IL-6, IL-12, TNF-α, IFN-γ, IL-17, IL-8 e MIP-1β, se encontram ainda mais elevados nesta fase. Tanto na fase aguda quanto de convalescença verificamos uma associação positiva entre IL-17 e os níveis das demais citocinas citadas, dado que reforça a ideia do papel de indução pró-inflamatória e regulação desta citocina. Além disso, houve uma redução drástica dos níveis de IL-10 e CRP nesta fase, quando atingem concentrações similares ao grupo controle. Por fim, os dados deste trabalho, também sugerem que as células bastão possam atuar como importantes fontes de IL-10 durante a infecção malárica, considerando a associação positiva entre o número de células bastão e os níveis de IL-10 na fase aguda e o retorno de ambos a níveis similares ao Controle na fase de convalescença da infecção. / Malaria remains as a major public health problems of the world, causing more than 200 million annual cases that result in an estimated one million deaths. However, despite the obvious importance of the disease epidemiology, mechanisms and factors involved in the pathogenesis and pathophysiology of the disease are still poorly understood. It is believed that cytokines and other mediators of immune responses are crucial in the healing process and in determining the course of infection. Thus, this study aimed to evaluate serum protein (CRP) and hematological State. Patients were levels of changes in evaluated during cytokines, chemokines, C-reactive patients with malaria in endemic the phase (at acute areas of diagnosis Rondonia before starting treatment) and convalescent phase (15 days after starting treatment when the patient was cured). In acute phase of illness, patients with malaria had thrombocytopenia, eosinopenia, leucopenia and lymphopenia, and an increased number of band cells. Additionally, changes were observed in levels of IL-1β, IL-2, IL-6, and TNF-α, IFN-γ, IL-10, IL-17, IL-8, MIP-1β and CRP level, which were high. In the convalescent phase, the hematologic changes return to normal. However, serum levels of IL-1β, IL-2, IL-6, IL-12, TNF-α, IFN-γ, IL-17, IL-8 and MIP-1β, are still higher in this phase. Both in acute and convalescent other cytokines mentioned phase, we found a positive above. This data reinforces association between the idea that this IL-17 levels and cytokine has the a role in inducing pro-inflammatory and regulation of the other cytokines. In addition, there was a drastic reduction in the levels of IL-10 and CRP at this phase, when they reach concentrations similar to the control group. Finally, our data also suggest that band cells may act as producers of IL-10 during malaria infection, considering the positive association between the number of band cells and the levels of IL-10 in the acute phase and return both to levels similar to control in the convalescent phase of infection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-17Bitstream added on 2014-06-13T20:29:53Z : No. of bitstreams: 1 dalmagro_p_me_araca.pdf: 405350 bytes, checksum: 6e68960f50834d47030b502e88fb55c8 (MD5) / Endotoxemia é distúrbio sistêmico que se origina da resposta do hospedeiro a um componente da membrana celular das bactérias Gram- negativas. Esta resposta se dá através da exposição dos receptores celulares TLR-4 e TLR-2 ao LPS. Os objetivos deste estudo foram investigar as alterações na expressão gênica da exposição ao LPS em leucócitos de equinos utilizando a técnica de microarray, avaliar a eficiência do modelo ex vivo para os estudos envolvendo a endotoxemia pela mesma técnica, avaliar a expressão global de genes em vias envolvidas, identificar componentes da cascata metabólica com potenciais para novas terapias, e fornecer subsídio para futuros estudos. Amostras de sangue total (15mL) de cavalos saudáveis (n=6) foram incubadas durante 4 horas a 37°C com 5% de CO2 na presença (1 ou 10 ng/mL) ou ausência de LPS (0 ng/mL). Alíquotas de 500µL de sangue foram coletadas nos momentos 0, 2 e 4 horas após o estímulo do LPS. O RNA, extraído das mostras, foi utilizado para a transcrição do cDNA. A hibridização do cDNA marcado com Cy-3 foi realizada em lâminas 4x44K v2 de humanos contendo sequências homólogas com a espécie equina para os genes de interesse. Após a leitura das lâminas, com filtro para genes 30x mais ou menos expressos, verificou-se um aumento da expressão do TLR-2 na concentração de 10 ng LPS/mL no momento 4 em relação ao momento 2. Este resultado sugere que, embora o receptor TLR-4 seja o principal receptor no reconhecimento do LPS, o receptor TLR-2 também tem um papel no reconhecimento destas moléculas / Endotoxemia is systemic disturbance that origins from the host response to a