Successful pregnancy is related to Th2 immune response profile, including molecules encoded by the major histocompatibility complex (MHC); however, Toxoplasma gondii infection induces Th1 immune response that is associated with adverse pregnancy outcome. To investigate the influence of MHC haplotype in pregnancy outcome in T. gondii-infected animals, congenic mice, C57BL/KsJ and CB10-H2 females, were orally infected with ME-49 strain on the first day of pregnancy and sacrificed on 8 and 18 days post-infection. C57BL/KsJ showed higher number of parasites in the lungs at 8dI, irrespective of pregnancy, compared with CB10-H2; and both CB10-H2 and C57BL/KsJ showed high number of parasites in the brain at 18dI, irrespective of pregnancy. Parasites were not found in the uterus/placenta in both lineages of mice irrespective of the day of infection and there was no difference in abortion rate of infected mice, although CB10-H2 mice presented higher histological damage compared with C57BL/KsJ at 8 and 18 days of pregnancy and infection. Infection of non-pregnant C57BL/KsJ increased mast cell infiltration in the uterus, and gestation decreased this cell numbers. Furthermore, C57BL/KsJ presented higher IFN-γ levels systemically on 8dI; and TNF and IL-6 on 8 and 18dI compared with CB10-H2, despite gestation or not. Additionally, in the uterus/placenta of CB10-H2, pregnancy increased FOXP3 and under infection IL-10, IL-13 and IL-17 expression levels. Our data suggest that both genetic background and MHC haplotypes are essential to protect against reabsorption rate and abortion in congenital toxoplasmosis. / O sucesso da gestação está relacionado com um perfil de resposta imunológica tipo Th2 e envolvimento de vários mecanismos para manutenção da tolerância materno-fetal, incluindo as moléculas codificadas pelo complexo principal de histocompatibilidade (MHC). Entretanto, a infecção por Toxoplasma gondii induz um perfil de resposta tipo Th1 que é associada aos resultados prejudiciais da gestação. Para investigar a influência do haplotipo do MHC na toxoplasmose congênita, fêmeas de camundongos congênicos, C57BL/KsJ (H-2d) e CB10-H2 (H-2b) foram oralmente infectadas com 5 cistos da cepa ME-49 no primeiro dia de gestação e sacrificadas aos 8 e 18 dias após a infecção. As fêmeas C57BL/KsJ apresentaram alto número de parasitos nos pulmões aos 8dI, comparadas às fêmeas CB10-H2 e ambas as linhagens apresentaram alto número de parasitos no cérebro aos 18dI, independentemente da gestação. Não foram encontrados parasitos no útero/placenta em nenhuma das linhagens, independente do tempo de infecção e não houve diferença no índice de aborto dentre as fêmeas infectadas, apesar da linhagem CB10-H2 ter apresentado maiores danos histológicos comparada à C57BL/KsJ aos 8 e 18 dias de gestação e infecção. A infecção nas fêmeas C57BL/KsJ não-gestantes provocou aumento na migração de mastócitos para o útero enquanto que a gestação diminui tal migração. Além disso, camundongos C57BL/KsJ apresentaram altos níveis sistêmicos de IFN-γ aos 8dI e TNF e IL-6 aos 8 e 18dI comparados aos CB10-H2 gestantes e não-gestantes. Ainda, no útero/placenta das fêmeas CB10-H2 a gestação aumentou os níveis de expressão de FOXP3 e, sob a infecção, houve aumento no nível de expressão de IL-10, IL-13 e IL-17. Nossos resultados sugerem que, tanto o background genético como o haplotipo do MHC sejam essenciais na proteção contra os índices de reabsorção fetal e aborto nos casos de toxoplasmose congênita. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Paracoccidioidomycosis is one of the most prevalent systemic mycosis in Latin America, including Brazil. It is caused by chronic infection with Paracoccidioides brasiliensis, a thermally dimorphic fungus. Calomys callosus, Rengger 1830 (Rodentia, Cricetidae), is a wild rodent found in Central Brazil and has been shown to be susceptible to experimental infection with P. brasiliensis. The objective of this work was to study the clinicopathological aspects of this experimental infection in Calomys. callosus infected with 0.6 x 105 yeast isolated from P. brasiliensis (strain Pb18) and to compare it with two others susceptible animals: A / Sn and B10.A mice. For this, five animals from each group were sacrificed at 7, 15, 30, 60, 90 and 120 days post inoculation (d.p.i.). Samples of the lung, liver and spleen were processed for mycological examination to determine the number of counts of colony forming units (CFU) as well as for histopathological examination using hematoxilyn and eosin (H&E), reticulin Gomori, trichromic (Masson), and Grocott´s stains. Blood samples from each mice were collected from orbital venous plexus and used to detect IgG and IgM specific anti-P. brasiliensis by ELISA. To determine of survival post-infection, others eight animals from each group was used. The mortality rate was higher in C. callosus than A / Sn and B10.A mice, being all deaths occurring up to 118 d.p.i. IgM levels tended to rise in all groups, but in B10.A mice and Calomys callosus groups, the level of IgG was significantly elevated during the all experimental period. Granulomatous lesions were observed in the roots of all animal groups and all granulomas were composed by Langhans giant cells, epithelioid cells, macrophages, lymphocytes, plasma cells, eosinophils, and necrosis. In C. callosus, the development of granulomas in lung was observed with 15 d.p.i. and exhibited extensive necrosis, especially at the end of the experiment. The presence of granulomas in liver was detected with seven d.p.i. in all animals, but the extensive necrosis was observed especially in samples of Calomys callosus. Similar pattern was also observed in spleen samples. In addition, in Calomys callosus the granulomatous lesions were more extensive in lung and spleen than in liver. The assessment of differential deposition of collagen showed that in Calomys callosus and B10.A the lesions were predominantly composed by collagen type III, although in B10.A animals a predominance of collagen type I was observed without, however, exceed the levels observed for collagen type III at the end of the experiment. On the other hand, the levels of collagen were lower in A / Sn mice than Calomys callosus and B10.A. and, apparently, it was not identified in the lung. On the other hand, in this group was observed a tendency to increase the deposition of collagen type I in the liver at the end of experiment. Callomys callosus showed a higher number of CFU in the three organs studied, especially in the lungs. The proportion of viable fungi in liver, lung and spleen was always higher in Calomys callosus than A / Sn and B10.A and tend to increase in liver and lung during the infection progression with the presence of budding fungi. Conclusions: Ours results indicate that the experimental infection by Paracoccidioides brasiliensis (Pb18) was more aggressive and widespread in Calomys callosus than A/Sn and B10, especially in the lung. So, Calomys callosus can be considered as an alternative animal model in studies of paracoccidioidomycosis infection. / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico causador da paracoccidioidomicose, a mais prevalente micose profunda e sistêmica da América Latina, ocorrendo principalmente no Brasil. Calomys callosus, Rengger 1830 (Rodentia, Cricetidae), é um roedor selvagem encontrado no Brasil Central, que tem se mostrado susceptível a infecção experimental pelo P. brasiliensis. O objetivo deste trabalho foi estudar aspecctos clínico-patológicos desta infecção em C. callosus inoculados com 0,6 x 105 leveduras de P. brasiliensis, cepa Pb18, comparando-o aos camundongos A/Sn e B10.A. Cinco animais de cada grupo foram sacrificados aos 7, 15, 30, 60, 90 e 120 dias pós inóculo (d.p.i.), e fragmentos dos pulmões, fígado e baço foram processados para exame micológico direto, cultura em Mycosel, contagem de unidades formadoras de colônias (UFC), e para exame histopatológico, através das colorações de hematoxilina e eosina, reticulina de Gomori, tricrômico de Masson, metenamina prata de Gomori-Grocott. Sangue foi coletado do plexo venoso orbital para realização de ELISA e dosagem de IgG e IgM específicos anti-P. brasiliensis. Outro grupo, contendo oito animais de cada espécie, foi usado para observação da sobrevida pós-infecção. A mortalidade foi maior em C. callosus, com todas as mortes ocorrendo até os 118 d.p.i. Os níveis de IgM mostraram tendência a elevação nos três grupos avaliados. Os camundongos B10.A e Calomys callosus mostraram tendência a elevação dos níveis de IgG, observada durante o período experimental. Lesões granulomatosas foram observadas nos órgãos analisados dos três grupos de animais testados, constituídos por células gigantes tipo Langhans, células epitelióides, macrófagos, linfócitos, plasmócitos, eosinófilos e necrose. Nos pulmões os granulomas foram mais precocemente observados em Calomys callosus (15 d.p.i.), evoluindo com maior presença de necrose no final do experimento. O fígado mostrou granulomas já aos sete d.p.i. em todos os animais, sendo mais necrosante em Calomys callosus. Padrão semelhante foi observado também para o baço. Em todos os órgãos analisados, as lesões granulomatosas foram mais extensas em Calomys callosus no pulmão e no baço, ocupando aos 90 d.p.i. respectivamente, 90% e 70% dos parênquimas examinados, sendo mais reduzida no fígado. Em relação à avaliação da deposição diferencial de colágeno, observou-se que as lesões em Calomys callosus e B10.A tiveram predominantemente deposição de colágeno tipo III. No fígado e baço dos animais B10.A identificou-se deposição crescente de colágeno tipo I, sem entretanto superar os níveis observados para o colágeno tipo III, até o final do experimento. Nos camundongos A/Sn os níveis de colágeno depositados foram mais baixos, comparativamente aos outros animais, não sendo aparentemente identificados nas lesões pulmonares, mostrando tendência a aumento de deposição de colágeno tipo I, nos períodos finais do experimento, verificado no fígado. Calomys callosus apresentaram maior número de UFC nos três órgãos estudados, especialmente nos pulmões. As proporções de fungos viáveis identificadas nos diferentes órgãos de Calomys callosus foram maiores que aquelas observadas nos outros animais, tendendo a aumento no fígado e pulmões, com o transcorrer da infecção, ocorrendo o mesmo em relação aos brotamentos fúngicos. Conclusões: A infecção experimental produzida pela inoculação de 0,6 x 105 leveduras de Paracoccidioides brasiliensis, cepa virulenta Pb18 produziu a doença no C. callosus, que sob o ponto de vista clínico-patológico foi mais grave e disseminada do que a observada nos modelos murinos de susceptibilidade e de resistência, sobretudo nos pulmões. Calomys callosus pode ser considerado como modelo animal alternativo no estudo da paracoccidioidomicose infecção. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas / Acinetobacter baumannii emergiu como um dos patógenos hospitalares mais importantes em UTIs nos últimos anos devido principalmente a sua maior resistência aos antimicrobianos. Os fatores de risco associados a PAV por A. baumannii variam de acordo com a unidade e há controvérsias sobre sua virulência e mortalidade atribuída. O objetivo deste estudo foi avaliar os fatores de risco e a mortalidade hospitalar no prazo de 30 dias em pacientes com PAV por A. baumannii bem como diferenças quanto a essa mortalidade hospitalar e o uso de terapêutica adequada ou inadequada em pacientes com PAV por A. baumannii multirresistente versus não-multirresistente. Um estudo de pacientes com PAV por A. baumannii (casos) versus pacientes em uso de ventilação mecânica sem PAV (controles) quanto aos fatores de risco e evolução, foi realizado na UTI de adultos, mista, do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia no período de 09/2008 a 08/2009. O hospital de Clínicas é de ensino e assistência terciária e sua UTI tem 15 leitos. O diagnóstico de PAV foi por critérios clínicos, radiológicos e microbiológicos com contagem &#8805;106 UFC/mL. A identificação das amostras foi feito com o Kit BD BBL Crystal