component of the cellular membrane of Gram-negative bacterias. This response occurs through exposure of cellular receptors TLR-4 and TLR-2 to LPS. The objectives of this study were to investigate changes in gene expression of exposure to LPS in horses leukocytes using the microarray technique, to evaluate the efficiency of the ex vivo model for studies of endotoxemia by the same technique, to evaluate the global expression of genes in the metabolic pathways involved, identify components of the metabolic cascade with potential for new therapies, and provide allowance for future studies. Whole blood samples (15mL) of healthy horses (n=6) were incubated for 4 hours at 37°C with 5% of CO2 in the presence (1 or 10 ng/ml) or absence of LPS (0 ng/ml). Aliquots of 500μL of blood were collected at 0,2 and 4 hours after LPS stimulation. The RNAs, extracted from the samples, were used for the transcription of the cDNAs. Hybridization of labeled cDNAs with Cy-3 were performed in 4x44K v2 slides containing human sequences homologous to the equine species for the genes of interest. After the reading of the slides with filter for genes 30x up regulation or down regulation expression, it was observed an increased expression of the TLR-2 concentration of 10 ng LPS/mL at time 4 compared to time 2. This result suggests that, although the TLR-4 receptor is the main LPS recognition receptor, the receptor TLR-2 also plays a role in recognition of these molecules

O objetivo do presente estudo, prospectivo e randomizado, é avaliar comparativamente as respostas hemodinâmicas, laboratoriais, imunomoleculares e clínicas, em dois grupos de pacientes submetidos a cirurgia de revascularização miocárdica com extracorpórea utilizando-se, em um deles infusão de azul de metileno durante o período intraoperatório. As variáveis hemodinâmicas estudadas foram: FC, PAE, PVC, DC, RVS, RVP, PAPM, PASS, PASD e PASM. Os dados laboratoriais avaliados foram: gasometria arterial, creatinina, leucócitos, bastões, neutrófilos, eosinífilos, basófilos, linfócitos, Ht, Hb, paquetas, Na+ e K+. Os marcadores imunomoleculares estudados foram: IL - 1ß, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 p40, TNF alfa e NO. Os dados clínicos avaliados foram: idade, sexo, raça, tabagismo, hipertensão, diabetes, angina estável, angina instável, infarto prévio, tempo de CEC, tempo de pinçamento aórtico, número de pontes realizadas, urina azulada, fezes azuladas, diarréia, náuseas, cefaléia, tontura, disúria, astenia e dispnéia. As variáveis citadas foram obtidas em todos ou em parte dos períodos seguintes: antes da indução, terceira hora, sexta hora, 24ª hora e 48ª hora após o término da CEC. Ocorreram diferenças estatisticamente significativas na resistência vascular sistêmica, na pressão arterial sistêmica diastólica, em parte das citocinas estudadas e no óxido nítrico. A análise dos resultados mostra que no grupo que utilizou azul de metileno houve resistência vascular sistêmica mais alta no período da sexta hora de pós-operátório, menor concentração de TNF alfa no período da terceira e 48ª hora e menores níveis de óxido nítrico no período da sexta hora. As medidas laboratoriais foram semelhantes em ambos os grupos exceto maior número de leucócitos e neutrófilos na 48ª hora após CEC no grupo contrôle. Verifica-se que o azul de metileno levou a melhores condições hemodinâmicas e menores valores e alguns marcadores de reposta inflamatória sistêmica após cirurgia de revascularização miocárdica com circulação extra-corpórea e não apresentou efeitos adversos importantes. / The objective of the present study, prospective and randomized, is to evaluate the hemodynamic, gasometric, immunomolecular and clinical response in two groups of patients submited to coronary artery surgery under cardiopulmonary bypass with the use, in one of them, of methylene blue infusion during the intraoperative period. The hemodynamic variable data evaluated were: heart rate, left atrial pressure, central venous pressure, cardiac output, systemic vascular resistance, pulmonary vascular resistance, mean pulmonary artery pressure, systolic systemic arterial pressure, dyastolic systemic arterial pressure and mean systemic arterial pressure. Laboratoryal data were: arterial gasimetry, urea, creatinine, leucocytes, neutrophils, eosinophils, basophils, lymphocytes, hematocrit, hemoglobin, platelets, sodium and potassium. The immunomolecular data were: IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p40, TNF alfa and NO. The clinical data evaluated were: age, gender, race, smoking, hypertension, diabetes, stable angina, unstable angina, previous infarction, cardiopulmonary