Nonenteric e o antibiograma por difusão de disco seguindo as orientações do CLSI. Os resultados foram submetidos a análise univariada e multivariada e a investigação foi aprovada pelo Comitê de Ética e Pesquisa da UFU. As PAVs foram usualmente tardias (90,0%), com A. baumannii como o segundo agente etiológico mais frequente (25,7%) seguindo a Pseudomonas aeruginosa (32,5%). Os fatores de riscos significantes associados à infecções por este microrganismo na análise univariada foram: gênero masculino (p= 0,0144; OR= 4,814), diagnóstico clínico na admissão (p= 0,0129. OR=0,239), diagnóstico cirúrgico na admissão (p= 0,0321, OR= 4.607) ventilação mecânica &#8805; 7 dias (p= 0,0315, OR= 5,939), tempo de internação na UTI &#8805; 20 dias (p=0,0002, OR= 9,578), uso prévio de antibióticos (p=0,0006, OR=6,333) e uso prévio de carbapenêmicos (p< 0,0001, OR=10,250), persistindo como fatores independentes na análise multivariada uso prévio de carbapenêmicos (p=0,0249, OR= 6,280) e tempo de internação na UTI &#8805; 20 dias (p=0,0148, OR= 7,427). A. baumannii foi responsável por cerca de um quarto das PAVs, com o uso prévio de carbapenêmicos e internação na UTI &#8805; 20 dias comportandose como fatores de risco independentes. Embora a mortalidade hospitalar nas PAVs por este microrganismo não fosse diferente do grupo controle, elas foram causadas na sua maioria (87,5%) por amostras multiresistentes em pacientes em uso de terapêutica antibiótica empírica incorreta (87,5%).

Breast cancer is the most common malignancy among women and represents a serious health problem around the world. Despite of the progression in cancer research, there is a few biomarker validated to be used in clinical routine. Thus, this work aimed to investigate the levels of four serum proteins related with the mostly earlier events of breast cancer. For this purpose, serum levels of EGFR1, HER-2, TSP-1 and RANKL were investigated in twenty-eight patients with breast cancer in the early and advanced stage by ELISA method. Nineteen volunteers with no breast cancer were included in this study as controls. The results showed that serum EGFR1 (sEGFR1) levels decrease with disease progression. The mean sEGFR1 concentration in control group was 61.7 ng/mL, 38.0 ng/mL in initial breast cancer and 34.2 ng/mL in metastatic breast cancer. The best cutoff value was 46.85 ng/mL, it was able to distinguish volunteers and breast cancer patients with 75% sensitivity, and 94.7% specificity. Regarding sHER-2, its levels were found to increase with disease progression. Serum HER-2 (sHER-2) median in control group was 5.13 ng/mL, and in initial breast, and metastatic breast cancer women the mean was 5.99 ng/mL and 6.18 ng/mL, respectively. A cutoff value of 5.38 ng/mL of HER-2 was able to distinguish healthy and breast cancer individuals with 81.5% of sensitivity and 78.9% of specificity. Regarding TSP-1, women with metastatic breast cancer had significantly lower levels than control group and initial breast cancer. Besides although initial patients tend to have a higher concentration than control group, no statistical difference was observed. Concerning serum RANKL no differences was observed between the groups. In conclusion, our results bring evidence that sEGFR1 and sHER-2 should be investigated in a large clinical trial in an attempt to validate these proteins as potentials biomarkers for earlier detection of breast cancer. / O câncer de mama é a neoplasia maligna mais comum entre as mulheres e representa um sério problema de saúde pública em todo o mundo. Apesar dos avanços em pesquisas na área de cancerologia, há poucos biomarcadores validados para uso na rotina clínica. Assim, este trabalho teve como objetivo investigar os níveis de quatro proteínas do soro relacionadas com os eventos em sua maioria anteriores do câncer de mama. Para este efeito, os níveis séricos de EGFR1, HER-2, TSP-1 e RANKL foram investigados em vinte e oito pacientes com câncer de mama em estádio inicial e avançado, pelo método de ELISA. Dezenove voluntárias sem câncer de mama foram incluídas neste estudo como grupo controle. Os resultados mostraram que os níveis séricos de EGFR1 (sEGFR1) diminui com a progressão da doença. A concentração média de sEGFR1 no grupo controle foi de 61,7 ng/mL, 38,0 ng/mL no câncer de mama inicial e 34,2 ng/mL no câncer de mama metastático. O melhor valor de cutoff foi 46,85 ng/mL, com sensibilidade de 75% e 94,7% de especificidade para distinguir entre pacientes com câncer de mama e grupo controle. Com relação ao sHER-2, as concentrações foram encontradas para aumentar com a progressão da doença. A concentração mediana de sHER-2 no grupo de controle foi de 5,13 ng/mL, e em pacientes com a neoplasia em sua fase inicial e com câncer de mama metastático a mediana foi de 5,99 ng/mL e 6,18 ng/mL, respectivamente. Um valor de cutoff de 5,38 ng/mL de HER-2 foi capaz de distinguir indivíduos saudáveis e de câncer de mama, com 81,5% de sensibilidade e 78,9% de especificidade. Quanto à sTSP-1, mulheres com câncer de mama metastático têm níveis mais baixos do que o grupo controle e pacientes com câncer inicial. Além disso, embora as pacientes iniciais tendessem a ter uma concentração mais elevada do que o grupo controle, não houve diferença estatística. Quanto ao sRANKL nenhuma diferença foi observada entre os grupos. Por último, os nossos resultados trazem evidências de que os níveis de sEGFR1 e sHER-2 devem ser investigados em ensaios clínicos com tamanho amostral significativo na tentativa de se validar estas proteínas como potenciais biomarcadores para a detecção precoce do câncer de mama. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

CHAPTER I: Leishmania spp are obligate intracellular protozoan that can cause a complex of known infectious diseases such as leishmaniasis, affecting millions of people worldwide. The host-pathogen interaction involves the parasite surface molecules and cellular receptors that culminate in phagocytosis. This internalization process involves changes in cytoskeleton through interaction with proteins related to actin polymerization, as AFAP, Arp 2/3 complex, Galectin-3, Septins and WASp, as well as activation and signaling pathways. It is known that L. amazonensis promastigotes after entry into phagocytes are present in phagosomes, and these vesicles undergo a maturation process, forming phagolysosome, important for differentiation of the promastigote forms to amastigotes. This study aimed to understand which proteins related to actin cytoskeleton exert role in the process of invasion and multiplication of L. amazonensis and which signaling pathways are involved in the formation of phagolysosome, the invasion and multiplication of this protozoan process the host cell. For this, we did invasion and multiplication assays with macrophages C57 BL/6 and BALB/c peritoneal treated or not with cytochalasin D, invasion assay with macrophages C57 BL/6 previously fixed in formaldehyde (0.01%), assay with macrophages C57 BL/6 knockdown for AFAP-1L1, Arp2, Galectin-3, Septin 4, 14 and WASP proteins compared to wild type cells. And yet, assays phagolysosome kinetics of formation and proliferation and invasion assays using inhibitors of Akt, ERK2, MEK1, MEK1/2, mTOR, PI3K and Ras signaling pathways. The results show that L. amazonensis invaded cells defective in actin polymerization, as well as fixed cells as well as decreased expression of Arp2, Galectin-3 and WASp proteins increased internalization of these parasites. The signaling pathways MEK1/2, ERK2 and AKT delayed the recruitment of the lysosomes to phagosome, and inhibition of PI3K, MEK1/2 and ERK2 pathways drastically decreased internalization of the parasite in the cells. We concluded that L. amazonensis were able to actively invade phagocytic cells, and that the Arp2, Galectin-3 and WASp proteins are involved in the process of entry into host cells. In addition, the MEK1/2, AKT and ERK2 signaling pathways are involved in the formation of phagolysosome as well as PI3K, MEK1/2 and ERK2 pathways seem to favor infection with L. amazonensis. CHAPTER II: The flagellate protozoan Trypanosoma cruzi is the causative agent for Chagas disease. It is estimated that there are eight million people infected worldwide. T. cruzi has different surface proteins related to cell invasion. In this context, our research group identified in T. cruzi, a protein of 21 kDa (P21) showed that pro-phagocytic and chemotactic activities, playing an important role in the internalization of this parasite in vitro. This study aimed to evaluate the role of recombinant protein P21-His6 based on native P21 of T. cruzi in Leishmania amazonensis in order to seek greater understanding of the mechanism of action of this protein and its relationship with the host in vivo. To this end, the footpad infect BALB/c mouse treated with 40&#956;g of active and denatured recombinant P21, BSA and PBS for 6 weeks and assess the footpad size, parasitic load (real time PCR) and cytokine production of IL-1&#946; in the paws, the popliteal lymph nodes and spleen. The results showed an increase in the footpad area, as well as increased parasite load in the infected and treated animals with P21-His6. Also, increased production of IL-&#946; in the footpad and the popliteal lymph nodes also in animals treated with P21-His6. We conclude that the P21 protein plays a role in pro-phagocytic also in vivo experiments, favoring infection. / CAPÍTULO I: Leishmania spp são protozoários intracelulares obrigatórios, que podem causar um complexo de doenças infecciosas conhecidas como leishmanioses, que afetam milhões de pessoas mundialmente. A interação entre patógeno-hospedeiro envolve moléculas de superfície do parasito e receptores celulares que culminam na fagocitose. Este processo de internalização envolve modificações no citoesqueleto celular por meio da interação com proteínas relacionadas à polimerização de actina, como AFAP, Complexo Arp2/3, Galectina-3, Septinas e WASp, bem como a ativação de vias de sinalização. Sabe-se que formas promastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis após a entrada nos fagócitos, estão presentes em fagossomos, e essas vesículas sofrem um processo de maturação, formando o fagolisossomo importante para a diferenciação da forma promastigota em amastigota. Este trabalho teve como objetivo, entender quais proteínas relacionadas ao citoesqueleto de actina exercem papel no processo de invasão e na multiplicação de L. amazonensis, bem como, quais vias de sinalização estão envolvidas no processo de formação do fagolisossomo, na invasão e na multiplicação deste protozoário na célula hospedeira. Para isso, fizemos ensaios de invasão e multiplicação em macrófagos imortalizados C57 BL/6 e peritoneais de BALB/c tratados ou não com citocalasina D, ensaio de invasão em macrófagos C57 BL/6 previamente fixadas em formaldeído, ensaio com macrófagos C57 BL/6 knockdown para as proteínas AFAP-1L1, Arp2, Galectina-3, Septina 4 e 14 e WASp, comparando com células Wild Type. E ainda, ensaios de cinética de formação do fagolissomo e ensaios de invasão e multiplicação utilizando inibidores das vias de sinalização envolvendo Akt, ERK2, MEK1, MEK1/2, mTOR, PI3K e Ras foram realizados. Os resultados mostram que L. amazonensis invadiu células deficientes na polimerização de actina, e também células fixadas, bem como a diminuição da expressão das proteínas Arp2, Galectina-3 e WASp aumentaram a internalização desses parasitos. As vias de sinalização MEK1/2, ERK2, AKT atrasaram o recrutamento de lisossomos para o fagossomo, e a inibição das vias PI3K, MEK1/2 e ERK2 diminuíram drasticamente a internalização do parasito nas células. Concluímos que L. amazonensis foi capaz de invadir ativamente células fagocíticas, e que as proteínas Arp2, Galectina-3 e WASp estão envolvidas no processo de entrada na células hospedeira. Além disso, as vias de sinalização MEK1/2, ERK2 e AKT estão envolvidas na formação do fagolisossomo, bem como as vias PI3K, MEK1/2 e ERK2 parecem favorecer a infecção por L. amazonensis. CAPÍTULO II: O protozoário flagelado Trypanosoma cruzi é o causador da Doença