bypass duration, aortic cross-clamp time, graft number, bluish urine, bluish feces, diarrhea, nausea, headache, dizziness, dysuria, tiredness and dyspnea. All the data were obtained, in all or part of the following periods: before the anesthesia and at the third, sixth, 24th and 48th hour after the end of the cardiopulmonary bypass. Statistically significant differences occurred in the systemic vascular resistance, diastolic systemic arterial pressure and in part of the evaluated cytokines, as well as with the nitric oxide. The analysis of the results show that, in the methylene blue patients group, the systemic vascular resistance was higher at the sixth hour, lower concentrations of TNF alfa at the third and at the 48th hour and lower levels of NO at the 6th hour. The laboratorial data were similar in the two groups, except for the number of leucocytes and neutrophils were higher in the control group at the 48th hour after the end of the cardiopulmonary bypass. The gasometric data showed no difference between the groups. It was verified that the methylene blue has induced better hemodynamic conditions and lower levels of part of markers of SIRS after coronary artery surgery under cardiopulmonary bypass and no siginifcant deleterious side effects.

Orientador: Helena Zerlotti Wolf Grotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T17:44:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vecina_JulianaFalcato_M.pdf: 2472016 bytes, checksum: 998c5db311e3937952a30ad21b925f92 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Introdução: A leucocitose e a presença de hipertermia são os indicadores primários de inflamação/infecção sistêmica na maioria das espécies animais. Em cães as alterações leucocitárias podem ser evidenciadas em 72 horas, enquanto a elevação sérica das proteínas de fase aguda e a velocidade de hemossedimentação ocorrem mais precocemente sendo úteis na monitorização do processo inflamatório/infeccioso. A interleucina-6 é o principal regulador da resposta inflamatória, ocasionando o aumento da síntese hepática das proteínas de fase aguda, como a proteína C reativa e o fibrinogênio. A elevação da velocidade de hemossedimentação, por sua vez, é conseqüente ao aumento das proteínas de fase aguda. O diagnóstico da inflamação/infecção em cães é realizado por meio de técnicas manuais, carentes de precisão e padronização na maioria dos laboratórios veterinários. O objetivo desse estudo foi a investigação de parâmetros e métodos laboratoriais, que possam auxiliar no diagnóstico e monitoramento do processo inflamatório/infeccioso em cães. A avaliação e padronização de tais parâmetros poderão contribuir para o esclarecimento diagnóstico com maior precisão e em um menor intervalo de tempo e poderão ser incluídos na rotina laboratorial veterinária. Materiais e métodos: Foram estudados 117 cães adultos de diferentes raças divididos inicialmente em dois grupos: controle (n=31) e inflamatório/infeccioso (n=86). Posteriormente, os animais doentes foram subdivididos em: inflamatório (n=29) e infeccioso (n=57). O leucograma foi obtido em contador automatizado e a contagem diferencial de leucócitos realizada em esfregaços de sangue corados com May-Grünwald- Giemsa. Os valores de fibrinogênio e velocidade de hemossedimentação foram determinados por métodos automatizados, a proteína C reativa e a interleucina-6 usando kit de ELISA comercial espécie-específicos. Resultados: A velocidade de hemossedimentação automatizada foi o melhor marcador do processo inflamatório/infeccioso, seguida da proteína C reativa. Apresentaram positividade em 82,56% e 65,12% dos casos, respectivamente. Os demais marcadores foram positivos em menos de 50% dos animais. Quando os animais doentes foram subdivididos, o grupo com inflamação apresentou maior freqüência de positividade do que o grupo infeccioso. A concentração de hemoglobina e o número de plaquetas foram superiores no grupo controle, enquanto a contagem total de leucócitos, número de basófilos e presença de desvio à esquerda apresentaram valores elevados no grupo de animais doentes. Níveis superiores de velocidade de hemossedimentação, proteína C reativa e interleucina-6 foram observados no grupo com inflamação/infecção quando comparados aos controles. Quando subdivididos, no grupo de animais com processo inflamatório os níveis de fibrinogênio e proteína C reativa foram superiores aos do grupo infeccioso, enquanto os valores de velocidade de hemossedimentação e interleucina-6 foram semelhantes. Conclusões: A determinação da velocidade de hemossedimentação apresentou a melhor acurácia na detecção do processo inflamatório/infeccioso. Na