de Chagas. Estima-se a existência de 8 milhões de pessoas infectadas em todo o mundo. T. cruzi apresenta diferentes proteínas de superfície relacionadas ao processo de invasão celular. Nesse contexto, nosso grupo de pesquisa identificou em T. cruzi, uma proteína de 21 kDa (P21) que apresentou atividades pro-fagocíticas e quimiotáticas, exercendo papel importante na internalização desse protozoário in vitro. O presente trabalho teve como finalidade avaliar o papel da proteína recombinante P21-His6 baseada na P21 nativa de T. cruzi na infecção por Leishmania amazonensis, a fim de buscar maior entendimento no mecanismo de ação dessa proteína e sua relação com o hospedeiro in vivo. Para isso, infectamos as patas de animais BALB/c e tratamos os animais com 40&#956;g de P21 recombinante ativa e desnaturada, PBS e BSA por 6 semanas e avaliamos o tamanho da pata, a carga parasitária (PCR em tempo real) e a produção da citocina IL-1&#946; nas patas, linfonodos do poplíteo e baços. Os resultados mostraram aumento na área da pata, bem como aumento da carga parasitária nos animais infectados e tratados com a P21-His6. E ainda, aumento da produção da citocina Il-1&#946; na pata e no linfonodo do poplíteo também nos animais tratados com a P21-His6 também foram observados. Concluímos que a proteína P21 exerce papel pro-fagocítico também em experimentos in vivo, favorecendo a infecção. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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The SICAA and SINASC databases were linked and re-structured through a deterministic linkage to identify the records of the same child. The follow-up time for each child was 365 days after the birth. Only doses and intervals between doses valid for analysis were used. The 10-valent pneumococcal vaccine (PCV10) was used as a vaccine to compare the receipt of the pentavalent vaccine. The timely endpoint vaccination of the three doses in the primary series was defined as the dose of vaccine given up to 30 days of the recommended age. Poisson regression was used to identify predictors of timely vaccination of the primary series of the pentavalent vaccine. RESULTS: Of the 13,523 children included, 77.0% (CI95% 76.3-77.7) and 79.1% (CI95% 78.4-79.8) received three valid doses of the primary series of the pentavalent vaccine and PCV10, respectively. Only 47.1% (95% CI 46.2-48.0) and 47.6% (CI 95% 46.8-48.4) received timely the three doses of pentavalent vaccine and PCV10, respectively. The predictive factors for timely vaccination of the pentavalent primary series and PCV10 were the same: married mother; 7 or more prenatal visits and the mother's age equal to or greater than 20 years. CONCLUSION: Almost 80% of children received valid three primary doses of pentavalent and PCV10 vaccines, but fewer than half of the birth cohort received them on time. New efforts are needed to improve timely vaccination and get the maximum benefit from vaccination. / INTRODUÇÃO: Muitos países têm relatado surtos de doenças imunopreveníveis, colocando o monitoramento da vacinação em idade oportuna como indicador estratégico para os programas de imunização estimarem a real proteção. OBJETIVO: Analisar a vacinação oportuna da série primária da vacina pentavalente em crianças menores de doze meses de idade, vacinadas em unidades de saúde ao Sistema Único de Saúde. METODOLOGIA: Estudo de coorte retrospectiva de base populacional com crianças nascidas em 2014 no município de Goiânia, Goiás. Foram utilizados dados do Sistema de Controle do Atendimento Ambulatorial (SICAA) que contém dados de vacinas e do Sistema de Informação de Nascidos Vivos (SINASC) que contém dados maternos e da criança. As bases de dados SICAA e SINASC foram vinculadas e reestruturadas por meio de linkage determinístico para identificação dos registros de mesma criança. O tempo de seguimento de cada criança foi de 365 dias. Foram utilizadas apenas doses e intervalos entre doses válidos para análise. A vacina pneumocócica 10-valente (PCV10) foi empregada como vacina de comparação do recebimento da vacina pentavalente. O desfecho vacinação oportuna das três doses da série primária foi definida como a dose de vacina administrada até 30 dias após a idade recomendada. Utilizou-se regressão de Poisson para identificar os fatores preditores da vacinação oportuna da série primária da vacina pentavalente. RESULTADOS: Das 13.523 crianças incluídas, 77,0% (IC95% 76,3-77,7) e 79,1% (IC95% 78,4-79,8) receberam três doses válidas da série primária da vacina pentavalente e da PCV10, respectivamente. Apenas 47,1% (IC95% 46,2-48,0) e 47,6% (IC95% 46,8-48,4) receberam oportunamente as três doses da vacina pentavalente e da PCV10, respectivamente. Os fatores preditores à vacinação oportuna da série primária da pentavalente e da PCV10 foram os mesmos: mãe casada; 7 ou mais consultas de pré-natal e idade da mãe maior ou igual a 20 anos. CONCLUSÃO: Quase 80% das crianças receberam três doses primárias válidas de vacinas pentavalente e PCV10, mas menos da metade da coorte de nascimento receberam oportunamente. Novos esforços são necessários para melhorar a vacinação oportuna e obter o máximo benefício da vacinação.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-10-27T17:20:50Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Alves de Brito e Cardoso - 2010.pdf: 3862835 bytes, checksum: bac9d567036b30752cd19dc0042891c0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T14:25:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Alves de Brito e Cardoso - 2010.pdf: 3862835 bytes, checksum: bac9d567036b30752cd19dc0042891c0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T14:25:41Z (GMT). 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Many studies have shown also that vaginal swab can be used for detection of both infections, however, just the NAAT Aptima Combo 2 has been cleared by Food and Drug Administration for this specimen use. In Brazil, the most widely used NAAT for the diagnosis of chlamydia and neisseria is the kit Amplicor CT/NG (Roche) and, up to date, there isn’t any study which evaluates the use of vaginal swabs. Objectives: To evaluate the performance of the kit AMPLICOR CT/NG (Roche) in the diagnosis of C. trachomatis and N. gonorrhoeae using urine, endocervical and vaginal swabs and to analyze the agreement of results between the different biological specimens. Methods: The target population was sexually active adolescents and young women between 15 and 24 years from Inhumas, Goias. Socio-demographic and sexual behavior were obtained through a face-to-face interview. The diagnosis was performed by PCR using the AMPLICOR CT/NG (Roche) assay in urine, vaginal swab (VS) and endocervical swab (ES) specimens. For the performance evaluation were calculated the sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value. The kappa coefficient was calculated to assess agreement between the samples. It was considered a true-positive result when at least two of three biological samples from the same patient were positive for chlamydia and/or gonococcus. Results:Among the 428 participants the mean age was 19,4 years. The three biological specimens were collected from 309 adolescents (72.2%). Among these, the prevalence rates were 8.7% (IC95% 5,8-12,4) for C. trachomatis and 2.3% (IC95% 0,9-4,6) for N. gonorrhoeae.For chlamydia the sensitivities observed with the different samples were above 80% and specificities exceeding 97% with positive predictive values (PPV) between 78.8% and 84.6% and negative predictive values (VPNs) >98%. For the gonococcus the sensitivities were 42.8% for urine, 71.4% for ES and 100% for VS with specificities >96% for the three samples. The two types of swab showed low PPVs for gonococcus (≈40%) and urine showed PPV of 100%. VPNs were >98%. The agreement of results between specimens was around 94% for the detection of both infections. However, the values of kappa (κ) coefficient ranged from 0.68 to 0.73 for chlamydia, which means substantial agreement between samples. For gonococcal infection, the agreement was slight or fair with κ coefficients ranging from 0.13 to 0.33. Conclusions:The performances of the specimens and the κ values suggest that the vaginal swab appears to be equivalent to urine and endocervical swab for detection of chlamydia and may be suitable for screening studies. The three samples showed different performance in the detection of gonococcus and did not present good agreement of results, suggesting that they are not equivalent in the diagnosis of this infection with the PCR kit used. / A introdução dos testes de amplificação de ácidos nucléicos (NAATs) foi um grande avanço no rastreamento das doenças sexualmente transmissíveis (DST) causadas por Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae, pois apresentam alta sensibilidade e permitem a utilização de amostras de coleta não invasiva, como a urina. O uso da urina facilitou o diagnóstico em indivíduos assintomáticos e possibilitou a realização de estudos epidemiológicos em locais fora do ambiente clínico. Vários estudos mostram que o swab vaginal também pode ser utilizado na detecção de ambas as infecções, porém a Food and Drug Administration restringe o seu uso apenas pelo NAAT Aptima Combo 2. No Brasil, o NAAT mais utilizado no diagnóstico de clamídia e neisseria é o kit Amplicor CT/NG (Roche) e, até o momento, nenhum estudo avaliou a utilização do swab vaginal. Objetivos:Avaliar o desempenho do kit AMPLICOR CT\NG (Roche) no diagnóstico de C. trachomatis e N. gonorrhoeae empregando urina, swabs endocervical e vaginal e analisar a concordância de resultados entre as diferentes amostras biológicas. Métodos: A população alvo foi constituída de adolescentes e jovens sexualmente ativas, com idade entre 15 e 24 anos, residentes em Inhumas, Goiás. Os dados sócio-demográficos e de comportamento sexual foram obtidos através de entrevista. O diagnóstico foi realizado empregando o kit Amplicor CT/NG (Roche) em amostras de urina, swab endocervical (SE) e swab vaginal (SV). Para avaliação do desempenho foram calculadas a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo dos testes. O coeficiente kappa foi calculado para avaliar a concordância entre as amostras. Considerou-se um resultado como verdadeiro-positivo quando pelo menos duas das três amostras biológicas da mesma paciente fossem positivas para clamídia e/ou gonococo. Resultados: Entre as 428 participantes a média de idade foi de 19,4 anos. Os três espécimes biológicos foram coletados de 309 adolescentes (72,2%). Entre estas, as prevalências foram de 8,7% (IC95% 5,8-12,4)para C. trachomatis e de 2,3% (IC95% 0,9-4,6) para N. gonorrhoeae. Para clamídia as sensibilidades observadas com as diferentes amostras foram superiores a 80% e as especificidades superiores a 97%, com valores preditivos positivos (VPPs) entre 78,8% e 84,6% e valores preditivos negativos (VPNs) >98%. Para o gonococo as sensibilidades foram de 42,8% na urina, 71,4% no SE e de 100% no SV com especificidades >96% nas três amostras. Os dois tipos de swab apresentaram baixos VPPs para o gonococo (≈ 40%) e a urina apresentou VPP de 100%. Os VPNs foram >98%. A concordância de resultados da PCR empregando as diferentes amostras foi de cerca de 94% para ambas as infecções. Entretanto, os valores do coeficiente kappa (κ) variaram de 0,68 a 0,73 para clamídia, o que significa concordância substancial entre as amostras. Para a infecção gonocócica, a concordância foi fraca ou razoável com valores de κ variando de 0,13 a 0,33. Conclusões: Os desempenhos das amostras e os valores do κ sugerem que o swab vaginal parece ser equivalente à urina e ao swab endocervical na detecção da clamídia podendo ser recomendado para estudos de triagem. As três amostras diferiram quanto ao desempenho na detecção da infecção gonocócica e não apresentaram boa concordância de resultados sugerindo que não são equivalentes no diagnóstico desta infecção com o kit de PCR utilizado.