análise global os níveis de interleucina-6, proteína C reativa e fibrinogênio foram superiores no grupo inflamatório/infeccioso, mas mostraram eficácia limitada na detecção individual de cães doentes. Cães com processo inflamatório mostraram uma resposta mais exacerbada tanto nas determinações sorológicas/plasmáticas como nos parâmetros hematológicos do que os cães com processo predominantemente infeccioso / Abstract: Introduction: Leukocytosis and hyperthermia are the primary indicators of inflammation infection in most animal species. White blood cell count changes are evident after 72 hours in dogs, while the increase of serum acute phase proteins levels and erythrocyte sedimentation rate occur earlier. Thus they are considered as useful and precocious markers in identifying and monitoring inflammatory/infection process. Interleukin-6 is the major inflammatory response regulator and increases hepatic synthesis of acute phase proteins such as C-reactive protein and fibrinogen. Erythrocyte sedimentation rate rises as a consequence of acute phase protein stimulus. The investigation of the presence of inflammation/infection process in dogs is performed in most veterinary laboratories by manuals technics, which show poor precision and fail in standardization of procedures. The aim of this study was to evaluate new parameters and laboratory methods, which may help in the identification of the inflammatory/infection process in dogs. The evaluation and standardization of these parameters may contribute to the diagnosis with greater precision and in a shorter period of time and may be included in the routine veterinary laboratories. Materials and methods: We studied 117 adult dogs of different breeds. They were divided into two groups: normal controls (n = 31) and suspicious of inflammatory / infectious diseases (n = 86). Subsequently, animals were subdivided into animals with inflammatory (n = 29) or infection conditions (n = 57). Hematological parameters were obtained using an automated counter and differential count was performed by microscopic observation in blood smears stained with Giemsa-May-Grünwald. Fibrinogen concentration and erythrocyte sedimentation rate were determined by automated methods and plasma Creactive protein and interleukin-6 were measured by commercial ELISA kits. Results: Erythrocyte sedimentation rate was the most sensitive marker of the inflammatory/infection process, showing significant increase in 82,56% of the cases, followed by C-reactive protein measurement (65,12%). The other markers were positive in less than 50% of the animals. When the animals were subdivided according to inflammatory or infection condition the group with inflammation showed higher frequency of positivity than the infectious group. The concentration of hemoglobin and the number of platelet were higher in the control group, while white blood count, number of basophils and presence of left shift showed high values in the group of sick animals. Erythrocyte sedimentation rate, C-reactive protein and interleukin-6 levels were higher in the group with inflammation/infection when compared to controls. Animals with inflammatory process showed fibrinogen and C-reactive protein levels higher than those with infection, while erythrocyte sedimentation rate and interleukin-6 levels were similar. Conclusions: Results of this study indicate that erythrocyte sedimentation rate showed the best accuracy in identifying inflammatory/infectious process. Interleukin-6, C-reactive protein and fibrinogen levels were higher in inflammatory/infectious group, but showed limited efficacy in detection of individual sick animals. Dogs with inflammatory process demonstrate a more remarkable response in both serum/plasma determinations and hematological parameters when compared with dogs presenting predominantly infectious process / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2018-05-22T16:51:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_josiane_feijo.pdf: 1901281 bytes, checksum: 4995490ffaaf74c8692c66cfb785d3df (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-22T16:58:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_josiane_feijo.pdf: 1901281 bytes, checksum: 4995490ffaaf74c8692c66cfb785d3df (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-22T16:58:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_josiane_feijo.pdf: 1901281 bytes, checksum: 4995490ffaaf74c8692c66cfb785d3df (MD5) Previous issue date: 2016-07-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O cálcio é um mineral essencial para uma variedade de processos fisiológicos do organismo da vaca leiteira, sua deficiência pode causar vários distúrbios metabólicos, que levam a redução do desempenho produtivo e reprodutivo, com consequentes perdas econômicas. Atualmente há no mercado veterinário algumas estratégias para a prevenção da hipocalcemia, como: dieta aniônica, dieta deficiente de cálcio, administração de vitamina D3 no pré-parto e tratamento com cálcio oral no pós-parto recente, mas todas essas requerem ajustes a serem melhorados. Com isso, o objetivo desta Tese, é desenvolver uma estratégia farmacêutica eficiente no pré-parto, para prevenir a hipocalcemia subclínica (HSC) no pós-parto, para tal foi realizado dois experimentos in vivo, aprovados pelo Comitê de Ética de Experimentação animal da Universidade Federal de Pelotas. O primeiro foi relacionar a queda do cálcio no periparto com a síntese de proteínas de fase aguda, observamos que vacas com concentrações de cálcio  8,5 mg/dL alteram a síntese de proteínas de fase aguda já no pré-parto, causando diminuição no escore de condição corporal, no peso e na produção de leite. O segundo experimento foi analisar o efeito da suplementação de diferentes dietas cátion-anionica no pré-parto e relacionar com a hemogasometria e concentrações de cálcio sanguíneo. Observamos que a suplementação com dieta aniônica, proporciona um aumento na concentração de cálcio ionizado disponível no plasma e redução nas globulinas, demonstrando que o pH levemente ácido provavelmente altera a síntese de glubulinas. / Calcium is an essential mineral for a variety of physiological processes in the body of the dairy cow, its deficiency can cause various metabolic disorders, leading to reduced production and reproductive performance, with consequent economic losses. There are currently in the veterinary market some strategies for the prevention of hypocalcemia, such as anionic diet, deficient in dietary calcium, vitamin D3 administration in pre-partum and treatment with oral calcium in the recent post-partum, but all of these require adjustments to be improved. Thus, the aim of this thesis is to develop an effective strategy in the pre-partum to prevent subclinical hypocalcemia (HSC) postpartum, for this was done two in vivo experiments, approved by the Animal Experimentation Ethics Committee of the University Federal of the Pelotas. The first was to correlate the drop of calcium in the peripartum with the synthesis of acute phase proteins, we observed that cows in concentrations of calcium  8.5 mg / dL alter the synthesis of acute phase proteins, causing decrease in body condition score, in weight and milk production. The second experiment was to evaluate the effect of supplementation of different cation-anion diets in prepartum and relate to the blood gas analysis and blood calcium levels. We observed that supplementation with dietary anion, provides an increase in concentration of available calcium in ionized plasma and reduction in globulins, demonstrating that pH may change glubulinas synthesis.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2016-09-15T12:44:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_lorena_amaral.pdf: 1402709 bytes, checksum: dc0cdf39546ca7aa38b1d66d2153ecb3 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-09-15T19:48:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_lorena_amaral.pdf: 1402709 bytes, checksum: dc0cdf39546ca7aa38b1d66d2153ecb3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T19:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese_lorena_amaral.pdf: 1402709 bytes, checksum: dc0cdf39546ca7aa38b1d66d2153ecb3 (MD5) Previous issue date: 2014-10-02 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / A pesquisa por marcadores precoces de inflamação tem sido o foco na medicina humana e veterinária durante as últimas décadas. Acredita-se que tanto o exercício físico quanto a obesidade sejam capazes de gerar a reação de fase aguda. O primeiro estudo teve como objetivo caracterizar a reação de fase aguda e sua relação com desempenho de cavalos submetidos a uma competição de longa distância. Foram avaliados 23 equinos os quais foram divididos em dois grupos sendo o grupo 1 composto pelos 10 primeiros colocados na competição e o grupo 2 composto pelos 13 animais que concluíram a competição em colocações inferiores. Foram efetuadas coletas sanguíneas em repouso (dia 0) e no ultimo dia de competição e foram realizados o teste de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Os resultados demonstraram que o exercício físico imposto influenciou de forma significativa (p<0,0001) as concentrações séricas das proteínas inflamatórias. A haptoglobina foi superior nos animais com baixo desempenho. Conclui-se