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_carla_pohl_sehn.pdf: 1038153 bytes, checksum: 075d58210f65d23825bbd6f9adff7315 (MD5) Previous issue date: 2010-07-29 / The association of vaccine antigens to potent immunological adjuvants is a key strategy to improve the performance of subunit vaccines. Adjuvants are components that, when used in combination with a specific antigen, induce more immunity that the antigen alone. Microbial products have been used as adjuvant, including the B subunit of the thermo labile entherotoxin of Escherichia coli (LTB), which is atoxic. LTB is known by its great efficiency as mucosal immunity adjuvant and this activity depends on the shape of the antigen combination (co-administered or fused), on the immunization route (mucosal or parentheral) and the dosage. This study aims to evaluate the adjuvant activity of recombinant LTB (rLTB), both as chimeric and coadministered orally or intramuscularly, using the major fimbrial unit type 1 (FimA) of Salmonella Enteritidis as antigen. BALB/c mice were immunized orally or intramuscularly with three doses of rLTB or PBS (controls) or rFimA, rFimA associated with Freund's incomplete adjuvant (rFimA+AI, i.m. immunized animals), co-administered or fused to LTB (chimera). The levels of total systemic antibodies, IgG1, IgG2a and IgA anti-rFimA were measured by ELISA and an animal protection assay against S. Typhimurium infection was performed. The results show that rLTB only showed adjuvant activity that resembled the commercial adjuvant when coadministered intramuscularly to rFimA and for totals antibody production. These results confirm that the action of adjuvant rLTB is influenced by the shape of binding to the antigen (fused or co-administered) and route of administration. Immunizations did not induce protection of mice challenged with S. Typhimurium, but survival time was greater among animals immunized with only the rFimA and rFimA+AI. Furthermore, the total antibody titer, IgG1 and IgG2a obtained by the chimeric form, both orally as intramuscularly, were similar to those obtained by the animal only immunized with rFimA. These results suggest that rFimA has a possibility of having an adjuvant capability rFimA. / A associação de antígenos vacinais a potentes adjuvantes imunológicos é uma estratégia fundamental para melhorar o desempenho de vacinas de subunidade. Adjuvantes são substâncias que, usadas em combinação com um antígeno específico, induzem mais imunidade que o antígeno sozinho. Produtos microbianos, como a subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB), que é atóxica, têm sido utilizados com esse propósito. A LTB é reconhecida por sua grande eficiência como adjuvante da imunidade de mucosa e essa capacidade depende da forma de combinação ao antígeno (co-administrada ou fusionada), da via de imunização (mucosa ou parenteral) e da dose administrada. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade adjuvante da subunidade B recombinante da enterotoxina termolábil de Escherichia coli, fusionada ou co-administrada, por via oral (v.o.) ou intramuscular (i.m.), utilizando a subunidade fimbrial principal recombinante da fímbria tipo 1 (FimA) de Salmonella Enteritidis como antígeno. Para isso, camundongos BALB/c foram imunizados v.o. e i.m. com 3 doses de rLTB, PBS (controles) ou rFimA, ou rFimA associada a adjuvante de Freund incompleto (rFimA+AI, animais imunizados via i.m.), co-administrada ou fusionada a LTB (quimera). Os níveis de anticorpos sistêmicos totais, IgG1, IgG2a e IgA anti-rFimA foram mensurados por ELISA e um ensaio de proteção animal contra infecção por S. Typhimurium foi realizado. Os resultados obtidos demonstraram que a rLTB apresentou atividade adjuvante estatisticamente semelhante a do adjuvante comercial somente quando co-administrada i.m. a rFimA e em relação a produção de anticorpos totais. Esses resultados confirmam que a ação adjuvante da rLTB é influenciada pela forma de ligação ao antígeno (fusionada ou co-administrada) e pela via de administração. As imunizações não induziram proteção de camundongos desafiados com S. Typhimurium, porém o tempo de sobrevivência foi maior entre os animais imunizados somente com a rFimA e rFimA+AI. Além disso, os níveis de anticorpos totais, IgG1 e IgG2a obtidos pela forma quimérica imunizada tanto v.o. quanto i.m., foram semelhantes àqueles obtidos pelos animais imunizados somente com a rFimA. Os resultados obtidos apontam para uma possível atividade adjuvante da proteína rFimA.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-12T14:08:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_PerfilSoroepidemiologicoRubeola.pdf: 2078023 bytes, checksum: d32067e339d79b48139cb029df708447 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-16T16:57:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_PerfilSoroepidemiologicoRubeola.pdf: 2078023 bytes, checksum: d32067e339d79b48139cb029df708447 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-16T16:57:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_PerfilSoroepidemiologicoRubeola.pdf: 2078023 bytes, checksum: d32067e339d79b48139cb029df708447 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2009 / A Rubéola é uma virose exantemática geralmente de evolução benigna, mas quando adquirida durante a gestação, pela teratogenicidade do vírus, pode provocar a Síndrome da Rubéola Congênita caracterizada por malformações fetais e aborto espontâneo. Com o objetivo de descrever o perfil soroepidemiológico da Rubéola de pacientes referenciados ao Instituto Evandro Chagas/SVS/MS nos períodos prévacinal(1989 a 1999) e pós-vacinal (2000 a 2005), foi realizado estudo retrospectivo do banco de dados de 34.221 amostras, cujos testes sorológicos foram analisados através da técnica de pesquisa de IgM e IgG por ELISA com kits do laboratório DADE BEHRING®. A taxa de infecção encontrada foi de 17,2% no período prévacinal e de 4,0% no pós-vacinal. Entre a sintomatologia apresentada no período pré-vacinal, a linfadenopatia teve maior taxa com 38,4% e no pós-vacinal a artralgia com 11,3%. Nas mulheres em idade fértil, a média da taxa de imunes foi de 78,3% e 84,4% no período pré e pós-vacinal, respectivamente. A taxa de infecção em gestantes no período