que o exercício prolongado é capaz de gerar reação de fase aguda e que o monitoramento da concentração de haptoglobina pode ser um sinalizador de processo inflamatório e baixo desempenho. O segundo estudo teve como objetivo associar a adiposidade corporal e a forma de criação de potros com o perfil energético sanguíneo, as concentrações sanguíneas de proteínas inflamatórias e lesões osteoarticulares no tarso comparando animais criados em regimes intensivo ou extensivo. Foram avaliados 40 potros com 18 meses de idade da raça crioula, sendo 20 animais criados em sistema extensivo e 20 animais em sistema intensivo. Foram efetuadas avaliação bioquímica e eletroforese proteica. Foram efetuadas a mensuração de acumulo de gordura através de ultrassonografia e estudo radiológico da região por tarso. Foi observado maiores níveis de colesterol total e LDL, glicemia, amiloide A sérica, transferina, haptoglobina, glicoproteina acida e proteína de 23Kda não identificada no animais do grupo intensivo com relação aos do grupo extensivo. Em 100% dos animais do grupo intensivo foram observados lesões articulares enquanto 23% dos animais do grupo extensivo apresentaram tais alterações. No teste de Fisher foi observado que os animais do grupo intensivo apresentaram 105% mais chance de desenvolver osteoartrite que os animais do grupo extensivo. Ainda, no teste de Pearson foi observada correlação positiva entre a gordura na crista do pescoço com o grau de comprometimento articular. Conclui-se que tanto o exercício quanto o sobre peso foram capazes de gerar uma reação de fase aguda, sendo que durante o exercício prolongado a haptoglobina apresentou relação com o desempenho dos animais. Já os potros em criação intensiva, além da reação de fase aguda, foi observada elevada incidência de osteoartrite juvenil e alterações no metabolismo energético / The search for early markers of inflammation has been the focus in human and veterinary medicine during the last decades. To determine the value of the measurement of proteins in the situations described, two studies were conducted. It is believed that both the physical exercise as obesity can generate an acute phase reaction. The first study aimed to characterize the acute phase reaction and its relation to performance of horses subjected to long distance competition. Was developed during the March of Resistance of Crioulo horses, consisting of a route of 750 km traveled. Were evaluated 23 horses, of wich were divided into two groups, with the first group consisting of the top 10 in the competition and the second group comprises the 13 animals that completed the competition in lower positions. Blood samples were collected at rest (day 0) and on the last day of competition and testing polyacrylamide electrophoresis (SDS-PAGE) gel were performed. The results showed that imposed physical exercise influenced significantly (p<0.0001) in serum concentrations of haptoglobin, ceruloplasmin, immunoglobulin A, acid glycoprotein and the protein with molecular weight of 23 kDa. Haptoglobin was higher in animals with low performance. The second study aimed to associate adiposity and the shape of creation of foals with blood energy profile, blood concentrations of inflammatory proteins and osteoarticular lesions in the tarsus comparing animals raised in intensive or extensive regimes. Were evaluated 40 Crioulo foals at 18 months old, 20 animals kept in extensive systems and 20 animals in intensive system. Protein electrophoresis and biochemical evaluation were performed. Measurement of fat accumulation were made by ultrasound and radiological study of the tarsus region. Higher levels of total cholesterol and LDL, blood glucose, serum amyloid A, transferrin, haptoglobin, acid glycoprotein and unidentified protein 23Kda of animals in the intensive group compared to the extensive group was observed. The intensive group also showed greater deposit of fat in the crest of the neck, retroperitoneal area and base of the tail region. In 100% of the animals in the intensive group were observed lesions compatible with juvenile osteoarthritis while 23% of the animals in extensive group showed such changes. In Fisher's exact test was observed that the animals in the intensive group had 105% more likely to develop osteoarthritis than animals from extensive group. Still, the Pearson test positive correlation between fat on the crest of the neck with the degree of joint involvement of foals was observed. We conclude that both the exercise and the overweight were able to generate an acute phase reaction, and during prolonged exercise haptoglobin were related to animal performance. Already foals in intensive farming, besides the acute phase reaction, high incidence of juvenile osteoarthritis and changes in energy metabolism was observed.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2016-09-21T15:15:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_claudia_haetinger.pdf: 674150 bytes, checksum: 1bf3ad07ae9c372f349ffe56ca5ab83b (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-09-21T16:39:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_claudia_haetinger.pdf: 674150 bytes, checksum: 1bf3ad07ae9c372f349ffe56ca5ab83b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T16:39:45Z (GMT). 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Os animais foram submetidos à coleta de sangue no momento do parto, 18 horas e 7 dias após o parto. No Artigo 2, foram utilizadas 7 éguas mestiças e seus respectivos neonatos, as quais foram submetidas à indução de placentite ascendente entre os dias 290-300 de gestação. As éguas foram submetidas a coletas de sangue 60 dias pré-parto, 30 dias pré-parto, no dia da indução, 24 horas e 48 horas após a indução, no dia que antecedeu o parto, imediatamente após e 24 horas após o parto e os neonatos imediatamente após o nascimento, 12 horas, 24 horas e 48 horas após o nascimento. Em ambos os artigos, a concentração sérica de proteína total foi determinada pelo método colorimétrico, e a leitura realizada por espectofotômetro e para a obtenção da concentração das frações proteicas, utilizou-se eletroforese em gel de acrilaminada contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Na avaliação estatística foi considerada significância de 5%. Foram observadas 23 bandas proteicas, com pesos moleculares de 16 KDa a 245 KDa. No Artigo 1 constatou-se, nas éguas, elevação de das frações proteicas no momento do parto, no qual as éguas com placentite apresentaram concentrações mais elevadas do que as hígidas. Os potros provenientes das éguas com placentite apresentaram maior concentração de α1-glicoproteína ácida após a ingestão de colostro. No artigo 2 as éguas submetidas a indução de placentite apresentaram elevação na α1-glicoproteína ácida a partir das 48 horas após a inoculação da bactéria. Com os resultados podemos caracterizar as concentrações médias das Proteínas de Fase Aguda em éguas com placentite e seus neonatos para avaliação da saúde nesse período. Concluímos que a α1-glicoproteína ácida pode ser indicada como um marcador inflamatório para a placentite. / The ascending placentitis is a major cause of premature birth, abortion and birth of compromised foals, so the search for early markers of this condition becomes critical for diagnosis and treatment in the early stage of the disease. The aim of this study is to characterize the concentration of acute phase proteins in periparturient mares with placentitis and their newborns. In Paper 1, 24 Thoroughbred mares and their neonates were used, which were divided by histopathologic examination of the placenta in group Placentitis (n = 11) and group Healthy (n = 13). The animals were subjected to blood collection at delivery, 18 hours and 7 days after delivery. In Paper 2, 7 mares and their neonates were used, which, the mares were subjected to induction of ascending placentitis between days 290-300 of gestation. The mares were subjected to blood sampling 60 days prepartum, 30 days prepartum, on the day of induction, 24 hours and 48 hours after induction, the day before delivery, immediately after and 24 hours after delivery and newborns immediately after birth, 12 hours, 24 hours and 48 hours after birth. Plasma total protein concentration was determined by the colorimetric method, and reading performed by spectrophotometer. To obtain the concentration of protein fractions was used acrilaminada gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE). At the statistical evaluation was considered significance of 5%. Were observed 23 protein bands with molecular weights of 16 kDa to 245 kDa. In Paper 1 it was found, in mares, elevated protein fractions at delivery, in which mares with placentitis showed higher concentrations than healthy mares. The foals from mares with placentitis showed higher concentration of α1-acid glycoprotein after ingestion of colostrum. In Paper 2 mares subjected to induction of placentitis had increased α1-acid glycoprotein from 48 hours after bacterial inoculation. With the results we show the average concentrations of acute phase proteins in mares with placentitis and their newborns for health assessment on that period. We speculate that α1-acid glycoprotein may be indicated as an inflammatory marker for placentitis, but more studies are needed.