pré-vacinal foi de 9,3% e no pós-vacinal 1,6%. Os recémnascidos infectados corresponderam a 2,1% no período pré e 1,0% no período pósvacinal nesses, houve predomínio de catarata e cardiopatia isoladas ou em associação. Foi concluído que houve diferença significante entre as frequências de todos os segmentos estudados, em relação aos períodos pré e pós-vacinal, confirmando a eficácia da vacina na prevenção da Rubéola e da SRC, tal fato realça a necessidade de se ampliar as coberturas vacinais para impedir a circulação do VR no país, cumprindo assim o acordo de eliminação até o ano 2010. / Rubella is a usually benign exanthematic virus infection. However, it can cause Congenital Rubella Syndrome characterized by fetal malformation and spontaneous abortion when acquired during pregnancy due to its teratogenicity. A restrospective study of a database of 34.221 samples was performed in order to describe the seroepidemiological profile of rubella in patients referred to the Evandro Chagas Institute/SVS/MS, during the vaccinal period (1989 -1999) and post-vaccinal (2000- 2005). The serological tests were analyzed through research of IgM and IgG by ELISA with DADE BEHRING® laboratory kits. The infection rates found were 17,2% and 4,0% during the pre- and post-vaccinal periods, respectively. Among the symptoms observed during the pre-vaccinal period, lymphadenopathy presented the highest rate (38,4%), whereas during the post-vaccinal period arthralgia was the most prevalent (11,3%). In women in reproductive age, the mean immunity rate was 78,3% and 84,4% during the pre- and post-vaccinal periods, respectively. The infection rate in pregnant women was 9,3% during the pre-vaccinal period and 1,6% during the post-vaccinal period. The total of infected newborns in the prevaccinal period was 2,1%, and 1,0% in the post-vaccinal period. Predominance of cataract and cardiopathy, isolated or in association, was observed among the newborns. It was concluded that there was a significant difference between the frequency of all studied segments regarding the pre- and post-vaccinal periods, which confirmed the effectiveness of the vaccine in the prevention of Rubella and Congenital Rubella Syndrome. These data highlight the need to increase the coverage of vaccination programs in order to reduce the circulation of the rubella virus in Brazil, thus accomplishing the commitment to eliminate rubella by 2010.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-28T15:15:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoSericaLectina.pdf: 842856 bytes, checksum: 1d50a60868eedc792b1a123a56c45874 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-06T12:06:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoSericaLectina.pdf: 842856 bytes, checksum: 1d50a60868eedc792b1a123a56c45874 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-06T12:06:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoSericaLectina.pdf: 842856 bytes, checksum: 1d50a60868eedc792b1a123a56c45874 (MD5) Previous issue date: 2012 / Apesar de as parasitoses intestinais, serem conhecidas desde muito tempo e serem estudas desde sua identificação, ainda constituem um desafio quanto ao seu diagnóstico e tratamento. Existe a necessidade de investimentos em pesquisas para o diagnóstico mais preciso, para a pronta intervenção, para os casos existentes. Além da prevenção dos fatores de risco que favorecem o surgimento, a manutenção e a propagação desses agentes. O conhecimento de que a competência imunológica do hospedeiro é um fator limitante da carga parasitária de diversas espécies. Considerando-se que a lectina ligadora de manose (MBL), componente do sistema do complemento, é uma proteína chave do sistema imune inato, atuando na primeira linha de defesa contra os patógenos pois é considerada de fase aguda, este estudo com 221 amostras de indivíduos de ambos os sexos e idades variadas, coletadas em três laboratórios distintos, no período de janeiro a abril de 2012. Foi estabelecido o perfil da população do estudo e fez-se a análise da associação entre fatores sociais e demográficos com as entero-parasitoses e avaliada a influência dos níveis séricos da lectina ligadora de manose(MBL) na susceptibilidade das enteroparasitoses, distribuição por faixa etária e sexo. Estabelecida também a comparação entre as concentrações séricas de MBL dos grupos com identificação de parasitas. Foram observadas associações estatisticamente significativas quando se relacionou os protozoários E.histolytica e G.lamblia com a concentração sérica da MBL. / Although the intestinal parasitosis are known since a long time and be studied since its identification, still constitute a challenge for their diagnosis and treatment. The delineation of the problem coming up in the necessity of investments in research for more accurate diagnosis, for the prompt intervention, to the existing cases and work for the prevention of risk factors that favor the emergence, maintenance and propagation of these agents. The knowledge that the host's immune competence is a limiting factor of parasitic load of various species, stimulated the research considering that the Mannosebinding lectin (MBL), a component of the complement system, is a key protein of the innate immune system, acting in the first line of defense against pathogens because it is considered acute phase. In this study, were colected 221 samples of individuals of both gender and varied ages at three different laboratories, in the period from January to April 2012. The profile of the population of the study are made and the analysis of the association between social and demographic factors with the entero-parasites and evaluated the influence of serum levels of Mannose-binding lectin (MBL) susceptibility of enteroparasitoses, distribution by age group and gender. Established also the comparison between serum concentrations of MBL of groups with identification of parasites. Statistically significant associations were observed when related protozoa E. histolytica and G.lamblia with the serum concentration of the MBL.